Evaluacin de un sistema de aireacin externo en la fermentacin con lactococcus lactis

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Evaluation of an external aeration system during fermentation with lactococcus lactis
Soler Galindo A.1 RESUMEN Una de las variables ms importantes que intervienen en los procesos de fermentacin aerobia es la transferencia de oxgeno. Sin embargo, puede convertirse en un limitante en dichos procesos, debido a distintos factores que incluyen condiciones ambientales necesarias en el cultivo, propiedades del medio lquido, caractersticas geomtricas del reactor, entre otras. En la fermentacin con lactococcus lactis cepa IBUN 34.1 se presenta insuficiencia de oxgeno, incluso en las primeras etapas del cultivo. En el presente trabajo se desarrolla un sistema de aireacin externo para la fermentacin, y se realiza un anlisis de las caractersticas de ste, identificando las variables involucradas en el proceso de transferencia de oxgeno gas-lquido, y haciendo una comparacin con el sistema de aireacin tradicional, constituida por dos turbinas tipo Rushton y un difusor interno para la aireacin. Se hace una evaluacin de la operacin del sistema de aireacin externa y se obtiene como resultado que las variables que mayor influencia tienen en los valores del coeficiente volumtrico global de transferencia de masa, kLa, son el flujo de medio de cultivo de recirculacin y la agitacin. Se obtiene que el mayor valor de kLa, para el sistema de aireacin tradicional fue de 40,68 (h-1), mientras que para el sistema con aireacin externa se obtuvo un valor de 63,18 (h-1). Palabras clave: reactor, kLa, transferencia de oxgeno, fermentacin aerbica. ABSTRACT One of the most important variables involved in aerobic fermentation processes is the oxygen transfer. However, oxygen can be a limiting factor in fermentation processes, and that is because of different facts such as environmental conditions necessary in the liquid medium properties, geometric characteristics of the reactor, etc. In fermentation with IBUN 34.1 lactococcus lactis strain there is insufficient oxygen even in the early stages of the crop. In this paper is developed an external aeration system for fermentation and it is made an analysis of the characteristics of that system by identifying the variables involved in the process of oxygen gas liquid transfer, is made a comparison with conventional ventilation system, formed by two Rushton turbines and internal diffuser for aeration. An evaluation of the external aeration system operation is made and as a result, the variables with the greatest influence on the overall volumetric mass transfer coefficient, kLa, are recirculation culture medium flow and agitation. The highest value of kLa obtained for the traditional aeration system was 40.68 (h- 1), while for the external aeration system was 63.18 (h1 ). Key words: reactor, kLa, oxygen transfer, aerobic fermentation.

Ingeniera Qumica, Universidad Nacional de Colombia, Colombia. apsolerg@unal.edu.co.

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INTRODUCCIN La fermentacin con lactococcus lactis es empleada para producir un complejo enzimtico que genera un biopolmero a partir de glucosa. Sin embargo, a condiciones normales de operacin estndar de un biorreactor, se presentan altas limitaciones de suministro de oxgeno al proceso, haciendo que el proceso de respiracin se limite. Dicha insuficiencia de oxgeno se presenta incluso en las etapas tempranas de cultivo. El complejo enzimtico que es producido por la bacteria cido-lctica lactococcus lactis cepa IBUN 34.1, efecta una actividad de hidrlisis y de transferencia, hidrolizando sacarosa en fructosa y glucosa y transfiriendo posteriormente la glucosa a la estructura que conforma el biopolmero. El complejo enzimtico mencionado, tiene una elevada actividad glucansacarasa -4.17 U/mL, y al actuar con el sustrato se obtiene un polmero lineal con peso molecular promedio de 800000 Da2, que est compuesto por unidades de -Dglucopiranosil (26) glucopiranosa. Cuando se purifica el polmero obtenido, se logra un material con propiedades fsicas y qumicas que permiten un amplio uso en la industria de alimentos. En la industria farmacutica es empelado para crear recubrimientos de tabletas y pelculas para cpsulas2. En el presente trabajo se hace un estudio de los parmetros involucrados en la fermentacin con lactococcus lactis, teniendo en cuenta la respuesta de tales parmetros al mejorar la transferencia de oxgeno, empleando un sistema de aireacin externo con un diseo que permite una operacin simple. La evaluacin se enfoca en los detalles y configuracin del biorreactor convencional, y en la operacin del dispositivo que se propone
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para que se reduzca la insuficiencia en el suministro del oxgeno al proceso. Teniendo en cuenta que la eficiencia en la aireacin en un sistema fermentativo depende de los parmetros de solubilidad de oxgeno, velocidad de difusin en los cultivos y la capacidad del biorreactor para suplir los requerimientos de oxigeno de la poblacin microbiana, se realizan algunas modificaciones esenciales a las condiciones de operacin con el equipo disponible para mejorar la transferencia de oxgeno. Se determina el comportamiento de la concentracin de oxgeno en diferentes cultivos, considerando las condiciones de agitacin y aireacin en una fermentador de 1.5 litros con la configuracin tradicional del tanque agitado, proponiendo mejores condiciones de operacin para eliminar la limitacin de oxgeno en el proceso. Se emplea un agitador de acero sinterizado. METODOLOGA Microorganismo El microorganismo a usar fue el Lactococcus Lactis, cepa 3.4, perteneciente a la familia Streptococaceae, con dicha cepa se crea un complejo enzimtico glucosiltransferasa, el cul por su alta actividad enzimtica de hidrlisis y transferencia, se relaciona con el polmero BiLac. Medio de fermentacin e inoculo Para el ptimo desarrollo del cultivo se establece un medio con las siguientes composiciones desarrolladas con posterioridad por el grupo de investigacin (Y Soler A, 2004): Componentes Sacarosa Extracto de Levadura Concentracin (g/L) 60 10 0,14

Informacin tomada de la ficha tcnica del biopolmero Bilac, suministrada por el Instituto de Biotecnologa de la Universidad Nacional de Colombia. 2002.

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cido Fosfrico

0,04 0,04 0,2 13,8 mL/L 20 1 Litro

Altura Total

198

Tabla 2 - Especificaciones del reactor Biolab

Evaluacin De Los Cultivos Y El Sistema En el desarrollo de los procesos de fermentacin se hace una observacin constante del pH, la biomasa y el oxgeno disuelto, de esta forma se determina la actividad enzimtica por medio del Kla y as la productividad del cultivo variando las condiciones de operacin. En la primer parte del proceso es necesario realizar un seguimiento de las fermentaciones, para ello se determina la biomasa con la variacin del pH y el oxgeno disuelto, se realizan cuatro mediciones, una a cada hora, y cada treinta minutos en la ltima etapa del proceso, por medio de espectrofotometra se determina la mayor absorbancia, posteriormente se grafica la variacin de la Biomasa en el tiempo, el proceso se interrumpe al bajar la temperatura a 4C de esta forma se evita que la enzima polimerice el sustrato y se afecte la medicin de la actividad enzimtica. Para la determinacin de la actividad enzimtica se realiza la diferenciacin entre la actividad hidroltica y la actividad de transferencia de masa, con el fin de establecer ambas actividades se realiza la reaccin qumica con una solucin en relacin 1:1 a temperatura de 30C y pH 7. Determinacin Del Coeficiente De Transferencia De Oxgeno (Kla) En Agua Se realiza desgasificacin con nitrgeno, y se tienen dos fases en el sistema, agua y aire, en un segundo momento de la experimentacin se restituye la condicin de saturacin a diferentes condiciones de evaluacin, obteniendo la siguiente grfica, que representa la curva para

Agua Destilada c.s.p

Tabla 1- Medio de fermentacin para el crecimiento de la cepa Lactococcus lactis IBUN 34.1

El inculo se debe mantener a 30C y 200 rpm por un tiempo de 12 horas, de esta forma se verifica que tenga un ptimo crecimiento microbiano. Equipos Y Preparacin. Se realizan dos tipos de ensayo el primero con fermentador convencional en este la fermentacin se lleva a cabo en un fermentador Biolab, este proceso se inocula a 30C y pH aproximado a 7; el segundo ensayo es con el fermentador con dispositivo de aireacin externo y recirculacin de medio de cultivo, en este proceso se le adiciona al fermentador convencional un puerto de succin con bomba peristltica. En cuanto a los equipos a usar se tiene el uso de un fermentador con las siguientes caractersticas (SolerA and Tellez, 2002): Dimensiones Dimetro impulsor Da Dimetro del tanque Altura del impulsor Ancho hoja del impulsor Alto hoja del impulsor Ancho Bafles Altura Lquido Valor (mm) 56 117 25 19 16.5 0 88(1Litro); 110 (1.2 litros)

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el clculo del Kla por esta tcnica de desgasificacin

Ilustracin 1- Curva para el clculo del kLa por la tcnica de desgasificacin

Luego de realizar el balance de materia y establecer las relaciones y las ecuaciones de transferencia de masa se obtiene la ecuacin (1) [ ]

Se procede a graficar los datos de la reaireacin y de este modo el Kla pasa a ser la pendiente de la recta resultante, esto supone que la composicin del aire es constante. Determinacin Del Coeficiene De Transferencia De Oxgeno (Kla) Por La Tcnica Dinmica. Este coeficiente permite la determinacin de la productividad de un reactor que a su vez depende de las caractersticas fsicas y de operacin en el tiempo. Al tener una variacin de la concentracin celular la transferencia de oxgeno se da por medio de la siguiente ecuacin:
Ilustracin 2 - Diagrama de flujo para la aplicacin de la tcnica dinmica.

Lo principal de este mtodo es que se introduce una perturbacin en el sistema al encontrarse en estado estacionario, y analizar la respuesta obtenida. Cuando el sensor de oxgeno disuelto no tiene contacto con el electrodo o cuando hay desoxigenacin del medio con nitrgeno, y el 100% me indica que el medio estril ya est saturado despus de su aireacin, es decir pasadas doce horas del proceso. Es importante para el ptimo desarrollo del proceso que el oxgeno disuelto sea mayor a las

El proceso que se lleva a cabo en esta transferencia se describe en la Ilustracin No. 2

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condiciones crticas de saturacin ya que a estas condiciones el crecimiento se reduce, y se ven afectadas las condiciones metablicas. La grfica que se obtiene por este mtodo es corresponde a la Ilustracin No. 3

Tabla 3 - Diseo experimental en la caracterizacin del prototipo de aireador externo. Ilustracin 3 - Curva en la obtencin del kLa empleando la tcnica dinmica -rgimen no permanente-.

RESULTADOS Y DISCUSIN Anlisis aireacin del sistema convencional de

Diseo Experimental Es necesario correlacionar las variables que afectan las condiciones de transferencia de oxgeno con el Kla, esto se realiza mediante el modelo factorial no balanceado de efectos fijos, se tienen en cuenta dos factores el flujo de recirculacin del lquido y el flujo de aire, a su vez se tienen en cuenta 3 variables como lo son la presin manomtrica, la temperatura y la agitacin. Al ser necesario un gran nmero de ensayos se realizan unos sesgamientos a raz de unas combinaciones de flujo de recirculacin y flujo de aire, junto con la variacin de parmetros de las tres variables, se obtiene que.

Con el objetivo de establecer el comportamiento de la concentracin de oxgeno en el proceso fermentativo, se desarrolla una serie de ensayos para identificar y determinar el efecto de la aireacin y la agitacin en el sistema convencional de reactor agitado y difusor interno. Esto se toma como condicin de referencia para mejorar las condiciones de aireacin y aumentar el suministro de oxgeno al proceso. Se toma como base la fermentacin realizada a 0.5 vvm y 200 rpm. En la ilustracin 4 se muestran los resultados de las fermentaciones con la configuracin convencional, realizando variaciones en el flujo de aireacin y la velocidad de agitacin. En el caso de la fermentacin en el punto central, se presenta uno de los ensayos como representativo de la cintica, y de esa manera, se usaron los resultados para el clculo del error experimental y la determinacin de los percentiles de 25% y 75%, los cuales son etiquetas representativas de la dispersin y significancia de los datos.

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En la segunda grfica de la Ilustracin 4 se puede observar que el comportamiento es similar en todos los experimentos y que no hay efecto frente al cambio de pH en los sistemas evaluados. Se evidencia que el pH se reduce a causa de la produccin de cidos, lo cual es propio de las bacterias acido lcticas heterofermentativas, que generan cido lctico a partir de glucosa, y matinol a partir de fructosa (Bogoya, 2007). Al realizar ensayos con bacterias cido lcticas con ptimo crecimiento a pH entre 6 y 6.5, y son autorreguladas e inhibidas a pH menor a cinco, se obtienen resultados que se ajustan a lo obtenido en otro experimento con bacterias de la misma denominacin (Mataragas & Metaxopoulos, 2003)

Ilustracin 4 - Cinticas de crecimiento y de variacin de pH en fermentaciones convencionales con Lactococcus Lactis.

Para el inicio de los cultivos, las variaciones de la biomasa en la cinticas de las fermentaciones oscilan entre 0.15 y 0.33 mg/mL sujetas a las diferentes condiciones, sin embargo, los resultados indican que esta variacin no tiene efectos significativos al finalizar la fase de adaptacin. En la Ilustracin 4 se pueden observar las etapas caractersticas del proceso, donde se tiene una fase lag variable y corta (hasta de una hora), una etapa exponencial (entre la hora 1 y 3), la etapa de desaceleracin desde la hora 3 y, finalmente, una fase estacionaria que inicia en la hora 5. Los valores finales obtenidos para las concentraciones de biomasa, fueron mximos para las condiciones de aireacin de 1.75 vvm y velocidad de agitacin de 250 rpm.

Ilustracin 5 - Variacin del porcentaje de oxgeno disuelto en fermentaciones convencionales con lactococcus lactis.

En la Ilustracin 5 se presentan los resultados para el porcentaje de oxgeno disuelto (%OD) en distintas etapas de la fermentacin. Se observa que el suministro de oxgeno para los cultivos se ve limitado, aun teniendo condiciones mximas de operacin, obtenindose que el porcentaje de oxgeno disuelto se haga cero estando en la tercera hora, durante la fase exponencial. De esta manera, se tiene que las condiciones de operacin del biorreactor convencional,

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incluso llevadas al extremo, no logran cumplir con los requerimientos de suministro de oxgeno para el proceso fermentativo; y tampoco se mantiene una concentracin mnima de oxgeno para el cultivo. Por otro lado, se evidencia en la experimentacin y en los resultados, que el efecto en el suministro de oxgeno al variar la velocidad de agitacin es mayor al compararlo con los cambios en la aireacin, lo que se ajusta a los resultados registrados en literatura para niveles cercanos. (Bandaiphet, 2006) Sin embargo, debe considerarse que la actividad enzimtica del extracto tambin tiene incidencia en la productividad del cultivo, y por lo tanto, se relaciona con los parmetros del proceso de fermentacin, lo que concuerda con la sugerencia de Bandaiphet en el 2006, afirmando que incluso en caso de tener valores elevados para el kLa, con altas velocidades de agitacin, se obtiene un efecto desfavorable en la productividad del biopolmero. La actividad hidroltica y la transferencia de oxgeno estn notablemente relacionadas con los cambios de agitacin y de aireacin, y por eso, intervienen en la velocidad de transferencia de masa. Estos resultados se muestran en la Ilustracin 6, y se observa que la actividad glucosiltransferasa presenta su valor ms alto en el cultivo con condiciones de 1.75 vvm de aireacin y velocidad de agitacin de 250 rpm. A estas condiciones, la actividad de transferencia incrementa de 5.9 U/mL a 7.5 U/mL en relacin con la fermentacin base que se realiza a 0.5 vvm y 200 rpm.
Ilustracin 6- Actividades hidroltica, de transferencia y biomasa obtenidas en fermentaciones convencionales con Lactococcus Lactis.

Para el ensayo que se realiza a 2.5 vvm y 250 rpm, se obtiene un valor tambin elevado de actividad, pero se observa que aun con el aumento en la aireacin, el aumento de la actividad enzimtica no es estadsticamente significativo, debido a que su diferencia con el valor mayor de actividad, se encuentra entre los datos de no significancia (percentil 25% a 75%). Al mejorar las condiciones de aireacin, se logra un aumento en la productividad del cultivo. Esto sucede porque la actividad enzimtica, que est relacionada con la productividad, aumenta incluso en los casos en que la biomasa se ve modificada con el incremento de los niveles de aireacin. Partiendo del objetivo de eliminar las limitaciones en el suministro de oxgeno al proceso fermentativo, se hace necesario implementar un sistema que elimine las insuficiencias de oxgeno, sin que esto afecte las condiciones mecnicas y de oxidacin de las clulas o la enzima, evitando el estrs oxidativo. Entonces, se debe hacer una inspeccin y evaluacin del equipo de aireacin externa propuesto para cubrir los requerimientos de oxgeno del sistema.

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Determinacin del kLa en agua para el sistema convencional Las condiciones de evaluacin del sistema para la caracterizacin del coeficiente global de transferencia de oxgeno en el sistema tradicional con tanque agitado y difusor interno, se mencionan a continuacin: Medio: agua. Reactor: Bioflo de 2 L con un litro de medio. Temperatura: ambiente Variables: aireacin, agitacin Niveles: 0.5 y 1 vvm; 200 y 300 rpm. Tcnica: desgasificacin con nitrgeno.

de mezcla, el tiempo de respuesta del electrodo y el tiempo muerto, y por esta razn no se consideran para realizar la linealizacin. Lo mismo sucede con los ltimos datos recopilados, debido al acercamiento a la concentracin de saturacin, y por esto tampoco se consideran tales datos en la linealizacin. Los resultados indican la importante relacin del coeficiente global volumtrico de transferencia de oxgeno con las condiciones de agitacin y aireacin del proceso. A condiciones extremas, se alcanza un valor de kLa de 40.68 h-1, con velocidad de agitacin de 300 rpm y aireacin de 1 vvm. A estas condiciones, an con el valor mximo de kLa registrado, la cantidad de oxgeno suministrado es insuficiente para el cultivo, y por lo tanto, no ser adecuado para la produccin del biopolmero de inters. Teniendo como referencia el valor mximo de kLa registrado para el sistema convencional, se hace posteriormente la comparacin con el sistema de aireacin externo desarrollado.

Anlisis del sistema de fermentacin con aireador externo

Ilustracin 7 - Porcentaje de oxgeno disuelto en agua para el sistema convencional.

Diseo del dispositivo Los factores considerados para caracterizar el equipo de aireacin externo propuesto son los siguientes: Dimensiones Material de construccin que proporcione condiciones de higiene y esterilidad: se selecciona acero inoxidable 316 calibre 10, con conexiones sanitarias en SMS roscado; vlvulas de bola de acero inoxidable 304 con soldaduras en argn y conexiones para la manguera de entrada del gas y conduccin en manguera de la fase lquida y gas-liquido desde y hacia el reactor.

En la Ilustracin 7 se presentan los valores experimentales para la reaireacin del sistema de fermentacin convencional, y se calculan los valores de kLa asociados a cada condicin del diseo experimental. Se consolidan los resultados en la tabla 4.
Condiciones de ensayo 0.5 vvm; 200 rpm 1 vvm; 200 rpm 0.5 vvm; 300 rpm 1 vvm; 300 rpm kLa (h-1) 20.16 32.40 28.44 40.68

Tabla 4- valores de kLa en agua para el sistema convencional.

Una anotacin importante es que los primeros datos se ven afectados por el tiempo

Las condiciones de operacin a considerar son:

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Variables de control del proceso: Agitacin, caudal del lquido, caudal del gas, temperatura presin en el contacto gaslquido. Condiciones constantes: volumen del medio, geometra del reactor. Variables de respuesta: Oxgeno disuelto, cantidad de biomasa, pH, actividad enzimtica, kLa. Variable independiente: tiempo. Caracterizacin hidrodinmica

El medio de fermentacin empleado para la caracterizacin hidrodinmica es agua; y el punto central para la determinacin del error experimental es: flujo de recirculacin (FR) de 0.87 rpm, flujo de aire (FA) de 0.65 vvm, agitacin a 176 rpm y 18 C de temperatura. Las variables a medir son: aireacin, flujo de recirculacin, presin total, temperatura y agitacin. El equipo est integrado por un reactor Bioflo de 2 litros de capacidad, con volumen de operacin de 1,2 litros y aireador externo. La tcnica empleada es desgasificacin con nitrgeno. En la ilustracin 8 se muestra la configuracin del sistema de aireacin externo para la fermentacin con lactococcus lactis.

Se realiza la experimentacin variando las condiciones establecidas y con la informacin de la concentracin de oxgeno disuelto, se calcula el kLa correspondiente para cada ensayo. En la ilustracin 9 se muestra la variacin del kLa en funcin del flujo de recirculacin y el flujo de aire para el sistema. Se observa en esta grfica que la variable de flujo de recirculacin influye de manera notable en la transferencia de oxgeno, con valores obtenidos de hasta 90 h-1. Por otro lado, las variaciones en el nivel de aireacin no tienen un efecto significativo en el sistema estudiado con diferentes condiciones, lo que puede suceder debido a que los flujos de lquido pueden resultar bajos para los flujos de aire que se manejan en la zona de contacto gaslquido. Los resultados obtenidos concuerdan con los valores obtenidos experimentalmente en un desarrollo similar (Czermak, Weber, & Nehring, 2005), empleando microburbujeadores de cermica, con reactores similares de 2 y 5 litros de capacidad, con burbujeador interno. Los valores reportados en estos experimentos para el kLa oscilan entre 25 y 50 h-1 a condiciones mximas de aireacin de 0.1 vvm y 100 rpm de velocidad de agitacin.

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Ilustracin 8- Configuracin del sistema con aireador externo para la fermentacin con lactococcus lactis.

Ilustracin 9 -Variacin del kLa en funcin del flujo de recirculacin y el flujo de aire.

Ilustracin 10 -Variacin del kLa en funcin de la presin en el aireador externo, con un FR de 0.45 Re/m y FA de 0.65 vvm

En la ilustracin 10 se observa que la transferencia de oxgeno aumenta con el incremento de la presin, y logra un mximo valor cuando la presin est en 15 psi, lo que har que se aumente la velocidad de ingreso de oxgeno al proceso fermentativo. Cuando la presin en el sistema es de 20 psi se presenta una reduccin significativa en la transferencia

de oxgeno, lo cual puede explicarse por la estabilidad del sistema, debido a que se debe incrementar la presin de la lnea de gas para que se mantenga estable la presin en la cmara de contacto. Por otro lado, si el FR es bajo, se crean baches en el bombeo e inestabilidad en el sistema.

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Ilustracin 11 - Porcentaje de oxgeno disuelto en funcin del tiempo en la fermentacin con lactococcus lactis, con el sistema de aireacin externo.

En la ilustracin 11 se observa la variacin del kLa en funcin de la agitacin, con un flujo de aire de 1 vvm. Se evidencia que la agitacin influye de manera significativa en la transferencia de oxgeno, lo que resalta su importancia en el sistema de aireacin externo. La influencia de la agitacin en la transferencia de oxgeno se da porque dentro del reactor se posee una homogeneizacin del lquido cuando se difunde el gas dentro de este. Evaluacin del sistema de aireacin externo en el cultivo con lactococcus lactis cepa IBUN 34.1 Fermentaciones operacin variables en condiciones de

del cultivo y los niveles de biomasa final obtenidos, se consolidan en la ilustracin 11, y los experimentos transcurren de manera normal. Para la fase exponencial de las curvas, se calcularon los kLa correspondientes a diferentes condiciones de operacin mediante la tcnica dinmica, consistente en detener el suministro de aire hasta que se llegue a un valor cercano al estimado de la concentracin crtica, y luego se permite la reaireacin del sistema bajo las condiciones determinadas. Las curvas obtenidas se modelaron para la etapa I de la experimentacin (determinacin de la demanda de oxgeno), y para la etapa II (reaireacin), obteniendo el kLa con una ecuacin de la forma , siendo A y B constantes y , una constante correspondiente a kLa en s-1. Se utiliz el software Data Fit 9 Oakdale Engineering, versin libre del 2009 para hacer el ajuste de los datos.

Para evaluar el sistema, se emplea un medio de cultivo estndar para la fermentacin con lactococcus lactis, manteniendo la agitacin constante en 154 rpm y la temperatura en 30 C. Las curvas de crecimiento caractersticas

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Los resultados se muestran en la tabla 5. Puede observarse en la ilustracin 11 y en la tabla 5 que la demanda de oxgeno presenta una tendencia normal, la cual aumenta mientras transcurre el proceso de fermentacin, siendo dependiente de la biomasa viable.

misma tendencia y las etapas caractersticas del sistema convencional. Con las condiciones propuestas (con mayor flujo de recirculacin) se logra mantener por encima del 60 % de oxgeno disuelto durante la totalidad de la fase experimental de la fermentacin, suprimiendo la insuficiencia que se presenta para el sistema tradicional, como se observa en la ilustracin 13. Se observa que a condiciones con menor FR, el suministro de oxgeno sigue siendo bajo despus de la segunda hora; por esto, la alternativa propuesta es ms eficiente y cumple con el objetivo del trabajo. Partiendo de los resultados obtenidos en fermentaciones con condiciones variables, con actividades de 3.62 U/mL hidroltica y 3.55 U/mL glucosiltransferasa, puede afirmarse que al desarrollar un cultivo con alimento controlado de suministro de sacarosa y de oxgeno, y aumentando los flujos durante la fase exponencial, se lograra la fermentacin para la obtencin de la enzima sin la formacin del polmero.

Tabla 5- Demanda de oxgeno y kLa en fermentaciones con el prototipo de aireador externo.

Se presenta disminucin de la biomasa a partir del cuarto ensayo en la misma fermentacin, lo que puede deberse a la muerte de parte de la biomasa a casusa de la suspensin repetida del suministro de aire al sistema y de modificar las condiciones de operacin. Para el sexto ensayo se tiene le mayor valor de biomasa viable y tambin la mayor demanda de oxgeno durante las cercanas a terminar la fase exponencial. Con el fin de verificar la reproducibilidad entre los ensayos de un lote y el siguiente, se realiza una rplica del ensayo 6 para una concentracin de biomasa correspondiente a la etapa inicial de la fase exponencial. Se tiene como resultado un error de 1,6 % en el clculo del kLa, lo que indica la aceptabilidad del modelo experimental utilizado. Fermentaciones operacin fijas en condiciones de

Manteniendo fijo el medio de cultivo, las condiciones de operacin para esta parte de la experimentacin fueron: flujo de aire de .65 vvm, flujo de recirculacin de 0.45 y 0.87 Re/m, presin manomtrica en el aireador de 10 psi, velocidad de agitacin de 154 rpm y temperatura de 30 C. Las curvas de crecimiento microbiano se visualizan en la ilustracin 12, y a partir de los resultados, se puede analizar que las curvas mantienen la

Ilustracin 12 -Cintica de crecimiento microbiano en fermentaciones con el prototipo de aireador externo.

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AGRADECIMIENTOS La autora agradece al Instituto de Biotecnologa de la Universidad Nacional de Colombia por permitir el desarrollo del trabajo; a la Universidad Nacional de Colombia y a todas las personas que colaboraron con el desarrollo del proyecto y dieron apoyo durante todo el proceso del mismo. REFERENCIAS

Ilustracin 13 - Porcentaje de oxgeno disuelto en fermentaciones con el prototipo de aireador externo.

CONCLUSIONES Con los resultados de la evaluacin del sistema tradicional de fermentacin conformado por un reactor agitado y sistema difusor interno, se confirma que incluso a mximas condiciones de operacin, se presenta insuficiencia en el suministro de oxgeno para el proceso fermentativo con lactococcus lactis cepa IBUN 34.1. Se determina que al aumentar la agitacin, se aumenta el coeficiente volumtrico de transferencia de oxgeno. En contraste, al realizar modificaciones en la aireacin, se no se presentan incrementos tan significativos en el kLa. Segn la caracterizacin hidrodinmica del sistema, las variables determinantes en la fermentacin son el flujo de recirculacin y la velocidad de agitacin en el reactor, logrado un valor mximo de kLa de 63,18 h-1, partiendo de un valor de 40,68 h-1 con el sistema convencional. La eliminacin de la insuficiencia en el suministro de oxgeno para la fermentacin con lactococcus lactis se logra empleando el sistema de aireacin externo propuesto, a condiciones de operacin de 0.65 vvm de aireacin, presin manomtrica de 10 psi y flujo recirculacin de 0.87 CPM.

Bandaiphet, C. (2006). Efect of aireation and agitation rates and scale-up on oxygen transfer coeficient, kLa in exopolysaccharide production from Enterobacter cloacae WD7 Carbohydrate Polymers. Bogoya, W. (2007). Evaluacin de la purificacin de la enzima glucansacarasa de Lactococcus lactis subsp. lactis. Cepa IBUN 34.1 para la produccin de un biopolmero. Tesis de grado Msc Ingeniera Qumica, Universidad Nacional de Colombia. Bogot. Czermak, P., Weber, C., & Nehring, D. (2005). A ceramic microsparging aeration system for cell culture reactors. Publication Series of Institute of Biopharmaceutical Technology. Mataragas, M., & Metaxopoulos, L. (2003). Influence of pH and temperature on growth and bacteriocin production by Leuconostoc mesenteroides L124 and Lactobacillus curvatus L442. Meat Science, 265-271.

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