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ingredientes antimicrobianos
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Introduccin
En los alimentos se entiende por conservacin el conjunto de las acciones realizadas para mantenerlos con una naturaleza y/o propiedades deseadas el tiempo mximo posible.
La conservacin es la finalidad ms importante del proceso de los alimentos, y constituye la parte central y fundamental de la ciencia y tecnologa alimentaria.
La calidad de un alimento puede ser afectada de manera diversa por procesos fsicos, qumicos, bioqumicos y microbiolgicos. En esta presentacin nos centraremos en posibles alteraciones causadas por microorganismos y en las sustancias que pueden reducirlas y/o prevenirlas.
Los animales y plantas sanas tienen los tejidos estriles. Slo hay microbiota en las superficies o tracto intestinal.
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Antecedentes histricos
La necesidad de conservar alimentos viene como consecuencia del cambio de hbitos del hombre al pasar de nmada a agricultor.
Muchos procedimientos de conservacin fueron desarrollados antes de que se conocieran los microorganismos.
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Tiempos prehistricos: Antiguo Egipto: Antigua Roma: Alrededor de 1400: 1775: 1850-1980:
Sal comn, humo. Vinagre, sal y miel. Dixido de azufre para estabilizar el vino. Aparecen los encurtidos. Hofer recomienda el Brax. Se descubren la accin antimicrobiana del cido brico, cido srbico, cido frmico, cido saliclico, cido benzico, parabens, cido propinico, nisina, natamicina,...
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Olvidndonos de los esfuerzos que tradicionalmente se han hecho para conservar los alimentos, no es hasta el siglo XIX cuando se estudia, la alteracin microbiana, de los alimentos, de manera rigurosa.
Con anterioridad a esta poca, la mayor parte de trabajos e investigacin se orientan hacia el rea mdica, prestndose poca atencin a los alimentos.
Es con Luis Pasteur, en 1857, cuando se establece la era moderna de la microbiologa de los alimentos, al demostrar que son microorganismos los causantes de la alteracin de la leche.
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Los microorganismos que nos podemos encontrar en un alimento, pertenecen fundamentalmente a: - bacterias - hongos
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Morfologa de hongos
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Saccharomyces cerevisiae
21.000
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Bacterias
Acinetobacter Aeromonas Alcaligenes Arcobacter Bacillus Brochotrix Campylobacter Carnobacterium Citrobacter Clostridium Corynebacterium Enterobacter Enterococcus Erwinia Escherichia Flavobacterium Hafnia Kocuria Lactococcus Lactobacilus Leuconostoc Listeria Micrococcus Moraxella Paenibacillus Pantoea Pediococcus Proteus Pseudomonas Psychrobacter Salmonella Serratia Shewanella Shigella Staphylococcus Vagococcus Vibrio Weissella Yersinia
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Mohos y Levaduras
MOHOS Alternaria Aspergillus Aureobasidium Botrytis Byssochlamys Cladosporium Colletotrichum Fusarium Geotrichum Monilia Mucor Penicillium Rhizopus Trichothecium Wallemia Xeromyces
LEVADURAS
Brettanomyces Candida Cryptococcus Debaryomyces Hanseniaspora Issatchenkia Kluyveromyces Pichia Rhodotorula Sacharomyces Schizosacharomyces Torulaspora Trichosporon Zygosaccharomyces
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Durante la fase exponencial cada microorganismo se divide a intervalos constantes, y la poblacin se doblar en el transcurso del tiempo conocido como tiempo de generacin.
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Crecimiento microbiano
64 32 16 8
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Crecimiento microbiano
Nmero de bacterias
16
32
64
Potencia de 2
20
21
22
23
24
25
26
Logaritmo base 2
Logaritmo base 10
0.30
0.60
0.90
1.2
1.5
1.8
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Nt = N0 2n
n=
K=
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Cambios en la composicin del alimento Cambios de tipos microbianos Cambio en el nmero de microorganismos
Velocidad de crecimiento de microorganismos Efectos sinrgicos de los microorganismos Efectos de antagonismo entre microorganismos
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Cl. botulinum Cl. perfringens Staph. aureus Listeria monocytogenes Bacillus sp E. coli Salmonellae B coagulans Bacterias del acido lctico Levaduras y mohos
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aw mnima 0,91 0,88 0,80 0,75 0,65 0,60 0,96 0,95 0,95 0,95 0,96 0,97 0,86 0,62
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Pseudomonas s.p.p E.coli Lactobacillus s.p.p Cl botulinum Cl. perfringens Salmonellae Listeria monocytogenes Staph aureus Bacillus spp Micrococcus sp Levaduras y mohos Levaduras osmfilas y mohos xerfilos
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Clasificacin de los microorganismos de importancia en los alimentos segn sus temperaturas ptimas aproximadas (C)
* Por razones prcticas definidas como la temperatura a la que el tiempo de generacin o duplicacin es mayor de 103 minutos.
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Cl. botulinum Cl. perfringens B. cereus Staph. aureus Bacterias del cido lctico Salmonellae Cl. botulinum E Listeria monocytogenes Micrococcus sp Pseudomonas fluorescens Levaduras y mohos
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Productos crnicos
pH
4,5
7,0
aw
0,8
0,99
0,75
1,00
Eh
-200mv
+200mv
-200mv
+200mv
Temperatura
-15C
+ 85C
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Contaminacin
Materias primas
Medio Ambiente
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Inhibicin Inhibicin
Inactivacin Inactivacin
almacenamiento almacenamiento -Reduccin aw -Reduccin aw -Disminucin de Oxgeno -Disminucin de Oxgeno -Incremento de CO2 -Incremento de CO2 -Acidificacin -Acidificacin -Fermentacin -Fermentacin -Adicin de conservadores -Adicin de conservadores -Congelacin -Congelacin -Recubrimiento de la superficie -Recubrimiento de la superficie -Modificaciones estructurales -Modificaciones estructurales -Modificaciones qumicas -Modificaciones qumicas -Renovacin de gases -Renovacin de gases -Cambios en la fase de -Cambios en la fase de transicin transicin
-Esterilizacin -Esterilizacin
-Pasteurizacin -Pasteurizacin -Radiacin -Radiacin -Por -Porimpulsos impulsoselctricos elctricos -Tratamiento -Tratamientocon conpresin presin -Coccin -Coccin -Freidura -Freidura -Blanqueo -Blanqueo(Blanching) (Blanching)
-Envasado -Envasado
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K=
1 t
ln
z0 zt
K = constante de tasa de muerte t = tiempo zo = n clulas vivas inicialmente zt= n clulas vivas tras el tiempo
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Tambin es frecuente utilizarlos conjuntamente con mtodos fsicos de conservacin (calor, irradiacin, refrigeracin, altas presiones...)
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cidos Srbico y Sorbatos cido Actico, Acetatos y Diacetatos Parabens Nitrato y Nitrito Dixido de Azufre y Sulfitos Pimaricina o Natamicina
E-200, E-202, E-203 E-260, E-261, E-264, E-263 E-214 a E-219 E-249, E-250, E-251, E-252 E-220 a E-228 E-235
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Nitrato y Nitrito
NITRATO Su accin antimicrobiana se dirige exclusivamente hacia las bacterias anaerbicas y se debe fundamentalmente al nitrito que se genera. El nitrato es convertido en nitrito por accin de las bacterias.
NITRITO La accin antimicrobiana se debe al cido nitroso, y a los cidos de nitrgeno producidos a partir del mismo. Su efecto aumenta conforme baja el pH. Inhibe la accin de enzimas bacterianas, como las del sistema de la deshidrogenasa y de la utilizacin de la glucosa.
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Dixido de Azufre
La accin antimicrobiana del dixido de azufre se basa esencialmente en la inhibicin de las reacciones catalizadas enzimticamente. Su efecto inhibitorio es muy importante en enzimas con grupos SH. Tambin inhibe las reacciones enzimticas reaccionando con los producto finales e intermedios. En carne fresca y productos crnicos inhibe el desarrollo de bacterias. Tambin estabiliza el color de la carne y en cierta medida pueda dar, al consumidor, una impresin de frescura en la carne.
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cidos Orgnicos
El pH y el contenido en cidos orgnicos de un alimento son dos factores que determinan, no slo los microorganismos que pueden sobrevivir durante el perodo de almacenamiento sino tambin su capacidad para alterar dicho alimento.
A grosso modo tanto los microorganismos capaces de alterar un alimento como los de producir intoxicaciones, se desarrollan en un rango de pH comprendido entre 4,0 y 8,0 si bien mohos y levaduras pueden crecer y desarrollarse a un pH ms bajo.
El pH de un alimento puede bajarse artificialmente aadiendo cantidades significativas de cido (actico, ctrico, lctico,...) con el fin de limitar el crecimiento microbiano.
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El efecto combinado de un pH bajo, ms una concentracin ms o menos elevada de un cido dbil, conduce a una acidificacin del citoplasma, usualmente suficiente para restringir el desarrollo microbiano, junto con otros efectos ms especficos en la actividad celular.
Las soluciones cidas contienen concentraciones elevadas de protones, tal que H+ y H3O+. En el caso de cidos fuertes nos encontramos tambin con aniones (Cl-, SO2-,...) y molculas no disociadas en el caso de cidos dbiles. De hecho todo ello puede afectar a las clulas microbianas, bien individualmente, o en combinacin.
Diferenciar, a nivel de efectividad, entre pH y accin de los cidos dbiles es importante. As, mohos y levaduras pueden crecer en pH muy bajos en soluciones de cidos fuertes, pero no en las de cidos dbiles.
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El valor Pka
En solucin los cidos dbiles no estn totalmente disociados en sus iones, sino que hay un equilibrio entre las molculas de cido sin carga, y sus respectivos aniones y cationes.
HA
cido
A + H
Anin
Catin
La proporcin de cido/anin es dependiente del pH, y as a pH bajo, la alta concentracin de protones dar lugar a una mayor proporcin de molculas de cido y a menos aniones. El pKa es el pH al que las concentraciones de cido y anin son iguales. Para varios cidos se asume que slo la parte no disociada tiene capacidad antimicrobiana, de acuerdo a ello en valores de pH elevados, superiores al valor de pKa es de esperar que cualquier accin antimicrobiana sea dbil.
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Solubilidad
La solubilidad de un compuesto orgnico tambin se puede deducir de su coeficiente de reparto y as, o ms hidrofobicidad, menos solubilidad en agua. La solubilidad de los cidos orgnicos varia con el pH, y as a pH ms bajos, menor es la solubilidad. Los problemas que a veces plantea la solubilidad limitada de un compuesto se puede paliar en parte con agitacin mecnica.
Volatilidad
En sistemas experimentales, a veces la ausencia de actividad antimicrobiana detectable puede haber sido causada por la agitacin en un cultivo aerbico con agitacin. Esto sucede de manera particular con productos tales como el metil-acetato.
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Anin
cido
cido
Anin + Protn
pH 4,75 pH 6,50
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La disociacin del cido libera protones. Consecuencias: Disminucin del pHi Inhibicin de la gliclisis Inhibicin transporte activo
Esta teora de los cidos no puede ser aplicada: Para cidos insuficientemente hidrofbicos (succnico, tartrico o ctrico...) Cuando se utilizan a concentraciones bajas Cuando el pH externo es elevado
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Quelacin de metales
La quelacin de metales es un fenmeno propio de todos los cidos orgnicos, si bien a veces con poca afinidad. Los cationes metlicos forman complejos con los aniones cargados negativamente. Estos complejos son prcticamente insolubles y precipitan (por ejemplo: citrato de calcio, lactato de calcio, en vino). La capacidad quelante se mide por la cte. de estabilidad, que es el log. de la cte. de equilibrio, e indica la afinidad del catin metlico por el anin. En los cidos orgnicos, a ms grupos carboxlicos, mas capacidad de quelacin. La quelacin de metales depende de la presencia de la forma aninica, a su vez dependiente del pH.
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Como mecanismo inhibitorio, este se debe a: Eliminacin de iones metlicos del medio. Eliminacin de cationes de la pared/membrana del microorganismo. La eliminacin de iones metlicos de las paredes celulares en bacterias gram negativas, las hace ms sensibles a diferentes antibiticos, QACS, ...
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Estos cidos se difunden de manera libre y rpida en las clulas microbianas, y alcanzan su mxima concentracin en 1 min. (aprox.). Cuando se ha llegado a la mxima acumulacin se establece un flujo en los dos sentidos entre el interior y el exterior celular. En cuanto a la liberacin de protones esta depender de: a) Del valor pKa del cido b) De la concentracin c) Del pH del medio
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Las concentraciones de estos cidos que se requieren para inhibir el crecimiento de microorganismos acostumbran a ser altos, del orden del 1 al 4%, siendo el pH del medio del orden de 3 a 4,5.
As, a modo de ejemplo, se necesita una concentracin del 1% de cido actico, a un pH de 4,0 para inhibir mohos, levaduras y bacterias cido
tolerantes.
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La inhibicin es causada por descenso del pH interno, lo que conduce a su vez a la inhibicin de la respiracin, fermentacin/gliclisis y transporte activo. Todos estos efectos son reversibles, simplemente lavando las clulas. En relacin al pH externo, hay que considerar: 1) 2) Su efecto en la proporcin de cido no disociado. El pH diferencial entre el citoplasmtico y el del medio que determina el grado al que los conservantes se concentran en el citoplasma, lo que determina a su vez la concentracin de protones liberada en el mismo. 3) El pH por si mismo acta directamente sobre el microorganismo.
Tambin, como posible mecanismo del efecto sobre la fase estacionaria (alargndola), se ha propuesto que la bomba de protones H+- ATP asa, es activada a bajo pH.
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Posiblemente estos cidos puedan sustituir la de la membrana de fosfolpidos (fundamentalmente en levaduras), dando lugar a un cambio en la estructura de la misma. Es probable que todos los cidos grasos tengan tres acciones que actan en diferente proporcin ya diferente concentracin segn el tipo de cidos. Estas tres actividades seran: a) Ruptura de la membrana, provocando la muerte. b) Inhibicin del crecimiento por descenso del pH interno. c) Agotamiento energtico, al actuar sobre la membrana celular.
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La contaminacin superficial en productos crnicos tratados por el calor, y posteriormente envasados en atmsfera modificada, es una de las principales causas de la alteracin organolptica (acidificacin, formacin de gas, aparicin de gas, aparicin de lquido,...) que puede sufrir un producto a lo largo de su vida comercial. Dicha contaminacin, previa al proceso de envasado, puede proceder del medio ambiente, de la manipulacin, de la maquinaria y del mtodo de trabajo. En casos extremos dicha contaminacin puede dar lugar a la formacin de biofilms, biopelculas que protegen e incrementan la resistencia de los microorganismos formadores de los mismos, siendo necesario el empleo de conservantes-desinfectantes para
eliminarlos. Si bien de manera no excluyente, entre los gneros bacterianos implicados en esta alteracin podemos considerar los siguientes: Lactobacillus, Pseudomonas, Listeria, Bacillus, Escherichia.
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PHYTOALEXINAS: Se producen como respuesta a una infeccin en la planta. Se conocen unos 200 tipos y actan sobre hongos y bacterias gram-positivas. Ejemplos de thaumatinas... estos productos seran: quitinasas, thioninas, ceamatinas,
CIDOS ORGNICOS. COMPUESTOS FENLICOS: Compuestos caracterizados por uno o ms anillos aromticos, con grupos hidroxilos y diversos grupos funcionales. Se pueden clasificar en tres grupos: a)Fenoles simples y cidos fenlicos (etil-fenol, hidroquinasas...) b)Derivados del cido hidroxicinmico (p-cumrico). c)Flavonoides (catequinas, proantociaminas...) ACEITES ESENCIALES Y SUS COMPONENTES: Mezclas de steres, aldehdos, cetonas y terpenos, timol, cinamaldehdo, eugenol...
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LACTOFERRINA ACTIVADA Acta unindose a la superficie celular tanto en bacterias gram-positivas, como gram-negativas.
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Parabens
Destruccin de la membrana celular Desnaturalizacin de las protenas intracelulares Reacciones competitivas con coenzimas Inhibicin de la absorcin de nutrientes esenciales, tales como la glucosa y aminocidos Su accin antimicrobiana es relativamente independiente del valor del pH del medio
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Bacteriocinas
NISINA
Protena de 34 aminocidos producido por Lactococcus lactis. Acta sobre la membrana citoplasmtica inmediatamente despus de la germinacin de las esporas. No ataca directamente a las esporas, actuando tras el tratamiento trmico Su espectro de accin es relativamente estrecho, actuando exclusivamente sobre bacterias gram-positivas, bacterias lcticas, Bacillus, Clostridium y Listeria.
PEDIOCINA
Producida por cepas del gnero Pediococcus. Acta sobre Clostridios, B. cereus, S. aureus, Listeria y bacterias lcticas.
SAKACINA
Producida los Lactobacillus sake. Acta sobre Listeria, Clostridium, S. aureus y otros gram-positivos.
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Utilizacin de Conservantes
Por regla general no se acostumbra a utilizar un solo conservante, siendo lo usual emplear una mezcla de ellos. Con ello se pretende: Ampliar el espectro de accin Conseguir efectos sinrgicos Reducir la concentracin de conservantes individuales
Tambin es frecuente utilizarlos conjuntamente con mtodos fsicos de conservacin (calor, irradiacin, refrigeracin, altas presiones...)
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Conservacin Multifactorial
BARRERA Reduccin del pH EFECTO PRINCIPAL Fuerza a la clula a gastar energa para expulsar los H+ que se generan en el interior celular. Incremento de H+ en el interior celular y disfuncin de la membrana celular. Se fuerza la osmorregulacin, lo que lleva a la sntesis y acumulacin de solutos compatibles.
Reduccin de O2
Inhibicin del desarrollo de aerobios estrictos, y reduccin en la generacin de energa en los anaerobios facultativos.
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Factores de inhibicin
1) Contaminacin inicial: La ms baja posible. 2) Temperatura de almacenamiento: La ms baja posible. 3) pH: El ms bajo posible. 4) aw : La ms baja posible 5) Oxgeno: La concentracin ms baja posible. 6) Tratamiento trmico: El ms alto posible. 7) Conservantes: Estar presentes los ms idneos, en la concentracin adecuada.
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