Prctica 2.

3 Efecto de la concentracin del sustrato sobre la velocidad de la reaccin

Introduccin Al interactuar con el sitio activo de la enzima (E), el sustrato (S) forma von sta el complejo enzima-sustrato (ES), en donde el sustrato reacciona mucho ms fcil y rpidamente que en ausencia de la enzima, por una disminucin de la energa de activacin.

De acuerdo con la ley de accin de masas, la velocidad de la reaccin 3 ser proporcional a la concentracin [ES], la cual depende de [E] y [S]. Se concluye que la velocidad de la reaccin es directamente proporcional a [S]. Esta relacin es vlida solo cuando [S] es baja. Con valores muy altos de [S] la velocidad ya no cambia, o sea que se ha alcanzado una velocidad mxima (Vmx). Para explicar lo anterior:

Objetivo

1. Observar el efecto de la concentracin del sustrato sobre la velocidad de la reaccin enzimtica. 2. Determinar la constante de Michaelis-Menten por los mtodos conocidos, as como su aplicacin.

Resultados Tubo No. Blanco Problemas

T Sacarosa 0.35M(mL) Absorbencia =540 nm 0.5 0

1 0.05 0.36

2 0.1 0.457

3 0.15 0.469

4 0.3 0.672

5 0.5 0.336

6 0.8 0.742

Azcar reductor moles /2ml Concentracin de sustrato (moles/L=M) Velocidad (UI)

0.000 0.500 0.000

2.603 0.050 0.521

3.304 0.100 0.661

3.391 0.150 0.678

4.859 0.300 0.972

2.430 0.500 0.486

5.365 0.800 1.073

Clculos Para conocer los moles de azcar reductor se interpolo en la Curva Tipo los valores de absorbencia obtenidos en la prctica. Se obtuvo la linea de tendencia y con ella su ecuacion y = 0.1383x Donde X son los moles de azcar reductor y Y es la Absorbencia, as: -

Para calcular la actividad de la enzima en Unidades de Invertasa. Con:

Para calcular la Concentracin del Sustrato 0.35 moles (Sacarosa) - 1000mL x (volumen aadido) mL

Para 0.05 mL con Sacarosa 0.35M y ABS = 0.36 0.35 moles (Sacarosa) - 1000mL x - 0.05mL

Para 0.10 mL con Sacarosa 0.35M y ABS = 0.457 0.35 moles (Sacarosa) - 1000mL x - 0.10mL

Para 0.15 mL con Sacarosa 0.35M y ABS = 0.469 0.35 moles (Sacarosa) - 1000mL x - 0.15mL

Para 0.30 mL con Sacarosa 0.35M y ABS = 0.672 0.35 moles (Sacarosa) - 1000mL x - 0.30mL

Para 0.50 mL con Sacarosa 0.35M y ABS = 0.336 0.35 moles (Sacarosa) - 1000mL x - 0.50mL

Para 0.80 mL con Sacarosa 0.35M y ABS = 0.742 0.35 moles (Sacarosa) - 1000mL x - 0.80mL

Grfica de velocidad en unidades de invertasa

Calculo de la constante de Michaelis-Menten por el procedimiento grfico de Lineweaver-Burk

y=23.92x+1.5 Pendiente=23.92=Km/Vmax -1/km=-0.075 km=1/(0.075)=13.3 Vmax=km/pendiente=(13.3)/(23.92)=0.55

Discusin La variable en este experimento fue la concentracin de nuestro sustrato, gracias a esto se pudo observar por medio de una grfica de velocidad contra concentracin de sustrato que entre ms concentracin de este, ms velocidad de la reaccin se tendr. En nuestra grfica velocidad vs concentracin del sustrato nuestra quinta lectura no fue congruente ya que disminuye la absorbancia. Conclusin A menor concentracin de sustrato menor la velocidad de reaccin, y a mayor concentracin ms rpida la reaccin pero habr un lmite en el cual la velocidad no aumentara, ese valor ser nuestra velocidad mxima. El obtener la velocidad mxima se pudo calcular la constante de Michaelis-Menten. Bibliografa

Bioqumica Arroyo, Gmez, Tapia (2004) Editorial Limusa, Mxico D. F.