1

LABORATORIO DE MTODOS INSTRUMENTALES

PRCTICA 1:
DETERMINACIN DE FSFORO EN BEBIDAS DE COLA POR
ESPECTROFOTOMETRA UV-VIS

INTEGRANTES:
Oxte Rodrguez Zuriely
Zapata Cruz Gabriel Eduardo

SALN 1

FECHA DE ENTREGA:
23 de Agosto del 2012



UADY
FACULTAD DE
QUMICA.
Campus de Ciencias
De la Salud
20 pts
Comentario [jsn1]: Nmero de
equipo?
2

INDICE

ANTECEDENTES 3

OBJETIVO 6

METODOLOGIA 6

RESULTADOS y DISCUSIONES 8

CONLUSIONES 12


REFERENCIA 14










3

ANTECEDENTES
Mxico es el primer lugar per cpita en consumo de refresco en el mundo.
Segn datos de la Cmara Nacional de la industria de la Leche y de la
Asociacin Nacional de Productores de Refrescos el consumo de refrescos
casi duplica la leche, aun cuando los primeros son ms caros.
1
Las bebidas de cola, son muy populares, su consumo es muy frecuente sobre
todo en la poblacin juvenil.
Actualmente se est prestando atencin a las posibles consecuencias del
consumo excesivo de estas bebidas que puedan afectar a la salud humana;
para ello se estn haciendo esfuerzos intensivos como la evaluacin del
potencial erosivo en los dientes debido a la acidez de las bebidas; los efectos
secundarios adversos a la ingesta de altas concentraciones de cafena y los
efectos adversos en el metabolismo del calcio debido al alto volumen del cido
fosfrico, l cual si se combina con el calcio necesario para el organismo (en
bajas proporciones) puede aumentar el riesgo de sufrir enfermedades de los
huesos, tal como la osteoporosis.
2

La determinacin y cuantificacin de fsforo contenidos en muestras de
consumo popular, como son los refrescos de cola se pueden obtener a travs
de mtodos de espectrometra UV-Vis.
1
El cido fosfrico es sustancia que contienen los refrescos de cola, es un
aditivo que se emplea como antioxidante. Cantidades elevadas de fsforo en la
dieta, tienen un efecto desmineralizante del hueso, ya que el fsforo es un
mineral que precipita con el calcio, reduciendo su absorcin por parte de
nuestro cuerpo. Por ello, no se recomienda abusar del consumo de estas
bebidas, dada la importancia del calcio en el correcto desarrollo y
mantenimiento de la masa sea. El cido fosfrico que se encuentra muy
diluido no es txico, es inodoro y se emplea para dar un sabor cido a muchos
refrescos, como la Coca-cola, a la cual se le agrega, aproximadamente 0.95
% de H
3
PO
4
; el pH de los refrescos es cercano a 2.3.
3


Comentario [jsn2]: No cumplieron con
los mrgenes establecidos ene l manual de
procedimientos.
4

El instrumento utilizado en la espectrometra ultravioleta-visible se llama
espectrofotmetro UV-Vis. Mide la intensidad de luz que pasa a travs de una
muestra , y la compara con la intensidad de luz antes de pasar a travs de
la muestra La relacin I / Io se llama transmitancia, y se expresa
habitualmente como un porcentaje (%T). La absorbancia (A) se basa en la
transmisin:
A= -log (%T)
Las partes bsicas de un espectrofotmetro son una fuente de luz, un soporte
para la muestra, una rejilla de difraccin o monocromador y un detector.
Un espectrofotmetro puede ser nico o de doble haz.
Las muestras para espectrofotometra UV-Vis suelen ser lquidas, aunque la
absorbancia de los gases e incluso de los slidos tambin puede medirse.
Las muestras suelen ser colocadas en una celda transparente, conocida como
cubeta. Las mejores cubetas estn hechas con cuarzo de alta calidad, aunque
son comunes las de vidrio o plstico. El cristal y la mayora de los plsticos
absorben en el UV, lo que limita su utilidad para longitudes de onda visibles.
El espectrofotmetro es un instrumento fcil de usar que ejecuta mediciones de
absorbancia, % de transmitancia y concentracin dentro del rango de longitud
de onda de 325 a 1100 nanmetros. Consta de un interruptor de apagado y
encendido, una pantalla digital, una tapa del compartimiento de muestra, el
teclado, una puerta del compartimiento de la lmpara.

Figura 1. Partes de un Espectrofotmetro de UV-VIS de un solo haz.
Comentario [jsn3]: Qu smbolo es?
Comentario [jsn4]:
Comentario [jsn5]: No tienen
referencia los parrafos
5

El teclado est compuesto por:
Pantalla de cristal lquido de 20 caracteres en 2 lneas.
Tecla FUNCIN 1: La funcin vara dependiendo de la pantalla,
generalmente salir, retroceder o borrar.
Tecla FUNCIN 2: La funcin vara dependiendo de la pantalla,
generalmente entrar, aceptar o continuar.
Tecla de SELECCIN: Usada para recorrer el men e ingresar valores
numricos.
Controles de longitud de onda: Aumenta y disminuye el ajuste de
longitud de onda
0 Abs/100%T: (Cero Abs/100% Transmitancia) Aumenta
automticamente el instrumento a cero absorbancia (100%T).
A/T/C: Cambia entre modos de absorbancia, % de transmitancia y
concentracin.
Utilidades: Accede al ajuste del instrumento, diagnstico y otras
funciones.

IMPRIMIR: Enva los datos actuales a una impresora seleccionada.

[4











Comentario [jsn6]: No mencionan en
los antecedentes mtodos para determinar
fosforo, ni el fundamento de estos
mtodos. Empezaron muy bien los
antecedentes pero les falto aterrizar el
objetivo principal.
6





OBJETIVOS

Conocer las partes y el manejo de un espectrofotmetro de UV-VIS.

Realizar una curva de calibracin para cuantificar por UV-VIS, el
contenido de Fosforo en una muestra de refresco de cola.



METODOLOGA
Inicialmente se procedi a pesar 100 mL de una solucin stock de 100 ppm de
P
2
O
5
a partir de 0.0191 g de fosfato monobsico de potasio (KH
2
PO
4
), se tom
1mL de esta solucin y se prepararon 25 mL de una solucin de trabajo a una
concentracin de 4ppm, estas soluciones fueron incoloras.
Preparacin de la solucin reductora:
Para el proceso de preparacin de la solucin reductora. Se pesaron 0.1572 g
de molibdato de potasio y se disolvi en 7.8 mL de agua destilada, se pesaron
0.2116 g de acido ascrbico los cuales fueron disueltos en 12 mL de agua
destilada y se le aadieron 2.2 mL de H
2
SO
4
aforando a 25 mL con agua
destilada. Posteriormente estas tres soluciones se mezclaron llevndose a un
aforo de 50mL obtenindose as la solucin reductora cuyo color era azul.

Comentario [jsn7]: No se puede pesar,
se procedi a preparar 100 mL .
Comentario [jsn8]: Este comentario
no se describe en metodologa.
Comentario [jsn9]: Este comentario
no se describe en metodologa.

7

Preparacin de la curva de calibracin:
Se prepararon estndares en matraces aforados de 10 mL, para esto se
extrajeron alcuotas de 1, 2, 3, 4 y 5 mL de la solucin de trabajo y se les
agreg a cada una 4 mL de la solucin reductora; estas soluciones se
incubaron por 30 minutos a una temperatura de 50C.
Preparacin de la muestra:
Se desgasific la bebida de cola (Coca-Cola light) en un bao de ultrasonido
por 20 minutos, posteriormente se tom 1mL de la bebida desgasificada y se
llev a aforo a 50 mL con agua destilada. A continuacin se tom una alcuota
de 1 mL de la solucin preparada con anterioridadque se prepar, se le
aadieron 4 mL de la solucin reductora y se afor a 10 mL con agua destilada.
Igualmente se prepar un blanco aadiendo 4 mL de la solucin reductora y se
afor a 10 mL con agua destilada. Todas las soluciones se incubaron, al mismo
tiempo a 50
0
C por 30 minutos.
A los 10 minutos de calentamiento las soluciones en las cuales se formaba un
complejo de fosfomolibdato se tornaron de color azul. El blanco no mostr
cambio de color, pues esta no contena fsforo y por lo tanto el complejo no se
form.
Anlisis espectrofotomtrico
Para llevar a cabo el anlisis espectrofotomtrico primero, se realiz un barrido
de exploracin con el punto de la curva de calibracin ms concentrado (2
ppm), a una longitud de onda de 750 a 850 nm. Posteriormente a partir de la
longitud de onda en la que se alcanz el mximo de absorcin el cual fue de
807 nm se realiz un anlisis de la curva de calibracin y de las muestras. Para
realizar este anlisis primero se hizo la medicin del blanco con los siguientes
pasos: Se lav la celda con el blanco, se puso el blanco en la celda y sta se
coloc en el espectrofotmetro de UV-VIS (GENESYS UV10 THERMO
SCIENTIFIE) y se hizo la medicin correspondiente. Despus se hizo la
medicin de los estndares de 0.4, 0.8, 1.2, 1.6 y 2 ppm. Para esto primero se
lav la celda con agua destilada, luego se lav con los estndares, se verti el
8

estndar en la celda y sta se introdujo en el espectrofotmetro. Se hizo la
medicin correspondiente y se anotaron los resultados obtenidos.
En seguida se realiz de nuevo la medicin del blanco y por ltimo se llevaron
a cabo las mediciones de las muestras siguiendo el mismo proceso ya
mencionado y se anotaron los resultados obtenidos.
Por ltimo con los datos obtenidos de los estndares se graficaron las
absorbancias contra los valores de concentracin en ppm y con la curva de
calibracin.

RESULTADOS Y DISCUSIONES
La espectrofotometra de absorcin UV-Vis posee diversas aplicaciones, una
de ellas es el anlisis de un solo componente. Para esta prctica se utiliz esta
tcnica con el fin de determinar el nivel de fsforo presente en una bebida de
cola elegida previamente (RESULTADOS Y DISCUSIONES
La espectrofotometra de absorcin UV-Vis posee diversas aplicaciones, una
de ellas es el anlisis de un solo componente. Para esta prctica se utiliz esta
tcnica con el fin de determinar el nivel de fsforo presente en una bebida de
cola elegida previamente (Pepsi-Cola ). Lo anterior estuvo basado en el
mtodo espectrofotomtrico del azul de molibdeno con el molibdato de amonio
y cido ascrbico para desarrollar color.
Durante la formacin de los cidos molbdicos un exceso de molibdato
reacciona en solucin cida (razn por la cual se le aadi H2SO4 a la solucin
reductora) con el fosfato (especie de inters para este experimento) para luego
determinar el nivel de fsforo presente. La reaccin siguiente ilustra el proceso:
Figura 1. Formacin del complejo de fosfomolibdato
El H
3
PO
4
es el que se encuentra presente en la bebida de cola a analizar.
Con formato: Fuente: Negrita
Comentario [jsn10]: Estos prrafos no
son resultados ni discusiones, es parte de
los antecedentes que te hicieron falta.
Comentario [jsn11]: No hay figura
Con formato: Subndice
Con formato: Subndice
9

En la reaccin 1 se observa la formacin del complejo de fosfomolibdato que
posteriormente fue reducido a un compuesto azul soluble cuya absorbancia es
medida espectrofotomtricamente y es proporcional a la cantidad de fsforo
presente en la muestra. Para lograr lo anterior se utiliz en esta prctica cido
ascrbico debido a sus propiedades reductoras.
). Lo anterior estuvo basado en el mtodo espectrofotomtrico del azul de
molibdeno con el molibdato de amonio y cido ascrbico para desarrollar color.
Durante la formacin de los cidos molbdicos un exceso de molibdato
reacciona en solucin cida (razn por la cual se le aadi H2SO4 a la solucin
reductora) con el fosfato (especie de inters para este experimento) para luego
determinar el nivel de fsforo presente. La reaccin siguiente ilustra el proceso:
Barrido de exploracin
Cuadro 1: Barrido de exploracin
Concentracin Absorbancia l
mx
registrada en nm
2 ppm 0.730 822

Anlisis de puntos para la curva de calibracin
Cuadro 2: puntos para la curva de calibracin
Solucin de 10 mL
alcuotas mL
Concentracin de P
2
O
5

(ppm)
Absorbancia
l= 822
1 0.4 0.226
2 0.8 0.389
3 1.2 0.517
4 1.6 0.630
5 2.0 0.767

Comentario [jsn12]: Cul reaccin 1?
Comentario [jsn13]: No hay reaccin
Estos prrafos no pertenecen a resultados
y discusiones. Revisar antes de enviar el
trabajo, no hay ni figuras, ni reacciones.
Comentario [jsn14]: Utiliza otra
palabra.
10

0
0.226
0.389
0.517
0.63
0.767
0
0.1
0.2
0.3
0.4
0.5
0.6
0.7
0.8
0.9
0 0.5 1 1.5 2 2.5
Absorbancia
Absorbancia
Lineal (Absorbancia)
Lineal (Absorbancia)
Lineal (Absorbancia)
A continuacin se presenta la grfica de los resultados, en la cual
los valores situados en la abscisa corresponden a los valores de la
concentracin de cada estndar en partes por milln (ppm), y los valores
de la ordenada corresponden a la absorbancia obtenida de acuerdo a la
concentracin del estndar.








Pendiente: 0.331 Desviacin estndar: 50x10
-2
Intercepto: + 0.109 Coeficiente de correlacin: 0.998


Cuadro 3: Absorbancia y concentracin de la muestra
Muestra Absorbancia a 822 nm Concentracin (ppm)
1 0.459 1.059
2 0.443 1.010



Con formato: Sangra: Izquierda:
1.27 cm, Sin vietas ni numeracin
11

Concentraciones en ppm de P
2
O
5
en la muestra de cola (Pepsi-cola):

Ley de Bouguer-Beer:
A = bC
Siendo:
A: Absorbancia b: espesor de la celda (1 cm)
C: Concentracin : Coeficiente de extincin molar (pendiente)
Para la muestra1 de Cola analizada (Pepsi-Cola):
A1 = 0.459
C1 = A/b
C1 = 0.459/ [(0. 331) (1)]
C1 = 1.386 ppm de P
2
O
5

Para la muestra 2 de Cola analizada (Pepsi-Cola):
A1 = 0.443
C1 = A/b
C1 = 0.443/ [(0. 331) (1)]
C1 = 1.338 ppm de P
2
O
5


Niveles de fsforo presentes en las muestras de cola a partir de las
concentraciones en ppm de P
2
O
5
utilizando el factor gravimtrico:

Con formato: Subndice
Con formato: Subndice
Comentario [jsn15]: Estn seguros
qu es esa Ley?
Comentario [jsn16]: ?
Comentario [jsn17]: No era necesario
estos pasos, debieron trabajar con la
ecuacin de la recta de la curva de
calibracin. Y buscar por ese mtodo el
valor de concentracin.

Con formato: Subndice
Con formato: Subndice
12

Ppm P= (X ppm de P
2
O
5
) (50) (10) (62 g de P/142 de P
2
O
5
)
Muestra 1.- ppm P= (1.386 ppm) (50) (10) (0.4366)
Ppm P= 302.577
Muestra 2.- ppm de P= (1.338 ppm) (50) (10) (0.4366)
Ppm de P= 292.085

En el cuadro 2 se puede percibir que conforme aumentaba la concentracin de
P
2
O
5
, la absorbancia tambin aumentaba, lo anterior se debe a que haba una
mayor presencia de fsforo (proveniente del P
2
O
5
) y en consecuencia se form
una mayor cantidad del complejo de fosfomolibdato, lo anterior se comprob
por una mayor intensidad en la coloracin azul. Por esa razn, para realizar el
barrido de exploracin, se utiliz el punto de la curva de calibracin ms
concentrada (aqul con 2 ppm de P
2
O
5
) para establecer la longitud de onda
mxima de absorcin, la cual fue registrada en 822 nm.
Posteriormente se aplic la ley de Bouguer-Beer para obtener los valores de
fsforo en la muestras de la bebida de cola (Pepsi-Cola) y se observ que por
cada litro de refresco consumido se ingieren entre 203.02 mg de fsforo. Lo
anterior quiere decir que si una persona consume un vaso (aAproximadamente
250 mL) de una bebida de cola (Pepsi-Cola para este ejemplo) al da, estara
consumiendo entre 73 mg de fsforo.
Se puede afirmar que los resultados obtenidos del experimento fueron bastante
precisos debido al pequeo valor de la desviacin estndar, as como tambin
que existe una relacin directamente proporcional entre la concentracin en
ppm y la absorbancia de los puntos de la curva de calibracin, es decir,
conforme una variable aumenta, la otra tambin lo hace, esto se debe al valor
positivo cercano a 1 (que indica correlacin perfecta) del coeficiente de
correlacin.

Con formato: Subndice
Con formato: Subndice
Con formato: Subndice
Con formato: Subndice
Con formato: Subndice
Con formato: Subndice
Comentario [jsn18]: Utilicen el
nombre tradicional Lambert-Beer
Comentario [jsn19]: No discutiste
nada de los resultados obtenido durante la
prctica llevada a cabo, ni mencionaste si
estaba entre los limites, para la prxima
mejora tus resultados y discusiones.
13

CONCLUSIONES

Se cumpli el objetivo de conocer y aprender el manejo de los diferentes
aparatos utilizados en el laboratorio (espectrofotmetro de uv-vis, la mquina
de incubacin con ultrasonido), con el propsito de determinar y realizar una
curva de calibracin para cuantificar la concentracin de fosforo en la muestra
de cola (Pepsi-Cola) que se analiz, esto mediante la preparacin de
estndares, las cuales se utilizaron para el barrido de exploracin.
El espectrofotmetro de UV-Vis mide la capacidad de transmitancia de las
soluciones, la cual es inversa a la absorbancia. Gracias a este equipo se puede
determinar la concentracin de fsforo de las muestras indirectamente a partir
de las absorbancias obtenidas en base a las concentraciones del P
2
O
5
.
La absorbancia es directamente proporcional a la concentracin de fsforo en
las soluciones. Para lograr lo anterior, en esta prctica se utiliz el mtodo
espectrofotomtrico del azul de molibdeno con el molibdato de amonio y cido
ascrbico para desarrollar color.
El barrido de exploracin se realiz a partir de la solucin estndar ms
concentrada para que las absorbancias obtenidas de las dems soluciones
estndar estn dentro de la longitud de onda establecida.
Es necesaria la medicin de un blanco, y la realizacin de una curva de
calibracin para minimizar los errores sistemticos al momento de medir las
absorbancias de las muestras.

Finalmente, de acuerdo a los clculos realizados, se puede concluir que la
cantidad de fsforo presente en la bebida analizada (Pepsi-Cola) es muy alta
en comparacin con las cifras normales de fsforo srico inorgnico en los
adultos, que oscila entre 2.8 y 4 mg por cada 100 mL, dado que un vaso
(aproximadamente 250 mL) de esta bebida al da aportara de 50.75 mg de
fsforo.
Comentario [jsn20]: Deberan
mencionarlo en las discusiones y a que
creen que se deba estas concentraciones
elevadas, revisen sus clculos antes de
afirmar lo que comentan.
14






REFERENCIAS

1
Cavazos, Norma C.; Zrate, L.; Torres de Navarro, E. Determinacin de
fsforo y cafena en bebidas de cola. Educacin Qumica, 2001, 12,2, pp.116-
120.

2
Ortz R.; Martnez Y. Laboratorio de Anlisis Instrumental. Universidad de los
Andes, Facultad de Ciencias. Departamento de Qumica. Mrida, 2003. 48 pp.
9-11.

3
Guzmn B., J. Las bebidas gaseosas no te alimentan, TuVida Sana,
Colombia, Ene.18, 2011, 18

4
Angelici R.J. Tcnica y Sntesis en Qumica Inorgnica. Editorial Revert.
1979, Espaa. p 247.


Comentario [jsn21]: Revisar el manual
de procedimientos para las referencias.