UNIVERSIDAD DEL CAUCA

FACULTAD CIENCIAS DE LA SALUD

PROGRAMAS MEDICINA Y ENFERMERIA IV SEMESTRE
ASIGNATURAS: MICROBIOLOGIA Y PARASITOLOGIA BASICO CLINICA Y CUIDADO DE LAS
PERSONAS CON PROCESOS INFECCIOSOS
GUIA ELABORADA POR LILIANA CALDAS ARIAS
DOCENTE DEPARTAMENTO MEDICINA INTERNA
TINCION DE GRAM

METODOLOGIA DE ENSEANZA. Revise y estudie la presente gua para su discusin y
aplicacin en el desarrollo del laboratorio nmero 1 en la unidad de Bacteriologa.

PROPOSITOS EDUCATIVOS
1. Conocer la utilidad de la tincin de Gram como herramienta para el diagnstico
microbiolgico de algunos procesos bacterianos.
2. Conocer el fundamento de la coloracin de Gram.
3. Adquirir conocimientos terico-prcticos sobre la realizacin de esta tcnica de
coloracin.
4. Realizar lecturas microscpicas para identificacin bacteriana preliminar.

UTILIDAD. Ya que por el mtodo de coloracin de Gram, tanto las bacterias patgenas,
oportunistas y las que hacen parte de la flora normal pueden teirse y observadarse, es
importante tener en cuenta el sitio anatmico de donde provienen las muestras clnicas y su
adecuada recoleccin para que la tincin de Gram, constituya una herramienta de utilidad
diagnstica en las infecciones bacterianas.

La tincin de Gram tiene valor diagnstico y puede ser aplicada a diversos y mltiples tipos de
especimenes clnicos como lquidos corporales estriles (LCR), exudados, excreciones (orina),
secreciones (esputo), abscesos y tejidos.
Tambin puede aplicarse a diferentes tipos de materiales de uso hospitalario como catteres y
soluciones para el diagnstico y control de las enfermedades intrahospitalarias.

El uso de la tincin de Gram es LIMITADO en muestras de materia fecal y NO tiene valor en
muestras farngeas como en el caso de faringitis estreptoccica y en muestras nasofarngeas.
La observacin de esta tincin permite encontrar caractersticas como forma (cocos, bacilos,
cocobacilos y espirilos), agrupacin (parejas, racimos, cadenas y empalizadas), y tamao de las
clulas bacterianas a partir tanto de muestras clnicas como de cultivos bacterianos.

En la interpretacin de este mtodo es relevante considerar la presencia de respuesta
leucocitaria o respuesta inflamatoria y otro tipo de clulas del husped como clulas epiteliales,
con el fin de orientar la presencia de infeccin aguda o crnica y en algunos casos permitir la
evaluacin de la calidad de la muestra clnica como sucede con las muestras de esputo.
REACTIVOS. La tincin de Gram utiliza en orden estricto de primero a cuarto los siguientes
reactivos:
1. CRISTAL VIOLETA o violeta de genciana:COLORANTE BASICO
2. LUGOL DE GRAM: MORDIENTE
3. ALCOHOL - ACETONA: DECOLORANTE
4. FUSCINA (SAFRANINA): COLORANTE DE CONTRASTE

FUNDAMENTO. El cristal violeta sirve como colorante bsico unindose a la pared celular
bacteriana, con al ayuda del mordiente que refuerza la unin del colorante.
Las bacterias GRAM POSITIVAS debido a la estructura y composicin bioqumica de su pared
celular retiene el complejo cristal violeta-lugol y an despus del tratamiento con el decolorante
conserva el colorante bsico, por lo que se observan al microscopio de color azul oscuro o
violeta una vez concluida la tcnica de tincin.

Las bacterias GRAM NEGATIVAS pierden el colorante bsico cuando son tratadas con el
decolorante debido a que el alcohol disuelve el contenido lpidico de la pared celular lo que
aumenta la permeabilidad celular, dando como resultado la prdida del complejo cristal violeta-
lugol. Las bacterias decoloradas captan entonces el colorante de contraste, razn por la cual
estas clulas bacterianas se observan al microscopio de color rosado una vez concluida la
tcnica de tincin.

TCNICA
1. Marcar y realizar un extendido delgado de la muestra clnica o de una colonia sobre un
portaobjetos (placa) y dejar secar.
2. Fijar el material a estudio a la placa pasndola 2 o 3 veces por la llama de un mechero
evitando el excesivo calentamiento.
3. Colocar la placa sobre un soporte y cubrirla con cristal violeta durante un minuto.
4. Lavar con agua corriente.
5. Cubrir la placa con lugol de Gram durante un minuto.
6. Lavar con agua corriente.
7. Cubrir la placa con alcohol-acetona durante 5 segundos.
8. Lavar con agua corriente.
9. Cubrir la placa con fuscina ( safranina) durante un minuto.
10. Lavar con agua corriente.
11. Dejar secar al aire
12. Observar al microscopio con aceite de inmersin, objetivo de 100X, condensador
abierto totalmente para que la luz pase y se obtenga buena iluminacin

INFORME DE RESULTADOS. Una tincin de Gram a partir de un espcimen clnico debe
contener la siguiente informacin:
Respuesta leucocitaria y su tipo ya sea PMN o MN (polimorfonuclear o mononuclear
respectivamente) en trminos de escasa moderada o abundante cantidad.
Forma, coloracin y a veces agrupacin bacteriana en trminos de escasa moderada o
abundante cantidad.
En muestras de esputo sirve para evaluar la calidad de la muestra y se deben contar los
PMN y las clulas epiteliales con objetivo de 10X adems de informar los morfotipos
bacterianos.

OBSERVACIN La flora bacteriana observada con la tincin de Gram se informa por gnero y
a veces agrupacin pero no se indica la especie ya que solo la identificacin mediante pruebas
bioqumicas a partir de cultivos permite precisar la especie.

REQUERIMIENTOS DEL ESTUDIANTE
Traer preparado este material para su discusin
Guantes, tapabocas y bata de manga larga,
Jabn y toalla para el secado de manos
Traer Colores: entre otros Azul oscuro y Rosado



ATENCION ESTUDIANTES MEDICINA Y ENFERMERIA:
Para mejorar su aprendizaje en el rea de Bacteriologa Clnica le recomiendo la asistencia
puntual a las clases y laboratorios, usted deber ampliar algunos conceptos de manera
independiente y para lograrlo al finalizar este documento hay unos textos que orientaran su
bsqueda, tambin se le recomienda el uso del diccionario mdico para aclarar algunos
trminos que usted debe dominar.