50 ) DE CINCO ESPECIES DEL GNERO MICRURUS EN ESTADO DE CAUTIVERIO EN NILO CUNDINAMARCA (COLOMBIA)
SINDY MONJE BELMONTE
UNIVERSIDAD DE LA AMAZONIA FACULTAD DE CIENCIAS BASICAS PROGRAMA DE BIOLOGIA CON ENFASIS EN BIORECURSOS FLORENCIA CAQUET 2.007
2 2
DETERMINACIN DE LA DOSIS LETAL MEDIA (DL 50 ) DE CINCO ESPECIES DEL GNERO MICRURUS EN ESTADO DE CAUTIVERIO EN NILO CUNDINAMARCA (COLOMBIA)
SINDY MONJE BELMONTE
Trabajo de grado presentado como Requisito parcial para optar al Ttulo de Bilogo con nfasis en Biorecursos
DIRECTORA Marta Gmez Cabal Biloga MSC Biologa Vegetal Directora de Investigacin y Desarrollo Laboratorios Probiol
ASESORA Claudia Martnez Crdenas Biloga, Bacteriloga, Microbiloga, Esp.Epidemiologa Directora de Aseguramiento de Calidad Laboratorios Probiol S.A.
UNIVERSIDAD DE LA AMAZONIA FACULTAD DE CIENCIAS BASICAS PROGRAMA DE BIOLOGIA CON ENFASIS EN BIORECURSOS FLORENCIA - CAQUETA 2.007 3 3
NOTA DE ADVERTENCIA Artculo 18 del Acuerdo N o
026 de Diciembre de 2.001: El director y los jurados del trabajo de grado no son responsables de las ideas y conclusiones expuestas en el trabajo, ellas son exclusividad de su autor
______________________________ Presidente del Jurado
______________________________ Jurado
______________________________ Jurado
Florencia, Mayo de 2007 5 5
DEDICATORIA
Dedico en especial este trabajo a la memoria de mi Abuela Nazarea Quimbay de Belmonte, a mis Padres Stella Belmonte de Monje, Felix Eney Monje Pena; mi Hermano Osman Monje Belmonte, las personas que ms amo, porque sin su apoyo espiritual constante no habra alcanzado mis logros.
A Juan Manuel Suarez Tezna, la persona con la que he compartido este corto tiempo mi corazn y me ha brindado su amor incondicional en buenos y malos momentos.
A los doctores Marta Gmez Cabal, Clemencia Gmez Cabal, Alberto Gmez Cabal, Claudia Martnez Crdenas, Jairo Maldonado y Hctor Charry por su amistad desinteresada y su asesora en el rea de la Biologa y Toxinologa de las serpientes presentes en Colombia.
A todo el equipo de trabajo del Laboratorios Probiol S.A., en especial a Blanca Grajales, Marisol Giraldo, Nelson Daz, y Sonia Lancheros, por brindarme una estada clida y servicio.
A mis profesores de la Universidad de la Amazonia y mis mejores compaeros de carrera y amigos, por incentivar mi espritu de investigacin y acompaarme durante todo el transcurso de la misma.
6 6
AGRADECIMIENTOS
A Marta Gmez Cabal, directora de esta investigacin, quien siempre estuvo presente y atenta al progreso de mi trabajo para guiarme en mi aprendizaje como una gran maestra y mostrarme las maravillas de la Biologa.
A Claudia Martnez Crdenas, asesora de esta investigacin, quien me acompa en la fase final de muestreo y en el anlisis estadsitico de las pruebas de seroneutralizacin.
A Clemencia Gmez, Alberto Gmez Cabal y Maria Clara Gmez Cabal, por su amistad incondicional y hospitalidad.
A Jairo Maldonado, por su invaluable apoyo en la fase de campo realizada en el Serpentario del Parque Recreacional y Zoolgico Piscilago, su enseanza en el rea de Biologa, Manipulacin y Taxonoma de las serpientes del gnero Micrurus lo cual permiti que se llevara a cabo parte de el proyecto.
A Hctor Charry, por sus asesoras en el desarrollo del proyecto, en el rea de Biologa y Toxinologa experimental de las serpientes del gnero Micrurus.
A Fernando Ortz y Gloria Elena Estrada, jurados de esta investigacin, por sus correcciones y sugerencias en el desarrollo y presentacin final de la investigacin.
7 7
TABLA DE CONTENIDO
Pg.
RESUMEN.............................................................................................................17 ABSTRACT...........................................................................................................18 1. INTRODUCCIN...............................................................................................19 2. PROBLEMA ......................................................................................................21 3. JUSTIFICACIN ...............................................................................................23 4. OBJETIVOS ......................................................................................................24 4.1 OBJETIVO GENERAL:.................................................................................24 4.2 OBJETIVOS ESPECIFICOS: .......................................................................24 5. REVISION DE LITERATURA............................................................................25 5.1 Clasificacin Taxonmica.............................................................................25 5.2 Caractersticas generales de la especie Micrurus sp. ..................................25 5.2.1 Morfologa y Fisiologa general .................................................................26 5.2.2 Hbitat y comportamientos ....................................................................26 5.2.3 Tipo de alimentacin y reproduccin .....................................................27 5.3 Distribucin Geogrfica de las Micrurus en estudio .....................................27 5.3.1 Micrurus surinamensis surinamensis, (Cuvier, 1.817) ..........................27 5.3.2 Micrurus mipartitus, (Dumril, Bibron y Dumril, 1.854)........................28 5.3.3 Micrurus isozonus, Cope, 1.860 ...........................................................28 5.3.4 Micrurus dumerilii, (Griffin, 1.916) ..........................................................29 5.3.5 Micrurus medemi, (Roze, 1.967)............................................................29 5.4 Venenos Ofdicos .........................................................................................30 5.4.1 Venenos micrricos ...............................................................................30 5.4.2 Dosis Letal Media de los venenos Elapdicos en Colombia...................31 5.5 Accidente Ofdico por corales en Colombia..................................................32 5.5.1 Clasificacin del Accidente Ofdico........................................................33 5.6 Seroterapia en Accidentes ofdicos por Micrurus .........................................33 5.6.1 Dosis Efectiva Media del Suero Antielapdico Probiol frente a los venenos Micrricos.........................................................................................34 5.6.2 Produccin de Suero Antiofdico Antielapdico en Colombia .................36 6. METODOLOGIA................................................................................................39 6.1 Fase de Campo............................................................................................39 6.1.1 rea de Estudio .....................................................................................39 6.1.2 Obtencin de los Venenos Micrricos....................................................40 6.1.3 Extraccin de Veneno............................................................................40 6.1.5. Preparacin de las Muestras de los Venenos Micrricos .....................41 6.2 Fase Experimental .......................................................................................41 6.2.1 Animales Experimentales ......................................................................41 6.2.2 Ensayos Preliminares ............................................................................42 8 8 6.2.3 Dosis Letal Media DL 50 (OMS, 1981) ....................................................42 6.2.3.1 Validez de la Prueba ......................................................................43 6.2.4 Dosis Efectiva Media DE 50 .....................................................................44 6.2.4.1 Validez de la Prueba .......................................................................46 6.3. Condiciones Experimentales.......................................................................46 6.3.1 Condiciones de Mantenimiento..............................................................46 6.3.2 Grupo Control Positivo...........................................................................46 6.3.3 Grupo Control Negativo .........................................................................47 7. RESULTADOS..................................................................................................48 7.1 Aspectos Biolgicos .....................................................................................48 7.1.1 Micrurus surinamensis surinamensis, Cuvier (1.817) ............................48 7.1.2 Micrurus mipartitus, Dumril y Bibrn (1.854).......................................49 7.1.3 Micrurus isozonus , Cope (1.860) ..........................................................51 7.1.4 Micrurus dumerilii , Griffin (1.916) .........................................................52 7.1.5 Micrurus medemi, Roze (1.967).............................................................53 7.2 Dosis Letal Media (DL 50 )..............................................................................55 7.2.1 DL 50 para Micrurus surinamensis surinamensis.....................................55 7.2.2 DL 50 para Micrurus mipartitus ................................................................58 7.2.3 DL 50 para Micrurus isozonus..................................................................61 7.2.4 DL 50 para Micrurus dumerilii ..................................................................64 7.2.5 DL 50 para Micrurus medemi ...................................................................67 7.3 Dosis efectiva Media (DE 50 ) .........................................................................70 7.3.1 DE 50 para el Veneno de Micrurus surinamensis neutralizado por un Lote Piloto de Suero Anticoral AC-OO5..................................................................70 7.3.2 DE 50 para el Veneno de Micrurus mipartitus neutralizado por un Lote Piloto de Suero Anticoral AC-OO5..................................................................71 7.3.3. DE 50 para el Veneno de Micrurus isozonus neutralizado por un el Lote Piloto de Suero Anticoral AC-OO5..................................................................72 7.3.4. DE 50 para el Veneno de Micrurus dumerilii neutralizado por un el Lote Piloto de Suero Anticoral AC-OO5..................................................................73 7.3.5 DE 50 para el Veneno de Micrurus medemi neutralizado por un el Lote Piloto de Suero Anticoral AC-OO5..................................................................74 8. ANALISIS DE RESULTADOS...........................................................................76 8.1 Aspectos Biolgicos .....................................................................................76 8.1.1 Micrurus surinamensis surinamensis.....................................................76 8.1.2 Micrurus mipartitus.................................................................................76 8.1.3 Micrurus isozonus..................................................................................77 8.1.4 Micrurus dumerilii...................................................................................78 8.1.5 Micrurus medemi ...................................................................................79 8.2 Dosis Letal Media (DL 50 ) ..............................................................................79 8.2.1 (DL 50 ) para Micrurus surinamensis surinamensis ..................................79 8.2.2 (DL 50 ) para Micrurus mipartitus..............................................................80 8.2.3 (DL 50 ) para Micrurus isozonus ...............................................................80 8.2.4 (DL 50 ) para Micrurus dumerilii ................................................................80 8.2.5 (DL 50 ) para Micrurus medemi.................................................................81 9 9 8.3 Dosis Efectiva Media (DE 50 ) ........................................................................81 8.3.1 DE 50 del Suero Antiofidico Anticoral Polivalente Liofilizado frente al veneno de la especie Micrurus surinamensis .................................................81 8.3.2 DE 50 del Suero Antiofidico Anticoral Polivalente Liofilizado frente al veneno de la especie Micrurus mipartitus.......................................................82 8.3.3 DE 50 del Suero Antiofidico Anticoral Polivalente Liofilizado frente al veneno de la especie Micrurus isozonus. .......................................................82 8.3.4 DE 50 del Suero Antiofidico Anticoral Polivalente Liofilizado frente al veneno de la especie Micrurus dumerilii. ........................................................82 8.3.5 DE 50 del Suero Antiofidico Anticoral Polivalente Liofilizado frente al veneno de la especie Micrurus medemi. ........................................................82 9. CONCLUSIONES..............................................................................................83 10. RECOMENDACIONES....................................................................................85 BIBLIOGRAFIA.....................................................................................................86 ANEXOS................................................................................................................93
10 10
LISTA DE CUADROS
Pg. Cuadro 1. Dosis Letal Media DL50 Comparativas de los venenos Micrricos de algunas especies de la Amazonia ColombianaCuadro 2. Dosis Efectiva Media (Otero, 1.994)
Cuadro 2. Dosis Efectiva Media (Otero, 1.994)
Cuadro 3. Dosis Efectiva Media de los venenos micrricos (Charry, 2.006)
Cuadro 4. Dosificacin con veneno Micrrico
Cuadro 5. Casos Atendidos conSuero Anticoral Figura 2. rea de Estudio (Nilo Cundinamarca) Mapa Areo
Cuadro 6. Distribucion de los Venenos en Tubos Plsticos de Colores
Cuadro 7.Caractersticas morfomtricas de los ejemplares de la especie M. surinamensis
Cuadro 8. Cantidad de veneno obtenida durante el tiempo de estudio en miligramos para la especie M. s.surinamensis
Cuadro 9. Caractersticas morfomtricas de los ejemplares de la especie Micrurus mipartitus
Cuadro 10. Cantidad de veneno obtenida durante el tiempo de estudio en miligramos para la especie M. mipartitus
Cuadro 11. Caractersticas morfomtricas de los ejemplares de la especie M.isozonus
Cuadro 12. Cantidad de veneno obtenida durante el tiempo de estudio en miligramos para la especie M.isozonus
Cuadro 13. Caractersticas morfomtricas de los ejemplares de la especie M. dumerilii
Cuadro 14. Cantidad de veneno obtenida durante el tiempo de estudio en miligramos para la especie M.dumerilii.
32 34 35 36 38 41 49 49 50 50 52 52 53 53 11 11 Cuadro 15. Caractersticas morfomtricas de los ejemplares de la especie M. mipartitus
Cuadro 16. Cantidad de veneno obtenida durante el tiempo de estudio en miligramos para la especie M. medemi
Cuadro 17. Ensayos preliminares para la determinacin de la Dosis letal Media para el Veneno Micrurus surinamensis
Cuadro 18. Pruebas finales para la determinacin de la dosis letal media para el Veneno Micrurus surinamensis
Cuadro 19. Ensayos preliminares para la determinacin de la dosis letal media para el Veneno Micrurus mipartitus
Cuadro 20. Pruebas finales para la determinacin de la dosis letal media para el Veneno Micrurus mipartitus
Cuadro 21. Ensayos preliminares para la determinacin de la dosis letal media para el Veneno Micrurus isozonus
Cuadro 22. Pruebas finales para la determinacin de la dosis letal media para el Veneno Micrurus isozonus
Cuadro 23. Ensayos preliminares para la determinacin de la dosis letal media para el veneno Micrurus dumerilii
Cuadro 24. Pruebas finales para la determinacin de la dosis letal media para el veneno Micrurus dumerilii
Cuadro 25. Ensayos preliminares para la determinacin de la dosis letal media para el veneno Micrurus medemi
Cuadro 26. Pruebas finales para la determinacin de la dosis letal media para el veneno Micrurus medemi
Cuadro 27. Determinacin de la DE 50 del Suero Antimoral frente al veneno Micrurus surinamensis
Cuadro 28. Determinacin de la dosis efectiva media (DE 50 ) para el veneno Micrurus mipartitus probando la efectividad del el suero antiofidico anticoral polivalente liofilizado Lote piloto AC-005 producido por Laboratorios Probiol S.A. (Tcnica utilizada por el Instituto Clodomiro Picado)
54 55 55 56 58 59 61 62 64 65 67 68 70 71 12 12 Cuadro 29. Determinacin de la dosis efectiva media (DE 50 ) para el Veneno Micrurus isozonus frente al suero antiofidico anticoral polivalente liofilizado Lote piloto AC-005 de producido por Laboratorios Probiol S.A. (Tcnica utilizada por el Instituto Clodomiro Picado)
Cuadro 30. Determinacin de la dosis efectiva media (DE 50 ) para el veneno Micrurus dumerilii frente al suero antiofidico anticoral polivalente liofilizado Lote piloto AC-005 producido por Laboratorios Probiol S.A. (Tcnica utilizada por el Instituto Clodomiro Picado)
Cuadro 31. Determinacin de la dosis efectiva media (DE 50 ) para el veneno Micrurus medemi frente al Suero Antiofidico Anticoral Polivalente Liofilizado Lote piloto AC-005 producido por Laboratorios Probiol S.A. (Tcnica utilizada por el Instituto Clodomiro Picado)
Cuadro 32. Efectividad del Suero Antiofdico Antimoral Lote Piloto: AC 005 frente a cinco Lotes de veneno del gnero Micrurus sp.
72 73 74 75
13 13
LISTA DE FIGURAS Pg.
Figura 1. Anlisis de la Produccin de Suero Anticoral
Figura 2. rea de Estudio (Nilo Cundinamarca) Mapa Areo
Figura 3. Mtodo de Extraccin del veneno Micrrico
Figura 4. Dosis Letal Media (DL 50 )
Figura 5. Dosis Efectiva Media (DE 50 )
Figura 6. Micrurus surinamensis surinamensis, Cuvier (1.817)
Figura 7.Micrurus mipartitus, Dumril y Bibrn (1.854)
Figura 8. Micrurus isozonus, Cope (1.860)
Figura 9. Micrurus dumerilii, Griffin (1.9169)
Figura 10. Micrurus medemi, Roze 81.967)
37 39 40 43 45 48 50 51 53 54
14 14
LISTA DE GRFICAS
Pg.
Grfica 1. Curva de la dosis letal media del veneno Micrurus surinamensis en estado de cautiverio en Nilo - Cundinamarca
Grfica 2. Curva de la dosis letal media del veneno Micrurus mipartitus en estado de cautiverio en Nilo - Cundinamarca
Grfica 3. Curva de la dosis letal media del veneno Micrurus isozonus en estado de cautiverio en Nilo - Cundinamarca
Grfica 4. Curva de la dosis letal media del veneno Micrurus dumerilii en estado de cautiverio en Nilo - Cundinamarca
Grfica 5. Curva de la dosis letal media del veneno Micrurus medemi en estado de cautiverio en Nilo - Cundinamarca
Grfica 6. Curva de la dosis efectiva medio (DE 50 )
para el veneno Micrurus surinamensis frente al suero antiofidico anticoral polivalente liofilizado Lote piloto AC-005 producido por Laboratorios Probiol S.A. (Tcnica utilizada por el Instituto Clodomiro Picado)
Grfica 7. Curva de la dosis efectiva media (DE 50 )
para el veneno Micrurus mipartitus frente al suero antiofidico anticoral polivalente liofilizado Lote piloto AC-005 producido por Laboratorios Probiol S.A.
Grfica 8. Curva de la dosis efectiva media (DE 50 ) para el veneno Micrurus isozonus frente al suero antiofidico anticoral polivalente Liofilizado Lote piloto AC-005 producido por Laboratorios Probiol S.A.
Grfica 9. Curva de la dosis efectiva media (DE 50 ) para el veneno Micrurus dumerilii frente al Suero antiofidico Anticoral Polivalente Liofilizado Lote piloto AC-005 de Laboratorios Probiol S.A.
Grfica 10. Curva de la dosis efectiva media (DE 50 )
para el veneno Micrurus medemi frente al Suero Antiofidico Anticoral Polivalente Liofilizado Lote piloto AC-005 de Laboratorios Probiol S.A.
57 60 63 66 69 70 71 72 73 74
15 15
LISTA DE TABLAS
Pg.
Tabla 1. Clasificacin Taxonmica de las Micrurus en estudio
Tabla 2. Denticin de la familia Elapidae, (Soerensen, 1.990)
Tabla 3. Dosis Letal Media de venenos de serpientes Colombianas
Tabla 4. Clasificacin Taxonmica Micrurus surinamensis
Tabla 5. Clasificacin Taxonmica Micrurus mipartitus
Tabla 6. Clasificacin Taxonmica Micrurus isozonus
Tabla 7. Clasificacin Taxonmica Micrurus dumerilii
Tabla 8. Clasificacin Taxonmica Micrurus medemi
25 26 30 48 49 51 52 54
16 16
LISTA DE ANEXOS
Pg.
ANEXO A. FICHA DE ASPECTOS BIOLOGICOS DE LAS ESPECIES EN ESTUDIO
ANEXO B. UTILIZACIN DE ANIMALES DE LABORATORIO EN LA EXPERIMENTACIN BIOLGICA
ANEXO C. CARACTERISTICAS GENERALES DE LOS BIOMODELOS
ANEXO D. FORMATO PRUEBA DOSIS LETAL MEDIA
ANEXO E. FORMATO PRUEBA DOSIS EFECTIVA (DE 50 )
ANEXO F. MATERIALES
ANEXO G ANLISIS ESTADSTICOS PARA DETERMINAR LA DL 50 Y DE 50
94 107 118 119 121 122 124
17 17
RESUMEN
Se calcul la dosis letal media (DL 50 ) del veneno de las serpientes anteriormente mencionadas en estado de cautiverio en Nilo Cundinamarca (Colombia), inoculando ratones albinos de la especie Mus musculus por va intraperitoneal de 17 19 gramos. Se evaluaron dosis ascendentes de veneno desde 100 hasta 600 g/ por ratn, sometindoles a un periodo de observacin 24 48 horas post- inoculacin. La (DL 50 ) obtenida para las especies de Micrurus sp. de forma ascendente de mayor a menor toxicidad: Micrurus mipartitus de 5.53 g/ratn < Micrurus dumerilii de 8.83 g/ratn < Micrurus surinamensis de 13.50 g/ratn < Micrurus isozonus de 28.92 g/ratn < Micrurus medemi de 47.1 g/ratn.
Posteriormente se evalu la efectividad de un Lote Piloto: AC-005 de suero antiofdico antielapdico liofilizado producido por Laboratorios Probiol S.A. de Colombia frente a la toxicidad de cinco lotes de venenos utilizados, demostrando que el suero anticoral es polivalente y neutraliza de la misma forma los diferentes venenos en estudio sin importar la especie, estando en una relacin de 0.3 mg/ml. La (DE 50 ) del suero valorado en relacin con los venenenos de la especie Micrurus surinamensis es de 1.021 mg/ml, Micrurus mipartitus es de 0.8 mg/ml, Micrurus isozonus es de 1.28 mg/ml, Micrurus dumerilii es de 1.16 mg/ml y Micrurus medemi es de 1.55 mg/ml., utilizando ratones albinos de la especie Mus musculus con pesos de 20 -22 gramos, inoculndolos por va intraperitoneal.
Se determin que existe intima relacin entre la dosis de veneno, la dosis efectiva de suero antiofdico y su efecto, siendo notable la sensibilidad de los animales y la reproducibilidad de los experimentos, para las pruebas de letalidad y potencia.
18 18
ABSTRACT
There was calculated the lethal average dose (DL 50 ) of the poison of the serpents previously mentioned in condition of captivity in Nilo - Cundinamarca (Colombia), inoculating albino mouse of the species Mus musculus for route intraperitoneal with 17 - 19 grams. Ascending doses of poison were evaluated from 100 - 600 g/by mouse, submitting to a period of observation 24 - 48 hours post-inoculation. The (DL 50 ) obtained for the species of Micrurus sp. of ascending form of bigger than minor toxicity: Micrurus mipartitus of 5.53 g/mouse <Micrurus dumerilii of 8.83 g/mouse <Micrurus surinamensis of 13.50 g/mouse <Micrurus isozonus of 28.92 g/mouse <Micrurus medemi of 47.1 g/mouse.
Later there was evaluated the efficiency of a Pilot Lot: AC-005 of whey antiofdico antielapdico lyophilized produced by Laboratories Probiol S.A. of Colombia opposite to the toxicity of five lots of used poisons, demonstrating that the whey anticoral is polyvalent and neutralizes of the same form the different poisons in study without importing the species, being in a relation of 0.3 mg/ml. The (DE 50 ) of the whey valued for relation with the venenenos of the species Micrurus surinamensis is of 1.021 mg/ml, Micrurus mipartitus is of 0.8 mg/ml, Micrurus isozonus is of 1.28 mg/ml, Micrurus dumerilii is of 1.16 mg/ml and Micrurus medemi is of 1.55 mg/ml., using albino mouse of the species Mus musculus with weight of 20-22 grams, inoculating them for route intrperitoneal.
One determined that intimate relation exists between the dose of poison, the effective dose of whey antiofdico and his effect, being notable the sensibility of the animals and the reproducibilidad of the experiments, for the tests of lethal and promoting.
19 19
1. INTRODUCCIN
Colombia debido a sus propiedades geogrficas, es uno de los diez pases con mayor diversidad de vertebrados, con 2.890 especies de las cuales 520 son reptiles. Representan el 6% del total de las especies del mundo, que lo posicionan en el tercer lugar del planeta, con 97 especies de reptiles endmicas y 20 especies de reptiles en peligro de extincin, datos reportados por la Asociacin Colombiana de Parques Zoolgicos, Acuarios en el 2.003 y el Fondo para la Accin Ambiental, quienes afirman que as como Colombia posee una gran biodiversidad, tambin presenta una enorme vulnerabilidad en sus 99 ecosistemas.
Dentro de la clase Reptilia (reptiles), orden Squamata (escamosos), suborden Serpentes (serpientes), se distribuyen en 9 familias las serpientes en Colombia, de las cuales solo tres familias son venenosas: Viperidae (Vboras); Elapidae (Rabo de aj, Corales) y Colubridae (Cazadoras, culebras comunes) pero solo las dos primeras son de gran importancia mdica debido a la toxicidad de sus venenos; una de ellas es la familia Elapidae (serpientes corales o de anillos).
Taxonmicamente se han propuesto varias teoras para clasificar las corales, pero debido a que la taxonoma es una ciencia inexacta, que se encuentra en constantes reevaluaciones y cambios, el nmero de especies para Colombia vara segn el autor. Para Colombia la familia Elapidae, con el gnero Micrurus (Wagler, 1.824), Roze seala 13 especies en 1.966; Peters registra 14 en 1.986; 20 especies segn Campbell y Lamar en 1.989; Juan Jose Silva en 1.994 reporta para la Amazonia Colombiana 10 taxones del gnero Micrurus, subfamilia Elapinae, entre especies y subespecies vlidas; Orlando Chaparro en el 2.000 afirma que el pas representa uno de los centros de dispersin ms importantes del grupo con ms de 28 especies del gnero Micrurus y una del gnero Leptomicrurus (Schmidt,1.937), distribuidas en todo el territorio colombiano, desde el nivel del mar hasta los 2.400 m.s.n.m.; Daniel Pineda en el 2.002 public en el libro Accidentes por animales venenosos que la familia Elapidae tiene dos gneros para Colombia, Micrurus, conformado por 22 especies y Pelamis con una sola especie; 28 especies en el 2.006 por Jairo Maldonado distribuidas en 3 gneros Pelamis, Leptomicrurus y Micrurus; y considerando que algunos herpetlogos como Hctor Charry en el 2.006 incluyen el gnero Leptomicrurus como parte del gnero Micrurus, subfamilia Elapinae, con 22 especies. Esta extraordinaria diversidad hace que Colombia ocupe el tercer puesto en nmero de especies de coral despus de Mxico y Brasil.
20 20 Los venenos de las serpientes corales de la familia Elapidae, tienen accin predominantemente neurotxica y algunos cardiotxicos. La mayora de estos venenos tienen actividad de bloqueo postsinptico y en minora una actividad de bloqueo presinptico, producto de la accin de fosfolipasas A2 que afectan esta terminal (Charry, 2.006). La actividad de las neurotoxinas actan bloqueando la transmisin del impulso nervioso sobre los diferentes rganos, lo cual juega un papel importante en la accin letal de los venenos de estas serpientes, que han sido estudiados no slo con el objetivo de mejorar la calidad y eficacia de los antivenenos (sueros monovalentes y polivalentes) en el diagnstico y tratamiento de las mordeduras, sino tambin en estudios comparativos de los componentes de esos venenos, sus reacciones inmunolgicas, evolutivas haciendo una gran contribucin cientfica a la biologa y estimulando el inters cientfico en posteriores estudios (Chaparro, 2.000).
En el estudio toxinolgico desde el punto de vista farmacolgico, la dosis letal media de los venenos micrricos (serpientes coral) y la dosis efectiva media de los antivenenos frente a los venenos, es primordial en el estudio de la neutralizacin del poder txico de los mismos por un suero antiofdico antielapdico especfico o polivalente dependiendo de el mtodo que se utilice. Uno de los mtodos para analizar la toxicidad de un veneno es la dosis letal media (DL 50 ), definindose como aquella sustancia txica (veneno elapdico) expresada en miligramos por kilogramos de peso corporal (animales inoculados de la especie Mus musculus) capaz de matar el 50% de los animales inoculados, en un periodo de tiempo determinado, que usualmente es de 24 a 48 horas postinoculacin (Martnez, 2.004).
Por lo anterior y considerando que para Colombia existen datos deficientes de la biologa y toxinologa experimental de los venenos de las serpientes Micrurus sp., el objetivo de este proyecto de investigacin fue determinar la dosis letal media (DL 50 ) de cinco especies de corales a saber: Micrurus surinamensis surinamensis, (Cuvier, 1.817); Micrurus mipartitus, (Dumril Bibron y Dumril, 1.854); Micrurus isozonus, (Cope, 1.860); Micrurus dumerilii, (Griffin, 1.916) y Micrurus medemi, (Roze, 1.967); en estado de cautiverio en el Parque Recreacional y Zoolgico Piscilago ubicado en el Municipio de Nilo, Departamento de Cundinamarca, Colombia.
Con la determinacin de la dosis letal media de las cinco especies de corales en estudio, se realiz posteriormente la prueba de seroneutralizacin para determinar la dosis efectiva media (DL 50 ), es decir la capacidad o potencia neutralizante efectiva media del Suero Antiofdico AntiElapdico (Lote Piloto Nmero AC 005) fabricado por Laboratorios Probiol S.A. para neutralizar un Pool de venenos de las cinco especies de Micrurus sp en estudio.
21 21
2. PROBLEMA
Las serpientes son reptiles que han sido culturalmente el grupo de vertebrados que ms rechazo causa a las personas. A su alrededor existen mitos y leyendas perpetuadas por la humanidad, como la creencia de que las serpientes corales (Micrurus) muerden por la cola. Estas son fantasas que se construyen en respuesta al desconocimiento acerca de su verdadera naturaleza, sin rescatar el importante papel que juegan en los ecosistemas, regulando poblaciones de insectos, mamferos, aves, anfibios y hasta reptiles incluyendo serpientes (Galvis, 2.005).
Taxonmicamente se han propuesto varias teoras para clasificar las corales, pero debido a que la taxonoma es una ciencia inexacta, que se encuentra en constantes reevaluaciones y cambios, el nmero de especies para Colombia vara segn el autor.
En la serie de libros rojos de especies amenazadas de Colombia no se estn teniendo en cuenta las serpientes y se presenta solo una de las especies Eunectes marinus comnmente conocida como anaconda con datos deficientes, corroborando el gran desconocimiento de la biologa de los ofidios.
Otras amenazas que ponen en riesgo la perpetuidad de las serpientes es el deterioro del hbitat, la persecucin y muerte indiscriminada por el hombre a causa del miedo irracional que hace que dificulten los estudios de estos taxones. Es claro que no podrn sobrevivir sin nuestra ayuda, y su extincin es la prdida de un eslabn en la cadena trfica que puede llevar a un desequilibrio ecolgico.
Las corales causan el 2.9% (Martnez, 2.006) del total de los accidentes ofdicos en Colombia y debido a la falta de informacin epidemiolgica confiable, segn el Ministerio de Proteccin Social, en Colombia se producen 4.000 accidentes al ao por mordedura de serpiente, 40 son por corales, donde las principales vctimas son los nios.
A pesar de que la incidencia de mordedura de serpientes de coral sea baja, considerando el gran nmero de especies y su gran distribucin en Colombia, cuando ocurre, se considera grave, ya que el accidente ofdico por Micrurus se maneja clnicamente como una intoxicacin y los principales efectos del veneno de estas serpientes son la parlisis flcida en la vctima, por lo cual ocasiona un paro cardiorrespiratorio y finalmente la muerte, sino es tratado clnicamente en las primeras horas con un Suero Antiofdico Anticoral (Gmez, 2.006)
22 22 El estudio toxinolgico de los venenos de las serpientes presentes en Colombia, especialmente de la familia Elapidae (corales), se desconoce total o parcialmente, ya que solo se han determinado las dosis letales medias para las Micrurus presentes en la Amazonia Colombiana y no existe reporte de las dosis letales de las Micrurus del centro del pas como la especie Micrurus mipartitus, de importancia mdica, causante de una gran cantidad de accidentes en la regin Andina del pas.
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3. JUSTIFICACIN
Este trabajo es importante para hacer un aporte de tipo cientfico a la biologa y toxinologa de las serpientes corales (Micrurus), haciendo especial nfasis en la importancia de su conservacin y la caracterizacin de los venenos de cinco especies a saber: Micrurus surinamensis surinamensis, (Cuvier, 1.817); Micrurus mipartitus, (Dumril Bibron y Dumril, 1.854); Micrurus isozonus, (Cope, 1.860); Micrurus dumerilii, (Griffin, 1.916) y Micrurus medemi, (Roze, 1.967), presentes en Colombia. Teniendo en cuenta que es el tercer pas con mayor especies de coral de Latinoamrica, despus de Brasil y Mxico; actualmente estn reportadas 29 especies de serpientes del gnero Micrurus (corales, rabo de aj, rabo de candela) segn Campbell y Lamar (2.004) con una amplia distribucin geogrfica en el territorio nacional.
En el presente estudio se determin la dosis letal media (DL 50 ), que se utilizaron para encontrar los umbrales de toxicidad, para cada uno de los cinco venenos en estudio. As mismo la verificacin de que el suero antiofdico anticoral polivalente liofilizado producido por Laboratorios Probiol S.A. posee una adecuada capacidad de neutralizacin frente a cada uno de los venenos de las especies Micrurus sp. mencionadas anteriormente como objeto de estudio.
En el desarrollo de los sueros antiofdicos, es muy importante establecer las dosis letales medias de las diferentes especies de serpientes, para luego conocer la eficiencia de los sueros antiofdicos. Por eso la Organizacin Mundial de la Salud (OMS) recomienda que es necesario establecer en cada pas sus propios parmetros para la produccin y regulacin de los antivenenos, aceptando que es necesario un procedimiento donde se compruebe el estado letal de cada lote de veneno utilizado (DL 50 ) y posteriormente se confirme la potencia neutralizante de cada lote de antivenenos con la dosis efectiva media (DE 50 ). (UPS, 2.000).
La dosis letal media de los venenos ofdicos y la dosis efectiva media, prueba de potencia, prueba de seroneutralizacin o titulacin de un suero antiofdico, estn definidas por la OMS como uno de los principales procedimientos que se tienen en cuenta al momento de evaluar la calidad de los antivenenos, gracias a que con estas pruebas se determina la cantidad de veneno en mililitros capaz de matar al 50% de la poblacin inoculada, indispensable a su vez para determinar la cantidad de veneno en miligramos que son neutralizados por un mililitro de suero. Esta razn convierte a la dosis efectiva media en la herramienta mdica ms prctica para la dosificacin ms acertada del antiveneno (BP, 1.973).
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4. OBJETIVOS
4.1 OBJETIVO GENERAL:
Determinar la dosis letal media (DL 50 ) de cinco especies de la familia Elapidae, gnero Micrurus sp., mantenidas en cautiverio en el Parque Recreacional y Zoolgico de Piscilago en el Municipio de Nilo, Departamento de Cundinamarca (Colombia).
4.2 OBJETIVOS ESPECIFICOS:
Identificar algunos aspectos biolgicos del manejo de las cinco especies de Micrurus sp. en estado de cautiverio, como la identificacin taxonmica, categora de amenaza (UICN, Apndice Cites), sexo, edad aproximada, condiciones fsicas, morfometra (longitud total, longitu cola), distribucin geogrfica, hbitat, comportamiento de la especie en cautiverio, manipulacin y transporte.
Determinacin de la Dosis Letal Media (DL 50 ) de los venenos de las cinco especies de Micrurus sp. presentes en Colombia:
Identificar las diferencias que presentan los resultados de la dosis letal media (DL 50 ) de los venenos de las cinco especies de Micrurus sp. anteriormente nombradas.
Realizar una prueba de efectividad del suero antiofdico antielapdico polivalente liofilizado (Lote pioto: AC 005) fabricado por Laboratorios Probiol S.A. frente a cada uno de los venenos de las cinco especies de Micrurus sp. en estudio.
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5. REVISION DE LITERATURA
5.1 Clasificacin Taxonmica
Tabla 1. Clasificacin Taxonmica de las Micrurus en estudio
5.2 Caractersticas generales de la especie Micrurus sp.
Las serpientes del gnero Micrurus son reptiles que carecen de extremidades; en trminos generales son de tamao mediano y pequeo, la mayora de las especies muestra proporciones con tendencia a ser muy delgadas; su cuerpo est cubierto por escamas lisas (Charry, 2.006); son conocidas popularmente con el nombre de corales, serpientes de anillos, rabo de aj, rabo de candela, cabeza de chocho, entre otros nombres vulgares dependiendo de la ubicacin geogrfica.
Se caracterizan en general por su diseo (cuerpo adornado con anillos que lo circundan completamente, que se disponen segn la especie en tradas o pares) y su patrn de coloracin (rojo, negro, blanco, amarillo) a excepcin de algunas especies (M.scutiventris y M.karlschmidti), includas para algunos autores en el gnero Leptomicrurus (Schmidt, 1.937), que tienen el dorso de color negro uniforme, sin anillos visibles; en la cabeza presentan un anillo completo de color amarillo o blanco y en la cola dos o tres anillos pequeos de color rojo (Silva, 1.994).
26 26 5.2.1 Morfologa y Fisiologa general
Desde el punto de vista taxonmico es quizs el aparato venenfero la caracterstica ms importante para diferenciar un ofidio del gnero Micrurus de cualquier serpiente de la familia Colubridae, Anilidae, con las cuales presentan similitudes que corresponde a formas diferentes de mimetismo (Silva, 1.994).
El aparato venenfero de los Micrurus, al igual que el de todos los dems tanatofidios, est compuesto por un par de glndulas situadas a cada lado de la cabeza, en la regin temporal, por detrs y debajo de los ojos. Tiene adems un par de pequeas glndulas accesorias, localizadas por delante de las glndulas principales y el conducto excretor de veneno, adems de un par de dientes inyectores cortos no mayores a 3mm. de largo, ligeramente incursados, situados en la parte inferior del maxilar superior y en el extremo anterior de ste. Estos ltimos estn surcados por un canal central para la conduccin del veneno cubierto por una membrana mucosa. Constituye una caracterstica importante de las corales verdaderas el tener el diente inyector siempre erctil y con poca movilidad anteroposterior (Silva, 1.994).
El tipo de denticin para las serpientes corales es llamado Proteroglifa (Tabla 2), segn Meja (1.987) el maxilar superior es alargado (belfas); la cabeza suele ser pequea, con cuello no diferenciado, ojos muy pequeos y puntiformes.
Tabla 2. Denticin de la familia Elapidae, (Soerensen, 1.990)
Habitan en zonas de clima medio y clido, algunas especies viven en estrecha cercana con los seres humanos, como las que prefieren los jardines o cultivos como el caf y cacao. Muchas especies llevan vida semisubterrnea, hbitos nocturnos y crepusculares, prefieren permanecer ocultas bajo la hojarasca, piedras o troncos, son serpientes de carcter manso, tmidas. Cuando se sienten en peligro, algunas levantan la cola y la enrollan para dar la impresin de que se trata de la cabeza (Otero, 1.994). Cuando muerden lo hacen con mucha fuerza y con frecuencia se quedan firmemente aferradas a la piel por un largo perodo de tiempo (Charry, 2.006), debido a que su boca es pequea y sus colmillos son cortos con baja o nula movilidad anteroposterior.
27 27 5.2.3 Tipo de alimentacin y reproduccin
El 90% de las especies de Micrurus sp. se alimentan de otras serpientes, son ofidifagas. Adems comen anfibios, peces y otros reptiles (Pineda, 2.002).
La reproduccin es interna; los machos han desarrollado rganos copuladores bifurcados a partir de la pared de la cloaca llamados hemipenes, a travs del surco, a lo largo de cada uno de los hemipenes es transportado el esperma hacia el aparato reproductor de la hembra (Young, 1.980). Slo uno de los dos hemipenes entra en la cloaca de la hembra, nunca ambos a la vez. Se reproducen por medio de huevos (Ovpara).
5.3 Distribucin Geogrfica de las Micrurus en estudio
Las Micrurus son las representantes de la familia Elapidae de Amrica, en donde tienen una amplia distribucin geogrfica. Se les encuentra desde la regin nororiental de los Estados Unidos, pasando por Mxico, Amrica Central y Sur Amrica, hasta la Argentina. En Colombia se distribuyen desde el nivel del mar hasta los 2.000 metros de altitud (Silva, 1.994). Las corales ocupan varios tipos de ambientes disponibles, desde los terrestres (hojarasca, races de los rboles), subterrneos y ambientes acuticos.
Se encuentra en la Amazona y Orinoqua colombiana; presentando una alta ocurrencia poblacional en las regiones limtrofes de Brasil y Per con Colombia. Las poblaciones de esta especie presentan mayor densidad en las reas de trapecio amaznico colombiano y en pases vecinos como Brasil, Ecuador, Per y Bolivia. Se aprecia una disminucin de la incidencia poblacional hacia el norte y el centro de la Amazonia colombiana, en los territorios de Guaviare, Guaina, Vaups y Orinoqua. Micrurus s. surinamensis, M. l. lemniscatus y M. spixii obscurus son las tres formas codominantes del gnero Micrurus en la regin amaznica. (Silva, 1.994).
M. s. surinamensis alcanza un gran desarrollo corporal; los individuos hembras adultos pueden tener hasta 1.400 mm de largo y el cuerpo robusto con un grosor de 100 a 120 mm medido en la parte media del cuerpo. Los especmenes hembras de mximo desarrollo tienen entre 450 a 600 gr. de peso; cabeza robusta de 40 mm de largo y 40 mm de ancho, deprimida anteroposteriormente; boca ancha, con hocico redondo, ojos pequeos, ligeramente sobresalientes y situados por encima; pupilas cilndricas; internasales ms pequeas que las prefrontales; frontal pequea ms delgada que ancha, lo cual constituye un elemento caracterstico de esta especie. Su cuerpo consta de tres colores los cuales forman anillos amarillos, negros y rojos. Cabeza caractersticamente roja, con las escamas ceflicas bordeadas con lneas negras; las escamas supraceflicas y las 28 28 labiales (supra e infralabiales) enrojecidas, es tpico de esta especie, lo cual constituye uno de los caracteres taxonmicos ms sobresalientes, fcil de reconocer y til para la identificacin de esta especie. Tienen dimorfismo sexual, las hembras poseen en forma constante un mayor desarrollo corporal que los machos (Silva, 1.994).
5.3.2 Micrurus mipartitus, (Dumril, Bibron y Dumril, 1.854)
En Antioquia y Choc la especie es conocida popularmente como rabo de aj, coral, cabeza de chocho o rabo de candela, posee anillos negros y blancos, o negros y amarillos en el cuerpo; una banda roja encima de la cabeza y entre dos y cuatro rojas en la cola; talla mxima 124 cm. (Otero, 1.994). Es Ovpara. Tiene costumbres nocturnas y subterrneas, pero tambin se le encuentra oculta entre grietas, troncos podridos y hojarasca. Se encuentra en todo el territorio nacional, principalmente en zonas hmedas y selvticas. Se alimenta de lagartijas, ranas y otras serpientes. Mide entre 50 a 90 centmetros de longitud, pero puede alcanzar un poco ms de un metro. Algunos estudios sugieren que es la serpiente terrestre ms venenosa del mundo. Por su comportamiento poco agresivo, los accidentes son raros, aunque sin tratamiento casi siempre son mortales (Vsquez, 1.995).
El ojo es pequeo, puntiforme y la pupila vertical semielptica. Tiene anillos negros separados por blancos o amarillos ms delgados, pero el segundo de la cabeza y los tres o cinco ltimos, son rojos brillantes. Posee 15 hileras de escamas dorsales y carece de escama loreal, en general son de vida nocturna y subterrnea, se alimentan de caecilidos, lagartos y otras serpientes. Son ovparas, se hallan distribudas en Centro Amrica y Norte de Suramrica. En Colombia es probablemente la ms abundante en la cordillera de los andes encontrndose ampliamente distribuida a una altura aproximada de 1.800 metros sobre el nivel del mar. Es comn en zonas productoras de caf (ngel, 1.983).
5.3.3 Micrurus isozonus, Cope, 1.860
Segn Campbell y Lamar (2.004) esta especie mide en promedio 50 y 70 cm aunque no son raros los ejemplares de un metro de longitud, existe un registro de un ejemplar que midi 150 cm. Presenta una coloracin dorsal conformada por triadas, series de tres anillos negros alternados con dos blancos y un anillo rojo brillante que separa cada triada entre si. Normalmente los anillos rojos son ms largos que los anillos individuales de las triadas. Posee entre 10 y 14 triadas en el cuerpo adems de 1 2/3 en la cola. El hocico es blanco ynegro, este patrn puede extenderse hasta la parte trasera de los ojos y al mismo nivel en el dordo de la cabeza. Despus puede observarse una banda gris o blancuzca que tiene manchas irregulares que atraviesa de lado a lado la cabeza transversalmente. En otros ejemplares el hocico es gris con manchas negras y una banda esta bordeada posteriormente por un anillo rojo ancho que puede incluir algunas escamas en el frente y dorso de la cabeza, posterior a este se encuentra el anillo 29 29 negro de la primer triada. El vientre de la cabeza usualmente es rojo, blanco con pigmento negro hacia las escamas que bordean la boca.
Es una especie que se encuentra en Colombia distribuda hasta los 1.400 m.s.n.m. en la regin de la Orinoqua y puede llegar a medir unos 70 centmetros. El patrn de coloracin son anillos rojos, negros, y amarillos. Los anillos negros en grupos de tres intercalados por dos anillos amarillos y los anillos negros extremos tocando los anillos rojos. En estado de cautiverio se han logrado conservar varios ejemplares de esta especie por ms de dos aos (Maldonado, 2.006). De su biologa se conoce muy poco.
5.3.4 Micrurus dumerilii, (Griffin, 1.916) Esta especie algunos la clasifican como Micrurus carinicaudus antioquensis (Prez et al, 1.993), la indican como sinnimo de M.dumerilii antioquensis. M. dumerilii ha sido reportada para Colombia (en El Cedro, Ro Jurad, Choc) cerca de la frontera con Panam segn Campbell y Lamar (1.989), sin embargo no se ha registrado en territorio panameo. Esta especie es endmica para Colombia, se encuentra en tierras del oeste del pas, la zona Andina y la Sierra Nevada de Santa Martha hasta los 2.133 m.s.n.m.; se han reportado cinco subespecies en todo el territorio colombiano M. d. antioquiensis, M. d. carinicaudus, M. d. colombianus, M. d. dumerilli, y M. d. transandinus. El patrn de coloracin para las subespecies M. d .dumerilli y M. d. colombianus tienen los anillos negros en grupos de tres. Se han logrado mantener las subespecies M. d. antioquiensis y M. d. transandinus ms de un ao vivas con la misma dieta que para la especie Micrurus medemi en estado de cautividad (Maldonado, 2.006).
5.3.5 Micrurus medemi, (Roze, 1.967)
Es una especie endmica de Colombia. Esta serpiente ha llegado a medir 60 centmetros en estado de cautiverio. Tiene un patrn de coloracin diferente de otras corales; a lo largo de su cuerpo posee anillos negros intercalados con anillos amarillos, blancos o rojos (pero no todos al tiempo); habita en el bosque hmedo tropical y seco entre 250 600 m.s.n.m. Se ha reportado una satisfactoria reproduccin en cautiverio de especies provenientes de reas cercanas a Nilo (Cundinamarca) como Villavicencio (Meta) en el Parque Recreacional y Serpentario Piscilago, con una dieta que incluye cecilias, varias serpientes pequeas y alimentacin artificial a base de mezclas de harinas y carne (Maldonado, 2.006).
30 30 5.4 Venenos Ofdicos
El veneno de las serpientes es una mezcla de diferentes compuestos slidos de los cuales 70 a 90% son polipptidos y protenas, 10 a 30% compuestos y elementos de bajo peso molecular. Los compuestos del veneno han sido clasificados segn Daniel Pineda en 2.002 en proteicos y no proteicos. La dosis letal media de los venenos de serpientes colombianas se presenta en la Tabla 3. (Pineda, 2.002).
Tabla 3. Dosis Letal Media de venenos de serpientes Colombianas
Especie DL 50 (mg/ratn)*(Sic) Micrurus mipartitus 9, 0 Crotalus durissus terrificus 130, 0 Bothrops atrox 58, 0 69, 0 Botriechis shlegelii 206, 0 Botricpsis punctat 47, 0 * Inoculacin intraperitoneal de 5 ratones de 18 20 g/nivel. (Sic): [No es mg/ratn sino es g/ratn], la medida de Dl 50 se da en microgramos por ratn o por peso de ratn.
5.4.1 Venenos micrricos
Los venenos de las corales son muy potentes, su accin es predominantemente neurotxica, si bien algunos tambin cardiotxicos. Nunca debe subestimarse el tamao de la serpiente, ni la ausencia inicial de sntomas generales y locales. La mordedura es indolora de una pequea serpiente coral rabo de aj de 10 a 15 cm de longitud y tan delgada como un cordn de zapato, es potencialmente mortal para un hombre adulto. Estos venenos poseen neurotoxinas de bajo peso molecular, que se unen frecuentemente a los receptores colinrgicos de la placa neuromotora de las fibras musculares, actuando como un aislante que bloquea el paso del impulso nervioso al msculo, lo que ocasiona una parlisis flcida que puede conducir a disnea y paro respiratorio (Charry, 2.006).
El veneno de las corales induce efectos tpicamente neurotxicos, produciendo por lo general un bloqueo postsinptico de los receptores colinrgicos de la placa motora. Este veneno se esparce rpidamente por los tejidos y bloquea los receptores de acetilcolina en los msculos, observndose entre los sntomas por mordedura de coral una parlisis muscular (Galvis, 2.005); sin embargo, algunos venenos micrricos poseen tambin actividad de bloqueo presinptico, producto de la accin de fosfolipasas A 2 que afectan esta terminal. Es importante recordar que los venenos de las corales no producen efectos hemorrgicos, coagulaciones, ni daos locales a piel o tejidos (Charry, 2.006).
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5.4.2 Dosis Letal Media de los venenos Elapdicos en Colombia
En Colombia existe una fuente de informacin deficiente acerca de la accin letal de los venenos de las serpientes en general, especialmente las pertenecientes a la familia Elapidae. Slo hay un reporte desde 1.994 publicado por el Mdico de la Universidad Nacional de Colombia Juan Jos Silva Haad quien fue el primer cientfico que public un artculo llamado Los micrurus de la Amazonia Colombiana. Biologa y toxicologa experimental de sus venenos donde determin la dosis letal media DL 50 para el veneno de 15 tanatofdios pertenecientes al gnero Micrurus que viven en la regin amaznica.
En este experimento se investig la produccin mxima y media de veneno en las diferentes especies de Micrurus. Las diferentes cantidades obtenidas se relacionaron con los tamaos de los Micrurus comnmente observados en la Amazona. Los datos obtenidos acerca de los tamaos y de la produccin de veneno de cada grupo muestra, fueron sometidos a clculos y anlisis estadsticos para determinar los diferentes valores de los intervalos de clase.
En los ensayos de investigacin Silva (1.994) empleo ratones blancos machos y hembras no preadas, de 25 a 35 gramos, utilizando grupos de seis ratones con pesos iguales para cada dosis letal de ensayo y por cada va orgnica de inoculacin experimentada. Se hizo uso de palomas domsticas (Columbia livia), con pesos de 200 a 300 gramos; cobayos machos (Cavia cobaya) con pesos de 200 a 300 gramos y primates de la especie Aotus nancymai con pesos de 600 a 800 gramos.
La dosis letal media, est definida en farmacologa y se utiliza para obtener la dosis media capaz de matar el 50% de la poblacin inoculada por el veneno en este caso ofdico de especies del gnero Micrurus; esta dosis letal media (DL 50 ) se expres en microgramos por gramo de peso corporal, para los animales cuyo peso era menos a un kilogramo y en miligramos por kilo de peso corporal para aquellos cuyo peso era mayor de un kilogramo. Los estudios de venenos de las diferentes especies de Micrurus, permitieron demostrar que la especie M.s.surinamensis es el mayor productor de veneno entre todas las especies de coral que viven en la regin Amaznica.
Los resultados obtenidos indicaron que las palomas, los primates y los cobayos son los animales ms susceptibles al veneno de M. s. surinamensis, administrado bien sea por la va Intramuscular (I.M.) o Intraperitoneal (I.P). La sensibilidad de estas tres especies al veneno micrrico es similar, como se aprecia en el Cuadro 1. El ratn blanco de acuerdo con los resultados observados, exhibe comparativamente con los cobayos, palomas y micos, la mayor resistencia a los venenos de M. l. lemniscatus, M. spixii obscurus y M. s. surinamensis.
32 32 Cuadro 1. Dosis Letal Media DL50 Comparativas de los venenos Micrricos de algunas especies de la Amazonia Colombiana
Especie Dosis Letal 50 DL 50
Va de Administracin Animal Empleado 1.41 g/gr peso I.P Mus musculus M.hemprichii ortoni 3.4 g/gr I.M Mus musculus 0.44 g/gr I.P Mus musculus M.lemniscatus l. 0.50 g/gr I.M Mus musculus 2.2 g/gr I.P Mus musculus M.spixii obscurus 4.25 g/gr I.M Mus musculus 0.41 g/gr I.P Mus musculus 0.55 g/gr I.M Mus musculus 0.18 g/gr I.M Aotus nancymai M. s. surinamensis 0.068 g/gr I.V Aotus nancymai 0.2 g/gr I.M Cavia cobaya M. s. surinamensis 0.065 g/gr I.V Cavia cobaya 0.18 g/gr I.M Columbia livia M. s. surinamensis 0.068 g/gr I.V Columbia livia *(Tomado del Artculo Los Micrurus de la Amazona Colombiana. Biologa y toxicologa experimental de sus venenos Silva, 1.994.)
5.5 Accidente Ofdico por corales en Colombia
Los accidentes ofidicos por corales representan el 2.9% (Martnez, 2.006) de las mordeduras por serpientes. Su diagnstico se puede realizar mediante la identificacin de la serpiente, ya sea porque el paciente la describa o porque la capture y la lleve al centro de salud para que sea identificada; si se desconoce el agente agresor, se hace fundamental hacer un diagnstico clnico o cuadro clnico en donde se tiene que tener en cuenta los siguientes aspectos:
a) las manifestaciones neurolgicas que son tpicas de este envenenamiento y b) las manifestaciones hemorrgicas que estn completamente ausentes en este tipo de accidentes. El diagnstico diferencial de un accidente ofdico por serpientes de la familia Elapidae y Viperidae es fundamental ya que ambos tratamientos deben realizarse con un suero antiofdico especfico diferente, por lo tanto es importante descartar otro tipo de envenenamiento por serpientes (Pineda, 2.002).
Las manifestaciones clnicas del envenenamiento por serpientes de coral en el accidentado es exclusivamente neurolgico, en los casos moderados y graves, el paciente puede presentar un compromiso con los msculos de las extremidades que le puede dificultar el mantenerse de pie y de los msculos respiratorios que lo llevan a presentar disnea; los efectos locales son escasos con dolor leve, mnimo 33 33 y transitorio (Pineda, 2.002); el edema es escaso solamente alrededor de la mordedura, no hay hemorragias en la piel, excepto a travs de los orificios dejados por los colmillos. No se presentan ampollas, ni necrosis y despus de unos minutos aparecen parestesias en el sitio de la mordedura, pero por el contrario la mordedura es mortal en cuestin de horas dependiendo de la regin afectada (Otero, 1.994).
El accidente ofdico por coral no es frecuente pero cuando ocurre se considera grave (Gmez, 2.003), ya que el envenenamiento ocurre a nivel sistmico, lo cual puede ser severo, siendo entonces una intoxicacin esencialmente neurotxica y experimentalmente se demostr su efecto miotxico (Vital, et al, 1.983/84); el veneno se difunde rpidamente por los tejidos y si el paciente Animal o Humano no es atendido de inmediato con Suero Antiofdico AntiElapdico en el transcurso de unas pocas horas ocasiona parlisis de todos los msculos del cuerpo incluyendo los msculos respiratorios provocando que la vctima tenga dificultad al respirar sin que el afectado pierda el conocimiento, generando paro cardiaco respiratorio y finalmente la muerte (Gmez, 2.003).
5.5.1 Clasificacin del Accidente Ofdico
Este tipo de accidente ofdico se clasifica teniendo en cuenta fundamentalmente el grado de compromiso de la funcin respiratoria; si no est comprometida, hablamos de un accidente moderado; si hay compromiso de los msculos respiratorios, hablamos de un accidente severo. Es importante tener en cuenta que la clasificacin de este accidente puede cambiar con la evolucin y que un paciente que ingres con un accidente moderado puede evolucionar hacia uno severo. Se habla de un accidente leve cuando el paciente no presenta ningn tipo de alteracin motora, clasificacin que puede variar segn la evolucin del estado neurolgico, por tanto la vctima que ha entrado como un accidente leve, permanezca en observacin, por lo menos de 6 horas antes de darle de alta, ya que as como existe la probabilidad de que sea una mordedura seca o sin inoculacin de veneno, podra ocurrir lo contrario (Pineda, 2.002).
5.6 Seroterapia en Accidentes ofdicos por Micrurus
En el accidente elapdico (corales), en las regiones de Antioquia y Choc, se tienen dos especies importantes: Micrurus mipartitus y Micrurus dumerilii. Para la primera se produce en Costa Rica un antiveneno especfico anticoral gargantilla o rabo de aj. La evaluacin de este antiveneno y su comparacin con el suero anticoral producido por Probiol (Bogot), con veneno de otras especies de la Amazona, realizado por el Doctor Rafael Otero Patio. Cuadro 2.
34 34 Cuadro 2. Dosis Efectiva Media (Otero, 1.994)
DE 50 Neutralizante del efecto letal del veneno de Micrurus mipartitus (4 DE 50 = 36 g) Suero anti M.mipartitus Instituto Clodomiro Picado ICP (Costa Rica) 0.5 mg veneno/ml antiveneno Suero Anticoral (Laboratorios Probiol) (Colombia) 0.13 mg veneno/ml antiveneno *Tomado del Artculo Seroterapia y Tratamiento del Accidente Ofdico en Antioquia y Choc por el Doctor Rafael Otero Patio.
Para M.dumerilii no se produce antiveneno especfico en ninguno de los pases de Amrica Latina. Sin embargo, este veneno antignicamente es muy parecido al de M.nigrocinctus, especie que se encuentra en el Urab Antioqueo, Choc y Centroamrica; en Costa Rica, el (ICP) Instituto Clodomiro Picado produce un antiveneno especfico anti-M.nigrocinctus. La evalucacin experimental contra el efecto letal (4DL 50 = 30 g veneno de M.dumerilii antiquensis), segn reportes del Doctor Rafael Otero fue:
DE 50 = 0.8 mg veneno/ml antiveneno (anticoral ICP)
El antiveneno habra que aplicarlo antes que el paciente tenga parlisis, es decir en las primeras 2 horas; sin embargo el 50% de los pacientes llegan al hospital en insuficiencia respiratoria y por lo tanto, el antiveneno no logra revertir los sntomas paralticos y estos persisten durante 3 a 6 das. En consecuencia, el soporte ventilatorio adecuado se constituye en la parte importante del tratamiento (Otero, 1.994).
5.6.1 Dosis Efectiva Media del Suero Antielapdico Probiol frente a los venenos Micrricos
El suero antiofdico antielapdico liofilizado producido por Laboratorios Probiol S.A. posee una adecuada potencia neutralizante contra los venenos de serpientes de las especies Micrurus mipartitus, Micrurus s.surinamensis, Micrurus dumerilii, Micrurus spyches medemi y Micrurus spixii (Charry, 2.006).
La dosis efectiva media (DE 50 ) del suero antiofdico antielapdico de Laboratorios Probiol S.A. frente al veneno de cada una de las especies de serpientes Micrurus sp. mencionadas anteriormente, segn pruebas y experimentos realizados por el Doctor Hctor Charry en el Centro de Investigacin y Asesora Ofidiolgica OPHIDIA en Manizales, se muestran en el Cuadro 3.
35 35 Cuadro 3. Dosis Efectiva Media de los venenos micrricos (Charry, 2.006)
Especie Dosis Efectiva Media (DE 50 ) Micrurus mipartitus 1,37* Micrurus s. surinamensis 1,12* Micrurus dumerilii 1,25* Micrurus spyches medemi 1,37* Micrurus spixii 2.37* Micrurus s.p.p. Mezcla Homognea 1,20* *DE 50 expresada en miligramos de veneno neutralizados por cada 10 ml de antiveneno
La demostrada capacidad neutralizante (DE 50 ) del suero antiofdico anticoral de Laboratorios Probiol S.A. frente a los venenos micrricos, guarda una coherente relacin proporcin con la cantidad promedio de veneno inoculada en la mordida de la mayora de las especies de corales estudiadas y que est entre los 5 a 25 mg de veneno, esto significa que una dosis inicial de entre 5 y 10 frascos viales de 10 ml del antiveneno permiten tratar adecuadamente un accidente micrrico promedio, siempre y cuando su aplicacin sea precoz y por la va de administracin ms adecuada (intravenosa)(Charry, 2.006).
No existe ningn mtodo para la dosificacin de antivenenos que pueda ser recomendado internacionalmente. Las variaciones existentes en cuanto a composicin y accin de los venenos es tan grande que difcilmente pueden concebirse una prueba nica general. Cada pas o regin debe establecer sus propios parmetros para la dosificacin de sus sueros.
La Organizacin Mundial de la Salud ha considerado que mtodos ms sencillos, como la simple demostracin del nmero de miligramos que una unidad de volumen de antiveneno neutraliza, es tan precisa y ms econmica que cualquier otro mtodo ms elaborado. Se concluy, adems, que para el clnico la cantidad de miligramos de veneno que una dosis de antiveneno neutraliza, es ms fcil de comprender y relacionar con el tratamiento a seguir.
Por facilidad de mantenimiento y costo, el ratn blanco es el animal preferiblemente para la dosificacin de potencia. La ruta de inoculacin es importante y debe utilizarse aquella que muestre un resultado ms acorde con la realidad; tericamente, es la intramuscular o subcutnea. Sin embrago, su uso no es prctico en el ratn blanco, ya que este es muy resistente a los venenos por esta va.
El veneno que recibe cada ratn en la prueba no debe ser inferior a 3DL 50 . El veneno de referencia debe ser una mezcla de venenos individuales representantes de las diferentes zonas geogrficas de la regin, desecado por 36 36 liofilizacin, escrupulosamente dosificado y conservado en fro y en la oscuridad. Segn la OMS, se aconseja incluir paralelamente con el suero a probar una antitoxina previamente dosificada como suero de referencia. Adems, conviene repetir la DL 50 cada vez que un nuevo lote de antiveneno va a ser dosificado.
El mtodo que sugiere la OMS consiste en la mezcla de una cantidad fija de veneno en presencia de cantidades variables del antiveneno, las que se ajustan a un volumen igual, se incuban 30 minutos a 37 C y se inoculan por va intraperitoneal en grupos de cinco ratones por mezcla, de forma que cada uno reciba una dosis no inferior a 3Dl 50 .
El ttulo de neutralizacin en microgramos de veneno neutralizado por mililitro se calcula con base en la menor cantidad de antiveneno que protege al menos cuatro de los cinco animales.
Ejemplo de protocolos utilizados en la determinacin de potencia:
Cuadro 4. Dosificacin con veneno Micrrico
Experimento No. Ml de Veneno (1mg/ml) Ml de Solucin Salina Ml de Antiveneno Relacin g Veneno/1 ml de Antiveneno No. de Ratones Cantidad a Inocular 1 0,3 1,2 3,0 100 5 0,75 2 0,3 2,7 1,5 200 5 0,75 3 0,3 3,2 1,0 300 5 0,75 4 0,3 3,45 0,75 400 5 0,75 5 0,3 3.60 0,6 500 5 0,75 6 0,3 4.2 - Control 5 0,75 *Dosis Prueba por Ratn 50 g (Observacin por 72 horas) por el Instituto Clodomiro Picado en Costa Rica.
5.6.2 Produccin de Suero Antiofdico Antielapdico en Colombia
Hace 40 aos el nico productor de suero antiofdico para la familia Viperidae fue el Instituto Nacional de Salud, es importante aclarar que el Instituto durante todos esos aos slo produjo Suero para las mordeduras de serpientes de esta familia conocida con los siguientes nombres vulgares: talla x, veinticuatro, patoco, patoquilla, cascabel, verrugoso y nunca produjo suero para las mordeduras de serpientes de la familia Elapidae, es decir las corales (rabo de aj, coral, coralilla) (Gmez, 2.006).
Pero a partir de los 80, se cont con un productor de carcter privado en el pas llamado Laboratorios Probiol. Este laboratorio fundado en 1956 por el Doctor Cesar Gmez Villegas, inici la produccin y comercializacin de sueros antiofdicos en 1.988 y adems de producir el suero antiofdico para las mordeduras de la familia Viperidae incursion en el suero para la mordedura de 37 37 corales convirtindose en el nico productor de suero antimoral en el pas (Gmez, 2.006).
Colombia hasta el ao 1.997 cont con dos productores nacionales de sueros antiofdicos; entre los dos suplan las necesidades en cuanto a accidentes ofidicos por mordedura de serpientes de la familia Viperidae y Elapidae, abasteciendo las necesidades no solo de Colombia como productor sino tambin como exportador de este importante biolgico en pases vecinos como Panam, Ecuador y Per, aportando al desarrollo cientfico, econmico y social (Monje, 2.006).
El Laboratorio Probiol realiz un anlisis estadstico de la Produccin de suero anticoral desde 1.988 hasta el 2.006 en Colombia que se presenta a continuacin en la Figura 1 en donde se muestra que desde el ao 1.998 no hay produccin de este biolgico vital en el pas. En cuanto a las especies que causan el accidente ofidico elapdico, los datos que se muestran en el Cuadro 5 son los casos atendidos con suero antielapdico producido por Laboratorios Probiol. se presentan como una informacin, debido a su bajo nmero, no pueden ser analizados estadsticamente.
Figura 1. Anlisis de la Produccin de Suero Anticoral
ANLISIS DE LA PRODUCCIN DE SUERO ANTIOFDICO PARA LA FAMILIA ELAPIDAE EN COLOMBIA 1988 - 2006 0 1.000 2.000 3.000 4.000 5.000 6.000 7.000 8.000 9.000 10.000 1 9 8 8 1 9 8 9 1 9 9 0 1 9 9 1 1 9 9 2 1 9 9 3 1 9 9 4 1 9 9 5 1 9 9 6 1 9 9 7 1 9 9 8 1 9 9 9 2 0 0 0 2 0 0 1 2 0 0 2 2 0 0 3 2 0 0 4 2 0 0 5 2 0 0 6 AOS C A N T I D A D
D E
F R A S C O S PRODUCCIN LABORATORIOS PROBIOL COMPORTAMIENTO DE LA PRODUCCIN 1992 - 2006
*(Tomado del Archivo de Laboratorios Probiol S.A 50 aos de Historia por Clemencia Gmez Cabal, 2.006)
38 38
Cuadro 5. Casos Atendidos conSuero Anticoral
Nombre
Edad aos Lugar y Fecha del Accidente
Institucin
Fecha Diagnstico
Andrea Lobo de la Hoz
2
Santa Marta (Magdalena)
Clnica Marcaribe
23 VII 2003 1. Accidente ofdico por coral en mano
Brayan Alexis Arciniegas 7
Bucaramanga (Santander)
Clnica Materno Infantil
28 VII 2003 1. Accidente Ofdico por coral en el pie Juan Carlos Otalvaro 27
Cartago (Valle del Cauca)
Hospital Universitario del Valle Evaristo Garca 23 VII 1994 1. Neurotoxicidad por mordedura de coral. 2. Intoxicacin por hidrocarburos Steven Romn Prez 2 Mesitas del Colegio (Cundinamarca) Hospital de Kennedy (Bogot D.C.) 23 VIII 1.994 1. Mordedura por coral M.mipartitus en el dedo de la mano izquierda Nerlsy Janet Panado 22 Villavicencio (Meta) Hospital Departamental de Villavicencio 22 VI 1.992 1. Mordedura en el cuello por la especie M.psyches Efran Jimnez Bueno 40 Caicedonia (Valle del Cauca) Hospital Universitario San Juan de Dios (Armenia) 2 II 1.992 1. Mordedura por ofidio tipo coral en arco interno del pie izquierdo *(Tomado del Archivo de Laboratorios Probiol S.A. 50 aos de Historia por Clemencia Gmez Cabal, 2.006).
Actualmente el pas cuenta con la produccin de suero antiofdico polivalente para vipridos producido por el Laboratorio Probiol S.A., pero no para coral. Aunque es doloroso decirlo, las razones de haber terminado la produccin de suero anticoral en el pas se debi al cierre que tuvo el Laboratorio en el ao 1.997 por parte del INVIMA por no cumplir con las Buenas Prcticas de Manufactura. La razn del cierre fue real, sin embargo como ocurri en muchos de los cierres de Laboratorios (especialmente nacionales) que hizo el INVIMA, no se evalu ni el impacto social, ni el econmico, no se buscaron alternativas para evitar el desabastecimiento de algunos biolgicos y medicamentos, como fue el caso del suero contra las mordeduras de serpientes del gnero Micrurus (Corales). Por ello, desde el ao 1.997 el pas no cont con suero antiofdico anticoral. Sin embargo, el Laboratorio Probiol siempre mantiene un stock y en ms de una oportunidad ha suministrado en calidad de donacin el suero antiofidico antielapdico a vctimas de mordeduras de corales, salvndoles la vida (Gmez, 2.006).
La situacin actual se puede comparar con el ao 1.987, retomando el escrito que hizo el Dr. Cesar Gmez Villegas al Ministerio de Salud, el 27 de Julio del mismo ao, para solicitar el Registro Sanitario del suero anticoral: En la actualidad y a causa de que este antiveneno no se consigue en el pas, es frecuente escuchar por radio y televisin el llamado angustioso y muchas veces intil en busca de este medicamento indispensable para salvar vidas humanas.
39 39
6. METODOLOGIA
6.1 Fase de Campo
6.1.1 rea de Estudio
La Fase de Campo se realiz en el Parque Recreacional y Zoolgico Piscilago ubicado en el Municipio de Nilo, Departamento de Cundinamarca (Colombia), a los 41250.24 de latitud Norte y 744051.25 de latitud Oeste aproximadamente, en el Kilmetro 105 va Bogot Girardot, privilegiadamente sentado sobre el clido Valle de Sumapaz, kilmetro 5 va Melgar Girardot y a 70 kilmetros de Ibagu. Con una extensin de 83 hectreas y una temperatura promedio entre 27 y 30 (grados centgrados).
Figura 2. rea de Estudio (Nilo Cundinamarca) Mapa Areo
40 40 6.1.2 Obtencin de los Venenos Micrricos
Los venenos se obtuvieron de las serpientes del genero Micrurus sp. las especies: Micrurus surinamensis (4 ejemplares); Micrurus mipartitus (1 ejemplar); Micrurus isozonus (2 ejemplares); Micrurus dumerilii (2 ejemplares) y Micrurus medemi (4 ejemplares) en estado de cautiverio que forman parte del inventario oficial del serpentario del Parque Recreacional y Zoolgico de Piscilago en Nilo (Cundinamarca).
Cada quince das se recolectaron muestras de veneno de cada uno de los ejemplares, para un total de 20 muestreos a lo largo de diez meses.
Al iniciar el estudio se tomaron algunos datos morfomtricos como longitud total, longitud cola y algunos aspectos biolgicos como la identificacin taxonmica, categora de amenaza (UICN, apndice CITES), sexo, edad aproximada, condiciones fsicas, distribucin geogrfica, hbitat, comportamiento del individuo en cautiverio, manipulacin y transporte de cada uno de los ejemplares de las cinco especies de Micrurus sp. Anexo A.
6.1.3 Extraccin de Veneno
Las serpientes del gnero Micrurus son de tamao pequeo por tanto no se recomienda el mtodo de inmovilizacin con gancho, ya que se perdera veneno o se expondra seriamente al manipulador de la serpiente a ser mordido. Para este experimento se utilizaron frascos para toma de muestra nuevos y limpios, con la superficie cubierta por un guante desechable asimilando un tambor, lo que induce a la serpiente a morder e inocular el veneno. Figura 3.
Figura 3. Mtodo de Extraccin del veneno Micrrico
41 41
6.1.4. Conservacin y Transporte de los Venenos
Las muestras de los venenos una vez obtenidos, fueron conservados en tubos plsticos individuales por especie, cerradas y debidamente etiquetadas con un rtulo que contena: fecha de recoleccin de la muestra, el nmero de lote del veneno y la especie de la cual se extrajo el veneno. Las muestras de los venenos fueron mantenidas a una temperatura de 2C con hielo seco en una nevera de icopor, mientras fueron transportadas a las instalaciones del laboratorio.
6.1.5. Preparacin de las Muestras de los Venenos Micrricos
Una vez ingresadas las muestras de veneno al laboratorio, fueron secadas en una estufa a 37 centgrados por 48 horas, posteriormente se pesaron, se etiquetaron nuevamente con la cantidad de miligramos de veneno que contiene cada tubo plstico. A cada especie se le asign un color. Cuadro 6. Se mantuvieron a temperatura ambiente en la oscuridad hasta el momento de preparar la solucin de trabajo.
Cuadro 6. Distribucion de los Venenos en Tubos Plsticos de Colores
Especie Color del Tubo Plstico Micrurus surinamensis surinamensis, Rojo Micrurus mipartitus, Amarillo Micrurus isozonus Azul Micrurus dumerilii Verde Micrurus medemi Blanco
6.2 Fase Experimental
6.2.1 Animales Experimentales
Dentro del proyecto de investigacin Determinacin de la Dosis Letal Media (DL 50 ) de cinco especies del gnero Micrurus en estado de cautiverio en Nilo- Cundinamarca (Colombia) que tuvo asiento en el Laboratorio Probiol S.A, se estableci como prioridad la utilizacin y el manejo tico de animales de laboratorio en esta experimentacin biolgica. Anexo B.
Se utilizaron como biomodelos ratones de la especie Mus musculus con pesos que oscilaron entre 17 y 22 gramos sin importar el sexo adquiridos en el bioterio de la Universidad Nacional en la Facultad de Veterinaria. Los biomodelos utilizados no tuvieron ningn tipo de privacin en las condiciones ambientales experimentales; los principales factores ambientales que puedan afectar a los 42 42 animales sern constantes, ya que los cambios en el ambiente experimental producirn cambios en el modelo animal, lo que conlleva al aumento de la variabilidad de los resultados, de lo contrario las pruebas se invalidan. Se tuvo en cuenta el cuadro de caracteristicas generales para los biomodelos utilizados. Anexo C.
6.2.2 Ensayos Preliminares
Se prepar una solucin madre de veneno Micrrico para cada especie en una concentracin (1:1) mg/ml en solucin de Cloruro de Sodio al 0.9%. Se realizaron seis diluciones siguiendo una progresin geomtrica sin espaciamiento constante (d). Cada dosis fue ensayada en lotes de 5 animales inoculando 0,5 ml por la va intraperitoneal.
La prueba a la que se llamo Prueba gruesa se repitio varias veces hasta encontrar una dosis de trabajo. Anexo D.
Para la determinacin estadistica de la DL 50 ( ensayos preliminares) se utilizo la prueba de probits la cual no requiere de un espaciamiento constante (d) entre los niveles de dosis. Se utiliz el programa Simfit 5.0 para realizar los clculos automticamente. Anexo E.
6.2.3 Dosis Letal Media DL 50 (OMS, 1981)
La dosis letal media (DL 50 ) se determin mediante el mtodo de Spearman & Karber, es un mtodo aproximado, no paramtrico, propuesto por la OMS en 1981, inyectando por la va intraperitoneal (I.P) un volumen de 0,5 ml de diluciones seriadas de veneno cercanas a la dilucin de trabajo encontrada en los ensayos preliminares. Se utilizaron ratones albinos de la especie Mus musculus, con pesos entre 17 y 19 gramos. Se emplearon cinco ratones por dosis para un total de seis dosis a ensayar. Los animales fueron mantenidos en observacin durante un periodo de 48 horas. Los animales del grupo control se inyectaron con solucin salina isotnica. Anexo D.
Las dosis letales se repitieron cinco veces con cada veneno, para obtener una muestra estadsticamente significativa. Figura 4.
43 43
Figura 4. Dosis Letal Media (DL 50 )
6.2.3.1 Validez de la Prueba Los ratones debian tener durante toda la prueba las condiciones experimentales constantes de temperatura y alimentacin. Si las condiciones no son constantes la prueba se invalidaba.
Si en el grupo control negativo se producia una o ms muertes, la prueba se invalidaba.
Se tomo una bala del veneno Micrurus sp. de la especie a evaluar y se diluy en Solucin Salina al 0.9%, con una concentracin (1:1) g/ml. Se determinaron seis diluciones de veneno cercanas a la dosis de trabajo hallada en los ensayos preliminares, utilizando un espaciamiento constante entre cada dilucin (d). Se midi la cantidad necesaria de veneno para inocular 10 ratones en cada dilucin y se sigui el siguiente protocolo: Dilucin l 1 10 2 20 3 30 4 40 5 50 6 60 24 Horas 0/5 1/5 2/5 3/5 4/5 5/5 48 Horas 0/5 1/5 2/5 3/5 4/5 5/5 Se completo hasta un volumen final de 5 mililitros con solucin salina estril 0.9% cada dilucin Se tomaron cinco ratones de 17 - 19 gramos por cada dilucin y se inyectaron con 0.5 mililitros de la solucin. Se observaron los ratones inoculados a las 24 y 48 horas y se registr el nmero de muertes para cada dosis. Los resultados se anotaron en un nmero fraccionario, donde el numerador es el nmero de ratones muertos y el denominador es el nmero de ratones inoculados por dilucin 44 44 Si el grupo control positivo sobrevivian uno o ms ratones, la prueba se invalidaba.
Si en los resultados de la prueban existian dos diluciones que separaban la menor dilucin en la cual mueren el 100% de los ratones de la mayor dilucin en donde mueren el 0% de los ratones la prueba se invalidaba.
6.2.4 Dosis Efectiva Media DE 50
En la determinacin de la dosis efectiva media (DE 50 ). Figura 5. se utiliz la tcnica utilizada por el Instituto Clodomiro Picado de Costarica, que consiste en una mezcla de una cantidad fija de veneno en presencia de cantidades variables de antiveneno, las que se ajustan a un volumen igual, se incuban por espacio de 30 minutos a 37C y se inocula por va intraperitoneal en grupos de cinco ratones por mezcla, de modo que cada uno reciba una dosis no inferior a 3DL50. Anexo F.
El clculo de la dosis letal media (Dl 50 ) se realiz con el programa Simfit 5.6 edicin 7, al cual se ingresan las distintas dosis y los niveles de respuesta, en este caso sobrevivencia, para cada una. El programa realiza la regresin lineal dada por la relacin probit-log de la dosis segn el mtodo grfico numrico modificado para computadores de Lichfield y Wilcoxon, que entrega la DE 50 y el intervalo de confianza al 95% (Tallarida y Murray, 1987; Jurado, 1989). La determinacin de diferencias significativas entre las DL 50 se realiz mediante W Shapiro Wilks de tendencia.
45 45
Figura 5. Dosis Efectiva Media (DE 50 )
Se tomo una bala del veneno Micrurus sp. de la especie a evaluar y se diluy en Solucin Salina al 0.9%, con una concentracin (1:1) g/ml. Se reconstituy el Lote Piloto: AC-005 de Suero Antiofidico Anticoral Polivalente Liofilizado producido por Laboratorios Probiol S.A. con 10 ml de agua destilada. Se sigui el siguiente protocolo utilizado por el Instituto Clodomiro Picado de Costarica:
Experimento No. mL veneno (1mg/ml)
mL Solucin Salina mL Antiveneno Relacin g Veneno/1ml Antiveneno
24 Horas
48 Horas 1 0.3 1.2 3.0 100 5/5 5/5 2 0.3 2.7 1.5 200 4/5 4/5 3 0.3 3.2 1.0 300 3/5 3/5 4 0.3 3.45 0.75 400 2/5 2/5 5 0.3 3.60 0.6 500 1/5 1/5 CONTROL (+) 0.3 4.2 ---- Control 0/5 0/5 Se incub la solucin final durante 30 minutos a 37 Centgrados Se tomaron cinco ratones de 20 22 gramos por cada dilucin y se inyectaron con 0.75 mililitros de la solucin final. Se observaron los ratones inoculados a las 24 y 48 horas y se registr el nmero de sobrevivientes para cada dosis. Los resultados se anotaron en nmero fraccionario, donde el numerador es el nmero de ratones que sobreviven y el denominador es el nmero de ratones inoculados por dilucin. 46 46 Se utiliz el Mtodo de transformacin en Probits para la dosis efectiva media, usando el programa Simfit 5.6 edicin 7. Este Mtodo est aceptado por la Organizacin Mundial de la Salud.
6.2.4.1 Validez de la Prueba
Un mililitro de suero antiofidico anticoral liofilizado producido por Laboratorios Probiol (DE 100 ) debe titular como mnimo 0.1 miligramos de veneno Micrurus sp.
Si el Lote Piloto AC 005 a probar no neutraliza, se desecha el suero antiofidico del lote correspondiente debido a la baja potencia del producto.
Los ratones deben tener durante toda la prueba las condiciones experimentales constantes de temperatura y alimentacin. Si las condiciones no son constantes la prueba se invalidaba.
Si en el grupo control positivo sobreviven uno o ms ratones, la prueba se invalida.
6.3. Condiciones Experimentales
Durante las pruebas de letalidad y Potencia se tuvo en cuenta las condiciones de mantenimiento y los grupos control positivo y negativo.
6.3.1 Condiciones de Mantenimiento
Durante las pruebas de letalidad y potencia en el tiempo de observacin y postinoculacin 24 48 horas, los ratones fueron mantenidos en cajas de acero inoxidable de las mismas que se utilizan en el bioterio de la Universidad Nacional. Los ratones se mantuvieron en el transcurso del tratamiento de la dosis letal media y la dosis efectiva media en condiciones experimentales constantes de peso, temperatura y alimentacin. Si las condiciones no eran constantes la prueba se invalidaba.
6.3.2 Grupo Control Positivo
Dosis letal media (DL 50 ) para cada lote de veneno de las cinco especies de Micrurus sp. se inocularon 5 ratones con 0.75 ml de la dosis madre concentrada (1:1) del veneno. Si en el grupo control positivo sobrevivan uno o ms ratones, la prueba se invalidaba.
Dosis efectiva media (DE 50 ) para cada lote de veneno de las cinco especies de Micrurus sp. se hizo una dilucin de la dosis madre concentrada (1:1) de 47 47 veneno y se inyect 0.75 ml a 5 ratones. Si en el grupo control positivo sobrevivan uno o ms ratones se invalidaba la prueba.
6.3.3 Grupo Control Negativo
Dosis letal media (DL 50 ) para cada lote de veneno de las cinco especies de Micrurus sp. se inocularon 5 ratones con 0.75 ml de solucin salina estril al 0.9%. Si en el grupo control negativo se produca una o ms muertes, la prueba se invalidaba.
Dosis efectiva media (DE 50 ) para el lote piloto de suero antiofidico anticoral AC -:005: se prepar una dilucin madre (1:1) de suero antiofidico y solucin salina estril al 0.9% y se inyectaron 5 ratones con 0.75 ml de esta solucin. Si en el grupo control negativo se produca una o ms muertes, la prueba se invalidaba.
48 48
7. RESULTADOS
7.1 Aspectos Biolgicos
Durante el tiempo de estudio se realiz un registro inicial de los Aspectos Biolgicos de 13 individuos de la familia Elapidae, gnero Micrurus, los cuales se determinaron taxonmicamente con claves y reportes de Cuvier (1.817), Dumril y Bribn (1.854), Cope (1.860), Griffin (1.916), Roze (1.967), Silva (1.994), Campbell y Lamar (1.989 - 2.004), adems se cont con la colaboracin y asesora del Bilogo Herpetlogo Jairo Maldonado.
Tabla 4. Clasificacin Taxonmica Micrurus surinamensis
Figura 6. Micrurus surinamensis surinamensis, Cuvier (1.817)
TAXONOMIA Reino Phylum Sub. phylum Clase Orden Suborden Familia Subfamilia Genero Especie Nombre comn Animalia Chordata Vertebrata Reptilia Squamata Serpentes Elapidae Micrurinae. Micrurus Micrurus surinamensis surinamensis. Figura 6. Coral 49 49
Cuadro 7.Caractersticas morfomtricas de los ejemplares de la especie M. surinamensis
Identificacin del individuo Edad Sexo Longitud total (cm) Longitud cola (cm) Mss-001 Adulto Hembra 89,5 8,0 Mss-002 Adulto Hembra 92,0 11,0 Mss-003 Juvenil Macho 64,5 8,5 Mss-004 Adulto Hembra 73,5 6,5
Cuadro 8. Cantidad de veneno obtenida durante el tiempo de estudio en miligramos para la especie M. s.surinamensis
7.1.2 Micrurus mipartitus, Dumril y Bibrn (1.854)
Tabla 5. Clasificacin Taxonmica Micrurus mipartitus
Especie Promedio por muestreo para los cuatro ejemplares ( mg ) Cantidad en miligramos (mg) Total Micrurus surinamensis 0,8 16 TAXONOMIA Reino Phylum Sub phylum Clase Orden Suborden Familia Subfamilia Genero Especie Nombre comn Animalia Chordata Vertebrata Reptilia Squamata Serpentes Elapidae Micrurinae. Micrurus Micrurus mipartitus. Figura 7. Rabo de candela, rabo de aj, cabeza de chocho. 50 50 Figura 7.Micrurus mipartitus, Dumril y Bibrn (1.854)
Cuadro 9. Caractersticas morfomtricas de los ejemplares de la especie Micrurus mipartitus
Identificacin del individuo Edad Sexo Longitud total (cm) Longitud cola (cm) Mmp-001 Adulto Macho 90,0 9,5
Cuadro 10. Cantidad de veneno obtenida durante el tiempo de estudio en miligramos para la especie M. mipartitus
Especie Promedio por muestreo para ejemplar ( mg ) Cantidad en miligramos (mg) Total Micrurus mipartitus 0,1 2,5 51 51 7.1.3 Micrurus isozonus , Cope (1.860)
Tabla 6. Clasificacin Taxonmica Micrurus isozonus
Figura 8. Micrurus isozonus, Cope (1.860)
TAXONOMIA Reino Phylum Sub phylum Clase Orden Suborden Familia Subfamilia Genero Especie Nombre comn Animalia Chordata Vertebrata Reptilia Squamata Serpentes Elapidae Micrurinae. Micrurus Micrurus isozonus. Figura 8. Coral 52 52 Cuadro 11. Caractersticas morfomtricas de los ejemplares de la especie M.isozonus
Identificacin del individuo Edad Sexo Longitud total (cm) Longitud cola (cm) Mis-001 Juvenil Macho 53,0 3,0 Mis-002 Adulto Macho 90,0 4,5
Cuadro 12. Cantidad de veneno obtenida durante el tiempo de estudio en miligramos para la especie M.isozonus
7.1.4 Micrurus dumerilii , Griffin (1.916)
Tabla 7. Clasificacin Taxonmica Micrurus dumerilii
Especie Promedio por muestreo para los dos ejemplares ( mg ) Cantidad en miligramos (mg) Total Micrurus isozonus 0,2 6,0 TAXONOMIA Reino Phylum Sub phylum Clase Orden Suborden Familia Subfamilia Genero Especie Nombre comn Animalia Chordata Vertebrata Reptilia Squamata Serpentes Elapidae Micrurinae. Micrurus Micrurus dumerilii. Figura 9. Coral 53 53 Figura 9. Micrurus dumerilii, Griffin (1.9169)
Cuadro 13. Caractersticas morfomtricas de los ejemplares de la especie M. dumerilii
Identificacin del individuo Edad Sexo Longitud total (cm) Longitud cola (cm) Mdm-001 Adulto Macho 40,0 7,0 Mdm-002 Adulto Hembra 59,0 5,5
Cuadro 14. Cantidad de veneno obtenida durante el tiempo de estudio en miligramos para la especie M.dumerilii.
7.1.5 Micrurus medemi, Roze (1.967)
Especie Promedio por muestreo para los dos ejemplares ( mg ) Cantidad en miligramos (mg) Total Micrurus dumerilii 0,05 3 54 54 Tabla 8. Clasificacin Taxonmica Micrurus medemi
Figura 10. Micrurus medemi, Roze 81.967)
Cuadro 15. Caractersticas morfomtricas de los ejemplares de la especie M. mipartitus
TAXONOMIA Reino Phylum Sub phylum Clase Orden Suborden Familia Subfamilia Genero Especie Nombre comn Animalia Chordata Vertebrata Reptilia Squamata Serpentes Elapidae Micrurinae. Micrurus Micrurus medemi. Figura Coral Identificacin del individuo Edad Sexo Longitud total (cm) Longitud cola (cm) Mmd-001 Adulto Macho 67,0 9,5 Mmd-002 Adulto Macho 51,0 7,0 Mmd-003 Adulto Hembra 59,0 5,5 Mmd-004 Adulto Macho 50,0 7,0 55 55 Cuadro 16. Cantidad de veneno obtenida durante el tiempo de estudio en miligramos para la especie M. medemi
7.2 Dosis Letal Media (DL 50 ) Para determinar la dosis letal media se realizaron varios ensayos preliminares los cuales sirvieron para establecer una dosis letal media de trabajo, para cada uno de los venenos de las especies estudiadas. Luego de determinar la dosis letal de trabajo, se elaboraron varias pruebas finales y de ellas se realiz un muestreo al azar de cinco pruebas las cuales sirvieron para dar soporte estadstico a la determinacin de la dosis letal media (DL 50 ) de los ejemplares estudiados del genero Micrurus sp. 7.2.1 DL 50 para Micrurus surinamensis surinamensis Cuadro 17. Ensayos preliminares para la determinacin de la Dosis letal Media para el Veneno Micrurus surinamensis
8.1 - 12.9 Promedio: (Dosis letal 50 de trabajo) 12.3 Media : 13.6 Desviacin estndar : 3.8 Limite de confianza 95% inferior 8.8 Limite de confianza 95% superior 18.3 Especie Promedio por muestreo para los cuatro ejemplares ( mg ) Cantidad en miligramos (mg) Total Micrurus medemi 0,1 4 56 56
Cuadro 18. Pruebas finales para la determinacin de la dosis letal media para el Veneno Micrurus surinamensis
Media : 28,92 Desviacin estndar : 0.383 Limite de confianza 95% inferior 28,67 Limite de confianza 95% superior 29,17 Valor mnimo 26,4 Valor mximo 29,20 Estadstico W Shapiro Wilks 0.835 Probabilidad P < 0.3254 Mtodo estadstico Spearman Karber (OMS 1981) 63 63 Grfica 3. Curva de la dosis letal media del veneno Micrurus isozonus en estado de cautiverio en Nilo - Cundinamarca
La DL 50 del veneno Micrurus Isozonus es de 28,92 g /peso de ratn de 17 y 19 g
64 64 7.2.4 DL 50 para Micrurus dumerilii
Cuadro 23. Ensayos preliminares para la determinacin de la dosis letal media para el veneno Micrurus dumerilii
Media : 8,99 Desviacin estndar : 0.130 Limite de confianza 95% inferior 8,33 Limite de confianza 95% superior 9,15 Valor mnimo 8,83 Valor mximo 9,18 Estadstico W Shapiro Wilks 0.953 Probabilidad P < 0.76 Mtodo estadstico Spearman Karber (OMS 1981) 66 66 Grfica 4. Curva de la dosis letal media del veneno Micrurus dumerilii en estado de cautiverio en Nilo - Cundinamarca
La DL 50 del veneno Micrurus dumerilii es de 8,83 g /peso de ratn de 17 y 19 g
67 67 7.2.5 DL 50 para Micrurus medemi
Cuadro 25. Ensayos preliminares para la determinacin de la dosis letal media para el veneno Micrurus medemi
Media : 46,93 Desviacin estndar : 0.383 Limite de confianza 95% inferior 46.45 Limite de confianza 95% superior 47.41 Valor mnimo 46.56 Valor mximo 47.48 Estadstico W Shapiro Wilks 0.809 Probabilidad P < 0.31 Mtodo estadstico Spearman Karber (OMS 1981) 69 69 Grfica 5. Curva de la dosis letal media del veneno Micrurus medemi en estado de cautiverio en Nilo - Cundinamarca
La DL 50 del veneno Micrurus Medemi es de 47,2 g /peso de ratn de 17 y 19 g
70 70 7.3 Dosis efectiva Media (DE 50 ) En la determinacin de la dosis efectiva media (DE 50 ) se implement la tcnica utilizada por el Instituto Clodomiro Picado de Costarica segn la metodologa explicada anteriormente 6.2.5. Se realiz una prueba retando el suero antiofidico Anticoral polivalente liofilizado Lote Piloto AC - 005 producido por Laboratorios Probiol S.A. frente a cada uno de los venenos de las especies en estudio. 7.3.1 DE 50 para el Veneno de Micrurus surinamensis neutralizado por un Lote Piloto de Suero Anticoral AC-OO5 Cuadro 27. Determinacin de la DE 50 del Suero Antimoral frente al veneno Micrurus surinamensis
Especie (DE 50 ) Desviacin Estndar Limite de Confianza 95% Probabilidad (p) Micrurus surinamensis 1.021 0,1395 0.577- 1,46
0.0053
Grfica 6. Curva de la dosis efectiva medio (DE 50 )
para el veneno Micrurus surinamensis frente al suero antiofidico anticoral polivalente liofilizado Lote piloto AC-005 producido por Laboratorios Probiol S.A. (Tcnica utilizada por el Instituto Clodomiro Picado)
Concentracin [mg veneno / ml antiveneno] 71 71 7.3.2 DE 50 para el Veneno de Micrurus mipartitus neutralizado por un Lote Piloto de Suero Anticoral AC-OO5 Cuadro 28. Determinacin de la dosis efectiva media (DE 50 ) para el veneno Micrurus mipartitus probando la efectividad del el suero antiofidico anticoral polivalente liofilizado Lote piloto AC-005 producido por Laboratorios Probiol S.A. (Tcnica utilizada por el Instituto Clodomiro Picado)
Grfica 7. Curva de la dosis efectiva media (DE 50 )
para el veneno Micrurus mipartitus frente al suero antiofidico anticoral polivalente liofilizado Lote piloto AC-005 producido por Laboratorios Probiol S.A.
Concentracin [mg veneno / ml antiveneno] 72 72 7.3.3. DE 50 para el Veneno de Micrurus isozonus neutralizado por un el Lote Piloto de Suero Anticoral AC-OO5
Cuadro 29. Determinacin de la dosis efectiva media (DE 50 ) para el Veneno Micrurus isozonus frente al suero antiofidico anticoral polivalente liofilizado Lote piloto AC-005 de producido por Laboratorios Probiol S.A. (Tcnica utilizada por el Instituto Clodomiro Picado)
Especie (DE 50 ) Desviacin Estndar Limite de confianza 95% Probabilidad (p) Micrurus isozonus 1,28 0,2 0,64 - 1,92
0,0077
Grfica 8. Curva de la dosis efectiva media (DE 50 ) para el veneno Micrurus isozonus frente al suero antiofidico anticoral polivalente Liofilizado Lote piloto AC-005 producido por Laboratorios Probiol S.A.
Concentracin [mg veneno/ ml antiveneno] 73 73 7.3.4. DE 50 para el Veneno de Micrurus dumerilii neutralizado por un el Lote Piloto de Suero Anticoral AC-OO5
Cuadro 30. Determinacin de la dosis efectiva media (DE 50 ) para el veneno Micrurus dumerilii frente al suero antiofidico anticoral polivalente liofilizado Lote piloto AC-005 producido por Laboratorios Probiol S.A. (Tcnica utilizada por el Instituto Clodomiro Picado)
Especie (DE 50 ) Desviacin Estndar Limite de Confianza 95% Probabilidad (p) Micrurus dumerilii 1,16 0,239 0,40-1,93
0,077
Grfica 9. Curva de la dosis efectiva media (DE 50 ) para el veneno Micrurus dumerilii frente al Suero antiofidico Anticoral Polivalente Liofilizado Lote piloto AC-005 de Laboratorios Probiol S.A.
Concentracin [mg veneno / ml antiveneno] 74 74 7.3.5 DE 50 para el Veneno de Micrurus medemi neutralizado por un el Lote Piloto de Suero Anticoral AC-OO5
Cuadro 31. Determinacin de la dosis efectiva media (DE 50 ) para el veneno Micrurus medemi frente al Suero Antiofidico Anticoral Polivalente Liofilizado Lote piloto AC-005 producido por Laboratorios Probiol S.A. (Tcnica utilizada por el Instituto Clodomiro Picado)
Especie (DE 50 ) Desviacin Estndar Limite de Confianza 95% Probabilidad (p) Micrurus medemi 1,55 0,222 0,845- 2,261
0,0060
Grfica 10. Curva de la dosis efectiva media (DE 50 )
para el veneno Micrurus medemi frente al Suero Antiofidico Anticoral Polivalente Liofilizado Lote piloto AC-005 de Laboratorios Probiol S.A.
Concentracin [mg veneno / ml antiveneno] 75 75 7.3.6 Relacin Efectividad del Suero Anticoral Probiol respecto a los Venenos del gnero Micrurus sp. Utilizados
Cuadro 32. Efectividad del Suero Antiofdico Antimoral Lote Piloto: AC 005 frente a cinco Lotes de veneno del gnero Micrurus sp.
Especie (DE 50 ) del suero Antiofidico anticoral Lote Piloto: AC -005 (ml) Cantidad de Veneno utilizado por Lote (mg) Relacin de Efectividad (mg/ml) Micrurus surinamensis 1.02 0.30 0.29
Micrurus mipartitus 0.86 0.25 0.30
Micrurus isozonus 1.28 0.38 0.29
Micrurus dumerilii 1.16 0.34 0.30
Micrurus medemi 1.55 0.46 0.30
76 76
8. ANALISIS DE RESULTADOS
8.1 Aspectos Biolgicos
8.1.1 Micrurus surinamensis surinamensis
De los trece ejemplares estudiados del gnero micrurus, cuatro pertenecen a la especie Micrurus surinamensis surinamensis tres Hembras y un Macho. Anexo A. Esta especie presenta un gran desarrollo corporal aproximadamente de 90 cm, Silva (1994) describe ejemplares hasta de 140 cm ademas, muestran un marcado dimorfismo sexual en cuanto al tamao. las hembras tienen mayor longitud total y menor longitud cola con respecto a las medidas observadas en el individuo macho de la especie que se puede apreciar De acuerdo a lo planteado por Silva (1.994), en donde existe un dimorfismo sexual diferenciado, en el Cuadro 7.
Los patrones de coloracin en estos individuos coinciden con los reportados por Cuvier (1.817), Campbell y Lamar (1.989) y Silva (1.994), que consta de tres colores aposemticos, los cuales forman anillos negros, amarillos y rojos. Los anillos negros forman triadas bien definidas, que en un nmero de 6 a 9 se extienden desde la parte posterior de la regin temporal hasta la cola como se puede apreciar en la Figura 6.
Existen datos deficientes del comportamiento de esta especie en estado de cautiverio. Segn Maldonado (2.006), se ha logrado mantener estos individuos vivos en cautiverio de seis meses a un ao, proporcionandoles un hbitat e implementando una dieta similar a la observada en su hbitat natural.
Mantener estas serpientes vivas en cautiverio en un periodo largo es una tarea difcil para el investigador, ya que cuando entran en un nivel alto de Stres, pierden el apetito y no se alimentan voluntariamente, para ello Maldonado (2.006) les implement una dieta a base de harinas y carnes por medio de la alimentacin inducida.
8.1.2 Micrurus mipartitus
En el presente estudio se trabaj con un ejemplar Macho en total de esta especie. Anexo A. Segn Otero (1.994) esta especie puede alcanzar una talla mxima de 1,24 metros, esta especie tiene al igual que M.s.surinamensis, M.isozonus un gran tamao corporal. Cuadro 9. Debido a que solo se tuvo en observacin un individuo no se logr hacer una comparacin entre individuos de diferente sexo.
77 77 El patrn de coloracin del individuo observado coincide con el reportado por Dumril y Bibron (1.854), ngel (1.983) y Otero (1.994), que consta de tres colores aposemticos los cuales forman anillos blancos, negros y rojos; posee un anillo rojo de mayor grosor encima de la cabeza y entre dos y cuatro anillos rojos en la cola como se puede observar en la Figura 7.
Segn Maldonado (2.006) en esta especie existe un tipo de coloracin atpica presente en Colombia en la que se remplazan los anillos blancos por anillos amarillos, los cuales separan los anillos negros a lo largo de el cuerpo y poseen una banda roja encima de la cabeza y entre dos o cuatro anillos rojos en la cola.
Existen datos deficientes acerca del comportamiento de esta especie en estado de cautiverio. Maldonado (2.006) ha logrado mantener estos individuos vivos en cautiverio de seis meses a un ao, proporcionandoles un hbitat e implementando una dieta similar a la observada en su hbitat natural.
Mantener estas serpientes vivas en cautiverio en un periodo largo es una tarea difcil para el investigador, ya que cuando entran en un nivel alto de Stres, pierden el apetito y no se alimentan voluntariamente, para ello Maldonado (2.006) les implement una dieta a base de harinas y carnes por medio de la alimentacin inducida.
8.1.3 Micrurus isozonus
En esta investigacin se trabaj con dos ejemplares Machos. Anexo A. Segn Cope (1.860), Campbell y Lamar (1.989), Maldonado (2.006) esta especie es endmica para Colombia. Debido a que el nmero de individuos es bajo y poseen el mismo sexo, no se logr hacer una comparacin entre individuos Hembras y Machos de la misma especie. Los individuos observados en cautiverio presentan tamao corporal entre 53 90 y una longitud de la cola inferior a las medidas observadas en otras especies del gnero Micrurus sp.Cuadro 11.
El patrn de coloracin de los individuos observados en esta especie es similar al reportado por Silva (1.994) para la especie Micrurus spixii obscurus, formado por anillos de colores negro, amarillo y rojo, los cuales se agrupan en triadas amplias, bien definidas, que en nmero de 5 a 7 se extienden desde la nuca hasta la cola del ofdio. Las triadas de anillos negros estn separadas una de la otra por dos anillos amarillos en medio de dos anillos rojos.Figura 8.
Al comparar el patrn cromtico de estas dos especies M.isozonus y M.spixii obscurus difieren en que los individuos de la especie M.spixii poseen abundante pigmento melnico en las escamas dorso laterales del cuerpo del ofdio, por lo cual adquiere una coloracin negra brillante, mientras que en los individuos de la especie M.isozonus la presencia de melanina es inferior, solo se encuentran bordeando las escamas, los colores amarillo y rojo son ntidos y brillantes, el 78 78 hocico es amarillo y negro con una banda rojo en la cabeza, el vientre de la cabeza usualmente rojo y amarillo con pigmento negro hacia las escamas que bordean la boca. De aceurdo con lo planteado por Campbell y Lamar (2.004) el patrn de coloracin reportado para esta especie difiere con las especies evaluadas en Piscilago en que se cambian los anillos blancos por anillos amarillos.
De su biologa, toxinologa y comportamiento en el medio ambiente natutal y artificial se conoce muy poco; Maldonado (2.006) ha logrado mantener estos individuos vivos en cautiverio alrededor de dos aos, proporcionandoles un hbitat e implementando una dieta similar a la observada en su hbitat natural.
Mantener estas serpientes vivas en cautiverio en un periodo largo es una tarea difcil para el investigador, ya que cuando entran en un nivel alto de Stres, pierden el apetito y no se alimentan voluntariamente, para ello Maldonado (2.006) les implement una dieta a base de harinas y carnes por medio de la alimentacin inducida.
8.1.4 Micrurus dumerilii
En esta investigacin se trabaj con dos ejemplares, una Hembra, un Macho. Anexo A. Segn los reportes de Griffin (1.916), Maldonado (2.006), esta especie es endmica para Colombia. Alcanza una talla mxima de 65 cm. posee un tamao corporal pequeo con respecto a otras especies del gnero Micrurus como M.s.surinamensis, M.mipartitus, M.isozonus. Los individuos observados presentan un dimorfismo sexual pronunciado, la Hembra posee mayor longitud total y menor longitud cola. Cuadro 13.
El patrn de coloracin de los individuos observados en esta especie coinciden con los reportados por Griffin (1.916) el cual consta de tres colores aposemticos los cuales forman aproximadamente 18 repeticiones de un anillo negro en medio de dos anillos blancos que a su vez se encuentran en medio de dos anillos rojos. La cabeza es negra con un anillo blanco encima. La cola posee de 5 a 6 repeticiones un anillo negro y uno blanco. Figura 9.
De su biologa, comportamiento en el medio ambiente natutal y artificial se conoce muy poco; Maldonado (2.006) ha logrado mantener estos individuos vivos en cautiverio alrededor de dos aos, proporcionandoles un hbitat e implementando una dieta similar a la observada en su hbitat natural.
Mantener estas serpientes vivas en cautiverio en un periodo largo es una tarea difcil para el investigador, ya que cuando entran en un nivel alto de Stres, pierden el apetito y no se alimentan voluntariamente, para ello Maldonado (2.006) les implement una dieta a base de harinas y carnes por medio de la alimentacin inducida.
79 79
8.1.5 Micrurus medemi
En el presente trabajo se estudiaron cuatro ejemplares en total, una Hembra que se logr reproducir satisfactoriamente en cauiverio y tres Machos. Anexo A. De acuerdo a lo planteado por Roze (1.967), Maldonado (2.006), esta es una especie endmica de Colombia, que puede llegar a medir alrededor de 60 a 67 cm en estado de cutiverio. Cuadro 15.
Estas serpientes tienen una coloracin atpica a otras corales ya que por lo general las corales poseen tres colores, mientras que en esta especie posee dos patrones cromticos de dos colores, anillos negros anchos y anillos amarillos delgados o anillos negros anchos y anillos rojos delgados en repeticiones de 42 45. Figura 10.
Existen datos deficientes de la biologa y comportamiento de esta especie en estado tanto en su hbitat natural como en cautiverio; Maldonado (2.006) ha logrado mantener estos individuos vivos en cautiverio alrededor de dos aos, proporcionandoles un hbitat e implementando una dieta similar a la observada en su hbitat natural.
Mantener estas serpientes vivas en cautiverio en un periodo largo es una tarea difcil para el investigador, ya que cuando entran en un nivel alto de Stres, pierden el apetito y no se alimentan voluntariamente, para ello Maldonado (2.006) les implement una dieta a base de harinas y carnes por medio de la alimentacin inducida.
8.2 Dosis Letal Media (DL 50 ) Para este estudio se realizaron cinco pruebas finales a cada veneno para cada especie en estudio. El nmero de pruebas realizadas siguiendo siempre la misma metodologa garantiz que los parmetros que influan de forma directa en los resultados estuvieran siempre bajo control y permiti normalizar el ensayo de determinacin de la DL 50 del veneno de las Serpientes del genero Micrurus, especies Micrurus surinamensis surinamensis, Micrurus mipartitus, Micrurus isozonus, Micrurus dumerilii y Micrurus medemi ya que se demostr que en las diferentes pruebas finales los lmites de los valores estimados de las respectivas DL 50 para un intervalo de confianza de 95 %, se encontraban ampliamente dentro dicho intervalo. 8.2.1 (DL 50 ) para Micrurus surinamensis surinamensis
El cuadro 17 muestra en el promedio la dosis letal de 12,3 g/ratn para Micrurus surinamensis, esta dosis fue utilizada para deteminar la dosis letal de las pruebas 80 80 finales, Los resultados obtenidos Cuadro 18, permiten definir la DL 50 del veneno M.surinamensis utilizado como de 13,50 g que al ser inoculado intraperitonealmente en ratones albinos de peso entre 17 y 19 gramos provoca la muerte al 50% de los animales inoculados. Grfica 1.
Al comparar la DL 50 de 13,50 g/raton,
para el Veneno de la Micrurus surinamensis utilizado, con la dosis letal reportada para la misma especie, por Silva (1994) de 10,25 g/peso del ratn, se observa una marcada diferencia que se puede explicar por muchas razones: Primero: la zona geografica donde se realizo el estudio, Silva trabajo en el amazonas, mientras que el presente estudio fue realizado en Nilo Cundimarca; Segundo: Las serpientes utilizadas por Silva fueron serpientes en su habitat natural mientras, el presente estudio son ejemplares en cautiverio sometidas a alimentacion artificial y aun alto grado de stress. Estas razones pueden con llevar variaciones en las dosis letales para esta especie.
8.2.2 (DL 50 ) para Micrurus mipartitus
En los ensayos preliminares la dosis letal media promedio es de 5.77 g/ratn para Micrurus mipartitus Cuadro 19, esta dosis fue utilizada para deteminar la dosis letal de las pruebas finales. En las pruebas finales el veneno de la especie Micrurus mipartitus utilizada present una DL 50 de 5,53 g/ratn, Grfica 2, mostrndose altamente txico, comparado con los venenos de las otras especies estudiadas y con la DL 50 para M.mipartitus reportada por Pineda(2002) de (9 g/ratn). Estas diferencias se deben como se explico anteriormente a que las caracteristicas del veneno pueden variar significativamente de una region a otra y de igual manera las condiciones del habitat en cautiverio o natural. Cuadro 20.
8.2.3 (DL 50 ) para Micrurus isozonus
Se realiz un ensayo preliminar para determinar la dosis letal media inicial de trabajo de 28.2 g/ratn. Cuadro 21. En el Cuadro 22 se observan los resultados para la DL 50 obtenida para el veneno Micrurus isozonus que fue de 28,92 g/ por ratn, equivalente a la cantidad de veneno de Micrurus isozonus que causo la muerte del 50% de los animales en 48 horas. Grfica 3. No se encuentra ningn reporte de dosis letal media en la literatura cientfica para esta especie en Colombia lo que dificulta su comparacin.
En relacin con las otras especies estudiadas los resultados de la dosis letal media es menor que las obtenidas para las especies M.surinamensis, M.mipartitus y M.dumerilii.
8.2.4 (DL 50 ) para Micrurus dumerilii
Cuadro 23. En los ensayos preliminares para la determinacin de la dosis letal media inicial de estudio fue 8.84 g/ratn. Los resultados para el estudio de la 81 81 dosis letal media final observados en el Cuadro 24, de M.dumerilii utilizado se pueden definir como 8.83 g de veneno que al ser inoculado a ratones albinos de 17 a 19 gramos ocasionan la muerte al 50% del total de la poblacion inoculada. No se encuentra ningn reporte de dosis letal media en la literatura cientfica para esta especie en Colombia lo que dificulta su comparacin.Grfica 4.
De acuerdo con Bolivar(2.006) la especie Micrurus dumerilii, presenta junto a la Micrurus mipartitus la mayor accidentalidad por la familia Elapidae en Colombia. Es importante recalcar que de acuerdo a los resultados obtenidos Micrurus dumerilli presenta el veneno ms txico despues de M.mipartitus.
8.2.5 (DL 50 ) para Micrurus medemi
En el Cuadro 25 se observa una dosis letal media inicial de trabajo de 47.1 g/ratn. Se calcul la dosis letal media para la especie Micrurus medemi de 47.2 g por peso de ratn. Cuadro 26. Se inocularon ratones albinos de la especie Mus musculus va intraperitoneal con pesos de 17 a 19 gramos y se definio la dosis letal media como la cantidad en microgramos de veneno capaz de matar al cincuenta por ciento de la poblacin inoculada.Grfica 5.
Es importante recordar que esta especie es endemica para Colombia y hasta ahora no se ha reportado la dosis letal media lo que dificulta su comparacin.
8.3 Dosis Efectiva Media (DE 50 )
Utilizando la metodologa del Instituto Clodomiro Picado de Costa Rica, la dosis efectiva media de un suero antiofdico polivalente especfico en la evaluacin experimental frente al efecto letal medio del veneno de las serpientes debe neutralizar al menos tres dosis letales medias de veneno utilizado en la experimentacin. El suero antiofdico anticoral lote piloto AC-005 neutraliza de la misma forma los diferentes venenos de las especies Micrurus sp. estudiadas, estando en una relacin de aproximadamente 0.3 mg/ml de efectividad del suero antiofdico antielapdico producido por Laboratorios Probiol. Cuadro 32.
8.3.1 DE 50 del Suero Antiofidico Anticoral Polivalente Liofilizado frente al veneno de la especie Micrurus surinamensis
La dosis efectiva media del suero anticoral producido por Laboratorios Probiol es de 1,021 mg/ml capaz de salvar el 50% de la poblacin inoculada utilizando ratones albinos de la especie Mus musculus con pesos entre 20 -22 gramos. Grfica 6. Donde 1,021 ml de suero antiofidico anticoral polivalente liofilizado producido por Laboratorios Probiol S.A. Lote AC-005 neutraliza 0.304 mg de veneno Micrurus surinamensis con un limite de confianza del 95% entre 0.577- 1,46 y con una probabilidad de p = 0.0053.Cuadro 27. 82 82
8.3.2 DE 50 del Suero Antiofidico Anticoral Polivalente Liofilizado frente al veneno de la especie Micrurus mipartitus.
En el Cuadro 28 se observa la dosis efectiva media del suero anticoral producido por Laboratorios Probiol Lote AC-005 que es de 0.862 ml que neutraliza 0.25 mg de veneno Micrurus mipartitus con un limite de confianza del 95% entre 0,235-1,48 y con una probabilidad de p =0.022. Esta dosis efectiva media es capaz de salvar el 50% de la poblacin inoculada utilizando ratones albinos de la especie Mus musculus con pesos entre 20 22 gramos. Figura 7.
8.3.3 DE 50 del Suero Antiofidico Anticoral Polivalente Liofilizado frente al veneno de la especie Micrurus isozonus.
La (DE 50 ) es de 1,28 ml de suero antiofidico anticoral polivalente liofilizado producido por Laboratorios Probiol Lote AC-005 que neutraliza 0.384 mg de veneno Micrurus isozonus con un limite de confianza del 95% entre 0,64 - 1,92 y con una probabilidad de p = 0.0077.Cuadro 29. Esta dosis es capaz de salvar el 50% de la poblacin inoculada utilizando ratones de la especie Mus musculus con pesos de 20 22 gramos. Figura 8.
8.3.4 DE 50 del Suero Antiofidico Anticoral Polivalente Liofilizado frente al veneno de la especie Micrurus dumerilii.
En el Cuadro 30 se observa la (DE50) es de 1,16 mg/ml. Donde 1,16 ml de suero antiofidico anticoral polivalente liofilizado producido por Laboratorios Probiol S.A. Lote AC-005 neutraliza 0.348 mg de veneno Micrurus dumerilii en donde sobrevive el 50% de la poblacin inoculada utilizando ratones albinos de la especie Mus musculus. Figura 9. Con un limite de confianza del 95% entre 0,40-1,93 y con una probabilidad de p = 0.077.
8.3.5 DE 50 del Suero Antiofidico Anticoral Polivalente Liofilizado frente al veneno de la especie Micrurus medemi.
La (DE 50 ) es de 1,55 mg/ml en donde sobrevive el 50% de la poblacin inoculada con el veneno de la especie Micrurus medemi como se observa en la Grfica 10. Donde 1,55 ml de Suero Antiofdico Anticoral Polivalente Liofilizado de Probiol S.A. Lote AC-005 neutraliza 0.465 mg de veneno Micrurus medemi con un limite de confianza del 95% entre 0,845-2,261 y con una probabilidad de p = 0.0060. Cuadro 31.
83 83
9. CONCLUSIONES
En la literatura cientfica se evidencia una deficiente informacin acerca de la categora de amenaza, vulnerabilidad, extincin, estudios poblacionales, toxinologa y comportamiento de las serpientes del gnero Micrurus sp. presentes en Colombia en estado de cautiverio.
Igualmente solo se reporta la Dl 50 para dos de las cinco especies evaluadas; la especie Micrurus surinamensis en la Amazonia Colombiana tiene una Dl 50 de10,25 g/ratn utilizando ratones de 25 a 35 gramos e inoculandolos intraperitonealmente (Silva, 1.994) y una Dl 50 para la especie Micrurus mipartitus de 9 mg/ratn utilizando como biomodelo ratones albinos de 18 -20 gramos por nivel (Pineda, 2.002).
Es de aclarar que existe error en las unidades de medida en la Dl 50 terica planteada por Pineda (2.002) para la especie M.mipartirus ya que los resultados de dosis letales se determinan en g por gramos o peso del animal inoculado, lo que dificulta una comparacin de las dosis letales medias tericas y las obtenidas experimentalmente.
La DL 50 del veneno de cada una de las cinco especies del gnero Micrurus sp. puede ser determinada a travs de inoculaciones por va intraperitoneal en ratones albinos de la especie Mus musculus con pesos entre 17 y 19 gramos sin distincin de sexo. Se demostr resultados satisfactorios tanto en sensibilidad como en reproducibilidad al utilizar un modelo estadstico Spearman Karber el cual nos permiti calcular una Dl 50 inicial de trabajo.
Se encontr que la toxinologa de los venenos puede variar entre especies y an utilizando el veneno de un mismo ejemplar obteniendo como resultado este orden de toxicidad en las cinco especies de Micrurus sp. evaluadas: Micrurus mipartitus < Micrurus dumerilii< Micrurus surinamensis< Micrurus isozonus< Micrurus medemi. Indicando que el que tiene una menor DL 50 se caracteriza como el ms txico.
Estos cambios en la Dl 50 puede atribuirse a los diferentes niveles de stress a los que son sometidas las serpientes, que conllevan a la muerte por inanicin y a los cambios en la alimentacin que se deben implementar para lograr mantenerlas con vida por un largo periodo de tiempo.
En la evaluacin del Lote Piloto: AC-005 de suero antiofidico antielapdico producido por Laboratorios Probiol S.A., se demostr que posee una capacidad 84 84 neutralizante de los cinco lotes de veneno utilizados del gnero Micrurus sp. Es muy importante lo anteriormente mencionado, ya que respalda el uso del suero polivalente en accidentes causados por las especies: Micrurus surinamensis, Micrurus mipartirus, Micrurus isozonus, Micrurus dumerilii y Micrurus medemi. El suero antiofidico antielpdico neutraliza de la misma forma los diferentes venenos mencionados anteriormente sin importar la especie que se refieran, estando en una relacin de efectividad de aproximadamente 0.3mg/ml del Lote Piloto de suero anticoral frente a los cinco Lotes de veneno micrrico analizados. Es decir que 1 cm de suero anticoral polivalente est neutralizando 0.3 mg de veneno micrrico de las especies evaluadas.
Esto nos indica que no hay especificidad en la relacin del suero anticoral y tampoco se tendran en cuanta las dosis letales medias de cada uno de los venenos. En este sentido el suero antiofidico antielapdico analizado tiene el mismo grado de efectividad independientemente de las especies evaluadas y teniendo constante el volumen de veneno utilizado.
85 85
10. RECOMENDACIONES
Las serpientes del gnero Micrurus sp. en estado de cautiverio mueren por inanicin, por lo tanto se debe implementar diferentes dietas para suplir las necesidades vitales de acuerdo con sus hbitos de alimentacin en su hbitat natural; el cual debe basarse en lo reportado por Silva (1.994) y lo recomendado por Maldonado (2.006), una alimentacin a base de celicilias, bachias, alevinos y pequeas serpientes.
La determinacin de la dosis letal media se realiz utilizando 13 individuos del gnero Micrurus sp., que sirven como base a posteriores estudios ampliando la muestra experimental y as se aumentara la cantidad en mg de cada uno de los lotes de veneno a evaluar.
Se recomienda determinar la Dl 50 del veneno de las serpientes de acuerdo a la zona geogrfica de su captura, ya que se han demostrado variaciones significativas en su composicin que podran tener importancia mdica, filogentica y taxonmica.
Para calcular una Dl 50 inicial de trabajo o reto en la fase experimental inicial se debe utilizar un modelo estadstico que permita calcular la dosis letal media inicial experimental sin tener en cuenta una d entre las diluciones. En la determinacin de la Dl 50 de la fase experimental final se debe utilizar un modelo estadstico utilizando una d aprobada por la OMS.
El grado de toxicidad de los venenos evaluados presenta variabilidades entre especies e incluso utilizando el veneno de un mismo ejemplar, por lo tanto no se recomienda un mtodo para la dosificacin del suero anticoral y difcilimente puede concebirse una prueba nica general.
En el clculo de la DE 50 planteada por el Instituto Clodomiro Picado de Costa Rica no se tiene en cuenta la dosis letal media del lote de veneno, pero esta dosis efectiva media del suero antiofidico debe cubrir mnimo 3DL 50 del lote de veneno a evaluar.
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INDICE ALAFABETICO
Accin Postsinptica: Actividad neurotxica del veneno en un sitio especfico de accin dentro de la unin neuromuscular despus de la sinapsis.
20 Accin Presinptica: Actividad neurotxica del veneno en un sitio especfico de accin dentro de la unin neuromuscular antes de la sinapsis.
21 Dosis Letal Media (DL 50 ): Es la dosis de preparacin u organismo que mata el 50% de los animales inoculados.
43 Dosis Efectiva Media (DE 50 ): Es la dosis de preparacin en la que sobrevive el 50% de los animales inoculados.
45 Liofilizado: Deshidratar algo en vaco. El Suero antiofdico Liofilizado no necesita refrigeracin ya que es seco.
37 Miotxico: Daos en el corazn por efectos de una intoxicacin.
26 Monovalente: Se hace referencia al Suero antiofdico especfico para una sola especie de serpientes.
35 Neurotxico: Daos en el sistema nervioso por efectos de una intoxicacin.
31 OMS: Organizacin Mundial de la Salud.
37 Polivalente: Se hace referencia al Suero antiofdico que tiene efectividad sobre varias especies de una misma familia de serpientes.
36 Proteroglifas: Tipo de denticin de las Micrurus. Su aparato venenoso consta de un diente acanalado a cada lado de la parte anterior de la maxila y dos glndulas productoras de veneno. Dichos dientes son profundamente acanalados y por medio de un conducto se comunican con las glndulas, que son grandes y estn colocadas en la regin temporal, una a cada lado de la cabeza. Los dientes inyectores de las serpientes proteroglifas son fijos y relativamente cortos, pero esto se encuentra compensado por un activo veneno neurotxico. 27 92 92
Tanatofdios: Son las modificaciones osteolgicas de los huesos de las serpientes para inocular toxinas por medio del aparato venenoso. Las serpientes Proteroglifas y Solenoglifas son conocidas como tanatofdios.
27 Toxinologa: Estudio de las toxinas producidas por glndulas secretoras de veneno.
21 Va Intraperitoneal (I.P): Dcese de lo que est o se pone en el interior del peritoneo. Inculos intraperitoneales.
32 Va Intramuscular (I.M): Dcese de lo que est o se pone en el interior de los msculos. Inyeccin intramuscular.
32 Va Intravenosa (I.V): Dcese de lo que est o se pone en el interior de las venas. Inyeccin intravenosa.
33
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ANEXOS
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ANEXO A. FICHA DE ASPECTOS BIOLOGICOS DE LAS ESPECIES EN ESTUDIO
1. IDENTIFICACIN TAXONMICA:
NOMBRE CIENTFICO: NOMBRE VULGAR: CODIGO Micrurus s.surinamensis Coral Ms-001
2. CATEGORIA DE AMENAZA UICN: No aplica APNDICE CITES: No aplica
4.1 Tegumento: Piel cubierta de escamas. 4.2 Sistema seo: Constituido por vrtebras que le permiten gran flexibilidad. 4.3 Denticin: El tipo de denticin presente es llamado Proteroglifa, el maxilar superior es alargado (belfas). 4.4 Estado.reproductivo: El ejemplar se encuentra apto para la reproduccin. 4.5 Descripcin: Dentro del gnero Micrurus es una especie de mayor tamao en comparacin con otras especies del mismo gnero, posee colores aposemticos rojo, amarillo, negro, que indican advertencia; su cabeza es pequea de color rojo con lneas negras en forma de red, con cuello no diferenciado y ojos muy pequeos. 4.6 Locomocin: Serpentino, la serpiente contrae sus msculos para generar una serie de movimientos ondulatorios, este es la locomocin comn en todas las serpientes de coral.
5. MOFORMETRIA:
Longitud total: 89,5 cm. Longitud Cola: 8.0 cm.
6. DISTRIBUCIN GEOGRFICA: Geogrficamente se encuentra en la Amazona y Orinoqua Colombiana; presentando una alta ocurrencia poblacional en las regiones limtrofes de Brasil y Per con Colombia. Se aprecia una disminucin de la incidencia poblacional hacia el norte y el centro de la Amazonia Colombiana, en los territorios de Guaviare, Guaina, Vaups y Orinoqua.
7. HBITAT: Habitan en zonas de clima medio y clido. Algunas especies tienen vida semisubterrnea, hbitos nocturnos y prefieren permanecer ocultas bajo la hojarasca, piedras, troncos, son de carcter manso, tmidas de hbitos nocturnos. Su hbitat natural es el bosque tropical siempre cerca de reas acuticas entre 0 y 600 msnm. 8. HISTORIA NATURAL DE LA ESPECIE EN CAUTIVERIO:
8.1 Patrn de actividad: Durante el da su actividad es mnima, en la noche tiene mayor actividad. 8.2 Locomocin y postura: Permanece enrollada en las cajas herpetolgicas, cuando se le va ha extraer el veneno, se levanta la cola y esconde la cabeza. 8.3 Dormideros: Se le acondicion un recipiente plstico transparente, con tierra negra rica en humus, y un recipiente con agua. 8.4 Dieta: Alimentacin artificial inducida con ratones pinck (recin nacidos) de la especie Mus musculus. El Doctor Jairo Maldonado realiza una mezcla de harinas y carnes, y las ha mantenido por ms de un ao en el Serpentario del Parque Recreacional y Zoolgico Piscilago en Nilo Cundinamarca.
9. COMPORTAMIENTO DEL INDIVIDUO:
9.1 Patrn de actividad: En general su patrn de actividad es mnimo. Mantener esta especie en cautiverio es una tarea difcil para el investigador, ya que pierden el apetito y no se alimentan por si mismas. 9.2 Comportamiento Social: Cuando se les extrae veneno son agresivas, por lo general las serpientes se mantienen en cajas individuales; solo se mantienen ms de dos serpientes de la misma especie cuando son de la misma camada. 9.3 Interaccin con otras especies: El comportamiento social con otras especies es agresivo.
10. MANIPULACIN: La inmovilizacin de la serpiente se hace directamente con la mano, debido a su tamao, ya que las pinzas herpetolgicas lastimaran la serpiente o expondran al investigador a una mordedura letal; para ello se toman medidas preventivas, y la manipulacin solo lo realiza una persona experta.
11. TRANSPORTE: Se transportan por medio de cajas herpetolgicas. 95 95
1. IDENTIFICACIN TAXONMICA:
NOMBRE CIENTFICO: NOMBRE VULGAR: CODIGO Micrurus s.surinamensis Coral Ms-002
2. CATEGORIA DE AMENAZA UICN: No aplica APNDICE CITES: No aplica
4.1 Tegumento: Piel cubierta de escamas. 4.2 Sistema seo: Constituido por vrtebras que le permiten gran flexibilidad. 4.3 Denticin: El tipo de denticin presente es llamado Proteroglifa, el maxilar superior es alargado (belfas). 4.4 Estado.reproductivo: El ejemplar se encuentra apto para la reproduccin. 4.5 Descripcin: Dentro del gnero Micrurus es una especie de mayor tamao en comparacin con otras especies del mismo gnero, posee colores aposemticos rojo, amarillo, negro, que indican advertencia; su cabeza es pequea de color rojo con lneas negras en forma de red, con cuello no diferenciado y ojos muy pequeos. 4.6 Locomocin: Serpentino, la serpiente contrae sus msculos para generar una serie de movimientos ondulatorios, este es la locomocin comn en todas las serpientes de coral.
5. MOFORMETRIA:
Longitud total: 92,0 cm. Longitud Cola: 11,0 cm.
6. DISTRIBUCIN GEOGRFICA: Geogrficamente se encuentra en la Amazona y Orinoqua Colombiana; presentando una alta ocurrencia poblacional en las regiones limtrofes de Brasil y Per con Colombia. Se aprecia una disminucin de la incidencia poblacional hacia el norte y el centro de la Amazonia Colombiana, en los territorios de Guaviare, Guaina, Vaups y Orinoqua.
7. HBITAT: Habitan en zonas de clima medio y clido. Algunas especies tienen vida semisubterrnea, hbitos nocturnos y prefieren permanecer ocultas bajo la hojarasca, piedras, troncos, son de carcter manso, tmidas de hbitos nocturnos. Su hbitat natural es el bosque tropical siempre cerca de reas acuticas entre 0 y 600 msnm. 8. HISTORIA NATURAL DE LA ESPECIE EN CAUTIVERIO:
8.1 Patrn de actividad: Durante el da su actividad es mnima, en la noche tiene mayor actividad. 8.2 Locomocin y postura: Permanece enrollada en las cajas herpetolgicas, cuando se le va ha extraer el veneno, se levanta la cola y esconde la cabeza. 8.3 Dormideros: Se le acondicion un recipiente plstico transparente, con tierra negra rica en humus, y un recipiente con agua. 8.4 Dieta: Alimentacin artificial inducida con ratones pinck (recin nacidos) de la especie Mus musculus. El Doctor Jairo Maldonado realiza una mezcla de harinas y carnes, y las ha mantenido por ms de un ao en el Serpentario del Parque Recreacional y Zoolgico Piscilago en Nilo Cundinamarca.
9. COMPORTAMIENTO DEL INDIVIDUO:
9.1 Patrn de actividad: En general su patrn de actividad es mnimo. Mantener esta especie en cautiverio es una tarea difcil para el investigador, ya que pierden el apetito y no se alimentan por si mismas. 9.2 Comportamiento Social: Cuando se les extrae veneno son agresivas, por lo general las serpientes se mantienen en cajas individuales; solo se mantienen ms de dos serpientes de la misma especie cuando son de la misma camada. 9.3 Interaccin con otras especies: El comportamiento social con otras especies es agresivo.
10. MANIPULACIN: La inmovilizacin de la serpiente se hace directamente con la mano, debido a su tamao, ya que las pinzas herpetolgicas lastimaran la serpiente o expondran al investigador a una mordedura letal; para ello se toman medidas preventivas, y la manipulacin solo lo realiza una persona experta.
11. TRANSPORTE: Se transportan por medio de cajas herpetolgicas. 96 96
1. IDENTIFICACIN TAXONMICA:
NOMBRE CIENTFICO: NOMBRE VULGAR: CODIGO Micrurus s.surinamensis Coral Ms-003
2. CATEGORIA DE AMENAZA UICN: No aplica APNDICE CITES: No aplica
4.1 Tegumento: Piel cubierta de escamas. 4.2 Sistema seo: Constituido por vrtebras que le permiten gran flexibilidad. 4.3 Denticin: El tipo de denticin presente es llamado Proteroglifa, el maxilar superior es alargado (belfas). 4.4 Estado.reproductivo: El ejemplar se encuentra apto para la reproduccin. 4.5 Descripcin: Dentro del gnero Micrurus es una especie de mayor tamao en comparacin con otras especies del mismo gnero, posee colores aposemticos rojo, amarillo, negro, que indican advertencia; su cabeza es pequea de color rojo con lneas negras en forma de red, con cuello no diferenciado y ojos muy pequeos. 4.6 Locomocin: Serpentino, la serpiente contrae sus msculos para generar una serie de movimientos ondulatorios, este es la locomocin comn en todas las serpientes de coral.
5. MOFORMETRIA:
Longitud total: 64.5 cm. Longitud Cola: 8.5 cm.
6. DISTRIBUCIN GEOGRFICA: Geogrficamente se encuentra en la Amazona y Orinoqua Colombiana; presentando una alta ocurrencia poblacional en las regiones limtrofes de Brasil y Per con Colombia. Se aprecia una disminucin de la incidencia poblacional hacia el norte y el centro de la Amazonia Colombiana, en los territorios de Guaviare, Guaina, Vaups y Orinoqua.
7. HBITAT: Habitan en zonas de clima medio y clido. Algunas especies tienen vida semisubterrnea, hbitos nocturnos y prefieren permanecer ocultas bajo la hojarasca, piedras, troncos, son de carcter manso, tmidas de hbitos nocturnos. Su hbitat natural es el bosque tropical siempre cerca de reas acuticas entre 0 y 600 msnm. 8. HISTORIA NATURAL DE LA ESPECIE EN CAUTIVERIO:
8.1 Patrn de actividad: Durante el da su actividad es mnima, en la noche tiene mayor actividad. 8.2 Locomocin y postura: Permanece enrollada en las cajas herpetolgicas, cuando se le va ha extraer el veneno, se levanta la cola y esconde la cabeza. 8.3 Dormideros: Se le acondicion un recipiente plstico transparente, con tierra negra rica en humus, y un recipiente con agua. 8.4 Dieta: Alimentacin artificial inducida con ratones pinck (recin nacidos) de la especie Mus musculus. El Doctor Jairo Maldonado realiza una mezcla de harinas y carnes, y las ha mantenido por ms de un ao en el Serpentario del Parque Recreacional y Zoolgico Piscilago en Nilo Cundinamarca.
9. COMPORTAMIENTO DEL INDIVIDUO:
9.1 Patrn de actividad: En general su patrn de actividad es mnimo. Mantener esta especie en cautiverio es una tarea difcil para el investigador, ya que pierden el apetito y no se alimentan por si mismas. 9.2 Comportamiento Social: Cuando se les extrae veneno son agresivas, por lo general las serpientes se mantienen en cajas individuales; solo se mantienen ms de dos serpientes de la misma especie cuando son de la misma camada. 9.3 Interaccin con otras especies: El comportamiento social con otras especies es agresivo.
10. MANIPULACIN: La inmovilizacin de la serpiente se hace directamente con la mano, debido a su tamao, ya que las pinzas herpetolgicas lastimaran la serpiente o expondran al investigador a una mordedura letal; para ello se toman medidas preventivas, y la manipulacin solo lo realiza una persona experta.
11. TRANSPORTE: Se transportan por medio de cajas herpetolgicas. 97 97
1. IDENTIFICACIN TAXONMICA:
NOMBRE CIENTFICO: NOMBRE VULGAR: CODIGO Micrurus s.surinamensis Coral Ms-004
2. CATEGORIA DE AMENAZA UICN: No aplica APNDICE CITES: No aplica
4.1 Tegumento: Piel cubierta de escamas. 4.2 Sistema seo: Constituido por vrtebras que le permiten gran flexibilidad. 4.3 Denticin: El tipo de denticin presente es llamado Proteroglifa, el maxilar superior es alargado (belfas). 4.4 Estado.reproductivo: El ejemplar se encuentra apto para la reproduccin. 4.5 Descripcin: Dentro del gnero Micrurus es una especie de mayor tamao en comparacin con otras especies del mismo gnero, posee colores aposemticos rojo, amarillo, negro, que indican advertencia; su cabeza es pequea de color rojo con lneas negras en forma de red, con cuello no diferenciado y ojos muy pequeos. 4.6 Locomocin: Serpentino, la serpiente contrae sus msculos para generar una serie de movimientos ondulatorios, este es la locomocin comn en todas las serpientes de coral.
5. MOFORMETRIA:
Longitud total: 73,5 cm. Longitud Cola: 6,5 cm.
6. DISTRIBUCIN GEOGRFICA: Geogrficamente se encuentra en la Amazona y Orinoqua Colombiana; presentando una alta ocurrencia poblacional en las regiones limtrofes de Brasil y Per con Colombia. Se aprecia una disminucin de la incidencia poblacional hacia el norte y el centro de la Amazonia Colombiana, en los territorios de Guaviare, Guaina, Vaups y Orinoqua.
7. HBITAT: Habitan en zonas de clima medio y clido. Algunas especies tienen vida semisubterrnea, hbitos nocturnos y prefieren permanecer ocultas bajo la hojarasca, piedras, troncos, son de carcter manso, tmidas de hbitos nocturnos. Su hbitat natural es el bosque tropical siempre cerca de reas acuticas entre 0 y 600 msnm. 8. HISTORIA NATURAL DE LA ESPECIE EN CAUTIVERIO:
8.1 Patrn de actividad: Durante el da su actividad es mnima, en la noche tiene mayor actividad. 8.2 Locomocin y postura: Permanece enrollada en las cajas herpetolgicas, cuando se le va ha extraer el veneno, se levanta la cola y esconde la cabeza. 8.3 Dormideros: Se le acondicion un recipiente plstico transparente, con tierra negra rica en humus, y un recipiente con agua. 8.4 Dieta: Alimentacin artificial inducida con ratones pinck (recin nacidos) de la especie Mus musculus. El Doctor Jairo Maldonado realiza una mezcla de harinas y carnes, y las ha mantenido por ms de un ao en el Serpentario del Parque Recreacional y Zoolgico Piscilago en Nilo Cundinamarca.
9. COMPORTAMIENTO DEL INDIVIDUO:
9.1 Patrn de actividad: En general su patrn de actividad es mnimo. Mantener esta especie en cautiverio es una tarea difcil para el investigador, ya que pierden el apetito y no se alimentan por si mismas. 9.2 Comportamiento Social: Cuando se les extrae veneno son agresivas, por lo general las serpientes se mantienen en cajas individuales; solo se mantienen ms de dos serpientes de la misma especie cuando son de la misma camada. 9.3 Interaccin con otras especies: El comportamiento social con otras especies es agresivo.
10. MANIPULACIN: La inmovilizacin de la serpiente se hace directamente con la mano, debido a su tamao, ya que las pinzas herpetolgicas lastimaran la serpiente o expondran al investigador a una mordedura letal; para ello se toman medidas preventivas, y la manipulacin solo lo realiza una persona experta.
11. TRANSPORTE: Se transportan por medio de cajas herpetolgicas. 98 98
1. IDENTIFICACIN TAXONMICA: 1
NOMBRE CIENTFICO: NOMBRE VULGAR: CODIGO Micrurus mipartitus Rabo de aj , cabeza de chocho, rabo de candela. Mp-001
2. CATEGORIA DE AMENAZA UICN: No aplica APNDICE CITES: No aplica
4.1 Tegumento: Piel cubierta de escamas. Posee 15 hileras de escamas dorsales y carecen de escama loreal. 4.2 Sistema seo: Constituido por vrtebras que le permiten gran flexibilidad. 4.3 Denticin: El tipo de denticin presente es llamado Proteroglifa, el maxilar superior es alargado (belfas). 4.4 Estado.reproductivo: El ejemplar se encuentra apto para la reproduccin. 4.5 Descripcin: Presenta colores aposemticos: negros, rojos y blancos, esta serpiente presenta un anillo rojo en la cabeza, y cinco anillos rojos en la cola intercalados de anillos negros, el resto de su cuerpo posee un anillo negro, seguido de un anillo blanco. Su cabeza es pequea, sin diferenciacin de cuello, el ojo es pequeo. 4.6 Locomocin: Serpentino, la serpiente contrae sus msculos para generar una serie de movimientos ondulatorios, este es la locomocin comn en todas las serpientes de coral.
5. MOFORMETRIA:
Longitud total: 90 cm. Longitud Cola: 9,5cm.
6.DISTRIBUCIN GEOGRFICA: Geogrficamente se encuentra principalmente en la Cordillera de los Andes, Antioquia y Choc, encontrndose ampliamente distribuida en todo el territorio Colombiano, a una altura aproximada de 1.800 metros sobre el nivel del mar.
7. HBITAT: Habitan en principalmente en zonas hmedas, zonas productoras de caf y selvticas, esta especie vive en cercana estrecha con los seres humanos, ya que prefieren los cultivos de caf. Tiene hbitos nocturnos y subterrneos, pero tambin se encuentra oculta entre la hojarasca, grietas, y troncos podridos.
8. HISTORIA NATURAL DE LA ESPECIE EN CAUTIVERIO:
8.1 Patrn de actividad: Tiene mayor actividad nocturna. 8.2 Locomocin y postura: Permanece buscando la manera de ocultarse en la tierra cuando se va a manipular para extraer su veneno. 8.3 Dormideros: Se le acondicion un recipiente plstico transparente, con tierra negra, con hojarasca y un recipiente con agua. 8.4 Dieta: Alimentacin artificial inducida con ratones pinck (recin nacidos) de la especie Mus musculus. El Doctor Jairo Maldonado realiza una mezcla de harinas y carnes, y las ha mantenido por ms de un ao en el Serpentario del Parque Recreacional y Zoolgico Piscilago en Nilo Cundinamarca.
9. COMPORTAMIENTO DEL INDIVIDUO:
9.1 Patrn de actividad: En general su patrn de actividad es mnimo. Mantener esta especie en cautiverio es una tarea difcil para el investigador, ya que pierden el apetito y no se alimentan por si mismas. 9.2 Comportamiento Social: Cuando se les extrae veneno no tiene conducta agresiva. 9.3 Interaccin con otras especies: El comportamiento social con otras especies es agresivo.
10. MANIPULACIN: La inmovilizacin de la serpiente se hace directamente con la mano, debido a su tamao, ya que las pinzas herpetolgicas lastimaran la serpiente o expondran al investigador a una mordedura letal; para ello se toman medidas preventivas, y la manipulacin solo lo realiza una persona experta.
11. TRANSPORTE: Se transportan por medio de cajas herpetolgicas 99 99
1. IDENTIFICACIN TAXONMICA:
NOMBRE CIENTFICO: NOMBRE VULGAR: Mis-001 Micrurus isozonus Coral
2. CATEGORIA DE AMENAZA UICN: No aplica APNDICE CITES: No aplica
4.1 Tegumento: Piel cubierta de escamas. 4.2 Sistema seo: Constituido por vrtebras que le permiten gran flexibilidad. 4.3 Denticin: El tipo de denticin presente es llamado Proteroglifa, el maxilar superior es alargado (belfas). 4.4 Estado.reproductivo: El ejemplar se encuentra apto para la reproduccin. 4.5 Descripcin: Dentro del gnero Micrurus es una especie de tamao grande, posee colores aposemticos negro, amarillo, rojo; el patrn de coloracin del cuerpo es tres anillos negros intercalados de dos anillos amarillos, en medio de dos anillos rojos. Existe pocos reportes acerca de su biologa. 4.6 Locomocin: Serpentino, la serpiente contrae sus msculos para generar una serie de movimientos ondulatorios, este es la locomocin comn en todas las serpientes de coral.
5. MOFORMETRIA:
Longitud total: 53 cm. Longitud Cola: 3 cm.
6. DISTRIBUCIN GEOGRFICA: Geogrficamente esta especie se encuentra en la Regin de la Orinoqua. De su Ubicacin geogrfica se conoce muy poco.
7. HBITAT: Habitan la regin de la Orinoqua, se distribuye aproximadamente en Colombia hasta los 1.400 metros sobre el nivel del mar.
8. HISTORIA NATURAL DE LA ESPECIE EN CAUTIVERIO:
8.1 Patrn de actividad: Mayor actividad nocturna. 8.2 Locomocin y postura: En el da permanece enrollada, locomocin serpentina, en el momento de manipularla para la extraccin del veneno, la serpiente se torna agresiva, se enrolla escondiendo la cabeza debajo de su cuerpo y levanta la cola a manera de seuelo. 8.3 Dormideros: Se le acondicion un recipiente plstico transparente, con tierra negra, con hojarasca, y un recipiente con agua. 8.4 Dieta: El Doctor Jairo Maldonado implement una dieta que incluye cecilias, bachias, serpientes pequeas y alimentacin artificial inducida con una mezcla de harinas y carnes.
9. COMPORTAMIENTO DE LA ESPECIE:
9.1 Patrn de actividad: Nocturno. 9.2 Comportamiento Social: Se ha logrado satisfactoriamente mantener viva dos aos en cautiverio. 9.3 Interaccin con otras especies: Es agresivo, esta serpiente es ofidifaga.
10. MANIPULACIN: La inmovilizacin de la serpiente se hace directamente con la mano, debido a su tamao, ya que las pinzas herpetolgicas lastimaran la serpiente o expondran al investigador a una mordedura letal; para ello se toman medidas preventivas y la manipulacin solo lo realiza una persona experta.
11. TRANSPORTE: Se transportan por medio de cajas herpetolgicas.
100 100
1. IDENTIFICACIN TAXONMICA:
NOMBRE CIENTFICO: NOMBRE VULGAR: CODIGO Micrurus isozonus Coral Miso-002
2. CATEGORIA DE AMENAZA UICN: No aplica APNDICE CITES: No aplica
4.1 Tegumento: Piel cubierta de escamas. 4.2 Sistema seo: Constituido por vrtebras que le permiten gran flexibilidad. 4.3 Denticin: El tipo de denticin presente es llamado Proteroglifa, el maxilar superior es alargado (belfas). 4.4 Estado.reproductivo: El ejemplar se encuentra apto para la reproduccin. 4.5 Descripcin: Dentro del gnero Micrurus es una especie de tamao grande, posee colores aposemticos negro, amarillo, rojo; el patrn de coloracin del cuerpo es tres anillos negros intercalados de dos anillos amarillos, en medio de dos anillos rojos. Existen pocos reportes acerca de su biologa. 4.6 Locomocin: Serpentino, la serpiente contrae sus msculos para generar una serie de movimientos ondulatorios, este es la locomocin comn en todas las serpientes de coral.
5. MOFORMETRIA:
Longitud total: 90 cm. Longitud Cola: 4,5cm.
6. DISTRIBUCIN GEOGRFICA: Geogrficamente esta especie se encuentra en la Regin de la Orinoqua. De su Ubicacin geogrfica se conoce muy poco.
7. HBITAT: Habitan la regin de la Orinoqua, se distribuye aproximadamente en Colombia hasta los 1.400 metros sobre el nivel del mar.
8. HISTORIA NATURAL DE LA ESPECIE EN CAUTIVERIO:
8.1 Patrn de actividad: Mayor actividad nocturna. 8.2 Locomocin y postura: En el da permanece enrollada, locomocin serpentina, en el momento de manipularla para la extraccin del veneno, la serpiente se torna agresiva, se enrolla escondiendo la cabeza debajo de su cuerpo y levanta la cola a manera de seuelo. 8.3 Dormideros: Se le acondicion un recipiente plstico transparente, con tierra negra, con hojarasca, y un recipiente con agua. 8.4 Dieta: El Doctor Jairo Maldonado implement una dieta que incluye cecilias, bachias, serpientes pequeas y alimentacin artificial inducida con una mezcla de harinas y carnes.
9. COMPORTAMIENTO DE LA ESPECIE:
9.1 Patrn de actividad: Nocturno. 9.2 Comportamiento Social: Se ha logrado satisfactoriamente mantener viva dos aos en cautiverio. 9.3 Interaccin con otras especies: Es agresivo, esta serpiente es ofidifaga.
10. MANIPULACIN: La inmovilizacin de la serpiente se hace directamente con la mano, debido a su tamao, ya que las pinzas herpetolgicas lastimaran la serpiente o expondran al investigador a una mordedura letal; para ello se toman medidas preventivas y la manipulacin solo lo realiza una persona experta.
11. TRANSPORTE: Se transportan por medio de cajas herpetolgicas.
101 101
1. IDENTIFICACIN TAXONMICA: 2
NOMBRE CIENTFICO: NOMBRE VULGAR: CODIGO Micrurus dumerilli Coral Mdm- 001
2. CATEGORIA DE AMENAZA UICN: No aplica APNDICE CITES: No aplica
4.1 Tegumento: Piel cubierta de escamas. 4.2 Sistema seo: Constituido por vrtebras que le permiten gran flexibilidad. 4.3 Denticin: El tipo de denticin presente es llamado Proteroglifa, el maxilar superior es alargado (belfas). 4.4 Estado.reproductivo: El ejemplar se encuentra apto para la reproduccin. 4.5 Descripcin: Dentro del gnero Micrurus es una especie de tamao pequeo, posee colores aposemticos, anillos negros intercalados con anillos blancos en cabeza y cola, sin cuello diferenciado del resto del cuerpo, su cola tiene un adelgazamiento brusco, el patrn de coloracin del cuerpo es distinto de la cola, a lo largo del cuerpo posee en medio de dos anillos rojos un anillo blanco seguido de un anillo negro, la cola tiene un anillo negros en medio dos anillos blancos en seis repeticiones. 4.6 Locomocin: Serpentino, la serpiente contrae sus msculos para generar una serie de movimientos ondulatorios, este es la locomocin comn en todas las serpientes de coral.
5. MOFORMETRIA:
Longitud total: 40 cm. Longitud Cola: 7 cm.
6. DISTRIBUCIN GEOGRFICA: Geogrficamente esta especie se encuentra en la Regin Andina, Antioquia, Sierra Nevada de Santa Martha. En Colombia esta especie se encuentra en tierras del oeste del pas.
7. HBITAT: Habitan en el bosque seco aproximadamente 2.133 metros sobre el nivel del mar.
8. HISTORIA NATURAL DE LA ESPECIE EN CAUTIVERIO:
8.1 Patrn de actividad: Mayor actividad nocturna. 8.2 Locomocin y postura: En el da permanece enrollada, locomocin serpentina. 8.3 Dormideros: Se le acondicion un recipiente plstico transparente, con tierra negra, con hojarasca, y un recipiente con agua. 8.4 Dieta: El Doctor Jairo Maldonado implement una dieta que incluye cecilias, bachias, serpientes pequeas y alimentacin artificial inducida con una mezcla de harinas y carnes.
9. COMPORTAMIENTO DE LA ESPECIE:
9.1 Patrn de actividad: Nocturno. 9.2 Comportamiento Social: Se ha logrado satisfactoriamente mantener viva dos aos en cautiverio. 9.3 Interaccin con otras especies: Es agresivo, esta serpiente es ofidifaga.
10. MANIPULACIN: La inmovilizacin de la serpiente se hace directamente con la mano, debido a su tamao, ya que las pinzas herpetolgicas lastimaran la serpiente o expondran al investigador a una mordedura letal; para ello se toman medidas preventivas y la manipulacin solo lo realiza una persona experta.
11. TRANSPORTE: Se transportan por medio de cajas herpetolgicas.
102 102
1. IDENTIFICACIN TAXONMICA: 1
NOMBRE CIENTFICO: NOMBRE VULGAR: CODIGO Micrurus dumerilli Coral Mdm -002
2. CATEGORIA DE AMENAZA UICN: No aplica APNDICE CITES: No aplica
4.1 Tegumento: Piel cubierta de escamas. 4.2 Sistema seo: Constituido por vrtebras que le permiten gran flexibilidad. 4.3 Denticin: El tipo de denticin presente es llamado Proteroglifa, el maxilar superior es alargado (belfas). 4.4 Estado.reproductivo: El ejemplar se encuentra apto para la reproduccin. 4.5 Descripcin: Dentro del gnero Micrurus es una especie de tamao pequeo, posee colores aposemticos, anillos negros intercalados con anillos blancos en cabeza y cola, sin cuello diferenciado del resto del cuerpo, su cola tiene un adelgazamiento brusco, el patrn de coloracin del cuerpo es distinto de la cola, a lo largo del cuerpo posee en medio de dos anillos rojos un anillo blanco seguido de un anillo negro, la cola tiene un anillo negros en medio dos anillos blancos en seis repeticiones. 4.6 Locomocin: Serpentino, la serpiente contrae sus msculos para generar una serie de movimientos ondulatorios, este es la locomocin comn en todas las serpientes de coral.
5. MOFORMETRIA:
Longitud total: 59 cm. Longitud Cola: 5,5 cm.
6. DISTRIBUCIN GEOGRFICA: Geogrficamente esta especie se encuentra en la Regin Andina, Antioquia, Sierra Nevada de Santa Martha. En Colombia esta especie se encuentra en tierras del oeste del pas.
7. HBITAT: Habitan en el bosque seco aproximadamente 2.133 metros sobre el nivel del mar.
8. HISTORIA NATURAL DE LA ESPECIE EN CAUTIVERIO:
8.1 Patrn de actividad: Mayor actividad nocturna. 8.2 Locomocin y postura: En el da permanece buscando la oscuridad. 8.3 Dormideros: Se le acondicion un recipiente plstico transparente, con tierra negra, con hojarasca, y un recipiente con agua. 8.4 Dieta: El Doctor Jairo Maldonado implement una dieta que incluye cecilias, bachias, serpientes pequeas y alimentacin artificial inducida con una mezcla de harinas y carnes.
9. COMPORTAMIENTO DE LA ESPECIE:
9.1 Patrn de actividad: Nocturno. 9.2 Comportamiento Social: Se ha logrado satisfactoriamente mantener viva dos aos en cautiverio. 9.3 Interaccin con otras especies: Es agresivo, esta serpiente es ofidifaga.
10. MANIPULACIN: La inmovilizacin de la serpiente se hace directamente con la mano, debido a su tamao, ya que las pinzas herpetolgicas lastimaran la serpiente o expondran al investigador a una mordedura letal; para ello se toman medidas preventivas y la manipulacin solo lo realiza una persona experta.
11. TRANSPORTE: Se transportan por medio de cajas herpetolgicas.
103 103
1. IDENTIFICACIN TAXONMICA: 1
NOMBRE CIENTFICO: NOMBRE VULGAR: CODIGO Micrurus medemi Coral Mmd-001
2. CATEGORIA DE AMENAZA UICN: No aplica APNDICE CITES: No aplica
4.1 Tegumento: Piel cubierta de escamas. 4.2 Sistema seo: Constituido por vrtebras que le permiten gran flexibilidad. 4.3 Denticin: El tipo de denticin presente es llamado Proteroglifa, el maxilar superior es alargado (belfas). 4.4 Estado.reproductivo: El ejemplar se encuentra apto para la reproduccin. 4.5 Descripcin: Dentro del gnero Micrurus es una especie que posee un patrn de coloracin diferente a otras corales, posee colores aposemticos, anillos negros intercalados con anillos rojos, su cabeza es pequea, sin cuello diferenciado del resto del cuerpo, su cola tiene un adelgazamiento brusco. 4.6 Locomocin: Serpentino, la serpiente contrae sus msculos para generar una serie de movimientos ondulatorios, este es la locomocin comn en todas las serpientes de coral.
5. MOFORMETRIA:
Longitud total: 67 cm. Longitud Cola: 9,5 cm.
6. DISTRIBUCIN GEOGRFICA: Este ejemplar proviene de Villavicencio (Meta), de su distribucin geogrfica se sabe muy poco. Es una especie endmica de Colombia.
7. HBITAT: Habitan en el bosque hmedo tropical y seco entre 250 600 metros sobre el nivel del mar, del territorio Colombiano.
8. HISTORIA NATURAL DE LA ESPECIE EN CAUTIVERIO:
8.1 Patrn de actividad: Mayor actividad nocturna. 8.2 Locomocin y postura: En el da permanece buscando la oscuridad. 8.3 Dormideros: Se le acondicion un recipiente plstico transparente, con tierra negra, con hojarasca, y un recipiente con agua. 8.4 Dieta: El Doctor Jairo Maldonado les implement una dieta que incluye cecilias, bachias, serpientes pequeas y alimentacin artificial inducida con una mezcla de harinas y carnes.
9. COMPORTAMIENTO DE LA ESPECIE:
9.1 Patrn de actividad: Nocturno. 9.2 Comportamiento Social: Se ha logrado satisfactoriamente la reproduccin en cautiverio de esta especie; se han mantenido vivas por ms de dos aos con la implementacin de la dieta artificial inducida, ya que la mayora de las corales no se alimentan voluntariamente en cautiverio. 9.3 Interaccin con otras especies: Es agresivo, esta serpiente es ofidifaga.
10. MANIPULACIN: La inmovilizacin de la serpiente se hace directamente con la mano, debido a su tamao, ya que las pinzas herpetolgicas lastimaran la serpiente o expondran al investigador a una mordedura letal; para ello se toman medidas preventivas, y la manipulacin solo lo realiza una persona experta.
11. TRANSPORTE: Se transportan por medio de cajas herpetolgicas.
104 104
1. IDENTIFICACIN TAXONMICA:
NOMBRE CIENTFICO: NOMBRE VULGAR: CODIGO Micrurus medemi Coral Mmd-002
2. CATEGORIA DE AMENAZA UICN: No aplica APNDICE CITES: No aplica
4.1 Tegumento: Piel cubierta de escamas. 4.2 Sistema seo: Constituido por vrtebras que le permiten gran flexibilidad. 4.3 Denticin: El tipo de denticin presente es llamado Proteroglifa, el maxilar superior es alargado (belfas). 4.4 Estado.reproductivo: El ejemplar se encuentra apto para la reproduccin. 4.5 Descripcin: Dentro del gnero Micrurus es una especie que posee un patrn de coloracin diferente a otras corales, posee colores aposemticos, anillos negros intercalados con anillos blancos, su cabeza es pequea, sin cuello diferenciado del resto del cuerpo, su cola tiene un adelgazamiento brusco. 4.6 Locomocin: Serpentino, la serpiente contrae sus msculos para generar una serie de movimientos ondulatorios, este es la locomocin comn en todas las serpientes de coral.
5. MOFORMETRIA:
Longitud total: 51.0 cm. Longitud Cola: 7.0 cm.
6. DISTRIBUCIN GEOGRFICA: Este ejemplar proviene de Villavicencio (Meta), de su distribucin geogrfica se sabe muy poco. Es una especie endmica de Colombia.
7. HBITAT: Habitan en el bosque hmedo tropical y seco entre 250 600 metros sobre el nivel del mar, del territorio Colombiano.
8. HISTORIA NATURAL DE LA ESPECIE EN CAUTIVERIO:
8.1 Patrn de actividad: Mayor actividad nocturna. 8.2 Locomocin y postura: En el da permanece buscando la oscuridad. 8.3 Dormideros: Se le acondicion un recipiente plstico transparente, con tierra negra, con hojarasca, y un recipiente con agua. 8.4 Dieta: El Doctor Jairo Maldonado les implement una dieta que incluye cecilias, bachias, serpientes pequeas y alimentacin artificial inducida con una mezcla de harinas y carnes.
9. COMPORTAMIENTO DE LA ESPECIE:
9.1 Patrn de actividad: Nocturno. 9.2 Comportamiento Social: Se ha logrado satisfactoriamente la reproduccin en cautiverio de esta especie; se han mantenido vivas por ms de dos aos con la implementacin de la dieta artificial inducida, ya que la mayora de las corales no se alimentan voluntariamente en cautiverio. 9.3 Interaccin con otras especies: Es agresivo, esta serpiente es ofidifaga.
10. MANIPULACIN: La inmovilizacin de la serpiente se hace directamente con la mano, debido a su tamao, ya que las pinzas herpetolgicas lastimaran la serpiente o expondran al investigador a una mordedura letal; para ello se toman medidas preventivas, y la manipulacin solo lo realiza una persona experta.
11. TRANSPORTE: Se transportan por medio de cajas herpetolgicas.
105 105
1. IDENTIFICACIN TAXONMICA:
NOMBRE CIENTFICO: NOMBRE VULGAR: CODIGO Micrurus medemi Coral Mmd-003
2. CATEGORIA DE AMENAZA UICN: No aplica APNDICE CITES: No aplica
4.1 Tegumento: Piel cubierta de escamas. 4.2 Sistema seo: Constituido por vrtebras que le permiten gran flexibilidad. 4.3 Denticin: El tipo de denticin presente es llamado Proteroglifa, el maxilar superior es alargado (belfas). 4.4 Estado.reproductivo: El ejemplar se encuentra apto para la reproduccin. 4.5 Descripcin: Dentro del gnero Micrurus es una especie que posee un patrn de coloracin diferente a otras corales, posee colores aposemticos, anillos negros intercalados con anillos amarillos, su cabeza es pequea, sin cuello diferenciado del resto del cuerpo, su cola tiene un adelgazamiento brusco. 4.6 Locomocin: Serpentino, la serpiente contrae sus msculos para generar una serie de movimientos ondulatorios, este es la locomocin comn en todas las serpientes de coral.
5. MOFORMETRIA:
Longitud total: 59.0 cm. Longitud Cola: 5,5 cm.
6. DISTRIBUCIN GEOGRFICA: Este ejemplar proviene de Villavicencio (Meta), de su distribucin geogrfica se sabe muy poco. Es una especie endmica de Colombia.
7. HBITAT: Habitan en el bosque hmedo tropical y seco entre 250 600 metros sobre el nivel del mar, del territorio Colombiano.
8. HISTORIA NATURAL DE LA ESPECIE EN CAUTIVERIO:
8.1 Patrn de actividad: Mayor actividad nocturna.
8.2 Locomocin y postura: En el da permanece buscando la oscuridad.
8.3 Dormideros: Se le acondicion un recipiente plstico transparente, con tierra negra, con hojarasca, y un recipiente con agua.
8.4 Dieta: El Doctor Jairo Maldonado implement una dieta que incluye cecilias, bachias, serpientes pequeas y alimentacin artificial inducida con una mezcla de harinas y carnes.
9. COMPORTAMIENTO DE LA ESPECIE:
9.1 Patrn de actividad: Nocturno.
9.2 Comportamiento Social: Se ha logrado satisfactoriamente la reproduccin en cautiverio de esta especie; se han mantenido vivas por ms de dos aos con la implementacin de la dieta artificial inducida, ya que la mayora de las corales no se alimentan voluntariamente en cautiverio. No son agresivas con individuos de la misma especie.
9.3 Interaccin con otras especies: Es agresivo, esta serpiente es ofidifaga.
10. MANIPULACIN: La inmovilizacin de la serpiente se hace directamente con la mano, debido a su tamao, ya que las pinzas herpetolgicas lastimaran la serpiente o expondran al investigador a una mordedura letal; para ello se toman medidas preventivas y la manipulacin solo lo realiza una persona experta.
11. TRANSPORTE: Se transportan por medio de cajas herpetolgicas.
106 106
1. IDENTIFICACIN TAXONMICA:
NOMBRE CIENTFICO: NOMBRE VULGAR: CODIGO Micrurus medemi Coral Mmd-004
2. CATEGORIA DE AMENAZA UICN: No aplica APNDICE CITES: No aplica
4.1 Tegumento: Piel cubierta de escamas. 4.2 Sistema seo: Constituido por vrtebras que le permiten gran flexibilidad. 4.3 Denticin: El tipo de denticin presente es llamado Proteroglifa, el maxilar superior es alargado (belfas). 4.4 Estado.reproductivo: El ejemplar se encuentra apto para la reproduccin. 4.5 Descripcin: Dentro del gnero Micrurus es una especie que posee un patrn de coloracin diferente a otras corales, posee colores aposemticos, anillos negros intercalados con anillos amarillos, su cabeza es pequea, sin cuello diferenciado del resto del cuerpo, su cola tiene un adelgazamiento brusco. 4.6 Locomocin: Serpentino, la serpiente contrae sus msculos para generar una serie de movimientos ondulatorios, este es la locomocin comn en todas las serpientes de coral.
5. MOFORMETRIA:
Longitud total: 50.0 cm. Longitud Cola: 7.0 cm.
6. DISTRIBUCIN GEOGRFICA: Este ejemplar proviene de Villavicencio (Meta), de su distribucin geogrfica se sabe muy poco. Es una especie endmica de Colombia.
7. HBITAT: Habitan en el bosque hmedo tropical y seco entre 250 600 metros sobre el nivel del mar, del territorio Colombiano. 8. HISTORIA NATURAL DE LA ESPECIE EN CAUTIVERIO:
8.1 Patrn de actividad: Mayor actividad nocturna. 8.2 Locomocin y postura: En el da permanece buscando la oscuridad. 8.3 Dormideros: Se le acondicion un recipiente plstico transparente, con tierra negra, con hojarasca, y un recipiente con agua. 8.4 Dieta: El Doctor Jairo Maldonado implement una dieta que incluye cecilias, bachias, serpientes pequeas y alimentacin artificial inducida con una mezcla de harinas y carnes.
9. COMPORTAMIENTO DE LA ESPECIE:
9.1 Patrn de actividad: Nocturno. 9.2 Comportamiento Social: Se ha logrado satisfactoriamente la reproduccin en cautiverio de esta especie; se han mantenido vivas por ms de dos aos con la implementacin de una dieta artificial inducida, ya que la mayora de las corales no se alimentan voluntariamente en cautiverio. 9.3 Interaccin con otras especies: Es agresivo, esta serpiente es ofidifaga.
10. MANIPULACIN: La inmovilizacin de la serpiente se hace directamente con la mano, debido a su tamao, ya que las pinzas herpetolgicas lastimaran la serpiente o expondran al investigador a una mordedura letal; para ello se toman medidas preventivas y la manipulacin solo lo realiza una persona experta.
11. TRANSPORTE: Se transportan por medio de cajas herpetolgicas.
107 107 ANEXO B. UTILIZACIN DE ANIMALES DE LABORATORIO EN LA EXPERIMENTACIN BIOLGICA
I. PROGRAMA GLOBAL PARA LA INFRAESTRUCTURA DE LA INVESTIGACIN BIOLOGICA Y BIOMEDICA EN MANEJO DE ANIMALES DE LABORATORIO INSTITUTO DE BIOTECNOLOGIA DE LA UNIVERSIDAD NACIONAL DE COLOMBIA, MAYO DE 2.000. (Osorio, et al 2.000)
1. PRINCIPIOS TICOS EN EL MANEJO DE ANIMALES DE LABORATORIO
1.1.tica
Este tema compete a todos los individuos pero, con mayor razn a los involucrados en la investigacin biolgica; desde el tcnico auxiliar que est a cargo del cuidado de los animales, hasta el ms alto directivo de la institucin productora o usuaria de los mismos. La primera condicin del investigador que trabaja con animales de laboratorio es el respeto por la vida, por el dolor o el sufrimiento a que stos pueden ser sometidos en los trabajos bajo su responsabilidad.
Siempre que se utilizan animales en investigacin habremos de considerar que un objetivo, tan importante como el de obtener resultados experimentales, ser el de minimizar cualquier dolor o angustia que stos puedan sufrir. El refinamiento de los procedimientos para conseguir que sean ms humanos debe ser parte integrante de toda investigacin cientfica.
Esto es importante tanto desde el punto de vista de la preocupacin humanitaria como para cumplir los requisitos de la legislacin sobre animales de investigacin.
2. TICOS INTERNACIONALES PARA INVESTIGACIN BIOMDICA CON ANIMALES - CIOM (CONSEJO INTERNACIONAL DE ORGANIZACIONES MDICAS)
2.1 El avance del conocimiento, la proteccin de la salud y/o el bienestar de los hombres y los animales requiere la experimentacin con animales vivos.
2.2. Siempre que sea apropiado usar mtodos alternativos.
2.3 Realizar experimentacin en animales despus de estudiar su importancia para la salud humana y animal y para el avance del conocimiento biolgico.
2.4 Seleccionar animales de especie y calidad apropiadas y usar el mnimo nmero requerido para obtener resultados cientficamente vlidos. 2.5 Tratar a los animales como seres sensibles y considerar imperativo tico el cuidado y uso adecuado, evitando o minimizando las molestias, la angustia y el dolor.
2.5 Presumir siempre que los procedimientos dolorosos para el hombre tambin causarn dolor en otras especies vertebradas.
2.6 Procedimientos que pueden causar dolor o angustia momentnea o mnima deben ser realizados con sedacin, analgesia o anestesia. No realizar procedimientos quirrgicos o dolorosos en animales no anestesiados o paralizados con agentes qumicos.
2.7 Cuando se requiere apartarse del principio anterior la decisin debe ser tomada por un Comit Revisor convenientemente constituido. Estas excepciones no deben ser hechas solo para demostracin o enseanza. 108 108 2.8 Al final de la experiencia, o en el momento apropiado, los animales que puedan sufrir dolor crnico o severo, angustia, disconfort o invalidez, que no puedan ser aliviados, deben ser sacrificados sin dolor.
2.9 Los animales mantenidos con fines biomdicos, deben tener las mejores condiciones de vida posibles, de preferencia con supervisin de veterinarios con experiencia en ciencia de animales de laboratorio.
2.10 El director del establecimiento es responsable por la calificacin de los investigadores y dems personal, para realizar los trabajos requeridos, debiendo otorgar adecuadas oportunidades de entrenamiento.
3. ALTERNATIVAS AL USO DE ANIMALES DE LABORATORIO
Desde que el concepto de Alternativas fue introducido recibi nombres variados segn quienes lo emplearon. Algunos lo interpretan como un programa para eliminar totalmente al animal experimental. El concepto ms generalizado en la actualidad parte de la publicacin de Russel y de Burch que definieron Alternativas como: Cualquier tcnica que Reemplace el uso de animales, que Reduzca su nmero en n trabajo particular o que Refine un mtodo existente para disminuir el dolor o el malestar de los animales. Esto de conoce como el princio de las tres Rs (Reemplazo, Reduccin y Refinamiento).
Como resultado de esta definicin existe una gran gama de tcnicas o abordajes (Biolgicos y no Biolgicos) que pueden considerarse apropiados como Alternativas.
4. CARACTERSTICAS DE LOS ANIMALES DE LABORATORIO
4.1 Gentica y Reproduccin
Es esencial conocer las caractersticas genticas para seleccionar los animales, a fin de elegir los portadores de caracteres consistentes con los objetivos experimentales. Debe considerarse las diferencias conocidas entre especies, colonias o cepas que incluyen: expectativas de vida, anatoma, tamao corporal, sistemas fisiolgicos y metablicos, caractersticas comportamentales, susceptibilidad a xenobiticos, etc. Es muy importante conocer la historia gentica completa de los animales antes de comenzar a trabajar.
Con relacin a tipos genticos los animales se clasifican en colonias exocriadas (outbred stocks), cepas endocriadas, (inbreb strains), los hbridos, las colonias parcialmente endocriadas, etc. Las colonias exocriadas son colonias mantenidas de manera que se evite el cruzamiento de familiares cercanos. Las cepas endocriadas son las obtenidas a partir de una pareja nica, por continuo cruzamiento entre hermanos o entre padres e hijos. Despus de veinte o ms generaciones con este mtodo se obtiene un coeficiente de endocra del 98%. Este es el mnimo nivel aceptado internacionalmente para que una cepa sea designada endocriada. Los hbridos son de dos tipos, el F1 y el F2. El F1 resulta del cruzamiento de dos cepas endocriadas. Los F2 son los animales resultantes del cruzamiento entre dos hbridos F1. Colonias parcialmente endocriadas son aquellas que no han alcanzado por cruzamiento entre hermanos las veinte generaciones.
4.2 Ambiente
Existe abundante evidencia de que las condiciones ambientales en que se cran y experimentan los animales influye decisivamente en las respuestas a los diferentes tratamientos. Si se requieren respuestas estandarizadas, las condiciones en que se mantienen los animales deben ser fijas y comparables en todos los laboratorios del mundo. 109 109 En general, los cambios en el ambiente externo son registrados por los receptores externos de los animales que envan la informacin al sistema nervioso central el que, a su vez, informar al sistema neuroendocrino para restaurar cualquier desbalance homeosttico. Esto producir cambios en el modelo del animal y con ello cambios, reconocibles o no, en las respuestas ocasionadas por el tratamiento experimental. Estas alteraciones pueden traducirse en una modificacin del tipo de respuesta o en un aumento de la variabilidad de los resultados entre o dentro de los laboratorios.
Los principales factores ambientales que afectan a los animales pueden clasificarse en: 4.2.1. Climticos (temperatura, humedad, ventilacin, etc.)
4.2.2. Fisicoqumicos (iluminacin; ruido; presencia de contaminantes, anestsicos y sanitizantes; composicin del aire y cama, etc.)
4.2.3. Habitaciones (forma, tamao, tipo y poblacin de las jaulas, etc)
4.2.4 Nutricionales (dietas, agua y esquema de administracin).
4.2.5. Microorganismos y parsitos (con especial referencia a los patgenos de cada especie).
4.2.6. Situacin experimental.
5. ASPECTOS A CONSIDERAR EN EL MANEJOS DE ANIMALES DE LABORATORIO EN PROYECTOS DE INVESTIGACIN
5.1 Recomendaciones para el tratamiento de los Animales
En la prctica el cuidado de los animales de laboratorio recae en varias personas, pero legalmente y dependiendo de las leyes del pas donde se adelante el estudio, la responsabilidad final con frecuencia recae en el Investigador principal que est realizando el procedimiento cientfico.
Las recomendaciones bsicas que debe tener en cuenta son:
Acoger los trminos de la legislacin pertinente.
Elegir la especie ms apropiada o la alternativa no animal, si existiere, que responda a las necesidades del proyecto. Requiere conocimiento previo de la historia natural de dicha especie. Debe tener en cuenta el estado de conservacin de la especie.
Utilizar el menor nmero posible de individuos (estudio piloto, buen diseo experimental y uso de pruebas estadsticas apropiadas)
Discutir previamente con colegas el valor cientfico de la investigacin as como los aspectos ticos de la misma durante todos los procedimientos.
Obtener animales de proveedores serios. En caso de tratarse de animales silvestres, su captura debe hacerse minimizando el dolor y acogiendo la legislacin vigente.
5.2 Categorizacin de las Molestias
Categorizacin de las molestias o el malestar inducido durante la Fase de Experimentacin:
110 110 5.2.1 Molestias menores: Se consideran como molestias menores los siguientes procedimientos:
Toma de muestra de sangre Examen rectal Toma de muestra de flujo vaginal Administracin forzada de sustancias inocuas Experimentos terminales bajo anestesia Vacunas sin coadyuvante Toma de radiografas en animales no anestesiados
5.2.2 Molestias moderadas: se consideran como molestias moderadas la utilizacin de cualquiera de los siguientes procedimientos:
Toma frecuente de muestras de sangre Pruebas de pirgenos Cateterizacin y canulacin Uso de Yesos Inmovilizacin Cesrea Recuperacin de anestesia general Inmunizacin sin adyuvantes completos Transplantes de piel
5.2.3 Molestias severas: se consideran como molestias severas la utilizacin de cualquiera de los siguientes procedimientos:
Extraccin del fludo asctico Sangra total sin anestesia previa Induccin de defectos genticos Deprivacin prolongada de comida, agua o sueo Pruebas de dosis letal 50 y concentracin letal 50 Inmovilizacin con relajantes sin sedacin Induccin de infecciones experimentales Pruebas de carcinogenicidad con produccin de tumores Induccin de convulsiones
6. Categorizacin de la Invasividad producida durante la experimentacin:
CATEGORA PROCEDIMIENTOS A Experimentos realizados en invertebrados o clulas/ tejidos aislados B Experimentos que causan nulo o mnimo estrs o malestar C Experimentos que causan leve estrs o dolor de corta duracin. D Experimentos que causan de moderado a severo estrs o malestar. E Procedimientos que causan dolor severo o al lmite de tolerancia de animales conscientes.
111 111
II. FORMULARIO PARA LA EVALUACIN DE PROYECTOS QUE INVOLUCRAN ANIMALES DE LABORATORIO
Formulario de evaluacin de proyectos de investigacin/docencia en lo referente a manejo de animales de laboratorio
INSTITUCIN: LABORATORIOS PROBIOL S.A., UNIVERSIDAD DE LA AMAZONIA, TECMOL FARMACUTICA.
PRIMERA PARTE
1. INVESTIGADOR PRINCIPAL (TITULAR DEL PROYECTO O ACTIVIDAD): SINDY MONJE BELMONTE.
2. TTULO DEL PROYECTO O PROTOCOLO: DETERMINACIN DE LA DOSIS LETAL MEDIA (DL 50 ) DE CINCO ESPECIES DEL GENERO MICRURUS EN ESTADO DE CAUTIVERIO EN NILO CUNDINAMARCA (COLOMBIA).
3. EQUIPO DE DOCENCIA O INVESTIGACIN (Personas que manipularn los animales de este proyecto)
Nombre Institucin Investigador Estudiante Posg. Estudiante de Preg. Cargo SINDY MONJE BELMONTE CONVENIO UNIAMAZONIA Y PROBIOL
X
X Investigador principal
MARTA GMEZ C. LABORATORIOS PROBIOL S.A.
X
Director Proyecto de Investigacin
3.1 EXPERIANCIA EN USO DE ANIMALES DEL GRUPO QUE TRABAJAR EL PROYECTO:
5.1.2 CARGO: DIRECTORA PROYECTO, DIRECTORA DE INVESTIGACIN Y DESARROLLO, LABORATORIOS PROBIOL S.A.
5.2.1 NOMBRE: FERNANDO IGNACIO ORTZ SUREZ
5.2.2 CARGO: JURADO CALIFICADOR, PROFESOR ASOCIADO, UNIVERSIDAD DE LA AMAZONIA. 112 112 5.3.1 NOMBRE: GLORIA ELENA ESTRADA
5.3.2 CARGO: JURADO CALIFICADOR, PROFESORA ASOCIADA, UNIVERSIDAD DE LA AMAZONIA.
6 DURACIN ESTIMADA DEL TIEMPO DE TRABAJO CON ANIMALES DE LABORATORIO: UN MES.
7 ANIMALES REQUERIDOS:
Especie Cepa Edad Sexo Peso Cantidad Procedencia Mus Musculus Exocriada 20 - 30 (das) H* M* 17 19 (gramos) Bioterio de la Universidad Nacional Mus Musculus Exocriada 30 40 (das) H* M*
20 22 (gramos) Bioterio de la Universidad Nacional H: Hembras M: Machos *Las pruebas de Dosis Letal Media y Dosis Efectiva Media se realizaron con biomodelos de la especia Mus musculus sin diferenciacin de sexo.
8 PROCEDIMIENTO DE TIPO : TERMINAL:_X__ AGUDO:____ CRNICO:____
9 CATEGORA DE LAS MOLESTIAS* Menores:_____ Moderadas:______ Severas:__X__
10 CATEGORIA DE INVASIVIDAD*
A:____ B:____ C:____ D:____ E:__X_
*Ver categorizacin correspondiente en ASPECTOS A CONSIDERAR EN EL MANEJOS DE ANIMALES DE LABORATORIO EN PROYECTOS DE INVESTIGACIN
SEGUNDA PARTE
1. SINTESIS DE LOS OBJETIVOS DEL PROYECTO O DE LA PRCTICA:
1.1 OBJETIVO GENERAL
Determinar la dosis letal media (DL 50 ) de cinco especies de la familia Elapidae, gnero Micrurus, mantenidas en cautiverio en el Parque Recreacional y Zoolgico de Piscilago en el Municipio de Nilo, Departamento de Cundinamarca (Colombia).
Evaluar la efectividad por medio de la (DE 50 ) del Lote Piloto AC-005 de suero antiofdico antielapdico producido por Laboratorios Probiol frente a los venenos de las cinco especies de Micrurus sp.a evaluar:
113 113 2. LA SIGUIENTE INFORMACIN SERA DE UTILIDAD PARA FACILITAR EL DESARROLLO DE LAS TAREAS QUE UD HA PROPUESTO REALIZAR, POR ELLO LE SOLICITAMOS DILIGENCIARLA EN SU TOTALIDAD Y DAR A CONTINUACIN LOS DETALLES PERTINENTES:
Para la realizacin de las pruebas requiere inmovilizar a su animal?
Si:__X__ No:_____
Si su respuesta es afirmativa, que tipo de inmovilizacin har? Qu mtodo usar y que duracin tendr?
La inmovilizacin que se le di a los Biomodelos de la especie Mus musculus, es manual para proceder a inocular las diluciones de veneno Micrrico el Lote Piloto de Suero Antiofdico Anticoral AC 005. La duracin de la inmovilizacin es de 1 minuto aproximadamente.
Realizar procedimientos invasivos?
Si:__X__ No:_____
Si su respuesta es afirmativa, de que tipo, frecuencia y duracin sern estos procedimientos? Cules son los efectos clnicos esperados durante ellos? Igual si su respuesta es negativa.
El procedimiento de invasin es la Inoculacin Va Intraperitoneal de Dosis Letal 50 de Veneno Micrrico y Dosis Efectiva 50 del Lote Piloto AC -005 de Suero Antiofdico Anticoral; una vez inoculados los Biomodelos se dejan en observacin por 24 48 horas post-inoculacin. Los efectos clnicos esperados en la Dosis Letal Media es que muera el 50% de la poblacin inoculada con Veneno Micrrico, utilizando la Metodologa de Laboratorios Probiol S.A de Colombia. Los efectos clnicos esperados en la Dosis Efectiva Media es que sobreviva el 50% de la poblacin inoculada con Veneno Micrrico neutralizado con el Suero Antiofdico AntiElapdico Lote Piloto AC 005 producido por Laboratorios Probiol S.A., utilizando la Metodologa del Instituto Clodomiro Picado de Costa Rica.
El animal ser sometido a algn tipo de privacin?
Si:_____ No:__X___
Si esto es previsible, de que tipo, duracin, frecuencia y dems sern y que se espera como efecto clnico?
Los biomodelos utilizados no tendrn ningn tipo de privacin en las condiciones ambientales experimentales; los principales factores ambientales que puedan afectar a los animales sern constantes, ya que los cambios en el ambiente experimental producirn cambios en el modelo animal, lo que conlleva al aumento de la variabilidad de los resultados, de lo contrario las pruebas se invalidan.
Le sern administrados al animal algn tipo de agentes qumicos o biolgicos?
Si:__X__ No:_____ En caso de que su respuesta sea positiva, qu tipo de agentes usar, qu dosis suministrar, que vas y frecuencias emplear y que efectos clnicos espera?
114 114 A los Biomodelos les sern administrados un agente de tipo Biolgico; en la prueba de Dosis Letal Media se inocula una dosis por nivel, cada nivel utiliza cinco ratones de Veneno Micrrico por Va Intraperitoneal esperando que muera el 50% de la poblacin inoculada y en la Prueba de Dosis Efectiva Media se inocula una dosis por nivel, cada nivel utiliza cinco ratones de Veneno Micrrico neutralizado con Suero Antiofdico Anticoral (Medicamento de tipo Biolgico a base de inmunoglobulinas equinas, producido por Laboratorios Probiol S.A. Las dosis son administradas por Va Intraperitoneal, esperando que sobreviva el 50% de la poblacin inoculada. Ambas pruebas se mantienen en observacin por 24 48 Horas post-inoculacin.
Para la realizacin del experimento o prctica recurrir al empleo de agentes anestsicos?
Si:__X__ No:_____
En caso de que su respuesta sea positiva, Qu tipo de agentes usar, qu dosis suministrar, qu vas y frecuencia emplear y qu efectos clnicos espera?
Luego de realizar los registros pertinentes en cada una de las pruebas de potencia y seroneutralizacin realizadas, los ratones que sobrevivieron se les aplic el mtodo de eutanasia con Enflurano por Va Respiratoria (Anestesia general), los efectos clnicos esperados son la muerte por hipoxia de los ratones sobrevivientes.
Describa a continuacin el tipo de manejo que requerir su animal o grupo de animales en cuanto a dietas, antibiticos, cuidados especiales, etc.
Los Biomodelos fueron mantenidos en Cajas de acero inoxidable tipo Bioterio, en condiciones ambientales constantes, controlando los principales factores ambientales durante toda la experimentacin, Climticos (temperatura, humedad, ventilacin), Fisicoqumicos (iluminacin; ruido, presencia de contaminantes, cama), Habitaciones (Jaulas de tipo Bioterio), Nutricionales (dietas, agua y esquema de administracin).
Enumere el nombre o nombres de las personas que se encargarn de stos cuidados especiales en los animales durante el desarrollo del proyecto o prctica:
1. Sindy Monje Belmonte. 2. Marta Gmez Cabal. En caso de presentarse dolor durante los procedimientos, qu medidas se utilizarn para aliviarlo?
El Veneno Micrrico utilizado induce efectos tpicamente neurotxicos, produciendo un bloqueo postsinptico de los receptores colinrgicos de la placa motora. Este veneno se esparce rpidamente por los tejidos y bloquea los receptores de acetilcolina en los msculos, observndose a las 24 48 horas postinoculacin una parlisis muscular o la muerte. Los modelos que sobreviven se les aplic el Mtodo de Eutanasia por Hipoxia.
Qu mtodo de eutanasia se llevar a cabo al final del procedimiento? Quin lo realizar?
Al final del procedimiento a los biomodelos sobrevivientes se les aplic el Mtodo de Eutanasia por Hipoxia; finalmente todos los biomodelos se incineran.
115 115 TERCERA PARTE ALTERNATIVAS
Existe algn mtodo alternativo o de reemplazo que no involucre el uso de animales en trabajos como el que usted propone?
Si:_____ No:__X___
No, porque solo la Prueba Dosis Letal Media es aceptada por la Organizacin Mundial de la Salud, y es la prueba empleada rutinariamente en laboratorios dedicados a la evaluacin de la toxicidad aguda en diferentes pases; as como la Prueba de Dosis Efectiva Media en la evaluacin de la potencia neutralizante de los sueros antiofdicos comerciales.
CUARTA PARTE
Riesgos para el personal o para la poblacin del Bioterio
_____Sin Riesgo _____Radiactivos _____Qumicos _____Cancergenos __X__Biolgicos: El personal manipulador de los biomodelos en el bioterio tiene riesgo biolgico al auto inocularse con el veneno Micrrico empleado en las Pruebas de Dosis Letal Media y Dosis Efectiva Media. __X__Riesgo Potencial: La auto inoculacin del Biolgico en evaluacin puede acarrear la muerte del personal manipulador de los Biomodelos, sino es tratado a tiempo con Suero Antiofdico Anticoral Polivalente producido por Probiol S.A.
QUINTA PARTE
IDENTIFICACIN DE LAS PERSONAS QUE SE PUEDEN CONTACTAR EN CASO DE EMERGENCIA:
Suministre los datos de una persona a quien se pueda recurrir en caso de algn imprevisto durante el experimento o prctica y de un nombre alternativo con el mismo fin:
PARA USO DEL COMIT INSITITUCIONAL DE CUIDADO Y USO DE ANIMALES DE LABORATORIO
_________________________________________ Firma del Investigador Principal y Responsable
116 116
III. LEY No. 84 DE 1.989. POR EL CUAL SE ADOPTA EL ESTATUTO NACIONAL DE PROTECCIN DE LOS ANIMALES
CAPTULO SEXTO DEL USO DE ANIMALES VIVOS EN EXPERIMENTOS E INVESTIGACIN
ARTICULO 23: Los experimentos que se llevan a cabo con animales vivos, se realizarn nicamente con autorizacin previa del Ministerio de Salud Pblica y slo cuando tales actos sean imprescindibles para el estudio y avance de la ciencia, siempre est demostrado:
a) Que los resultados experimentales no puedan obtenerse por otros procedimientos o alternativas.
b) Que las experiencias son necesarias para el control, prevencin, el diagnstico o el tratamiento de enfermedades que afectan al hombre o al animal.
c) Que los experimentos no puedan ser sustituidos por cultivo de tejidos, nodos computarizados, dibujos, pelculas, fotografas, video u otros procedimientos anlogos.
ARTICULO 24: El animal usado en cualquier experimento deber ser puesto bajo los efectos de anestesia lo suficientemente fuerte para evitar que sufra dolor.
Si sus heridas son de consideracin o implican mutilacin grave, sern sacrificados inmediatamente al trmino del experimento.
ARTICULO 25: Se prohbe realizar experimentos con animales vivos, como medio de ilustracin de conferencias en facultades de medicina, veterinaria, zootecnia, hospitales o laboratorios o en cualquier otro sitio dedicado al aprendizaje, y con el propsito de obtener destreza manual.
Los experimentos de investigacin se llevarn a cabo nicamente en los laboratorios autorizados previamente por las autoridades del Ministerios de Salud Pblica y el Decreto 16080 de 1.978 en lo pertinente.
Tambin se prohbe el uso de animales vivos en los siguientes casos expresamente:
a) Cuando los resultados del experimento son conocidos con anterioridad.
b) Cuando el experimento no tiene un fin cientfico y especialmente cuando est orientado hacia una actividad comercial.
c) Realizar experimentos con animales vivos de grado superior en la escala zoolgica la indispensable, segn la naturaleza de la experiencia.
ARTICULO 26: Para todo experimento con animales vivos deber conformarse un comit de tica.
El Ministerio de Salud Pblica no autorizar la realizacin de experimentos con animales vivos sino cuando est conformado el mismo, que est integrado por no menos de tres (3) miembros, uno de los cuales deber ser veterinario del Instituto Colombiano Agropecuario, el segundo deber pertenecer a la autoridad administradora de los recursos naturales; el tercero deber ser representante de las sociedades protectoras de animales. Los miembros del comit de tica sern designados por sus respectivas entidades a solicitud del experimentador. El gobierno nacional reglamentar la forma de proveer las representaciones de las sociedades protectoras de animales y su junta coordinadora nacional, que tendr tres miembros por un periodo de dos aos. Las 117 117 representaciones de las sociedades protectoras de animales en los comits de tica sern ad- honorem. Todo comit de tica ser responsable de coordinar y supervisar:
a) Las actividades y procedimientos encaminados al cuidado de los animales.
b) Las condiciones fsicas para el cuidado y bienestar de los animales.
c) El entrenamiento y las capacidades del personal encargado del cuidado de los animales.
d) Los procedimientos para la prevencin del dolor innecesario incluyendo el uso de anestesia y analgsicos.
e) el cumplimiento de los prescrito en los Artculos 24 y 25 de esta Ley.
El director de un experimento en el que se vayan a utilizar animales vivos, queda obligado a comunicar al comit de tica, la naturaleza de los procedimientos que vayan a emplearse con los animales, el nmero y tipo de los mismos, las alternativas al uso de animales y las fuentes y naturaleza de los fondos de investigacin.
En el sitio en el cual un comit de tica tenga razones para creer que se est violando esta Ley o que se violar, o que se est violando, ordenar lo siguiente, segn sea pertinente:
a) Suspensin del experimento.
b) Sacrificio del animal cuando se le haya causado enfermedad o lesin incurable.
PARAGRAFO: Son deberes de los comits de tica:
a) Reunirse trimestralmente.
b) Hacer inspecciones por lo menos cuatro (4) veces al ao a las reas de estudio de animales de cada laboratorio y a los centros de experimentales, de las cuales rendirn un informe a las autoridades competentes y a la entidad administradora de los recursos naturales.
c) Revisar durante las inspecciones a los centros experimentales o de estudio las condiciones de manejo y el control del dolor en los animales, para establecer si se cumplen los requisitos sealados en la presente Ley.
De todas las actuaciones el Comit de tica se rendir informe a las entidades empleadoras del funcionario.
La violacin de lo dispuesto en cualquiera de los artculos del captulo quinto de esta Ley acarrear al experimentador pena de multa de cincuenta mil ($50.000,oo) a quinientos mil ($500.000,oo) pesos.
118 118 ANEXO C. CARACTERISTICAS GENERALES DE LOS BIOMODELOS
1. ESPECIE: Mus musculus
Nombre Vulgar
Peso Al Nacer (g) Edad al Desmame (das) Peso al Desmame (g) Edad a la Pubertad (das) Peso Adulto (g) Longevidad promedio (aos) Productividad Cras/Madre/Ao Nmero Cromosomas (2n) Ratn Blanco 1 - 2 19 - 21 10 - 12 35 25 - 30 1 - 2 50 - 100 40
2. DATOS DE CRIA Y REPRODUCCIN *
Nombre Vulgar
Edad Reproductiva Rango Hembra-Macho
Ciclo Sexual Duracin (das)
Receptividad Sexual Duracin
Gestacin Media y Rango (das)
Tamao de la Camada
Periodo Reproductivo ptimo Ratn Blanco 6s 4 - 5 10 20 h 20 19 - 21 6 - 12 7 8 m * h = Horas s = Semanas a = Aos d = Das m = Meses
3 PARAMETROS FISIOLGICOS Y NUTRICIONALES *
Nombre Vulgar
Temperatura Rectal ( C0.5) Rata Respiratoria Mnima (x y Rango) Rata Cardiaca Mnima (x y Rango) Agua Requerida (Diaria) (ml) Orina Excretada (Diaria) (ml) Comida Requrida (Diaria) (g) Ratn Blanco 37.5 138 90 - 180 470 300 - 650 3 - 7 1 - 3 3 6 *VALORES PROMEDIO Y RANGOS EXTRAIDOS DE LA LITERATURA PARA ANIMALES ADULTOS JOVENES
4 PRUEBAS DE SERONEUTRALIZACIN
4.1 PESOS DE LOS BIOMODELOS
Prueba de Potencia Peso* Dosis Letal Media (DL 50 ) 17 19 g / ratn (Mus musculus) Dosis Efectiva Media (DE 50 ) 20 22 g / ratn (Mus musculus) * El peso de los Biomodelos en gramos por ratn blanco.
24 Horas /5 /5 /5 /5 /5 /5 48 Horas /5 /5 /5 /5 /5 /5 *Los resultados se anotan en un nmero fraccionario, donde el numerador es el nmero de ratones muertos y el denominador es el nmero de ratones inoculados por dilucin.
3. PESOS DE LOS BIOMODELOS
Prueba de Potencia Peso* Dosis Letal Media (DL 50 ) 17 19 g / ratn (Mus musculus) * El peso de los Biomodelos en gramos por ratn blanco.
4. GRUPO CONTROL
4.1. No. Ratones inoculados
CONTROL POSITIVO Solucion madre (1:1) CONTROL NEGATIVO Solucion salina0,9% 24 Horas 0/5 0/5 48 Horas 0/5 0/5 * Los resultados se anotan en un numero fraccionario donde , el numerador es el nmero de ratones muestros y el denominador es el numero de ratones inoculados. Si el control positivo sobreviven uno o mas ratones la prueba se invalida. Si el control negativo se produce una o mas ratones la prueba se invalida
24 Horas /5 /5 /5 /5 /5 /5 48 Horas /5 /5 /5 /5 /5 /5 *Los resultados se anotan en un nmero fraccionario, donde el numerador es el nmero de ratones muertos y el denominador es el nmero de ratones inoculados por dilucin.
3. PESOS DE LOS BIOMODELOS
Prueba de Potencia Peso* Dosis Letal Media (DL 50 ) 17 19 g / ratn (Mus musculus) * El peso de los Biomodelos en gramos por ratn blanco.
4. GRUPO CONTROL
4.1. No. Ratones inoculados
CONTROL POSITIVO Solucion madre (1:1) CONTROL NEGATIVO Solucion salina0,9% 24 Horas 0/5 0/5 48 Horas 0/5 0/5 * Los resultados se anotan en un numero fraccionario donde , el numerador es el nmero de ratones muestros y el denominador es el numero de ratones inoculados. Si el control positivo sobreviven uno o mas ratones la prueba se invalida. Si el control negativo se produce una o mas ratones la prueba se invalida
121 121 ANEXO E. FORMATO PRUEBA DOSIS EFECTIVA (DE 50 )
2. PROTOCOLO DE DOSIFICACION PARA LA DETERMINACION DE LA (DE 50 )
Experimento No. mL veneno (1mg/ml)
mL Solucin Salina mL Antiveneno Relacin g Veneno/1ml Antiveneno
24 Horas
48 Horas 1 0.3 1.2 3.0 100 /5 /5 2 0.3 2.7 1.5 200 /5 /5 3 0.3 3.2 1.0 300 /5 /5 4 0.3 3.45 0.75 400 /5 /5 5 0.3 3.60 0.6 500 /5 /5 CONTROL (+) 0.3 4.2 ---- Control /5 /5 *Los resultados se anotan en un nmero fraccionario, donde el numerador es el nmero de ratones vivos y el denominador es el nmero de ratones inoculados por dilucin.
3. PESOS DE LOS BIOMODELOS
Prueba de Potencia Peso* Dosis Letal Media (DL 50 ) 20 22 g / ratn (Mus musculus) * El peso de los Biomodelos en gramos por ratn blanco.
122 122
ANEXO F. MATERIALES
1. Recursos Biolgicos:
1.1. Agua de Cicloproceso
Agua destilada, grado inyectable, libre de pirgenos, empaquetada en ampollas de 10 mililitros, utilizada para diluir el Suero Antiofdico.
1.2. Suero Antiofdico
Se utiliz el Lote Piloto AC 005 de Suero Antiofdico Antielapdico Polivalente Liofilizado producido por Laboratorios Probiol S.A.
1.3. Solucin Salina Estril
Se utiliz Solucin Salina Estril al 0.9%, en la preparacin de las diferentes diluciones que se inocularon en los biomodelos, debido a que es una solucin isotnica (es decir que tiene la misma concentracin molecular que el plasma sanguneo, manteniendo la misma presin osmtica sin alterar los resultados obtenidos en las diferentes pruebas realizadas), distribuidas en frascos de 500 ml.
1.4. Veneno Elapdico
Se utilizaron venenos de serpientes corales de las siguientes cinco especies* en estudio:
* Lotes de veneno suministrados por el Doctor Jairo Maldonado, Bilogo del Serpentario del Parque Recreacional y Zoolgico de Piscilago en Nilo (Cundinamarca).
2. Recursos no Biolgicos:
Balas con tapa MICOTAINER Brand Tubes. Lote: 4285895 (5). Exp. 2008.
Cinta de enmascarar tesa Belersdort S.A Colombia. Bajo Tecnologa de BDF.
Incubadora 37 C E & Q EQUIPOS. Ref: IAA-9. Serial: 1027. WATT 100. V.A.C: 110. A.A Bogot, Col. 075954.
123 123 Incubadora EDEL STAHL Rost frei memert No. 854. Schwabach W. Germany. Typ. U10. F Nr 880 994. V: 110. Hz: 50160. W: 1400. DIN 12880 K1.0. Nenntemp: 220 C. Schutzart DIN 40050 IP20.
Jeringas de 1ml RYMCO Estril para insulina U 100 276 x 12 x 0.4mm. REG. MINSALUD: COLOMBIA V 000438 R1. Lote: 2003472. VAL: DIC / 2.008.
Jeringas de 10 ml RYMCO Estril de 216 x 11/2 40 x 0.8 mm. REG. MINSALUD: COLOMBIA V 0000438. Lote: 2003103. VAL: ABR / 2.008.
Micropipeta de 500 l BIOHT PRO y puntas amarillas.
Micropipeta de 100 l BRAND Transferpette y puntas azules.
Pipetas de 1 ml SUPERIOR W. GERMANY DIN. Tol. 0.01. 1ml: 0.01. Ex. 20 C.
Pipetas de 2 ml. 2 IN 1/10. CORNING USA Reusable No. 97085. TD. 20 C.
Pipetas de 5 ml. 5 IN 1/10. PIREX. USA Reusable No. 7065. TD. 20 C.
Pinzas de Material Quirrgico. Germany Sfainless.
Sofware SPEARMAN KARBER, Mtodo Estadstico No Paramtrico.
Viales limpios con tapn de caucho.
124 124
ANEXO G ANLISIS ESTADSTICOS PARA DETERMINAR LA DL 50 Y DE 50
Anlisis de regresin y anlisis Probit Para el clculo de los DE 50 y DL 50 generalmente se usa el anlisis Probit. En un experimento tpico de pruebas de toxicidad aguda se tiene la siguiente situacin: Concentracin de la sustancia o dosis (d). Nmero de individuos (n). Nmero de organismos muertos o afectados (r). Porcentaje de efecto (p).
La representacin grfica de p vs. d, o relacin dosis-respuesta, genera una curva parablica que muchas veces presenta dificultades en la construccin de un modelo lineal. Una forma de abordar este problema es transformando d a una escala logartmica (X = log10(d), lo cual mostrar una relacin dosis-respuesta de forma S o sigmoidea normal,de esta manera la distribucin de p vs. X ser de tipo normal. Posteriormente, mediante las tablas de Probit se transforma p (porcentaje de efecto) a unidades probit (buscando en una tabla de distribucin normal el valor de z correspondiente a una probabilidad acumulada igual a p y sumndole a continuacin cinco unidades), se obtiene una distribucin de puntos en un sistema bivariado de tipo lineal, los cuales se procesan segn un anlisis de regresin tpico. Vale la pena enfatizar que el Probit es una transformacin sobre la tasa de efecto (p), y la ecuacin generada es de la forma:
Donde:
125 125 Para facilitar los clculos, simplemente se puede usar un software como el Simfit Versin 5,6 edicin 7 El procedimiento Probit permite encontrar estimadores m-verosmiles de parmetros de regresin y de tasas naturales (por ejemplo, tasas de mortalidad) de respuesta para ensayos biolgicos cuantales, analizando porcentajes de efecto vs. dosis dentro del marco de la regresin.
Prueba Estadstica Spearman Karber : Aspecto Terico y Explicacin
El mtodo de Spearman-Krber es un mtodo aproximado, no paramtrico, que proporciona una buena estimacin de la media y la desviacin estndar. Si la distribucin es simtrica, se obtiene una estimacin de la concentracin total mediana (CL50/CE50/CI50). Se utiliz la prueba de distribucin t student y el mtodo de Spearman Karber, aceptado por la Organizacin Mundial de la Salud para determinar la validez de los experimentos realizados en la determinacin de la dosis letal media de cinco especies del gnero Micrurus, tcnica estandarizada por Laboratorios Probiol S.A.
Clculo de la dosis letal Media por el mtodo Spearman Karber
m = X 100 +/- d/n (r n / 2) m = logaritmo DL 50
X 100 = logaritmo del nivel donde la dosis ms dbil de veneno causa el 100% de mortalidad. n = nmero de ratones utilizados en cada dilucin r = nmero de ratones que mueren en cada dosis d = valor constante (logaritmo de intervalo de clase) = sumatoria de ratones muertos por nivel desde X 0 a X 100 incluyendo los dos valores extremos (X 0 representa el logaritmo de la dosis ms alta que no produce ninguna muerte).
Clculo de los lmites de confianza DL 50
El clculo de los lmites de confianza para la dosis letal media se utiliz la siguiente frmula:
V(m) = D 2 / n 2 (n 1). [r (n r)]
Se tomaron valores aproximados de intervalos de confianza al 95%, los siguientes valores: m +/- t 0.05 V(m), t. 0.05, teniendo un valor apropiado para E (n 1) grados de libertad, donde los grados de libertad se evalan como la suma de los niveles que provocan la muerte de los ratones entre el 0 100%, estando estos dos valores extremos excluidos.