UNIVERSIDAD NACIONAL AUTNOMA DE NICARAGUA-LEN DEPARTAMENTO DE AGROECOLOGIA AREA DE FITOPATOLOGIA

INFORME FINAL

Efecto de Trichoderma harzianum y Paecilomyces lilacinus en el rendimiento del Tomate (Lycopersicon esculentum Mill.) en el Campus Agropecuario de la UNAN-Len.

AUTOR: Anbal Sirias

Tutor: M. Sc. Wilber Salazar A. Asesor: Ing. lvaro Caballero.

Len, enero de 2007

Efecto de Trichoderma harzianum y Paecilomyces lilacinus sobre nematodos y rendimiento del cultivo del Tomate (Lycopersicon esculentum). Wilber Salazar A.1 Alvaro Caballero H.2 Anbal Sirias.3 Resumen El uso excesivo de plaguicidas qumicos en la horticultura moderna, ha incrementado el riesgo de intoxicaciones en trabajadores agrcolas y consumidores. Una alternativa al uso excesivo de qumicos es el control biolgico. El propsito de este estudio fue evaluar cinco formas de aplicacin de dos hongos nematfagos Paecilomyces lilacinus y Trichoderma harzianum en el cultivo del tomate. Los productos utilizados fueron TRICHOZAM 8.3 WP (3 x10 9conidias/g) y PAZAM 8.3 WP (8 x 10 8 conidias/g) ambos a una dosis de 240 g/ha. Los tratamientos evaluados fueron: Trichoderma siembra /Paecilomyces trasplante, Paecilomyces siembra /Trichoderma trasplante, Trichoderma siembra /Trichoderma trasplante, Paecilomyces siembra/ Paecilomyces trasplante, Paecilomyces+Trichoderma siembra /Paecilomyces+Trichoderma trasplante y testigo. Al momento de la siembra se mezcl cada producto en un sustrato estril (Peatmoss) por separado, luego fue depositado en bandejas de 105 celdas a la dosis antes mencionada. En el trasplante se aplic 50 ml de una solucin conteniendo las esporas de estos hongos, a una concentracin de 0.25 g de producto comercial/litro de agua a cada planta. Los nematodos encontrados con mayor frecuencia en este estudio fueron: Rotylenchulus sp, Tylenchorhynchus sp y Pratylenchus sp. El nematodo Meloidogyne sp se present en bajas poblaciones y no caus ndulos en las races del tomate. El tratamiento Trichoderma siembra/ Paecilomyces trasplante, fue el que present mas altos rendimientos, mayor longitud de races y menor nmero de nematodos. El tratamiento que gener menos rendimientos y que no redujo eficientemente las poblaciones de nematodos fue Paecilomyces+Trichoderma siembra/ Paecilomyces+Trichoderma trasplante. Este ltimo tratamiento present la menor longitud de races, solo superado por el testigo. Palabras claves: Tomate, Paecilomyces lilacinus, Trichoderma harzianum, nematodos, control biologico.

Materiales y Mtodos
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Docente/Investigador. UNAN-Len. wsalazar_a@yahoo.com UNAN-Len Asistente de Investigacin. UNAN-Len 3 Tesista. UNAN-Len

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Ubicacin del estudio El estudio se llev a cabo en el Campus Agropecuario de la UNAN-Len, el cual cuenta con las siguientes condiciones climticas: temperatura media anual de 29 oC, humedad relativa promedio de 74% y precipitacin promedio anual 1256 mm/ao. Los suelos son francos arenosos predominando el contenido de arena, seguido de limo y finalmente la arcilla. La capa arable tiene una profundidad de 2 m con una densidad aparente de 1.27 g /cm3 y con una pendiente de 1.5%. Diseo experimental (aumentar el diseo) Se utiliz un diseo de Bloques Completos al Azar (BCA), con cuatro repeticiones y seis tratamientos para un total de 24 unidades experimentales. Cada unidad experimental estuvo constituida por 50 plantas lo que equivale a 200 plantas en cada tratamiento. El rea total del estudio fue de 709.8 m2. Tratamientos Los tratamientos evaluados en este estudio fueron diferentes momentos de aplicacin (siembra y transplante) de dos productos biolgicos comerciales TRICHOZAM 8.3 WP y PAZAM 8.3 WP. En ambos productos se aplic la dosis comercial de 240 gramos por hectrea, la cual posee una concentracin de 3 x 109 conidias por gramo de producto comercial en el caso de Trichoderma harzianum y 8 x 108 conidias por gramo de producto comercial para el caso de Paecilomyces lilacinus. Los tratamientos considerados en este estudio se presentan en la Tabla 1. Fase de bandeja: Ambos productos fueron aplicados al sustrato antes de la siembra, incorporndose manualmente al sustrato mezclndolo homogneamente. Una vez mezclados los productos se procedi a la siembra de la semilla colocando una semilla por alveolo. Posteriormente se reg el sustrato y se colocaron las bandejas en un cuarto oscuro para facilitar una emergencia homognea de las plntulas. Fase de trasplante: Los productos T. harzianum y P. lilacinus fueron aplicados a las plntulas al momento del trasplante diluyndolos en agua a una dosis de 240 g en 108 litros, los cuales se mezclaron y posteriormente se colocaron en una bomba manual de presin con capacidad para 20 litros. Todas las plantas recibieron 50 ml de la solucin dependiendo el tratamiento que le corresponda. Tabla 1. Tratamientos a aplicarse en la siembra y transplante en el cultivo del Tomate.
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Tratamient o
T1

Aplicaci n
Siembra Trasplante Siembra Trasplante Siembra Trasplante Siembra Trasplante Siembra Trasplante Siembra Trasplante

Gramos/ha T. harzianum
240 ----240 240 240 ----240 240 -----

Gramos/ha P. lilacinus
--240 240 ------240 240 240 240 -----

T2

T3

T4

T5

T6

Variables a medir y seleccin de plantas a muestrearse. Variables de respuesta 12345Nmero de frutos cosechados (unidades) Peso fresco de frutos (kg/ha) Nmero de ndulos en races (unidades) Largo y peso de races (cm/gramos) Identificacin y cuantificacin de nematodos (unidades)

Metodologa de muestreo Cuantificacin y peso de frutos: La cuantificacin y peso de frutos se realiz en todas las plantas dentro de la parcela experimental. En este dato solamente se incluyeron frutos comerciales los cuales se caracterizaron por poseer coloracin uniforme, tamao mediano a grande, sano y libre de dao fsico. Nmero de ndulos, largo y peso de races: Para recolectar estos datos se realiz un muestreo dirigido enumerando las plantas y posteriormente seleccionando las plantas cuyo nmero asignado era divisibles entre 5 en cada unidad experimental, e.g. la planta 1, 5, 10, 15, 25 hasta la planta 50 para obtener un total de 10 plantas muestreadas por unidad experimental y 40 plantas en todo el tratamiento.
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Este nmero de plantas representa el 20% de plantas muestreada en cada tratamiento y fue utilizado para muestrear nmero de ndulos, largo, peso de races y muestreo de nematodos. Muestreo de nematodos: Los muestreos se realizaron en cuatro momentos, el primero antes de la siembra, el segundo15 das despus del trasplante, el tercero 30 das despus del trasplante y el cuarto al momento de la cosecha. Antes de la siembra: El muestreo realizado antes de la siembra se llevo a cabo en forma de zig-zag (Fig 1) procurando que los sitios de muestreo fueran representativos del rea experimental. El nmero de submuestras tomadas fue de 15 en un rea de 709.8, el nmero de submuestra se calcul siguiendo las recomendaciones de Shurtleff y Averre III (2000), las cuales se presentan en la Tabla 2. Las submuestras se tomaron a una profundidad de 20 centmetros, estando el suelo a capacidad de campo colectndose 200 gramos de suelo en cada submuestra. Posteriormente, las submuestras fueron mezcladas homogneamente, tomndose 100 gramos para su anlisis en el laboratorio. Despus del trasplante: En esta etapa se realizaron tres muestreos, en los cuales se muestrearon 40 plantas de cada tratamiento seleccionados azarisadamente. Para la toma de muestras se utiliz un tubo 1 metro de largo y 2.5 cm de dimetro con un extremo afilado. El procedimiento consista en introducir 20 centmetros de la parte afilada del tubo en un ngulo de 45 grados en el suelo, procurando extraer suelo de la rizsfera de la planta sin causar dao a las races. Utilizando este tubo se extraa aproximadamente 100 gramos de suelo de cada planta, posteriormente estas submuestras eran mezcladas y se tomaban 100 gramos de suelo lo que representaba la muestra de ese tratamiento. Tabla 2. Nmero de sitios a muestrear dependiendo de las dimensiones del rea. Area a muestrear Nmero de muestras 500 metros cuadrados 8-10 muestras 500 metros cuadrados-0.4 hectrea 0.4 hectrea 4 hectreas Fuente: Shurtleff y Averre III (2000) 11-20 muestras 20-25 muestras

Procesamiento de muestras y nemtodos. El anlisis nematolgico se efectu tomando 300 g de suelo y procesndolos por el mtodo de Baermann (2). Una vez extrados los nematodos fueron transferidos a platos siracusa de 20 ml de capacidad, y se contaron e identificaron utilizando aspectos morfolgicos y claves dicotmicas, con la ayuda de un estereoscopio y un microscopio compuesto a magnitudes de 4 X y 10 X respectivamente. Anlisis estadstico Para el anlisis estadsticos se utiliz el programa estadstico Statistical Program for Social Sciences (SPSS, 11.5). Se realiz un Anlisis de Varianza (ANDEVA) para determinar si existen diferencias significativas entre los tratamientos, posteriormente se realizarn separaciones de medias segn Duncan peso en fresco, nmero de tomates cosechados, nmero de ndulos y largo de raz. El nivel de significancia exigido fue de 0.05. Manejo agronmico El manejo agronmico del cultivo fue el que tradicionalmente utiliza el productor, consistiendo en preparacin del suelo, fertilizacin, manejo de malezas, plagas y enfermedades, exceptuando plagas y enfermedades de suelo que fueron manejadas con los tratamientos del estudio. La variedad de tomate utilizada ser Chiro, la cual se caracteriza por poseer un crecimiento de tipo semi-determinado. La distancia de siembra ser de 1.30 metros entre surco y 0.30 metro entre plantas para una densidad poblacional de 1820 plantas en el rea experimental. En la etapa de semillero se utilizaran 25 bandejas de 72 orificios cada una. El sustrato que se utilizar ser Peat-moss, utilizndose aproximadamente 15 kilogramos.

RESULTADOS Y DISCUSION Efecto de T. harzianum y P. lilacinus sobre el nmero de frutos, longitud y peso de races de tomate El tratamiento Trichoderma sp al momento de la siembra y Paecilomyces sp al momento del trasplante (T+P) fue el que obtuvo mejores resultados en lo que a rendimiento y desarrollo fisiolgico de las plantas se refiere. En lo referido a rendimientos, el tratamiento T+P produjo 810 frutos, superando significativamente al resto de tratamientos evaluados (Cuadro 3). Los tratamientos testigo (T) y combinado Trichoderma+Paecilomyces (TP+TP) a la siembra y al trasplante, presentaron los mas bajos rendimientos con promedios de 340 y 374.50 frutos por tratamientos respectivamente estos datos no presentan diferencias significativas entre si, pero si difieren estadsticamente con el tratamiento T+P. Los tratamientos P+P, P+T y T+T presentaron rendimientos intermedios sin diferencias significativas entre ellos pero estadsticamente superiores al testigo y menores que el tratamiento T+P. La tendencia experimentada en los rendimientos se mantuvo para las variables longitud y peso de races, en los cuales el tratamiento T+P present promedios de longitud y peso de races que superaron significativamente al resto de tratamientos con datos de longitud y peso de races de 28.16 cm y 7.84 g respectivamente. (Cuadro 3). Cuadro 3 Tratamiento Testigo TP+TP P+P P+T T+T T+P Frutos cosechados 340.00 a 374.50 ab 587.37 b 590.00 b 593.75 b 810.00 c Longitud de races en cm 17.83 a 19.16 ab 23.00 b 23.50 b 22.50 ab 28.16 c Peso de races en gramos 7.0288 a 7.1625 ab 7.4575 ab 7.3213 ab 7.2938 ab 7.8438 c

Nivel de significancia * * * En cada columna las medias con igual letra no difieren, segn Duncan (alpha = 5%) Los resultados indican que el tratamiento Trichoderma sp al momento de la siembra y Paecilomyces sp al momento del trasplante incrementaron significativamente los rendimientos del cultivo del tomate, incrementando igualmente la longitud y peso de races. Aparentemente las plantas a las que se le aplic Trichoderma al momento de la siembra fueron protegidas desde la etapa de plntula, por este
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organismo de patgenos del suelo, ya que el uso de este hongo ha sido probado exitosamente para el control de diferentes fitopatgenos que afectan a distintos cultivos (Harman, 2000).

Esta proteccin en el momento en que la planta es altamente susceptible a hongos de suelo pudo influir directamente en el desarrollo radicular de las plntulas dentro de este tratamiento. Esto debido a que aunque no hubo diferencias significativas entre tratamientos en lo que mortalidad se refiere, si pudo apreciarse que las plantas en este tratamiento crecieron con mayor rapidez y fortaleza. La aplicacin de Paecilomyces sp al momento del trasplante influy eficientemente sobre los rendimientos, puesto que redujo el nmero de nematodos fitopatgenos en el campo definitivo, los cuales de otra manera hubiesen alcanzado poblaciones que afectaran el desarrollo radical de las plantas y por ende su produccin, como efectivamente ocurri en el testigo. La efectividad de Paecilomyces como agente de control de nematodos ha sido ya reportado por Jatala (1985) el cual encontr huevos y hembras de Meloidogyne incognita fuertemente infectados por Paecilomyces lilacinus en races de papa en el Per. Segn los resultados obtenidos en este estudio la proteccin brindada a las plntulas por Trichoderma y a las plantas trasplantadas obtenida por Paecilomyces fue lo suficientemente eficiente como para asegurar a las plantas un ambiente favorable para su desarrollo. Estos estudios coinciden con los obtenidos por Mendez, (2003) quien encontr que en el caso de Lechuga orgnica, la mejor combinacin para usar Trichoderma sp y Paecilomyces sp fue usando al primero al momento de la siembra y al segundo al momento del trasplante.

Efecto de Trichoderma sp y Paecilomyces sp sobre nematodos asociados al tomate El anlisis estadstico permiti separar los tratamientos en dos grupos que presentaron diferencias estadsticas entre ellos. El primer grupo de tratamientos estuvo formado por los tratamientos T+P, P+T y P+P y el segundo grupo estuvo formado por los tratamientos T+T, TP+TP y testigo. Los tratamientos pertenecientes al primer grupo lograron reducir significativamente el nmero de nematodos presentes en ellos en comparacin con los tratamientos T+T, TP+TP y testigo. La cantidad de nematodos presentes en los tratamientos del segundo grupo no presentaron diferencias con el testigo, lo que implica que los tratamientos no ejercieron efecto sobre las poblaciones de nematodos presentes en el estudio. Los tratamientos en los cuales Paecilomyces sp fue aplicado se presento una reduccin significativa en el nmero de nematodos, no as en los que Paecilomyces sp estuvo ausente en los cuales el nmero de nematodos no varo. La excepcin a este comportamiento fue el tratamiento combinado (TP/TP) en el cual a pesar de haberse aplicado Paecilomyces sp no se redujo el nmero de nematodos.

Efecto de Trichoderma sp y Paecilomyces sp sobre nematodos asociados al tomate

600

Nmero de nematodos

500 400 300 200 100 0

Fitopatgenos Vida libre

T+P

P+T

T+T

P+P

T/P+TP

Testigo

Tratamientos
Trichoderma sp + Paecilomyces sp (T+P) Paecilomyces sp + Trichoderma sp (P+T) Paecilomyces sp (TP/TP) Trichoderma sp + Trichoderma sp (T+T) Paecilomyces sp + Paecilomyces sp (P+P) Trichoderma sp + Paecilomyces sp/Trichoderma sp + Testigo

En el cultivo del tomate, los especimenes mas frecuentemente recobrados y en mayor cantidad fueron aquellos referidos a los gneros Rotylenchulus sp, Thylenchorhynchus sp, Pratylenchus sp, Trichodorus sp, Hoplolaimus sp y Aphelenchoides sp (Cuadro 4). Estos nematodos fueron

encontrados en todos los tratamientos del estudio y han sido reportados por varios autores como parsitos del cultivo del tomate. Todos estos gneros de nematodos presentaron susceptibilidad a Paecilomyces sp, ya que en los tratamientos donde fue aplicado este organismo estos gneros de nematodos disminuyeron considerablemente no as en los tratamientos donde no fue aplicado. Cuadro 4. Gneros de nematodos fitopatgenos mas comunes en el cultivo del tomate bajo la influencia de Trichoderma sp y Paecilomyces sp Gneros de nematodos Rotylenchulus sp Tylenchorynchus sp Pratylenchus sp Trichodorus sp Hoplolaimus sp Aphelenchoides sp Meloidogyne sp Heterodera sp Tylenchus sp Xiphinema sp Mesocriconema sp Helicotylenhus sp Hemicyliophora sp Nmero de nematodos/ 100g de suelo
780 305 220 305 185 185 30 15 15 30 15 20 60 15

Bibliografa Harman, G. 2000. Myths and dogmas of biocontrol. Changes in perceptions derived from research on Trichoderma harzianum T-22. Plant Disease 84 (4): 377-393. Jatala, P. (1985). Biological control of nematodes. In: Sasser, J. N. & Carter C. C. (Eds). An advanced treatise on Meloidogyne. Biology and Control. Raleigh, Department of Plant Pathology, North Carolina State University & USAID: 302-308. Mndez Martnez, J. 2003. Efecto de la aplicacin de Trichoderma harzianum y Paecilomyces lilacinus en Zamorano. Proyecto especial del Programa de Ingenieros Agrnomos. Zamorano, Honduras. 32p.
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