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ESPECTROSCOPIA UV-VIS 1- Introduccin Los mtodos espectroscpicos de anlisis se basan en la medicin de la radiacin electromagntica emitida o absorbida por los analitos. Los mtodos espectroscpicos tambin se clasifican de acuerdo con la regin del espectro electromagntico que se utiliza. Estas regiones incluyen los rayos X, ultravioleta, visible, infrarrojo, microondas y radiofrecuencias. Todo analito molecular es capaz de absorber ciertas longitudes de onda caractersticas de la radiacin electromagntica. En este proceso, la energa de la radiacin es transferida temporalmente a la molcula y, como consecuencia, disminuye la intensidad de la radiacin. La absorbancia de una solucin aumenta conforme disminuye la transmitancia. De acuerdo con la ley de Beer, la absorbancia est relacionada linealmente con la concentracin de la especie y con la longitud de la trayectoria de la radiacin en el medio absorbente, esta linealidad puede presentar desviaciones lo que representa limitaciones de la ley. La ley de Beer slo describe adecuadamente el comportamiento de la absorcin en soluciones diluidas. Las mediciones de absorcin en las regiones visible y ultravioleta del espectro proporcionan informacin cualitativa y cuantitativa sobre molculas orgnicas, inorgnicas y bioqumicas. La espectroscopia de absorcin molecular ultravioleta/visible se emplea principalmente para el anlisis cuantitativo y es uno de los mtodos ms comunes usados en laboratorios qumicos. Los instrumentos que se utilizan para las mediciones con radiacin ultravioleta, visible o infrarroja se denominan espectrofotmetros, stos emplean una rejilla o un prisma monocromador para proporcionar una banda angosta de radiacin para las mediciones y como ventaja, la longitud de onda que se usa se puede variar continuamente. Algunos estn diseados slo para la regin visible, otros tienen rangos que van desde 180 a 200nm en el ultravioleta a travs de toda la regin visible de 750 a 800nm. Unos pocos cubren la regin ultravioleta/visible as como la cercana al infrarrojo, aproximadamente a 3000nm. Los equipos actuales pueden determinar los espectros de absorcin en forma automtica. Se debe indicar tipo de lectura (A o %T), rango de longitudes de onda donde se desea el equipo realice el barrido y solicitar una correccin de base con la solucin blanco en el compartimiento de la muestra. En caso de utilizar un equipo de doble haz, la correccin de la lnea de base se realiza conjuntamente con las lecturas de absorbancia de las muestras. La determinacin espectrofotomtrica de compuestos orgnicos que contienen uno o ms grupos cromofricos es potencialmente factible. Varias especies inorgnicas tambin absorben, iones de los metales de transicin y sus complejos son coloridos en solucin, por lo que pueden ser determinados por medicin espectrofotomtrica. Muchos analitos no absorbentes, inorgnicos y orgnicos, se pueden determinar fotomtricamente
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hacindolos reaccionar con reactivos cromofricos para producir productos que absorben fuertemente en las regiones ultravioleta y visibles. Es posible determinar las concentraciones de dos componentes individuales en una mezcla en forma simultnea realizando mediciones espectrofotomtricas a dos longitudes de onda. En la mayora de los mtodos espectrofotomtricos se hace una calibracin con el mtodo de los estndares externos, para ello se prepara una serie de soluciones patrn del analito, se mide su absorbancia y se construye una curva de calibracin de absorbancia frente a concentracin, o se determina la ecuacin de regresin lineal. La pendiente de la curva de calibracin o de la ecuacin de regresin es igual al producto de la absortividad y la longitud de la trayectoria de la radiacin. El mtodo de los estndares externos es, por consiguiente, un procedimiento para obtener el factor de proporcionalidad entre absorbancia y concentracin en las mismas condiciones y con los mismos instrumentos empleados en las muestras.

2- Objetivos Ilustrar sobre los principios de la espectrofotometra, las formas de operacin prctica de los equipos, las caractersticas de absorcin de la luz por las soluciones y sus aplicaciones cuantitativas. Realizar un anlisis de mezclas para la determinacin de la concentracin de cada componente de una mezcla. Elaborar una curva de calibracin por el mtodo de los estndares externos.

3- Reactivos 3.1. Solucin de dicromato de potasio 0.01 M y 6.10-4 M 3.2. Solucin de permanganato de potasio 3. 10-3 M y 1.8.10-4 M 3.3. Solucin de cido sulfrico al 15% v/v. 3.4. Agua destilada. 4- Material 4.1. Matraz de 50ml. 4.2. Matraz de 100ml. 4.3. Matraz de 1000ml 4.4. Probeta de 250ml. 4.5. Vaso de precipitado. 4.6. Varilla de vidrio. 4.7. Embudo. 4.8. Papel absorbente. 4.9. Espectrofotmetro DR/2010 (intervalo de longitud de onda 400-900nm). 4.10. Par de celdas para muestras de 10ml.

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5- Procedimiento 5.1. Preparacin de soluciones. 5.1.1. Preparacin de la solucin 0.01M de dicromato de potasio: pesar 0,2942g de la droga y disolver con agua destilada. Llevar a matraz de 100ml y enrazar. 5.1.2. Preparacin de la solucin 3.10-3M de permanganato de potasio: pesar 0,0474g de la droga y disolver con agua destilada. Llevar a matraz de 100ml y enrazar. 5.1.3. Preparacin de la solucin de cido sulfrico al 15%: medir 150ml del cido, llevar a matraz de 1000ml y enrazar con agua destilada. 5.2. Determinacin de espectros de absorcin. 5.2.1. Encender el espectrofotmetro, automticamente el equipo realizar una serie de controles o chequeos de inicializacin. Es importante aguardar el tiempo necesario para permitir la estabilizacin de la fuente de luz. 5.2.2. Seleccionar el programa 0 (cero), modo lectura de ABSORBANCIA. El quipo pide que se ingrese el nmero de programa (apretar la tecla 0 y luego enter) 5.2.3. Ajustar la longitud de onda a 340nm. Usar la perilla situada en el costado del equipo. 5.2.4. Colocar la solucin blanco o cero en una celda, en este caso agua destilada, hasta la marca correspondiente a 10ml. Con papel absorbente limpiar y secar la superficie externa de la celda. 5.2.5. Colocar la celda en el portacelda del equipo y tapar con el capuchn de proteccin de la luz. 5.2.6. Ajustar el aparato a cero (apretando la tecla zero), siempre se debe usar la misma cubeta y en la misma posicin. El equipo mostrar en la pantalla una lectura de 0 de absorbancia. 5.2.7. Colocar la solucin de K2Cr2O7 6.10-4 M en otra celda hasta la marca correspondiente a 10ml. Con papel absorbente limpiar y secar la superficie externa de la celda. 5.2.8. Colocar la celda en el portacelda, tapar con el capuchn y leer en el equipo (apretando la tecla read). Registrar el valor de absorbancia indicado en el visor una vez que la lectura se ha estabilizado. 5.2.9. Seleccionar las siguientes longitudes de onda y determinar los valores de Absorbancia. Para cada nuevo valor de longitud de onda se debe ajustar el 0 de Absorbancia segn lo indicado anteriormente. Longitudes de onda: 340 350 370 380 390 400 410 420 425 430 435 440 445 450 455 460 465 470 475 480 490 500 510 520 525 530 535 540 545 550 555 560 570 580 590 600 610 620 630nm. 5.2.10 Finalmente retirar la celda y apagar el equipo. * Repetir el mismo procedimiento para una solucin de KMnO4 1.8.10-4 M.

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Tabla 1: Absorbancias para las soluciones de KMNO4 y K2Cr2O7 a distintas longitudes de onda
Long onda 400 410 420 425 430 435 440 445 450 455 460 465 470 475 480 490 500 K2Cr2O7 0,210 0,873 0,730 0,706 0,690 0,683 0,664 0,642 0,610 0,573 0,523 0,478 0,432 0,370 0,324 0,227 0,153 KMnO4 0,182 0,149 0,132 0,129 0,129 0,132 0,14 0,149 0,165 0,188 0,215 0,252 0,299 0,352 0,407 0,581 0,742 Long onda 510 520 525 530 535 540 545 550 555 560 570 580 590 600 610 620 630 K2Cr2O7 0,098 0,060 0,046 0,037 0,030 0,025 0,022 0,019 0,017 0,017 0,016 0,016 0,016 0,014 0,016 0,012 0,014 KMnO4 0,92 1,165 1,151 1,164 1,058 1,064 1,117 1,033 0,847 0,709 0,609 0,336 0,177 0,133 0,113 0,102 0,094

5.3. Representacin, en un mismo grfico, de absorbancia vs. longitud de onda para las soluciones de KMnO4 y K2Cr2O7. Grfico 1: Espectros de absorcin para las soluciones de KMNO4 y K2Cr2O7 a distintas longitudes de onda.

1,200 1,100 1,000 0,900 0,800 0,700 Abs 0,600 0,500 0,400 0,300 0,200 0,100 0,000 400 425 450 475 500 525 550 575 600 625 K2Cr2O7 KMnO4

Long de onda (nm)

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5.4. Seleccin de las longitudes de onda de trabajo. 5.4.1. Observar ambos espectros de absorcin y seleccionar dos longitudes de onda con valores de absorbancia elevados para el permanganato o para el dicromato y con mnimas interferencias del otro compuesto.

5.5. Determinacin de las concentraciones de dicromato y permanganato en una mezcla. 5.5.1. Preparacin de diluciones: a) Tomar respectivamente 3, 4 y 6ml de solucin de dicromato de potasio 0.01M y llevar a 50.0ml con cido sulfrico al 15 % en un matraz aforado. b) Tomar respectivamente 2, 3 y 4ml de solucin de permanganato de potasio 3. 10-3 M y llevar a 50.0ml con cido sulfrico al 15 % en un matraz aforado. 5.5.2. Calcular la concentracin final de permanganato y dicromato para todas las diluciones. 5.5.3. Seleccionar la primera longitud de onda elegida (520nm). 5.5.4. Ajustar el 0 de absorbancia utilizando la solucin de H2SO4 15% como blanco. 5.5.5. Medir la absorbancia de las soluciones correspondientes, comenzando por la de menor concentracin. Registrar los valores obtenidos. 5.5.6. Repetir el procedimiento (puntos 5.4.4 y 5.5.5.) para la segunda longitud de onda seleccionada (410nm). 5.5.7. Obtener las representaciones de Beer para ambas series de soluciones y para las dos longitudes de onda anteriormente seleccionadas.

6- Tratamiento de los resultados 6.1. Representar grficamente absorbancia (en ordenadas) vs concentracin. 6.2. Estimar la mejor recta de acuerdo a los valores medidos. 6.3 Observar el intervalo dinmico lineal de trabajo. Si es necesario, descartar aquellos puntos que se alejen de la linealidad ocasionando desviaciones a la ley de Lambert Beer. 6.4. Del grfico de absorbancia vs concentracin, calcular los valores de absortividad molar () de cada una de las especies a ambas longitudes de onda. 6.5 Determinar la concentracin de cada componente en la solucin incgnita segn la siguiente ecuacin: A 1 = Cr2O72-1 x b x CCr2O72- + MnO4- 1 x b x CMnO4A 2 = Cr2O72-2 x b x CCr2O72 - + MnO4- 2 x b x CMnO4-

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7- Redaccin del informe 7.1. Indique las caractersticas tcnicas del equipo utilizado como tipo de lmpara, rango til de longitudes de onda, tipo de selector de longitudes de onda, ancho de banda, detector, etc. 7.2. Realice las 4 representaciones de Beer e indique los coeficientes de extincin para cada compuesto a cada longitud de onda. Indique si descart alguna lectura. 7.3. Calcule las concentraciones de cada compuesto en su muestra.

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