PROCEDIMIENTO El siguiente mtodo se basa en el anlisis de 25.

0 g de la muestra, que se considera como una unidad analtica, en una proporcin de 1:9 de muestra/caldo. Esta cantidad puede variarse siempre que se mantenga la misma proporcin de 1:9 en el medio de preenriquecimiento. La mnima muestra recomendada es de 25.0 g, es decir, una unidad analtica. Para algunos casos donde el riesgo es mayor, se utilizan dos unidades analticas (50.0 g) o ms. 1. Preenriquecimiento. 1.1. Procedimiento general para la preparacin de muestras NOTA IMPORTANTE El presente procedimiento se basa en la tcnica general para la deteccin de Salmonella en alimentos. Sin embargo, deben consultarse los siguientes incisos para realizar las modificaciones pertinentes al preenriquecimiento dependiendo del alimento a analizar, los cuales se presentan en el complemento de la presente prctica. 1. Pesar en una bolsa de Stomacher estril, en rea asptica 25.0 g de muestra a analizar. 2. Verter 225.0 mL de caldo lactosado estril en la bolsa. 3. Homogeneizar la muestra con el diluyente durante 30.0 seg a velocidad media en el Stomacher. 4. Transferir aspticamente la mezcla homogeneizada a un recipiente estril de boca ancha con tapn de rosca y dejar reposar por 60.0 min. a temperatura ambiente con la tapa perfectamente cerrada. 5. Mezclar bien y determinar el pH de la muestra con papel pH. 6. Ajustar si es necesario, a un pH de 6.80.2 con NaOH 1N o HCl 1N estriles. 7. Mezclar y cerrar suavemente la tapa del matraz 8. Incubar la muestra homognea a 35 2C durante 24 h. 2. Enriquecimiento selectivo. 1. Cerrar firmemente el tapn de rosca de los matraces con los cultivos de preenriquecimiento y agitar suavemente. 2. Transferir 1.0 mL del cultivo de preenriquecimiento (con una pipeta de vidrio de 1 mL, estril) a un tubo con 10.0 mL de cada uno de los siguientes medios de enriquecimiento: Caldo tetrationato (antes de su uso, deber activarse aadiendo al medio base 0.2 mL de solucin yodo-yoduro de potasio y 0.1 mL de solucin de verde brillante al 0.1 %) Caldo selenito cistina Caldo Vassiliadis-Rappaport (en sustitucin del caldo tetrationato) 3. Incubar los tubos inoculados en caldo selenito-cistina, caldo tetrationato y/o caldo Vassiliadis-Rappaport a 351C durante 24 h. Para alimentos altamente contaminados debern incubarse los medios de enriquecimiento a 42C por el mismo periodo

Preenriquecimientos especficos en diversos grupos de alimentos para la deteccin de Salmonella spp. (contina de inciso 1)
1.2. Preenriquecimiento para huevo en polvo, claras de huevo en polvo, huevos lquidos pasteurizados y congelados, frmulas infantiles y mezclas preparadas en polvo como harinas para hot cakes, galletas, donas, biquets y pan. Si el alimento est congelado, no descongelar sino hasta el momento del anlisis. Descongelar en un bao de agua a 45C agitando continuamente en un lapso de 15.0 min. aproximadamente, o bien se somete a una temperatura entre 2 y 5C durante 18.0 h. 1.2.1. Productos lquidos Realizar el preenriquecimiento como se indica en el procedimiento general (inciso 1.1.) 1.2.2. Productos en polvo 1. Pesar 25.0 g de muestra y transferirla a una porcin del caldo lactosado (aproximadamente 15.0 mL), para permitir la humectacin lenta del alimento. 2. Homogeneizar poco a poco con una varilla de vidrio estril y agregar ms caldo lactosado hasta completar 225.0 mL 3. Continuar igual que el procedimiento general (inciso 1.1.) 1.3. Preenriquecimiento para productos no pasteurizados congelados de huevo 1. Descongelar la muestra como se indica en 1.2. 2. Pesar aspticamente y por duplicado 25.0 g de muestra. 3. Colocar una de las muestras en un matraz que contenga 225.0 mL de caldo selenito cistina 4. Colocar la segunda muestra en un matraz que contenga 225.0 mL de caldo tetrationato, sin verde brillante. 5. Ajustar si es necesario el pH a 6.80.2 con hidrxido de sodio 1N o cido clorhdrico 1N. 6. Al matraz que contiene el caldo tetrationato, adicionarle 2.25 mL de verde brillante al 0.1% y 4.5 mL de solucin yodo-yoduro. Mezclar bien. 7. Incubar a 35C durante 18 a 24 h, o en caso de tratarse de alimentos fuertemente contaminados incubar a 42C por el mismo periodo. 1.4. Productos que contienen huevo en su formulacin: (pastas para sopa, rollos chinos, etc.); ensaladas preparadas (jamn, huevos, pollo, atn, pavo); frutas frescas, congeladas o secas; crustceos (camarones, cangrejos, jaibas, langostinos, langostas) y pescado 1. Preferentemente no descongelar la muestra antes de su anlisis, si esto es necesario, proceder igual que en el inciso 1.2. 2. Pesar 25.0 g de muestra y adicionar 225.0 mL de caldo lactosado estril. 3. Licuar el alimento durante 2.0 min. 4. Transferir la mezcla homogeneizada en el matraz que contena el medio de preenriquecimiento. 5. Continuar con la incubacin como se indica en el procedimiento general (inciso 1.1.) 1.5. Leche en polvo, entera, semidescremada o descremada.