UNIVERSIDAD DE SAN CARLOS DE GUATEMALA FACULTAD DE CC.QQ.

Y FARMACIA ESCUELA DE QUIMICA BIOLOGICA DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIA CURSO DE MICROBIOLOGIA BIOLOGA Y QUMICA

Yancy Minnette Juan 201080037 QQ

GUIA DE TRABAJO No. 3 MICROSCOPIA INSTRUCCIONES . Para resolver la presente gua puede consultar el libro de Microbiologa de Prescot Microbiologa de Alcamo y bibliografa recomendada para el curso. Adems puede consultar paginas de internet, dejando constancia de su consulta. FECHA DE ENTREGA: lunes 05 DE AGOSTO DE 2013

1.

Realice un esquema en donde pueda observarse la trayectoria de los rayos de luz a travs del condensador, el portaobjetos y el lente objetivo 10X y seale lo siguiente:

a. b. c. d. e. f.

Cuando los rayos de luz atraviesan el portaobjetos de vidrio. Qu forman antes de llegar al lente objetivo? - Tienen forma de cono de luz. De dnde se obtiene Sen ? Conteste en base al esquema. - Define el radio de la imagen apmplificada que recibe el lente. Cul es la funcin del condensador? - El condensador es el lente que concentra los rayos luminosos sobre la preparacin. Cul es la funcin del diafragma de campo y del diagrama de apertura? - El diafragma regula la cantidad de luz que entra en el condensador. Qu aumentos pueden tener los lentes objetivos? y los oculares? - Los objetivos pueden tener aumentacin de 4X, 10X, 40X y 100X. - Los oculares tienen un aumento de 10X. Cmo se producen las imgenes reales y virtuales en un microscopio ptico. Cul es la que se ve realmente?

g.

h.

Una imagen virtual est formada por la proyeccin de los rayos reflejados o refractados y una imagen real se forma con los rayos reflejados o refractados y no con sus proyecciones. Explique qu es el poder de resolucin (P.R.) de un microscopio ptico. - El poder de resolucin describe la capacidad de un microscopio de distinguir dos puntos adyacentes y muy pequeos. Se puede decir que es la capacidad del microscopio para observar detalles en la muestra o espcimen a ser analizado. Cmo se calcula el P.R. de un microscopio ptico. P.R. = C donde: = longitud de onda; C=constante de proporcionalidad NA NA=abertura numrica

2.

Dibuje un lente objetivo de inmersin (con aceite), la lmina portaobjetos y la trayectoria de los rayos de luz a travs de los mismos e indique lo siguiente:

a.

Cul es la funcin del aceite inmersin cuando se observa a

travs del objetivo de 100X? - El aceite disminuye el espacio de aire entre el objetivo, y debido a que tiene un ndice de refraccin muy cercano al del vidrio, elimina casi completamente la desviacin de los rayos de luz. b. Indique que les sucede a los rayos de luz cuando atraviesan el portaobjetos de vidrio donde no hay aceite? Y qu pasa con estos mismos rayos en la parte de la lmina que si hay aceite? - Los rayos de luz al atravesar el portaobjetos de vidrio, se desvan debido al cambio de densidad entre el vidrio y el aire resultando en que algunos rayos de luz sean refractados y por lo tanto no todos los rayos de luz llegan al objetivo. - Si hay aceite de por medio, este evita la refraccion de los rayos de luz permitiendo que entren al objetivo, por lo tanto la resolucin aumenta. c. Qu importancia tiene el ndice de refraccin (n) del aire, vidrio y aceite de inmersin, cuando se observa con el lente de 100X? Explique. - El ngulo de luz que penetra una lente va depender del ndice de refraccin del medio en el que se encuentre el lente del objetivo. Por eso es importante saber que existe una gran diferencia entre estos 3 medios. 3. Utilizando la siguiente ecuacin, calcule el Poder de Resolucin (P.R.) de un microscopio ptico (use slo la A.N. del objetivo de inmersin). P.R. = DATOS: 0.5 ( ) A.N. objetivo

 = 530 nm A.N. objetivo = 1.25 a. Calcule: P.R. del microscopio en micras (um) P.R. = 0.5 (530nm) 1.25 P.R. = 0.212 um Qu significa este resultado? Explique - Para poder diferenciar entre dos objetos, la distancia minima entre ellos debe ser de 0.212um. Cules son los factores que limitan el P.R. de los microscopios pticos? - La apertura numrica del objetivo y condensador

b. c.

4. Sobre el aceite de inmersin: a. Cules son las propiedades del aceite de inmersin que logran aumentar el P.R. del microscopio ptico? - Se aumenta el P.R. del microscopio al utilizar aceite de inmersin debido a que su ndice de regraccion es similar al del vidrio y es incoloro. b. Por qu es importante emplear aceite de inmersin cuando observamos bacterias? - Es importante para as poder observar las bacterias mas claramente y poder destinguir bien su morfologa. c. Ponga 3 recomendaciones para el buen uso del lente de inmersin. - Asegurar que el objetivo de inmersin este limpio antes de usarlo. - El portaobjetos debe estar totalmente seco. - Tener cuidado que al momento de subir la platina, no quebrar el objetivo de inmerison. 5. Elabore un cuadro con los diferentes tipos de microscopios pticos que se consideraron en esta unidad: campo claro, campo oscuro, contraste de fses y fluorescencia. Indique sus principales caractersticas y sus principales aplicacines.

MICROSCOPIO Microscopio de Campo Claro

CARACTERSTICAS Objetos oscuros se pueden identificar en fondo brillante. Microorganismos pueden ser teidos para su mejor observacin.

APLICACIN Identificacin microorganismos morfologa general segn de su

Microscopio de Campo Oscuro Microscopio de Fluorescencia

Objetos con diferentes ndices de refraccin. Imagen oscura de fondo brillante Muestra con ndices de refraccin distintos La luz es refractada Exposicin a luz U.V. Tincin con fluorocromos si no poseen fluorescencia natural El rayo de luz monocromtica se enfoca en el espcimen que contiene en fluorocromo, que se exita y emite luz de longitud de onda visible

Morfologa e identificacin general de microorganismos sin teir. Hace posible la observacin en estado vivo de partculas y clulas Torne ms visibles los objetos ms transparentes Locacin de de una protena especfica dentro de la clula. Identificacin de bacterias patgenas por inmunofluorescencia . Procesos dinmicos en clulas vivas.

6. Cules son las principales diferencias entre el microscopio ptico y el microscopio electrnico? Un microscopio electrnico tiende a tener mayor resulcion que un microscopio ptico. En un microscopio ptico, se utiliza una fuente de luz para observar la muestra, mientras que un microscopio electrnico utiliza un haz de electrones los cuales generan una imagen digital. 7. Mencione los 2 tipos de microscopios electrnicos que existen, como funcionan y su principal aplicacin. Ponga 2 ejemplos de tipo de microorganismos, orgnulos celulares y partculas que se pueden observar con microscopa electrnica y sus dimensiones. Mencione la capacidad de aumento de este tipo de microscopios. a. Microscopio Electrnico de Transferencia (MET) - Un filamento de tungsteno calentado en un generador de electrones libera un haz de electrones que es enfocado a continuacin sobre la muestra mediante el condensador. La muestra dispersa los electrones que pasan a travs de ella, y este haz se enfoca con lentes magntica para formar una imagen aumentada y visible sobre una pantalla fluorescente. Se emplea para la observacin e investigacin de la estructura bacteriana o viral en detalle, con el que pueden llegarse a estudiar hasta los orgnulos y componentes celulares de los microorganismos. P.R.: 0.5nm

b. Microscopio Electrnico de Barrido (MEB) - Realiza un escner con un estrecho haz de electrones en forma de prisma, de adelante hacia atrs sobre la muestra, cuando el haz incide sobre una zona concreta de la muestra, los tomos de la superficie emiten una nube tenue de electrones denominados electrones secundarios, que son atrapados por un detector especial, stos inciden sobre un centellador, causando la emisin por ste de centellos de luz que un fotomultiplicador transforma en una corriente elctrica y la amplifica. La seal se enva a un tubo de rayos catdicos y se

produce una imagen como en la pantalla de televisin. Se emplea especficamente cuando se desea apreciar la superficie o una imagen tridimensional de los microorganismos sin un inters particular en su interior, tambin para localizacin real de microorganismos in situ, en nichos ecolgicos.P.R.: 7.0nm 8. Mencione cuales son las ventajas y desventajas de la microscopa electrnica. Ventajas: - Permite observar los microorganismos con mayor detalle, adems permite observar microorganismos de dimensiones muy reducidas y hasta sus componentes intracelulares y extracelulares. Reduce la participacin humana en los ajustes lo que repercute en menos errores. Desventajas: - Los procesos de preparacin de las muestras pueden resultar ms complicados, el alcance de la tecnologa y los costos es una limitante para su aplicacin.

Referencias: Microscopia Electronica de Barrido. UPV. Servicio de Microscopia Electronica. Consultado el: 03 de agosto de 2013. Encontrado en: http://www.upv.es/entidades/SME/info/753120normalc.html Microscopia Electronica. Microscopio Electronico de Transmision (MET). Consultado el 04 de agosto de 2013. Encontrado en: http://www.uned.es/cristamine/mineral/metodos/tem.htm TROESTCH, S. Limite de Resolucion. Slideshare. Consultado el: 3 de agosto de 2013. Encontrado en: http://www.slideshare.net/guest4f2b4fc/limite-de-resolucin