Trayendo a una encima vuelta a la vida o devolviendo la vida a

una encima

En los aos 1950 los cientficos se dieron cuenta que ADN sostena el
cdigo que permita a las protenas ser sintetizadas.
Sin embargo, como una cadena de aminocidos se desenvuelve en
una protena totalmente funcional, con la estructura tridimensional
apropiada, siguen siendo un misterio. Un mecanismo debe existir para
asegurar el doblar apropiado de la protena. Pero de surgi esta
informacin? En 1957, Chistian Anfinsen publico la primera evidencia
que la informacin para un dobl apropiado se encontraba en la
protena misma.
Background( antecedentes)
Las protenas estn hechas de combinaciones de 20 aminocidos que
despus se doblan en estructuras complejas. La cadena de
aminocidos que no es doblada se llama estructura primaria. para
tener actividad biolgica las protenas deben doblarse en estructuras
apropiadas secundarias y terciarias. Estas estructuras estn sujetas
por interacciones qumicas entre las cadenas de al lado de los
aminocidos, incluyendo las uniones de hidrgenos, interacciones
hidrofobicas y, a veces uniones covalentes. como estas estructuras
mas altas se forman ha sido un misterio por mucho tiempo. La
protena se dobla correctamente mientras es sintetizada o requiere la
accin de otras protenas para doblarse! Puede doblarse correcta y
en forma espontanea!.
En los aos 1950, Anfinsen era un bioqumico interesado en doblar
protenas correctamente. Especficamente l estaba investigando la
formacin de puentes disulforos, los cuales son uniones covalentes
entre cadenas laterales cistena que sirven como uno de los mayores
anclajes sujetando la estructura de protenas secretadas. El crea que
la protena en s contena toda la informacin necesaria para un
apropiado pliego de protenas. el propuso la "hiptesis fermodinmica"
cual mencionaba que la estructura biolgica activa de la protena
tambin era la ms termodinmicamente estable bajo condiciones en
vivo. en otras palabras, si las condiciones intracelulares podrian ser
copiadas en un tubo se ensayo ahi una proteina naturalmente se
plegarian en una confirmacion activa. el comenzo su trabajo en una
encima secretada, bovina pancreatica rivonucleico, y estudio su
habilidad para pregarse fuera de la celula.
The experiment( el esperimento)
Las proteinas desmpean una amplia variedad de funciones en las
celulas, no importando su funcion, una proteina debe plegarse
adecuadamente para llevar a cabo su rol biologico. para lee studio de
pliegue de proteinas es mejor estudiar una encima cual actividad
biologica puede se monitoriada facilmente actuando en vitro. Anfinsen
eligio una pequea proteina secretada la enzima rivonucleico en el
cual podia monitoriar el pliegue adecuado ensayando su habilidad
para catalizar el cultivo celular de RNA.
Ribonucleico, una protena secretada, es activa bajo condiciones de
oxidacin en vitro. La estructura terciaria del activo ribonucleico esta
sujeta por cuatro puentes disulforos. Agregando un agente reductor,
cual reduce la unin disulforo entre dos cadenas laterales cistena a
dos grupos libres sulfidrilo, pueden interrumpir esta interaccin
covalente. Una desnaturalizacin completa del ribonucleico requiere
tratamiento con un agente reductor. Anfinsen monitorio la reduccin
del ribonucleico midiendo el numero de grupos sulfidrilo libres
presentes en las protenas. En el estado de oxidacion no hay grupos
sulfidrilos libres en el ribonucleico porque cada residuo de sistene
esta involucrado en unas unin de sulforos. En su estado
completamente, por otra parte ribonucleico contiene ocho grupos de
sulfidrilos libres. Anfinsen exploto esta diferencia para medir la
extensin de reduccin utilizando ensayos espectros fotomtricos para
valorizar el nmero de grupo sulfidrilos.
Para estudiar el pliegue de protenas fuera de las clulas uno debe
primero desnaturalizar la protena. Las protenas son fcilmente
desnaturalizadas por el calor, una interrupcin mecnica como batir y
tratamientos qumicos. Protenas con puentes disulforos requieren una
medida adicional de tratamiento con un agente reductor para separar
esas uniones covalentes. Para desnaturalizar en ribonucleico,
Anfinsen primero redujo los puentes de disulfuros con acido
tioglicolico. El despus desnaturalizo la protena utilizando un alto
concentrado de urea y encubando la solucin a temperatura ambiente.
El demostr que este tratamiento converta la enzima inactiva
mostrando que el ribonucleico ahora era incapaz de catalizar el cultivo
de RNA. Utilizando el ensayo espectro fotomtrico el demostr que el
ribonucleico inactivo contena ocho grupos sufudrilo, cuales
correspondan a los cuatro puentes disulfuros quebrados. Con una
completamente protena desnaturalizada en mano, Anfinsen poda
formar: puede una enzima desnaturalizada plegarse correctamente
en vitro y volver hacer activa nuevamente?
Para encontrar la respuesta Anfinsen permiti una solucin reducida,
ribonucleico desnaturalizado oxidarse. El extrajo la urea de la enzima
desnaturalizada por precipitacin. Despus el resuspendio
ribonucleico desnaturalizado libre de urea en una solucin aminorada
y la encubo por dos o tres das. Expuesto ha oxigeno molecular en la
atmosfera oxido los residuos de sistene. El despus comparo la
actividad de este ribonucleico desnaturalizado a la de las enzimas
nativas. En los experimentos iniciales, 12 a 19 porciento de las
protenas previamente inactivas fueron capaces de catalizar el cultivo
celular RNA una vez ms. Protenas se suman en altas
concentraciones, lo cual lo hace difcil para que ellas se plieguen
correctamente. Disminuyendo la concentracin total de ribonucleico en
solucin, Anfinsen que hasta el 94 % de proteinas podrian ser
replegadas ( ver tabla 3.1). La enzima se haba plegado a su
conformacin activa fuera de la celula, demostrando que informacion
para el pliegue de la proteina esta en la protena misma.
Discusin
Bajo cuidadosos experimentos Anfinsen demostr la que informacin
requerida para plegar a una protena correctamente esta contenida en
su secuencia primaria. Su cuidadoso anlisis de la qumica de este
proceso contesto una pregunta fundamental en biologa. El demostr
el repliegue de otras enzimas libres de clulas, incluyendo protenas
sin puentes disulforos. Mientras que es posible plegar un nmero de
protenas fuera del proceso maquinaria normal de protenas en las
clulas, este proceso es acelerado en vivo por un nmero de enzimas.
Anfinsen continuo estudiando el problema del pliegue de protenas
aunque la hiptesis termodinmica no es verdadera para todas la
protenas, la demostracin de Anfinsen del repliegue del ribonucleico
libre de clulas ha dejado su marca en el campo de bioqumica. En
1972 el recibi el premio novel por su trabajo en qumica.