Gentica microbiana

Nucleotdeos
a unidade formadora dos cidos nuclicos: DNA e RNA. composto por um radical fosfato, uma pentose (ribose RNA e desoxirribose DNA) e uma base nitrogenada (Adenina, Guanina, Citosina, Timina e Uracila).

cido ribonuclico (RNA), formado por ribonucleotdeos cido desoxirribonuclico (DNA), formado por desoxirribonucleotdeos

DNA
Adenina Guanina

RNA

Citosina

Timina

Uracila

Estrutura das cinco bases encontradas nos cidos nuclicos, com abreviaturas e nomenclatura

DNA
cido Desoxirribonuclico. Molcula de fita dupla formando uma dupla hlice As fitas esto unidas pelas ligaes de Hidrognio A=T C=G

O DNA apresenta estrutura em dupla fita, com pareamento obrigatrio: A sempre com T C sempre com G

Os pares de bases de Watson-Crick

A existncia de sulcos diferentes (maior e menor) se deve: (1) s diferentes estruturas das bordas superior e inferior das bases (2) assimetria dos resduos de desoxirribose

Watson e Crick tambm propuseram uma disposio em hlice (parafuso) das duas fitas complementares A estrutura ao lado corresponde ao que hoje se chama de dupla hlice

Ateno para os sulcos maior e menor ao longo da hlice

Um cromossomo uma estrutura densa no interior da clula que carrega fisicamente informaes hereditrias de uma gerao para outra Cada clula bacteriana possui apenas um cromossomo, consistindo em uma molcula de DNA de fita dupla na forma circular O cromossomo procaritico no envolto pela membrana nuclear Uma clula bacteriana pode conter um ou mais plasmdeos = molculas de DNA de fita dupla menores que os cromossomos que podem replicar-se independentemente dos cromossomos A maioria so molculas de DNA circulares

O cromossomo de microrganismos eucariticos consiste em uma nica molcula longa de DNA de fita dupla Durante a diviso, os cromossomos tornam-se firmemente entrelaados em uma forma condensada que pode ser vista com um microscpio comum Cada cromossomo eucaritico linear As molculas de DNA so pelo menos 10 vezes mais longas que as das bactrias H normalmente mais que um cromossomo por clula

Duplicao do DNA
a nica molcula capaz de sofrer auto autoduplicao. duplicao Ocorre durante a fase S da intrfase intrfase. do tipo semiconservativa semiconservativa, pois cada molcula nova apresenta uma das fitas vinda da me e outra fita recm sintetizada.

DNA

Duplicao

DNA

DNA

A replicao semi-conservativa foi provada em experimentos nos quais o DNA de Eschericchia coli foi inicialmente marcado com 15N, mais pesado; nas geraes sucessoras, cultivadas sem 15N, formaramse DNAs hbridos, que no se formariam se a replicao no fosse semiconservativa

Todas as DNA polimerases operam na direo 5' 3' a partir de um molde antiparalelo

A replicao semiconservativa se d a partir de forquilhas de replicao

Auto-radiografias obtidas com [3H]timidina revelam a estrutura (olho de replicao)

Diferenciao autoradiogrfica da replicao unidirecional e bidirecional do DNA

Aps marcao fraca com [3H]timidina, uma suspenso de E. coli recebe um pulso de grande quantidade de [3H]timidina. Alguns segundos aps isola-se o DNA para fazer autorradiografia. Espera-se padres diferentes para cada tipo de replicao

Todas as DNA polimerases conhecidas so capazes de estender fitas de DNA apenas na direo 5' 3' Como, ento, se d a sntese na direo 3' 5' da forquilha de replicao?

O que ocorre uma replicao descontnua numa direo e contnua na outra; os fragmentos (de Okasaki) so unidos mais tarde por uma ligase

Todas as DNA polimerases precisam de um grupo 3'-OH para estender a cadeia de DNA Como, ento, se inicia a sntese de DNA? Uma enzima chamada primase (insensvel rifampicina) sintetiza um PRIMER de RNA tanto na fita lider como nos fragmentos de Okasaki

Uma RNA polimerase pode sintetizar tambm um primer da fita lder

Provvel sequncia de eventos durante a iniciao da replicao em E. coli na regio oriC Os tetrmeros da protena DnaA ligam a cada um dos 9 pb repetidos no oriC Molculas adicionais de DnaA ligam para formar uma espcie de nucleossomo As trs regies de 13 pb ricas em A-T so ento "fundidas" A protena DnaB separa-se do complexo DnaB-DnaC e entra na regio em fuso e a atividade helicase da DnaB mantm a conformao randmica A protena SSB liga para estabilizar as fitas separadas

Representao do conjunto replissomo em cada forquilha de replicao

PROTENA
DNA girase SSB
DnaA

FUNO
Desespiraliza o DNA Ligao e estabilizao da fita simples do DNA Fator de iniciao Ligao e estabilizao do DNA (semelhante a histonas) Montagem do primosso, 3'5' helicase Montagem do primossomo Montagem do primossomo 3'5' helicase (desespiraliza o DNA) Chaperona DnaB Auxilia o DnaC na liberao do DnaB Sntese do primer de RNA Elongao (sntese propriamente dita do DNA) Elimina o primer de RNA, preenchendo com DNA Liga covalentemente os fragmentos de Okazaki Trmino

HU PriA PriB PriC DnaB DnaC DnaT Primase (iniciase) DNA polimerase III DNA polimerase I DNA ligase Ter

RNA
cido Ribonuclico Molcula de fita simples dividido em: RNA mensageiro (RNAm RNAm) RNA transportador (RNAt RNAt) RNA ribossmico (RNAr RNAr)

RNAm
Leva a informao da seqncia protica a ser formada do ncleo para o citoplasma, onde ocorre a traduo. Ele contm uma seqncia de trincas correspondente a uma das fitas do DNA. Cada trinca (trs nucleotdeos) no RNAm denominada cdon e corresponde a um aminocido na protena que ir se formar

1 cdon

3 nucleotdeos no RNAm

7 cdons

21 nucleotdeos

2a base U
UUU (Phe/F) Fenilalanina UUC (Phe/F) Fenilalanina U UUA (Leu/L) Leucina UUG (Leu/L) Leucina

C
UCU (Ser/S) Serina UCC (Ser/S) Serina UCA (Ser/S) Serina UCG (Ser/S) Serina

A
UAU (Tyr/Y) Tirosina UAC (Tyr/Y) Tirosina UAA "Ocre" (Stop) UAG "mbar" (Stop)

G
UGU (Cys/C) Cistena UGC (Cys/C) Cistena UGA "Opala" (Stop) UGG (Trp/W) Triptofano

CUU (Leu/L) Leucina CUC (Leu/L) Leucina C CUA (Leu/L) Leucina CUG (Leu/L) Leucina

CCU (Pro/P) Prolina CCC (Pro/P) Prolina CCA (Pro/P) Prolina CCG (Pro/P) Prolina

CAU (His/H) Histidina CAC (His/H) Histidina CAA (Gln/Q) Glutamina CAG (Gln/Q) Glutamina

CGU (Arg/R) Arginina CGC (Arg/R) Arginina CGA (Arg/R) Arginina CGG (Arg/R) Arginina

1a base

AUU (Ile/I) Isoleucina AUC (Ile/I) Isoleucina A AUA (Ile/I) Isoleucina AUG (Met/M) Metionina, Start

ACU (Thr/T)Treonina ACC (Thr/T)Treonina ACA (Thr/T)Treonina ACG (Thr/T)Treonina

AAU (Asn/N) Asparagina AAC (Asn/N) Asparagina AAA (Lys/K) Lisina AAG (Lys/K) Lisina

AGU (Ser/S) Serina AGC (Ser/S) Serina AGA (Arg/R) Arginina AGG (Arg/R) Arginina

GUU (Val/V) Valina GUC (Val/V) Valina G GUA (Val/V) Valina GUG (Val/V) Valina

GCU (Ala/A) Alanina GCC (Ala/A) Alanina GCA (Ala/A) Alanina GCG (Ala/A) Alanina

GAU (Asp/D) cido asprtico GGU (Gly/G) Glicina GAC (Asp/D) cido asprtico GGC (Gly/G) Glicina GAA (Glu/E) cido glutmico GGA (Gly/G) Glicina GAG (Glu/E) cido glutmico GGG (Gly/G) Glicina

RNAt
Levam os aminocidos para o RNAm durante o processo de sntese protica. As molculas de RNAt apresentam, em uma determinada regio, uma trinca de nucleotdeos que se destaca, denominada anticdon. atravs do anticdon que o RNAt reconhece o local do RNAm onde deve ser colocado o aminocido por ele transportado. Cada RNAt carrega em aminocido especfico, de acordo com o anticdon que possui

Stio de ligao ao aminocido

U A C

Anti-cdon

RNAr
So componentes dos ribossomos, organela onde ocorre a sntese protica. Os ribossomos so formados por RNAr e protenas

Aminocidos
Molculas que do origem s protenas.

R H N H H C C OH O

Ligao Peptdica
a ligao covalente entre dois aminocidos. Quando poucos aminocidos esto ligados peptdeo Quando muitos aminocidos esto ligados protena

 O grupo OH do cido carboxlico de um aminocido se liga em um dos hidrognios da amina do outro aminocido, formando uma molcula de gua.

R H N H H C C OH H O H N

R O C C OH H

H 2O

 Um dos carbonos de um aminocido agora est instvel

porque est fazendo apenas trs ligaes, ao invs de quatro. O mesmo est acontecendo com o nitrognio do outro aminocido, pois esse est fazendo duas ligaes, ao invs de trs.

R H N H H C C O H N

R O C C OH H

 Ento uma ligao covalente entre o carbono de um

aminocido e o nitrognio do outro acontece. essa ligao a ligao peptdica.

R H N H H
Ligao Peptdica

R O H N C C OH H O C

Transcrio
Processo pelo qual uma molcula de RNA produzida usando como molde o DNA.

DNA-polimerases dirigidas por RNA ocorrem em vrus (transcriptase reversa)

RNA-polimerases dirigidas por RNA ocorrem em vrus e plantas

DNA

Transcrio

DNA

RNA

Traduo
Tambm chamada sntese de protenas Quando o RNAm chega ao citoplasma ele se associa ao ribossomo. Aps essa associao os RNAt levam os aminocidos, que sero ligados, formando assim a protena.

 Quando o RNAm chega ao citoplasma, ele se associa ao ribossomo. Nessa organela existem 2 espaos onde entram os RNAt com aminocidos especficos. UAC AAA AUG UUU CUU GAC CCC UGA

somente os RNAt que tm seqncia do anti-cdon complementar seqncia do cdon entram no ribossomo.

 Uma enzima presente na subunidade maior do ribossomo realiza a ligao peptdica entre os aminocidos.

UAC AAA AUG UUU CUU GAC CCC UGA

 O RNAt vazio volta para o citoplasma para se ligar a outro aminocido.

UAC

AAA AUG UUU CUU GAC CCC UGA

 O ribossomo agora se desloca uma distncia de 1 cdon. o espao vazio preenchido por um outro RNAt com seqncia do anti-cdon complementar seqncia do cdon. AAA GAA AUG UUU CUU GAC CCC UGA

UAC

 Uma enzima presente na subunidade maior do ribossomo realiza a ligao peptdica entre os aminocidos. UAC

AAA GAA AUG UUU CUU GAC CCC UGA

UAC

AAA GAA AUG UUU CUU GAC CCC UGA

O RNAt vazio volta para o citoplasma para se ligar a outro aminocido. e assim o ribossomo vai se deslocando ao longo do RNAm e os aminocidos so ligados.

 Quando o ribossomo passa por um cdon de terminao nenhum RNAt entra no ribossomo, porque na clula no existem RNAt com seqncias complementares aos cdons de terminao.

GGG AUG UUU CUU GAC CCC UGA

Cdon de terminao

GGG Ento o ribossomo se solta do RNAm, a protena recm formada liberada e o RNAm degradado.

AUG UUU CUU GAC CCC UGA

Variabilidade em microrganismos
Associada a duas propriedades:
Gentipo: potencial total herdado
Procariotos: cromossomo + qualquer DNA presente (p. ex. plasmdios) Eucariotos: cromossomo + DNA organelas

Fentipo: poro expressa do gentipo

ex. Azomonas spp. meio com sacarose: colnias mucosas meio sem sacarose: colnicas secas

Variaes genotpicas
Ocorre graas a dois mecanismos:
Mutaes Recombinao gentica

Mutaes
So alteraes ou modificaes sbitas em genes ou cromossomos, podendo acarretar variao hereditria. As mutaes podem ser gnicas quando alteram a estrutura do DNA ou cromossmicas quando alteram a estrutura ou o nmero de cromossomos.

Mutaes
As mutaes so espontneas e podem ser silenciosas, ou seja, no alterar a protena ou sua ao. Podem ainda ser letais, quando provocam a morte, ou ainda acarretar doenas ou anomalias. As mutaes tambm promovem a evoluo j que determinam aumento na variabilidade gentica.

Mutaes Gnicas
As mutaes gnicas so responsveis por alteraes nos genes e conseqentemente nas protenas, determinando, muitas vezes, a formao de novas protenas ou alterando a ao de enzimas importantes no metabolismo.

Mutaes Gnicas
Alteram uma ou mais bases do DNA, o que afetar a leitura durante a replicao ou durante a transcrio. Podem ser transmitidas hereditariamente quando ocorrem nas clulas germinativas. Quando ocorrem em clulas somticas podem provocar a formao de tumores.

Tipos de Mutaes Gnicas

ocorre a troca de um Substituio ou mais pares de bases.

Mutaes Gnicas
Adio acontece quando uma ou mais bases so adicionadas ao DNA, modificando a ordem de leitura da molcula durante a replicao ou a transcrio.

Mutaes Gnicas
Deleo acontece quando uma ou mais bases so retiradas do DNA, modificando a ordem da leitura, durante a replicao ou a transcrio.

Recombinao gentica
Transformao
Avery, MacLeod & McCarthy (1944)

Conjugao
Ledeberg & Tatum (1946)

Transduo
Zinder & Ledeberg (1952)

Recombinao gentica
Transformao

Recombinao gentica

Recombinao gentica
Conjugao
Ledeberg & Tatum (1946)

Natureza:
contato entre clulas plasmdeo ou cromossomo

Conjugao

http://highered.mcgraw-hill.com/sites/0072437316/student_view0/chapter20/animations.html#

Conjugao

Recombinao gentica
Transduo
Lederberg & Zinder (1952): Salmonella typhimurium

Natureza:
vrus como vetor (bacterifagos ou fagos) generalizada e especializada

Transduo generalizada

Regulao Gnica

Expresso gnica em resposta ao ambiente

E. coli resposta rpida a mudanas ambientais Se um aminocido est ausente no meio, ela produz as enzimas necessrias para produzi-lo

Regulao Gnica
Bactria: liga e desliga genes em resposta a mudanas ambientais Eucariotos: causa a diferenciao celular, produzindo tecidos especializados para determinadas tarefas

DNA e expresso
Genes estruturais: codificam protenas usadas no metabolismo, biossntese ou estrutura da clula. Genes reguladores: codificam protenas ou RNA que interagem com outras seqncias de DNA e afetam sua transcrio ou traduo. Elementos reguladores: no so transcritos mas afetam a expresso das seqncias s quais esto ligados.