ORAL BIOLOGY

Pengaruh Mutasi Gen WDR72 terhadap Amelogenesis Imperfecta

Oleh : Nama Nim Dosen Pembimbing : Putri Hardiyatin Hsb : 04121004003 : drg. Shanty Chairani M.Si

PROGRAM STUDI KEDOKTERAN GIGI FAKULTAS KEDOKTERAN T.A 2013/1014 UNIVERSITAS SRIWIJAYA

Pengaruh Mutasi Gen WDR72 terhadap Amelogenesis Imperfecta

Abstract : Healthy dental enamel is the hardest and most highly mineralized human tissue. Though acellular, nonvital, and without capacity for turnover or repair, it can nevertheless last a lifetime. Amelogenesis Imperfecta is a clinically and genetically heterogenous group of inheritance defects of enamel formation, covering diverse clinical phenotypes that typically show Mendellian inheritance patterns.The candidat genes for Amelogenesis Imperfecta (AI) is AMELX, ENAM, MMP20, KLK4, FAM83H and WDR72. The WDR72 gene maps to
chromosome 15q21.3. Mutation in WDR72 have been identified in autosomal recessive

hypomaturation

amelogenesis

imperfecta.

One

subset,

known

as

hypomaturation

Amelogenesis Imperfecta, is characterised by near-normal volumes of organic enamel matrix but with weak, creamy-brown opaque enamel that fails prematurely after tooth eruption. Autosomal-recessive hypomaturation Amelogenesis Imperfecta in a consanguineous Pakistani family. A whole-genome SNP autozygosity screen identified a locus on chromosome 15q21.3. Sequencing candidate genes revealed a point mutation in the poorly characterized WDR72 gene. Screening of WDR72 in a panel of nine additional hypomaturation Amelogenesis Imperfecta families revealed the same mutation in a second, apparently unrelated, Pakistani family and two further nonsense mutations in Omani

families. Intracellular localization in maturation-stage ameloblasts. WDR72 function is unknown, but as a putative propeller is expected to be a scaffold for protein-protein interactions. Key words : Amelogenesis Imperfecta, WDR72, Enamel.

PENDAHULUAN Enamel Enamel adalah jaringan biomineralisasi manusia yang unik pada saat pembentukan secara normal. Enamel merupakan jaringan yang aselular, nonvital, serta bertahan seumur hidup tanpa kapasitas signifikan apapun untuk memperbaiki. Enamel adalah sekitar 96 % kandungan mineral dan terutama terdiri dari sejumlah besar kristal hidrosiapatit. (Ca10[PO4]6[OH]2). Enamel juga merupakan epitel yang terlibat dan dibentuk oleh ameloblas selama perkembangan gigi. Kunci kekuatan enamel adalah penyusunan yang teratur pada kristal hidrosiapatit dalam batang enamel. Masing-masing batang enamel merefleksikan jalur yang diambil oleh ameloblas. Sel-sel epitel yang terlibat bertanggung jawab untuk sekresi matriks protein enamel yang diperlukan untuk memineralisasi dan kemudian menghapus kendalinya sebagai enamel matang ke bentuk akhir.1 Dibanding jaringan-jaringan gigi yang lain, enamel adalah jaringan yang paling kuat, keras dan merupakan pelindung gigi yang paling tahan terhadap rangsangan-rangsangan pada waktu pengunyahan. Secara normal enamel berkembang dalam 3 fase yaitu : 1. Fase pembentukan yaitu terjadinya pembentukan matriks organik. 2. Fase kalsifikasi yaitu terjadinya mineralisasi matriks organik. 3. Fase maturasi yaitu terjadinya pematangan mineralisasi.2 Komposisi enamel dalam persentase berat terdiri dari : Mineral (anorganis) 96 % : (PO4 55,5 % ; Ca 37 % ; CO3 3,5 % ; Na 0,5 % dll) Organis 3 % : keratin, kolagen, pepton, glikoprotein, polisakarida, lemak, asamasam amino dan sebagainya. Air 1 % struktur jaringan keras gigi dapat terjadi pada tahap

Kelainan pada

histodiferensiasi, aposisi dan kalsifikasi selama tahap pertumbuhan dan perkembangan gigi, yang dapat mengenai gigi sulung maupun gigi tetap. Dan terjadi beberapa kelainan pada enamel yang merupakan salah satu jaringan gigi, salah satu kelainan tersebut adalah Amelogenesis Imperfecta. Adanya beberapa mutasi gen yang menyebabkan kelainan ini seperti MMP20, KLK4, AMELX, ENAM, FAM83H dan WDR72.3

PEMBAHASAN Amelogenesis Imperfecta Amelogenesis imperfecta merupakan istilah kolektif untuk kegagalan perkembangan enamel normal, meliputi bermacam-macam fenotip klinis yang cirinya menunjukkan pola pewarisan mendel. Amelogenesis imperfecta (AI) adalah variabel klinis dan kelompok genetik heterogen cacat yang diwariskan pada pembentukan enamel gigi. Ini mempengaruhi kualitas dan jumlah enamel dan biasanya melibatkan semua gigi primer dan gigi sekunder, tetapi dengan fenotipe variabel dalam keluarga atau bahkan dalam gigi yang berbeda dari orang yang sama. Amelogenesis Imperfecta dapat terjadi sebagai bentuk terisolasi atau sebagai salah satu tanda dalam spektrum fenotip dari sindrom tertentu (yaitu bentuk sindrom). Pada Amelogenesis Imperfecta gigi memiliki penampilan jelly agar mengkilap, serta enamel lebih lembut dari biasanya dan pigmen coklat hadir dalam lapisan tengah enamel.4 Ada 3 bentuk dasar amelogenesis imperfecta yaitu : 1. Hipoplastik Terjadi akibat kerusakan pada pembentukan matriks enamel.

2. Hipokalsifikasi Terjadi akibat kerusakan pada mineralisasi deposit matriks enamel.

3. Hipomaturasi Terjadi akibat adanya gangguan pada perkembangan atau pematangan enamel.

Cacat dalam amelogenesis berhubungan dengan tahap tertentu dari formasi enamel yang mengarah ke fenotipe sangat bervariasi. Fenotipe yang berbeda telah digunakan selama beberapa dekade terakhir sebagai sistem klasifikasi. Saat ini yang paling banyak digunakan skema klasifikasi Amelogenesis Imperfecta, membagi Amelogenesis Imperfecta menjadi 4 jenis utama berdasarkan kerusakan enamel (Amelogenesis Imperfecta I-IV), dan kemudian lebih lanjut pengelompokan menjadi 14 subkelompok berdasarkan penampilan klinis (fenotipe) dan modus warisan (dominan autosom, resesif autosom atau X-linked): Tipe Amelogenesis Imperfecta I : Tipe Hipoplasia (berkurangnya jumlah enamel, sekresi cacat) Tipe Amelogenesis Imperfecta II : Jenis Hipomaturasi (cacat pengolahan protein dan pematangan kristal) Tipe Amelogenesis Imperfecta III : Jenis Hipokalsifikasi (derajat yang tidak cukup pada pengapuran matriks organik terbentuk, cacat mineralisasi) Tipe Amelogenesis Imperfecta IV : Hipomaturasi - hipoplasia dengan Taurodonsia Enamel hipoplasia sulit tembus dan berkurang ketebalan, hipomaturasi

/hipokalsifikasi enamel biasanya berubah warna, menunjukkan buram, kekuningan atau penampilan coklat dan memiliki konsistensi yang lemah dengan penurunan ketahanan. Keterbatasan karena variabilitas klinis yang tinggi juga sebagai hubungan yang mendasari molekul cacat .4 WDR72 WD repeat containing protein 72 adalah protein yang pada manusia dikodekan oleh gen WDR72. WDR72 berisi 7 ulangan domain WD40, yang diperkirakan akan membentuk struktur propeller. WDR72 merupakan protein intraselular dengan struktur propeller yang diharapkan untuk menengahi interaksi protein-protein reversibel.

WD repeat-containg protein 72 adalah protein yang penting untuk pembentukan enamel gigi, yang jika rusak menyebabkan amelogenesis imperfecta kelompok klinis dan genetik heterogen dengan gangguan yang mempengaruhi enamel gigi. Gangguan Enamel seperti hipoplasia, hipomineralisasi atau keduanya, dan gigi yang terkena Amelogenesis Imperfecta mungkin berubah warna, sensitif atau rentan terhadap disintegrasi baik pra-erupsi atau pascaerupsi. Pada jenis hipoplasia dari Amelogenesis Imperfecta, enamel berupa keras normal tetapi tidak berkembang ke ketebalan normal. Pada tipe hipomeneralisasi, enamel berupa ketebalan normal tetapi buram atau putih kekuningan tanpa kilau pada gigi yang baru erupsi. WDR72 terlibat dalam mobilisasi vesikel dan Ca2+ dengan eksositosis yang bergantung pada sinapsis. WDR72 dinyatakan dalam berbagai jaringan. Analisis imunohistokimia mengembangkan gigi seri tikus dan terdeteksi Wdr72 dalam organ enamelnya, dengan pewarnaan yang lebih intens dalam maturasi ameloblas daripada di sekretori ameloblas. Wdr72 juga terdeteksi di beberapa sel jaringan tulang dan ikat.1

Tabel WDR725 Mutasi gen wdr72 terhadap Amelogenesis Imperfecta Amelogenesis Imperfecta secara umum terlibat pada pertumbuhan gigi primer dan sekunder (Gambar 2). Penampilan klinis gigi pada erupsi dan penampilan radiografi sebelum erupsi konsisten dengan pembentukan volume matriks enamel yang mendekati normal. Namun, pada saat erupsi, enamel lebih lembut dan opak dibandingkan pada gigi normal. Di

mulut enamel segera mulai mengalami perubahan pasca erupsi, termasuk variabel derajat perubahan warna coklat dan kehilangan jaringan enamel. Dalam beberapa kasus enamel terkelupas dan gesekan juga terlihat . Dalam sebuah penelitian diidentifikasi dan direkrut sepuluh keluarga dengan hipomaturasi Amelogenesis Imperfecta resesif autosom, asal-usul dari salah satunya adalah Kashmir di Pakistan (P1-P5) dan Oman (O1-O5). Sampel darah perifer diambil dari anggota keluarga yang terkena dan tidak terkena. Genom DNA disiapkan dengan metode pengasinan konvensional. Alternatif lain sampel DNA disiapkan dari Oragen (Genotek DNA) berupa kumpulan saliva sesuai dengan instruksi pembuatan. Kemudian pemeriksaan gigi dilaksanakan. Dan Amelogenesis Imperfecta terbesar adalah dari keluarga pada P1 (Gambar1).6

Gambar 1. Silsilah dan haplotipe keluarga P1 dengan hipomaturasi Amelogenesis Imperfecta resesif-autosom. Lingkaran padat (perempuan) dan kotak (laki-laki) membedakan individu yang terpengaruh Amelogenesis Imperfecta, dengan proband yang ditandai panah. Penanda mikrosatelit genotif digunakan untuk mendefinisikan interval kandidat yang

dicatat, batang merah mendefinisikan haplotype dengan status terkena. Individu yang termasuk dalam layar seluruh genom ditandai dengan tanda bintang.

Gambar 2 . Penampilan klinis Hipomaturasi Amelogenesis Imperfecta pada pasien dengan Mutasi WDR72 (A dan B) pertumbuhan gigi dari 8 tahun (A; keluarga P1) dan 7 tahun (B; keluarga P2) , menggambarkan buram, cream- coklat, warna enamel berubah mulai (panah ) dari yang mendasari dentin setelah erupsi dan permukaan yang bernoda. Bagian atas gigi seri permanen lebih nyata terpengaruh daripada gigi bagian bawah. Open bite anterior, yang diamati dalam (A) tetapi tidak dalam (B). Pada (C) Pertumbuhan gigi dari anggota usia 19 tahun dari keluarga P1 menggambarkan perubahan pasca erupsi , termasuk kehilangan permukaan enamel dan ditandai pewarnaan coklat, dengan gigi insisivus dan servikal enamel insisivus relatif rendah. Pada ( D ) Sebuah rontgen bitewing individu yang diilustrasikan dalam ( C ), menunjukkan hilangnya enamel kotor pasca erupsi meninggalkan permukaan yang tidak teratur sangat jelas pada gigi molar (panah). Ada kekurangan yang jelas pada radiodensitas antara enamel dan dentin dibandingkan dengan gambar dalam gigi yang tidak erupsi dari individu tanpa Amelogenesis Imperfecta, yang memiliki morfologi khas mahkota melengkung. Satu-satunya mutasi yang merusak diidentifikasi berada di WDR72 (Gambar 3). Sebuah titik mutasi diidentifikasi dalam ekson 15 (c.2348C> G) diprediksi memperkenalkan kodon stop prematur (p.S783X). Semua kode ekson WDR72 serta urutan sekitarnya, kemudian diamplifikasi dengan PCR dan diurutkan dalam individu yang terkena Amelogenesis Imperfecta dari sisa keluarga hipomaturasi Amelogenesis Imperfecta (P2 - P5 dan O1 - O5). Keluarga P2, yang tidak diketahui hubungannya dengan P1, memberikan kesamaan mutasi p.S783X dan memiliki fenotip klinis yang serupa (Gambar 2). Titik mutasi tambahan diidentifikasi di ekson 17 (c.2934G > A) dalam keluarga O1 ( Gambar 3). Hasil ini di kodon stop prematur lain adalah p.W978X. Dalam keluarga O2, penghapusan dari pasangan basa tunggal di ekson 16 (c.2857Adel) mengarah dengan pergeseran kerangka terminal (p.S953VfsX20). Penampilan klinis dari individu yang terkena Amelogenesis Imperfecta

dalam keluarga O1 dan O2 konsisten dengan yang diamati dalam dua keluarga lainnya. Setiap mutasi konsisten dengan fenotip penyakit. Mutasi dalam keluarga P1 dan P2 ada dari 192 orang Pakistan normal, dan mutasi dalam keluarga O1 dan O2 tidak teridentifikasi di 192 individu normal yang berbeda etnis. Tidak ada mutasi yang diidentifikasi di enam keluarga tersisa. Hal ini konsisten dengan pengamatan sebelumnya bahwa hipomaturasi Amelogenesis Imperfecta cenderung heterogen secara genetik.6 WDR72 adalah sitoplasma protein yang penting untuk untuk pembentukan enamel. Untuk penyelidikan lokalisasi WDR72 selama amelogenesis, antisera poliklonal dibesarkan secara komersial pada kelinci dengan peptida sintetik CETGTLERHETGERA (WDR72 asam amino 587-600 dengan terminal C yang ditambahkan). Imunohistokimia dilakukan sesuai dengan metode standar pada demineralisasi parafin-yang tertanam di rahang tikus yang termasuk mengerupsi gigi seri. Bagian rehidrasi diinkubasi dengan poliklonal primer antisera selama 1 jam. Immunoreaktivitas divisualisasikan dengan horseradish peroksidase dan DAB (Dako Envision). Immunoreaktivitas WDR72 diamati pada tahap maturasi ameloblas (Gambar 4), serta di beberapa tulang dan sel jaringan ikat. 6 p.R897X adalah mutasi keempat dari mutasi WDR72 dideskripsikan pada pasien Amelogenesis Imperfecta. Seperti tiga mutasi lainnya (p.S783X, p.W978X dan p.S953V fs X20), itu terletak dalam ekson 14-16 dari 19-ekson gen.

Gambar 3. Mutasi WDR72 dan P2, O1, O2 dan silsilah Keluarga

(A)(i) Skema representasi dari gen dijelaskan di ujung proksimal dari interval Amelogenesis Imperfecta-terkait Amelogenesis Imperfecta pada kromosom 15q21.3. (ii) Struktur ekson (kotak) dari WDR72 dengan start (ATG) dan kodon berhenti ditandai dengan Amelogenesis Imperfecta dan dengan intron diwakili oleh garis. Posisi dari mutasi yang ditandai dengan dengan panah. (iii) Representasi struktur protein dengan posisi perkiraan domain WD40 ditandai. Posisi dari mutasi pada tipe yang tidak teratur ditandai dengan panah. (B) Silsilah untuk keluarga P2, O1, O2 dan dengan urutan mutasi yang ditemukan pada masingmasingnya. Sebuah bentuk berlian merupakan individu yang jenis kelaminnya tidak diketahui.

Gambar 4. Lokalisasi wdr72 selama perkembangan gigi insisivus tikus pada fase sekresi dan maturasi. Immunoreaktivitas wdr72 diamati pada organ enamel, dengan pewarnaan yang lebih intens dalam maturasi ameloblas (panah ganda dalam panel B) daripada di sekretori ameloblas (panah di panel A), panah hitam dan panah terbuka masing-masing menandai matriks enamel dan ruang enamel setelah demineralisasi. D dan B masing-masing menunjukkan dentin dan tulang. Sisipan dalam (B) menunjukkan kontrol negatif yang antibodi utamanya telah dihilangkan.

Dalam kesehatan, batang enamel berbatasan satu sama lain dengan lapisan tipis antarbatang enamel yang ditandai dengan berbagai orientasi kristal hidroksiapatit dari komposisi yang berbeda. Penampilan yang abnormal dari antar-batang enamel yang diamati mungkin merupakan gangguan terhadap tahap akhir pematangan enamel. Sedikit yang diketahui tentang kontrol pembentukan antar-batang enamel. Variasi antar-batang enamel tidak lengkap antar-batang enamel pada tikus yang tidak diakui untuk penukar anion. Mutasi WDR72 mempengaruhi tahap akhir pematangan enamel. Struktur putatif propeller dari WDR72 berpotensi untuk berkontribusi pada sejumlah pematangan yang berbeda pada proses

ameloblas. Perubahan siklus pH dalam matriks enamel diakui menjadi penting untuk beberapa aspek pematangan enamel termasuk pertumbuhan kristal. Jelaslah bahwa fenotipe sebenarnya dari mutasi WDR72 paling diamati selama erupsi gigi, karena terjadinya perubahan pasca-erupsi yang cepat dan luas. Lapisan enamel telah berkurang radiodensitasnya dibandingkan dengan enamel normal, merupakan indikasi bahwa lapisan enamel hipomineralisasi. kromosom 15q21.3 mutasi gen WDR72

Amelogenesis Imperfecta resesif autosom

Jenis Hipomaturasi Mutasi gen WDR72 diidentifikasi merubah ketetapan dengan kegagalan terlambat pada pematangan enamel tanpa penyimpanan protein matriks. Mekanisme WDR72 intraselular yang mempengaruhi pematangan enamel masih tetap tidak diketahui.1

KESIMPULAN Sebagai kesimpulan, mutasi WDR72 adalah penyebab hipomaturasi Amelogenesis Imperfecta resesif autosom yang signifikan dengan dampak merugikan pada tahap akhir pematangan enamel di amelogenesis.

DAFTAR PUSTAKA 1. Cells Tissue Organ 2011;194:60-66, December 29, 2010 : Hypomaturation Amelogenesis Imperfecta due to WDR72Mutations: A Novel Mutation and Ultrastructural Analyses of Deciduous Teeth 2. Cells Tissue Organ 2007;186:78-85, 2007 : Enamel Formation and Amelogenesis Imperfecta 3. Cells Tissues Organs 2011;194:279283, May 19 2011 : Amelogenesis Imperfecta: Genotype-Phenotype Studies in 71 Families 4. Molecular Syndromology 2012;3:223-229, Oktober 19, 2012 : A Novel Homozygous WDR72 Mutation in Two Siblings with Amelogenesis Imperfecta and Mild Short Stature 5. Biochem Genet (2011) 49:104121, 2010 : Dening a New Candidate Gene for Amelogenesis Imperfecta: From Molecular Genetics to Biochemistry 6. The American Journal of Human Genetics, 699-705, November 13, 2009 : Mutations in the Beta Propeller WDR72 cause Autosomal-Recessive Hypomaturation 7. Journal dental research, 89, Desember 2010 : Novel WDR72 Mutation and Cytoplasmic Localization