EXTRACCIN Y CROMATOGRAFA EN CAPA DELGADA.

Alternanthera dentata
Jaramillo, Nicomedes1; Gutirrez, Luisa2; Pitti, Aileen3 Curso QM 460, Escuela de Qumica. Universidad Autnoma de Chiriqu 1 4-748-1611, 2 4-747-964, 3 4-746-2115, 16 de septiembre de 2013. Resumen Alternanthera dentata perteneciente la familia Amaranthacea, que generalmente es una plante vertical que crece formando montculos de follajes de 12 a 30 pulgadas de altura, con hojas de forma linear-lanceoladas a ovadas con forma dentada. Los extractos acuosos de hojas de la planta se encuentran a ser de color rojo a purpura, se ha encontrado que posee antocianinas por tanto este color del extracto puede variar con cambios de pH y se ha utilizado como indicador de neutralizacin. (Nair Shyama, P. Sheetal 2011) Luego de un pre-tratamiento de secado en un horno durante una semana a aproximadamente 60C, la muestra de A. dentata posee un % de humedad 68,04% promedio, con un extracto de savia que mostraba un pH de 4, 0,9 Brix obtenidos de 3,5 gr de hojas secas a 29,0 C y con un porcentaje de ceniza de 17,95%. Se realiz una extraccin acido-base a la muestra, tomando como solvente orgnico dicloroetano, las fracciones obtenidas fueron inyectas en una placas para CCD, y almacenadas para a posteriori pruebas. Palabras Claves: Alternanthera, dentata, Humedad, Cenizas, brix, cromatografa, extraccin Marco Terico Alternanthera dentata es una planta que se cultiva por su follaje de color prpura oscuro, y se puede utilizar como un bello contraste follaje contra otras plantas en camas menos formales y fronteras de la flor, el extracto de las hojas se puede utilizar como un indicador natural en titulaciones de neutralizacin por la presencia de antocianinas que varan segn el pH, tambin poseen un color rojo-purpura su extracto acuoso (Nair Shyama, P. Sheetal 2011) Posee propiedades antiinflamatorias y de efecto analgsico (Pizziolo, Raslan, Jamal, Silveira 2006), originaria de las Antillas y Brasil, A. dentata es una planta generalmente vertical que forma tpicamente difusin montculos de follaje de 12 a 30 "de altura.

Obtenida: http://garden-plants-in-thailand.de La tcnica empleada, Extraccin, se puede definir segn Galagovsky (1999) como la separacin de un componente (del seno de la mezcla), por la accin de un solvente que lo disuelva selectivamente y en este caso aprovechando la situacin de reacciones reversibles el utilizar una extraccin tipo AcidoBase donde se realiza un tipo de lavado cuando se extrae una impureza, permaneciendo el compuesto deseado en su fase original. Materiales y Reactivos Materiales. Cristalera. Instrumentos Balanza analtica Crisol con tapa Esptula Extractor de savia por presin Goteros

GPS Horno Mortero y pistilo Mufla Percolador Vasos de precipitados

HCl

NaOH

Reactivos Etanol 96%

NaHCO3 MgSO4 Hexano

Lquido incoloro, olor caracterstico y penetrante. Disolvente, inflamable, voltil, irritante a las vas respiratorias y ojos, en altas dosis produce somnolencia y trastornos al sistema nervioso central. Dicloroetano Liquido incoloro, olor caracterstico, disolvente, inflamable, voltil, toxico muy fuerte (cancergeno, mutagenicos, teratgeno), nocivo, irritante. Fase Experimental

Propanol

Liquido incoloro, voltil, olor penetrante, corrosivo, irritante. Causa problemas a la dermis y tracto respiratorio. Slido, incoloro, inodoro, toxico, nocivo, sustancia higroscpica, corrosiva en solucin. Polvo, blanco, inodoro, toxicidad mnima. Slido, incoloro, inodoro, exento de cualquier toxicidad. Liquido incoloro, disolvente, olor penetrante, irritante a la piel, inflamable, voltil. Liquido incoloro, disolvente, olor penetrante, irritante a la piel, irritacin al sistema respiratorio, nocivo si es ingerido, inflamable, voltil.

EXTRACCIN, CROMATOGRAFA CD Secado de muestra, % Humedad

Horno a 60C, una semana

Extraccin AcidoBase

Ceniza

Extraccin Hidroalcoholica

Extraccin Acuosa

Guardar Fracciones e inyectar CCD

Hojas en mufla a 600C. 3 horas

Maceracin, Agua/etanol

Maceracin con Agua

Evaporar solvente Determinar %

Determinar BRIX

Espectro VIS

Resultados y Clculos Cuadro 1. Clasificacin taxonmica Nombre cientfico Alternanthera dentata Nombre Comn Familia Amaranthaceae Gnero Alternanthera Localidad Parque Botnico de la UNACHI

Hbitat Fecha Condiciones de recoleccin

Tropical hmedo 21 de agosto de 2013, 1:46 p.m. Humedad Relativa: 74 %, Parcialmente Soleado Norte 0826.040 Altura 32 metros

Fig1. Planta de estudio. Alternanthera dentata

Cuadro 2. Determinacin de Materia seca total Muestra Peso del sobre Peso del sobre Peso de la de peridico (g) de peridico + muestra (g) muestra (g) 1 10,12 74,30 64,30 Cuadro 3. Clculos para materia seca total Muestra % de materia seca total y % de humedad.

Peso del sobre de peridico + muestra a 60C 7 das(g) 30,67

Peso de la muestra a 60C 7 das (g). 20,55

Fig.2 Espectros VIS. Picos

Cuadro 4. Determinacin de cenizas en hojas (1,0035 g) Muestra Peso del crisol (g) Peso del crisol + Peso del crisol muestra (g) muestra a 600C. (g) 1 23,1905 24,1940 23,3706

+ Peso de la muestra a 600C. (g) 0,1801 17,95%

Cuadro 5. Clculos para % de cenizas en muestras de hojas % de Cenizas=Peso de muestra a 600C/ Peso inicial de la muestra *100. % de Cenizas=0,1801 g/ 1,0035 g *100 =17,95% Cuadro 6. Extraccin Hidroalcohlica Masa Utilizada: 2,34 g Volumen: 50 mL Vaso Qumico Vaco: 40,05 g Vaso Qumico, Solvente Evaporado: 41,15 g Cuadro 7. Extraccin Acuosa Masa Utilizada: 3,50 g mL Obtenidos: 20 mL Brix: 1,0 a 29,0C 0,9 a 29,0C 0,8 a 29,0C pH: 4 Absorbancias: 678 nm 679 nm 680 nm Discusin de resultados A. Secado. La muestra se almaceno en un sobre hecho de hojas de peridico con pequeos orificios para facilitar el secado de la misma, en el horno de la Escuela de Biologa durante una semana, donde la temperatura se aproxima a mantenerse constante alrededor de los 60C, lo que promueve la evaporacin del agua y evita la descomposicin de cualquier otra sustancia o compuesto por accin de secado a altas temperaturas. El porcentaje calculado fue de 68,04 % que en comparacin con un 83,96% a 105C, es clara la disminucin, lo

que indica que la determinacin a 105C pudo haber prdida de peso por descomposicin y evaporacin de componentes. B. Extraccin Acido-Base. Basada en reacciones reversibles que pueden sufrir compuestos orgnicos se es posible separar a partir de una extraccin fracciones que solo contengan cidos carboxlicos, fenoles, bases y compuestos neutros que por medio de pruebas sencillas se es posible afirmar su presencia. Es posible diferenciar entre grupos cidos y

dbilmente cidos, ya que los fenoles se extraen solo con una solucin NaOH, mientras que los cidos orgnicos se pueden extraer con una solucin de NaHCO3, ya que a este pH los fenoles no pasan a fenoxidos, con la excepcin de que contengan grupos atrayentes de electrones como en el caso de los nitro-fenoles. Y por medio de estas reacciones escalonadas separar compuestos de inters. Las fracciones obtenidas fueron almacenadas, para posterior anlisis e inyeccin en placas de cromatografa de capa delgada y el eluyente fue una mezcla de hexanopropanol 2:1. (Galagovsky, 1999) C. Ceniza. Se adecuaron 1 crisol para la determinacin de este punto, midiendo sus pesos secos y con tapa, se utilizaron 1,0035 gramos de muestra, que seran colocados en una mufla a 600C durante dos horas, luego de este tiempo se determin los pesos donde se obtuvo un porcentaje de ceniza 17,95%, los cuales representan el material inorgnico presente en la muestra que quedan despus de la oxidacin completa o incineracin. El porcentaje ha aumentado en comparacin con muestra hmeda, ya que al secar la muestra, se requiere mucha mayor cantidad de materia para obtener un gramo, pero como el porcentaje de ceniza permanece casi constante, al aumentar la cantidad de muestra, aumenta por consiguiente la cantidad de materia inorgnica. D. Extraccin hidroalcohlica. Este tipo de extraccin tiene como funcin principal es extraer de la muestra compuestos que son soluble en alcohol y que en otras circunstancias permaneceran en la matriz intactos si realizara con agua solamente. El extracto obtenido fue de 1,10 gramos luego de evaporar el solvente. Se volvi a diluir y se almaceno para futuras experiencias. La cantidad obtenida luego de evaporar fue

prcticamente el doble comparado con una extraccin con materia hmeda, esto se puede deber al mismo efecto que se vio en la determinacin de ceniza, al no poseer agua la muestra, el alcanzar una determinada masa se requiere de mayor cantidad de muestra. E. Extraccin de Acuosa. Se utiliz una maceracin en mortero con pistilo, utilizando 3,50 gramos de muestra se obtuvieron alrededor de 20 ml, los cuales se utilizaron para obtener pH (4), grados brix 0,9 los cuales representan la concentracin de solidos solubles por medio de un refractmetro, luego se procedi a obtener un espectro VIS de la muestra obteniendo una seal a 678 nm, 679 nm, 680 nm en tres lecturas individuales dando la posibilidad de estar relacionada a las clorofilas, ya que los rangos de absorcin en el espectro visible son bandas comprendidas entre 600-700, pero no se puede confirmar por falta de patrones de referencia. Conclusin Se es posible conseguir separaciones de compuestos orgnicos, utilizando soluciones cidas o alcalinas capaces de convertir dichas sustancias en sales, solubles en agua. El cido clorhdrico diluido se emple en el laboratorio para la extraccin de sustancias bsicas de sus mezclas con otras neutras o cidas, o bien para eliminar impurezas bsicas, el hidrxido de sodio lo utilizamos para extraer un cido carboxlico o un compuesto fenlico de su solucin en un disolvente orgnico (Aileen). Existe cambios muy significativos, al realizar pruebas en muestra hmedas vegetales sin tratar en comparativa con la muestra seca, ejemplo es la variacin en los porcentajes de ceniza. Utilizando

soluciones cidas y alcalinas en el proceso de extraccin para separar ciertos componentes entre las fases acuosa y orgnica para librar los compuestos deseados de las impurezas de cidos inorgnicos solubles en agua. (Nicomedes) Las tcnicas de anlisis a utilizar depende en gran medida de la cantidad de muestras final y el estado de la misma. La tcnica de extraccin es muy adecuada debido al sistema de fcil manejo y permite una separacin de las muestras. El porcentaje obtenido de las muestras resulta de la cantidad adecuada que se requiere para el estudio o anlisis. (Luisa) Bibliografa Virginia Ramos Pizziolo, Dlio Soares Raslan, Claudia Mashrouah Jamal, Damaris Silveira, Antimicrobiana y citotxica actividades de deteccin de algunas plantas medicinales brasileas utilizadas en Governador Valadares distrito Beatriz Gonalves Brasileiro, Revista Brasileira de Cincias Farmacuticas Brazilian Journal of Pharmaceutical Sciences, vol. 42, n. 2, abr. / Junio de 2006. Recuperado el 24 de agosto de 2013; http://www.scielo.br/pdf/rbcf/v42n2/a04v42n2.p df DUYMOVICH, Claudio; ACHEME, Rosana; SESINI, Sandra y MAZZIOTTA, Daniel. Espectrofotmetros y Fotocolormetros: Gua prctica de actualizacin. Acta bioqum. cln. latinoam. [online]. 2005, vol.39, n.4, pp. 529539. ISSN 1851-6114.

MISSOURI BOTANICAL GARDEN. Alternanthera dentata. Recuperado el 24 de agosto de 2013. http://www.missouribotanicalgarden.org/garden s-gardening/your-garden/plant-finder/plantdetails/kc/a484/alternanthera-dentata.aspx Garden plants in thainland. Recuperado el 24 de agosto de 2013. http://garden-plants-inthailand.de/index.php/en/gardens/show-allplants-indatabase/plantitem/plantitemenglish?cid%5B0 %5D=39_Amaranthaceae-Alternantheradentata

Galagovsky, Lydia Raquel Kurman. Qumica orgnica: fundamentos terico-prcticos para el laboratorio. Eudeba, 1999. Pg. 92