INGENIERIA GENETICA

La ingeniera gentica es la tecnologa del control y transferencia de ADN de un organismo a otro, lo que posibilita la creacin de nuevas especies, la correccin de defectos genticos y la fabricacin de numerosos compuestos

La tecnologa del ADN recombinante[editar]

A. tumefaciens adhirindose a una clula de zanahoria.

Con la que es posible aislar y manipular un fragmento de ADN de un organismo para introducirlo en otro. Si se quieren unir dos ADNs, cada uno de los cuales procede de una especie diferente podemos utilizar dichas enzimas como herramientas. Cada ADN se trata con una endonucleasa de restriccin que origina en este caso un corte escalonado en las dos hebras dobles de ADN. Los extremos escalonados del ADN1 y el ADN2 son complementarios, con lo cual, una condicin que tiene que tener los dos ADNs que se quiere unir es que tengan un pequeo fragmento igual en sus secuencias. Los dos DNAs as cortados se mezclan, se calientan y s enfran suavemente. Sus extremos cohesivos se aparearn dando lugar a un nuevo ADN recombinado, con uniones no covalentes. Las uniones covalentes se consiguen aadiendo ADN ligasa y una fuente energtica para formar los enlaces. Otra enzima clave para unir ADNs es la transferencia terminal, que puede adicionar muchos residuos de desoxirribonucletidos sucesivos al extremo 3de las hebras del ADN. De este modo pueden construirse colas de poli G (nucletico de guanina) en los extremos 3 de las dos hebras de ADN dplex y colas de poli C (nucletico de citosina) en los extremos del otro ADN. Como estas colas son complementarias, permitirn que los dos ADNs se unan por complementariedad. Posteriormente, se forman los enlaces covalentes por el ADN ligasa. El ADN vector es el vehculo de clonacin, ya que transporta el inserto de ADN a una molcula hospedadora, donde puede ser replicado. Los vectores o transportadores ms utilizados son los plsmidos y el ADN del fago lambda. Plsmidos: Estos son pequeos ADNs de cadena doble y circular, que se encuentran en el citoplasma de la mayora de las bacterias. Cadaplsmido contiene varios genes que se replican, transcriben y traducen independientemente de los genes del cromforo bacteriano, pero simultneamente en el tiempo.

La tecnologa del ADN recombinante[editar]

A. tumefaciens adhirindose a una clula de zanahoria.

Con la que es posible aislar y manipular un fragmento de ADN de un organismo para introducirlo en otro. Si se quieren unir dos ADNs, cada uno de los cuales procede de una especie diferente podemos utilizar dichas enzimas como herramientas. Cada ADN se trata con una endonucleasa de restriccin que origina en este caso un corte escalonado en las dos hebras dobles de ADN. Los extremos escalonados del ADN1 y el ADN2 son complementarios, con lo cual, una condicin que tiene que tener los dos ADNs que se quiere unir es que tengan un pequeo fragmento igual en sus secuencias. Los dos DNAs as cortados se mezclan, se calientan y s enfran suavemente. Sus extremos cohesivos se aparearn dando lugar a un nuevo ADN recombinado, con uniones no covalentes. Las uniones covalentes se consiguen aadiendo ADN ligasa y una fuente energtica para formar los enlaces. Otra enzima clave para unir ADNs es la transferencia terminal, que puede adicionar muchos residuos de desoxirribonucletidos sucesivos al extremo 3de las hebras del ADN. De este modo pueden construirse colas de poli G (nucletico de guanina) en los extremos 3 de las dos hebras de ADN dplex y colas de poli C (nucletico de citosina) en los extremos del otro ADN. Como estas colas son complementarias, permitirn que los dos ADNs se unan por complementariedad. Posteriormente, se forman los enlaces covalentes por el ADN ligasa. El ADN vector es el vehculo de clonacin, ya que transporta el inserto de ADN a una molcula hospedadora, donde puede ser replicado. Los vectores o transportadores ms utilizados son los plsmidos y el ADN del fago lambda. Plsmidos: Estos son pequeos ADNs de cadena doble y circular, que se encuentran en el citoplasma de la mayora de las bacterias. Cadaplsmido contiene varios genes que se replican, transcriben y traducen independientemente de los genes del cromforo bacteriano, pero simultneamente en el tiempo. Se pueden unir genes extraos a los plsmidos con mucha facilidad, y despus ser transportados como pasajeros al interior de las clulas de E. coli. ADN del fago lambda. Es otro vector que puede ser utilizado para introducir genes en bacterias. Cuando el ADN recombinado del fago lambda, con su gen pasajero, se mezcla con

la cubierta del virus lambda, se producen partculas fgicas infecciosas, si el tamao del ADN recombinado no es muy distinto del ADN natural del virus lambda. Los procesos de clonacin y de aislamiento de estos fragmentos se inician con la construccin de una biblioteca de ADN o un banco de ADN. stas estn formadas por todas las molculas de plsmidos o fagos recombinantes originados al unir un ADN a un vector. Las bibliotecas deben cumplir la caracterstica de poder introducirse en clulas donde cada recombinante pueda aplicarse in vivo.

La secuenciacin del ADN[editar]

Tcnica que permite saber el orden o secuencia de los nucletidos que forman parte de un gen. Abreviadamente, ste sera el mtodo a seguir: Como la tcnica se basa en la sntesis de ADN, para hacer la reaccin de secuenciacin se necesita: Como "molde" se utiliza una de las cadenas del fragmento de ADN que se va a secuenciar. Como "cebador" para iniciar la sntesis, se necesita un corto oligonucletido complementario del extremo de la cadena. Desoxinucletidos de las cuatro bases: dAMP, dTMP, dGMP, dCMP. Didesoxinucletidos de una base en cada una de las cuatro reacciones de secuenciacin.

Al aadir la ADN-polimerasa, comienza la polimerizacin en el cebador, pero cesa al incorporarse un didesoxinucletido. Se produce un conjunto de cadenas dobles cuyas longitudes dependen de la situacin del didesoxinucletido incorporado. Deben prepararse cuatro reacciones de secuenciacin, cada una con un didesoxi distinto. Los fragmentos resultantes se separan por tamao mediante electroforesis, se autorradiografa, y la sucesin de bandas de cada una de las cuatro reacciones, comparndolas entre s, dan la secuencia del ADN.

La reaccin en cadena de la polimerasa (PCR)[editar]

Con la que se consigue aumentar el nmero de copias de un fragmento determinado de ADN, por lo tanto, con una mnima cantidad de muestra de ADN, se puede conseguir toda la que se necesite para un determinado estudio. La tcnica de la PCR consiste en: 1. En un tubito se mezcla el ADN molde, los dos cebadores (oligonucletidos), los cuatro dNTPs y el ADN-polimerasa termorresistente. 2. Se calienta a 110 C durante 5 min, con lo que se separan las cadenas del ADN molde a amplificar, generndose las correspondientes cadenas sencillas. 3. Se baja la temperatura en torno a los 60 C, de modo que cada cebador se empareja con el extremo correspondiente de una de las cadenas del molde. Se dice que ahora tenemos los moldes cebados. 4. Se sube la temperatura hasta 72 C (la ptima de funcionamiento de la polimerasa Taq), y se deja durante 5 min, tiempo durante el que se est produciendo la sntesis in vitro de las cadenas complementarias de cada hebra molde. 5. Se sube la temperatura a 94 C durante 20 segundos, suficientes para separar la cadena recin sintetizada respecto del molde original.

Biotecnologa gentica[editar]
En la dcada de 1970 se abrieron nuevas perspectivas en el campo de las biotecnologas gracias a la elaboracin de nuevas tcnicas que permiten llegar directamente al material que est en el origen de todas las caractersticas y procesos vitales, es decir, el ADN. Este conjunto de tcnicas moleculares de manipulacin gentica recibe el nombre de ingeniera gentica. Su objetivo es la manipulacin in Vitro del ADN, la introduccin de este ADN as modificado en clulas vivas y la incorporacin del mismo como parte del material hereditario de dichas clulas. De este modo, ADN de diversas procedencias, por ejemplo, la fraccin de ADN humano regula la sntesis de insulina, puede introducirse en bacterias de manera que pasa a formar parte de su genoma y lograr as que la bacteria adquiera la capacidad de elaborar insulina.

Terapia gentica[editar]
La terapia gentica consiste en sustituir o aadir, segn el caso, una copia normal de la regin defectuosa del ADN para poder solucionar y restablecer la funcin alterada, evitando el desarrollo de enfermedades de origen gentico, como por ejemplo la facultad defensiva ante las enfermedades infecciosas. Las enfermedades con las que se ha empezado a trabajar son, entre otras, la deficiencia de la enzima ADA (adenosina desaminasa), conocida como la de los nios burbuja y la DMD o distrofia muscular de Duchenne. La posibilidad de curar las enfermedades genticas con un tratamiento especfico justifica lo esfuerzos que se estn realizando en este sentido.

Implicaciones ticas[editar]
La ingeniera tiene aplicaciones en campos muy diversos; dos de los ms importantes son la medicina y la creacin de nuevas especies o mejora de las existentes. El progreso en estos mbitos puede aportar resultados capaces de aliviar algunos problemas de gran importancia, pero no se debe olvidar que la explotacin comercial de las tecnologas requeridas slo est al alcance de unas pocas empresas multinacionales. Como era de esperar, la tradicional dependencia econmica de los pases subdesarrollados tiene en la ingeniera gentica un nuevo elemento de desequilibrio. En otro orden de cosas, la ingeniera gentica puede plantear graves problemas ticos. Hay opiniones muy diversas sobre dnde han de situarse los lmites de manipulacin del material que est en la base de todos los procesos vitales. Al inicio de los experimentos del ADN recombinante, varios investigadores mostraron su preocupacin por los riesgo que se pueden realizar con dichas tcnicas, en varios pases se crearon comits para discutir el uso y la aplicacin de tcnicas de ingeniera gentica. Lamentablemente est limitada por fuerzas polticas y por la presin de las empresas 1 involucradas en el desarrollo y la comercializacin de los productos biotecnolgicos. Es necesario la participacin de cada ciudadano sobre la informacin para tener un criterio respecto al tema ya que esto no puede ser resuelto solo por expertos, quien tiene la decisin final es la sociedad en decidir qu se debe hacer

ESTRACCION DE ADN La extraccin de ADN requiere una serie de etapas bsicas. En primer lugar tienen que romperse la pared celular y la membrana plasmtica para poder acceder al ncleo de la clula. A continuacin debe romperse tambin la membrana nuclear para dejar libre el ADN. Por ltimo hay que proteger el ADN de enzimas que puedan degradarlo y para aislarlo hay que hacer que precipite en alcohol. La solucin de lavavajillas y sal ayudada por la accin de la licuadora es capaz de romper la pared celular y las membranas plasmtica y nuclear. Los zumos de pia y papaya contienen un enzima, la papana, que contribuye a eliminar las protenas que puedan contaminar el ADN. El alcohol se utiliza para precipitar el ADN que es soluble en agua pero, cuando se encuentra en alcohol se desenrolla y precipita en la interfase entre el alcohol y el agua.

PSR Y ELECTROFORESIS

La tcnica conocida como PCR por sus siglas en ingls (Polymerase Chain Reaction), es una tcnica de biologa molecular cuyo objetivo es obtener un gran nmero de copias de un fragmento de ADN particular, partiendo de un mnimo. La electroforesis constituye parte importante del procedimiento rutinario del anlisis de los cidos nucleicos y protenas. Y as como el microscopio permite visualizar microorganismos y estructuras similares, la electroforesis nos ayuda a observar los cidos nucleicos y protenas al final del procedimiento. EL proceso de electroforesis se basa en la migracin de las molculas con carga neta de una muestra, cuando es sometida a un campo elctrico, hacia el polo opuesto de su carga.