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Módulo 10.

ORGANELOS TRANSDUCTORES DE ENERGÍA: CLOROPLASTOS Y FOTOSÍNTESIS
PLÁSTIDOS Con este nombre se denomina genéricamente a un grupo de organelos que producen y/o almacenan diversos productos en algas y plantas. Todos los plástidos derivan de proplástidos, que son pequeños organelos presentes en los tejidos meristemáticos (tejidos en activa división). Los etioplastos son plástidos de hojas crecidas en ausencia de luz que cuando se exponen a la luz se transforman en cloroplastos, desarrollando una estructura mucho más compleja (ver figura). Los amiloplastos son plástidos especiales que reservan almidón en los tejidos no fotosintéticos y los cromoplastos almacenan pigmentos liposolubles.

Etapas de transformación de un etioplasto (a) cuando se expone a la luz . En el centro de la fotografía se observa una estructura (cuerpo prolamelar) que será el origen de los tilacoides. Luego de tan sólo un minuto de exposición a la luz el cuerpo prolamelar se organiza en laminillas (b). Al cabo de otro minuto de exposición (c) comienzan a distribuirse las laminillas. Luego de 24 horas de exposición a la luz (d) se observan los primeros grana (asociación de membranas tilacoidales). En (e) puede verse un granum totalmente desarrollado.

Los cloroplastos son el tipo más importante de plástidos: estos organelos contienen clorofila, un pigmento de color verde capaz de captar la energía que provee la luz solar para realizar la fotosíntesis. Hay varios tipos de clorofilas que difieren ligeramente entre sí: en las plantas terrestres las clorofilas más comunes son las clorofilas a y b, pero en las algas hay otros tipos. Los cloroplastos también contienen una variedad de pigmentos amarillos y naranjas llamados carotenoides que absorben radiaciones luminosas en zonas del espectro visible donde no absorben las clorofilas y por ello se denominan pigmentos fotosintéticos accesorios o auxiliares. Un alga unicelular puede contener sólo un gran cloroplasto, en tanto que la célula de una hoja puede tener entre 20 y 100. Es importante señalar que los cloroplastos no son solamente sitio de síntesis y almacenamiento de hidratos de carbono, pues el ATP y el poder reductor que producen son utilizado en diferentes compartimientos para la síntesis de otros compuestos químicos que la célula requiere para su funcionamiento. Los cloroplastos son organelos complejos, en forma típica de disco, delimitados por dos membranas, una interna y otra externa . El espacio delimitado por la membrana interna llamado estroma (que es análogo a la matriz mitocondrial) contiene las enzimas encargadas de sintetizar glucosa a partir de dióxido de carbono, agua y energía (ATP y poder reductor) obtenida de la luz solar; también posee ADN, ARN y ribosomas. Dentro del estroma existe un tercer sistema de membranas que delimita compartimientos en forma de sacos aplanados, de forma discoidal, interconectados unos con otros, llamados tilacoides. El interior de este compartimiento se denomina espacio intratilacoidal. Los tilacoides se agrupan formando pilas (granum, plural grana). Tales membranas, ricas en clorofila, se asemejan a la membrana interna de la mitocondria por el hecho de que ambas intervienen en la formación de ATP. La energía captada por las moléculas de clorofila a partir de la luz solar es utilizada para excitar electrones que se utilizarán en la formación de moléculas de ATP y de poder reductor (NADPH, equivalente al

Transporte de proteínas hacia los cloroplastos Como ya se ha mencionado en capítulos anteriores. Las proteínas que ingresan al cloroplasto y tienen como destino este tercer compartimiento presentan una primera secuencia de señal que será eliminada por una peptidasa de señal al entrar al estroma. los cloroplastos no se originan de novo: siempre provienen de la división de cloroplastos preexistentes. lo que les permite producir un pequeño número de las proteínas que se encuentran en estos organelos. la proteína atraviesa una o las dos membranas y así llega al estroma o a los tilacoides de los grana. Los cloroplastos plantean un problema adicional por poseer un tercer compartimiento (la membrana tilacoidal y el espacio intratilacoidal). casi todo el ADN de las células eucarióticas se encuentra en el núcleo. Para que las células hijas posean una cantidad de cloroplastos equivalente a la que tenía la célula madre sus cloroplastos deben dividirse antes de producirse la división celular. Sin embargo. La división de los cloroplastos ocurre por fisión binaria. dentro del tilacoide una segunda peptidasa de señal liberará la cadena polipeptídica definitiva. Esta energía química será luego utilizada en el estroma para obtener glucosa partir de dióxido de carbono y agua. la mayor parte de las proteínas de los cloroplastos son fabricadas en los ribosomas libres del citosol. Luego de hidrolizada la primera secuencia de señal queda expuesta una segunda secuencia de señal que indica que el destino final es intratilacoidal. pero parte de las mismas son sintetizadas en los propios organelos. pero los cloroplastos (al igual que las mitocondrias) contienen moléculas de ADN en sus compartimientos internos. que después son transportadas al sitio adecuado del organelo. por lo que las proteínas citosólicas destinadas a cada uno de ellos contienen diferentes secuencias de señal. el tráfico de proteínas está dirigido solamente desde el citosol hacia los cloroplastos. la mayoría de las proteínas presentes en los cloroplastos son codificadas por el ADN nuclear.BIOLOGÍA / Módulo 10 / Cloroplastos y Fotosíntesis 2 NADH). ambos organelos (mitocondrias y cloroplastos) están contenidos en la misma célula. Tal como se mencionó al tratar las mitocondrias. De acuerdo a su ubicación final. como en las bacterias y la división de su ADN se realiza del mismo modo que hemos visto para este tipo de . no se conoce que se exporten proteínas desde el cloroplasto hacia el citosol. Del mismo modo que lo que ocurre con las mitocondrias. Las proteínas codificadas por el genoma del cloroplasto son relativamente pocas y usualmente se ubican en la membrana tilacoidal de los cloroplastos. la que iniciará entonces su plegamiento. así como ribosomas. En las células vegetales capaces de realizar fotosíntesis. Al igual que lo que ocurre en las mitocondrias. las proteínas destinadas a los cloroplastos son orientadas hacia estos organelos por secuencias de señal específicas que tienen que ser reconocidas por una proteína de la membrana externa del cloroplasto. en muchos casos ser trata de subunidades de proteínas complejas que tienen que ensamblarse luego con otras subunidades codificadas en el genoma nuclear. Los genomas de los cloroplastos Como ya se ha dicho.

Estas membranas tilacoides forman un tercer compartimiento en los cloroplastos. en donde cada moneda corresponde a un tilacoide. Como ya se ha mencionado. El ADN cloroplástico es bastante simple y. tanto en su estructura como en la sensibilidad a los antibióticos. la síntesis de péptidos empieza con N-formilmetionina y no con metionina y el ADN cloroplástico puede ser transcripto por la ARN polimerasa de la E. De este modo. al igual que las mitocondrias. la energía química almacenada por los autótrofos sirve de combustible para las reacciones metabólicas que mantienen la vida en la tierra. intervienen en la síntesis de ATP. coli para producir ARNm cloroplástico y fabricar proteínas cloroplásticas. los pigmentos fotosintéticos y las enzimas necesarias para las reacciones de la fotosíntesis que requieren luz se encuentran asociados a las membranas tilacoidales. poseen una membrana interna y otra externa. Algunas bacterias son autótrofos quimiosintéticos: son productores que fabrican sus compuestos orgánicos mediante la oxidación de sustancias inorgánicas simples como el azufre y el amoníaco. Cuando se examina al microscopio una pequeña porción de la hoja de una planta. aplanados e interconectados entre sí. La clorofila. junto con otras características semejantes a las de células procarióticas. Si se utiliza el microscopio electrónico puede comprobarse que los cloroplastos. Cada granum se parece a una pila de monedas. la membrana interna de los cloroplastos encierra un tercer sistema de membranas que forman un conjunto de sacos discoidales. tejido que se ubica en el interior de la hoja. La membrana interna encierra una zona llena de líquido. Los autótrofos quimiosintéticos no requieren de luz como fuente de energía para realizar estas reacciones. April 1996 . Por su parte la maquinaria de síntesis proteica se parece más a la de las bacterias que a la de células eucariotas: los ribosomas son similares a los de Escherichia coli. es decir que son los únicos organismos capaces de transformar la energía solar en energía química mediante el proceso de la fotosíntesis. Los procariotes fotosintéticos como las cianobacterias carecen de cloroplastos. Esta idea se ha incorporado como un elemento importante de la teoría endosimbiótica que se refiere al origen de las células eucarióticas 1. Cada año estos destacados organismos producen más de 200 mil millones de toneladas de nutrientes que pueden ser asimilados por los heterótrofos para obtener energía química. pero poseen estructuras similares a los tilacoides que son extensiones de la membrana celular y se ubican en la periferia de la célula. Algunas membranas tilacoidales se extienden de un granum a otro. Los productores son organismos autótrofos (que se nutren a sí mismos: del griego autos que significa "a uno mismo" y trophos que significa "nutrición"). es de tipo circular y no parece contener histonas asociadas. Estas membranas. es decir que se trata de organismos que fabrican sus propios alimentos a partir de materias primas inorgánicas y por lo tanto no dependen para su nutrición de otros organismos. poder reductor y moléculas sencillas para sintetizar sus propios componentes. llamados tilacoides. localizados principalmente en las células del mesófilo. Scientific American. se puede comprobar que el color verde debido a la clorofila no se encuentra disuelto en el citoplasma sino que se encuentra confinado en los cloroplastos. 274:(4): 38-45. La mayor parte de los productores son autótrofos fotosintéticos : organismos que utilizan la luz como fuente de energía para la fabricación de compuestos orgánicos a partir de dióxido de carbono y agua. Los cloroplastos constituyen el lugar en donde se lleva a cabo la fotosíntesis Las plantas. Como ya ha sido expresado antes. las algas y algunas bacterias son productores. denominada estroma.BIOLOGÍA / Módulo 10 / Cloroplastos y Fotosíntesis 3 organismos. la existencia de una molécula propia de ADN circular en los cloroplastos. que contiene la mayor parte de las enzimas necesarias para aquellas reacciones de la fotosíntesis que no requieren de luz (las reacciones que convierten el dióxido de carbono en glucosa ). llamado espacio tilacoideo o intratilacoidal. salvo en algunas algas. “The birth of complex cells. al igual que en las bacterias. En algunas zonas estos sacos se organizan en columnas llamadas grana. 1 Christian de Duve. han sido las causas de que se proponga que estos organelos evolucionaron a partir de organismos procarióticos que originalmente vivieron dentro de células de mayor tamaño y que a lo largo de la evolución se han adaptado de manera que dejaron de ser organismos autónomos. conformando un sistema interconectado. al igual que la membrana interna de las mitocondrias.

moléculas que son luego utilizados como fuente de energía para fabricar glúcidos a partir de CO 2 y H2O. según una ecuación actualmente conocida como reacción de Hill. De este modo la energía solar proporciona la fuerza motriz para la ciclación continua del CO2 y O2 atmosféricos. El CO2 formado regresa a la atmósfera para volver a ser utilizado por los organismos fotosintetizadores. 2 H2O + 2 NADP+ → 2 NADPH + 2 H+ + O2 . el colorante se decoloraba y se formaban burbujas de oxígeno. En las reacciones luminosas de la clorofila y otros pigmentos absorben energía luminosa la que se conserva en forma de energía química en dos productos ricos en energía: ATP y NADPH. Algunos años más tarde se encontró que el aceptor universal de hidrógeno en las plantas es el NADP +. que demostró que cuando se exponen a la luz extractos de hoja que contienen cloroplastos en presencia de un aceptor de hidrógeno (A) se desprende oxígeno. ¿De qué manera transducen (transforman) las moléculas de pigmentos de las membranas tilacoides la energía luminosa en energía química? La clave la dio un descubrimiento realizado en 1937 por Robert Hill. generando ATP y poder reductor para sus propias actividades. Cuando se iluminaba el recipiente conteniendo la mezcla de reacción. Los organismos heterótrofos aeróbicos usan el O 2 para degradar los productos orgánicos ricos en energía producidos en la fotosíntesis a CO 2 y H2O. El ATP y el NADPH producidos durante la fotosíntesis también pueden ser utilizados para la síntesis de otros compuestos orgánicos. y las reacciones de fijación de carbono .BIOLOGÍA / Módulo 10 / Cloroplastos y Fotosíntesis 4 FOTOSÍNTESIS: CAPTACIÓN DE ENERGÍA LUMINOSA Los organismos fotosintetizadores capturan la luz solar para formar ATP y NADPH (un análogo fosforilado del NADH). En la oscuridad no había reacción. que en su forma oxidada es azul y en su forma reducida es incolora. con liberación de oxígeno molecular: luz H2O + CO2 → (CH2O) + O2 La fotosíntesis abarca dos procesos: las reacciones luminosas (fotodependientes). al tiempo que tiene lugar la reducción simultánea del aceptor de hidrógeno. concluyendo que la producción de oxígeno podía disociarse de la reducción del CO2. Hill también demostró que la presencia de CO 2 no es necesaria para que la reacción tenga lugar y que si está presente no participa en la reacción. La ecuación global de la fotosíntesis describe una reacción de óxido-reducción en la que el H 2O provee el hidrógeno necesario para la reducción del CO 2 y su transformación a glúcidos (CH2O). ya que tienen lugar tanto en presencia de la luz como en la oscuridad (sería más correcto denominarlas reacciones fotoindependientes). En las reacciones de fijación de carbono se utilizan el ATP y el NADPH para reducir el CO2 a glucosa. mal llamadas reacciones oscuras. que sólo tienen lugar cuando se iluminan las plantas. 2 H2O + 2 A → 2 AH2 + O2 El aceptor de hidrógeno utilizado por Hill fue el diclorofenolindofenol (DPIP).

la energía de un fotón es inversamente proporcional a su longitud de onda . El sistema de anillos heterocíclicos tiene una estructura con alternancia de enlaces sencillos y dobles (conjugados) que constituyen el grupo . en general. Cuando se absorbe un fotón se eleva un electrón a un nivel energético superior. En otras palabras. Esta energía proviene de la luz. dejando ir el cuanto de energía en forma de luz (fluorescencia) y/o calor. La absorción de luz excita las moléculas La luz es una pequeña parte de un gran espectro de radiación. sino también como una partícula. es inestable. Está constituida por pequeños paquetes de energía llamados fotones. Todas las radiaciones de dicho espectro viajan a través de ondas. La luz ultravioleta tiene una longitud de onda aún más pequeña y el infrarrojo una longitud de onda incluso mayor. el espectro electromagnético. el fitol. Los diferentes colores de la luz (distintas regiones del espectro de luz) se identifican mediante sus longitudes de onda. esterificando a un ácido sustituyente de uno de los pirroles. pero el proceso ocurre según un sistema de todo o nada: para ser absorbido el fotón ha de contener una cantidad de energía (un cuanto) que iguale exactamente la energía de la transición electrónica. Color Ultravioleta Violeta Azul Verde Amarillo Anaranjado Rojo Infrarrojo Rango de longitud de onda (nm) <400 400-425 425-490 490-560 560-585 585-640 640-740 >740 Energía (KJ/mol) 471 292 260 230 210 193 176 85 La capacidad de una molécula para absorber luz depende del ordenamiento de sus electrones alrededor de los núcleos atómicos en su estructura. cuya longitud de onda es tan grande que puede medirse en kilómetros. En otro extremo del espectro se encuentran las ondas de radiación de baja frecuencia. La radiación fluorescente es siempre de mayor longitud de onda (menor energía) que la luz absorbida. Los electrones elevados a orbitales de energía superior usualmente vuelven rápidamente a sus orbitales normales ( estado basal). En un extremo del espectro se encuentran los rayos gamma. La energía de un fotón (cuanto de luz) es mayor cuanto menor sea la longitud de onda y va de 300 kJ (radiación violeta de 400 nm de longitud de onda) a 170 kJ (radiación roja de 700 nm de longitud de onda).BIOLOGÍA / Módulo 10 / Cloroplastos y Fotosíntesis 5 Observemos que en la fotosíntesis. los electrones fluyen desde el agua hacia el NADP +. Además contiene una larga cadena hidrofóbica de un alcohol. La luz visible es radiación electromagnética de longitud de onda entre 400 y 700 nm. Pigmentos fotosintéticos Los más importantes son las clorofilas. La luz no sólo se comporta como una onda. con formación de agua. en tanto que en la fosforilación oxidativa que ocurre en la cadena respiratoria que tiene lugar en las mitocondrias sucede lo contrario: los electrones pasan del NADH al O 2. Dentro del espectro de la luz visible el color violeta corresponde a la longitud de onda más corta y el rojo a la longitud de onda más larga. Una molécula que ha absorbido un fotón se encuentra en estado excitado que. pigmentos verdes con estructuras policíclicas que se parecen a la protoporfirina de la hemoglobina. Se denomina longitud de onda a la distancia que existe entre la cresta de una onda y la de la siguiente. cuya longitud de onda es muy corta (menor de un nanómetro). La molécula está compuesta de un sistema de anillos heterocíclicos (cuatro anillos pirrólicos sustituidos y un quinto anillo no pirrólico). excepto que la posición central está ocupada por Mg 2+ en lugar de Fe2+. Puesto que el flujo electrónico inducido por la luz va “cuesta arriba” no puede transcurrir sin aporte de energía.

y que algunas bacterias 2 del griego cromos = color. no oxigenados. Una es invariablemente la clorofila a.BIOLOGÍA / Módulo 10 / Cloroplastos y Fotosíntesis 6 cromóforo2 responsable de la absorción de luz. Espectro de acción de la fotosíntesis El espectrofotómetro es un instrumento para medir la cantidad de luz que absorbe una sustancia. si la clorofila fuese responsable de la fotosíntesis. Engelmann. por lo que determina la capacidad de los distintos pigmentos para absorber radiaciones luminosas de diferentes longitudes de onda. las membranas tilacoidales contienen pigmentos secundarios que también absorben la luz. Engelmann supuso que si dichos cloroplastos se expusieran a un espectro luminoso producido por un prisma. presentes en algas rojas y en cianobacterias e incluyen a la ficocianina (azul) y a la ficoeritrina (roja). foros = llevar. grupo responsable del color de la molécula . y a las xantofilas. En organismos fotosintetizadores inferiores existen otras clorofilas con pequeñas diferencias químicas. un alga que se encuentra en forma de filamentos delgados en estanques de agua fresca. La efectividad relativa de las diferentes longitudes de onda en la fotosíntesis está dada por el espectro de acción de la fotosíntesis. ¿Cómo medir la fotosíntesis en aquellos días de tecnología tan elemental? Engelmann sabía que durante la fotosíntesis se producía oxígeno. Además de las clorofilas. aprovechando la forma del cloroplasto en la Spirogyra. la fotosíntesis se llevaría a cabo con mayor rapidez en aquellos puntos en los que el cloroplasto fuera iluminado por los colores que la clorofila absorbe más rápidamente. llamados conjuntamente pigmentos accesorios. Cada una de las células de Spirogyra contiene un cloroplasto verde esmeralda en forma de espiral embebido en el citoplasma. mientras que la segunda es la clorofila b. un espectro de absorción no indica cuáles son las longitudes de onda más efectivas para la fotosíntesis. que sólo difiere de la clorofila a en que tiene un grupo aldehído en lugar de un grupo metilo en el anillo II. que fue determinado en un experimento biológico clásico llevado a cabo en 1833 por el biólogo alemán T. La mayoría de las plantas superiores contienen aproximadamente el doble de clorofila a que de clorofila b. Los cloroplastos de las plantas superiores contienen siempre dos tipos de clorofila. Entre ellos se encuentran los carotenoides que incluyen a los carotenos.W. pues los pigmentos no se encuentran libres sino formando parte de la membrana. de colores rojo al amarillo y las ficobilinas que son pigmentos tetrapirrólicos pero no cíclicos. Sin embargo.

este complejo se denomina centro de reacción fotoquímico. contiene cantidades aproximadamente iguales de ambas clorofilas y puede tener también clorofila c. el espectro de acción de la fotosíntesis difiere un poco del espectro de absorción de la clorofila pura. sólo tienen el fotosistema I. el P680* (P680 excitado). Su función es absorber energía lumínica y transmitirla a velocidad muy elevada al centro de reacción en donde tienen lugar las reacciones fotoquímicas que se describirán más adelante. pero las bacterias fotosintéticas. algas y cianobacterias tienen ambos fotosistemas. con los crisantemos. Las membranas tilacoides tienen dos tipos de fotosistemas. pero sólo unas pocas pueden transducir la energía luminosa a energía química. donde se promueve el pasaje de un electrón a un orbital de energía superior. en donde la luz roja. Todas las moléculas de pigmentos pueden absorber fotones. se genera una molécula de potencial de reducción muy negativo. El fotosistema II. Los dos fotosistemas tienen funciones distintas y complementarias. La absorción de luz por el fotosistema II inicia el proceso Cuando la energía de excitación llega al centro de reacción del fotosistema II. tan efectiva para la fotosíntesis en otros habitats. Cuando una molécula de clorofila (o un pigmento accesorio) absorbe un fotón se excita y −en lugar de emitir fluorescencia − transfiere la energía por resonancia a una molécula de clorofila vecina y retorna a su estado basal. El fotosistema I tiene un centro de reacción denominado P700 y una elevada proporción de clorofila a en relación con la clorofila b. o proteínas CAB 3) que orientan a la clorofila con respecto al plano de la membrana y le confieren propiedades para la absorción de la luz ligeramente diferentes de las de la clorofila libre. de donde finalmente es cedido a un aceptor electrónico vecino que forma parte de la cadena de transportadores de electrones y que darán como resultado final la generación de ATP y de NADPH. determinó el espectro de acción observando hacia cuáles células de Spirogyra se dirigían estas bacterias y encontró que se concentraban en las localizadas en las regiones azul y roja del espectro. Sin embargo. cada uno de ellos con su centro de reacción y su conjunto de moléculas antena. como carotenoides (en las plantas) o ficobilinas (en algas rojas y de cianobacterias) y que absorben luz que la clorofila reflejaría y estos pigmentos accesorios transfieren luego por resonancia su energía de excitación a las moléculas de clorofila. La clorofila canaliza la energía absorbida a centros de reacción fotoquímicos Los pigmentos de las membranas tilacoidales que absorben luz están ordenados en conjuntos o dispositivos funcionales denominados fotosistemas. ha sido absorbida durante el paso de la luz a través del agua. que finalmente cede su electrón a una serie de quinonas (plastoquinona y otras). ya que no utilizan el agua como dador de átomos de hidrógeno sino al sulfuro de hidrógeno (SH 2) o directamente al hidrógeno molecular. con su centro de reacción P680. Por tanto. Esto se explica por dos razones: la primera es que los cloroplastos contienen además de clorofila pigmentos accesorios en cantidades importantes. por ejemplo. como ya hemos dicho. la segunda. Las moléculas de clorofila en las membranas tilacoidales están ligadas a proteínas integrales de membrana (fijadoras de clorofila a o b. sino por la presencia del oxígeno liberado durante la fotosíntesis. Esto constituye un importante mecanismo de adaptación. demostró que dichas bacterias no eran atraídas simplemente por la luz roja o azul. que son capaces de tomar protones del medio. La presencia de pigmentos accesorios permite a las algas utilizar con mayor eficacia la luz verde del espectro. Un complejo transductor consiste en varias moléculas de clorofila combinadas con un complejo proteico que también contiene quinonas fuertemente unidas. El proceso se repite varias veces hasta que se excita la clorofila del centro de reacción. Todas las plantas superiores. que no desprenden oxígeno.BIOLOGÍA / Módulo 10 / Cloroplastos y Fotosíntesis 7 tenían especial atracción por áreas de alta concentración de oxígeno. 3 CAB = chlorophyll a/b binding proteins . ya que permite que las algas vivan en hábitats acuáticos profundos. Las otras moléculas del fotosistema se denominan moléculas recolectoras de luz o antenas. es que los pigmentos al estar insertos en la membrana tilacoidal varían el espectro de luz que pueden absorber respecto a los pigmentos en solución. En los cloroplastos de espinaca cada fotosistema contiene unas 200 moléculas de clorofilas y unas 50 de carotenoides. en comparación. El hecho de que las bacterias no se dirigiesen hacia esas zonas en ausencia de la Spirogyra.

Para ello crearon un complejo de escisión del agua.BIOLOGÍA / Módulo 10 / Cloroplastos y Fotosíntesis 8 Para poder continuar con el proceso. produce un agente oxidante que está en condiciones de tomar cuatro electrones del agua. pero en este caso desde el estroma hacia el . Como consecuencia de la cesión de un electrón. que transfiere los electrones al NADP + para formar NADPH. el que es satisfecho porque una proteína soluble que contiene cobre y que pertenece al fotosistema II (plastocianina) le cede sus electrones. La absorción secuencial de cuatro fotones. pero el gran salto evolutivo lo dieron los antecesores de las cianobacterias. proceso denominado fotólisis del agua (ruptura de la molécula de agua por efecto de la luz). La captura de un fotón por una de las moléculas antena y su traslado hasta el P700 origina una molécula excitada ( P700*) que transfiere su electrón a una serie de aceptores entre quienes se encuentran una proteína hierro-sulfurada (Fe-S). 2 H20 4 H+ + 4 e− + O2 La absorción de luz por el fotosistema I crea un poderoso agente reductor Los procesos fotoquímicos que ocurren en el fotosistema I son similares a los que se han indicado para el fotosistema II. El complejo de los citocromos es muy similar al complejo III de la cadena respiratoria: recibe electrones de una quinona y se los cede a una proteína soluble (la plastocianina. El complejo de los citocromos une los fotosistemas II y I Los electrones almacenados en las quinonas del fotosistema II se transportan al P700 del fotosistema I a través del complejo de los citocromos y de la plastocianina. en lugar del citocromo c de las mitocondrias). generando cuatro protones y una molécula de oxígeno. la molécula de P700 ha quedado con déficit electrónico (P700 +). que contiene cuatro iones manganeso. la ferredoxina (Fd) y finalmente la ferredoxina-NADP+ oxidorreductasa. el producto más abundante que existía. cada uno de los cuales produce la pérdida de un electrón del centro de Mn. que adaptaron el fotosistema II para aprovechar los electrones de agua. también se bombean protones. Ese electrón podría provenir de un gran número de compuestos orgánicos o inorgánicos. el P680 + debe adquirir un electrón para volver a su estado basal. en el cloroplasto. Al igual que en la mitocondria.

La fijación del CO2 tiene lugar en tres fases: 1. Las reacciones que dan lugar a la fijación y reducción del dióxido de carbono forman parte de una ruta cíclica elucidada a principios de la década del ‘50 por Melvin Calvin y a menudo se la denomina ciclo de Calvin 4. La enzima responsable de la síntesis de ATP en los cloroplastos es un complejo muy similar al que opera en las mitocondrias: una proteína transmembrana homóloga a la mitocondrial que permite el pasaje de protones y un complejo de proteína periférica también homóloga a la de las mitocondrias. con lo que la concentración de protones interna es 3000 veces superior a la del estroma. generando una importante fuerza motriz para la síntesis de ATP. Fijación del CO2 en una unión orgánica. lograda a través de la condensación de seis moléculas de dióxido de carbono con otras tantas de una pentosa. o simplemente fotofosforilación. ubicada hacia el espacio estromático. la ribulosa-difosfato. formando seis moléculas de un intermediario inestable que se descompone en 12 moléculas de 3-fosfoglicerato 4 Melvin Calvin (1918-1997) recibió el Premio Nobel en 1961 por su aporte al conocimiento de la fotosíntesis de hidratos de carbono . A diferencia de lo que ocurre con respiración mitocondrial. la entrada de un número reducido de protones tiene un efecto pronunciado. para distinguirla de la fosforilación oxidativa que se produce durante la respiración mitocondrial. Dado que este espacio es pequeño. proceso al que se denominó fosforilación fotosintética. pero se estima que por cada par de electrones transportados se forman una o dos moléculas de ATP. no está bien establecida la estequiometría del proceso. se generaba ATP. proceso que se denomina fijación del CO2 o fijación del carbono. Acoplamiento de la síntesis de ATP al flujo de electrones impulsado por la luz En 1954 Arnon descubrió que si se añadían ADP y fosfato inorgánico a la reacción de Hill. que permite la síntesis de ATP a expensas de ADP + Pi. con lo que tanto la orientación de la ATP sintasa como el sentido de paso de los protones son opuestos a los de las mitocondrias. Síntesis fotosintética de glúcidos Las plantas verdes contienen en sus cloroplastos una maquinaria enzimática única para catalizar la conversión del CO2 en compuestos orgánicos sencillos (reducidos). que alcanza a 3 unidades de pH (pH 8 en el estroma y pH 5 en el espacio tilacoidal).BIOLOGÍA / Módulo 10 / Cloroplastos y Fotosíntesis 9 interior del espacio tilacoidal.

De ellas. Fase 1. Regeneración de la pentosa difosfatada.5-bisfostato y la rotura del intermedio inestable de seis carbonos que se forma. dos moléculas se utilizan en la síntesis de una molécula de glucosa-fosfato que podrán utilizarse luego en la síntesis de almidón. 3. Conversión de 3-fosfoglicerato en gliceraldehído-3-fosfato Ocurre en dos pasos que básicamente significa el proceso inverso de la glucólisis. generando dos moléculas de 3fosfoglicerato. La enzima cataliza la incorporación del CO 2 a la ribulosa-1. Fijación del CO2 y conversión en 3-fosfoglicerato. De este modo el proceso cíclico permite la conversión continua de CO 2 en triosas y hexosas fosfato. en . Es la enzima más abundante de la biosfera. En el primer paso el 3fosfoglicerato es convertido a 1. lo que hace un total de 560 kDa.3-bisfosfoglicerato por la quinasa correspondiente a expensas del ATP. Reducción del 3-fosfoglicerato a gliceraldehído-3-fosfato . Diez de las doce moléculas de gliceraldehído-3-fosfato se utilizan para la regeneración de las 6 moléculas de ribulosa-difosfato. Está localizada en el estroma del cloroplasto. La diferencia estriba en que el cofactor necesario para la reducción es el NADPH y no el NADH.5-bisfosfato carboxilasa oxidasa (rubisco). El poder reductor (NADPH) generado en las reacciones luminosas se utiliza para reducir las 12 moléculas de 3-fosfoglicerato a gliceraldehído-3fosfato.BIOLOGÍA / Módulo 10 / Cloroplastos y Fotosíntesis 10 2. donde constituye alrededor del 50% de la proteína total del cloroplasto. Está constituida por ocho subunidades grandes (56 kDa c/u) y ocho subunidades pequeñas (14 kDa c/u). Fase 2. La enzima que cataliza la incorporación del CO 2 en forma orgánica es la ribulosa-1.

Fotorrespiración La rubisco no es específica para el CO 2.5difosfato con otras tantas de CO 2 para dar un intermedio inestable (18 carbonos) que se descompone dando lugar a 12 moléculas de 3-fosfoglicerato.5-bisfosfato a partir de triosas fosfato Dado que la primera reacción de fijación del carbono consiste en la unión del dióxido de carbono a una pentosa difosfatada (la ribulosa-difosfato).BIOLOGÍA / Módulo 10 / Cloroplastos y Fotosíntesis 11 el segundo la deshidrogenasa que requiere NADPH reduce al 1. 5. Para ello será necesario que se condensen 6 de ribulosa-1. Regeneración de la ribulosa-1. 4. El problema es que la condensación de la ribulosa--difosfato con el oxígeno no permite la . por lo que se consumen 6 ATP adicionales para pasar la ribulosa-5-fosfato a ribulosa1. 6 y 7 carbonos en un proceso que convierte triosas (10 moléculas de gliceraldehído fosfato) en pentosas (6 moléculas de ribulosa 1. La glucosa-6fosfato producida es convertida por la fosfoglucomutasa en glucosa-1-fosfato.3-bisfosfoglicerato a gliceraldehido-3fosfato con producción de fosfato inorgánico. ya que el O2 compite con éste por el sitio activo de la enzima. El destino del fosfoglicerato es variado: a) la mayor parte de él se recicla para regenerar la pentosa fosfato que da inicio al proceso. La fuente de ATP y NADPH son las reacciones luminosas ocurridas en el tilacoide. se debe regenerar ésta constantemente para que el flujo de CO2 a glúcidos sea continuo. b) puede convertirse en hexosa fosfato y dar lugar a la síntesis de almidón. hasta llegar a regenerar las 6 moléculas de ribulosa-difosfato: a) 4 gliceraldehído fosfato (C3) 2 fructosa-fosfato (C6) 2 eritrosa-fosfato (C4) y 2 xilulosa-fosfato (C5) 2 sedoheptulosa-fosfato (C7) 2 xilulosa-fosfato (C5)+ 2 ribosa-fosfato (C5) b) 2 gliceraldehído fosfato (C3) + 2 fructosa-fosfato (C6) c) 2 gliceraldehído fosfato (C3) + 2 eritrosa-fosfato (C4) d) 2 gliceraldehído fosfato (C3) + 2 sedoheptulosa-fosfato (C7) De este modo se utilizaron las 10 moléculas de gliceraldehído-fosfato para generar las 6 moléculas de pentosa requeridas (las 4 xilulosas fosfato y las 2 ribosas fosfato son llevadas a 6 ribulosa fosfato por isomerasas específicas) Cada glucosa fosfato sintetizada a partir de CO 2 y H2O cuesta 12 NADPH y 18 ATP El resultado neto del ciclo de Calvin es la conversión de seis moléculas de dióxido de carbono y una de fosfato en una de glucosa-6-fosfato. Dos de las doce moléculas de gliceraldehído-3-fosfato son el resultado neto del proceso .3-difosfoglicerato con el consumo de 12 ATP y luego se utilizan 12 NADPH para obtener finalmente 12 moléculas de gliceraldehído-3-fosfato. por lo que también cesa la fijación del CO 2 (de allí el error de denominar “reacciones oscuras” a las reacciones de fijación del CO 2). En la oscuridad cesa la producción de ATP y NADPH. Las 10 moléculas de gliceraldehído fosfato recorren el siguiente camino. Falta ahora regenerar las seis moléculas iniciales. quizás debido a que gran parte de la evolución tuvo lugar antes de que el oxígeno fuese un componente importante de la atmósfera. Para ello se forman intermedios de 3. Estas 12 moléculas de 3-fosfoglicerato se reducen a 12 moléculas de 1. que como almidón primario se conserva en el cloroplasto y c) puede abandonar el cloroplasto y dar lugar a la formación de sacarosa o degradarse mediante la vía glicolítica con producción de energía. las otras diez se reordenan para formar 6 moléculas de ribulosa-5-fosfato. material de partida para la síntesis del almidón por las fosforilasas.5-difosfato. Aparentemente la evolución de la rubisco produjo un sitio activo incapaz de discriminar bien entre ambos sustratos. Fase 3.5difosfato).

dando un claro significado funcional a la diferencia anatómica antes mencionada. que típicamente crecen en condiciones de altas intensidades luminosas y temperatura. pero el proceso es energéticamente desfavorable. en la que el mesófilo (tejido fotosintético) adopta una disposición “en corona” (de allí el nombre de estructura Kranz. El rendimiento de los cultivos de plantas C 4 es dos o tres veces más alto que el de plantas C3. son capaces de fijar dióxido de carbono muy eficientemente mediante la formación intermedia de un compuesto de cuatro carbonos. se lleva a cabo con gran eficiencia. porque el principal producto de la fijación del dióxido de carbono es un compuesto de tres carbonos. el 3-fosfoglicerato. en alemán) que rodea a las células de la vaina del haz (que a su vez rodean al tejido conductor) y que a diferencia de lo que ocurre en las plantas C 3 son muy ricas en cloroplastos. ni siquiera en presencia de las intensidades de luz más elevadas de la naturaleza. el abastecimiento de dióxido de carbono disminuye y en las plantas C3 la fotosíntesis disminuye de modo considerable. Si este mecanismo pudiera incorporarse por medios genéticos a otras . los cuales se abren y cierran en respuesta a factores como el contenido de agua y la intensidad de la luz. la fotorrespiración es un derroche de energía y puede llegar a inhibir la producción de biomasa hasta en un 50%. y por ende el crecimiento de la planta. Cuando los estomas se cierran. Esto ha llevado a que muchas plantas.BIOLOGÍA / Módulo 10 / Cloroplastos y Fotosíntesis 12 fijación de carbono. Entre las plantas agresivas y de crecimiento rápido que utilizan la vía C4 se encuentran la caña de azúcar. Las plantas C4. la fotosíntesis. como en la respiración (de ahí el nombre de fotorrespiración). Algunas plantas tienen un mecanismo que impide la fotorrespiración. el oxalacetato. el sorgo y la gramilla. el maíz. dos moléculas de glicolato (en total 4 carbonos) son reconvertidas en 3-fosfoglicerato y dióxido de carbono. Las reacciones de la vía C 4 incrementan la fijación de dióxido de carbono. peroxisoma y mitocondria) y se produce dióxido de carbono. llamadas plantas C4. especialmente de climas cálidos. de manera que aún en circunstancias adversas. alta velocidad de crecimiento. A través de un proceso en el que intervienen tres organelos (el cloroplasto. La característica esencial de la ruta C 4 es que concentra el dióxido de carbono en la célula. Para ello han modificado su estructura anatómica. Plantas C 3 y C4 Se dice que la mayor parte de las plantas son plantas C 3. Si bien la fijación del CO 2 es predominante en relación a la fijación del O 2 (alrededor de tres veces). De hecho. pero primero incorporan el dióxido de carbono en el oxalacetato. Algunas plantas. hayan desarrollado adaptaciones como las que se indican a continuación. baja o nula velocidad de fotorrespiración y baja velocidad de pérdida de agua. una de las principales diferencias entre las plantas C3 y C4 es que estas últimas no se saturan. En el proceso total se consume oxígeno en los tres compartimientos subcelulares (cloroplasto. El ciclo de Calvin se realiza en las células de estas vainas y las reacciones de la vía C4 se llevan a cabo en las células del mesófilo. El dióxido de carbono entra en la hoja a través de pequeños poros llamados estomas. sino que se forma un intermediario inestable oxigenado que se descompone en una molécula de 3-fosfoglicerato y otra de fosfoglicolato (de dos carbonos). el peroxisoma y la mitocondria. “corona”. De todos modos estas plantas utilizan el ciclo de Calvin para producir carbohidratos. tienen alta velocidad fotosintética.

edición inglesa.M. ¿Por qué se dice que es incorrecta la denominación “reacciones oscuras” para referirse a las reacciones de fijación del dióxido de carbono? 11. ¿El hecho de contar con un ADN circular y ribosomas del tipo procariote proporciona algún indicio sobre el origen de los cloroplastos? 4. ¿Cuál es la importancia de los pigmentos fotosintéticos? ¿Podría tener lugar la fotosíntesis sin ellos? 6.W. Roberts y P. ¿La fotorrespiración fue simultánea con la fotosíntesis o apareció posteriormente durante el curso de la evolución? Fundamente su respuesta 13. G. Raff. S. Cuando una célula fotosintética se divide ¿los cloroplastos existentes se reparten entre las células hijas? ¿se reduce el número de cloroplastos en cada división celular? 5. Bray. A.BIOLOGÍA / Módulo 10 / Cloroplastos y Fotosíntesis 13 especies vegetales. Cox (2001) "Lehninger Principios de Bioquímica". ¿Qué es lo que se pretende indicar cuando se habla de “espectro de acción de la fotosíntesis”? 7. ¿Qué es lo que demuestra la experiencia de Hill? 9.. DARNELL. (2002). ZIPURSKY. “Essential Cell Biology”. y M. 2 nd edition. CUESTIONARIO 1. J. de modo que el ciclo C 3 se verifique ahí. Hopkin. MATSUDAIRA.fosfato carboxilasa oxidasa. K. K. ¿Cuál es la razón por la que las plantas “C4” son más eficientes que las plantas “C3”? 15. enzima responsable de la fijación del dióxido de carbono)? 14. ORIANS & H. La Ciencia de la Biología”. 2001). ¿Qué analogía puede encontrar entre la cadena de transporte electrónico de la cadena respiratoria mitocondrial y los fotosistemas de los tilacoides cloroplásticos? 12. (traducido de la 2ª edición inglesa. BERK. Walter (2003). H. El cometido del ciclo C4 es simplemente incrementar la concentración de dióxido de carbono dentro de las células de la vaina. Las cianobacterias son procariotes y. Garland Science. COOPER. P.. BIBLIOGRAFIA Alberts. Taylor & Francis Group. ¿Cuál es el resultado de las reacciones luminosas y en qué se utilizan los productos obtenidos? 10. (versión española de la 3a. 2002. New York & London. Lewis. LODISH. La operación del ciclo C 4 sirve para incrementar la concentración de dióxido de carbono dentro de las células de la vaina del haz unas 10 a 60 veces en comparación con la de las células de las plantas que sólo tienen la vía C 3. Worth Publishers. Johnson. D. Engelmann realizó una experiencia iluminando los filamentos del alga filamentosa Spirogyra con las diferentes radiaciones que componen el espectro visible.L. 2000). ¿Qué tipo de pigmentos se extrajeron en el trabajo práctico y mediante qué técnica se logra separarlos? .M.H. ¿cómo es posible que se los considere organismos fotosintéticos? 2. G.. K. ¿Existe alguna relación entre la fotorrespiración y la especificidad de sustrato de la rubisco ( ribulosabis. ¿Existe alguna relación entre la estructura de las hojas de las plantas “C4” y el tipo de fotosíntesis que realizan? 16. M. España.L.C. BALTIMORE & J. en presencia de bacterias aerobias.A. 2ª edición. Editorial Médica Panameicana (traducido de la 6ª edición inglesa. ¿Qué ocurre cuando se expone a la luz una suspensión de cloroplastos activos en presencia de diclorofenolindofenol (DPIP)? ¿Qué ocurre si en el mismo tubo se ha adicionado un inhibidor de la reacción de Hill? 17. A. SADAVA.L. S.. ¿El ADN que se encuentra dentro de los cloroplastos es realmente funcional o se trata de un resabio evolutivo? 3. Nelson D. La Célula. New York). Marbán Libros. Edición. HELLER (2003) “Vida. Biología Celular y Molecular. D. ¿Cuál fue el objetivo de la experiencia y cómo interpretó los resultados obtenidos? 8. Ediciones Omega S. PURVES. D. se podría incrementar de modo importante la producción de alimento en algunas regiones del mundo. B. Editorial Médica Panamericana. carecen de cloroplastos. en consecuencia. 6ª.

BIOLOGÍA / Módulo 10 / Cloroplastos y Fotosíntesis 14 18. ¿Qué sustancias acumulan los amiloplastos? .

inhibidor de la fotosíntesis y calor) sobre la reacción. • Filtrar el triturado a través de gasa para eliminar restos vegetales groseros. Como aceptor final de los electrones de la fotólisis del agua se empleará un oxidante artificial (2.5 M. el que en su forma oxidada es azul y en su forma reducida es incolora. 2 DPIPH2 + O2 . eliminar los pecíolos y la nervadura central y cortarlas en pequeños trozos. I. FUNDAMENTO Se conoce como reacción de Hill a la reacción fotoquímica en la que los electrones provenientes de la fotólisis del agua producen la reducción de un oxidante natural (NADP +) o artificial (2. 3. Se evaluará el efecto de diferentes factores (oscuridad. • Observe la morfología de cloroplastos y amiloplastos en células vegetales.). sales férricas. luz. Podrá observarse además la formación de burbujas como consecuencia del oxígeno liberado en la reacción. así como todos los demás pasos en los que se utilice la suspensión de cloroplastos. Triturar durante 2 a 3 minutos hasta lograr un extractivo de color verde oscuro. Amiloplastos de tubérculos de papa observados con y sin agregado de solución diluida de Lugol. • En un mortero colocado en baño de hielo poner las hojas cortadas junto con una cucharadita de arena (previamente lavada) y 50 ml de solución fría de sacarosa 0. Este procedimiento. En el trabajo práctico se pondrá de manifiesto la reacción de Hill que tiene lugar en los cloroplastos. Para ello se utilizará DPIP como oxidante artificial. 3.BIOLOGÍA / Módulo 10 / Cloroplastos y Fotosíntesis 15 Módulo 10.6diclorofenolindofenol. 1. Cloroplastos en forma de cinta en el alga verde filamentosa Spirogyra 2. Cloroplastos en células del mesófilo adheridas a la epidermis foliar. • Efectúe la extracción y separación de pigmentos fotosintéticos de hojas. OBSERVACIONES MICROSCOPICAS OBJETIVO Las observaciones indicadas tienen como objetivo poder constatar diferencias en la morfología y distribución de los plástidos según el material que se analice. REACCION DE HILL OBJETIVO El objetivo de la experiencia es comprobar la generación de poder reductor durante la etapa lumínica de la fotosíntesis. etc. cloroplastos 2 DPIP + 2H2O METODOLOGÍA DEL ENSAYO Aislamiento de cloroplastos: • Utilizar 8 hojas medianas de espinaca (deben estar bien verdes y turgentes). DPIP). Cloroplastos en corte transversal de hoja de pera. observados en desgarrado de hojas de hiedra.6-diclorofenolindofenol. TRABAJO EXPERIMENTAL OBJETIVOS GENERALES Que el alumno: • Verifique la existencia de reacciones fotodependientes (luminosas) en los cloroplastos. FOTOSINTESIS. II. deben realizarse en baño de hielo y con soluciones frías para conservar la estructura de los organoides de interés.

• Agregar al extractivo acetónico obtenido 1 ml de hexano y mezclar bien.1 M de pH 7 Inhibidor Suspensión A Suspensión B DPIP Luz Tubo 1 Tubo 2 Tubo 3 (*) Tubo 4 7ml 7ml 7ml 7ml + 1ml 1ml 1ml 1ml 6 gotas 6 gotas 6 gotas 6 gotas + + + Tubo 5 7ml 1ml + (*) El Tubo 3 debe estar recubierto con papel de aluminio antes de colocar los reactivos d) Colocar cada uno de los reactivos en el orden listado. para ser utilizados de acuerdo al protocolo siguiente: Buffer fosfatos 0. • Colectar los sobrenadantes y centrifugarlos durante 10 minutos a 3000 rpm. Experiencias a realizar: a) Colocar una gota de la suspensión A entre porta y cubreobjetos y observar al microscopio. g) Observar si se produjeron cambios de coloración. tanto hidrosolubles como liposolubles. . • Filtrar por papel el extracto resultante a un tubo de ensayo grande o probeta. Cortar en tiras finas una hoja mediana de espinaca. b) Tomar 3 ml de suspensión A y calentar hasta ebullición durante 2 minutos ( suspensión B) c) Rotular cinco tubos (números 1 a 5). El agregado de hexano y luego agua al extractivo nos permite separar por partición los pigmentos liposolubles en la capa superior de hexano. Descartar los sobrenadantes y resuspender suavemente los sedimentos que contienen los cloroplastos en 3 ml de buffer fosfatos 0. Para tapar se puede emplear un trocito de polietileno. La mayor parte de los cloroplastos quedarán en suspensión en el sobrenadante. • Incorporar al mortero una cucharadita de arena lavada. separar cromatográficamente y diferenciar distintos pigmentos fotosintéticos liposolubles presentes en células vegetales. III. Triturar y macerar con ayuda del pilón el material vegetal durante 5 minutos. Por cromatografía de adsorción en capa fina se logra la separación de las clorofilas (a y b) y los distintos tipos de pigmentos carotenoides (carotenos y xantofilas). dado que cada una de estas sustancias presenta diferente polaridad. FUNDAMENTO La acetona permite la extracción de la totalidad de los pigmentos vegetales.1 M de pH 7 frío. f) Para exponer los tubos a la luz colocar la gradilla frente a una lámpara de 75 w durante 10 minutos.BIOLOGÍA / Módulo 10 / Cloroplastos y Fotosíntesis 16 • Centrifugar el filtrado en 4 tubos durante 5 minutos a 2000 rpm para eliminar el material celulósico. EXTRACCION DE PIGMENTOS FOLIARES OBJETIVO Se trata de extraer. colocando las tiras en acetona a medida que son cortadas. e) Mezclar bien el contenido de los tubos por inversión de los mismos 2 veces. reponiendo la acetona en caso en que se evapore en exceso. Reunir las suspensiones de cloroplastos en un único tubo (suspensión A) mantenido en frío hasta el momento de usar. usando una pipeta Pasteur. METODOLOGÍA DEL ENSAYO a) Extracción de pigmentos liposolubles • Colocar en un mortero 20 ml de acetona. manteniendo los tubos en baño de hielo.

BIOLOGÍA / Módulo 10 / Cloroplastos y Fotosíntesis 17 • Adicionar 40 ml de agua a la mezcla hexano-acetona. • Introducir la placa sembrada dentro de la cuba cromatográfica. el que estará situado cerca del borde inferior de la placa. taparla y dejar ascender el solvente hasta que el frente del mismo esté a 0. pero a una altura tal que no quede sumergido al introducirlo en la cuba. El solvente debe evaporarse luego del agregado de cada gota. que constituye la muestra para las cromatografías. • Empleando una pipeta Pasteur con tetina separar la fase superior. • Colocar 3 gotas del extractivo en el punto de siembra.3 cm del borde superior. Nota: las placas deben activarse en estufa durante 1 hora a 110 oC y luego mantenerse en desecador antes de ser utilizadas. mezclar con suavidad para no emulsionar y dejar separar las dos fases que se han formado. b) Cromatografía en capa fina Solventes hexano hexano-acetona (80:20) acetona Siembra y desarrollo de la cromatografía • Colocar 2 ml de solvente de desarrollo en el frasco tipo Borrel que servirá de pequeña cuba cromatográfica. Esta muestra debe estar totalmente exenta de agua (no opalescente). la que se recibe en un tubo de Kahn. • Comparar los cromatogramas obtenidos con los distintos solventes de desarrollo a los efectos de seleccionar el que permita obtener una mejor resolución • Analizar los resultados obtenidos. .