paredes procariotas

1 INTRODUCCIN 2 PAREDES DE LAS EUBACTERIAS 2.1 EL PEPTIDOGLUCANO: COMPOSICIN QUMICA Y ESTRUCTURA 2.1.1 COMPOSICIN QUMICA Y ESTRUCTURA BSICAS DEL PEPTIDOGLUCANO 2.1.2 EL PEPTIDOGLUCANO DE BACTERIAS GRAM-NEGATIVAS 2.1.3 EL PEPTIDOGLUCANO DE BACTERIAS GRAM-POSITIVAS 2.2 RELACIONES ENTRE ESTRUCTURA Y FUNCIN EN EL PEPTIDOGLUCANO 2.3 OTROS COMPONENTES DE LA PARED CELULAR DE BACTERIAS GRAMPOSITIVAS: LA MATRIZ 2.4 PARED CELULAR DE LAS BACTERIAS CIDO ALCOHOL RESISTENTES 2.5 LA PARED DE BACTERIAS GRAM-NEGATIVAS 2.5.1 LA MEMBRANA EXTERNA DE BACTERIAS GRAM-NEGATIVAS 2.5.1.1 COMPOSICIN QUMICA Y ESTRUCTURA DE LA MEMBRANA EXTERNA 2.5.1.1.1 Fosfolpidos (FL) 2.5.1.1.2 Lipopolisacrido (LPS) 2.5.1.1.3 La lipoprotena (LPP, lipoprotena de Braun) 2.5.1.1.4 Protenas de la membrana externa 2.5.1.2 PAPELES Y FUNCIONES DE LA MEMBRANA EXTERNA 2.5.2 EL ESPACIO PERIPLSMICO 3 PAREDES DE LAS ARQUEAS BIBLIOGRAFA

1 INTRODUCCIN

La mayor parte de los procariotas posee una pared celular (P.C.) rgida rodeando al protoplasto. Las excepciones son los micoplasmas (dentro del dominio Bacteria) y algunas arqueas, como Thermoplasma. Al microscopio electrnico se puede observar como una capa en ntimo contacto con la membrana

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citoplsmica, con un espesor que oscila entre 10 y 80 nm (segn especies) -frente a los 8 nm de la membrana celular- , y con una estructura ms o menos compleja, segn los tipos bacterianos. a) Las paredes celulares ms frecuentes en eubacterias siguen dos modelos alternativos que, como veremos comparten un componente comn: paredes de tipo Gram-positivo o de tipo Gramnegativo. b) Unas pocas eubacterias (como las del gn. Planctomyces) poseen paredes a base de protenas. c) Las Arqueas poseen paredes diferentes a las de eubacterias y se pueden agrupar en diversos tipos. El grueso de este captulo est dedicado al estudio de las paredes Gram-positivas y Gram-negativas, con sus principales variantes, pero finalizaremos con una alusin a los principales modelos de paredes arqueanas. Aunque el alumno realizar en prcticas de labororatorio la tincin de Gram, vamos a explicarla aqu brevemente. La tincin de Gram es la ms importante entre las tinciones llamadas diferenciales (aquellas que no tien de la misma manera a todos los tipos de bacterias). Resumiendo, esta tincin consta de varios pasos:

1. Imaginemos un frotis en porta de vidrio con una muestra de varios tipos de bacterias, que se han fijado por calor. En la primera fase, esta preparacin de trata con un primer colorante llamado violeta cristal o violeta de genciana. 2. A continuacin se aade una solucin de lugol (yodo-ioduro), que acta como mordiente, formando una laca relativamente resistente con el violeta. En este momento todas las bacterias estn teidas de color violeta. 3. Ahora realizamos una descoloracin diferencial con etanol o una mezcla de etanol y acetona. Lo que ocurre es que algunas bacterias (las que llamaremos Gramnegativas) pierden el color violeta (quedaran prctimante transparentes al microscopio), mientras que otras (las Gram-positivas) resisten el tratamiento, y retienen el colorante violeta. 4. Finalmente, tratamos el porta con un segundo colorante (colorante de contraste): se trata de un colorante de color rojo o rosa, como la fucsina o la safranina. Este colorante tie ahora a las bacterias previamente descoloradas por el etanol. Por lo tanto, el resultado en la observacin al microscopio es que las bacterias Grampositivas se ven de color violeta, y las Gram-

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negativas de color rosa o rojo. Como veremos enseguida, esta diferencia de comportamiento ante la tincin de Gram refleja el hecho de que ambos tipos de eubacterias poseen dos tipos estructuralmente diferentes de pared celular, aunque ambas posean en comn la posesin de peptidoglucano. A continuacin estudiaremos con cierto detalle la pared celular de eubacterias.

PAREDES DE LAS EUBACTERIAS

Consisten en un esqueleto macromolecular rgido, llamado peptidoglucano (= mucopptido o murena), que en Gram-positivas se encuentra inmerso en una matriz aninica de polmeros azucarados ; y en Gram-negativas est rodeada por una membrana externa, e inmersa en un espacio periplsmico. Comenzaremos abordando esa macrolcula tan peculiar llamada peptidoglucano, para despus estudiar globalmente y por separado la pared de Gram-positivas y Gram-negativas, con algunas variantes que se pueden presentar.

2.1 EL PEPTIDOGLUCANO: COMPOSICIN QUMICA Y ESTRUCTURA

En las bacterias Gram-positivas el peptidoglucano representa el componente mayoritario de la pared celular (50-80% en peso), mientras que en Gram-negativas supone slo del 1 al 10%.

2.1.1 COMPOSICIN QUMICA Y ESTRUCTURA BSICAS DEL PEPTIDOGLUCANO

Est formado por repeticiones de una unidad disacardica fundamental unida a su vez a un tetrapptido. Distintas cadenas (formadas por el esqueleto de azcares) se unen entre s por determinados enlaces peptdicos entre tetraptidos de cadenas diferentes. Veamos todo ello en su concrecin qumica: La unidad disacardica repetitiva: consiste en N-acetilglucosamina (NAG) unida por enlace (14) a N-acetilmurmico (NAM). Obsrvese que el NAM es el 3-O-D-lactil-ter de la NAG (o sea, se deriva de unir el cido D-lctico con el OH del C-3 de la NAG). Las distintas unidades disacardicas se van uniendo entre s por enlaces (14) entre el NAM de una unidad y la NAG de la siguiente. Este enlace es susceptible a la rotura catalizada por el enzima lisozima. El nmero de repeticiones (n) puede oscilar entre 10 y 100. La cadena tetrapeptdica: Desde el grupo carboxilo de cada cido NAM, y mediante un enlace amido, se encuentra unido el tetrapptido. Un tetrapptido tpico de muchas bacterias es: L-alanina---D-glutmico---meso-diaminopimlico---D-alanina Obsrvese la alternancia de aminocidos D y L en el tetrapptido.

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La estructura global: Las distintas cadenas polisacardicas, con sus respectivos tetrapptidos, se unen entre s por medio de puentes o enlaces peptdicos, entre un aminocido de una cadena (p. ej., el aminocido n3, como el meso-DAP del ejemplo) y otro aminocido de una cadena adyacente (la D-ala terminal). De este modo, la estructura global es una sola macromolcula gigante que envuelve al protoplasto, formando un sculo rgido, a modo de tejido continuo, que tiene el volumen y la forma de la bacteria respectiva.

En bacterias Gram-negativas este sculo est formado por una sola capa (o unas pocas) de cadenas de PG. En Gram-positivas existen varias capas (hay varios niveles de PG). A continuacin describiremos por separado el PG de Gram-positivas y Gram-negativas, dando indicaciones de sus principales variantes.

2.1.2 EL PEPTIDOGLUCANO DE BACTERIAS GRAM-NEGATIVAS

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En la mayor parte de Gram-negativas el peptidoglucano corresponde a la composicin y estructura que acabamos de describir. Sin embargo, en las espiroquetas, el diaminocido en posicin 3, en vez de ser meso-DAP, est sustituido por la L-ornitina (que tambin es un diaminocido). El enlace entre cadenas polisacardicas se realiza normalmente mediante unin peptdica directa entre el grupo carboxilo de la D-ala terminal y el grupo e -amino del meso-DAP. Ahora bien, en este enlace participan solamente el 50% de los tetrapptidos. Los dems pptidos no participan en enlaces, y entre estos ltimos se encuentran incluso dipptidos y tripptidos. El resultado es una capa simple de PG (de 1 nm de espesor), a modo de malla floja, y con grandes poros (los huecos dejados por las zonas donde no hay enlace peptdicos). Ello explica el comportamiento de las bacterias Gram-negativas en la tincin de Gram: al aadir el alcohol, se produce una deshidratacin que tiende a contraer la estructura del PG, pero los poros son grandes y por ellos sale el primer colorante (el violeta de genciana). El ulterior tratamiento de la preparacin con el colorante de contraste (fuchsina o safranina) tie a estas bacterias de rojo.

2.1.3 EL PEPTIDOGLUCANO DE BACTERIAS GRAM-POSITIVAS

Es ms variado que el de Gram-negativas, sobre todo en funcin de ciertas variantes en la composicin del tetrapptido y del tipo de enlaces entre los tetrapptidos . Variantes en composicin del tetrapptido : En bacterias Corineformes: el grupo -CO- en a del D-glu (2) puede estar amidado o unido a una glicina (Gly); el aa (1) puede ser Gly o L-Ser, en lugar de la L-ala; el hidroxilo en 6 del NAM puede estar acetilado, lo que hace que el PG de estas bacterias sea resistente a la lisozima. Muchas bacterias Gram-positivas carecen de meso-DAP (3), y en su lugar puede existir: LL-DAP L-diaminobutrico (DAB) L-lisina L-homoserina L-ornitina Modalidades de uniones interpeptdicas: enlace directo entre la D-ala(4) y el -NH 2 libre del diaminocido en (3) enlace D-ala(4)-- X--diaminocido(3), donde X representa un puente, que puede consistir en: un solo aminocido: L-ala, o D-iso-Asn un pptido corto: {L-ala--L-ala} {L-ala}3 {L-ala}3 -- L-ornitina {Gly}5 enlace D-ala(4) --- {mismo tetrapptido}--- diaminocido (3) enlace entre D-ala(4) y el D-glu(2) (y no el aa en 3), por medio de un pptido en el que debe de existir obligatoriamente un diaminocido (p. ej., D-lys, D-ornitina).

Desde el punto de vista estructural, el PG de Gram-positivas se caracteriza por la existencia de mltiples capas, existiendo entrecruzamientos tanto entre cadenas adyacentes en el mismo nivel como entre niveles distintos. El resultado es una red tridimensional gruesa (hasta 50 capas en algunos
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Bacillus ), y ms compacta que en Gram-negativas. De todas formas, el grado de compacidad vara entre especies, y depende de: n de NAM que contengan tetraptidos que participen en entrecruzamientos; longitud del puente peptdico Ello condiciona a su vez la intensidad de la gram-positividad en la tincin de Gram.

2.2 RELACIONES ENTRE ESTRUCTURA Y FUNCIN EN EL PEPTIDOGLUCANO

La arquitectura molecular del sculo de murena est an sujeta a debate. Sin embargo, uno de los modelos recientes ms aceptado se podra resumir de la siguiente manera: Los resultados de difraccin de rayos X parecen indicar que las unidades disacardicas de las cadenas estn giradas unas respecto de otras, formando una estructura helicoidal de orden 4 o 5. A resultas de ello, los pptidos protruyen alternativamente: hacia arriba, a la izquierda, hacia abajo, a la derecha, y vuelta a empezar, etc. Esta organizacin permite que una cadena de PG se pueda unir con cadenas cercanas de su mismo nivel, as como con cadenas por encima y por debajo de su nivel, formando un perfecto entramado tridimensional (al menos en las Gram-positivas). La orientacin de las cadenas azucaradas en relacin con la superficie celular an est debatida. Parece que se disponen casi paralelas a la superficie celular, con una tendencia a una forma espiral por encima de la membrana citoplsmica. Si consideramos una bacteria de forma bacilar, esta espiral cerrada se dispone siguiendo el permetro circular (y no siguiendo el eje longitudinal). Los grupos tetrapeptdicos salen perpendicularmente de los NAM, en sentido vertical hacia la membrana. Sin embargo, cuando dos tetraptidos de un nivel se unen entre s, forman un puente casi horizontal, formando ngulos de unos 90o repecto de los esqueletos carbonados, y siguiendo el eje longitudinal de la clula. Esta estructura confiere una serie de importantes propiedades: 1) Gran rigidez, que contrarresta las fuerzas osmticas a que est sometido el protoplasto (aguanta presiones de unas 5 a 15 atmsferas). Esta rigidez depende de: a) el grado de entrecruzamiento ; b) el hecho de que el enlace (1 4) es muy compacto. La alternancia regular entre anillos piransicos de NAG y de NAM genera uno de los polisacridos ms estables desde el punto de vista termodinmico, que recuerda en su estilo a la quitina y a la celulosa; c) la alternancia en el tetrapptido, de aminocidos en configuraciones D y L supone una factor adicional que confiere an ms fuerza estructural, y adems permite que todas las cadenas laterales de estos aminocidos se dispongan hacia el mismo lado, facilitando la formacin de puentes de H. 2) Pero, al mismo tiempo, la estructura permite una notable flexibilidad. Ello colabora, junto con su rigidez, a soportar variaciones amplias de la tensin osmtica del protoplasto. 3) Condiciona la forma celular. Aunque la qumica del PG, por s misma, no determina la forma, es su disposicin espacial la responsable principal de esta forma.

2.3 OTROS COMPONENTES DE LA PARED CELULAR DE BACTERIAS GRAM-POSITIVAS: LA MATRIZ

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Como ya dijimos, el PG de las bacterias Gram-positivas se encuentra inmerso en una matriz, que puede representar hasta el 50% del peso de la pared celular, y que est constituida por largos polmeros denominados cidos teicoicos , pudiendo existir tambin (o en su lugar) los cidos teicurnicos y los lipoteicoicos. Estos componentes llegan a sobresalir de la superficie celular y suministran especificidad antignica.

cidos teicoicos : Estn presentes en muchas bacterias Gram-positivas, pero no en todas. Son polmeros de hasta 30 unidades de glicerol-fosfato o ribitol-fosfato, unidas entre s por enlaces fosfodister, en los que la mayora de los grupos -OH estn sustituidos por -H, azcares, aminoazcares o D-alanina. Los cidos teicoicos estn unidos covalentemente al peptidoglucano, concretamente al -OH en posicin 6 del NAM, a travs de una unidad de enlace, variable segn las especies. (Por ejemplo, en una especie de Micrococcus, el elemento de enlace consiste en {glicerol-P} 3 --NAG-P). cidos teicurnicos : Ciertas bacterias Gram-positivas, cuando se someten a un rgimen de limitacin de fosfato son incapaces de sintetizar cidos teicoicos, pero en su lugar producen cidos teicurnicos. Los teicurnicos consisten en polmeros aninicos formados por la alternancia de cidos urnicos (que tienen grupos COOH libres) y aminozcares como la N-acetil-galactosamina. cidos lipoteicoicos: Estn presentes en todas las bacterias Gram-positivas, aun en condiciones de carencia de fosfato. Se trata simplemente de cidos glicerol-teicoicos que se encuentran unidos a la membrana citoplsmica, concretamente se unen por enlace fosfodister con glucolpidos de membrana, mientras que el otro extremo de la cadena queda expuesto al exterior. En Streptococcus pyogenes las cadenas de lipoteicoicos se encuentran asociadas con la llamada protena M , originando una microfibrillas que sobresalen notablemente hacia el exterior celular (observables a microscopio electrnico), y que facilitan la unin a las clulas de animales en que parasitan estas bacterias. Funciones de los polmeros de la matriz : Parece ser que su papel principal es suministrar una carga neta negativa a la pared celular, lo que permite captar cationes divalentes (p. ej., Mg ++ ), que a su vez se necesitan para muchas actividades enzimticas de la membrana citoplsmica o del espacio periplsmico, que participan de

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la morfognesis y divisin de la pared celular. Como ya dijimos, los cidos teicoicos y teicurnicos son buenos antgenos. Cuando no estn cubiertos por estructuras ms externas (como cpsulas), constituyen el antgeno somtico O de las bacterias Gram-positivas . Finalmente, en algunas bacterias, sumistran, junto con el PG, receptores especficos para la adsorcin de ciertos bacterifagos.

2.4 PARED CELULAR DE LAS BACTERIAS CIDO ALCOHOL RESISTENTES

Determinadas bacterias Gram-positivas (corineformes, Nocardia y, en especial Mycobacterium ) presentan una pared celular muy compleja, con abundancia de lpidos (algo excepcional entre las Gram-positivas). Estas bacterias no se tien con los colorantes normales, pero una vez que se han teido con fucsina (forzando mediante calentamiento de la preparacin), tienen resistencia a decolorarse por una mezcla de cido clorhdrico al 3% en etanol de 96o . Por ello se denominan como bacterias cidoalcohol resistentes . Esta propiedad depende esencialmente de la presencia, en su pared celular de unos lpidos llamados cidos miclicos. Qumicamente, esta pared celular consiste en un esqueleto formado por dos tipos de polmeros, unidos covalentemente entre s: un peptidoglucano especial (la diferencia ms importante es que en vez de N-acetil murmico existe N-glucolil-murmico); un arabinogalactano de gran peso molecular. Ambos polmeros se encuentran enlazados a travs de fosfodister entre una unidad de murmico y una de las arabinosas. Pero a su vez, este esqueleto se une covalentemente a los cidos miclicos. Los cidos miclicos son -hidroxicidos grasos ramificados en a , cuya longitud de cadena es grande (desde C78 a C91 en Mycobacterium ). Estn unidos al esqueleto de la P.C. de forma uniforme, a travs de enlaces con los -OH en 5 de las unidades de arabinosa. Por lo tanto, el esqueleto de la P.C. de estas bacterias consiste en: peptidoglucano---arabinogalactano---cidos miclicos. Pero aparte de este esqueleto complejo, la P.C. de las bacterias cido-alcohol resistentes exhibe una variedad de lpidos: 1) Glucolpidos: a) Micolatos de trehalosa : dos unidades de trehalosa unidas entre s por enlace a (1 1), y en donde los grupos 6 y 6 estn unidos con cidos miclicos. Constituyen el llamado factor de crecimiento en cuerdas , debido a que son responsables de la agregacin de los individuos bacterianos en forma de cuerdas. b) Sulfolpidos de trehalosa : estn localizados en la periferia de la P.C., y parecen ser impartantes factores de virulencia. En Mycobacterium tuberculosis (el bacilo de la tuberculosis) estos sulfolpidos de trehalosa funcionan como evasinas, es decir, facilitan el que la bacteria escape a la accin de los macrfagos inhibiendo la fusin del fagosoma con el lisosoma, lo cual puede explicar el hecho de que estosmicroorganismos tengan xito como parsitos intracelulares.

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c) Micsidos : Localizados en la periferia, consisten en la unin por enlace ster entre cidos miclicos y azcares (incluyendo cidos urnicos, desoxiosas, aminozcares, etc.). 2) Ceras: Unin de cidos miclicos con ftioceroles (alcoholes ramificados de alto peso molecular: C30 C34 ). El alto contenido en lpidos confiere una serie de propiedades a estas bacterias (aparte de la cidoalcohol resistencia ya citada): aspecto y consistencia crea de sus colonias; crecen formando grumos en medios lquidos; gran impermeabilidad de la P.C., que a su vez condiciona una gran resistencia a la desecacin y gran resistencia a sustancias antibacterianas (detergentes, oxidantes, cidos, bases, etc).

2.5

LA PARED DE BACTERIAS GRAM-NEGATIVAS

La pared de las bacterias Gram-negativas es estructuralmente ms compleja que la de Grampositivas, cosa que se puede comprobar al observar un corte transversal al microscopio electrnico: por encima de la membrana citoplsmica y hasta el exterior se pueden apreciar 5 capas, alternndose las claras (L 2 , L5 ) y las oscuras (ms densas a los electrones: L1 , L3 , L4 ). La capa densa L4 corresponde al peptidoglucano (ya estudiado), que se encuentra inmerso en la capa clara L5 , que consiste en un espacio periplsmico, limitado entre la membrana citoplsmica y una membrana externa. La delgada capa de peptidoglucano no constituye ms del 5-10% de la pared. A continuacin estudiaremos la peculiar membrana externa de las bacterias Gram-negativas y el espacio periplsmico.

2.5.1 LA MEMBRANA EXTERNA DE BACTERIAS GRAM-NEGATIVAS

Se trata de una estructura de bicapa lipdica exclusiva de las bacterias Gram-negativas. Como otras bicapas lipdicas, consta de una doble capa de lpidos, junto con protenas de matriz (estas ltimas atravesando total o parcialmente la bicapa). Por supuesto, en la bicapa lipdica, los grupos polares quedan hacia afuera, mientras que los hidrfobos tienden al interior. Ahora bien, la composicin qumica y la disposicin de los elementos de esta membrana externa son muy distintos a los de una membrana tpica: la bicapa es altamente asimtrica : en la capa externa existe un 60% de protenas y un 40% de una macromolcula exclusiva de esta membrana externa: el lipopolisacrido (LPS); en la capa interna no hay LPS, existiendo fosfolpidos (FL), lipoprotenas (LPP) y otras protenas. El conjunto es un mosaico fluido que permite el desplazamiento lateral de los fosfolpidos, del LPS, y de las protenas, pero no de las lipoprotenas unidas covalentemente al peptidoglucano. Sin embargo, esta fluidez es menor que la de la membrana citoplsmica. 2.5.1.1 COMPOSICIN QUMICA Y ESTRUCTURA DE LA MEMBRANA EXTERNA La membrana externa se encuentra unida con el peptidoglucano subyacente a travs de distintos componentes y tipos de enlaces: enlaces inicos , mediados por cationes divalentes, entre distintas protenas de la membrana externa y el PG; enlaces hidrfobos entre fosfolpidos y protenas de la capa interior de la membrana externa con el
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PG; enlaces covalentes entre algunas molculas de lipoprotena y el PG. Parece ser que la membrana externa est en contacto directo con la plasmtica en numerosos puntos, denominados zonas de adhesin. Puede que se trate de regiones en las que produzca una autntica fusin entre estos dos tipos de membrana, facilitando quiz el transporte de ciertas sustancias desde el exterior al interior celular. Estudiaremos a continuacin los componentes de la membrana externa, aludiendo a su composicin qumica, estructura y funciones.
2.5.1.1.1 Fosfolpidos (FL)

Se localizan en la lmina interna de la m. ext. La composicin en fosfolpidos es similar a la de la membrana citoplsmica, con un ligero enriquecimiento en fosfatidil-etanolamina.
2.5.1.1.2 Lipopolisacrido (LPS)

Se trata de una macromolcula exclusiva de la lmina externa de la membrana externa de bacterias Gram-negativas, responsable de muchas de las propiedades biolgicas de estas bacterias. Se le conoce tambin con el nombre de endotoxina (toxina termoestable, no difusible). Se trata de un glucolpido complejo, que podemos considerar compuesto de tres regiones o dominios: lpido A, que es la porcin ms proximal, y de carcter hidrofbico; regin intermedia, llamada oligosacrido medular ; regin distal ( cadena lateral especfica , polisacardica) a base de repeticiones de unos pocos azcares. Es de carcter hidroflico y constituye el antgeno somtico O de las 6bacterias Gramnegativas. i) El lpido A: esta regin es prcticamente idntica en todas las bacterias Gram-negativas. Consiste en un disacrido formado por dos unidades de glucosamina unidas por enlace (16), pero donde todos los grupos -OH (menos uno) y -NH 2 estn sustituidos (unidos a otras molculas): Obsrvese que existen 5 (a veces 6) cidos grasos, todos ellos saturados, con predominio de -hidroximirstico (un cido graso C14 ). El -OH original en 4 est sustituido por arabinosamina-fosfato. El -OH en 1 est sustituido por fosforil-etanolamina (a veces pirofosforil-etanolamina). ii) El oligosacrido medular (tambin llamado corazn o ncleo): se une al lpido A a travs del -OH en 3. Se pueden considerar dos fracciones: la fraccin del ncleo interno, a base de dos tipos de azcares exclusivos de Gram-negativas: 2ceto-3-desoxioctnico (KDO) y L-glicero-D-manoheptosa (Hep). Alguna de las Hep y alguno de los KDO pueden a su vez estar unidos a fosforil-etanolamina (o pirofosforil-etanolamina). Esta regin es muy rica en grupos cargados , especialmente con carga negativa (de los fosfatos y KDO). La fraccin del ncleo externo est constituida a base de hexosas (glucosa, galactosa, NAG, y a veces algunas hexosas ms raras). iii) Cadena lateral especfica : polisacrido repetitivo, que se proyecta hacia el exterior celular, y que constituye el Ag somtico O de bacterias Gram-negativas. Consiste en la repeticin (hasta 40 veces) de unidades tri-, tetra- o pentasacardicas (en estos dos ltimos casos uno de los azcares de cada repeticin queda lateral respecto del esqueleto lineal que forman los dems). De todas estas regiones del LPS la nica indispensable para la viabilidad es el lpido A . Los mutantes incapaces de sintetizar las cadenas laterales o el oligosacrido medular dan colonias rugosas y

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estn afectados en distintas propiedades biolgicas, pero pueden sobrevivir.

PAPELES Y FUNCIONES DEL LPS 1. Papel estructural: el LPS es el componente esencial de la membrana externa. La porcin hidrofbica (las cadenas de cidos grasos del lpido A) se proyectan hacia el interior de esta membrana. Precisamente es la estructura del lpido A la principal responsable de la menor fluidez de dicha membrana, y por lo tanto de la mayor resistencia fsica. (Obsrvese que, mientras cualquier fosfolpido tiene dos cadenas de cido graso, el lpido A posee 5 o 6, todas ellas unidas al mismo disacrido, generando una molcula ms masiva.). 2. A su vez, la propiedad anterior hace que sea menos soluble a detergentes y ms resistente a disolventes orgnicos . 3. Es menos permeable a muchas molculas hidrofbicas , incluyendo antibiticos, debido a las largas cadenas laterales hidroflicas. 4. Se une a cationes divalentes (como Mg ++ o Zn++ ), lo que contribuye a la mayor estabilidad de la membrana externa. Esta presencia de cationes suministra un ambiente adecuado para muchas funciones de la P.C. (Si aadimos un agente quelante como el EDTA, o eliminamos el Mg ++ y lo sustituimos por Ca ++ , se produce la desorganizacin de la membrana externa). 5. Como ya dijimos, el LPS constituye la endotoxina de las bacterias Gram-negativas. La funcin como endotoxina se debe a la regin del lpido A. Sus propiedades como endotoxina estn en el origen de muchos sntomas patolgicos propiciados por patgenos Gram-negativos: a. pirogenicidad (induccin de fiebre) b. hipotensin c. en casos graves, choque letal, por fallo cardaco d. actividad necrtica de tejidos. 6. Pero igualmente, tiene efectos beneficiosos: estimula una serie de mecanismos defensivos del hospedador, incluyendo la activacin del complemento, que puede ocasionar la lisis de la bacteria, mejora las propiedades de los fagocitos, etc. Es decir, a pesar del nombre de endotoxina, el LPS no es intrnsecamente txico, sino que su efecto depende de la respuesta del hospedador. El macrfago es la clula del hospedador principal responsable de la mediacin de los efectos del LPS, tanto los positivos como los negativos. El macrfago posee receptores de membrana para detectar el LPS bacteriano, y en respuesta a l, libera una serie de molculas mediadoras (citoquinas) que actan a su vez sobre diversas partes del sistema inmunitario. De hecho, los efectos negativos se deben a comportamientos incontrolados desencadenados en el propio sistema inmunitario. 7. El LPS, y concretamente las cadenas laterales constituyen el antgeno somtico O , cuya

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especificidad viene determinada por la secuencia repetitiva de azcares. Esta porcin condiciona la virulencia de las bacterias Gram-negativas patgenas, por lo que debe de ser esencial en la interaccin hospedador-parsito. 2.5.1.1.3 La lipoprotena (LPP, lipoprotena de Braun) Su porcin polipeptdica es una pequea protena (7.2 kDa) muy abundante en la membrana externa, y es la responsable de la unin covalente entre sta y el peptidoglucano. La protena tiene una configuracin mayoritaria en a -hlice, que atraviesa el espacio periplsmico, y parece que se agrega formando trmeros. Una de las LPP del trmero (por trmino medio) se une covalentemente con el peptidoglucano. El aminocido N-terminal es una cistena cuyo grupo sulfhidrilo est unido por enlace tioter a un diglicrido, y cuyo grupo amino se une por enlace amido con un cido graso (p. ej., palmtico). De este modo, la porcin N-terminal de la LPP est embebida en la lmina interna de la membrana externa. El aminocido C-terminal es una lisina. Una de cada tres molculas de LPP usa esta Lys para establecer un enlace peptdico entre su propio grupo -NH 2 libre y el -COOH libre del meso-DAP del PG. Por trmino medio, por cada diez unidades disacardicas del PG, existe un enlace covalente con la LPP. La principal (y probablemente nica) funcin de la lipopprotena es meramente estructural: estabilizar el complejo entre peptidoglucano y membrana externa. Esta unin es tan fuerte que permite aislar la membrana externa y el peptidoglucano como una unidad. 2.5.1.1.4 Protenas de la membrana externa Estn intercaladas en esta membrana, participando en la estabilizacin de la arquitectura tridimensional, interaccionando unas con otras y con los lpidos. Entre ellas, las ms importantes son las porinas. Las porinas son protenas de unos 35 kDa, que se agregan formando trmeros con canales interiores, y que atraviesan la membrana de parte a parte. Su funcin es permitir el paso de sustancias a travs de dichos canales interiores, siempre que su peso molecular sea compatible con el tamao de los canales (suelen ser molculas entre 500 y 700 dalton). En las enterobacterias, las porinas colaboran en la proteccin contra las sales biliares que existen en el ecosistema intestinal donde pasan parte de su vida. Existen otras protenas minoritarias parecidas a porinas, que actan como canales especficos que permiten el paso de ciertas molculas: vitamina B12 , quelatos de Fe, nuclesidos, maltodextrinas, etc. Algunas de ellas sirven simultneamente como receptores de fagos. 2.5.1.2 PAPELES Y FUNCIONES DE LA MEMBRANA EXTERNA 1) Acta como tamiz molecular, que permite la difusin nicamente de molculas relativamente pequeas. Esto supone una proteccin frente a muchos agentes antibacterianos: colorantes, cidos biliares, antibiticos, enzimas (p. ej., la lisozima, que podra alcanzar y atacar al PG). Recurdese que las porinas slo permiten el paso de sustancias hidroflicas por debajo del tamao especificado por el dimetro de los canales. 2) Condiciona propiedades de superficie: a) grado de humedad (humectabilidad) b) adhesividad c) carga elctrica.
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3) Es la estructura donde se fijan los componentes del complemento (sistema defensivo de los animales superiores que conduce a la insercin, en la membrana externa, de una serie de protenas llamadas complejo de ataque a la membrana, que agujerea dicha membrana y ocasiona la lisis de la bacteria). 4) Ciertas protenas y cadenas laterales del LPS pueden ser lugares de adsorcin ( receptores especficos ) de fagos y bacteriocinas. 5) Punto de anclaje del anillo externo (L) del corpsculo basal de los flagelos. 2.5.2 EL ESPACIO PERIPLSMICO Entre la membrana externa y la membrana citoplsmica existe un compartimento acuoso baando al peptidoglucano, denominado periplasma o espacio periplsmico. El volumen de este compartimento puede llegar a representar un 20-40% del volumen celular total. El contenido del periplasma (el gel periplsmico) incluye: RNasa y fosfatasa, que digieren molculas que por s mismas no pueden pasar al citoplasma. Penicilinasa: degrada penicilina, evitando destruccin de PG protenas de transporte de nutrientes (p. ej., de maltosa) protenas de transporte de nutrientes (p. ej., de maltosa) protenas de unin a estmulos qumicos. En bacterias desnitrificantes y quimiolitoautotrofas, existen protenas implicadas en el transporte de electrones. El periplasma cumple una funcin de osmorregulacin: El periplasma es una solucin densa, con alta concentracin de macromolculas, y que participa en la regulacin de la osmolaridad celular frente a la tonicidad del medio exterior. Para ello, existe en este espacio periplsmico un oligosacrido derivado de la membrana citoplsmica (ODM, o segn sus iniciales inglesas, MDO), a base de 10 unidades de -D-glucosa (unidas entre s por enlaces 12) con sustituyentes cidos. En medios de alta osmolaridad (por ejemplo, en los fluidos corporales), disminuye la concentracin del oligosacrido. En ambientes de baja osmolaridad (p. ej., aguas fecales), aumenta mucho la concentracin de dicha molcula. De este modo, la presin de turgor del protoplasto se transmite contra el peptidoglucano, que como sabemos ya, es la estructura de la pared celular. que aguanta las variaciones de presin osmtica.

3 PAREDES DE LAS ARQUEAS

Aunque las arqueas pueden comportarse como Gram-positivas o como Gram-negativas, no se suele aludir a esto en este dominio de procariotas, ya que sus paredes tienen poco que ver con las de eubacterias. Exceptuando el gnero Thermoplasma, carente de pared celular, las dems arqueas poseen, por encima de la membrana citoplsmica, algn tipo de estructura con funciones de pared celular. En muchos casos las funciones de pared celular son ejercidas simplemente por una capa S paracristalina (vase tema 4), a base de disposicin regular de subunidades idnticas de una protena o glucoprotena (p. ej., Methanococcus, Methanogenium). Recuerde que en ciertas arqueas de ambientes extremos, esta capa S est estabilizada por factores de esos ambientes: En el halfilo obligado Halobacterium las subunidades de glucoprotena se estabilizan por altas concentraciones de in Na +. En el termoacidfilo Sulfolobus la estabilidad la confieren los bajsimos pH.

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En Methanospirillum y en Methanothrix varias clulas, cada una con su capa S, se encuentran englobadas por una vaina comn, a base de protenas y carbohidratos, con una estructura a base de anillos paralelos. En Methanosarcina y Halococcus la capa S se encuentra rodeada de metanocondroitina , un polmero a base de N-acetil-galactosamina, glucurnico, glucosa y manosa. (Esta metanocondroitina es similar al condroitn sulfato presente en tejido conjuntivo de animales). Finalmente, los miembros del orden Methanobacteriales poseen una pared de pseudomurena , un extrao peptidoglucano no basado en NAM. Consiste en un esqueleto de unidades repetitivas de NAG unidas por enlace (13) con N-acetil-talosaminournico (NAT, un azcar exclusivo de estos organismos). El grupo -NH 2 del NAT va unido a su vez con un tetrapptido, pero en ste slo participan aminocidos de la serie L. Al igual que en la murena de las eubacterias, las diversas cadenas se unen entre s por enlaces peptdicos entre el aminocido terminal (4) de un tetrapptido y el diaminocido (3) de otra cadena.

BIBLIOGRAFA
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Actualizada el jueves, 16 de octubre de 2003

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