INGENIERIA TITULO: Practica n° 3 NOMBRE DE LA PRÁCTICA: Preparación de INTEGRANTES

:

AGROINDUSTRIAL

edi!" c#$ti%!"

Urr#tia &e'a E$i(a)et* Nata$+ DOCENTE: Eteri! A$%a M#,!( GRUPO: -B.

Los medios de cultivo son una mezcla de nutrientes que, en concentraciones adecuadas y en condiciones físicas óptimas, permiten el crecimiento de los microorganismos. Estos medios son esenciales en el Laboratorio de Microbiología por lo que un control en su fabricación, preparación, conservación y uso, asegura la exactitud, confiabilidad y reproducibilidad de los resultados obtenidos. En los laboratorios de microbiología se utilizan diferentes tipos de medios de cultivo que pueden ser preparados en forma líquida o en forma sólida. Usualmente para preparar un medio sólido, se parte de un medio líquido al que se le a ade un agente solidificante como el agar, la gelatina o la sílicagel. Los medios de cultivo se pueden clasificar de acuerdo a la naturaleza de sus constituyentes en!  Medios naturales o comple"os! constituidos por sustancias comple"as de origen animal o vegetal, las que son usualmente complementadas por la adición de minerales y otras sustancias. En ellos no se conocen todos los componentes, ni las cantidades exactas presentes de cada uno de ellos.  Medios definidos o sint#ticos! son los medios que tienen una composición química definida cuali y cuantitativamente. $eneralmente se usan en traba"os de investigación.b %e acuerdo al uso del medio de cultivo, #stos se clasifican en! • Medios de enriquecimiento! son medios líquidos que favorecen el crecimiento de un tipo de microorganismo en particular. &ermiten aumentar el n'mero de microorganismos de ese tipo. Usualmente contienen una o m(s sustancias in)ibidoras del crecimiento de los microorganismos con excepción de los que se quieren cultivar. • Medios selectivos! son parecidos a los de enriquecimiento, se diferencian por ser medios sólidos y est(n dise ados para el aislamiento de microorganismos específicos. • Medios diferenciales! son medios que contienen indicadores de productos derivados de la actividad microbiana de los microorganismos. *o contienen ning'n tipo de sustancia con actividad antimicrobiana. &ermiten revelar características fisiológicas de los microorganismos.

Los medios de cultivo se pueden preparar en el laboratorio a partir de cada uno de sus constituyentes b(sicos, o por simple re)idratación de productos asequibles comercialmente +medios de cultivo des)idratados,. $eneralmente se prefiere el uso de los medios de cultivo des)idratados porque, adem(s de simplificar el traba"o, con ellos se tiene mayor probabilidad de obtener resultados reproducibles. &ara su preparación se deben tener en cuenta los siguientes aspectos! • &repararlos sólo a partir de productos que provengan de fabricantes o proveedores que suministren productos de calidad.

• • •

Utilizar agua destilada o desmineralizada con una calidad microbiológica y fisicoquímica adecuada. Utilizar materiales de vidrio bien lavado y en"uagado con agua destilada o desmineralizada. -ontrolar el tiempo y la temperatura recomendada durante su esterilización. *unca se deben exceder las condiciones se aladas por el fabricante.

El medio de cultivo constituye el aporte de nutrientes indispensables para el crecimiento de los microorganismos. La composición precisa depender( de la especie que se quiera cultivar, porque las necesidades nutricionales varían considerablemente. .ay microorganismos muy poco exigentes que crecen bien en medios de laboratorio normales y microorganismos muy exigentes que necesitan determinadas sustancias como vitaminas, suero o sangre para crecer. Existen medios cuya composición permite el crecimiento de!  un gran n'mero de especies +agar nutritivo, caldo ordinario, agar de Sabouraud,,  determinados microorganismos +impidiendo el desarrollo de otros,, son los denominados medios selectivos.  /tros en cambio, se desarrollan para el estudio de determinadas pruebas fisiológicas o test bioquímicos +utilización de citratos, acidificación a partir de az'cares, etc.,.

ESTERILI/ACI0N La presencia de microorganismos en todos los medios ambientales )ace imprescindible que para estudiar una bacteria determinada sea necesario destruir todas aquellas que pudieran encontrarse contaminando los medios o los instrumentos de traba"o. Esto se consigue mediante la E01E23L345-3/*, consistente en la destrucción de todo microorganismo.

En estas pr(cticas vamos a utilizar especialmente el calor como m#todo de esterilización rutinario, aunque tal y como se )a explicado en clase existen otras posibilidades. Los medios con contenido acuoso )an de ser esterilizados en el 5U1/-L56E mediante calor )'medo, obtenido por calentamiento en un depósito )erm#tico que contiene agua y del que previamente )a sido evacuado el aire con el fin de limitar las oxidaciones. En este sistema el vapor de agua sobrecalentado a 787 +8 atm, o 777 9- +7.: atm, difunde muy r(pidamente, )aciendo que los elementos termosensibles de las c#lulas se desnaturalicen, especialmente sus enzimas. &or lo tanto, una vez preparados los medios de cultivo )ay que proceder a su esterilización en autoclave, realizada )abitualmente a 7 atm de sobrepresión +7879-, durante 7: ó 8; min., salvo en el caso de medios cuyos componentes sufran alteraciones tales que los )agan inadecuados para el crecimiento. Este es el caso de los az'cares utilizados en los ensayos de fermentación, que se suelen esterilzar a menor presión <;.: atm. de sobrepresión +7779-,= para evitar su >caramelización> , una modificación consistente en su oxidación y consecuente conversión en formas tóxicas para el metabolismo de las bacterias, o en el caso de la urea, que conviene esterilizarla independientemente por filtración. &or otra parte, todo el material de vidrio se esteriliza mediante calor seco en el .orno &asteur. Una vez limpio, el material se envuelve en aluminio o se introduce en un contenedor +e"! pipetas en pipetero, y se mantiene en el )orno durante dos )oras a 7?;9-. En el caso de los portainóculos que se est(n utilizando constantemente, se utiliza el calor directo del mec)ero, que tambi#n sirve para flamear los bordes de tubos, matraces, pipetas, etc.

Un m#todo fundamental para estudiar las bacterias es cultivarlas en un medio líquido o en la superficie de un medio sólido de agar. Los medios de cultivo contienen distintos nutrientes que van, desde az'cares simples )asta sustancias comple"as como la sangre o el extracto de caldo de carne. &ara aislar o purificar una especie bacteriana a partir de una muestra formada por

muc)os tipos de bacterias, se siembra en un medio de cultivo sólido donde las c#lulas que se multiplican no cambian de localización@ tras muc)os ciclos reproductivos, cada bacteria individual genera por escisión binaria una colonia macroscópica compuesta por decenas de millones de c#lulas similares a la original. 0i esta colonia individual se siembra a su vez en un nuevo medio crecer( como cultivo puro de un solo tipo de bacteria. Muc)as especies bacterianas son tan parecidas morfológicamente que es imposible diferenciarlas sólo con el uso del microscopio@ en este caso, para identificar cada tipo de bacteria, se estudian sus características bioquímicas sembr(ndolas en medios de cultivo especiales. 5sí, algunos medios contienen un producto que in)ibe el crecimiento de la mayoría de las especies bacterianas, pero no la de un tipo que deseamos averiguar si est( presente. /tras veces el medio de cultivo contiene determinados az'cares especiales que sólo pueden utilizar algunas bacterias. En algunos medios se a aden indicadores de p. que cambian de color cuando uno de los nutrientes del medio es fermentado y se generan catabolitos (cidos. 0i las bacterias son capaces de producir fermentación, generan gases que pueden ser apreciados cuando el cultivo se realiza en un tubo cerrado. &ara un cultivo adecuado de bacterias y microorganismos, se utiliza el agar, un gel coloidal formado por )idratos de carbono, de extendido uso comercial, y que proviene de las paredes celulares de varias especies de algas ro"as, en concreto de miembros orientales del g#nero $elidium. 0e utiliza como agente solidificante en la preparación de dulces, cremas y lociones, así como en las conservas de pescado y carne@ para texturizar y emulsionar los )elados y postres congelados@ para clarificar, durante el proceso de fabricación del vino y la elaboración de la cerveza@ y tambi#n para dar apresto +almidonar, las telas. 5dem(s, es un excelente medio de cultivo de bacterias, ya que no se disuelve por el efecto de las sales, ni se consume por la acción de la mayoría de los microorganismos. El agar se extrae de las algas marinas )aci#ndolas )ervir. &osteriormente, el producto resultante se de"a enfriar y secar, y al final se solidifica en pastillas o en escamas. En un principio se llamó agarAagar, un t#rmino que se utiliza en Malasia para denominar a un alga local.

 &reparar adecuadamente medios de cultivo a partir de sus ingredientes y a partir de  medios de cultivo des)idratados.

 3ndicar el m#todo de esterilización apropiado.  &reparar medios de cultivo como soporte y fuente de nutrientes para el desarrollo de los microorganismos in vitro.  Mane"ar los instrumentos de uso rutinario, a la vez que imprescindibles, en el laboratorio de microbiología.  .acer un primer acercamiento a la manipulación de microorganismos. 5dquirir la idea de la importancia del traba"o en condiciones de esterilidad y las t#cnicas m(s comunes

EBU3&/0

Ba$an(a

A#t!c$a%e

C!cina

Materiales

1i!$a

Pape$

A'#a de"ti$ada

C$!r#r! "!di!

de

Pect!n a
0on proteínas )idrolizadas, se obtienen por digestión química o enzim(tica de proteínas animales o vegetales

E2tract! car e

de

-ontiene bases org(nicas, solubles productos de degradación de las proteínas, vitaminas y minerales.

A'ar
0e utiliza como agente solidificante. Es un polisac(rido que se obtiene de ciertas algas marinas. La" )acteria" n! "!n capace" de de'radar$!

.

Di%i"ión de a$#

n!" en 'r#p!":

Lo que aquí se )izo es dividir a los alumnos en dos grupos, y designo un traba"o específico para cada grupo.

M3t!d! !)"er%ati%!:

En los peque os momentos que se tenía libre cada alumno recorría a los dem(s grupos observando y )aciendo los apuntes que creía conveniente de los traba"os que se estaban realizando.

M3t!d! e2p$icati%!:

%entro de este m#todo est(n las exposiciones que cada grupo )acía de su traba"o asignado, )ablaban de su traba"o en forma detalla pero de manera personalizada +solo explicaban a las personas que se les acercaban a preguntar,.

 CALDO COM8N

Pect!na 453 'ra !" COLOCAR En pape$

C$!r#r! de "!di! 45:7 'ra !" A9ADIR En e$ i" ! pape$

E2tract! de carne 4567 'ra !" A9ADIR

En e$

i"

! pape$

PESAR

En $a )a$an(a

COLOCAR

En #na <i!$a c!n 45:7 a'#a de"ti$ada

$ de

;EC;AR

A'#a de"ti$ada p!r $a" parede"

DISOL&ER

Para p!der di"!$%er$! *a"ta "# e)#$$ición

CALENTAR

 AGAR COMUN
Pect!na 453 'ra !" COLOCAR En pape$

C$!r#r! de "!di! 45:7 'ra !" A9ADIR En e$ i" ! pape$

E2tract! de carne 4567 'ra A'ar 45=7 'ra !" A9ADIR !" A9ADIR En e$ i" ! pape$

En e$

i"

! pape$

PESAR

En $a )a$an(a

COLOCAR

En #na <i!$a c!n 45:7 a'#a de"ti$ada

$ de

;EC;AR

A'#a de"ti$ada p!r $a" parede"

DISOL&ER

Para p!der di"!$%er$! *a"ta "# e)#$$ición

 A'ar "a)!#ra#d
G$#c!"a : 'ra !"

CALENTAR

COLOCAR

En pape$

pect!na 457 'ra !" A9ADIR En e$ i" ! pape$

A'ar 45> 'ra !" A9ADIR

En e$

i"

! pape$

PESAR

En $a )a$an(a

COLOCAR

En #na <i!$a c!n 45:7 a'#a de"ti$ada

$ de

;EC;AR

A'#a de"ti$ada p!r $a" parede"

DISOL&ER

CALENTAR

Para p!der di"!$%er$! *a"ta "# e)#$$ición

 &ectona  -loruro de sodio  Extracto de caree

 -olocarlo todo en la fiola para disolverlo.

 -alentarlo )asta que se disuelva y llegue a su ebullición

 CALDO COMUN:
• • • • • Este medio es bastante bueno para el cultivo de g#rmenes que no presentan exigencias particulares. *o es diferencial. Es un medio de uso general que permite el crecimiento tanto de g#rmenes exigentes como no. 0e a"usta el p. a C,D. Es un ME%3/ L3BU3%/ Un color amarillo claro. 0e disolví r(pidamente Los microbiólogos necesitan cultivar bacterias en el laboratorio por varias de razones para llevar a cabo experimentos sobre investigaciones. &ara lograrlo de la manera m(s efectiva, es importante utilizar un medio de crecimiento que se aseme"e lo m(s posible al medio natural. El caldo de cultivo con agar se denomina agar nutritivo. El propósito general del agar es adaptar el medio para esas bacterias específicas.

 AGAR COMUN:
• • • Es un medio de cultivo de uso general para microorganismos poco exigentes. Medio de cultivo color (mbar oscuro. &or ser el 5gar -omun un medio enriquecido permitir( el crecimiento de bacterias tanto patógenas como saprofitas, por esto es importante traba"ar con las mayores condiciones de asepsia para garantizar que no )ay crecimiento de microorganismos contaminantes que puedan ocasionar un resultado erróneo. Es un Medio solido

 AGAR SABORAUD

Medio para la detección y aislamiento de )ongos en muestras mediante t#cnica de filtración por membrana. &ara que ocurra el crecimiento selectivo de )ongos sobre bacterias en la muestra depende tan solo de la reacción (cida +p. :.?,. Este medio es recomendado en el cultivo de )ongos, ya que su p. ba"o favorece el crecimiento de #stos. Es tambi#n un medio selectivo que impide en crecimiento de otro tipo de microorganismos. Medio de cultivo color (mbar claro

L! ?#e !)"er%a !" en $!" edi!" de <er entación de n#e"tra )acteria pr!)$e a <#e #na a$ta pre"encia de 'a" en '$#c!"a + "acar!"a@ + )aAa en $act!"a5 B %ira)a a c!$!r a ari$$! en $!" tre" edi!"@ indicand! pre"encia de Ccid!5

 Los medios de cultivos permiten el crecimiento y desarrollo de microorganismos, gracias a que proporcionan sustancias nutritivas.  Los medios de cultivos se pueden clasificar de acuerdo al porcenta"e de 5gar en tres grupos! medios sólidos, medios semiAsólidos y medios líquidos.  El medio de cultivos que traba"amos en el laboratorio corresponde a un medio sólido, es decir que contiene mas de un 7:E de 5gar, este es el 5gar Mc-onFey que se caracteriza por ser un medio diferencial para la detección, aislamiento y enumeración de bacterias coniformes y patógenas intestinales en agua, productos l(cteos y muestras biológicas.  El procedimiento para la preparación de cualquier medio de cultivo debe realizarse rigurosamente para no contaminar el medio.  La gran versatilidad metabólica del microorganismo )ace que los podamos encontrar pr(cticamente en cualquier entorno. Los alimentos son f(cilmente colonizados +contaminados,, ya sea de forma natural, en origen o durante el procesamiento y la manipulación. La multiplicación de los microorganismos en el alimento puede implicar desde una alteración inapreciable )asta su deterioro completo y puede ser, en cualquier caso, una vía de transmisión de enfermedades.  &or el contrario, en otras ocasiones, la alteración resulta beneficiosa debido a la adquisición de nuevas propiedades fisicoquímicas de inter#s organol#ptico o de conservación +que impidan la colonización por otros microorganismos,.  Las siguientes pr(cticas se centran en la detección de microorganismos en el propio alimento y adem(s se describen t#cnicas sencillas para estudiar el papel de los microorganismos en la producción de alimentos.

 -omo conclusión podemos decir que luego de nuestras clases en le laboratorio podemos ser capaces de identificar el materia )abitual utilizado en la practica de microbiología, ya que su uso fue constante y necesitaba una correcta manipulación de los mismos, así como la esterilización adecuada para obtener buenos resultados de los cultivos y an(lisis realizados.  En esta pr(ctica se aprendió la importancia de preparar medios de cultivo, de que materiales pueden ser )ec)os, los distintos tipos de cultivos que pueden desarrollarse en el laboratorio, así como su clasificación, sus características principales, los distintos tipos que pueden servir para identificar diferentes bacterias, así como las condiciones que estos deben de reunir.  Es importante mencionar que se obtuvieron buenos resultados ya que se pudo )acer la preparación del medio sin dificultad alguna.

 0e reconocieron los diferentes medios de cultivo existentes para el crecimiento de microorganismos aplicando conceptos b(sicos de nutrición y preparación de los mismos, adem(s se desarrollaron competencias que deben tenerse en cuenta antes, durante y despu#s de la preparación de un medio de cultivo

 El procedimiento que se llevo a cabo tuvo como ob"etivo aprender sobre la preparación adecuada de un medio de cultivo dependiendo de los nutrimentos b(sicos y factores físicos que requiere un microorganismo para su desarrollo, de acuerdo a esto se procedió a la preparación de dos medios siguiendo los requerimientos exigidos por estos, se obtuvo que los dos medios preparados

 )ttp!GGyactivany.blogspot.comG8;78G;DGpracticaAnDApreparacionAdeA mediosApara.)tml  )ttp!GG)tml.rincondelvago.comGpreparacionAdeAmediosAdeAcultivo.)tml  )ttp!GGHHH.slides)are.netGIendyJalamGprcticaAdeAmediosAdeAcultivo  )ttp!GGHHH.ucv.veGfileadminGuserKuploadGfacultadKfarmaciaGcatedraMicro G7;K5gar0abouraud%extrosa.pdf  )ttp!GGHHH.buenastareas.comGensayosGMediosA%eA-ultivoGLDDD;:.)tml  )ttp!GGHHH.slides)are.netGE0L5M5D:?GmanualAdeApracticasA8;78  )ttp!GGHHH.casadelabuelasilvia.com.arGindex.p)pM optionNcomKcontentOvieHNarticleOidNDP;Q!caldoAcomunA caldoOcatidN?8!sopasApuresAcremas  )ttp!GGHHH.editorialcep.comGoposicionesA sanitariasGscsGtemasmuestraG7?E8;temaE8;laborat.pdf  )ttps!GGHHH.google.com.peGM gHsKrdNcrOeiNpURFUtD834&gQ50dDS5BTps"N7OqN-5L%/U-/MU*+J51E2350,UBUEU0EU/J13E*EEDV  )ttp!GGes.scribd.comGdocGPCPP;P;GMicrobiologia  )ttp!GGannymo"ica.blogspot.comG8;78G;DGpracticaAnoDApreparacionAdeA mediosApara.)tml