Anlisis microbiolgicos

Aerobios mesfilos: para el anlisis de alimentos, para determinar existencia,

tipo y nmero de microrganismo se utilizar el mtodo del nmero ms probable
(NMP), es una tcnica que se basa en la determinacin de presencia o ausencia
(positia o negatia) en rplicas de diluciones consecutias de atributos
particulares de microorganismos presentes! "l estimado de densidad poblacional
se obtiene del patrn de ocurrencia de ese atributo en diluciones seriadas y el
uso de una tabla de probabilil#sticas! Para le realizacin de esta pruebas se $ace
uso de%
Materiales & Equipos:
Muestras ambientales (lodos actiados, r#os, c$arcas, suelo, etc!)
Placas Petri con medio de crecimiento (&'(, )*, +,( u otro)
+ubos de dilucin con - ml de .!/01 Na2l
Micropipetas de '. 3l
Puntas para micropipeta
4ncubadora a '052
6ortex
Procedimeinto
Muestras% 2olecte aspticamente muestras
"xtraccin de microorganismos iables% 7 g de muestra a un tubo de ensayo
que contenga - ml de solucin salina! (gite moderadamente por 0 minutos
en un ortex!
8iluciones en serie% "l extracto de la muestra puede ser diluido seriadamente
trans9iriendo 7 ml a un tubo con - ml de .!/01 Na2l! 2ada trans9erencia
corresponde a una dilucin de 7 en 7.! &epita en serie el procedimiento de
dilucin $asta alcanzar la dilucin 7.:;!
Placas Petri% <tilizando un marcador, diida la placa petri en cinco zonas de
igual tama=o! <se una placa por cada muestra! &otule cada zona con el
9actor de dilucina ser inculado
4noculacin% +rans9iera 0 3l de la dilucin apropiada al rea correspondiente!
&epita esta operacin cinco eces por cada dilucin
Permita que el incculo seque sobre el medio de crecimiento! ,elle la placa
con un tirilla de para9ina! 4nierta la placa e incube a '052 por ; d#as!
"aluacin de crecimiento% Para cada dilucin (7.
:>
: 7.
:?
: 7.
:0
: 7.
:@
: 7.
:;
)
ealu el crecimiento o no crecimiento sobre cada rplica inoculada! &eporte
los resultados!
RESULA!"S # !$S%US$&'
8espus de reportar los resultados, se $ace un comparatio de estos con tablas
existentes para conocer el nmero ms probable de aerobios mes9ilos y
determinar a tras de la normatia cuanto es el rango establecido para su
presencia en la muestra!
(acterias cido lcticas)
"ste tipo de microorganismos se determinan por medio del la tcnica P2& a
+iempo &eal (P2&rt)! Permite determinar el tama=o poblacional y la
composicin de bacterias totales y de cido lcticas, en particular las
pertenecientes a los gneros Lactobacillusy Bifidobacterium. )a clae de este
mtodo cuantitatio es la posibilidad de detectar en tiempo real la ampli9icacin
de nuestro genoma de inters! Para llear a cabo esta deteccin existen arios
mtodos pero casi todos basados en la utilizacin de otro 9ragmento de (8N
(sonda) complementario a una parte intermedia del (8N que queremos
ampli9icar! "sta sonda llea ad$erida una molcula 9luorescente y otra molcula
que in$ibe esta 9luorescencia (Aquenc$erA), de tal 9orma que slo cuando la
sonda es desplazada de su sitio por accin de la (8N polimerasa la molcula
9luorescente se libera de la accin del Aquenc$erA y emite 9luorescencia al ser
iluminada con un lser! )a cuanti9icacin de la 9luorescencia emitida durante
cada ciclo de la P2& ser proporcional a la cantidad de (8N que se est
ampli9icando! "n general para que sea lida esta tcnica requiere realizar en
paralelo una cura patrn en las mismas condiciones para conocer la cantidad
total de (8N que se est ampli9icando!
Cultek. (s.f.). PCR en Tiempo Real. Recuperado el 21 de Junio de 2014, de
http://.!edic.ula."e/idic/docs/clases/co!ple!entario##$te!a10.pdf