Medio utilizado para el cultivo de microorganismos a partir de
muestras de sangre. FUNDAMENTO Los frascos ( ) para hemocultivo permiten el desarrollo de microorganismos aerbicos y anaerbicos y estn especialmen- te indicados para el mtodo de los cultivos lquidos. En esta tcni- ca, la sangre es extrada aspticamente y se introduce en el frasco el cual contiene el medio que provee los requerimientos nutritivos y ambientales para aquellos grmenes comnmente hallados en bacteriemias. Las bacteriemias estn relacionadas a diferentes procesos infec- ciosos, y probablemente se produzca en alguna etapa de todas las infecciones. Bacteriemia no implica necesariamente enfermedad. Puede producirse transitoriamente como resultado de tratamientos odontolgicos u otros manipuleos. Pero debido a que solamente se indican hemocultivos en pacientes bajo sospecha de infeccin o en aquellos altamente susceptibles como los sometidos a ciruga cardiovascular, el hallazgo de una bacteriemia debe constituir un llamado de atencin. Los principales factores de fracaso en esta tcnica son las propiedades bactericidas del suero del enfermo y la coagulacin de la sangre, ya que en el cogulo pueden que- dar atrapadas las bacterias. La accin bactericida se supera au- mentando la relacin de dilucin sangre-medio. La coagulacin se previene bastante por la dilucin, pero adems por el empleo de anticoagulantes apropiados. Algunos tales como el clsico citrato de sodio mostraron accin txica sobre las bacterias. El empleo de polianetol-sulfonato de sodio es mucho ms efectivo y su introduc- cin ha mejorado esta tcnica, dado que adems de su capacidad anticoagulante, acta tambin como inhibidor del poder bacterici- da del complemento y de la actividad fagocitaria de los leucocitos. Debido a que en algunos procesos infecciosos, el nmero de orga- nismos por ml de sangre es muy escaso (menos de 1 por ml), se requieren grandes volmenes de muestra y por ende, ms cantidad de medio y envases de mayor tamao. Tal como se indica desde la revisin del Cumitech 1 sobre Hemocultivos, para detectar una bacteriemia o funguemia debe existir por lo menos un microorga- nismo viable por ml presente en la muestra de sangre a cultivar. Anteriormente se aconsejaba la extraccin de 2 a 10 ml de sangre para efectuar cultivos, pero trabajos como los de J. A. Washington II, H. H. Tenney y M.M. Hall entre otros, han puesto nfasis sobre la existencia de una relacin entre el volumen de sangre cultivado y la recuperacin de microorganismos. Inclusive hay quienes sostienen que en la deteccin de una sepsis en el laboratorio, el volumen de la muestra tendra mayor importancia que el medio empleado Hemocultivos B0720489 B0720588 B0720483 B0720585 B0720581 B0720490 B0720586 B0720484 HOJA 1 DE 5 o las condiciones de incubacin. Muestras de muy bajo volumen, dicultarn el hallazgo de un importante nmero de bacteriemias en adultos, segn los informes de P. Sandven y J. H. Tenney, lo cual conduce a considerar la cantidad de 10 ml en adultos como el volumen mnimo aconsejable para cada cultivo, volumen tambin considerado por la Clnica Mayo de Estados Unidos. Dado que mayor cantidad de muestra exigira la inoculacin de 2 o ms frascos convencionales, a efectos de mantener la relacin adecuada sangre/medio, Laboratorios Britania adhiere a la ten- dencia de emplear frascos con mayor volumen de medio de cultivo. Adems, Britania mantiene la posibilidad de eleccin segn las situaciones que se presenten en la prctica clnica. Pueden em- plearse frascos con 100 ml de medio o los clsicos con 50 ml, pero teniendo en cuenta que los de mayor capacidad al permitir inculos mayores, estn especialmente indicados cuando se sospechan gr- menes en escaso nmero o con exigencias nutricionales tales co- mo Haemophilus inuenzae, Neisseria meningitidis, Streptococcus spp., todos ellos agentes etiolgicos de cuadros spticos severos. Existen ciertas variantes de estreptococos dependientes. Algu- nas de estas cepas necesitan tiol o piridoxal para desarrollar. Se considera que en la sangre humana se hallan los nutrientes su- cientes que permiten su recuperacin, pero puede ser necesario suplementar los subcultivos con clorhidrato de piridoxal (0.001%), o L-cistena (0.05-0.1%). Estas sustancias estn incluidas, en todos los Hemocultivos Britania. Importancia Clnica de los Hemocultivos - La presencia de microorganismos vivos en episodios de bacterie- mias y/o septicemias est asociado con una considerable morbili- dad y mortalidad. - De acuerdo a la literatura, entre el 20-50% de los pacientes con episodios de bacteriemias o funguemias fallecen. - La mayora de los episodios de sepsis ocurren en hospitales y son debidos a microorganismos con alta resistencia a los antimi- crobianos. - La invasin de la sangre por microorganismos generalmente ocu- rre por drenaje del foco primario de infeccin, va linftica al sistema vascular o directamente a travs de agujas o material intravascular contaminado tales como catteres o injertos. Por lo tanto la bacte- riemia puede ser: Transitoria: por ejemplo abscesos, fornculos, manipulacin den- tal, celulitis, cistoscopias, endoscopa gastrointestinal, neumonas, meningitis, artritis sptica, osteomielitis hematgena aguda. Intermitente: abscesos que no drenan (intraabdominales, plvicos, hepticos, prostticos). Infecciones focales que simulan neumonia u osteomielitis. Hemocultivos HOJA 2 DE 5 Contnua: endocarditis, tromboebitis infectadas, aneurismas, bru- celosis, ebre tifoidea. Agentes etiolgicos de bacteriemias: El espectro de microorganismos que invade la sangre en adultos ha sido sistemticamente evaluado en numerosos estudios en los ltimos aos. Los ms frecuentes siguen siendo Staphylococcus aureus y Es- cherichia coli. Existe un marcado incremento de Staphylococcus coagulasa nega- tiva. Otros cambios importantes son el incremento de funguemias, bacteriemias por Enterococos, micobacteriemias asociadas al sn- drome de inmunodeciencia adquirida (SIDA) y tambin la reduc- cin de las bacteriemias por anaerobios. En los pacientes peditricos los agentes causales son general- mente los mismos que para los adultos y son raramente debido a microorganismos anaerobios. La bacteriemia por Haemophilus inuenzae, antiguamente comn en pacientes peditricos, ha dis- minudo pues se ha incrementado la inmunizacin contra Haemo- philus inuenzae tipo b. En los neonatos son frecuentes las bacteriemias por enterobac- terias. Microorganismos ms frecuentes en orden porcentual de apari- cin: - Staphylococcus aureus. - Escherichia coli. - Estalococos coagulasa negativa. - Klebsiella pneumoniae. - Enterococcus spp. - Pseudomonas aeruginosa. - Streptococcus pneumoniae. - Esteptococos del grupo viridans. - Streptococcus pyogenes. - Candida albicans. - Enterobacter cloacae. - Bacteroides fragilis. CONTENIDO Y COMPOSICIN Cdigo B0720586: HEMOCULTIVO NEONATAL (AERBICO): 12 frascos x 10 ml. Cdigo B0720581: HEMOCULTIVO NEONATAL (AERBICO): 100 frascos x 10 ml. Envase Hospitalario. Cdigo B0720483: HEMOCULTIVO PEDITRICO (MULTIPRO- PSITO): 6 frascos x 20 ml. Cdigo B0720489: HEMOCULTIVO PEDITRICO (MULTIPRO- PSITO): 60 frascos x 20 ml. Envase Hospitalario. Cdigo B0720484: HEMOCULTIVO ADULTO (MULTIPROPSI- TO): 6 frascos x 50 ml. Cdigo B0720490: HEMOCULTIVO ADULTO (MULTIPROPSI- TO): 60 frascos x 50 ml. Envase Hospitalario. Cdigo B0720585: HEMO-100: 6 frascos x 100 ml. Cdigo B0720588: HEMO-100: 30 frascos x 100 ml. Envase Hospitalario. Cada frasco de Hemocultivo contiene los siguientes compo- nentes: - Medio basal: Preparado a partir de medio infusin cerebro cora- zn, extracto de levadura, cistina, y una mezcla de cofactores, vitami- nas y minerales. Su composicin permite el desarrollo de bacterias nutricionalmente exigentes que puedan ser causa de bacteriemias. - Polianetol sulfonato de sodio (PSS): 0,03%: Anticoagulante con actividad anticomplementaria que inhibe parcialmente la capa- cidad fagocitaria de los leucocitos y a ciertos antibiticos aminoglu- csidos y polipeptdicos. - Menadiona: 0,5 ug/ml. Hemina: 5 ug/ml: Requeridos para el desarrollo de ciertas especies de Bacteroides y Prevotella. - Cistena: 0,05%: Ayuda a mantener un reducido Eh y permite el desarrollo de microorganismos que exigen tiol, como ciertos mutan- tes de Streptococcus spp. - Agua puricada: pH FINAL: 7.3 0.2. Adems los frascos de Hemocultivos contienen una cuidadosa y controlada atmsfera inerte en el espacio areo que est en con- tacto con el medio de cultivo del frasco. Esta atmsfera est desa- rrollada y formulada segn los agentes etiolgicos de bacteriemias segn los grupos etarios, que se describe a continuacin: - Los frascos de Hemocultivo Neonatal son aerbicos y su atmsfe- ra presenta una cantidad controlada de anhidrido carbnico (CO 2 ). - Los frascos de HEMO 100, Hemocultivo Adulto Multipropsito y Hemocultivo Peditrico Multipropsito contienen una atmsfera controlada de nitrgeno (N 2 ) y anhdrido carbnico (CO 2 ) que ase- gura el desarrollo de cepas anaerobias estrictas, CO 2 dependientes y facultativas (Eh menor de -250 mV). INSTRUCCIONES Producto listo para usar. CARACTERSTICAS DEL PRODUCTO Medio de cultivo color amarillo - mbar, transparente, lmpido. Nota: la presencia de polianetol sulfonato de sodio y la atmsfera de CO 2 pueden otorgar al producto una ligera opalescencia o con- tener cristales en suspensin. ALMACENAMIENTO Los frascos de hemocultivo se conservan a 10-35 C. Hemocultivos HOJA 3 DE 5 PROCEDIMIENTO Informacin previa: Debe requerirse informacin acerca del diagnstico presuntivo, cur- va trmica y antibioticoterapia recibida. En este ltimo caso interesa conocer la hora de administracin del antibitico ya que conviene obtener las muestras cuando el nivel de antibitico circulante sea mnimo (valle), es decir antes de la administracin de la nueva dosis del mismo. Preparacin de la piel: El desinfectante de eleccin es tintura de iodo al 2% o solucin de iodo-povidona al 10%. Cuando existe hipersensibilidad al iodo conviene emplear alcohol 70. El merthiolate no es adecuado. Una vez determinado el sitio de puncin, desinfectar la piel de la zona elegida y el tapn de goma del frasco de Hemocultivo. En todos los casos el desinfectante debe actuar durante 1 minuto. No efectuar una nueva palpacin luego de desinfectada la piel a menos que el dedo haya sido similarmente descontaminado o se utilicen guantes estriles (procedimiento ideal). Extraccin: La muestra puede obtenerse por puncin arterial o venosa em- pleando jeringa y aguja estriles. Si no da resultado la primera pun- cin, el nuevo intento debe efectuarse con una aguja nueva. A los efectos de descartar contaminaciones, las muestras sucesivas de un hemocultivo seriado tienen que obtenerse de distintas zonas de puncin. Luego de efectuada la extraccin de sangre, es conve- niente remover la tintura de iodo con alcohol para evitar fenmenos txicos locales. Volumen de sangre: Segn ensayos sobre medios con polianetol sulfonato de sodio (PSS), las diluciones de sangre en el medio recomendadas, uc- tan entre 1: 5 a 1:10. En el caso de lactantes o nios pequeos, pueden ser necesarias diluciones mayores. Por lo tanto, y respetan- do la concentracin de PSS presente en el medio, los volmenes aconsejados son los siguientes: HEMOCULTIVO NEONATAL (contiene 10 ml de medio de cultivo): inocular 0,5-1 ml de sangre del paciente. HEMOCULTIVO PEDIATRICO (contiene 20 ml de medio de culti- vo): inocular 1-2 ml de sangre del paciente. HEMOCULTIVO ADULTO (contiene 50 ml de medio de cultivo): inocular 5 ml de sangre del paciente. HEMO-100 (contiene 100 ml de medio de cultivo): inocular 10 ml de sangre del paciente. Inoculacin de los frascos: Una vez retirada la parte central de la tapa metlica del frasco de Hemocultivo y efectuada la desinfeccin del tapn de goma, inyec- tar la sangre cuidando especialmente no introducir aire. Mezclar de inmediato por inversin para permitir la accin anticoagulante. Importante: - La cantidad y frecuencia de las muestras a extraer debe ser dis- puesta por el mdico y sobre la base del cuadro clnico presentado por el paciente. - Nunca una sola muestra puede servir para descartar una bacte- riemia. - Tampoco son tiles numerosos especmenes. Se considera que tres son sucientes en la mayora de los casos. - La extraccin debe hacerse tan pronto como sea posible, al apa- recer el cuadro febril. - Es aconsejable efectuar la recoleccin de la muestra, media a una hora antes del pico febril, cuando ste pudo ser detectado, y siempre previamente a la terapia antibitica. Incubacin A 35-37 C. El tiempo de incubacin lo establece el laboratorio segn las ca- ractersticas del paciente en estudio y microorganismos que se in- tenten recuperar. Como regla general recomendamos incubar los frascos durante 7 das. Incubaciones prolongadas por ms de 7 das, son necesarias para grmenes difciles de detectar, como Actinobacillus, Cardio- bacterium, Eikenella, Haemophilus, Neisseria spp. Tambin en en- docarditis causada por levaduras o cuando el paciente ha recibido terapia antibitica. Importante: si los frascos inoculados no pueden llevarse a la estufa de incubacin de inmediato, tienen que conservarse a temperatura ambiente hasta el momento de remitir al laboratorio. En ningn ca- so se deben colocar en heladera. INTERPRETACIN DE LOS RESULTADOS Al menos una vez al da observar los frascos de los Hemocultivos inoculados con la muestra del paciente. La notable transparencia de los Hemocultivos Britania permite visualizar a travs del frasco la turbidez, el cambio de color, la hemlisis o burbujas de gas. Estos datos permiten sospechar la existencia de un desarrollo microbiano incipiente. Para que estas caractersticas puedan ser observadas fcilmente debe evitarse la agitacin del frasco cuando se retira de la estufa. Hemocultivos HOJA 4 DE 5 Coloraciones y subcultivos: Ante sospecha o evidencia de desarrollo microbiano en alguno de los frascos, se debe realizar la coloracin de Gram y subcultivos. Cuando no existieran evidencias de desarrollo, este procedimiento debe efectuarse de igual forma a diferentes tiempos y previo al des- carte de los hemocultivos. La tcnica operatoria es la siguiente: - Desinfectar el tapn de goma del frasco. - Extraer aproximadamente 0,25 ml de medio con jeringa y aguja estriles. Cuando se introduce la aguja debe sujetarse fuertemente el mbolo de la jeringa por si existiera presin de gas debida a pro- ductos de fermentacin. Invertir el frasco y retirar la muestra. - Transferir la muestra a un tubo estril intermedio o subculti- var directamente en Sangre Agar ( ), Chocolate Agar ( ). - Depositar una gota de la muestra en un portaobjetos y efectar la coloracin de Gram. Actualmente se considera ms til la colo- racin con naranja de acridina, para el examen rpido por micros- copa de uorescencia de extendidos de sangre o de hemocultivos donde pueden estar presentes escasos microorganismos, o bien para facilitar su diferenciacin respecto de la tincin de base del material proteico de la muestra. Permite la deteccin temprana de cantidades tan pequeas como 10 2 microorganismos por ml de cal- do. Los subcultivos deben incubarse preferentemente en atmsfera con tensin de CO 2 aumentada (5-10%) y en anaerobiosis (jarras anaerbicas). Si no se dispone de sistema de anaerobiosis se podr sospechar bacteriemias debidas a bacterias anaerobias cuando ha- biendo observado grmenes en la coloracin de Gram no se obten- ga desarrollo en los subcultivos efectuados. Para identicar dichas bacterias debe recurrirse necesariamente a sistemas que permitan efectuar aislamientos en medio slido con anaerobiosis estricta. Si se ha observado turbidez del medio y tanto la coloracin de Gram como los subcultivos resultan negativos ello puede deberse a la lisis de los elementos celulares de la sangre o a la presencia de va- riantes bacterianas, las cuales requieren medios igualmente hiper- tnicos en los subcultivos. En este caso es aconsejable transferir unas gotas del cultivo, a medios de agar triptena soya con sacarosa en concentraciones decrecientes. De esta forma puede lograrse la reversin de las variantes bacterianas a su forma original. Un hemocultivo es positivo en los siguientes casos: - Cuando el mismo germen se asla en dos o ms muestras. - Cuando se lo encuentra en una sola muestra pero simultnea- mente se lo recupera en otro material extrado al paciente (por ejemplo orina, L.C.R., entre otros). - Cuando se lo recupera de una o ms muestras y el ttulo de anti- cuerpos frente a la cepa aislada es signicativo o asciende durante la evolucin del proceso. - En aquellos casos en que el microorganismo sea recuperado de una sola muestra y el germen hallado no corresponde a la ora habitual de piel, siempre que el hallazgo est relacionado con el cuadro clnico. Por ejemplo: Escherichia coli, Klebsiella spp. Salmo- nella spp., Brucella spp., etc. - Se considera como posible contaminacin el hallazgo de un germen habitual de la ora cutnea en una sola de las muestras obtenidas, siendo el ttulo de anticuerpos no signicativo. Pero es necesario tener en cuenta el estado del paciente. Importante: el hallazgo de un microorganismo en muestras de he- mocultivos, an en aquellos casos que se presume contaminacin debe ser motivo de evaluacin por el equipo de profesionales para denir la situacin. CONTROL DE CALIDAD - Claridad del medio preparado: Transparente. - pH Final: 7.3 0.2. - Coagulacin: Negativa. - Desempeo microbiolgico: crecimiento de inculos 10-100 UFC/frasco. Hemocultivo Neonatal MICROORGANISMOS Streptococcus pyogenes ATCC 19615 Streptococcus pneumoniae ATCC 6305 Streptococcus pneumoniae ATCC 49619 Haemophilus inuenzae ATCC 49247 Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853 Candida albicans ATCC 10231 MICROORGANISMOS Streptococcus pyogenes ATCC 19615 Streptococcus pneumoniae ATCC 6305 Streptococcus pneumoniae ATCC 49619 Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853 Bacteroides fragilis ATCC 25285 Haemophilus inuenzae ATCC 49247 CRECIMIENTO Satisfactorio Satisfactorio Satisfactorio Satisfactorio Satisfactorio Satisfactorio CRECIMIENTO Satisfactorio Satisfactorio Satisfactorio Satisfactorio Satisfactorio Satisfactorio Hemocultivo Peditrico y Adulto Multipropsito CONTROL DE ESTERILIDAD RESULTADO Medio sin inocular Sin cambios Hemocultivos LABORATORIOS BRITANIA S.A. LOS PATOS 2175 (C1283ABI) CABA - ARGENTINA TEL/FAX 54 11 4306 0041 SMBOLOS UTILIZADOS DIAGNSTICO IN VITRO CDIGO N ELABORADOR ESTRIL N DE DETERMINACINES LOTE N FECHA DE VENCIMIENTO LMITE DE TEMPERATURA INSTRUCCIONES DE USO 0 1 / 2 0 1 1
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R E V
.0 3
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3 1 6 0 7 LIMITACIONES - A pesar de todos los cuidados que se empleen, es posible que en los elementos utilizados en la extraccin de la muestra existan microorganismos ambientales no viables que pueden teirse al co- lorear el extendido. Por ello el hallazgo de un germen en la obser- vacin microscpica del control primario no debe necesariamente considerarse como procedente del cultivo. En ese caso se sugiere repetir la coloracin al cabo de 2 o 3 ho- ras de incubacin adicional para constatar si hubo desarrollo. De ser as, el signicado de ese desarrollo debe ser evaluado por los microbilogos, de acuerdo a su experiencia y a los caracteres cul- turales y morfolgicos del microorganismo. - Es bien conocida la dicultad que signica evitar alguna contami- nacin eventual en los cultivos de sangre. Esta complicacin pue- de ser muy seria cuando la contaminacin introducida se debe a grmenes que pueden ser posibles agentes etiolgicos de sepsis o endocarditis. Tal es el ejemplo de Propionibacterium acns o Sta- phylococcus epidermidis. Por eso, para conrmar que ese hallazgo coincide con la etiologa del proceso, se requieren varios cultivos positivos en los cuales se reitera el aislamiento del mismo germen. - Pueden existir bacteriemias ocasionadas por microorganismos que no desarrollan en las condiciones de cultivo rutinarias y exi- gen procedimientos o medios suplementarios. Constituyen buenos ejemplos Francisella tularensis, Leptospira spp., Legionella spp., Brucella spp. En estos casos juega un papel fundamental la orien- tacin clnica. - Para el cultivo de sangre en los cuales se busque la presencia de hongos y levaduras se recomienda la siembra en caldo cerebro corazn o en medios bifsicos en una relacin 10% sangre/medio, con ventilacin previa de los frascos comerciales para hemocultivos y los frascos inoculados se incuban a 22-30C durante un mes. - Los microorganismos con deciencia en su pared celular se recu- peran en medios adicionados con sacarosa o manitol al 10%. - Existen muchas variables involucradas en esta tcnica que pue- den hacer que un espcimen de un paciente con bacteriemia, no presente grmenes viables. De all que no es fcil encontrar me- canismos que conduzcan rpidamente a poder armar que un re- sultado negativo se deba a un procedimiento incorrecto. Lo ms prctico y bastante conable es analizar varias muestras (3 o 4), espaciadas en varios das pero en momentos prximos al pico febril, si lo hubiese. - El examen directo de la muestra mediante la coloracin de Gram o naranja de acridina, puede tambin brindar una identicacin pre- suntiva del agente causal. Pero ello slo servir como orientacin diagnstica, ya que microorganismos con morfologa semejante pueden tener exigencias nutricionales o condiciones de incubacin muy diferentes. - En caso que sea necesario conservar la cepa microbiana aislada para realizar estudios posteriores. MATERIALES NECESARIOS NO PROVISTOS Equipos y material de laboratorio, microorganismos para control de calidad, reactivos y medios de cultivo adicionales segn requeri- miento. PRECAUCIONES - Solamente para uso diagnstico in vitro. Uso profesional exclu- sivo. - No utilizar el producto si al recibirlo su envase est abierto o da- ado. - No utilizar el producto si existen signos de contaminacin o dete- rioro, as como tampoco si ha expirado su fecha de vencimiento. - Utilizar guantes y ropa protectora cuando se manipula el produc- to. - Considerar las muestras como potencialmente infecciosas y ma- nipularlas apropiadamente siguiendo las normas de bioseguridad establecidas por el laboratorio. - Cuando se efecta el primer examen visual de los hemocultivos a las 18-24 horas de incubacin, tener en cuenta que pudo haber produccin de gas. Por lo tanto NO AGITAR los frascos. - Las caractersticas del producto pueden alterarse si no se conser- va apropiadamente. - Descartar el producto que no ha sido utilizado y los desechos del mismo segn reglamentaciones vigentes. REFERENCIAS - Raymond C. Bartlett, Paul D. Elner, John A. Washington. 1974. Blood Cultures, Cumitech 1, American Society for Microbiology. - L. Barth Reller, Patrick R. Murray, James D. MacLowry. 1982.Blood Cultures II, Cumitech 1B, American Society for Microbiology. - W. Michael Dunne, JR., Frederick S.Nolte, and Michael l. Wilson. 1997. Blood Cultures III, Cumitech 1B, American Society for Mi- crobiology. - Larry G. Reimer, Michael L. Wilson and Melvin P. Weinstein. 1997. Update on Detection of Bacteremia and Fungemia, Clinical Micro- biology Reviews, vol 10 N 3, p. 444-465. INDICACIONES AL CONSUMIDOR Utilizar el producto hasta su fecha de vencimiento. Conservar el producto segn las indicaciones del rtulo. HOJA 5 DE 5
Marcadores de infecciones transmisibles vía transfusional: El caso del banco de sangre de la Escuela de Microbiología de la Universidad de Antioquia, 2015-2016