Fitase e suas implicaes na digesto e absoro de nutrientes Historicamente as fitases tm sido utilizadas com o intuito de liberao de fsforo atravs

da hidrlise do fitato. Novos estudos tm demonstrado o efeito anti-nutricional do fitato, e o conceito de nutrio na ausncia do fitato principalmente atravs de Superdosagens de fitase esto trazendo ganhos significativos em desempenho animal. Introduo O uso de fitases em raes para animais no ruminantes bastante elevada, e estima-se que cerca de 90% das dietas de aves e sunos contenham a adio dessa enzima. Existem 4 principais tipos de fitase no mercado que derivam de diferentes microrganismos: Peniophora, Aspergillus, E Coli selvagem e E Coli geneticamente modificada. Cada uma delas tem caractersticas diferentes em termos de estabilidade trmica, estabilidade gstrica, afinidade ao substrato (fitato) e atuao em diferentes pHs, e so essas diferenas que fazem com que cada tipo de fitase atue de maneira diferente, e por consequncia, causem diferentes liberaes de nutrientes. Contudo, um objetivo comum de todas as fitases a quebra do fitato dos ingredientes vegetais que no disponvel para os animais, assim liberando o fsforo e reduzindo a necessidade de incluso de fosfato inorgnico (ou outras fontes de fsforo, como por exemplo, a farinha de carne e ossos) s dietas de aves e sunos, trazendo assim um benefcio econmico quando da formulao das dietas. Nos ltimos anos a comunidade cientifica vem discutindo os efeitos negativos que o fitato pode causar para a digestibilidade de microminerais (Harland e Morris, 1995), protena (Cowieson e Cowieson, 2011), aminocidos (Cowieson e Ravindran 2007, Cowieson et al., 2004), sdio (Cowieson et al., 2004) e utilizao da energia. Essa uma rea de estudo relativamente nova, onde doses mais altas de fitato tem sido empregadas para determinar o efeito extra-fosfrico das fitases, ou seja, a resposta adio de altas doses de fitase que no estejam meramente associadas liberao de fsforo do fitato, mas sim por evitar os danos causados pelo fitato na digestibilidade dos nutrientes supracitados. Fitato e seus efeitos anti-nutricionais De acordo com Santos (2012) o fitato (mio-inositol 1,2,3,4,5,6-hexa fosfato desidrogenado) alm de ser uma importante fonte de fsforo para nutrio animal, tambm uma fonte de reserva desse mineral nos gros, e mais recentemente se demonstrou que atua como antioxidante nos gros atravs da quelao de minerais como ferro, clcio e zinco, prevenindo o estresse oxidativo e assim evitando a morte do embrio. Santos (2012) ainda cita que a afinidade do fitato a ctions no trato gastrintestinal varia de acordo com o pH, fato este que est relacionado com a constante de dissociao da molcula (pKa), o que significa que o fitato pode estar levemente carregado negativamente (em pH cido) ou fortemente carregado negativamente (em pH neutro/alcalino). Desta maneira a afinidade do fitato aos ctions da dieta muda de acordo com o pH (Figura 1). Figura 1 Solubilidade do fitato em pH 2,0 a 7,0 na presena de Ca em concentrao similar ao encontrado no trato gastrintestinal dos animais (Fonte: Universidade de Maryland, dados no publicados) Tamin e Angel (2003) demonstraram que a baixa digestibilidade do P ftico do fitato no devido ao fato que as aves e sunos no possurem uma enzima capaz de hidrolisar o fitato. De acordo com os pesquisadores isto ocorre devido ao fato que alguns minerais reagem com o fitato insolubilizando-o, e assim impossibilitando a assimilao do P ftico, assim como do mineral que est ligado ao fitato. Tamin et al. (2004) demonstraram que o desaparecimento do P ftico em dietas sem calcrio foi ao redor de 69%, enquanto que com somente 0,5% de calcrio houve uma diminuio para 25%. Neste mesmo estudo se demonstrou que as fitases so eficientes em incrementar a absoro no somente do fsforo, mas tambm do clcio. Apesar da afinidade do fitato ser maior ao cobre e zinco (Selle e Ravindran, 2007) em dietas de aves existe uma alta concentrao de clcio, e por isso a formao de complexos Ca-fitato inevitvel. Nelson (1984) demonstrou que os requerimentos de clcio incrementam de acordo com a quantidade de fitato na dieta, e Lutrell (1993) demonstrou que a afinidade do ster IP4 (fitato com 4 grupos fosfato) ao clcio 70% menor que um ster IP6 (Figura 2 e 3). Figura 2 Requerimento de clcio total de frangos de corte at 21d de idade alimentados com dietas purificadas e recebendo nveis crescentes de P ftico (adaptado de Nelson, 1984)

0,5 0,6 0,7 0,8 0,9 1,0 1,1 0 0,1 0,2 0,3 0,4 Requerimento de Ca (%) P-ftico (%) Figura 3 Afinidade de diferentes steres de fitato pelo clcio (adaptado de Lutrell, 1993) Cowieson et al. (2004) elucidaram em partes o efeito anti-nutricional do fitato quando em seus estudos perceberam que existia um incremento na produo de mucina, e na excreo de sdio e outros minerais quando frangos de corte recebiam dietas com fitato (Tabela 1). De acordo com os autores isto ocorre porque o organismo secreta mais HCl para a ativao da pepsina, j que o fitato diminui a hidrlise das protenas e os animais tentam compensar essas perdas de digestibilidade. Tabela 1 Efeito do cido ftico e fitase na excreo de minerais endgenos e de cido silico (mg/ave/48h) em frangos de corte (Adaptado de Cowieson et al., 2004) Glicose Glicose + 1.000FTU Glicose + 1g IP6 Glicose + 1g IP6 + 1.000FTU Clcio 72,517,0a 70,013,2a 122,514,7b 73,813,1a Ferro 5,20,62a 4,30,64a 6,81,04b 6,60,79b Sdio 38,715,7a 45,012,4a 15526,3c 86,215,5b Enxofre 66,84,6a 67,55,1a 98,113,0b 80,310,0ab c. Silico 1,870,19a 2,230,16ab 5,330,39c 2,460,37b Mdias ( erro padro da mdia) sobrescritas com letras distintas na linha, e para a mesma varivel, diferem pelo teste de Tukey (p<0,05). Kies et al. (2006) em ensaios in vitro demonstraram que a solubilidade de diferentes protenas pode ser influenciada pela concentrao de fitato. Neste estudo a protena de pior solubilidade

foi a do farelo de arroz, matria prima esta que j tem um alto contedo de fitato em sua composio causando sua auto-insolubilizao (Figura 4). Mais recentemente Cowieson e Cowieson (2011) propuseram que o fitato diminui a solubilidade da protena atravs da atrao de molculas de gua para perto de si (interao eletrosttica), o que faria que os nutrientes tivessem menos gua ao seu redor, e assim diminuindo a sua solubilidade/digestibilidade. (Figura 5). y = 5,1164x2 - 15,889x + 11,004 R = 1 0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100 1 2 3 4 5 6 Afinidade de quelao relativa com o Ca (% do IP6) Grau de defosforilao Figura 4 Impacto do pH e da concentrao de fitato na solubilidade da protena de diferentes ingredientes (adaptado de Kies et al., 2006) Figura 5 Efeito da concentrao crescente de cido ftico sobre a solubilidade da lisozima (adaptado de Cowieson e Cowieson, 2011) Anlise de fitato em matrias-primas Como mencionado acima, o fitato dos gros desempenha um forte efeito antinutricional para as aves, e desta maneira crucial o conhecimento da quantidade de fitato nos ingredientes e raes, e com isso tentar otimizar a utilizao das fitases, empregando doses adequadas quantidade de substrato. Existem muitas metodologias utilizadas para a determinao da quantidade de fsforo ftico (precipitao por ferro, HPLC e metodologia enzimtica), porm, o maior limitante da anlise de fitato so os custos analticos elevados. Uma alternativa para a 0% 20% 40% 60% 80% 100% 120% Casena Milho Farelo de Soja Farelo de Arroz Farelo de Canola Farelo de Girassol Solubilidade da Protena pH 2 pH 3 pH 2 + fitato pH 3 + fitato

pH 2 + fitato + fitase pH 3 + fitato + fitase Lisozima em soluo (% de 6mg/mL) Fitato (mM) reduo dos custos seria a implementao de anlise de fitato por NIRS (Near-Infrared Reflectance Spectroscopy). Nas Tabelas Brasileiras para Aves e Sunos (Rostagno et al., 2011) podemos observar alguns valores de referencia para o contedo de fsforo ftico em matrias-primas brasileiras. No entanto, Wadt et al. (2010) demonstraram que a quantidade de fsforo ftico em amostras de milhos brasileiros apresentaram um valor mnimo de 0,10% e mximo de 0,26% (n=94), e concluram que esta variao pode estar correlacionada fertilizao feita no solo, assim como por diferenas ambientais