FACULTAD DE ODONTOLOGIA BIOQUIMICA PRIMERA UNIDAD: CONCEPTOS FISICOQUIMICOS DE IMPORTANCIA EN BIOQUIMICA

1. SOLUCIONES: SISTEMAS UTILIZADOS PARA EXPRESAR SU CONCENTRACION Una solucin (o disolucin) es una mezcla de dos o ms componentes , perfectamente homognea ya que cada componente se mezcla ntimamente con el otro, de modo tal que pierden sus caractersticas individuales. Esto ltimo significa que los constituyentes son indistinguibles y el conjunto se presenta en una sola fase (slida, lquida o gas) bien definida. Las soluciones son distintas de los coloides y de las suspensiones en que las partculas del soluto son de tamao molecular y estn dispersas uniformemente entre las molculas del solvente. Caractersticas de las soluciones I) Sus componentes no pueden separarse por mtodos fsicos simples como decantacin, filtracin, centrifugacin, etc. II) Sus componentes slo pueden separase por destilacin, cristalizacin, cromatografa. III) Los componentes de una solucin son soluto y solvente. Soluto es aquel componente que se encuentra en menor cantidad y es el que se disuelve. El soluto puede ser slido, lquido o gas, como ocurre en las bebidas gaseosas, donde el dixido de carbono se utiliza como gasificante de las bebidas. El azcar se puede utilizar como un soluto disuelto en lquidos (agua). Solvente es aquel componente que se encuentra en mayor cantidad y es el medio que disuelve al soluto. El solvente es aquella fase en que se encuentra la solucin. Aunque un solvente puede ser un gas, lquido o slido, el solvente ms comn es el agua. En una disolucin, tanto el soluto como el solvente interactan a nivel de sus componentes ms pequeos (molculas, iones). Esto explica el carcter homogneo de las soluciones y la imposibilidad de separar sus componentes por mtodos mecnicos. Clases de soluciones La solubilidad de una sustancia respecto de un disolvente determinado es la concentracin que corresponde al estado de saturacin a una temperatura dada. Cuando la solubilidad es superior a 0,1 M (molar) se suele considerar la sustancia como soluble en el disolvente considerado; por debajo de 0,1 M (molar) se considera como poco soluble o incluso como insoluble si se aleja bastante de este valor de referencia.

La solubilidad depende de la temperatura; de ah que su valor vaya siempre acompaado de la temperatura de trabajo. En la mayor parte de los casos, la solubilidad aumenta al aumentar la temperatura Dependiendo de su concentracin, las disoluciones se clasifican en diluidas, concentradas, saturadas, sobresaturadas. Diluidas: si la cantidad de soluto respecto del solvente es pequea. Ejemplo: una solucin de 1 gramo de sal de mesa en 100 gramos de agua. Concentradas: si la proporcin de soluto con respecto del solvente es grande. Ejemplo: una disolucin de 25 gramos de sal de mesa en 100 gramos de agua. Saturadas: se dice que una disolucin est saturada a una determinada temperatura cuando no admite ms cantidad de soluto disuelto. Ejemplo: 36 gramos de sal de mesa en 100 gramos de agua a 20 C. Si intentamos disolver 38 gramos de sal en 100 gramos de agua, slo se disolvera 36 gramos y los 2 gramos restantes permanecern en el fondo del vaso sin disolverse. Sobresaturadas: disolucin que contiene mayor cantidad de soluto que la permitida a una temperatura determinada. La sobresaturacin se produce por enfriamientos rpidos o por descompresiones bruscas. Ejemplo: al sacar el corcho a una botella de refresco gaseoso. Modo de expresar las concentraciones La concentracin de las soluciones es la cantidad de soluto contenido en una cantidad determinada de solvente o solucin. Las unidades de concentracin en que se expresa una solucin o disolucin pueden clasificarse en unidades fsicas y en unidades qumicas. Unidades fsicas de concentracin Las unidades fsicas de concentracin estn expresadas en funcin del peso y del volumen, en forma porcentual, y son las siguientes: a) Porcentaje peso a peso (% P/P): indica el peso de soluto por cada 100 unidades de peso de la solucin.

b) Porcentaje volumen a volumen (% V/V): se refiere al volumen de soluto por cada 100 unidades de volumen de la solucin.

c) Porcentaje peso a volumen (% P/V): indica el nmero de gramos de soluto que hay en cada 100 ml de solucin.

EJERCICIO: Se tiene un litro de solucin al 37%. Cuntos litros de agua se tienen que agregar para que quede al 4%? Resolvamos: El problema no indica las unidades fsicas de concentracin. Se supondr que estn expresadas en % P/V. Datos que conocemos: V = volumen, C= concentracin V1 = 1 litro C1 = 37% 37% P/V = significa que hay 37 gramos de soluto en 100 ml de solucin (solucin = soluto + solvente). C2 = 4% V2 = ? Regla para calcular disoluciones o concentraciones V1 C1 = V2 C2 Puede expresarse en: % P/V Reemplazando los datos que se tienen del problema, se obtiene:

Entonces, si tenemos un litro de solucin al 37%; para obtener una solucin al 4% es necesario tener un volumen de 9,25 litros; por lo tanto, para saber cuantos litros de agua hay que agregar al litro inicial, hacemos: V2 V1 = Volumen de agua agregado 9,25 1 = 8,25 litros Respuesta: Se deben agregar 8,25 litros de agua Unidades qumicas de concentracin Para expresar la concentracin de las soluciones se usan tambin sistemas con unidades qumicas, como son: a) Fraccin molar b) Molaridad M = (nmero de moles de soluto) / (1 litro de solucin) c) Molalidad m = (nmero de moles de soluto) / (1 kilo de solvente)

a) Fraccin molar (Xi): se define como la relacin entre los moles de un componente (ya sea solvente o soluto) de la solucin y los moles totales presentes en la solucin.

Ejercicio: Se agregan 3 gramos de sal en un recipiente con 4 litros de agua cul es la concentracin de sal?, o dicho de otra forma cul es la concentracin de la solucin? Calcular la fraccin molar de solvente y de soluto: Recordemos que la fraccin molar expresa la concentracin de una solucin en Moles de Soluto o de Solvente por Moles Totales de la Solucin. Solvente: agua (H2O) Soluto: sal (NaCl) Datos que conocemos: 3 gramos de soluto y 4.000 cm3 (4 litros) de solvente. Con estos datos debemos resolver el problema, calculando 4 valores significativos: moles de solvente, moles de soluto, fraccin molar de solvente y fraccin molar de soluto. Para el agua, se conoce su masa molar = M(H2O) = 18 g/mol (1 mol de H2O contiene 18 g, formados por 2 g de H y 16 g de O). Averiguar cuntos moles de solvente H2O) tenemos:

Para la sal (NaCl) su masa molar = M(NaCl) = 58,5 g/mol (1 mol de sal equivale a 58,5 g, formados por 23 g de Na y 35,5 g de Cl) Averiguar cuntos moles de soluto tenemos:

Ahora que conocemos la cantidad de moles de solvente y la cantidad de moles de soluto, podemos calcular las fracciones molares de solvente y de soluto: Fraccin molar del solvente = Xsolvente

Fraccin molar del solvente (agua) = 0,99977 Fraccin molar del soluto= Xsoluto

Fraccin molar del soluto= 0,00023 Pero sabemos que:

Entonces: 0,99977 + 0,00023 = 1 b) Molaridad (M): Es el nmero de moles de soluto contenido en un litro de solucin. Una solucin 4 molar (4 M) es aquella que contiene cuatro moles de soluto por litro de solucin.

Ejercicio: Cul ser la molaridad de una solucin que contiene 64 g de Metanol (masa molar del metanol 32 gr/mol) en 500 ml de solucin? Datos conocidos: metanol 64 g Masa molar del metanol: 32 g/mol Masa de la solucin: 500 ml (0,5 litro) Primero calculamos la cantidad de moles que hay en 64 g de metanol. Si un mol de metanol equivale a 32 g, 64 g equivalen a 2 moles (64/32=2) Aplicamos la frmula:

Respuesta: 4 molar (4M) c) Molalidad (m) En primer lugar debemos advertir que molalidad no es lo mismo que molaridad por lo cual debemos evitar confundirlas puesto que el nombre es muy parecido pero en realidad cambian mucho los clculos, y es un grave error pero muy frecuente. En la molalidad relacionamos la molaridad del soluto con el que estamos trabajando con la masa del disolvente (en kg) que utilizamos. La definicin de molalidad es la siguiente: Relacin entre el nmero de moles de soluto por kilogramos de disolvente (m)

Concentracin en miliosmoles por litro El fenmeno de smosis se presenta cuando una solucin esta separada de su solvente por una membrana semipermeable. La smosis es la difusin de solvente a travs de la membrana desde la parte de menor a la de mayor concentracin. La presin osmtica es la presin que se debe aplicar sobre la solucin de mayor concentracin para impedir el paso del solvente (smosis) a travs de la membrana. Las membranas biolgicas tienen permeabilidades distintas y se dice que son semipermeables, es decir que son permeables para las molculas del solvente o pequeas molculas, pero no permiten el paso libre todas las molculas disueltas. El osmol es una unidad biolgica que se usa para soluciones que tienen actividad osmtica. El osmol resulta ser una unidad muy grande para los fenmenos biolgicos, se usa con mayor frecuencia la subunidad miliosmol (mosmol) que es ms representativa; Para calcular un mosmol es necesario conocer si el soluto ioniza o no lo hace, la ionizacin aumenta el numero de partculas en solucin, cuando se disuelven 180 mg de glucosa hasta un litro tenemos 1 mmol de glucosa, como esta sustancia no ioniza tambin tenemos 1 mosmol de glucosa; cuando se disuelven 58.5 mg de cloruro de sodio, sal que ioniza dando dos iones (Na+ y Cl-), entonces los 58.5mg son iguales a 1 mmol de sal pero equivalen a 2 mosmol. La presin osmtica depende del nmero de partculas y no de su carga ni de su masa, la misma fuerza osmtica es ejercida por una molcula grande como una protena, con peso molecular de muchos miles y muchas cargas, como la molcula de hemoglobina o un ion de sodio o de cloro. La mayora de los lquidos corporales tiene una presin osmtica que concuerda con la de una solucin de cloruro de sodio a 0.9 % y se dice que una solucin es isosmtica con los lquidos fisiolgicos. Los soluciones isotnicas con respecto unas de otras ejercen la misma presin osmtica, o sea contienen la misma concentracin de partculas osmticamente activas. Cuando se habla de soluciones isotnicas en el laboratorio suele tratarse de las soluciones que tienen la misma presin osmtica del plasma sanguneo, que es aproximado de 300

miliosmoles / litro. Las soluciones fisiolgicas de concentracin menor de 300 hipotnicas y si su concentracin es mayor se denominan hipertnicas. Una solucin es isotnica con respecto a una clula viva cuando no ocurre ganancia ni prdida neta de agua en la clula, tampoco se produce ningn cambio de la clula cuando entra en contacto con la solucin. Si tenemos en cuenta que la concentracin osmolar de una solucin que contiene una mezcla de electrolitos y molculas neutras es igual a la suma de las concentraciones osmolares individuales de todos sus componentes, convertir la concentracin de los solutos que se encuentran en el suero en osmolaridad. Una formula sencilla y que ofrece una buena utilidad clnica es: Osmolaridad = 2 ( Na+ mmol/l) + Glucosa mmol/l + NUS mmol/l o tambin Osmolaridad = 2(Na+ meq /l) +Glucosa mg/dl /18 + NUS mgl/dl /2.8 Donde el factor 2 se debe a que se consideran los iones asociados al Na+ ( Cl - y HCO3-) ; 1 mosmol de glucosa equivale a 180 mg / l = 18 mg/dl, 1 mosmol de nitrgeno ureico (NUS) equivale a 28 mg/l = 2.8 mg /dl, corresponde a la masa molecular de dos tomos de nitrgeno en la urea. Los electrolitos Na+, Cl- y HCO3- contribuyen en mas del 92 % a la osmolaridad del suero, el otro 8% corresponde a la glucosa, protenas y la urea.

SOLUCIONES ACUOSAS El agua es la biomolcula ms abundante del ser humano, constituye un 65-70 % del peso total del cuerpo. Esta proporcin debe mantenerse muy prxima a estos valores para mantener la homestasis hdrica, por lo contrario el organismo se ve frente a situaciones patolgicas debidas a la deshidratacin o la retencin de lquidos. La importancia del estudio de la biomolcula agua radica en el hecho de que la totalidad de las reacciones bioqumicas se realizan en el seno del agua, todos los nutrientes se transportan en el seno del agua. Estructura molecular del agua. Es una molcula tetradrica, con el tomo de oxigeno en el centro y los dos tomos de hidrgeno en los vrtices de dicho tetraedro quedando los otros dos vrtices ocupados por los electrones no compartidos del oxgeno El oxigeno es un tomo que posee mayor electronegatividad que el hidrogeno, esto hace que la molcula de agua sea un dipolo elctrico. Esta estructura explica muchas de las propiedades fsicas y qumicas del agua bien sea por la formacin de puentes de hidrogeno o por solvatacion de otras molculas. Propiedades fsicas y qumicas del agua. Las propiedades del agua son la base de una serie de funciones esenciales para la integridad del organismo. Funciones bioqumicas y fisiolgicas del agua. De lo anterior se deduce que las funciones bioqumicas y fisiolgicas del agua son consecuentes con las propiedades fisicoqumicas que se han estudiado. El agua puede actuar como componente de macromolculas protenas, cidos nucleicos, polisacridos, pueden estabilizar su estructura a travs de la formacin de puentes de hidrogeno. El hecho de que sea considerada como disolvente universal de sustancias inicas, polares no inicas y anfipticas, facilita que en su seno se puedan llevar a cabo la

totalidad de las reacciones bioqumicas, as como el transporte adecuado de sustancias en el organismo. El agua puede actuar como sustrato o producto de muchas reacciones como la hidrlisis o formacin de steres. 2. ACIDOS Y BASES - TITULACIN DE SOLUCIONES Lavoisier (1777) observ que sustancias como el azufre y el fsforo en combinacin con oxgeno, y en disolucin acuosa, daban lugar a sustancias cidas. Pens que el responsable era el oxgeno y lo llam principio acidificante. Arrhenius (1887) propuso la Teora de la disociacin electroltica inica: Cuando los electrolitos (cidos, bases y sales) se disuelven en se disocian en partculas cargadas (Iones).
TEORAS SOBRE LOS CIDOS Y LAS BASES.- Entre ellas tenemos las dos siguientes.
TEORA DE ARRHENIUS.-

Afirma que un cido es cualquier sustancia que en solucin es capaz de ceder iones hidrgeno positivos o protones (H+) y bases es toda sustancia que en solucin acuosa es capaz de ceder iones hidroxilo (OH-), tal como se sugiere en los siguientes ejemplos:

TEORA DE BRONSTED Y LOWRY.- Afirma que:

a) CIDO.- Es cualquier molcula o ion con capacidad para ceder iones hidrgeno positivos o protones (H+) en solucin acuosa.

Hoy sabemos que los protones no pueden existir en estado libre, sino que apenas se forman, inmediatamente se combina con una molcula de agua formando el ion hidronio. De lo dicho anteriormente se desprende que el ion hidronio es la especie inica que predomina en las soluciones cidas, aunque por razones de carcter prctico se suele afirmar que en un medio cido predominan los iones hidrgenos positivos o protones

Es cualquier molcula o ion con capacidad para aceptar iones hidrgenos positivos o protones.
b) BASE.-

De la observacin de la ltima ecuacin podemos deducir que las sustancias que en su estructura presentan el ion hidrxido tienen carcter bsico.
ELECTROLITOS FUERTES Y DBILES.-Recordemos

que todos los cidos, hidrxidos y sales, al disolverse en agua se disocian parcial o totalmente en iones, por esa razn se les llama electrolitos. Un electrolito que se disocia total o casi totalmente en iones se llama electrolito fuerte, pero si son pocas las molculas que se disocian en iones, por debajo del 5%, se llaman electrolitos dbiles. Son electrolitos fuertes: HCl, HBr, HI, HNO3, HClO4, H2SO4, NaCl, LiOH, NaOH, RbOH, CsOH, Mg(OH)2, Ca(OH)2, Sr(OH)2, Ba(OH)2, etc. Son electrolitos dbiles: H2S, H3PO4, HF, H3BO3, H2SO3, HNO2, H2CO3, HClO, HCN, NH3, etc. Los cidos y las bases que tienen un alto grado de ionizacin son cidos o bases fuertes, mientras que los que tienen bajo grado de ionizacin son cidos o bases dbiles. TITULACION DE SOLUCIONES La titulacin cido-base es un procedimiento analtico cuyo objetivo es determinar la concentracin de un analito con propiedades cidas o bsicas, utilizando una disolucin valorada de una base o cido, mediante una reaccin de neutralizacin para formar una sal y agua. Asimismo, mediante una titulacin tambin es posible deducir el pK del analito. Las valoraciones cido-base poseen las siguientes caractersticas - Se basan en una reaccin volumtrica cido-base. - El fundamento terico de dicha reaccin es la transferencia de protones entre el cido y la base - El intervalo de viraje se caracteriza por un cambio brusco del pH. - Se necesita un indicador qumico o un pHmetro para monitorizar la valoracin. Los casos ms frecuentes en las valoraciones cido-base son: 1. valoracin de cido fuerte con base fuerte 2. valoracin de base fuerte con cido fuerte 3. valoracin de cido dbil con base fuerte

4. valoracin de base dbil con cido fuerte En los casos 3 y 4 tambin hay que tener en cuenta el equilibrio cido-base del disolvente. NUNCA se valora un cido o base dbil con una base cido dbil. Las curvas de titulacin son las representaciones grficas de la variacin del pH durante el transcurso de la valoracin. Dichas curvas nos permiten: - estudiar los diferentes casos de valoracin (cido fuerte vs. base fuerte; base fuerte vs. cido fuerte; cido dbil vs. base fuerte; base dbil vs. cido fuerte). - determinar las zonas tamponantes y el pKa. - determinar el intervalo de viraje y el punto de equivalencia. - seleccionar el indicador cido-base ms adecuado. Los casos ms frecuentes en Bioqumica son las valoraciones de cidos y bases dbiles, ya que muchos metabolitos presentan un cierto carcter cido bsico. A modo de ejemplo, a continuacin se presenta la curva de titulacin del Tris, una base dbil, que se ha de titular con un cido fuerte (ej. HCl). cido fuerte = cido titulante (HCl) vs. base dbil = analito (Tris)

Fases de una curva de titulacin En esta curva de valoracin se pueden distinguir las siguientes fases

1. Antes de aadir el cido: El pH de la disolucin viene determinado por el pKb (=14-pKa) y predomina la base conjugada dentro del par. 2. Al ir aadiendo el cido titulante (HCl), se forman las especies B = Tris y BH+ = TrisH+. La relacin entre la abundancia de las distintas especies y el pH se puede establecer mediante la ecuacin de Henderson-Hasselbalch. Tal y como se ha descrito anteriormente, cuando [A ] = [AH] , entonces el pH = pK . El pKa supone un punto de mnima pendiente en la curva de titulacin y se sita en el punto medio de la zona tampn. Zona tampn: tramo de la curva de titulacin en el que se producen mnimas variaciones de pH al aadir equivalentes H3O+/OH- ; se localiza en el intervalo de pH = pKa 1 unidad de pH. En esta regin, el cido y su base conjugada se presentan en concentraciones similares (factor de 10; es decir cuando pH- pKa = 1, el cido se encuentra desprotonado en un 90%). 3. PE = Punto de equivalencia. Es el pH al cual se cumple que N.meq.acido = N.meq.base y se localiza en el punto medio del intervalo de viraje. En el punto de equivalencia toda la base se ha transformado en su forma cida conjugada, y se cumple que BBH+ ; en nuestro caso, B = Tris, por lo que TrisTrisH+ . El intervalo de viraje es el tramo de la curva en el cual pequeas adiciones del cido titulante producen grandes variaciones del pH de la disolucin y es la zona de mxima pendiente de la curva de titulacin. Teniendo en cuenta que se emplea un cido fuerte y una base dbil en esta valoracin, el punto de equivalencia (PE) se localiza a pH < 7, por lo que se habla de una HIDRLISIS ACIDA. 4. En este tramo de la curva existe un exceso de H3O+ provenientes de la hidrlisis del cido fuerte, y por lo tanto, el pH de la disolucin viene definido por el exceso del cido titulante. Si se tiene una disolucin de cido de concentracin desconocida, el proceso de neutralizacin con una base, permite inferirla. En efecto, la adicin de base, agotar progresivamente los iones H+ en la disolucin original, por lo que el pH de sta disminuir de la misma forma. 3. EL PRODUCTO IONICO DEL AGUA Y LA ESCALA DE pH El agua es un electrolito dbil, o sea que se disocia en escasa proporcin. El proceso de disociacin se presenta mediante la reaccin reversible:

El equilibrio de disociacin del agua esta muy desplazado hacia la izquierda, es decir, la concentracin de los iones en el agua pura es mnima. A partir de la ecuacin 1 se puede deducir la expresin correspondiente a la constante de equilibrio para la disociacin del agua:

El smbolo [ ] indica la concentracin molar de los iones en la solucin. Si se traslada el denominador del segundo miembro al primero, la igualdad queda as:

La concentracin del agua sin disociar es elevada y se puede considerar constante. Como el producto de dos constantes da otra constante, el primer miembro de la igualdad anterior, se podr expresar as:

Esto significa que el producto de las concentraciones de los iones H+ y OH-es constante. Adems, como Keq es el resultado del producto de las concentraciones inicas se le llama producto inico del agua. Valor del producto inico del agua Experimentalmente se ha determinado que a 25o C:

De lo anterior se deduce que:

Ejemplo N 1 Cul es el valor de OH- si el valor de [H+] = 1.5 x 10 -4 ? (1.5 x 10 -4)[OH-] = 1.0 x 10-14
[

OH-] = 6.6 x 10-11

-

La solucin es cida porque [H+] Ejemplo N 2

Cul es la concentracin de [H+] si [OH-] = 2.0 x 10-5?

al ver que [H+] < [OH-] la solucin es bsica.

El pH El pH (potencial de hidrgeno) es una medida de la acidez o alcalinidad de una disolucin. El pH indica la concentracin de iones hidronio [H3O+] presentes en determinadas sustancias. La sigla significa "potencial de hidrgeno" (pondus Hydrogenii o potentia Hydrogenii; del latn pondus, n. = peso; potentia, f. = potencia; hydrogenium, n. = hidrgeno). Este trmino fue acuado por el qumico dans Srensen, quien lo defini como el logaritmo negativo en base 10 de la actividad de los iones hidrgeno, o como el logaritmo negativo de la concentracin molar (ms exactamente de la actividad molar) de los iones hidrgeno. Esto es:

Desde entonces, el trmino "pH" se ha utilizado universalmente por lo prctico que resulta para evitar el manejo de cifras largas y complejas. En disoluciones diluidas, en lugar de utilizar la actividad del ion hidrgeno, se le puede aproximar empleando la concentracin molar del ion hidrgeno. Por ejemplo, una concentracin de [H3O+] = 1 107 M (0,0000001) es simplemente un pH de 7 ya que: pH = log[107] = 7 El pH tpicamente va de 0 a 14 en disolucin acuosa, siendo cidas las disoluciones con pH menores a 7 (el valor del exponente de la concentracin es mayor, porque hay ms iones en la disolucin), y alcalinas las que tienen pH mayores a 7. El pH = 7 indica la neutralidad de la disolucin (cuando el disolvente es agua). Medida del pH El valor del pH se puede medir de forma precisa mediante un potencimetro, tambin conocido como pH-metro, un instrumento que mide la diferencia de potencial entre dos electrodos: un electrodo de referencia (generalmente de plata/cloruro de plata) y un electrodo de vidrio que es sensible al ion de hidrgeno. Tambin se puede medir de forma aproximada el pH de una disolucin empleando indicadores, cidos o bases dbiles que presentan diferente color segn el pH. Generalmente se emplea papel indicador, que se trata de papel impregnado de una mezcla de indicadores cualitativos para la determinacin del pH. El papel de litmus o papel tornasol es el indicador mejor conocido. Otros indicadores usuales son la fenolftalena y el naranja de metilo. La determinacin del pH es uno de los procedimientos analticos ms importantes y ms usados en ciencias tales como qumica, bioqumica y la qumica de suelos. El pH

determina muchas caractersticas notables de la estructura y actividad de las biomacromolculas y, por tanto, del comportamiento de clulas y organismos.

pH DE SOLUCIONES CIDAS Y BSICAS En este punto del desarrollo de nuestro curso, todos ya sabemos que la acidez de los cidos se debe a los iones hidrgenos positivos o protones y la basicidad o alcalinidad de los hidrxidos se debe a los iones hidroxilo

4. LA CONSTANTE DE EQUILIBRIO DE UNA REACCION, LA Ka Y EL PKa DE UN GRUPO DISOCIABLE Constante de equilibrio Constante que equivale al producto de las concentraciones de las sustancias formadas en una reaccin qumica reversible en la que se ha alcanzado el equilibrio, dividido entre el producto de las concentraciones de las sustancias que reaccionan, elevada cada una a un exponente igual al coeficiente que precede a su respectiva frmula en la ecuacin qumica ajustada. Sea la reaccin reversible entre los reactivos A y B para dar los productos de reaccin C y D, segn: aA + bB cC + dD siendo A, B, C y D especies qumicas cualesquiera y [A], [B], [C] y [D] sus concentraciones respectivas expresadas en mol/litro. La velocidad de la reaccin directa, v, es directamente proporcional al producto de las concentraciones de los reactivos, elevada cada una a un exponente igual al coeficiente del reactivo en la reaccin:

v = k [A]a [B]b donde k es la constante de velocidad de la reaccin de A con B a una temperatura determinada. La velocidad de la reaccin inversa, v , es, de forma anloga: v = k [C]c [D]d Cuando se alcanza el equilibrio, la velocidad de las dos reacciones es la misma La constante de equilibrio aparente de una reaccin bioqumica, en general, es funcin del pH. Las reacciones qumicas de inters biolgico se estudian generalmente en presencia de una disolucin reguladora que mantenga el pH constante, y casi siempre en un valor prximo a la neutralidad. Si medimos la constante de equilibrio de una reaccin bioqumica, manteniendo el pH constante (por ejemplo en 6.5), obtendremos un valor para dicha constante; si cambiamos el pH (incluso dentro del entorno de la neutralidad, por ejemplo 7.7), el valor de la constante puede ser distinto.

Pka El Pka de un compuesto es el pH (logaritmo negativo de la concentracin de hidrogeniones) al cual la fraccin no ionizada de este corresponde al 50% y el otro 50% est ionizada. pKa es la fuerza que tienen las molculas de disociarse (es el logaritmo negativo de la constante de disociacin cida de un cido dbil).

Es necesario recordar que la fraccin no ionizada es la que puede penetrar a la clula; por lo tanto si un compuesto tiene un Pka cido, ser penetrar mas fcilmente a la clula en un medio cido (con un pH similar). De igual manera un compuesto con un Pka bsico penetrar mejor en un medio con un pH bsico. Una forma conveniente de expresar la relativa fortaleza de un cido es mediante el valor de su pKa, que permite ver de una manera sencilla en cambios pequeos de pKa los cambios asociados a variaciones grandes de Ka. Valores pequeos de pKa equivalen a valores grandes de Ka (constante de disociacin) y, a medida que el pKa decrece, la fortaleza del cido aumenta. Un cido ser ms fuerte cuanto menor es su pKa y en una base ocurre al revs, que es ms fuerte cuanto mayor es su pKa. Esas constantes de disociacin no son fijas, dependen de otras variables. Por ejemplo, la constante de disociacin cambia a temperaturas diferentes. Sin embargo, mantiene su valor a la misma temperatura, ante cambios de la concentracin de alguna de las especies o incluso ante la accin de un catalizador.

Valores de pKa Principales constantes de disociacin a 25 C cido cido actico cido asprtico Frmula CH3-COOH pKa1 4,757 3,900 10,002 pKa2 pKa3

HO2CCH(NH2)CH2CO2 1,990 H 4,202 4,819 1,910

cido benzoico C6H5-COOH cido butanoico CH3-CH2-CH2-COOH cido maleico

6,332

9.3

Titulacion La titulacin es utilizada para determinar la cantidad de cidos en una solucin dada. Un volumen de concentracin conocida del cido, es titulado con una solucin de concentracin conocida de una base fuerte, usualmente hidrxido de sodio (NaOH). Esta ltima solucin es agregada en pequeas cantidades hasta que el cido es neutralizado o consumido, esto ltimo se verifica con un colorante o bien un potencimetro (aparato que mide el cambio en el pH). La concentracin del cido en la solucin original puede ser calculada a partir del volumen y la concentracin de la solucin de base agregada. El resultado de graficar el pH contra la cantidad de NaOH agregado es conocido como curva de titulacin, esta curva revela el pKa de un cido dbil.

Considrese la titulacin de una solucin 0.1 M de cido actico con una solucin 0.1 M de NaOH a 25 C. En este proceso existirn dos equilibrios reversibles:

Ac. actico H+ + Acetato-

Ka

H Acetato 1.74x10

Ac .Actico

Figura: representacin de la disociacin del cido actico en agua. Al inicio de la titulacin, antes de agregar al NaOH (OH-), el cido actico (CH3COOH) est muy poco ionizado, est cantidad puede ser calculada a partir de su constante de disociacin (pKa). El rectngulo muestra la regin amortiguadora, que para el cido actico est entre 3.76 y 5.76 unidades de pH. El protn disociado del cido actico es utilizado para formar agua a medida que se agrega la solucin de la base fuerte (NaOH). El punto en el cual las concentraciones del cido y su base conjugada son iguales, es precisamente el pKa, que en este caso sucede a un pH de 4.76. En la regin en la cual el pH cambia muy poco con referencia al pKa del cido en cuestin, es precisamente en donde se encuentra su capacidad amortiguadora, en este caso de 3.76 a 5.76 unidades de pH.

En la siguiente figura se comparan las curvas de titulacin para tres cidos dbiles con constantes de disociacin muy diferentes: cido actico, fosfato dihidrogenado y amoniaco.

Figura :. representacin de la disociacin de tres cidos orgnicos. Acido actico (pKa= 4.76). Fosfato dihidrogenado (pKa= 6.86). Amoniaco (pKa= 9.25). Aunque la forma de las curvas es la misma, estn desplazadas a lo largo del eje de pH, pues tiene diferente fuerza.

5. BUFFERS E INDICADORES: LA ECUACION DE HENDERSON HASSELBACH Las mezclas de cidos dbiles y sus sales, o la mezcla de las bases dbiles y sus sales, son llamadas soluciones tampn o amortiguadoras porque resisten los cambios de la concentracin de iones hidrgenos positivos o protones (H+) producidos por la adicin de pequeas cantidades de cidos o bases. La concentracin de H+ est vinculada a la naturaleza del electrolito dbil. Considerando un cido dbil, de modo genrico como HAc, su equilibrio de disociacin sera: HAc <--------------------> Ac- + H+ Aplicando la ley de accin de masas, la constante de equilibrio K ser:

K = [ Ac- ] x [ H+ ] / [ HAc ] despejando [H+] K x [HAc] [ H+ ) = -------------------[ Ac- ] aplicando logaritmos log ( H+ ) = log K + log (HAc ) - log ( Ac- ) multiplicando por -1 - log (H+ ) = - log K - log (HAc ) + log ( Ac- ) Si hacemos que - log ( H+ ) = pH - log K = pK

Se obtiene la ecuacin de Henderson-Hasselbalch:

Si en la ecuacin la concentracin de cido es igual a la de la base, el cociente es 1, siendo el log de 1 = 0, se tiene que pH = pK por tanto, se puede definir el pK como el valor de pH de una solucin amortiguadora en el que el cido y la base se encuentran a concentraciones equimoleculares o al 50% cada una. El pH de los medios biolgicos es una constante fundamental para el mantenimiento de los procesos vitales. La accin enzimtica y las transformaciones qumicas de las clulas se realizan dentro de unos estrictos mrgenes de pH. En humanos los valores extremos compatibles con la vida y con el mantenimiento de funciones vitales oscilan entre 6,8 y 7,8; siendo el estrecho margen de 7,35 a 7,45 el de normalidad. Tambin en el trabajo de laboratorio, es imprescindible el mantenimiento de un pH para la

realizacin de muchas reacciones qumico-biolgicas. Los sistemas encargados de evitar grandes variaciones del valor de pH son los denominados amortiguadores, buffer, o tampones. Son por lo general soluciones de cidos dbiles y de sus bases conjugadas o de bases dbiles y sus cidos conjugados. Los amortiguadores resisten tanto a la adicin de cidos como de bases. Las clulas contienen dos sistemas amortiguadores importantes adems de las protenas y los nucletidos. Estos sistemas a diferencia de las macromolculas estn formados por metabolitos de bajo peso molecular y son los sistemas de fosfato y bicarbonato. El sistema amortiguador de fosfato acta en el citoplasma de las clulas y consiste de: H2PO4- H+ + HPO42El sistema amortiguador de fosfato es ms eficiente a un pH cercano a su pKa de 6.86, por lo que resiste cambios en el pH desde 5.86 hasta 7.86, por tanto, es muy efectivo para los sistemas biolgicos que realizan reacciones alrededor de pH 7.0. En los mamferos por ejemplo el pH extracelular y de la mayora de los compartimientos citoplsmicos est en el intervalo de 6.9 a 7.4. El plasma sanguneo es amortiguado en parte por el sistema amortiguador de bicarbonato, que consiste de cido carbnico (H2CO3) como donador de protones y bicarbonato (HCO3-) como aceptor de protones: H2CO3 H+ + HCO3K1

H HCO

H 2CO3

La sangre es un importante ejemplo de solucin tampn en la que el cido y el ion que ejercen la accin del amortiguamiento son el cido carbnico, H2CO3, y el ion bicarbonato o carbonato cido, HCO3-. Cuando entra un exceso de ion hidrgeno a la sangre, se elimina casi totalmente por la reaccin:

Y cuando hay un exceso de ion hidrxido, ste es absorbido por la siguiente reaccin:

Por este mecanismo el pH de la sangre humana se mantiene cerca de 7,35, es decir, ligeramente alcalina. Si el pH de la sangre es menor que 7,35 la condicin se conoce como acidosis y si se eleva por encima de 7,45 se tiene una condicin llamada alcalosis. Si la elevacin est por encima de 7,8 o por debajo de 6,8 (debido a una respiracin defectuosa, inanicin, insuficiencia renal o alguna otra enfermedad) la persona puede sufrir daos irreversibles en el cerebro o incluso morir.