UNIVERSIDAD VALLE DEL GRIJALVA

POTABILIZACION Y TRATAMIENTO
ING. JESUSALEJANRO JIMENEZ MORALES
REVISION DE LA MICROBIOLOGIA DEL AGUA.
INGENIERIA CIVIL
RICARDO LEY TONDOPO
SEPTIMO SEMESTRE
TUXTLA GUTIERREZ CHIAPAS A 19 DE AGOSTO DE 2014
El agua y la contaminacin
El agua qumicamente pura es un lquido inodoro e inspido; incoloro y transparente en
capas de poco espesor, toma color azul cuando se mira a travs de espesores de 6 a 8 m,
porque absorbe las radiaciones rojas. A la presin atmosfrica normal (760 mm Hg), el punto
de congelacin del agua es 0C y su punto de ebullicin de 100C. El agua alcanza su
densidad mxima a una temperatura de 4C y se expande al congelarse.
El agua dulce que se utiliza proviene de dos fuentes: agua superfcial y agua subterrnea
(mantos freticos), se encuentra en ros, lagos, pantanos y rebalses o depsitos artifciales. Las
cuencas hidrolgicas o colectoras, tambin llamadas cuencas de captacin, son aquellas reas
de tierra que captan y llevan el agua de escurrimiento hasta las denominadas masas de agua
superfcial. El agua que fuye por la superfcie de la tierra hasta los cuerpos o masas de agua
en la superfcie se le conoce como escurrimiento superfcial y al agua que fuye por los ros
hasta los ocanos se le denomina escurrimiento fuvial. Se considera que el 69% del agua que
llega a los ros en toda la Tierra proviene de la lluvia y de la nieve derretida en sus cuencas, y el
agua restante proviene de descargas de agua subterrnea. Las cuencas fuviales, alimentadas
en gran parte por la lluvia, ocupan el 60% del rea de tierra frme y sustentan al 90% de la
poblacin mundial.
Cualquier sociedad civilizada debe considerar el suministro de agua potable como una
prioridad. Esto es as, porque el agua potable es una necesidad bsica para el desarrollo
humano, salud y bienestar. Un suministro adecuado de agua potable es, universalmente
reconocido como una necesidad humana bsica. Sin embargo, millones de personas en el
mundo en desarrollo no tienen fcil acceso a un suministro de agua adecuado y seguro.8
Con el cambio climtico, el crecimiento demogrfco y la escasez de agua, hay una
creciente necesidad de gestionar recursos hdricos de manera sostenible. En todo el mundo 1,1
millones de personas carecen de acceso a suministros adecuados de agua y ms an por la
gran demanda de afuentes de agua dulce en el mundo. Muchos de los grandes ros,
especialmente en las regiones semiridas, han reducido signifcativamente el fujo y captacin
de agua subterrnea, resultando en un descenso de los niveles freticos en numerosas
regiones. Desde una perspectiva de salud pblica, el acceso a cantidades sufcientes de agua
limpia y potable es una cuestin crucial. A pesar del hecho de que las grandes cantidades de
agua dulce estn disponibles en muchas regiones del mundo, el agua potable sigue siendo un
recurso limitado.
Calidad del agua
Calidad del agua, es un trmino usado para expresar apropiadamente el sustento del
uso del agua para varios procesos. La calidad del agua es uno de los principales problemas en
el tema del agua y su mejora es una de las principales preocupaciones. El agua purifcada se
utiliza como el componente principal en soluciones para dilisis peritoneal en hospitales, en
soluciones de nutrientes (alimento infantil), lquidos enterales, preparados en el hospital para
administrar a nios y pacientes dbiles que no pueden comer alimentos slidos regulares. La
contaminacin puede afectar a todo el proceso en la industria farmacutica o el medio ambiente
de un nosocomio. Aunque el agua potable es apta para el consumo humano, esto no garantiza
que cuente con la calidad sufciente para ser utilizada en instalaciones industriales, equipos,
preparacin de medicamentos, alimentos, cosmticos, materiales qumico farmacuticos, o
unidades de los centros de salud para la limpieza y lavado de semi-reas crticas o dispositivos
anteriores a la aplicacin de los procedimientos de desinfeccin o esterilizacin. Por esta razn,
cada planta industrial o farmacutica relacionada con los productos de salud debe contar con
adecuados sistemas de purifcacin de agua, lo que le permite satisfacer sus necesidades
particulares, especialmente en cuanto a los problemas relacionados con el almacenamiento y
distribucin interna. Este procedimiento debe garantizar el suministro de agua de acuerdo con
el volumen requerido y de conformidad con los puntos crticos exigidos de calidad.
Los sistemas de control de calidad de agua estn diseados para obtener informacin
cuantitativa sobre la distribucin temporal y espacial de la calidad del agua y, por tanto, las
variables sobre las propiedades fsicas, qumicas y biolgicas de los recursos hdricos.10 La
proteccin y salvaguardia de la calidad del agua, se encuentran entre las prioridades ms
importantes a causa de las implicaciones para el medio ambiente y la salud humana en las
zonas donde puede haber contacto directo o indirecto (ingestin, aerosol o inhalacin lquida,
contacto con la epidermis, etc.) con los patgenos.11 Entre los mtodos existentes, la deteccin
y conteo de bacterias indicadoras de base es la tcnica utilizada en el monitoreo de la calidad
del agua.
Contaminacin del agua
Las fuentes de contaminacin del agua pueden ser naturales o artifciales, la
contaminacin natural es generada por el ambiente, y la artifcial por las actividades
humanasLa importancia que ha cobrado la calidad del agua ha permitido evidenciar que entre
los factores o agentes que causan su contaminacin estn: agentes patgenos, desechos que
requieren O2, sustancias qumicas orgnicas e inorgnicas, nutrientes vegetales que ocasionan
crecimiento excesivo de plantas acuticas, sedimentos o material suspendido, sustancias
radioactivas y el calor.
El acceso al agua potable es esencial para alcanzar una buena salud en la poblacin. Las
enfermedades diarreicas causa un estimado de 1,8 millones de muertes cada ao en todo el
mundo, y estas enfermedades se han relacionado con el acceso limitado a agua potable. Existe
una gran preocupacin respecto al origen de la contaminacin microbiana durante la
manipulacin y el almacenamiento de agua en los pases en desarrollo. La desinfeccin y
almacenamiento seguro del agua de los hogares mejora la calidad del agua potable y con ello
la prevencin de enfermedades.
El agua natural puede contener una gran variedad de microorganismos patgenos,
bacterias, virus y protozoos. El principal origen de estos microorganismos patgenos son las
heces humanas y de otros mamferos de sangre caliente. Estos microorganismos fecales se
introducen en los ambientes de agua dulce, principalmente mediante la liberacin de efuentes
de aguas residuales, las aguas superfciales de escorrenta y la lixiviacin de suelos. Para
determinar la calidad microbiolgica del agua se utilizan indicadores bacterianos de
contaminacin fecal.15 Patgenos, tales como Bacillus cereus, Clostridium botulinum y Listeria
monocytogenes se encuentran en el mismo entorno de los vegetales, mientras que los agentes
patgenos entricos (Escherichia coli (E. coli) y Salmonella spp) pueden contaminar los
vegetales, si el estircol del animal o el agua de riego estn contaminados. Algunas bacterias
tienen como hbitat natural el agua, como por ejemplo: Flavobacterium spp, Pseudomonas spp,
Acinetobacter spp, Moraxella spp. Chromobacterium, Achromobacter spp y Alcaligenes spp, as
como, numerosas bacterias ya identifcadas.
La contaminacin microbiana de los suministros de agua potable puede tener graves
consecuencias para la salud de los consumidores, y este hecho se ha puesto de manifesto
dramticamente en los ltimos dos incidentes ocurridos en Canad, Walkerton, Ontario y North
Battleford, Saskatchewan.
Los contaminantes qumicos del agua potable pueden ser plomo, cadmio, nitrato, nitrito
y N-nitrosaminas, que son potencialmente nocivos para el hombre. Tambin, se ven implicados
el excremento humano y la falta de higiene personal y domstica en la propagacin de muchas
enfermedades infecciosas como: clera, febre tifoidea, hepatitis, poliomielitis, criptosporidiosis,
ascariasis y esquistosomiasis. En Kenia, las enfermedades diarreicas afectan a los hijos de los
residentes.8 La contaminacin fecal en los sistemas de agua potable se ha agudizado en los
ltimos aos de lugares recreativos y riego con patgenos emergentes, tales como Giardia,
Cryptosporidium y E. coli 0157: H7, entre otros.18
Escherichia coli
E. coli, es la especie bacteriana ms comnmente aislada en los laboratorios clnicos y
ha sido incriminada en enfermedades infecciosas que involucran tejidos y rganos humanos, es
uno de los organismos comunes involucrados en sepsis y en shock inducido por endotoxinas.
Las infecciones del tracto urinario y de heridas, neumona en pacientes hospitalizados
inmunosuprimidos y meningitis en neonatos son otras formas comunes de infeccin causadas
por E. coli. Ciertas cepas de E. coli pueden causar enteritis o gastroenteritis por mecanismos
diferentes que provocan cinco sndromes clnicos distintos. Es un bacilo Gram (-), mvil,
facultativo, oxidasa (-), reductor de nitratos, no esporulado, fermenta la glucosa con produccin
de cido y gas, presenta tres antgenos: somtico O; fagelar H; y de superfcie K.20 E. coli, es
miembro predominante de la fora intestinal humana.21 Los seres humanos sanos suelen llevar
ms de un billn de clulas de E. coli en sus intestinos. E. coli fue introducida a los laboratorios
hace casi un siglo para convertirse en uno de los organismos modelo ms importantes y con
mucho, es el procarionte ms estudiado.22
Los grupos de Shigella y E. coli diarreognica (DEC) tienen forma variable de causar
diarrea, dependiendo de la ubicacin geogrfca y del estado inmunitario del husped.
Recientemente, se han aislado e identifcado cepas de DEC por el mtodo reaccin en cadena
de la polimerasa (PCR) de la superfcie del agua de ros en la ciudad de Dhaka en Bangladesh,
por lo que se determin que la DEC es el principal problema de salud en Dhaka.24 Con su
amplia gama de patologas, E. coli es causa importante de morbilidad y mortalidad humana en
todo el mundo.22 Las cepas patgenas intestinales pertenecen a los prototipos: E. coli
enterohemorrgica (EHEC), EPEC, E. coli productora de la toxina Shiga (STEC), EIEC, ETEC y
E. coli de adherencia difusa (DAEC).18
E. coli enterotoxgenica (ETEC)
Las cepas de ETEC, forman enterotoxinas termolbiles (TL) o termoestables (TE) que
producen una diarrea secretoria similar a la que causa Vibrio cholerae. La unin superfcial de
las clulas bacterianas a las clulas del epitelio intestinal es un requisito para la produccin de
toxina. La produccin de toxinas esta mediada por plsmidos y con frecuencia involucra
serogrupos de E. coli: 08, 015, 020, 025, 027, 063, 078, 080, 085, 092, 0115, 0128ac, 0139,
0148, 0153, 0159, 0167. La infeccin con las ETEC, sigue usualmente a la ingestin de agua o
alimento contaminado.
Las ETEC, son la causa principal de deshidratacin por diarrea entre los bebs en
destete en los pases en desarrollo. Estos nios tenan de dos a tres episodios de ETEC, cada
uno en los 2 primeros aos de vida, lo que representa ms del 25% de todas las enfermedades
diarreicas y los resultados se estiman en unas 700.000 muertes cada ao. La ETEC, es ahora
reconocida como un problema de salud mundial.23
E. coli enteropatgena (EPEC)
Las cepas de EPEC, causan sndromes diarreicos principalmente en lactantes. La
patogenia no es clara; sin embargo, las reacciones infamatorias y los cambios epiteliales
degenerativos que se observan en cortes de tejido pueden ser secundarios a las propiedades
adhesivas de las bacterias, que se cree que estn relacionadas con plsmidos. Los sero grupos
055, 086, 0111, 0119, 0126, 0127, 0128ab, y 0142 estn comnmente involucrados. Las
manifestaciones clnicas de las son febre, malestar, vmitos y diarrea, con poca sangre y una
cantidad importante de moco.23
Las EPEC, son responsables de la diarrea peditrica prolongada y constituye una
amenaza importante para la salud en pases en desarrollo, mientras que la EHEC causa brotes
espordicos pero mortales de colitis hemorrgica y sndrome urmico hemoltico en Europa,
Amrica del Norte, y Japn. Tanto la EPEC como la EHEC, causantes de diarreas, colonizan la
mucosa intestinal y producen una caracterstica histopatolgica en las microvellosidades de los
enterocitos que forman el "borde de cepillo", conocidos como cuadro de adhesin y borrado del
enterocito, esta alteracin resulta de la accin de un grupo de protenas efectoras que se unen
a las clulas husped a travs de un sistema de secrecin tipo III codifcada por una isla de
patogenicidad conocida como locus cromosmico LEE.25
E. coli enteroinvasiva (EIEC)
Las cepas EIEC, son capaces de penetrar las clulas del epitelio y producen una
diarrea infamatoria, similar a la causada por especies de Shigella. Como con Shigella, la
mayora de las especies son inmviles, fermentadoras tardas de la lactosa o no fermentadoras
y anaerognicas. Se sospecha de cepas EIEC cuando se observa sangre, moco y neutrflos
segmentados en extendidos de materia fecal. Los serogrupos ms comnmente involucrados
son 028ac, 029, 0112, 0124, 0136, 0143, 0144, 0152, y 0164. Los mecanismos patognicos
incluyen invasin de la mucosa del colon, similar a Shigella, y proliferacin dentro de las clulas
epiteliales, que culminan en muerte celular.23
E. coli enteroadherente (EAEC)
La EAEC, es un trmino usado para describir cepas de E. coli que son adherentes a las
clulas Hep-2 o Hela, no producen enterotoxinas TL, TE o verotoxina (VT) y son no invasivas,
independientemente de los serogrupos. Las cepas EAEC producen diferentes patrones de
adherencia a las clulas de los tejidos. Un patrn se caracteriza por la formacin de pilas de
bacterias que se observan tanto en clulas Hep-2 y en cubreobjetos. Las cepas que producen
este patrn de adherencia se mencionan como EagEC. Hasta la fecha, estas cepas han sido
recuperadas principalmente en nios con diarrea crnica.23
E. coli enterohemorragica (EHEC)
Las cepas EHEC producen diarrea, probablemente secundaria al dao por toxina a las
clulas del endotelio vascular. Dado que estas cepas son citotxicas para clulas Vero, la toxina
es denominada por algunos autores como VT y las cepas que la producen como E. coli
productoras de VT. Otros investigadores se referen a esta toxina como toxina semejante a
Shiga (SLT).23 Un tema importante con la terapia emprica es que algunos episodios de diarrea
bacteriana se deben a la STEC, de diversas maneras a que se refere en la literatura como
STEC, EHEC y VTES. Hay ms de 100 serotipos de STEC que causan enfermedades en los
seres humanos; los serotipos importantes incluyen E. coli O157: H7, O111: NM, y O26: H11.
Las cepas pueden producir toxina Shiga 1 (Stx1), Stx2, las variantes de stx1 o stx2, o toxinas
mltiples.20La Stx, representa el factor principal de virulencia en cepas de STEC, y han sido
reconocidas las toxinas Stx1 y Stx2, que son similares en actividad biolgica, pero distintas
inmunolgicamente. Varios subtipos de Stx2 se han identifcado por la homologa en su
secuencia y reactividad inmunolgica cruzada.
TCNICAS PARA LA DETECCIN DE CONTAMINACIN FECAL
La presencia de microbios patgenos en agua potable es un riesgo signifcativo para la
salud de los consumidores. La mayora de las bacterias en los sistemas de distribucin de agua
potable estn asociadas con las biopelculas que crecen en la superfcie interior de las tuberas,
incluso bajo condiciones de elevada o baja velocidad en la conduccin de agua de bajo o alto
cizallamiento, dependiendo de las necesidades de caudal de la red. Al evaluar el riesgo de la
contaminacin microbiana en agua potable, es crucial obtener resultados confables
rpidamente. Tradicionalmente, las bacterias patgenas son detectadas a travs de cultivo, ya
que no requieren equipo especial, y las bacterias detectadas con estos mtodos son viables y
activas, ello signifca que los mtodos de cultivo tienden a subestimar el nmero real de
bacterias que son capaces de causar infecciones. El segundo inconveniente es que, el tiempo
requerido para los resultados pueden variar desde 1 da hasta varias semanas para los
diferentes microorganismos debido a las diferencias en las tasas de crecimiento (micobacterias
de crecimiento lento).
Hay varios estudios que muestran que los microbios patgenos oportunistas pueden
sobrevivir ms tiempo y tienen mayor resistencia al cloro cuando se presentan en las
biopelculas, ms que en el agua potable. En las biopelculas, el suministro de nutrientes para
las bacterias es mejor, y las bacterias estn protegidas contra la desinfeccin. Adems, los
virus pueden adherirse a las biopelculas y seguir siendo infecciosos durante mucho tiempo.
Indicadores de contaminacin de tipo fecal
Las bacterias indicadoras se utilizan con frecuencia como el identifcador de la fuente
de contaminacin fecal y/o organismos indicadores de contaminacin en el agua. Los
coliformes totales (CT), coliformes fecales termotolerantes (CF), E. coli, enterococos y bacterias
se utilizan como IOS para vigilar la calidad del agua y as, la evaluacin de la salud, ya que es
mucho ms fcil y menos costoso para detectar y cuantifcar
los agentes patgenos. La deteccin de patgenos es difcil porque las bacterias y los virus
pueden estar asociados con ciertos materiales en particular.
Tcnicas tradicionales
Frecuentemente, el indicador de E. coli se prefere para el recuento de coliformes, es un
buen indicador del riesgo sanitario asociado con agua contaminada. Mtodos aprobados y
utilizados tradicionalmente para el recuento de E. coli en agua, se basan en el cultivo,
incluyendo la siembra mltiple en tubos de fermentacin, o mtodo de fltracin por membrana,
seguido de incubacin en medios selectivos.15 Comparando, el recuento de los IOS con los
mtodos de cultivo tradicionales tiene el tiempo de deteccin como limitante sustancial, pues
puede ser tan amplio como 72 h desde el inicio del anlisis. Los mtodos ms rpidos se basan
en la deteccin de la actividad de una enzima en particular y no necesitan seguir los pasos de
confrmacin de los aislamientos. La directiva europea sobre agua potable defne la norma ISO
9308-1 (2002) como un mtodo de referencia para la deteccin de E. coli y coliformes. El
mtodo prescribe el uso de agar lactosa con Tergitol. Los pasos de confrmacin son
necesarios con el fn de discriminar coliformes y E. coli.32
Pruebas Bioqumicas
Algunas pruebas bioqumicas y otros ensayos han sido utilizados para diferenciar E.
coli de otras enterobacterias. Indol, E. coli produce indol en caldo que contiene triptfano. Rojo
de metilo, esta prueba indica el pH fnal del cultivo en caldo con 0.5 % de glucosa despus de
una incubacin de 4 das a 37C. E. coli da un pH inferior a 4.5 y es por tanto, rojo de metilo
positivo. Citrato, el medio de citrato de Koser modifcado por Simmons contiene citrato de sodio
y azul de timol como indicador, la nica fuente de carbono es el citrato. Los microorganismos
que pueden utilizar el citrato como fuente de carbono se desarrollan bien y el indicador se
vuelve azul. Los dems microorganismos no prosperan y el medio conserva su color verde.
Voges-Proskauer, depende de la produccin de acetilmetilcarbinol a partir de la glucosa. En
presencia de un lcali este compuesto es oxidado a diacetilo y da color rosa.
E. coli, descompone carbohidratos con produccin de cido y gas; produce
aproximadamente igual cantidad de CO2 y de H2 a partir de la glucosa. Todos los cultivos
contienen variantes y mutantes estables con respecto a morfologa colonial (rugosa o lisa),
caractersticas antignicas, comportamiento bioqumico y resistencia a los virus.35 Debido a la
importancia que representa contar con tcnicas sencillas y confables para la determinacin de
microorganismos indicadores de la calidad sanitaria de los alimentos, se han desarrollado,
mtodos como el PetriflmMR donde se utilizan medios deshidratados como medio Bilis Rojo
utilizados para la identifcacin positiva de E. coli O157: H7 en una muestra. Sin embargo, estos
mtodos no detectan clulas viables y puede dar resultados falsos negativos.28
Violeta que contienen elementos nutritivos, una base gelifcante en agua fra, un indicador de la
actividad de glucoronidasa y un indicador qumico para el recuento de CT y E. coli.35
Metodologas instrumentales para anlisis de agua
La capacidad de detectar la contaminacin microbiana en el agua potable es un asunto
de preocupacin urgente para los servicios de agua y las autoridades de salud pblica. El
sistema de Colilert 18/Quanti-Traye se basa en el nmero ms probable y la tcnica es basada
en enzimas, es un ensayo semi-automtico reducido a multiwells. Se puede detectar
simultneamente coliformes y E. coli con una incubacin de 18-22 h.
Los mtodos basados en la biologa molecular, tales como el anlisis de productos por
PCR, dan datos precisos con respecto a la ocurrencia de las bacterias. Sin embargo, los
mtodos basados en ADN no demuestran la viabilidad de las bacterias, y los mtodos bsicos
son slo cualitativos y no cuantitativos. La fuorescencia de hibridacin in situ (FISH) se basa
en la unin especfca de sondas de cidos nucleicos a las regiones especfcas en el rRNA.29
Este mtodo tambin fue utilizado por Yang en el 2007 en el Norte de Taiwn.
En la actualidad, los mtodos basados en la biologa molecular se utilizan para las
investigaciones epidemiolgicas de brotes, control y seguimiento de la propagacin de
patgenos potenciales. La electroforesis de campo pulsado, es el mtodo biomolecular ms
utilizado para la subtipifcacin de cepas de STEC.26 Tradicionalmente, los mtodos por FISH
se basan en el uso de sondas de ADN de oligonucletidos convencionales que contienen
alrededor de 20 bases. Recientemente, los mtodos por FISH han sido desarrollados usando
sondas de pptidos de cidos nucleicos (PNA) marcados con fuorescencia, dirigidas a
secuencias de genes de rRNA blanco especfco. Las molculas de PNA son imitadores de
ADN, donde se sustituye la carga negativa de la columna vertebral de azcar-fosfato por una
columna vertebral aquiral, la columna vertebral neutral de poliamida formada por unidades
repetitivas de N-(2-aminoetil) glicina.29 Adems, se ha encontrado que las pruebas de PNA
penetran mejor a travs de la pared celular hidrofbica de los microorganismos ms que las
pruebas tradicionales de ADN. Los mtodos FISH PNA, confrman rpidamente la presencia de
diversas bacterias patgenas. Asimismo, Liu y colaboradores (2008), desarrollaron un mtodo
que podra detectar especfcamente un pequeo nmero de clulas de Escherichia cultivables
y viables pero no cultivables O157:H7 en un litro de agua del grifo, as como en el agua de ro.
Las bacterias diana capturadas fueron detectadas utilizando los genes rfbE y fiC como los
marcadores con la combinacin de RT-PCR y el mtodo electrnico de microarrays de ADN.
Este mtodo tambin demostr ser capaz de detectar clulas de E. coli O157: H7 viables pero
no cultivables en un litro de agua del ro.
Referencias
Revista QumicaViva - mero 3, ao 12, diciembre 2013 - quimicaviva@qb.fcen.uba.a