TEMA 13

DUPLICACIN DEL DNA

Antes de realizar la gua deber revisar: 1. Estructura del DNA. 2. Molculas que componen el cromosoma eucariota. 3. Ciclo celular. Evaluacin: 1. Localizacin celular del DNA en clulas eucariotas y procariotas. 2. Qu molculas integran un cromosoma eucariota? 3. En una clula 2n=6 cuntas molculas de DNA hay en la etapa G2 y en la G1? El esquema del ciclo celular se representa a continuacin.

3. El sistema de control del ciclo celular debe activar las enzimas y otras protenas responsables de llevar a cabo cada uno de los procesos en el momento adecuado, y desactivarlas cuando es necesario. Ese sistema adems de asegurar que una fase haya terminado antes que empiece la siguiente, debe sensar las condiciones exteriores de la clula. En un organismo pluricelular, el sistema de control debe ser sensible a las seales provenientes de otras clulas, como la que estimula la divisin celular cuando hacen falta ms clulas. En el esquema siguiente se indican los puntos de control del ciclo as como las seales que lo desencadenan.

GUIA DE CLASE
1. En la figura se representan distintos niveles de complejidad de la cromatina. a. Cmo est formado un nucleosoma? b. Qu entiende por protenas bsicas? c. Qu caractersticas del DNA permiten que se asocie a protenas bsicas?

2. Explique por que el DNA genera molculas hijas idnticas a la molcula de DNA progenitora. El esquema puede ayudarle a responder.

3. Para entender como se reasocian las nuevas cadenas de DNA sintetizadas luego de la duplicacin, fue clave el experimento realizado por Meselson y Stahl (1958) que se esquematiza a continuacin.

a. Describa en qu consisti el experimento. b. Cul fue la conclusin sobre que sacaron de ese experimento? 4. Contrariamente a lo que podra imaginarse, la duplicacin de la molcula de DNA no comienza por un extremo de la doble hebra. Cmo est pautado en el DNA cada inicio de la duplicacin? 5. A partir del esquema que aparece a continuacin, enumere las molculas que participan en la horquilla de duplicacin e indique las funciones que desempean.

6. a. Explique las caractersticas de la reaccin catalizada por la DNA polimerasa. Tenga en cuenta los sustratos, fuente de energa y productos.

b. En qu se diferencian la DNA polimerasa y RNA polimerasa? 7. Qu consecuencias tiene para la duplicacin del DNA que sus hebras sean antiparalelas? 8. La tabla que aparece abajo muestra algunos parmetros cuantitativos de la duplicacin del DNA en clulas de dos orgenes. Saque las conclusiones que considere ms relevantes.

9. La DNA polimerasa incorpora aproximadamente 30.000 nucletidos/minuto en E.coli con un error cada 10 9 nucletidos. A partir del siguiente esquema explique la escasa cantidad de errores que se producen.

10. El DNA sufre modificaciones, algunas de las cuales se muestran a continuacin. Estas modificaciones ocurren despus de la duplicacin del DNA (despus de la fase S del ciclo celular) y pueden ser espontneas o causadas por agentes fsicos o qumicos.

a.

Explique por qu este dao causado al DNA debe ser reparado. b. Qu caracterstica del DNA hace posible que los daos en una hebra puedan repararse? 11. La radiacin UV (200-300nm) promueve la formacin de dmeros de Timina (entre dos T adyacentes). a. Qu consecuencias tiene la formacin de estos dmeros para la estructura del DNA? b. El esquema a continuacin representa como se reparan estos dmeros. Indique las principales caractersticas de este mecanismo de reparacin.

12. Algunas modificaciones de bases ocurren espontneamente como la desaminacin de la citosina que se convierte en uracilo. En el esquema se representa el mecanismo de reparacin de esta modificacin. Explique este mecanismo de reparacin.

13. Explique el papel de la DNA polimerasa, la primasa y los desoxi ribonucletidos tri fosfato (dNTP) en la duplicacin del DNA.

PCR: AMPLIFICACION DE MOLECULAS DE DNA La Reaccin en Cadena de la Polimerasa (PCR), descrita por primera vez en 1983, es una ingeniosa herramienta que ha tenido un impacto enorme en el campo de la biologa molecular. Hoy en da es utilizada en numerosas aplicaciones que van desde el diagnstico clnico de enfermedades, en medicina forense y en la determinacin del relacionamiento gentico entre especies, entre otros usos. La tcnica consiste en un mtodo de amplificacin in vitro de fragmentos de DNA, de modo de obtener millones de copias en un tiempo corto. Dicho de otra forma, es un mtodo de sntesis de cidos nucleicos mediante el cual un segmento particular de DNA puede ser replicado en forma especfica. El procedimiento involucra un equipo, el termociclador, y una serie de productos que se enumeran, junto a la secuencia general del proceso: Dos oligonucletidos que son cortas secuencias cebadoras de DNA (comnmente llamadas oligos) que flanquean el fragmento de DNA a ser amplificado. DNA a amplificar, que debe ser desnaturalizado por calor para separar las hebras y puede ser copiado. Para esto se programa en el termociclador la temperatura que suele ser prxima a los 90C. Unin de los oligos a sus secuencias complementarias del DNA a amplificar, que se logra bajando la temperatura (tambin forma parte del programa que se le de al termociclador). Una vez unidos los oligos al DNA que se desea amplificar comienza la extensin desde los 3de los oligos por accin de una DNA polimerasa, que dispondr de los 4 desoxiribonucletidos trifosfato (dNTP) en el medio. Sucesivos ciclos de temperaturas, establecidas segn el caso, permiten amplificar el DNA blanco o problema segn un mecanismo que se describe a continuacin.

La DNA polimerasa (Taq) tiene caractersticas muy particulares, es una enzima termoestable que fue aislada de un microorganismo que soporta temperaturas cercanas a los 100C sin desnaturalizarse. Por su parte los oligos hibridan con las hebras opuestas de DNA blanco y se orientan de tal manera que la sntesis de DNA por la polimerasa procede a lo largo de la regin comprendida entre ambos. Dado que los productos de esta extensin son asimismo complementarios y capaces de unirse a los oligos, sucesivos ciclos de amplificacin doblarn la cantidad de DNA blanco sintetizado en el ciclo anterior. El resultado es una acumulacin exponencial del fragmento especfico, aproximadamente 2n, donde n es el nmero de ciclos de amplificacin. Esta tcnica tiene mucha sensibilidad, en la medida que cantidades muy bajas de DNA pueden ser amplificadas, se ha utilizado para clonar fragmentos de DNA procedentes de restos fsiles; es decir de lo que queda de DNA sin descomponerse en restos de animales, plantas o bacterias. Tambin es una herramienta poderosa en medicina forense, para detectar infecciones vricas antes de la aparicin de los primeros sntomas y en el diagnstico prenatal de enfermedades genticas.

Los pasos sucesivos de la tcnica se esquematizan en la figura siguiente.

Centrar la discusin en: El maz transgnico Mon 810, evento resistente al ataque del taladro, ha sido autorizado por el MGAP. Conociendo el gen introducido en el maz para lograr resistencia al insecto, disee una estrategia que implique a la tcnica descrita, con el objetivo de monitorear si hay flujo gentico entre ese maz y otro no transgnico.