Universidade Federal da Bahia Instituto de Cincias da Sade Departamento de Biointerao ICSA35 Cultura de Clulas e Tecidos Profa.

. Andra Mendona Gusmo Cunha andrea.virologia@gmail.com Componentes: Rebeca Costa e Valdir Neto
ESTUDO ORIENTADO 02 ATIVIDADE EM DUPLA 1) Defina Biorreatores e cite 5 aplicaes na biotecnologia. R: So equipamentos para cultivo sob imerso temporria ou permanente de clulas que oferecem suporte a um ambiente biologicamente ativo.

2) Explique os modos de operao dos biorreatores. R: Cultivo em batelada ( simples): Adio ao volume total dos componentes em um nico momento no incio. No final extrado todas as clulas, o meio e produto. do tipo no alimentado. Batelada Alimentada: Adio dos nutrientes em intervalos de tempo, mas retira-se o volume final de uma s vez, por causa da adio por intervalos aumenta o risco de contaminao em relao ao modo de operao em batelada. Contnuo Simples: Nesse mtodo a adio e remoo do produto ocorre em intervalos de tempo, ocorre um fluxo de entrada e sada. Nesse sistema necessrio um maior cuidado com contaminao. Cultivo contnuo com reteno de biomassa:

3) Cite os tipos de biorreatores homogneos e heterogneos. R: Homogneos

Tipo Tanque Agitado Tipo Air-lift Biorreatores de ondas

Heterogneos Biorreator do leito empacotado Biorreator do leito Fluidizado Biorreator com crescimento sobre superfcie

4) Explique como montar, observar e contar as clulas de forma manual usando a Cmera de Neubauer. R: Para a contagem em cmara de Neubauer, as clulas devem estar totalmente individualizadas. Para clulas aderentes, necessrio fazer uma tripsinizao prvia, o que no feito no caso de clulas no aderentes. A cmara de Neubauer uma lmina de vidro com divises que auxiliam na contagem, possuindo 9 quadrados que medem 1 mm2 de rea. Somente os quatro quadrados externos so utilizados na contagem de clulas animais. Cada quadrado externo formado por mais 16 quadrados menores que auxiliam a contagem. Para a contagem, necessrio colocar uma lamnula de vidro sobre a cmara, que servir para conter a suspenso celular. O espao formado entre a lamnula e a cmara de 0,1 mm. Dessa forma, o volume determinado por cada quadrado equivalente a 0,1 mm3. As clulas contadas em um quadrado contidas em 1 mL equivalem ao valor de clulas contado multiplicado por 104 (fator de correo da cmara). 5) Para realizar um subcultivo celular da linhagem MDCK (Linhagem derivada de rim de co) so necessrias 2.10 6 cel/mL em cada frasco de cultivo. Sendo o frasco obtido do cultivo primrio 200.105 cel/mL. Quantos frascos de cultivo secundrio podem ser

fracionados R:

6) Em uma contagem de leuccitos, realizada em hemocitmetro, com diluio de 1:2, usando azul de tripan, foram obtidas os seguintes valores por quadrantes: 340, 320, 460, 480 clulas viveis e 20, 38, 28 e 30 clulas que incorporaram o corante. Sabendo que o volume total da amostra de 20 mL responda: Dados: Quadrantes (mdia) Clulas viveis: (340+320+460+480)/4 = 400 Clulas inviveis: (20+38+28+30)/4= 116 Diluio: Volume: 20 mL

a) Determine o nmero de clulas viveis por mL.

b) Determine o nmero de clulas viveis no volume total da amostra. c) Determine o percentual de viabilidade celular.

7) Srgio, estagirio do Laboratrio de Biotecnologia, estava trabalhando no setor de cultura de clulas. Utilizou o corante azul de tripan para avaliar a viabilidade celular de um determinado cultivo celular, utilizou o hemocitmetro para contagem e o microscpio ptico para contagem e obteve o seguinte resultado: - Quadrante 1: 51 clulas transparentes e 24 clulas coradas de azul. - Quadrante 2: 53 clulas transparentes e 27 clulas coradas de azul. - Quadrante 3: 68 clulas transparentes e 26 clulas coradas de azul. - Quadrante 4: 72 clulas transparentes e 23 clulas coradas de azul. Qual o percentual de clulas viveis e de clulas inviveis? R=_____________________________

8) Cite alguns mtodos utilizados para avaliar a viabilidade de um cultivo celular e indique o mecanismo de um desses mtodos.

R: Teste MTT (Brometo de difeniltetrazlio), Avalia a viabilidade por funo mitocondrial e o metabolismo celular. Com a adio d sal MTT as mitocndrias funcionais transformam a cor do brometo de amarelo para violeta por reduo do MTT. Nas mitocndrias no funcionais, no se observa a alterao da cor, e enxerga-se amarelo. Teste de LDH (Lactato Desidrogenase) Teste Vermelho Neutro

9) Defina os termos: esterilizao, desinfeco, antissepsia, assepsia. Cite exemplos que relacionam os termos a atividades desenvolvidas no laboratrio de cultivo celular.

Esterilizao: Destruio ou remoo de todos os tipos de microorganismos, at os esporos.

Desinfeco: Reduo ou inibio de microrganismos presentes na superfcie de materiais inanimados

Antissepsia: Limpeza da superfcie, aplicado para in vivo, como pele, mucosa etc.

Assepsia: Conjuntos de procedimentos destinados a previnir o acesso de microorganismos a objetos ambientes previamente descontaminao e/ou esterilizao.