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MACROINVERTEBRADOS COMO BIOINDICADORES DE ECOSSISTEMAS AQUTICOS CONTAMINADOS POR AGROTXICOS
Darclio Fernandes Baptista Daniel Forsin Buss Mariana Egler

INTRODUO
Em muitas bacias hidrogrficas, a poluio no pontual excede os efeitos gerados por fontes pontuais. Poluio no pontual aquela que atinge o corpo dgua receptor e lanada de forma difusa ou indireta, sendo, portanto, de difcil deteco. Dentre as fontes no pontuais de poluio, a agricultura representa o maior desafio, pois amplamente disseminada no pas, ocupa grandes extenses do territrio e inclui grande variedade de atividades. Vrios trabalhos demonstram que bacias hidrogrficas que percorrem reas agriculturveis so alvos de impactos mltiplos, dentre os quais, contaminao por fertilizantes e agrotxicos, desmatamento e assoreamento. Os principais contaminantes de origem agrcola so os resduos de fertilizantes e os agrotxicos. Esses produtos, quando aplicados sobre os campos de cultivo, podem atingir os corpos dgua, diretamente, atravs da gua da chuva e da irrigao ou, indiretamente, atravs da percolao no solo, chegando aos lenis freticos. Outra forma de contaminao indireta ocorre com a pulverizao de agrotxicos, que podem ser transportados por correntes areas e se depositarem no solo e na gua, distantes das reas onde foram originalmente usados. O transporte atmosfrico tambm ocorre por volatilizao dos compostos aplicados nos cultivos e pela formao de poeira do solo
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contaminado (Cooper, 1993). Portanto, para a melhoria da qualidade da gua dos rios, faz-se necessria uma abordagem que considere a bacia hidrogrfica como unidade de estudo. Os mtodos analticos tradicionais capazes de avaliar agrotxicos organofosforados e carbamatos em gua so realizados por cromatografia gasosa (GC), cromatografia lquida de alta performance (HPLC) ou espectofotometria de massa (MS). Devido aos problemas associados ao uso indiscriminado dos agrotxicos, fundamental que o monitoramento ambiental seja realizado constantemente. No entanto, esses mtodos de anlise exigem mo-de-obra especializada e apresentam alto custo operacional, o que torna invivel sua aplicao em larga escala (Alves, 2000). Alm disso, a poluio ambiental associada ao uso de agrotxicos especialmente difcil de ser avaliada, pois os eventos de contaminao obedecem a uma dinmica espacialmente difusa e temporalmente varivel. O resultado um quadro de contaminao baixa e contnua, que nem sempre captado pelos mtodos de screening qumicos, pois esses registram apenas o instante exato em que foram coletadas as amostras e no acompanham a variao temporal e espacial da contaminao. Desde a dcada de 70, pesquisadores e gestores de recursos hdricos da Europa Ocidental e Amrica do Norte (Cairns Jr. & Pratt, 1993; Armitage & Pardo, 1995) argumentam que as metodologias tradicionais de classificao de guas, baseadas em caractersticas fsicas, qumicas e bacteriolgicas, no so suficientes para atender aos usos mltiplos da gua, sendo particularmente deficientes na avaliao da qualidade esttica, de recreao e ecolgica do ambiente. Outra desvantagem que se as medies qumicas forem feitas longe da fonte poluente, no sero capazes de detectar perturbaes sutis sobre o ecossistema (Rosenberg & Resh, 1993). Para a realizao de avaliaes eficientes, de fundamental importncia a aplicao de anlises integradas da qualidade da gua, unindo as repostas das metodologias tradicionais de avaliao aos aspectos biolgicos do sistema (ver revises em Metcalfe, 1989; Rosenberg & Resh, 1993; Buss et al., 2003). Organismos aquticos vm sendo utilizados no monitoramento ambiental h aproximadamente um sculo e tm como base o conceito de indicadores biolgicos. A premissa bsica do uso de indicadores biolgicos
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para avaliar a qualidade da gua que a presena de uma espcie em nmeros elevados significa que suas necessidades fsicas, qumicas e nutricionais esto sendo supridas. Assim, os organismos refletem a qualidade do ambiente e podem ser utilizados para indicar efeitos especficos ou complexos, sendo particularmente vantajosos por registrarem continuamente as condies ambientais (Johnson, Wiederholm & Rosenberg, 1993). As metodologias de monitoramento biolgico podem ser empregadas como ferramentas de vigilncia, isto , para acompanhamento contnuo das condies dos ecossistemas de maneira a detectar impactos acidentais ou decorrentes da implantao de empreendimentos produtivos. Podem servir ainda como instrumento regulador, sendo utilizadas como prova cientificamente aceita das alteraes ambientais provocadas por aes criminosas. Atualmente, o objetivo dos estudos relacionados avaliao dos impactos em reas agriculturveis desenvolver e aperfeioar metodologias e ferramentas que permitam determinar de forma realista e exeqvel a condio ambiental. Alm disso, deve-se considerar a importncia do tratamento e transmisso da informao a diferentes pblicos, inclusive o leigo. Portanto, um dos desafios tornar os dados cientficos mais facilmente utilizveis por tcnicos, gestores, cientistas, polticos, grupos de interesse (associaes no-governamentais, cooperativas) e pelo pblico em geral.

USO DE INDICADORES BIOLGICOS

Uma vez definido o objetivo do monitoramento, deve-se pensar em selecionar qual o indicador apropriado para atingi-lo. Cairns Jr., Mccormick & Niederlehner (1993) afirmam que basicamente, tudo um indicador de alguma coisa, mas nada um indicador de tudo. A escolha do organismo teste depende da questo que se quer responder. A avaliao da toxicidade, o controle das descargas de efluentes ou o registro de um novo produto qumico requerem a coleta de dados consistentes e comparveis. Assim, um indicador biolgico ideal deve ter as seguintes caractersticas (Johnson, Wiederholm & Rosenberg, 1993: 1) ser taxonomicamente bem definido e facilmente reconhecvel por no-especialistas; 2) apresentar distribuio geogrfica ampla; 3) ser abundante, ou de
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fcil coleta; 4) ter baixa variabilidade gentica e ecolgica; 5) preferencialmente possuir tamanho grande; 6) apresentar baixa mobilidade e longo ciclo de vida; 7) dispor de caractersticas ecolgicas bem conhecidas; e 8) ter possibilidade de uso em estudos em laboratrio. No uso de indicadores, considera-se que a avaliao da qualidade ambiental ser efetuada com as variveis que respondam aos objetivos mais adequadamente, e no com todas aquelas que podem ser medidas. Ao selecionar um indicador e/ou ao construir um ndice, tal como ao adotar um parmetro estatstico, ganha-se clareza e operacionalidade. A necessidade de comunicar os resultados das avaliaes da qualidade ambiental constitui uma exigncia bsica nos processos de gesto ambiental. Um ndice projetado para simplificar a informao sobre fenmenos complexos de forma a melhorar a comunicao. Apesar do desenvolvimento de metodologias de avaliao com diversos organismos, vrios autores afirmam que o grupo de macroinvertebrados bentnicos o mais testado e utilizado, pois so relativamente fceis de coletar e identificar, possuem natureza sedentria (refletindo as condies ambientais locais com preciso), tm um grande nmero de espcies e distribuio ampla (Plafkin et al., 1989; Rosenberg & Resh, 1993; Kerans & Karr, 1994; Armitage & Pardo, 1995; Barbour et al., 1999).

MONITORAMENTO BIOLGICO: de ecossistemas a biomolculas

Indicadores em diferentes nveis de organizao biolgica fornecem informaes complementares, necessrias para a anlise de risco ecolgico. Os impactos da contaminao por agrotxicos nos macroinvertebrados variam de acordo com os tipos de substncias empregadas, com a sua toxicidade e com a estabilidade nos ambientes aquticos. Os efeitos sobre a fauna incluem desde alteraes fisiolgicas em alguns organismos at a morte macia de populaes, afetando toda a estrutura da comunidade (Clements, 2000). Em geral, quanto maior a concentrao de agrotxicos e mais longo o tempo de exposio, maiores as chances dos impactos negativos atingirem nveis superiores de organizao biolgica, como comunidades e ecossistemas. Se um estresse dura tempo suficiente para levar morte uma populao de organismos, afetando as taxas de crescimento e de
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reproduo e impedindo o recrutamento de novas espcies, ela ento capaz de alterar a estrutura da comunidade (Cairns Jr. & Pratt, 1993). Os efeitos dos contaminantes em nveis de organizao biolgica mais baixos (por exemplo, respostas moleculares e bioqumicas) ocorrem mais rapidamente, alm do que a especificidade das respostas e nossa compreenso sobre os efeitos dos contaminantes so geralmente maiores nos nveis mais baixos de organizao (Figura 1). Geralmente, os efeitos em tais nveis podem ser diretamente ligados exposio aos agentes contaminantes. Por exemplo, a presena de resduos qumicos e metablitos um indicador direto da disponibilidade de contaminantes para os organismos. Figura 1 Respostas a contaminantes qumicos nos diferentes nveis de organizao biolgica

Ecossistema

Complexidade, relevncia ecolgica, aplicabilidade

Eutrofizao, produtividade, decomposio,

Especificidade e rapidez de resposta, replicabilidade

Comunidade
Perda de espcies, reduo de riqueza, alteraes taxonmicas e funcionais

Populao
Mortalidade, estrutura gentica, doenas, abundncia, taxas de resistncia e resilincia

Indivduo
Mortalidade, crescimento, ciclo de vida comportamento, metabolismo, fecundidade

Fisiolgico
Respirao, metabolismo, bioenergtica, efeitos teratognicos

Biomolecular
Metalotionena, AChE, P-450, alteraes genticas (DNA e RNA), oncognese

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Apesar da maior compreenso sobre os mecanismos de funcionamento e da maior especificidade efeito-resposta, os efeitos nos nveis mais baixos de organizao tm limitaes. A real significncia ecolgica das respostas bioqumicas geralmente desconhecida. Nveis residuais e metablitos so excelentes indicadores de exposio, mas a ligao direta com os efeitos ecolgicos geralmente tnue (Clements, 2000). Outra limitao que os resultados de experimentos realizados em laboratrio podem ter pequena relevncia para as populaes naturais em campo. Em geral, a proteo integridade ecolgica enfatiza a preservao dos nveis mais altos de organizao biolgica (populaes, comunidades) e, assim, a demonstrao de respostas bioqumicas e fisiolgicas pode no ser suficiente. Portanto, alguns pesquisadores tm argumentado que as respostas em nveis mais altos de organizao medidos em campo so mais relevantes ecologicamente do que os efeitos nos nveis mais baixos (Cairns et al., 1993). Neste trabalho sero apresentadas as propriedades e as respostas de macroinvertebrados aos efeitos do uso de agrotxicos nos dois nveis de organizao biolgica mais utilizados, comunidade e organismo.

Utilizando comunidades como bioindicadores

Os indicadores biolgicos so muito teis devido sua especificidade a certos tipos de impacto j que inmeras espcies so comprovadamente sensveis a um tipo de poluente, mas tolerantes a outros (Washington, 1984). Assim, ndices podem ser criados especificamente para detectar lanamento de agrotxicos, considerando as respostas de diversas espcies da comunidade de macroinvertebrados. Os ndices que tm as comunidades como unidade de estudo so eficientes para o monitoramento rpido de grandes reas, apresentando relativo baixo custo (Watzin & McIntosh, 1999). Sua metodologia baseia-se em pesquisas de campo, analisando as alteraes estruturais e funcionais das comunidades nos sistemas ecolgicos. Sero apresentadas quatro abordagens utilizando ndices biolgicos de comunidade e a aplicao na avaliao de agrotxicos: ndices Biticos, Modelos de Predio de Impacto, Protocolos de Avaliao Rpida e Sistemas Especialistas.
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ndices biticos
A primeira abordagem visando determinao de indicadores biolgicos da qualidade das guas, com bases cientficas, foi feita com bactrias, fungos e protozorios, na Alemanha, por Kolkwitz & Marsson (1909). Esse mtodo ficou conhecido como ndice de saprobidade e enfatizava que a abundncia de organismos nas reas poludas ocorria por caractersticas fisiolgicas e comportamentais que os permitia tolerar estas condies. Assim, localidades onde eram encontrados nmeros elevados desses organismos eram classificadas como poludas. No final da dcada de 60, iniciaram-se esforos conjuntos na Europa para testar a aplicabilidade do ndice de saprobidade. Atualmente, a maioria dos pases europeus utiliza metodologias baseadas na mesma filosofia, sendo chamadas de ndices biticos. Esses ndices consistem em atribuir uma pontuao para cada espcie, baseada em sua tolerncia ao impacto, e o somatrio desses valores determina a qualidade da gua do local. Diversos ndices biticos surgiram e foram testados (ver revises em Metcalfe, 1989; Cairns Jr. & Pratt, 1993), mas um ndice em especial ganhou destaque, o BMWP. Em 1976, um grupo de trabalho foi criado para discutir e sintetizar o conhecimento sobre os ndices na Gr-Bretanha, originando o sistema conhecido por Biological Monitoring Working Party Score System (BMWP). Nos anos subseqentes esse ndice foi revisto e ampliado (Hawkes, 1997), e considera macroinvertebrados identificados no nvel taxonmico de famlia, com valores entre 1 e 10 atribudos com base na sensibilidade a poluentes orgnicos. Famlias sensveis a altos nveis de poluentes recebem valores mais altos enquanto famlias tolerantes recebem valores mais baixos. Quanto maior o somatrio, mais ntegra a localidade. A aplicao do ndice ASPT (Average Score Per Taxon), que a mdia dos valores de cada famlia encontrada (Balloch, Davis & Jones, 1976), tornou o proceeso ainda mais eficiente (Armitage et al., 1983; Walley & Hawkes, 1997). Recentemente, o ndice passou a ser aplicado em um programa nacional, sendo integrado a modelos de predio de impacto (Wright, 1995; Walley & Hawkes, 1996).

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Raven et al. (1998), utilizando o BMWP, avaliaram o impacto do derramamento acidental do inseticida organofosforado (Chlorpyriphos) sobre a fauna de macroinvertebrados no rio Roding em Londres. Com a aplicao do ndice, os gestores foram capazes de avaliar as conseqncias do acidente, realizando o acompanhamento da recuperao da fauna pela recolonizao e comparando os trechos impactados com sees do rio a montante do acidente. Outro exemplo da aplicao de ndices biticos ocorreu na bacia do rio Mills, que abastece boa parte da populao do oeste da Carolina do Norte (Lenat & Crawford, 1994). O programa local de biomonitoramento da qualidade da gua, conduzido h mais de 15 anos pela Agncia Ambiental Estadual, utilizava a fauna de macroinvertebrados e em especial, o ndice EPT ndice que avalia a porcentagem de insetos das ordens Ephemeroptera, Plecoptera e Trichoptera (Barbour et al., 1999). A qualidade da gua era sempre classificada como boa ou excelente, mas surpreendentemente, em agosto de 1994, as amostras dos macroinvertebrados durante o monitoramento de rotina apresentaram um declnio drstico na riqueza da fauna e na abundncia das populaes. No entanto, no foi constatada nenhuma mudana visvel no hbitat, nem nas comunidades de peixes ou de moluscos, e as amostras da gua no forneceram informao til acerca do que havia ocorrido. Aps um perodo de investigaes, a agncia ambiental concluiu que como o vero de 1994 foi excepcionalmente mido, houve um aumento da aplicao de inseticidas nas fazendas de tomates, sendo essa a fonte primria do problema. Nesse caso, tanto a deteco do impacto quanto o diagnstico foram baseados na bioavaliao das comunidades de macroinvertebrados e pelo padro do uso da terra.

Modelos de predio de impacto

Na dcada de 90, pases como Inglaterra, Esccia e Austrlia investiram na construo de modelos preditivos baseados em conceitos matemticos e estatsticos. O sistema britnico de predio e classificao foi denominado RIVPACS (River InVertebrate Prediction And Classification System). Para a construo desse modelo, 268 trechos de rio referncia (no poludos) foram analisados, sendo identificadas 16

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comunidades de macroinvertebrados atravs de anlises multivariadas (Armitage et al., 1983). Utilizando a anlise discriminante mltipla, buscou-se correlacionar 28 variveis ambientais a esses grupos de espcies (Wright et al., 1984), obtendo-se assim as comunidades esperadas associadas a essas variveis ambientais. Para avaliar o grau de impacto de uma localidade teste, os parmetros ambientais e a fauna de macroinvertebrados (comunidade observada) devem ser analisados. As variveis ambientais determinam o grupamento de localidades do qual o local teste faz parte. Comparando as comunidades esperadas com as observadas, pode-se medir o grau de impacto da localidade (Moss et al., 1987). Atualmente o RIVPACS III o mais moderno e o principal instrumento de bioavaliao utilizado pelas autoridades do Reino Unido e da Austrlia em seus programas nacionais de avaliao da qualidade da gua (Wright et al., 1993; Walley & Hawkes, 1996, 1997; Walley & Fontama, 1998).

Protocolos de Avaliao Rpida da qualidade da gua (PAR)

Enquanto nos pases europeus predominaram as abordagens surgidas a partir do ndice de saprobidade, na Amrica do Norte houve uma preferncia por mtodos de similaridade entre comunidades e de estatstica multivariada. Esses mtodos so conhecidos por Protocolos de Avaliao Rpida (PAR) e so baseados na classificao ambiental a priori a partir de parmetros fsicos e qumicos (Barbour et al., 1999). Tais protocolos se baseiam em comparaes entre locais referncia (reas que apresentam excelentes condies de integridade ambiental) e as reas a serem analisadas. Nos PAR, uma ou mais medidas bioindicadoras podem ser utilizadas. Essas medidas podem estar associadas a diferentes nveis hierrquicos de organizao biolgica (espcie, populaes ou comunidades) e podem ser divididas em cinco categorias: nmero de espcies (riqueza), enumeraes (abundncia dos grupos taxonmicos), similaridade entre comunidades, medidas trficas e ndices biticos. Por integrarem as respostas de vrias medidas biolgicas, esses ndices so genericamente tratados por ndices multimtricos.

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A aplicao desses mtodos tem ganhado ampla divulgao e vem sendo testada amplamente na Amrica do Norte, com finalidades diversas. No estado da Virgnia (EUA), o MAIS (Macroinvertebrate Aggregated Index for Streams) comprovou ser uma ferramenta eficiente na avaliao de agrotxicos (Voshell et al., 1997).

Sistema especialista
O sistema LIMPACT (Limnology and Impact) foi elaborado para pequenos rios em reas agriculturveis na Alemanha para estimar a contaminao da gua por agrotxicos. Sistemas especialistas so sistemas computacionais que devem apresentar um comportamento semelhante a um especialista em um determinado domnio. Esse sistema foi desenvolvido a partir de estudos realizados em 104 rios entre os anos de 1992 e 2000. Foram analisadas 555 amostras de agrotxicos qumicos, 660 amostras de macroinvertebrados bentnicos e a caracterizao dos rios de acordo com 9 parmetros de qualidade da gua e aspectos geomorfolgicos. De acordo com a abundncia de macroinvertebrados so aplicadas regras de conhecimento heurstico do tipo SE a abundncia de uma determinada espcie X, ENTO para uma contaminao Y de agrotxicos, d-se o valor Z. Neuman et al. (2002a, 2002b) listam 921 regras elaboradas para 39 espcies com o objetivo de estabelecer 4 classes de contaminao (No Detectada, Baixa, Moderada e Alta). O sistema est disponvel na Internet (http://www.d3web.de) para consulta e aplicao.

Utilizando organismos como bioindicadores

O uso de organismos como indicadores da qualidade da gua relativamente recente e vem sendo muito utilizado nos ltimos anos devido exigncia de medidas cada vez mais especficas na anlise dos poluentes. As primeiras respostas contaminao ambiental ocorrem nos nveis mais baixos de organizao biolgica (bioqumico e fisiolgico dos organismos), e por essa razo elas representam medidas rpidas e de maior sensibilidade na anlise da contaminao ambiental (Buckler & Tiliti, 1996). Nesse nvel de organizao biolgica, grande parte do
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conhecimento sobre os efeitos de substncias ou sedimento contaminados provm de estudos em laboratrio. O nvel de organizao biolgica de organismo pode ser subdividido em duas abordagens, a individual que trata de alteraes comportamentais, malformaes, mudanas nas taxas de crescimento, reproduo e alimentao e a bioqumica e fisiolgica que inclui alteraes na integridade da membrana celular, no transporte de ons, no metabolismo celular e em atividades enzimticas. Os componentes dessa abordagem so chamados de biomarcadores e so definidos como componentes biolgicos, clulas, processos bioqumicos, estruturas e funes biolgicas, que se alteram em contato com compostos xenobiticos (Kendall et al., 1996). O uso de biomarcadores especialmente til no diagnstico inicial da contaminao, podendo captar mudanas sutis no ambiente, que somente tempos depois seriam detectadas em populaes e comunidades (Hyne & Maher, 2000). H uma grande variedade de testes direcionados para avaliao especfica de agrotxicos. So discutidas neste artigo as duas principais abordagens que utilizam macroinvertebrados no nvel de organismos, a individual e os biomarcadores.

Individual
Deformidades morfolgicas A ocorrncia de deformidades morfolgicas em macroinvertebrados bentnicos decorrentes da exposio a ambientes poludos um fato conhecido h pelo menos trs dcadas (Brinckhurst, Chapman & Farrel, 1968) e vem sendo utilizada no monitoramento ambiental desde ento. Os grupos mais testados e analisados so os insetos e os aneldeos aquticos, sendo o gnero Chironomus (Chironomidae, Diptera, Insecta) o mais utilizado. Esse grupo parece especialmente suscetvel a deformidades morfolgicas, apresentando algumas vantagens, como ampla distribuio e altas densidades populacionais, alm de ter taxonomia e biologia bem conhecidas, podendo ser mantido em laboratrio. A dificuldade de estabelecer uma relao de causa e efeito entre os agentes contaminantes e as deformidades encontradas em espcies coletadas no campo representa uma das principais deficincias dessa metodologia.
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Isso agravado pela ocorrncia natural de deformidades nas populaes. Como a maior parte dos estudos pouco controlada, a atribuio de deformidades a um contaminante incerta (Johnson, Wiederholm & Rosenberg, 1993). Mas ainda assim alguns autores reportaram aumento da incidncia de malformaes com o aumento da contaminao em amostras de campo (Milbrink, 1983; Wiederholm, 1984; Warwick et al., 1987). Outros autores tm utilizado os bioensaios em laboratrio para a determinao do impacto de efluentes (Kosalwat & Knight, 1987). Em relao contaminao por agrotxicos, alguns estudos obtiveram sucesso em estabelecer uma relao entre exposio e ocorrncia de deformidades. A maior parte dos autores detectou deformidades nos segmentos da cabea como antena, mento, mandbulas , em brnquias e no processo de pigmentao (Warwick, 1985; Camargo, 1991). Um claro padro de dose-resposta foi registrado entre deformidades no mento de espcies do gnero Chironomus e diferentes graus de poluio em sedimento contaminado com agentes orgnicos persistentes, entre eles agrotxicos e hexaclorobenzeno (Hudson & Ciborowski, 1996). Muitos estudos j foram realizados em campo, analisando os efeitos sinergticos de origem agrcola e ou industrial (ver reviso em Johnson, Wiederholm & Rosenberg, 1993). A maior parte desses trabalhos foi realizada com material proveniente de lagos, provavelmente devido ao maior potencial de acumulao dos contaminantes nesses sistemas. Atualmente, a anlise de deformidades morfolgicas em macroinvertebrados bentnicos uma medida qualitativa da presena de contaminantes em um ecossistema, ainda estando restrita a alguns grupos taxonmicos. Para ampliar os estudos e incluir abordagens quantitativas, necessrio expandir o nmero de espcies estudadas e aprofundar os estudos experimentais. As deformidades provocadas por agentes qumicos ou classes de contaminantes especficos devem ser identificadas, e as relaes entre dose e tempo de exposio e a freqncia e severidade das deformidades devem ser estabelecidas. Um banco de dados organizado com essas informaes permitiria aumentar a eficincia desses estudos. Respostas comportamentais O uso de respostas comportamentais de macroinvertebrados na avaliao da contaminao ambiental tambm uma medida recente e vem
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sendo empregado em estudos de toxicidade crnica em laboratrio. Tambm parte da iniciativa dos pesquisadores de ampliar o nmero de espcies de macroinvertebrados aquticos utilizados, pois esses estudos j vm usando peixes desde a dcada de 70 (Johnson, Wiederholm & Rosenberg, 1993). A alterao no comportamento normal de um organismo o primeiro reflexo de desordens fisiolgicas e pode ser utilizada como indicador inicial da contaminao e de toxicidade subletal. Outra vantagem que as medidas comportamentais permitem integrar os efeitos no nvel bioqumico e fisiolgico com as mudanas no nvel individual, servindo como uma ligao entre diferentes nveis de organizao biolgica. Muitas funes comportamentais so essenciais para a viabilidade de populaes naturais e, dessa forma, podem comprometer seu equilbrio ecolgico. A resposta comportamental ocorre quando um agente qumico, ou outra condio estressante, induz alteraes que excedem a variao comportamental normal do organismo. As repostas comportamentais mais utilizadas so aquelas relacionadas s funes vitais como locomoo, alimentao, respirao, comportamento de caa, fuga e proteo. Os estudos comportamentais so usados principalmente para avaliao de toxicidade de sedimentos, sendo comuns os testes em laboratrio em que h exposio a agentes qumicos em doses conhecidas (Johnson, Wiederholm & Rosenberg, 1993). Os principais efeitos observados so alteraes no hbito alimentar, locomoo, respirao e no comportamento de deriva. Alguns exemplos reportam alteraes do comportamento natatrio de Chironomus tentans expostos ao paration (organofosforado), sendo correlacionados ao grau de inibio da enzima acetilcolinesterase, ao tempo de exposio e concentrao do agrotxico (Detra & Collins, 1991). Indivduos da ordem Trichoptera apresentaram mudanas no padro de construo de redes quando expostos a um piretride em condies de laboratrio. H uma vasta literatura sobre estudos de mesocosmo, incluindo uma recente reviso realizada pela Agncia Ambiental da Dinamarca (Danish Protection Agency, 2001). Nesse trabalho foram comparadas 112 publicaes e constatou-se que a deriva de macroinvertebrados foi a resposta mais sensvel ao impacto da contaminao por agrotxicos, destacando a importncia desses estudos na anlise da contaminao ambiental.
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Mudanas na histria de vida A histria de vida de macroinvertebrados bentnicos definida por fatores que governam a sobrevivncia, fecundidade, taxa de crescimento, estgio de desenvolvimento, tamanho, longevidade e ciclo reprodutivo. Alteraes desses parmetros vm sendo utilizadas como medidas de estresse provocadas pela contaminao ambiental. A maior parte dos estudos realizados com essa metodologia avalia a contaminao por metais pesados ou acidificao de ambientes aquticos (Johnson, Wiederholm & Rosenberg, 1993). Reynoldson, Thompson & Bamsey (1991) avaliaram mudanas na reproduo de Tubifex tubifex (Oligochaeta) em testes de toxicidade de sedimento, criando um bioensaio para anlise de sedimento. As principais respostas utilizadas em estudos de contaminao por agrotxicos so mudanas nas taxas de emergncia e taxas de crescimento. Estudos de mesocosmo e in situ demonstraram que a aplicao de agrotxicos em concentraes subletais ocasiona uma reduo na taxa de emergncia de insetos e diminuio do peso de macroinvertebrados (Schulz & Liess, 1999, 2000, 2001; Liess & Schulz, 1996). Da mesma forma que os inseticidas podem aumentar a taxa de mortalidade, eles podem diminuir ou prolongar as taxas de emergncia de insetos aquticos. Entretanto, muitas populaes de insetos aquticos influenciadas por contaminao ambiental apresentam variao na taxa de emergncia quando comparadas a populaes naturais, o que dificulta o estabelecimento da relao de causa e efeito entre o contaminante e a resposta biolgica observada. Para utilizar medidas associadas histria de vida de macroinvertebrados desejvel compreender todos os mecanismos envolvidos. A falta de conhecimento bsico pode dificultar a interpretao de dados e limitar o uso dessas variveis em estudos de biomonitoramento no campo.

Biomarcadores
Alguns biomarcadores so particularmente bem conhecidos e amplamente utilizados na avaliao da contaminao por agrotxicos. Por exemplo, a inibio da enzima acetilcolinesterase (AChE) utilizada para medir a contaminao por organofosforados e carbamatos. A ao txica desses produtos se baseia na inibio da enzima AChE, o que
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afeta a transmisso do impulso nervoso. Uma vez que essa reao praticamente irreversvel, a percentagem da inibio da atividade da AChE pode ser usada como um indicador de exposio. A maior dificuldade na utilizao de medidas da AChE o fato de existirem vrias formas dessa enzima, o que pode dificultar a correlao entre os sintomas e a inibio da atividade anticolinestersica (Hynes & Maher, 2000). O teste do efeito de trs organofosforados em diversas espcies de macroinvertebrados indicou suscetibilidades distintas (Day & Scott, 1990), sendo possvel utilizar esse mtodo para avaliar a exposio aguda a esses agrotxicos. Outro biomarcador com potencial de ser usado com macroinvertebrados o complexo de enzimas do tipo P-450. Genericamente conhecidas como monooxigensases, ou oxidases de funo mista (mixed function oxidase), essas enzimas tm a atividade associada com processos de biotransformao e detoxificao de agentes xenobiticos. A induo de P-450 pode servir como indicador de exposio a altas concentraes de contaminantes. O uso do citocromo P-450 na avaliao da contaminao de organismos marinhos foi detalhado em algumas revises (James, 1989; Livingstone, 1993).

CONCLUSO
Uma vez que improvvel que respostas em um nico nvel de organizao biolgica satisfaam os critrios de especificidade, os mecanismos de compreenso e a relevncia ecolgica, uma abordagem alternativa estudar respostas em diferentes nveis de organizao simultaneamente. Alm disso, tambm improvvel que um s pesquisador tenha recursos ou conhecimentos tcnicos para examinar respostas nos diferentes nveis de organizao. Dessa forma, integrar os efeitos dos contaminantes atravs dos diferentes nveis de organizao apresenta benefcios adicionais de promover pesquisas interdisciplinares.

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REFERNCIAS BIBLIOGRFICAS
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