CROMATOGRAFIA

Histrico
M. TSWEET (1903): Separao de misturas de pigmentos vegetais em colunas recheadas com adsorventes slidos e solventes variados.
ter de petrleo mistura de pigmentos

CaCO3

pigmentos separados

Cromatografia = kroma [cor] + graph [escrever] (grego)

CROMATOGRAFIA
Princpio Bsico
Separao de misturas por interao diferencial dos seus componentes entre uma FASE ESTACIONRIA (lquido ou slido) e uma FASE MVEL (lquido ou gs).

Modalidades e Classificao
Cromatografia Lquida Cromatografia Gasosa (CG)

CROMATOGRAFIA

FM = Lquido

FM = Gs

Slida Em CG a FE pode ser: Lquida

Cromatografia Gs-Slido (CGS)

Cromatografia Gs-Lquido (CGL)

CROMATOGRAFIA GASOSA
Histrico
1940

CGS rudimentar CGL proposta (Martin e Synge) Separao de cidos orgnicos por CGL: primeiro cromatgrafo (Martin e James)

1950

Primeiro equipamento comercial (Griffin & George) Detector por Densidade de Gs (Martin e James) Detector por Ionizao em Chama (McWillian e Dewar) Detector por Captura de Eletrons (Lovelock e Lipsky)

1960

Colunas Capilares (Golay)

Presentemente: Vendas de equipamentos e acessrios para CG nos EUA estimadas em mais de US$ 750.000.000 (1995).

CROMATOGRAFIA GASOSA
Aplicabilidade
Quais misturas podem ser separadas por CG ?

(para uma substncia qualquer poder ser arrastada por um fluxo de um gs ela deve ser dissolver - pelo menos parcialmente nesse gs)

Misturas cujos constituintes sejam

VOLTEIS (=evaporveis)
DE FORMA GERAL: CG aplicvel para separao e anlise de misturas cujos constituintes tenham PONTOS DE EBULIO de at 300oC e que termicamente estveis.

O Cromatgrafo a Gs
1 2 6

5 3
1 - Reservatrio de Gs e Controles de Vazo / Presso. 2 - Injetor (Vaporizador) de Amostra. 3 - Coluna Cromatogrfica e Forno da Coluna. 4 - Detector. 5 - Eletrnica de Tratamento (Amplificao) de Sinal. 6 - Registro de Sinal (Registrador ou Computador). Observao: em vermelho: temperatura controlada

INSTRUMENTAO
Gs de Arraste
Fase Mvel em CG: NO interage com a amostra - apenas a carrega atravs da coluna. Assim usualmente referida como GS DE ARRASTE

Requisitos:
INERTE No deve reagir com a amostra, fase estacionria ou superfcies do instrumento.

PURO Deve ser isento de impurezas que possam degradar a fase estacionria.
Impurezas tpicas em gases e seus efeitos:

H2O, O2 hidrocarbonetos

oxida / hidroliza algumas FE incompatveis com DCE rudo no sinal de DIC

INSTRUMENTAO
Gs de Arraste

Requisitos:
CUSTO Gases de altssima pureza podem ser muito caros.
CUSTO

C A B

A = 99,995 % (4.5) B = 99,999 % (5.0) C = 99,9999 % (6.0)

PUREZA

COMPATVEL COM DETECTOR Cada detector demanda um gs de arraste especfico para melhor funcionamento.
Seleo de Gases de Arraste em Funo do Detector:

DCT DIC DCE

He , H2 N2 , H2 N2 (SS), Ar + 5% CH4

Alimentao de Gs de Arraste
Componentes necessrios linha de gs:
controladores de vazo / presso de gs dispositivos para purificao de gs (traps) 3 4 2 1 6

INSTRUMENTAO

5 1 - Cilindro de Gs 2 - Regulador de Presso Primrio 3 - Traps para eliminar impurezas do gs 4 - Regulador de Presso Secundrio 5 - Regulador de Vazo (Controlador Diferencial de Fluxo) 6 - Medidor de Vazo (Rotmetro) Nota: Tubos e Conexes: Ao Inox ou Cobre

Dispositivos de Injeo de Amostra

Os dispositivos para injeo (INJETORES ou VAPORIZADORES) devem prover meios de introduo INSTANTNEA da amostra na coluna cromatogrfica
Injeo instantnea: t=0

INSTRUMENTAO

t=x Injeo lenta: t=0

t=x

Injetor on-column Convencional

1 2 3 4

INSTRUMENTAO

1 - Septo (silicone) 2 - Alimentao de gs de arraste) 3 - Bloco metlico aquecido 4 - Ponta da coluna cromatogrfica

Injeo on-column de lquidos

INSTRUMENTAO

1 - Ponta da agulha da microseringa introduzida no incio da coluna. 2 - Amostra injetada e vaporizada instantneamente no incio da coluna. 3 - Plug de vapor de amostra forado pelo gs de arraste a fluir pela coluna.

INSTRUMENTAO
Parmetros de Injeo
TEMPERATURA DO INJETOR Deve ser suficientemente elevada para que a amostra vaporize-se imediatamente, mas sem decomposio Regra Geral: Tinj = 50oC acima da temperatura de ebulio do componente menos voltil VOLUME INJETADO Depende do tipo de coluna e do estado fsico da amostra
COLUNA
empacotada = 3,2 mm (1/4) capilar = 0,25 mm Amostras Lquidas
0,2 mL ... 20 mL 0,01 mL ... 3 mL

Amostras Gasosas
0,1 ml ... 50 mL

0,001 ml ... 0,1 mL

Slidos: convencionalmente se dissolve em um solvente adequado e injeta-se a soluo

Microsseringas para Injeo

LQUIDOS Capacidades tpicas: 1 mL, 5 mL e 10 mL
Microseringa de 10 m L:
mbolo agulha (inox 316)

INSTRUMENTAO

corpo (pirex)

Microseringa de 1 m L (seo ampliada):

corpo agulha

guia mbolo (fio de ao soldado ao guia)

Colunas: Definies Bsicas

INSTRUMENTAO

EMPACOTADA = 3 a 6 mm L = 0,5 m a 5 m
Recheada com slido pulverizado (FE slida ou FE lquida depositada sobre as partculas do recheio)

CAPILAR = 0,1 a 0,5 mm L = 5 m a 100 m

Paredes internas recobertas com um filme fino (frao de m m) de FE lquida ou slida

INSTRUMENTAO
Temperatura da Coluna
Alm da interao com a FE, o tempo que um analito demora para percorrer a coluna depende de sua PRESSO DE VAPOR (p0). Estrutura qumica do analito Temperatura da coluna

p0 = f

Temperatura da coluna

Presso de vapor

Velocidade de migrao

ANALITO ELUI MAIS RAPIDAMENTE (MENOR RETENO)

INSTRUMENTAO
Temperatura da Coluna

CONTROLE CONFIVEL DA TEMPERATURA DA COLUNA ESSENCIAL PARA OBTER BOA SEPARAO EM CG

INSTRUMENTAO
Forno da Coluna
Caractersticas Desejveis de um Forno: AMPLA FAIXA DE TEMPERATURA DE USO Pelo menos de Tambiente at 400oC. Sistemas criognicos (T < Tambiente) podem ser necessrios em casos especiais. TEMPERATURA INDEPENDENTE DOS DEMAIS MDULOS No deve ser afetado pela temperatura do injetor e detector. TEMPERATURA UNIFORME EM SEU INTERIOR Sistemas de ventilao interna muito eficientes para manter a temperatura homognea em todo forno.

TEMPERATURA DA COLUNA

INSTRUMENTAO
Forno da Coluna
Caractersticas Desejveis de um Forno: FCIL ACESSO COLUNA A operao de troca de coluna pode ser frequente. AQUECIMENTO E ESFRIAMENTO RPIDO Importante tanto em anlises de rotina e durante o desenvolvimento de metodologias analticas novas.

TEMPERATURA ESTVEL E REPRODUTVEL

A temperatura deve ser mantida com exatido e preciso de 0,1C. Em cromatgrafos modernos (depois de 1980), o controle de temperatura do forno totalmente operado por microprocessadores.

Programao Linear de Temperatura

Misturas complexas (constituintes com volatilidades muito diferentes) separadas ISOTERMICAMENTE: TCOL BAIXA:
- Componentes mais volteis so separados - Componentes menos volteis demoram a eluir, saindo como picos mal definidos

INSTRUMENTAO

TCOL ALTA:
- Componentes mais volteis no so separados - Componentes menos volteis eluem mais rapidamente

Programao Linear de Temperatura

A temperatura do forno pode ser variada linearmente durante a separao: Consegue-se boa separao dos componentes da amostra em menor tempo

INSTRUMENTAO

Parmetros de uma programao de temperatura: TEMPERATURA

TINI Temperatura Inicial TFIM Temperatura Final tINI Tempo Isotrmico Inicial tFIM Tempo Final do Programa R Velocidade de Aquecimento

TFIM R TINI tINI TEMPO tFIM

Programao Linear de Temperatura

Possveis problemas associados PLT:
VARIAES DE VAZO DO GS DE ARRASTE

INSTRUMENTAO

A viscosidade de um gs aumenta com a temperatura. viscosidade vazo

DERIVA (DRIFT) NA LINHA DE BASE

Devido ao aumento de volatilizao de FE lquida

INSTRUMENTAO
Detectores
Dispositivos que examinam continuamente o material eluido, gerando sinal quando da passagem de substncias que no o gs de arraste

Grfico Sinal x Tempo = CROMATOGRAMA Idealmente: cada substncia separada aparece como um PICO no cromatograma.

INSTRUMENTAO
Detectores
Mais Importantes:
DETECTOR POR CONDUTIVIDADE TRMICA (DCT OU

TCD) Variao da condutividade trmica do gs de arraste.

DETECTOR POR IONIZAO EM CHAMA (DIC OU

FID) ons gerados durante a queima dos eluatos em uma chama de H2 + ar.
DETECTOR POR CAPTURA DE ELTRONS (DCE OU ECD) Supresso de corrente causada pela absoro de eltrons por eluatos altamente eletroflicos. Registradores XY

ANALGICO

REGISTRO DE SINAL

Integradores Computadores

DIGITAL

Tempo de Reteno Ajustado, tR O parmetro diretamente mensurvel de reteno de um analito o TEMPO DE RETENO AJUSTADO, tR: tR tR = tR - tM
SINAL

TEORIA BSICA

tM
TEMPO tR = Tempo de Reteno (tempo decorrido entre a injeo e o pice do pico cromatogrfico) tM = Tempo de Reteno do Composto No-Retido (tempo mnimo para um composto que no interaja com a FE atravesse a coluna) tR = Tempo de Reteno Ajustado (tempo mdio que as molculas do analito passam sorvidas na FE)

Volume de Reteno Ajustado, VR Embora no diretamente mensurvel, o parmetro fundamental de reteno o VOLUME DE RETENO AJUSTADO, VR:
vazo do gs de arraste

TEORIA BSICA

= t R - t M x FC tR
VR = Volume de Reteno (volume de gs de arraste necessrio para eluir um analito) VM = Volume de Fase Mvel (volume de gs de arraste contido na coluna; volume morto) VR = Volume de Reteno Ajustado (volume de gs de arraste consumido enquanto o analito est sorvido na FE) Fatores termodinmicos

VR = f
Parmetros dimensionais da coluna

Constante de Distribuio, KC
Coluna cromatogrfica: srie de estgios independentes onde acontece o equilbrio entre o analito dissolvido na fase estacionria e no gs de arraste:

TEORIA BSICA

Ocorre um quase-equilbrio entre o analito sorvido na FE e dissolvido no gs de arraste.

KC =

[A]S [A]M

KC = Constante de Distribuio
[A]S = concentrao do analito na FE [A]M = concentrao do analito no gs

Afinidade pela FE

[A]S

MENOR RETENO !!!

Volatilidade

[A]M

TEORIA BSICA
Fator de Reteno, k
Exprimindo o equilbrio em termos da MASSA do analito em cada fase, ao invs da concentrao:

FATOR DE RETENO, k: razo entre as massas de analito contidas na FE (Ws) e gs de arraste (WM) RAZO DE FASES, b: razo entre volumes de FE e gs de arraste na coluna

k =

WS WM

b =

VM VS

O fator de reteno k depende da constante termodinmica de distribuio KC e da razo de fases b da coluna

TEORIA BSICA Razo de Fases, b

Depende das DIMENSES da coluna:
rC = raio da coluna L = comprimento da coluna

df = espessura do filme de FE

b =

(rC

- df ) 2rCd f

rC >> df

Valores de b para colunas capilares de dimenses tpicas:

dC / mm 0.10 0.20 0.20 0.25 0.25 0.32 0.32 0.32 0.53 0.53 0.53

df / m m 0.10 0.11 0.33 0.25 1.00 0.17 0.52 1.00 0.88 2.65 5.00

b 250 455 152 250 63 471 154 80 151 50 27

Empacotadas: 5 < b < 50

TEORIA BSICA
Relaes entre VR, KC e

VR pode ser definido em funo de KC e b:

VR depende diretamente da constante de distribuio do soluto entre a FE e o gs de arraste e das dimenses da coluna. Outra combinao possvel:

possvel estimar tanto o fator de reteno quanto a constante de distribuio a partir do cromatograma

TEORIA BSICA
Eficincia de Sistemas Cromatogrficos
A migrao um analito pela coluna provoca inevitavelmente o alargamento da sua banda:

TEMPO

Efeitos do alargamento excessivo de picos: Separao deficiente de Picos mais largos e analitos com retenes menos intensos = menor detectabilidade prximas.

EFICINCIA Capacidade de eluio com o mnimo de disperso do analito.

TEORIA BSICA
Quantificao da Eficincia
Supondo a coluna cromatogrfica como uma srie de estgios separados onde ocorre o equilbrio entre o analito, a FE e o gs de arraste:

Cada estgio de equilbrio chamado de PRATO TERICO

O nmero de pratos tericos de uma coluna (N) pode ser calculado por:

tR wb

Coluna mais eficiente

TEORIA BSICA
Quantificao da Eficincia
ALTURA EQUIVALENTE A UM PRATO TERICO (H) Tamanho de cada estgio de equilbrio
(L = comprimento da coluna)

Valores tpicos de H e N:
dC 0.10 0.25 0.32 0.32 0.32 0.32 0.53 0.53 2.16 2.16 df 0.25 0.25 0.32 0.50 1.00 5.00 1.00 5.00 10% 5% H 0.081 0.156 0.200 0.228 0.294 0.435 0.426 0.683 0.549 0.500 N 370370 192308 150000 131579 102041 68966 70423 43924 3643 4000

Capilares, L = 30 m

Empacotadas, L = 2 m

Valores de H para colunas capilares e empacotadas so prximos, mas como L para capilares MUITO maior tipicamente elas so mais eficientes

TEORIA BSICA
Otimizao da Eficincia
A altura equivalente a um prato torico funo da velocidade linear mdia do gs de arraste u:
O valor de H pode ser minimizado otimizandose a vazo de gs de arraste

H
HMIN uMAX

Relaes algbricas entre H e u:

- Colunas Empacotadas: Equao de van Deemter

(A, B, C = constantes)
- Colunas Capilares: Equao de Golay

(B, CM, CS = constantes)

FASES ESTACIONRIAS
Conceitos Gerais
LQUIDOS Depositados sobre a superfcie de: slidos porosos inertes (colunas empacotadas) ou de tubos finos de materiais inertes (colunas capilares)
FE lquida SUPORTE Slido inerte poroso Tubo capilar de material inerte

Para minimizar a perda de FE lquida por volatilizao, normalmente ela :

Entrecruzada: as cadeias polimricas so quimicamente ligadas entre si

Quimicamente ligadas: as cadeias polimricas so presas ao suporte por ligaes qumicas

SLIDOS Colunas recheadas com material finamente granulado (empacotadas) ou depositado sobre a superfcie interna do tubo (capilar)

FASES ESTACIONRIAS
Caractersticas de uma FE ideal
SELETIVA Deve interagir diferencialmente com os componentes da amostra.
FE Seletiva: separao adequada dos constituintes da amostra

FE pouco Seletiva: m resoluo mesmo com coluna de boa eficincia

Regra geral: a FE deve ter caractersticas tanto quanto possvel prximas das dos solutos a serem separados (polar, apolar, aromtico ...)

FASES ESTACIONRIAS
Caractersticas de uma FE ideal
AMPLA FAIXA DE TEMPERATURAS DE USO Maior flexibilidade na otimizao
da separao.

BOA ESTABILIDADE QUMICA E TRMICA Maior durabilidade da coluna,

no reage com componentes da amostra

POUCO VISCOSA Colunas mais eficientes (menor resistncia transferncia do analito entre fases)

DISPONVEL EM ELEVADO GRAU DE PUREZA Colunas reprodutveis; ausncia

de picos fantasma nos cromatogramas.

FASES ESTACIONRIAS
FE Slidas: Adsoro
O fenmemo fsico-qumico responsvel pela interao analito + FE slida a ADSORO

A adsoro ocorre na interface entre o gs de arraste e a FE slida Slidos com grandes reas superficiais (partculas finas, poros) ADSORO Solutos polares Slidos com grande nmero de stios ativos (hidroxilas, pares de eletrons...)

FASES ESTACIONRIAS
FE Slidas
Caractersticas Gerais:
- Slidos finamente granulados (dimetros de partculas tpicos de 105 m a 420 m). - Grandes reas superficiais (at 102 m2/g).

Mais usados:
Polmeros Porosos Porapak (copolmero estireno-divinilbenzeno), Tenax (polixido de difenileno) Slidos Inorgnicos Carboplot, Carboxen (carves ativos grafitizados), Alumina, Peneira Molecular (argila microporosa)
- Separao de gases fixos - Compostos leves - Sries homlogas

Principais Aplicaes:

GASES DE REFINARIA Coluna:Carboxen-1000 60-80 mesh; 15 x 1/8 TCOL: 35oC a 225oC / 20oC. min-1 Gs de Arraste: He @ 30 ml.min-1 Detector: TCD

FASES ESTACIONRIAS
Famlias de FE Lquidas
POLIGLICIS Muito polares; sensveis a
umidade e oxidao; ainda muito importantes. Principal: Polietilenoglicol (nomes comerciais: Carbowax, DB-Wax, Supelcowax, HP-Wax, etc.) Estrutura Qumica: H

O CH2 CH2

OH n

AMINAS ALIFTICAS Coluna:4 % Carbowax 20M s/ Carbopack B + 0,8% KOH TCOL: 200oC (isotrmico) Gs de Arraste: N2 @ 20 mL.min-1 Detector: FID Amostra: 0,01 mL da mistura de aminas

FASES ESTACIONRIAS
Famlias de FE Lquidas
Maior parte das aplicaes em CG moderna Quatro grandes grupos estruturais:

PARAFINAS Apolares; alta inrcia qumica;

praticamente abandonadas. Principais: esqualano (C30H62), Apiezon (graxas para vcuo).

POLISTERES steres de dilcoois com dicidos. Polares; altamente sensveis a umidade e oxidao; uso em declnio. Principais: DEGS, EGA, EGS.

STERES METLICOS DE CIDOS GRAXOS Coluna:5%DEGS-PS s/ Supelcoport 100/120 mesh; 6 x 1/8 TCOL: 200oC (isotrmico) Gs de Arraste: N2 @ 20 ml.min-1 Detector: FID Amostra: 0,5 mL de soluo em clorofrmio contendo 0,5 mg de cada ster

FASES ESTACIONRIAS
FE Lquidas: Absoro
O fenmemo fsico-qumico responsvel pela interao analito + FE lquida a ABSORO

A absoro ocorre no interior do filme de FE lquida (fenmeno INTRAfacial) Filmes espessos de FE lquida Grande superfcie lquida exposta ao gs de arraste Interao forte entre a FE lquida e o analito (grande solubilidade)

ABSORO

FASES ESTACIONRIAS
Famlias de FE Lquidas
SILICONES (polisiloxanas) As FE mais empregadas em CG. Cobrem ampla faixa de polaridades e propriedades qumicas diversas.
CH3 H3C Si CH3 R1 O Si R2 CH3 O Si CH3 n CH3

R1, R2 = qualquer radical orgnico

- Ligao Si-O extremamente estvel = elevada estabilidade trmica e qumica das FE.

- Silicones so fabricados em larga escala para diversas aplicaes = minimizao de custo do produto + tecnologia de produo e purificao largamente estudada e conhecida.

- Praticamente qualquer radical orgnico ou inorgnico pode ser ligado cadeia polimrica = FE ajustveis a separaes especficas + facilidade de imobilizao por entrecruzamento e ligao qumica a suportes

FASES ESTACIONRIAS
Famlias de FE Lquidas
FE derivadas de polidimetilsiloxano (PDMS) por substituio de -CH3 por radicais orgnicos, em ordem crescente aproximada de polaridade:
Substituintes
carborano ? fenil 5 % cianopropil 7% fenil 50 % trifluoropropil 50% cianopropil 50% cianopropil 100% fenil 7% fenil 50% -

Nomes Comerciais
SE-30 OV-1 OV-101 SP-2100 Dexsil 300GC SE-52 SE-54 OV-3 OV-5 OV-73 OV-1701 SPB-7 CP-Sil 19CB OV-17 SP-2250 HP-50+ SPB-50 OV-210 QF-1 OV-225 SP-2300 CP-Sil 43CB SP-2340 SP-2330 Silar-9 CP

Observaes
mais apolares da srie pouco seletivas similar a PDMS estvel at > 400oC pouco polar moderadam ente polar moderadam ente polar retm arom ticos moderadam ente polar retm com postos carbonlicos polar retem doadores de eltrons altamente polar

Diferenas entre FE de composio similar provenientes de fornecedores diferentes: pureza, viscosidade.

FASES ESTACIONRIAS
Famlias de FE Lquidas
Separao de pesticidas - FE = 100 % PDMS
1 - TCNB 2 - Dichloram 3 - Lindano 4 - PCNB 5 - Pentacloroanilina 6 - Ronilano 7 - Antor 8 - pp-DDE 9 - Rovral 10 - Cypermetrin 11 - Decametrin

17 min

Coluna: CP-Sil 5 (25 m x 0,32 mm x 0,12 mm) TCOL:195oC (6,5 min) / 195oC a 275oC (10oC.min-1) Gs de Arraste: He @ 35 cm.min-1 Detector: FID

Amostra: 2mL de soluo dos pesticidas on-column

FASES ESTACIONRIAS
Famlias de FE Lquidas
Separao de piridinas - FE = 100 % CNpropilsilicone
1 - piridina 2 - 2-metilpiridina 3 - 2,6-dimetilpiridina 4 - 2-etilpiridina 5 - 3-metilpiridina 6 - 4-metilpiridina

Coluna: CP-Sil 43CB (10 m x 0,10 mm x 0,2 mm) TCOL:110oC (isotrmico) Gs de Arraste: N2 @ 16 cm.min-1 Detector: FID Amostra: 0,1mL de soluo 1-2% das piridinas em 3-metilpiridina

3 min

FASES ESTACIONRIAS
Famlias de FE Lquidas
Separao de fenis - FE = fenilmetilsilicones

50% Ph 50% Me

5% Ph 95% Me

FASES ESTACIONRIAS
FE Quirais
Separao de ismeros ticos: PRODUTOS BIOLGICOS Distino entre produtos de origem sinttica e natural (natural = normalmente substncias oticamente puras; sinttico = muitas vezes so misturas racmicas).

FRMACOS Em muitos frmacos apenas um dos

ismeros ticos tm atividade farmacolgica. Propriedades fsico-qumicas de ismeros ticos so MUITO SIMILARES

FE convencionais no interagem diferencialmente com ismeros ticos

Separao de misturas de ismeros ticos s possvel com FE oticamente ativas =

FE Quirais

FASES ESTACIONRIAS
FE Quirais
FE oticamente ativas mais importantes:
CH3 O Si CH3 CH3 O CH3 Si CH2

Derivados de aminocidos: Misturas de compostos formadores de pontes de hidrognio.

n
C

CH3 NH C CH3 H CH3

CH O C O N H

C*

CH CH 3 CH3

Chiralsil-Val

CH3 O Si CH3 O

CH3 Si CH2 CH2 O Ni O C3F7

Organometlicos: Separao de enantimeros formadores de complexos.

/2

Chiralsil-Metal

FASES ESTACIONRIAS
FE Quirais
Derivados de ciclodextrinas alquiladas:
b-ciclodextrina:
oligosacardeo cclico quiral

Chiralsil-Dex

- Introduzidas em 1983 - Quando ligadas a cadeias de polisiloxano: uso extremamente favorvel como FE lquida (viscosidade baixa, estabilidade ...) - Podem ser quimicamente imobilizadas nas colunas - Colunas disponveis comercialmente

FASES ESTACIONRIAS
FE Quirais: Aplicaes
leo essencial artificial de limo: separao de terpenos primrios

1 - (+/-) a-pineno 2 - sabineno 3 - (+/-) b-pineno 4 - (+/-) limoneno

Coluna: Rt-DEXsm (30 m x 0.32 mm x 0.25 m) TCOL: 1 min a 40C / 2C min-1 / 3 min a 200C Gs de Arraste: H2 @ 80 cm.min-1 Detector: FID

FASES ESTACIONRIAS
FE Quirais: Aplicaes
Aroma de bergamota: distino entre aroma natural e artificial

leo essencial natural

Essncia artificial

Coluna: Rt-DEXse (30 m x 0.32 mm x 0.25 m) TCOL: 1 min a 40C / 4C min-1 / 200C Gs de Arraste: He @ 80 cm.min-1 Detector: MS

FASES ESTACIONRIAS
FE Quirais: Aplicaes
Anfetaminas: resoluo dos ismeros

Coluna: Rt-DEXcst (30 m x 0.25 mm x 0.25 m) TCOL: 1 min a 120C / 1,5C min-1 / 3 min A 175C Gs de Arraste: He @ 25 cm.min-1 Detector: MS

COLUNAS EMPACOTADAS
Definies Bsicas
Tubo de material inerte recheado com FE slida granulada ou FE lquida depositada sobre suporte slido.
ao inox vidro pirex nquel TEFLON MESH dp 177 - 250 mm 149 - 177 mm 125 - 149 mm

MATERIAL DO TUBO

= 3 mm a 6 mm L = 0,5 m a 5 m

Granulometria do recheio

60 - 80 mesh 80 - 100 mesh 100 - 120 mesh

Eficincia maximizada com: - Diminuio de dC - Diminuio de dp - Recheio regular

Limitados pela resistncia passagem de gs de arraste

COLUNAS EMPACOTADAS
FE Lquidas: Suporte
A FE lquida deve ser disposta sobre um SUPORTE slido
rea superficial entre 0,5 e 10 m2.g-1 microporos regulares (~ 1 mm) NO interagir com a amostra boa resistncia mecnica

Uso quase universal: TERRA

DIATOMCEA

secagem calcinao

Esqueletos fsseis (SiO2 + xidos metlicos) de algas microscpicas

fuso com soda lavagem com cido silanizao

Chromosorb Anachrom Supelcoport ...

COLUNAS EMPACOTADAS
FE Lquidas: Suporte
Chromosorb - caractersticas gerais Chromosorb P Rseo, muito ativo. Chromosorb W Branco, mais inerte que o P. Chromosorb G Similar ao W, maior resistncia mecnica
Ordem crescente de inrcia
Densidade Aparente Tamanho de Poro rea Superficial

NOME
Chromosorb P Chromosorb W Chromosorb G

m 2 .g -1

g.ml

-1

mm

4,0 1,0 0,5

0,47 0,24 0,58

0,4 - 2 8-9 -

30 15 5

Tratamentos especiais: AW
Lavado com cido, para remoo de metais

NAW Sem lavagem com cido HP ou DMCS ou HDMS Silanizados (menor adsoro)

% Mx. de FE

COLUNAS EMPACOTADAS
FE Lquidas: Carga de FE
df = f (% FE no recheio)
Maior eficincia (d f = N) Menor sangria da FE com temperatura programada Separaes rpidas e em temperaturas menores

% FE
Maiores volumes de amostra Melhor blindagem dos stios adsortivos do suporte Melhor reprodutibilidade no preparo do recheio

TIPICAMENTE % FE = 1 % a 30 % do recheio

COLUNAS CAPILARES
Definies Bsicas
Tubo fino de material inerte com FE lquida ou slida depositada sobre as paredes internas. MATERIAL DO TUBO
slica fundida vidro pirex ao inox Nylon Silcosteel

= 0,1 mm a 0,5 mm L=5m a 100 m

Colunas de slica so revestidas externamente com camada de polmero (poliimida) para aumentar resistncia mecnica e qumica

Colunas Capilares x Empacotadas:

CAPILARES L = N Colunas mais eficientes FC = 1 ... 10 mL.min-1 Controle de vazo mais difcil Vi Dispositivos especiais de injeo

Famlias de Colunas Capilares :

WCOT (Wall coated open tube) FE liquida deposida (ligada // entrecruzada) sobre as paredes internas. PLOT (Porous layer open tube) Camada de FE slida presa s paredes internas SCOT (Support coated open tube) Predes internas revestidas
com material de recheio similar ao das colunas empacotadas

COLUNAS CAPILARES
Dimetro Interno
dC =

Eficincia

Valores comuns: 0,10 mm 0,25 mm 0,32 mm 0,53 mm

1
1

Colunas de altssima eficincia (amostras complexas, Fast GC); capacidade volumtrica limitada de processamento de amostra Dimetros mais comuns; capacidade volumtrica limitada de amostra requer dispositivos especiais de injeo

Colunas megabore: menor eficincia, mas maior capacidade de processamento permite uso de injetores convencionais

COLUNAS CAPILARES
Fast GC: Colunas Capilares Finas
Alm de colunas finas: necessrio controle acurado de vazo (controle eletrnico de presso) e altas velocidades de aquecimento da coluna. Destilao simulada de leo diesel:

Coluna: HP-1 (1 m x 0.10 mm x 0.40 m) TCOL: 35C / 40C min-1 / 0,75 min A 310C Gs de Arraste: He @ 90 ml.min-1 Detector: FID

COLUNAS CAPILARES
Colunas Capilares: Injeo
Baixa capacidade de processamento de amostra (sub-microlitro)

Injeo direta com microseringa muito difcil !!!

Injetores com diviso (splitters) Sistema

pneumtico despreza frao da amostra injetada

1 2 3 4 5
1 - Septo; 2 - Entrada de gs de arraste; 3 - Liner (misturador); 4 - Coluna Capilar 5 - Purga de gs de arraste; 6 - Vlvula de controle de purga.

6
- Menor sensibilidade (boa parte da amostra desprezada) - Diviso da amostra raramente uniforme (frao purgada dos constituintes menos volteis sempre menor) - Ajuste da razo de diviso mais uma fonte de erros

COLUNAS CAPILARES
Large Volume Injection (LVI)
Combinando injetores com temperatura programada, vlvulas controladas por microprocessador e pr-colunas pode ser feita injeo de grandes volumes (> 100 m L) de amostra

1 Colunas e
injetor frios; vlvula de purga aberta (solvente eliminado)

2 Colunas e injetor aquecidos; vlvula de purga fechada (constituintes de interesse transferidos para coluna analtica)

COLUNAS CAPILARES
Large Volume Injection (LVI)
Separao de PAH com LVI (Vinj = 25 mL, soluo 400 ppb em CH2Cl2)

Coluna: HP-5 (30 m x 0.25 mm x 0.25 m) TCOL: 5 min a 50C / 20C min-1 / 2 min A 320C Gs de Arraste: He @ 2 ml.min-1 Detector: FID

COLUNAS CAPILARES
Colunas Multicapilares
Feixes paralelos de colunas capilares com dC convencional

- Eficincia prxima das colunas convencionais - Capacidade similar das colunas empacotadas - Colunas mais curtas: anlises mais rpidas

Separao de explosivos em coluna multicapilar (OV-17, 1000 capilares x 6 m)

1 - 2,6-DNT 2 - 2,4-DNT 3 - 2,4,6-TNT 4 - 3,4,5-TNT 5 - 2,3,4-TNT 6 - RDX ? 7 - tetryl

DETECTORES
Definies Gerais
Dispositivos que geram um sinal eltrico proporcional quantidade eluida de um analito ~ 60 detectores j usados em CG

~ 15 equipam cromatgrafos comerciais

4 respondem pela maior parte das aplicaes

Detector por Condutividade Trmica

DCT TCD

Detector por Ionizao em Chama

DIC FID

DCE ECD
Detector por Captura de Eletrons

Detector Espectromtrico de Massas

EM MS

DETECTORES
Parmetros Bsicos de Desempenho
QUANTIDADE MNIMA DETECTVEL Massa de um analito que gera um pico com altura igual a trs vezes o nvel de rudo S =3 N
RUDO (N)

RUDO Qualquer componente do sinal gerado pelo detector que no se origina da amostra

SINAL (S)

Contaminantes nos gases

Fontes de Rudo

Impurezas acumuladas no detector Aterramento eltrico deficiente

DETECTORES
Parmetros Bsicos de Desempenho
LIMITE DE DETEO Quantidade de analito que gera um pico com S/N = 3 e wb = 1 unidade de tempo
Mesmo detector, nvel de rudo e massa de analito MAS diferentes larguras de base:

wb QMD = f Detector (sinal gerado, rudo) Largura do pico cromatogrfico

Definindo limite de deteco como: LD independente da eficincia do sistema cromatogrfico !

[QMD] = massa (ng, pg ...) [LD] = massa / tempo -1 (ng.s , pg.s-1 ...)

DETECTORES
Parmetros Bsicos de Desempenho
VELOCIDADE DE RESPOSTA Tempo decorrido entre a entrada do analito na cela do detector e a gerao do sinal eltrico.

t
SINAL

63,2% FSD

Constante de Tempo, t : tempo necessrio para o sinal chegar a 63,2 % FSD (full scale deflection = fundo de escala) aps a entrada de amostra

TEMPO A constante de tempo do sistema (detector + dispositivos de registro de sinal) igual ou menor a 10% da largura a meia altura (w0.5 ) do pico mais estreito do cromatograma

t R medido > t R real

t >> w0.5

w medida > w real Deformao no pico (cauda) Diminuio do rudo (damping)

DETECTORES
Parmetros Bsicos de Desempenho
SENSIBILIDADE Relao entre o incremento de
rea do pico e o incremento de massa do analito

Fator de Resposta, S: inclinao da reta rea do pico x Massa do analito

MASSA

REA

Sensibilidade

o mesmo incremento de massa causa um maior incremento de rea

Na ausncia de erros determinados: A = rea do pico cromatogrfico m = massa do analito

DETECTORES
Parmetros Bsicos de Desempenho
FAIXA LINEAR DINMICA Intervalo de massas
dentro do qual a resposta do detector linear

A partir de certo ponto o sinal no aumenta mais linearmente

REA

MASSA O fim da zona de linearidade pode ser detectado quando a razo (rea / Massa) diverge em mais de 5 % da inclinao da reta na regio linear:
REA / MASSA

1,05 S

0,95 S
MASSA

DETECTORES
Classificao
UNIVERSAIS: Geram sinal para qualquer substncia eluida.

SELETIVOS: Detectam apenas substncias com determinada propriedade fsico-qumica.

ESPECFICOS: Detectam substncias que possuam determinado elemento ou grupo funcional em suas estruturas

DETECTORES
Detector por Condutividade Trmica
PRINCPIO Variao na condutividade trmica do gs quando da eluio de um analito.
A taxa de transferncia de calor entre um corpo quente e um corpo frio depende da condutividade trmica do gs no espao que separa os corpos

Se a condutividade trmica do gs diminui, a quantidade de calor transferido tambm diminui - o corpo quente se aquece.

i
5

Cela de Deteco do DCT: 1 Bloco metlico (ao) 2 Entrada de gs de arraste

3 4

3 Sada de gs de arraste 4 Filamento metlico (liga WRe) aquecido

5 Alimentao de corrente
eltrica para aquecimento do filamento

DETECTORES
Detector por Condutividade Trmica
Configurao tradicional do DCT: bloco metlico com quatro celas interligadas em par - por duas passa o efluente da coluna e por duas, gs de arraste puro:
CELAS DA AMOSTRA CELAS DA AMOSTRA CELAS DE REFERNCIA

CORTE SUPERIOR

CORTE LATERAL

CELAS DE REFERNCIA

Quando da eluio de um composto com condutividade trmica menor que a do gs de arraste puro:
Filamentos nas celas de amostra se aquecem Resistncia eltrica dos filamentos nas celas de amostra aumenta

Filamentos nas celas de referncia no se aquecem

Resistncia eltrica dos filamentos nas celas de referncia fica constante

Diferena de resistncia eltrica entre os filamentos de amostra e referncia

DETECTORES
Detector por Condutividade Trmica
Os filamentos do DCT so montados numa ponte de Wheatstone que transforma a diferena de resistncia quando da eluio de amostra numa diferena de voltagem:

V Fonte de CC / Bateria (18 V a 36 V, tpico) F Ajuste da corrente nos filamentos I Medida da corrente nos filamentos (100 mA - 200 mA, tpico) B1 B2 Balanceamento / ajuste de zero R1 R2 Filamentos das celas de referncia A1 A2 Filamentos das celas de amostra

DETECTORES
Caractersticas Operacionais do DCT
SELETIVIDADE Observa-se sinal para qualquer substncia eluida diferente do gs de arraste = UNIVERSAL

SENSIBILIDADE / LINEARIDADE Dependendo da configurao particular e do analito: QMD = 0,4 ng a 1 ng com linearidade de 104 (ng - dezenas de mg) VAZO DE GS DE ARRASTE O sinal proporcional concentrao do analito no gs de arraste que passa pela cela de amostra.

Fc = 0
VAZO DE GS DE ARRASTE CONSTANTE DURANTE A ELUIO VARIAO DA VAZO DE GS DE ARRASTE DURANTE A ELUIO

Com DCT, a rea dos picos cromatogrficos MUITO dependente da vazo do gs de arraste !!!

DETECTORES
Caractersticas Operacionais do DCT
NATUREZA DO GS DE ARRASTE Quanto maior a
diferena Dl entre a condutividade trmica do gs de arraste puro, lA, e do analito, lX, maior a resposta.

Como:

(M = massa molecular)

QUANTO MENOR A MASSA MOLECULAR DO GS DE ARRASTE, MAIOR A RESPOSTA

Gs de arraste com DCT: He ou H2 He ou H2 outro gs

1
1 2

Usando He ou H2 como gs de arraste, Dl maximizado: MAIOR RESPOSTA Com outros gases, eventualmente lX > lA: PICOS NEGATIVOS

DETECTORES
Caractersticas Operacionais do DCT
FATORES DE RESPOSTA Quanto menor a condutividade
trmica do analito, maior o sinal.

Os fatores de resposta dependem da condutividade trmica do analito

Quantidades iguais de substncias diferentes geram picos cromatogrficos com reas diferentes !!!

lX
CHCl3 Mistura de quantidades equimolares de:
Etano l = 17,5 Clorofrmio l = 6,0 Etanol l = 12,7

Dl

C2H5OH C2H6

DETECTORES
Caractersticas Operacionais do DCT
TEMPERATURAS DE OPERAO Quanto maior a diferena entre a temperatura dos filamentos e do bloco metlico maior a resposta.
Temperatura do filamento, TF: entre 300oC e 350oC. funo da corrente de alimentao dos filamentos, i.

TF
Limitaes:

Sinal

- Correntes excessivas podem fundir o filamento ( tpicos do filamento = 20 mm) - Diminuio do tempo de vida til dos filamentos (oxidao por traos de O2 no gs de arraste)

Temperatura do bloco, TB: mantida to baixa quanto possvel

TB
Limitao:

Sinal

- Temperaturas excessivamente baixas podem provocar a condensao de analitos nas celas (erros analticos, danos aos filamentos)

DETECTORES
DCT: Aplicaes
1 Separao e quantificao de compostos que no geram
sinal em outros detectores (gases nobres, gases fixos)

Separao de Gases Fixos e Hidrocarbonetos:

Coluna: CP Sil 5CB (50 m x 0.32 mm x 5 m) Gs de Arraste: He @ 3 ml.min-1

TCOL: 40C Detector: DCT

1 N2 3 CO2 5 NH3 7 i-C4 2 CH4 4 n-C2 6 n-C3 8 n-C4

2 Por ser um detector no-destrutivo, pode ser usado em

CG preparativa ou deteco sequencial com dois detectores em tandem

DETECTORES
Detector por Ionizao em Chama
PRINCPIO Formao de ons quando um composto queimado em uma chama de hidrognio e oxignio

O efluente da coluna misturado com H2 e O2 e queimado. Como numa chama de H2 + O2 no existem ons, ela no conduz corrente eltrica.

Quando um composto orgnico elui, ele tambm queimado. Como na sua queima so formados ons, a chama passa a conduzir corrente eltrica

DETECTORES
Detector por Ionizao em Chama
COLETOR

AR
FLAME TIP

H2
BLOCO

COLUNA
O ar e o H2 difundem para o interior do coletor, onde se misturam ao efluente da coluna e queimam: Uma diferena de potencial eltrico aplicada entre o flame tip e o coletor - quando se formam ons na chama, flue uma corrente eltrica:

DETECTORES
Detector por Ionizao em Chama
Qumica da Chama de Hidrognio:
Incandescncia

Estrutura da chama trs regies bsicas

Reao Quebra

Regio de quebra Mistura dos gases, pr-aquecimento, incio da quebra das molculas de H2, O2 e dos analitos. Zona de reao Reaes exotrmicas com produo e/ou consumo de radicais H, O, OH, HO2 (provenientes do H2), CH e C2 (proveniente do analito) e ons CHO+ (analito). Zona de incandescncia Emisso de luz por decaimento de espcies excitadas: OH (luz UV), CH e C2 (visvel).

Queima de substncias com ligaes C-H

CH + O CHO+ + e1 on formado a cada ~105 tomos de C queimados

Queima de H2

Formam-se apenas radicais !!!

DETECTORES
Caractersticas Operacionais do DIC
SELETIVIDADE Seletivo para substncias que contm ligaes C-H em sua estrutura qumica.
(como virtualmente todas as substncias analizveis por CG so orgnicas, na prtica o DIC UNIVERSAL)

Compostos que NO produzem resposta no DIC:

Gases nobres H2, O2, N2 CO, CO2, CS2 CCl4, peralogenados NH3, NxOy SiX4 (X = halognio) H2O HCOOH, HCHO *

DIC

CH4 CO2 O2 N2

DCT

SENSIBILIDADE / LINEARIDADE QMD tpicas = 10 pg a 100 pg com linearidade entre 107 e 108 (pg a mg)

DETECTORES
Caractersticas Operacionais do DIC
VAZES DE GASES Alm do gs de arraste, as vazes de alimentao de ar (comburente) e hidrognio (combustvel) devem ser otimizadas.
Grficos Sinal x Vazo de Gases tpicos:

SINAL

AR

H2

150

300

450

600

15

30

45

60

O sinal se mantm aproximadamente constante em uma larga faixa de vazes de ar e H2

VARIAES NAS VAZES DE AR E H2 AFETAM APENAS MARGINALMENTE O SINAL = MAIORES REPRODUTIBILIDADE E REPETIBILIDADE

DETECTORES
Caractersticas Operacionais do DIC
TEMPERATURA DE OPERAO O efeito da temperatura sobre o sinal do DIC negligencivel. TRATAMENTO DE SINAL Por causa da baixa magnitude da corrente eltrica gerada (pA a nA) ela deve ser amplificada para poder ser registrada.
2 Diagrama eletrnico simplificado de um DIC 3

1 4

1 Flame tip / Chama / Coletor 2 3

Bateria ou Fonte de CC Voltagens de operao normais de 200 V a 300 V (no varivel - valor depende da geometria especfica do detector).

Amplificador Eletromtrico Deve amplificar o sinal e converter uma corrente varivel em uma
voltagem varivel (pA mV).

4 Sada de Registro de Sinal

DETECTORES
Caractersticas Operacionais do DIC
FATORES DE RESPOSTA O fator de resposta de um determinado composto aproximadamente proporcional ao nmero tomos de carbono. Presena de heteroelementos diminui o fator de resposta. Nmero Efetivo de Carbonos (NEC) Prev com ~20% de
aproximao o fator de resposta de um composto.
tomo C aliftico C aromtico C olefinco C carbonila O lcool prim. Cl aliftico X +1,00 +1,00 +0,95 +0,00 -0,60 -0,12

(X = Contribuio de cada tomo ao NEC)

Mistura com quantidades equimolares de: C2H6 NEC = 2,00 C2H5OH NEC = 1,40 CH3CHO NEC = 1,00

DETECTORES
Detector de Nitrognio - Fsforo
Modificao do DIC altamente seletiva para compostos orgnicos nitrogenados e fosforados
Prola de sal de metal alcalino: RbCl (normal), KCl

Seletividade S para fosforados ou nitrogenados: 10.000 x - 100.000 x em relao a hidrocarbonetos similares QMD = 0,4 pg a 10 pg (N) e 0,1 a 1 pg (P)
Pesticidas Triaznicos usando DNP:
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 Desetilatrazina Desisopropilatrazina Atraton Atrazina Trietazina Secbumeton Sebutilazina Simetrin Dipropretrina Dimetametrina Metroprotrina

(100 pg cada)

DETECTORES
Detector por Captura de Eletrons
PRINCPIO Supresso de um fluxo de eletrons lentos (termais) causada pela sua absoro por espcies eletroflicas
Um fluxo contnuo de eletrons lentos estabelecido entre um ando (fonte radioativa b -emissora) e um catodo.

Na passagem de uma substncia eletroflica alguns eletrons so absorvidos, resultando uma supresso de corrente eltrica.

DETECTORES
Detector por Captura de Eletrons
1

3 4

1 Ando (fonte radioativa b - emissora) 2 Sada de gases 4 Cavidade 3 Catodo 5 Coluna cromatogrfica

DETECTORES
Detector por Captura de Eletrons
Mecanismo de Captura de Eletrons

Gerao de eletrons lentos pela interao entre a radiao b, molculas do gs de arraste G e molculas de bloqueador (quencher) Q b + G G + + e + e* energia b + G G* + Q G + e + Q energia

Eletrons lentos so capturados pela espcie eletroflica AB

AB + e AB + energia
O decrscimo na corrente eltrica fluindo pela cela de deteco proporcional concentrao a da espcie absorvente no gs de arraste

Ib corrente de repouso Ie corrente na eluio do analito K constante de captura

DETECTORES
Caractersticas Operacionais do DCE
FONTE RADIOATIVA O ando deve estar dopado com um istopo radioativo b - ou a- emissor Emprego universal em DCE comerciais:
3H

(b-, 0,02 MeV)

63Ni

(b-, 0,06 MeV)

Sob a forma de Ta3H3 Maior sensibilidade Tdet deve ser < 225oC

Usado como 63Ni 0 Maior linearidade til at ~400oC

63Ni

preferido em equipamentos modernos

- Maior durabilidade (t1/2 = 100 a x 12 a para 3H) - Maior estabilidade trmica - Menor risco de uso (radioatividade)

Raramente usados:

85Kr, 90Sr, 99Tc, 147Pm, 241 Am, 226Ra

DETECTORES
Caractersticas Operacionais do DCE
POLARIZAO DOS ELETRODOS Vrios modos de polarizao possveis
VOLTAGEM CONSTANTE Pouco usada modernamente - picos cromatogrficos podem ser deformados. VOLTAGEM PULSADA Menos anomalieas eltricas: maior sensibilidade e linearidade.

TEMPERATURA DO DETECTOR Dependncia do sinal com temperatura de operao bastante significativa Variao de 3oC na temperatura Erro de ~ 10% na rea dos picos
Magnitude e sinal do erro depende do composto analisado !

TEMPERATURA DO DCE DEVE SER RIGIDAMENTE CONTROLADA

DETECTORES
Caractersticas Operacionais do DCE
GS DE ARRASTE Funcionamento do DCE muito dependente da natureza do gs de arraste MAIS USADOS:

N2 Ar + 5% CH4

Geram eletrons lentos quando bombardeados com b -

O gs deve ser o mais puro possvel !!! (traos de H2O e O2 comprometem o sinal do DCE)

Adsoro de contaminantes sobre os eletrodos causa deformao nos picos

VAZO DE GS DE ARRASTE Sinal depende diretamente da vazo de gs fluindo no detector

Sinal

DETECTORES
Caractersticas Operacionais do DCE
SENSIBILIDADE / LINEARIDADE QMD = 0,01 pg a 1 pg (organoclorados), linearidade ~ 104 (pg a ng)

10 fg Lindano (C6H6) m-ECD HP-6890

~250 fg cada analito

PESTICIDAS 1 tetracloro-m-xileno 2 a - BHC 3 Lindano 4 Heptachlor 5 Endosulfan 6 Dieldrin 7 Endrin 8 DDD 9 DDT 10 Metoxychlor 10 decaclorobifenila

O DCE O DETECTOR PREFERENCIAL PARA ANLISES DE TRAOS DE ORGANOALOGENADOS E SIMILARES

DETECTORES
Caractersticas Operacionais do DCE
SELETIVIDADE / FATORES DE RESPOSTA Valores de S maximizados para compostos eletroflicos S tpicos (clorobenzeno: S = 1)
hidrocarbonetos e esteres alifticos, dienos lcoois, cetonas e aldedos alifticos, aminas, nitrilas, mono - Cl, mono - F enis, oxalatos, mono - Br, di - Cl, hexa - F tri - Cl, cloretos de cidos, alquil - Pb, anidridos mono - I, di - Br, tri - Cl, mono - nitro, CS2 di - I, tri - Br, poli - Cl, di - nitro, 1,2 - dicetonas, fumaratos, organo - Hg

I > Br > Cl > F Comparando-se organoalogenados: a>b>g Terc > Sec > Prim trans > cis Tri > Di > Mono

DETECTORES
DCE: Aplicaes
Contaminantes em ar atmosfrico - deteco paralela DIC + DCE

DIC

DCE

1, 2, 3 - Hidrocarbonetos aromticos 4, 5, 6 - Hidrocarbonetos clorados

ANLISE QUALITATIVA
Conceitos Gerais
Identificao individual das espcies contidas na amostra

Aplicaes Qualitativas de CG

Determinao da identidade da amostra propriamente dita

Fontes de Informaes Qualitativas

RETENO Uso de dados de reteno de um analito
para sua identificao

DETECO Detectores que fornecem informaes estruturais sobre as substncias eludas

Para anlise qualitativa confivel por CG recomendvel combinao de dados provenientes de pelo menos duas fontes

ANLISE QUALITATIVA
Tempos de Reteno
Interaes analito / FE

tR = f

Presso de vapor do analito Condies operacionais (TCOL, FC ...)

Fixas as condies operacionais, o tempo de reteno ajustado de um analito uma constante

AMOSTRA

PADRO

Comparao de cromatogramas da amostra e de uma soluo padro do analito suspeito

ANLISE QUALITATIVA
Tempos de Reteno
Identificao por tR muito pouco confivel: Dependncia com FC e TCOL Variaes nestas condies afetam sensivelmente os tR
VARIAO DE 1% NO tR

DTCOL = 0,1% DFC = 1%

Sobrecarga na coluna Aumento excessivo na massa de material eluido deforma o pico cromatogrfico e altera o seu tR

Saturao da coluna cromatogrfica com aumento de massa eluida provoca cauda frontal no pico

MASSA

ANLISE QUALITATIVA
Tempos de Reteno
Comparao de tR usando dopagem (spiking) da amostra com o analito suspeito: aumento da confiabilidade de identificao.

Amostra complexa: incerteza nos tR medidos pode levar a identificao errnea

Comparao com cromatograma da amostra dopada permite identificao mais confivel do desconhecido

ANLISE QUALITATIVA
ndice de Reteno de Kovts
FUNDAMENTO Os tR isotrmicos para uma srie homloga de compostos dependem logaritmicamente do nmero de tomos de carbono na cadeia.

Separao isotrmica de uma mistura de n-alcanos (n-C4, n-C5, ... n-C16)

Um grfico de log(tR) em funo do nmero de tomos de carbono do analito nC LINEAR

ANLISE QUALITATIVA
ndice de Reteno de Kovts
O ndice de reteno de Kovts I para um analito definido por:

tR (A) Tempo de reteno ajustado do analito A tR (N) Tempo de reteno ajustado do n-alcano com N carbonos tR (n) Tempo de reteno ajustado do n-alcano com n carbonos (n = N + 1)

Interpolao logartmica dos tR

Ex.: um analito com I = 874 teria um tempo de reteno ajustado equivalente ao de um n-alcano hipottico com cadeia de 8,74 tomos de carbono

ANLISE QUALITATIVA
ndice de Reteno de Kovts
REPETIBILIDADE - REPRODUTIBILIDADE Os efeitos de TCOL e FC nos ndices de Kovts so pequenos

ANALITO
CHCl3 CH3CH2OH CH3CHO CH3(CO)CH3

DI/DT
+0,02 % -0,12 % -0,05 % -0,04 %

Dependncia de I para algumas substncias em uma coluna apolar na faixa de TCOL = 70oC a TCOl = 130oC

Identificao por ndices de reteno muito confivel que comparaes baseadas em tR

NDICE DE RETENO DE KRATZ Para programao linear de temperatura a relao entre tR e nC linear: clculo dos ndices de reteno modificado

ANLISE QUALITATIVA
Retention Time Locking (RTL)
PRINCPIO Em cromatgrafos com: controles pneumticos e trmicos microprocessados, injetores automticos e colunas cromatogrficas de qualidade excepcional possvel alta repetibilidade nos tR
CORRIDA #1 TCOL (1) FC (1) Coluna A CORRIDA #2 TCOL (2) FC (2) Coluna B

O software RTL (Hewlett-Packard) automaticamente ajusta as condies operacionais em um segundo CG para reproduzir os tR obtidos em um primeiro equipamento

Cromatogramas obtidos em diferentes equipamentos e colunas com condies operacionais da segunda corrida ajustadas pelo software de RTL

ANLISE QUALITATIVA
Mtodos de Deteco Qualitativos
Mtodos de deteco que fornecem informaes qualitativas sobre os analitos eludos:

Cromatografia Gasosa com Deteo Espectromtrica de Massas (CG-EM)

Cromatografia Gasosa com Deteo Espectromtrica por Emisso Atmica (CG-EA)

Cromatografia Gasosa com Deteo Espectromtrica por Absoro no InfraVermelho (CG-EIV)

Identificao muito confivel quando combinados a tcnicas de identificao baseadas em reteno

ANLISE QUALITATIVA
Espectrometria de Massas
PRINCPIO A amostra fragmentada e ionizada em um padro caracterstico da espcie qumica. 1 Molculas da amostra so bombardeadas por eltrons (electron impact = EI) ou ons (chemical ionization = CI): ABCDE + e- ABCDE + + 2 e2 O on formado se fragmenta: . . ABCDE + AB + CDE+ . + ABCDE AB+ + CDE. ABCDE.+ A+ + BCDE. 3 Os fragmentos inicos formados so separados magneticamente de acordo com suas massas moleculares e contados:
ABUNDNCIA

O grfico do nmero de ons formados em funo da razo Massa / Carga dos ons o ESPECTRO DE MASSAS do analito MASSA / CARGA

ANLISE QUALITATIVA
Espectrmetro de Massas
1 3

Cmara de Ionizao Eletrons gerados por um filamento aquecido bombardeam a amostra. Os fragmentos ionizados (carga +1) so repelidos pelo eletrodo positivo e conduzidos ao separador magntico.

1 2 3 4

Sada de Vcuo

Todo o interior do EM deve estar sob

alto vcuo (natm).

Separador Magntico A ao do campo magntico deixa apenas ons com determinada razo Massa / Carga atravessar esta rea do equipamento. Detector Uma vlvula fotomultiplicadora ou um fotodiodo gera um sinal eltrico proporcional ao nmero de ons que incide sobre o elemento.

ANLISE QUALITATIVA
Espectro de Massas

20

40

60

80

100

120

m/Z
- CO

m/Z = 80

m/Z = 118

- (CO + H)

m/Z = 79

m/Z = 90

ANLISE QUALITATIVA
Acoplamento CG - EM
Interface cromatgrafo - espectrmetro:

CG

EM

Separador Molecular O gs de arraste leve (He) difunde mais rapidamente que o analito e tende a ser drenado para o vcuo.

Vcuo Cmara de Ionizao

Interface Capilar Direta Com colunas capilares a vazo baixa de gs de arraste pode ser drenada pelo sistema de vcuo.

Coluna Capilar

ANLISE QUALITATIVA
Acoplamento CG - EM
Sistema de Controle e Aquisio de Dados:

MANDATRIO que sistemas CG-EM sejam totalmente controlados por microcomputador.

Sistema de Controle e Aquisio de Dados:

1 2 3

Gerencia e monitora o funcionamento dos mdulos de CG e EM. Coleta e arquiva espectros de massa em intervalos regulares de tempo e constroi o cromatograma. Aps a corrida, compara espectros coletados com bases de dados para identificao dos eluatos.

COMPUTADORES RPIDOS E COM GRANDE CAPACIDADE DE ESTOCAGEM DE DADOS

ANLISE QUALITATIVA
CG-EM: Gerao do Cromatograma
Espectros de massas completos coletados e arquivados em intervalos regulares de tempo Gerao do cromatograma a partir dos espectros: CROMATOGRAMA DE ONS TOTAIS (TIC = Total Ion Chromatogram)
Para cada espectro o nmero total de ons detectados na faixa de massas varrida somado e plotado em funo do tempo, gerando o cromatograma.

MONITORAMENTO DO ON SELECIONADO (SIM = Single Ion Monitoring)

Seleciona-se um fragmento resultante da fragmentao da espcie de interesse. Gera-se o cromatograma plotando-se o nmero de ond detectados com a massa desse fragmento em funo do tempo.

TIC
Universal Similar a DIC

SIM
Seletivo Maior Sensibilidade

ANLISE QUALITATIVA
CG-EM: TIC x SIM
Aroma de polpa industrializada de caj aps extrao por SPME

TIC
Aparecem os picos correspondentes a todas substncias eludas

SIM (m/z = 149)

Cromatograma construido a partir dos mesmos dados acima, mas apenas usando fragementos com massa = 149 (ftalatos: plastificante)

ANLISE QUALITATIVA
Identificao de Eluatos
1 Seleo manual ou automtica do espectro de massa correspondente a um eluato.

CONTAGENS

MASSA / CARGA

CONTAGENS

TEMPO

2 Interpretao manual do espectro e / ou comparao automtica com biblioteca de espectros padro do equipamento.

ANLISE QUALITATIVA
Identificao de Eluatos
Busca automtica em bibliotecas de espectros: comparao estatstica ( Probability Based Matching )
ESPECTRO DESCONHECIDO

PBM
BIBLIOTECA DE ESPECTROS
# 1

Lista com possveis candidatos + porcentagem de confiabilidade

NOME 1-dodeceno 1-dodecanol ciclododecano 2-dodeceno

PBM de um eluato desconhecido (1-dodeceno)

2 3 4 5 6

FRM. % C12H24 99 C12H26O 91 C12H24 91 C12H24 66

C11H22 35 1-undeceno 8-metil-3-undeceno C12H24 32

Identificao pouco confivel de espectros muito simples

LIMITAES:

Limitada pelo tamanho da base de dados (NIST = 66.000 espectros) Diferenas entre espectros gerados por diversos EM

ANLISE QUALITATIVA
Emisso Atmica em Plasmas
PRINCPIO A amostra fragmentada num plasma, os fragmentos so excitados e emitem luz ao retornarem aos seus estados fundamentais. 1
Amostra fragmentada ao colidir com molculas excitadas do gs de suporte do plasma.

ABCD + Hem A+ + B + CD + He + e2 Fragmentos so excitados eletronicamente. A+ + B + CD + Hem A+* + B* + CD* + He 3

Ao retornarem aos seus estados fundamentais os fragmentos excitados emitem luz em comprimentos de onda caractersticos.

A+* A+ + hn1 B* B + hn2 CD* CD + hn3

O MONITORAMENTO DA EMISSO NOS COMPRIMENTOS DE ONDAS CARACTERSTICOS DE CADA FRAGMENTO GERA CROMATOGRAMAS ELEMENTO-ESPECFICOS

ANLISE QUALITATIVA
Gerao e Sustentao de Plasmas
PLASMA Gs ionizado por aplicao de uma descarga eltrica e sustido por um campo eltrico oscilante

Eletrons da descarga eltrica colidem com o gs gerando ons

ons formados so acelerados pelo campo eltrico aplicado gerando continuamente mais ons e espcies excitadas

Gs de Suporte: HLIO (espcies formadas tem energia suficiente para excitar tomos e fragmentos de no metais) Sustentao: MICROONDAS (outros tipos de campos eltricos oscilantes no mantm plasmas estveis de He a presso atmosfrica de forma conveniente)

ANLISE QUALITATIVA
Espectro de Emisso Atmica
Mistura de raias de emisso atmicas e moleculares de fragmentos do analito e raias de emisso do plasma e impurezas

n-Hexano
Fragmentos: CN C2 OH NH

200 nm

800 nm

Naled (C4H7Br2Cl2O4P)
Fsforo Bromo Cloro

456 nm

566 nm

ANLISE QUALITATIVA
Esquema Tpico de um CG-DEA

1 Cromatgrafo Gasoso 2 Alimentao de Gs de Suporte do Plasma (He) 3 Linha de Transferncia (acoplamento CG - DEA) 4 Cavidade Ressonante (gerao do plasma) 5 Lente de Focalizao 6 Monocromador / Policromador 7 Detector de Luz (fotomultiplicadora / diode array) 8 Amplificao / Digitalizao de Sinal 9 Computador

ANLISE QUALITATIVA
DEA: Gerao de Plasma
Uma cavidade ressonante focaliza potncia gerada por uma fonte de microondas no interior de uma cela de deteco por onde passa o gs de suporte.

Cavidade Ressonante Beenaker TM010:

CABO DE ALIMENTAO DE MICROONDAS CAVIDADE RESSONANTE

He

CELA DE DETECO

PLASMA

Permite plasmas de He estveis a presso atmosfrica e potncias de microondas < 100 W CELA DE DETECO Tubo de material isolante eltrico e altamente refratrio (quartzo, alumina, BN)

ANLISE QUALITATIVA
Interface CG - DEA
Plasmas de He se extinguem pela passagem de grandes quantidades de material (~ 1 m L de lquido vaporizado)

Interface para colunas empacotadas:

He

Antes de ser misturado ao He, o efluente da coluna passa por uma vlvula diversora

PURGA

COLUNA

CELA

VLVULA DIVERSORA

Quando da eluio de grandes quantidades de analito o fluxo da coluna desviado para a purga

Colunas capilares: no h necessidade de diverso.