BioSMART ISSN: 1411-321X

Volume 3, Nomor 2 Oktober 2001

Halaman: 28-35

Pengaruh Aflatoksin B1 terhadap Pertumbuhan dan Perkembangan

Embryo dan Skeleton Fetus Mencit (Mus musculus L.)
Effects of Aflatoxin B1 on Growth and Development of Embryos and Skeletal
Fetuses of Mice (Mus musculus L.)

TETRI WIDIYANI 1 dan MAMMED SAGI2

1
Jurusan Biologi FMIPA UNS Surakarta
2
Fakultas Biologi UGM Yogyakarta

Diterima: 10 Juni 2001. Disetujui: 31 Agustus 2001

ABSTRACT

Aflatoxin B1 (AFB1) is a mycotoxin vastly contaminates in agriculture foodstuffs. AFB1 has teratogenic effects
because it can penetrate placental barrier easily from maternal to fetal tissues. AFB1 can be activated to become
epoxide compound. Epoxide is very dangerous, it can react with nucleic acid and form DNA or RNA adducts. The
aim of this research was to examine the effects of AFB1 on growth and development of embryos and skeletal fetuses
in pregnant mice during organogenesis period. Thirty pregnant mice were divided randomly into 5 groups with 6
replications. AFB1 was dissolved in propylene glycol and administrated orally on days 6-15 of gestation. The
treatment dosages were 0 (placebo), 2.25, 3, and 4.5 mg/kg body weight. Another group of animals was used as
control. At day 18 of gestation, all pregnant mice were sacrificed and caesarian sectioned to remove the fetuses.
Fetuses were examined for intrauterine mortality; growth retardation; morphological malformations; skeletal growth
and development (ossification); and skeletal malformations. AFB1 treatment with highest dosage (4.5 mg/kg body
weight) caused a significant increase in the number of intrauterine mortality; fetuses growth retardation; skeletal
growth retardation; and in the incidence of morphological and skeletal malformation such as hemorrhage, clubfoot,
curved body, intercostal fusion and vertebral flexion (lordosis and kyphosis). These results indicate that maternal
exposure to AFB1 during organogenesis period influences the growth and development of embryos and skeletal fetuses.

Key words: aflatoxin B1, mice, embryos, fetuses, skeletal.

PENDAHULUAN penyebab utama karsinoma hepatoseluler (Stuver,

Aflatoksin merupakan salah satu jenis
mikotoksin yang dihasilkan terutama oleh jamur
Aspergillus flavus. Jamur penghasil aflatoksin ini
biasanya tumbuh pada substrat berupa bahan
pangan dan pakan komoditas pertanian serta hasil
olahannya. Di negara-negara beriklim tropis,
kontaminasi bahan pangan dan pakan oleh jamur
penghasil aflatoksin merupakan masalah
lingkungan yang sering terjadi.
Pada mulanya dikenal 4 jenis aflatoksin, yaitu
aflatoksin B1, B2, G1 dan G2, tetapi kemudian
ditemukan sekitar 13 jenis aflatoksin (Banwart,
1979). Di antara aflatoksin itu, yang paling toksis
dan paling banyak terdapat di alam adalah
aflatoksin B1 (AFB1). AFB1 sangat terkenal sebagai
agensia karsinogenik yang merupakan salah satu
1998). Selain itu AFB1 juga bersifat toksik,
mutagenik dan teratogenik sehingga sangat
berbahaya bagi manusia dan hewan.
Di pasaran, bahan pangan dan pakan yang
terkontaminasi AFB1 masih banyak beredar bahkan
dalam kadar yang relatif tinggi (Muhilal, 1986;
Wiryatun dkk., 1988; Rahayu & Sardjono, 1989).
Di Indonesia, Pemerintah masih belum menetapkan
kebijaksanaan mengenai batas kadar aman AFB1
dalam bahan pangan dan pakan. USFDA (United
States Food and Drug Administration) menetapkan
batas kadar aman AFB1 di bawah 20 ppb (Saad,
1998).
Aflatoksin bersifat stabil terhadap pemanasan.
Pada suhu pemasakan normal (sekitar 1000C)
aflatoksin belum mengalami peruraian. Menurut
Kapti (1986), titik lebur aflatoksin relatif cukup

© 2001 Jurusan Biologi FMIPA UNS Surakarta

 WIDIYANI dan SAGI - Aflatoksin B1 pada Mus musculus
tinggi yaitu di atas 2500C oleh karena itu bahan
pangan yang terkontaminasi aflatoksin masih tetap
berbahaya untuk dikonsumsi meskipun telah diolah
dengan jalan pemanasan/pemasakan.
Efek teratogenesis AFB1 dimungkinkan terjadi
karena AFB1 mempunyai berat molekul relatif
rendah yaitu 312 dalton. Senyawa dengan berat
molekul kurang dari 600 dalton dapat melewati
barrier plasenta sehingga akan kontak dengan
jaringan fetus (Davis, 1977; Denning et al. 1990).
Di dalam tubuh, AFB1 mengalami metabolisme
yang meliputi mekanisme aktivasi dan deaktivasi
(detoksifikasi). Organ yang berperan dalam fungsi
metabolisme dan ekskresi pada fetus masih belum
berkembang secara sempurna sehingga masuknya
senyawa asing dalam tubuh akan membahayakan
bagi fetus tersebut.
Jaringan konseptal intrauterus justru terdapat
enzim lipoksigenase yang diketahui berperan dalam
bioaktivasi AFB1 menjadi senyawa epoksida AFB1.
Terbentuknya senyawa epoksida ini menimbulkan
dampak yang luas berkaitan dengan efek toksik,
karsinogenik, mutagenik, dan teratogenik dari
AFB1. Senyawa epoksida mempunyai kemampuan
bereaksi dengan asam nukleat membentuk DNA/
RNA-adduct yang menyebabkan terganggunya
proses pengekspresian gen. Selain itu senyawa
epoksida juga dapat berikatan dengan komponen
protein sel yang akan menyebabkan terganggunya
fungsi fisiologis sel dan selanjutnya berakibat pada
terjadinya kematian sel (Datta & Kulkarni, 1994;
Eaton & Gallagher, 1994; Heish & Heish, 1993).
Berdasarkan pada pernyataan bahwa AFB1
mempunyai efek teratogenesis, maka perlu dilaku-
kan penelitian untuk mengkaji pengaruh pemberian
AFB1 pada mencit (Mus musculus L.) bunting
selama masa organogenesis terhadap pertumbuhan
dan perkembangan embrio dan skeleton fetus.
BAHAN DAN METODE
Tiga puluh ekor mencit betina dewasa yang
berada dalam stadium proestrus dikelompokkan
secara acak menjadi 5. Masing-masing kelompok
yang terdiri dari 6 ekor mencit sebagai ulangan,
dikandangkan bersama seekor pejantan fertil untuk
dikawinkan. Pada hari berikutnya mencit-mencit
betina diperiksa apakah terdapat vaginal plug, jika
hasilnya positif maka pada hari itu ditentukan
sebagai hari ke-1 kebuntingan.
AFB1 murni buatan SIGMA dilarutkan dalam
propilen glikol dan diberikan pada hewan uji secara
oral. Peringkat dosis AFB1 adalah 0 (plasebo);
2,25; 3; dan 4,5 mg/kg BB dalam 0,2 ml propilen
29
glikol, sedang sisanya sebagai kelompok kontrol.
Perlakuan diberikan pada mencit bunting hari ke-6
sampai dengan hari ke-15.
Pada hari ke-18 umur kebuntingan, mencit
dikorbankan dan dilakukan bedah cesar untuk
mengambil fetus dari uterus. Fetus diamati,
meliputi pengamatan morfometri fetus dan
pengamatan histologis - histokimia skeleton.
Pengamatan morfometri terdiri dari penghitungan
jumlah kematian intrauterus, pengukuran berat
badan dan panjang fetus dan pengamatan terhadap
kelainan morfologi (malformasi). Pertumbuhan dan
perkembangan skeleton fetus secara umum dapat
diamati setelah diwarnai dengan Alizarin Red S
menurut metode C. Arnott (Kaufman, 1992).
Jumlah kematian intrauterus, jumlah fetus yang
mengalami malformasi, dan jumlah fetus yang
skeletonnya mengalami kelainan perkembangan
dianalisis dengan uji Chi-square. Rerata berat badan
dan panjang fetus serta rerata jumlah komponen
tulang yang mengalami osifikasi dianalisis varian
(ANAVA) pola satu arah menggunakan Rancangan
Acak Lengkap (RAL). Jika ANAVA menunjukkan
hasil yang signifikan dilanjutkan uji DMRT
(Duncan’s Multiple Range Test).
HASIL DAN PEMBAHASAN
Pertumbuhan dan Perkembangan Fetus
Hasil penelitian yang diperoleh tentang
pengamatan morfometri fetus dari mencit bunting
yang diberi AFB1 disajikan pada Tabel 1. Dari
Tabel tersebut dapat diketahui mengenai jumlah
induk, jumlah fetus total, rerata jumlah fetus dari
tiap induk, jumlah dan frekuensi fetus hidup, serta
jumlah dan frekuensi kematian intrauterus. Pada
penelitian ini kematian intrauterus yang terjadi
terdiri dari resorpsi dan kematian fetus. Selain itu
dalam Tabel 1 tersebut juga disajikan rerata berat
badan fetus, rerata panjang fetus serta jumlah dan
frekuensi fetus yang mengalami malformasi.
Dari Tabel 1 terlihat bahwa pemberian AFB1
cenderung menyebabkan penurunan jumlah fetus
yang hidup dan peningkatan jumlah kematian
intrauterus. Pada kelompok kontrol dan plasebo
100% fetus dalam keadaan hidup. Kematian
intrauterus mulai terjadi pada dosis terendah (2,25
mg/kg BB). Seiring dengan peningkatan dosis
AFB1 yang diberikan maka kematian intrauterus
cenderung mengalami peningkatan pula. Pada dosis
tertinggi (4,5 mg/kg BB), terjadi kematian fetus
yang relatif cukup tinggi (di atas 10%).
 BioSMART ISSN: 1411-321X
Volume 3, Nomor 2 Oktober 2001
Halaman: 28-35
Tabel 1. Pengamatan morfometri fetus hari ke-18 kebuntingan dari induk mencit yang diberi AFB1 pada dosis
berbeda.

Kelompok Perlakuan
No. Parameter yang Diamati
Kontrol Plasebo 2,25 mg/kg BB 3 mg/kg BB 4,5 mg/kg BB
1 Jumlah Induk 6 6 6 6 6
2 Jumlah Fetus Total 67 66 60 57 55
3 Jumlah Fetus dari Tiap Induk 11,17 11 10 9,5 9,17
(Rerata ± SD) ± 0,98 ± 1,1 ± 0,89 ± 0,84 ± 0,75
4 Jumlah dan Frekuensi Fetus Hidup 67 (100%) 66 (100%) 56 (93,33%) 51 (89,47) 44 (80%)
5 Jumlah dan Frekuensi Kematian Intrauterus 0 (0%) 0 (0%) 4 (6,67%) 6 (10,53%) 11 (19,99%)
a. Jumlah dan Frekuensi Resorpsi 0 (0%) 0 (0%) 1 (1,67%) 2 (3,51%) 3 (5,45%)
b. Jumlah dan Frekuensi Kematian Fetus 0 (0%) 0 (0%) 3 (5%) 4 (7,02%) 8 (14,54%)
6 Berat Badan Fetus (g) 1,64 a 1,57 a 1,44 b 1,39 b 1,37 b
(Rerata ± SD) ± 0,12 ± 0,1 ± 0,05 ± 0,12 0,07
7 Panjang Fetus (mm) 25,24 a 24,42 ab 23,9 b 23,54 b 20,98 c
(Rerata ± SD) ± 0,81 ± 0,75 ± 1,04 ± 0,96 ± 0,8
8 Jumlah dan Frekuensi M alformasi 0 (0%) 0 (0%) 7 (11,67%) 12 (21,06%) 20 (36,36%)
Keterangan: Huruf yang sama di belakang angka dalam satu baris menunjukkan tidak ada beda nyata di antaranya.

Hasil analisis statistik dengan uji Chi-square
adalah X2hitung > X2tabel, berarti ada hubungan antara
pemberian AFB1 dengan jumlah terjadinya kematian
intrauterus. Maka terbukti bahwa AFB1 yang diberikan
pada mencit bunting selama masa organogenesis
menyebabkan terjadinya kematian intrauterus. Hal
ini menunjukkan bahwa AFB1 bersifat toksik
terhadap embrio dan fetus sehingga dikatakan
AFB1 mempunyai efek embriotoksik dan fetotoksik.
Pada tahap embrional, sel secara intensif
mengalami diferensiasi, gerakan morfogenesis dan
organisasi. Selama periode ini terjadi proses
organogenesis sebagian besar organ tubuh. Embrio
sangat rentan terhadap efek teratogen sehingga
setiap gangguan dalam diferensiasi sel selalu
mengakibatkan kelainan bawaan. Kelainan ini
bervariasi mulai dari kecacatan struktural
(malformasi), hambatan pertumbuhan, penurunan
fungsi organ sampai kematian. Pada manusia dapat
juga menimbulkan keguguran sedang pada
Rodensia menimbulkan resorpsi (Wilson, 1973).
Pada penelitian ini dilakukan pengukuran berat
badan dan panjang fetus karena kedua parameter
ini cukup sensitif. Secara umum, dari data
pengamatan di Tabel 1 menunjukkan bahwa sejalan
dengan peningkatan dosis AFB1 yang diberikan,
maka cenderung mengalami penurunan baik untuk
ukuran berat badan maupun ukuran panjang fetus
(Gambar 1). Analisis statistik dengan ANAVA
untuk parameter berat badan fetus menunjukkan
hasil bahwa ada perbedaan yang sangat bermakna
(p<0.01) di antara kelima kelompok uji tersebut.
Analisis lanjutan antar kelompok dengan uji
DMRT menunjukkan bahwa kelompok kontrol
tidak berbeda dengan kelompok plasebo tetapi
kelompok kontrol dan plasebo berbeda secara
bermakna dengan kelompok perlakuan AFB1.
Meskipun pada kelompok perlakuan AFB1
mengalami penurunan berat badan seiring dengan
peningkatan dosis yang diberikan, tetapi di antara
kelompok perlakuan yang diberi AFB1 tersebut
tidak berbeda nyata (ditunjukkan dengan huruf
yang sama pada Tabel 1). Hal ini menunjukkan
bahwa berapapun besar dosis AFB1 yang diberikan
(dalam kisaran 2,25- 4,5 mg/kg BB) tidak
menimbulkan efek yang berbeda.
Untuk parameter panjang fetus hasil analisis
statistik dengan ANAVA sama seperti pada
parameter berat badan, yaitu ada perbedaan yang
sangat bermakna (p<0.01) di antara kelima
kelompok uji tersebut. Hasil analisis lanjutan
dengan uji DMRT menunjukkan bahwa pada
kelompok perlakuan AFB1 dosis 2,25 mg/kg BB
dan 3 mg/kg BB telah mulai terjadi penurunan
panjang fetus jika dibandingkan dengan kelompok
kontrol. Akan tetapi penurunan panjang fetus
tersebut kurang bermakna karena kelompok
tersebut tidak berbeda dengan kelompok plasebo.
Pada kelompok dosis perlakuan tertinggi (4,5
mg/kg BB) barulah terjadi penurunan panjang fetus
yang cukup bermakna. Dengan demikian dapat

© 2001 Jurusan Biologi FMIPA UNS Surakarta

 WIDIYANI dan SAGI - Aflatoksin B1 pada Mus musculus 31

dikatakan bahwa pemberian AFB1 pada dosis 4,5

mg/kg BB dapat mempengaruhi panjang fetus.

Gambar 1. Morfologi Fetus Normal dan Fetus yang Terhambat Pertumbuhannya: (A) Fetus normal dari kelompok
kontrol, (B) Fetus yang terhambat pertumbuhannya dari kelompok perlakuan AFB1 dosis 2,25 mg/kg BB, (C) Fetus
yang terhambat pertumbuhannya dari kelompok perlakuan AFB1 dosis 3 mg/kg BB, (D) Fetus yang terhambat
pertumbuhannya dari kelompok perlakuan AFB1 dosis 4,5 mg/kg BB.

Menurut Wilson (1973), penurunan berat badan
dan panjang tubuh fetus merupakan bentuk
teringan dari efek suatu senyawa yang bersifat
teratogenik. Penurunan berat badan dan panjang ini
merupakan indikator terjadinya hambatan
pertumbuhan akibat gangguan terhadap proses-
proses yang mendasari pertumbuhan (pembelahan
sel, metabolisme dan sintesis).
Gangguan pertumbuhan yang terjadi akibat
pemberian AFB1 kemungkinan diawali oleh
terbentuknya ikatan antara epoksida hasil
bioaktivasi AFB1 dengan asam nukleat membentuk
DNA atau RNA adduct. Hal ini menyebabkan
proses replikasi dan transkripsi DNA menjadi
terganggu. Proses pertumbuhan berkaitan erat
dengan pembelahan sel (mitosis dan meiosis).
Pembelahan sel selalu didahului oleh replikasi dan
transkripsi DNA. Jika DNA terganggu, maka
proses replikasi dan transkripsi akan terganggu
pula dan sebagai akibatnya terjadi hambatan
pertumbuhan.
Pengamatan terhadap morfologi fetus
membuktikan bahwa AFB1 bersifat teratogenik
karena dapat menimbulkan malformasi. Suatu
penelitian yang dilakukan oleh Ryan et al. (1990)
menyimpulkan bahwa terjadinya penurunan berat
badan karena pengaruh teratogen akan selau diikuti
oleh terjadinya malformasi. Hal tersebut juga
berlaku dalam penelitian ini. Malformasi yang
terjadi adalah hemoragi atau perdarahan bawah
kulit, tungkai bengkok dan tubuh bongkok (fleksi).
Data jumlah fetus yang mengalami malformasi
yang terdapat pada Tabel 1 menunjukkan bahwa
malformasi sudah terjadi pada perlakuan AFB1
dosis terendah (2,25 mg/kg BB) dan frekuensinya
relatif tinggi karena lebih dari 10%. Fetus yang
mengalami malformasi terus meningkat jumlahnya
seiring dengan peningkatan dosis AFB1 yang
diberikan. Pada dosis tertinggi (4,5 mg/kg BB)
bahkan jumlahnya relatif sangat tinggi mencapai
36,36%. Hasil analisis statistik dengan uji Chi-
square adalah X2hitung > X2tabel, berarti ada
hubungan antara pemberian AFB1 terhadap
terjadinya malformasi.
Jenis malformasi yang banyak terjadi pada
penelitian ini adalah hemoragi. Hemoragi atau
perdarahan sebenarnya adalah suatu peristiwa
keluarnya darah dari sistem kardiovaskuler yang
disertai dengan penimbunan di dalam ruangan
tubuh atau di dalam jaringan tubuh (Price &
Wilson, 1984). Ada beberapa mekanisme yang
memungkinkan untuk terjadinya perdarahan. Salah
satu di antaranya adalah akibat ketidakseimbangan
osmotik karena adanya gangguan tekanan dan
viskositas cairan pada bagian fetus yang berbeda
yaitu antara plasma darah dan ruang ekstrakapiler
atau antara cairan ekstraembrionik dan
intraembrionik. Menurut Wilson (1973), pada
keadaan normal embrio berkembang dalam cairan
amnion yang isotonis terhadap cairan tubuh.
Adanya senyawa-senyawa asing dalam jaringan
dapat mengganggu keseimbangan osmotik tersebut.
Jenis malformasi yang lain adalah tungkai
bengkok. Malformasi ini berkaitan erat dengan
proses pertumbuhan dan perkembangan tulang
panjang penyusun tungkai yang kurang sempurna.
32 BioSMART Vol. 3, No. 2, Oktober 2001, hal. 28-35

Tungkai bengkok dapat terjadi karena ada Pertumbuhan tulang pada salah satu sisi lebih
perbedaan kecepatan pertumbuhan tulang tersebut.

Gambar 2. Fotomikrograf Cranium Fetus: (A) Fetus kelompok kontrol, (B) Fetus kelompok perlakuan AFB1 dosis
4,5 mg/kg BB. Keterangan: 1. Os frontal, 2. Os Parietal, 3. Os Interparietal, 4. Os Supraoccipital, 5. Os frontal, os
parietal dan os supraoccipital belum mengalami osifikasi. Pewarna: Alizarin Red S. Warna merah (gelap): tulang;
warna transparan: kartilago.

lambat daripada sisi yang lain akibatnya ukuran
tulang penyusun tungkai tersebut menjadi tidak
sama dan akan membelok ke arah yang lebih
pendek.
Malformasi berupa tubuh bongkok juga
berkaitan dengan proses pertumbuhan dan
perkembangan tulang. Kemungkinan penyebabnya
adalah terjadi fleksi lordosis atau kifosis pada
columna vertebralis terutama pada vertebrae
thoracalis, vertebrae lumbalis atau vertebrae
sacralis.
Pertumbuhan dan Perkembangan Skeleton
Terjadinya malformasi berupa tungkai bengkok
dan badan bongkok sebenarnya berkaitan dengan
proses pertumbuhan dan perkembangan tulang. Hal
ini menunjukkan bahwa AFB1 secara khusus juga
mempengaruhi pertumbuhan dan perkembangan
sistem skeletal fetus. Menurut Anderson &
Conning (1988), pengamatan pertumbuhan dan
perkembangan skeleton dapat menggunakan tolok
ukur berupa (1) jumlah komponen skeleton dan
tingkat osifikasinya, (2) ada tidaknya atau
sempurna tidaknya osifikasi dan (3) ada tidaknya
kelainan dalam pembentukan skeleton.
Pada penelitian ini dilakukan pengamatan
meliputi skeleton aksial (cranium, vertebrae,
sternum, dan costae) dan skeleton appendicular
(cingulum pectorales, cingulum pelvicales dan
ekstremitas). Ditinjau dari tingkat osifikasinya
maka terjadi keterlambatan osifikasi pada
komponen tulang penyusun cranium, vertebrae
caudalis, sternum, metacarpal, dan metatarsal
fetus dari induk yang diberi perlakuan AFB1.
Keterlambatan osifikasi dapat diketahui dengan
menghitung jumlah komponen tulang penyusunnya
setelah diwarnai Alizarin Red S. Komponen tulang
akan menghasilkan warna merah, sedangkan jika
masih bersifat kartilago akan berwarna transparan.
Pada kelompok perlakuan dosis 4,5 mg/kg BB
beberapa fetus mengalami keterlambatan osifikasi
cranium. Komponen tulang yang mengalami
keterlambatan osifikasi meliputi os frontal, os
parietal, os interparietal, dan os supraoccipital
(Gambar 2). Keterlambatan osifikasi tulang
penyusun cranium akan membahayakan bagi
kehidupan fetus selanjutnya. Hal ini berkaitan
dengan fungsi cranium sebagai pelindung organ
syaraf terbesar yaitu otak. Apabila pembentukan
cranium tidak sempurna dimungkinkan terjadinya
kecacatan berupa exencephaly yang menyebabkan
otak terdedah keluar.
Rerata jumlah komponen tulang penyusun
vertebrae caudalis, sternum, metacarpal, dan
metatarsal disajikan pada Tabel 2. Dari tabel
tersebut dapat diketahui bahwa sejalan dengan
peningkatan dosis AFB1 yang diberikan, maka
jumlah komponen tulang cenderung menurun.
Analisis statistik dengan ANAVA untuk rerata
jumlah komponen tulang penyusun metatarsal dan
vertebrae caudalis menunjukkan perbedaan yang
bermakna (p<0,05), untuk metacarpal
menunjukkan perbedaan yang sangat bermakna
 WIDIYANI dan SAGI - Aflatoksin B1 pada Mus musculus 33

(p<0,01) sedangkan untuk sternum tidak ada

perbedaan yang bermakna (p>0,05).
Tabel 2. Rerata jumlah komponen tulang sternum, metacarpal, metatarsal, dan vertebrae caudalis fetus dari induk
yang diberi AFB1.

Dosis Jumlah Komponen Tulang (Rerata ± SD)

Perlakuan Sternum Metacarpal Metatarsal Vertebrae
(mg/kg BB) (ruas) (ruas) (ruas) Caudalis (ruas)
Kontrol 6±0a 2,73 ± 0,46 a 2,33 ± 0,82 a 6,2 ± 1,37 a
Plasebo 6±0a 2,73 ± 0,46 a 2,27 ± 0,59 a 6,2 ± 1,42 a
2,25 6±0a 2,47 ± 0,74 a 2,07 ± 0,7 ab 5,13 ± 1,46 ab
3 6±0a 2,27 ± 0,8 ab 1,73 ± 0,88 ab 4,87 ± 1,55 b
4,5 5,87 ± 0,35 b 1,73 ± 1,1 b 1,53 ± 0,92 b 4,4 ± 1,4 b

Keterangan: Huruf yang sama di belakang angka dalam satu kolom menunjuk kan tidak ada beda nyata di antaranya.

Analisis statistik lanjutan dengan DMRT
menunjukkan bahwa pengaruh AFB1 terhadap
osifikasi umumnya tampak nyata pada pemberian
AFB1 dosis tertinggi (4,5 mg/kg BB) yaitu untuk
sternum, metacarpal dan metatarsal (pada Tabel 2
ditunjukkan oleh huruf yang berbeda terhadap
kelompok kontrol dan plasebo). Sedangkan untuk
vertebrae caudalis efek yang nyata sudah
ditunjukkan pada dosis yang lebih rendah (3 mg/kg
BB).
Kelainan perkembangan skeleton juga dapat
diamati pada fetus dari kelompok perlakuan dosis
tertinggi (4,5 mg/kg BB). Kelainan skeleton yang
terjadi berupa fusi costae. Pada penelitian ini ada 2
jenis fusi yaitu fusi terjadi pada costae nomor 12-
13, sedang lainnya terjadi pada costae nomor 11-
12. Fusi costae nomor 12-13 hanya terjadi di
bagian pangkal (proksimal), sedangkan pada costae
nomor 11-12 fusi meluas sampai ke bagian distal
(ujung). Di samping fusi costae terjadi pula
kelainan skeleton berupa fleksi lordosis dan kifosis
pada vertebrae cervicales dan vertebrae
thoracales. Kelainan vertebrae ini mewujudkan
malformasi eksternal berupa tubuh bongkok
(Gambar 3).
Pertumbuhan dan perkembangan costae dan
vertebrae terjadi secara bersamaan sehingga
gangguan terhadap perkembangan awal vertebrae
seringkali diikuti dengan kelainan pada costae.
Kelainan vertebrae dapat disebabkan oleh 3
kemungkinan yaitu gangguan terhadap somit,
gangguan terhadap chorda dorsalis atau gangguan
terhadap diferensiasi sklerotom (Theiler, 1988).
Gangguan terhadap migrasi sel-sel mesenkim pada
waktu pembentukan vertebrae juga menyebabkan
kelainan terutama terhadap struktur centrum
vertebrae (Stazi et al., 1992). Sternum berkembang
paling akhir di antara skeleton aksial yang lain. Hal
ini disebabkan karena diduga sternum merupakan
penggabungan bagian ventral dari costae kanan dan
kiri (Carlson, 1988).
34 BioSMART Vol. 3, No. 2, Oktober 2001, hal. 28-35

Gambar 3. Struktur morfologi dan skeleton fetus yang mengalami malformasi tubuh bongkok: (A) Fetus normal
dari kelompok kontrol, (B) Fetus bertubuh bongkok dari kelompok perlakuan AFB1 dosis 4,5 mg/kg BB. Tanda
panah (→) menunjukkan fleksi vertebrae (lordosis-kifosis).
Tabel 3. Jumlah fetus yang mengalami kelainan skeleton dari induk mencit yang diberi AFB1.

Dosis Jumlah Fetus Jumlah Fetus yang Mengalami Frekuensi Fetus

Perlakuan yang Mengalami Kelainan
yang Diamati Kelainan Skeleton
(mg/kg BB) Skeleton (%)
Kontrol 15 0 0
Plasebo 15 0 0
2,25 15 4 26,67
3 15 6 40
4,5 15 10 66,67

Pertumbuhan dan perkembangan vertebrae
kemungkinan berkaitan dengan pengekspresian gen
Hoxc8+. Gen ini berfungsi mengendalikan ciri
segmental embrio. Wilayah kerja protein HOXC8+
adalah sepanjang sumbu anterioposterior vertebrae
thoracalis dan vertebrae lumbalis (Le Mouellic,
1992 in Kalthoff, 1996). Sedangkan pertumbuhan
dan perkembangan tulang penyusun ekstremitas
berkaitan dengan pengekspresian gen Wnt-1, Hoxd-
13 dan Msx-1 (Zakany et al., 1994). Diduga
aktivitas pengekspresian gen tersebut terganggu
oleh adanya senyawa epoksida AFB1 yang
membentuk DNA-adduct sehingga pertumbuhan
dan perkembangan sistem skeletal terhambat atau
mengalami kelainan.
Fetus-fetus yang mengalami kelainan skeleton
akibat pemberian AFB1 relatif cukup tinggi
jumlahnya (di atas 20%). Data mengenai jumlah
dan frekuensi fetus yang mengalami kelainan
skeleton disajikan pada Tabel 3. Dari Tabel
tersebut dapat diketahui bahwa jumlah dan
frekuensi fetus yang mengalami kelainan skeleton
cenderung meningkat sejalan dengan peningkatan
dosis AFB1 yang diberikan. Analisis statistik
dengan uji Chi-square membuktikan bahwa ada
hubungan antara pemberian AFB1 dengan terjadinya
kelainan skeleton.
KESIMPULAN
Berdasarkan hasil penelitian ini, maka dapat
disimpulkan bahwa AFB1 dosis 4,5 mg/kg BB yang
diberikan pada mencit bunting selama masa
organogenesis dapat menghambat pertumbuhan
dan perkembangan fetus mencit, menyebabkan
kematian intrauterus dan menimbulkan malformasi
berupa hemoragi, tungkai bengkok dan tubuh
bongkok. AFB1 dosis 4,5 mg/kg BB juga
menghambat pertumbuhan dan perkembangan
skeleton yang ditandai oleh terhambatnya osifikasi
komponen tulang cranium, metacarpal, metatarsal,
sternum dan vertebrae caudalis fetus, dan
terjadinya kelainan skeleton fetus berupa fusi
costae dan fleksi lordosis-kifosis vertebrae
cervicales dan vertebrae thoracales.
UCAPAN TERIMA KASIH
Ucapan terima kasih penulis sampaikan kepada
Dr. Wiryatun Lestariana, Apt. yang telah berkenan
memberikan bantuan bahan aflatoksin dan telah
memberikan banyak masukan dalam pelaksanaan
penelitian ini. Demikian juga kepada Kepala dan
Staf Laboratorium Histologi – Embriologi Hewan
Fakultas Biologi UGM (Sdr. Nur Chasanah dan
Bp. Abadi) serta Kepala dan Staf UPHP UGM
(terutama Bp. Suroso) atas penyediaan fasilitas dan
kerjasama yang baik selama berlangsungnya
penelitian ini.
DAFTAR PUSTAKA
Anderson, D. & D.M. Conning. 1988. Experimental
Toxicology The Basic Principles. London: Royal
Society of Chemistry.
Banwart, G.J. 1979. Basic Food Microbiology. Westport
Connecticut: AVI Publishing Company, Inc.
Carlson, B.M. 1988. Patten’s Foundation of
Embryology. 4th ed. New Delhi: Tata McGraw-Hill
Publishing Company LTD.
Datta, K. & A.P. Kulkarni. 1994. Oxidatif metabolism
of aflatoxin B1 lipoxygenase purified from human
term placenta and intrauterine conceptal tissues. J.
Teratol. 50 (4): 311-317.
 WIDIYANI dan SAGI - Aflatoksin B1 pada Mus musculus
Davies, D.M. 1977. Textbook of Adverse Drug Reaction.
New York: Oxford University Press.
Denning, D.W., R. Allen, A.P. Wilkinson, & M.R.A.
Morgan. 1990. Transplacental transfer of aflatoxins
in humans. Carcinogenesis 11: 1033-1035.
Eaton, L.D. & E.P. Gallagher. 1994. Mechanism of
carcinogenesis. Annual Review Pharmacology
Toxicology 34: 135-172.
Heish, L.L. & T.T. Heish. 1993. Detection of aflatoxin
B1-DNA adduct in human placenta and cord blood.
Cancer Res. 53: 1278-1280.
Kalthoff, K. 1996. Analysis of Biological Development.
New York: McGraw-Hill Inc.
Kapti, R.K. 1986. Toksin dalam Mikrobia Pangan.
Lanjuran (Proceedings) Seminar Keamanan Pangan
dalam Pengolahan dan Penyajian. PAU Pangan dan
Gizi UGM, Yogyakarta. hal: 197-203.
Kaufman, M.H. 1992. The Atlas of Mouse Development.
San Diego: Academic Press Harcourt Brace and
Company.
Muhilal. 1986. Cemaran Aflatoksin pada Hasil Olahan
Kacang Tanah dan Kedelai. Lanjuran (Proceedings)
Seminar Keamanan Pangan dalam Pengolahan dan
Penyajian. PAU Pangan dan Gizi UGM,
Yogyakarta. hal: 204-209.
Price, S.A. & L.M. Wilson. 1984. Clinical Concepts of
Diseases Processes. New York: McGraw-Hill Inc.
Rahayu, K. & Sardjono. 1989. Deteksi Mikotoksin pada
Produk Kecap Komersial. Yogyakarta: PAU Pangan
dan Gizi UGM.
35
Ryan, L.M., P.J. Catalano, C.A. Kimmel, & G.L.
Kimmel. 1990. Relationship between fetal weight
and malformation in developmental studies. Teratol.
44:215-223.
Saad, N. 1998. Aflatoxins: Occurrence and Health Risk.
CU Toxic Plant Pages,
www.usda.gov/gipsa/newsinfo/back/b-aflatox.htm.
Stazi, A.V., C. Macri, C. Ricciardi, & A. Mantovani.
1992. Significance of the minor alteration of the
axial skeleton in rat foetuses. A Short Review.
Conggres Anatomy 23: 91-104.
Stuver, S.O. 1998. Toward global control of liver
cancer. Seminars in Cancer Biology 8 (4): 299-306.
Theiler, K. 1988. Vertebral Malformation. Berlin:
Springer-Verlag.
Wilson, J.G. 1973. Environment and Birth Defects. New
York: Academic Press.
Wiryatun, L., S. Anggraheni, Maliyah M., & P. Hastuti.
1988. Cemaran Aflatoksin pada Bahan Makanan
yang Beredar di Yogyakarta. Laporan Penelitian
Proyek Peningkatan Pengembangan Perguruan
Tinggi UGM 5(9).
Zakany, J., M. Lemaistre & D. Duboule. 1994. Ectopic
expression of Wnt-1 induces abnormalities in growth
and skeletal patterning of the limbs. In: Zagris, N.,
A.M. Duprat & A. Durston (ed.). Organization of
The Early Vertebrate Embryo. New York: Plenum
Press-NATO Scientific Affairs Division.