MATERIAL DE APOIO DIDTICO BIOQUMICA I PROF.

GUSTAVO
PROTENAS ALOSTRICAS: MIOGLOBINA E
HEMOGLOBINA
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Inicialmente vamos lembrar o que alosteria: um fenmeno que permite a modificao da
conformao e portanto da funo de protenas atravs da ligao de diversas substncias qumicas
em determinados locais daquelas molculas. Ou seja, a ligao de uma substncia A protena
interfere com a ligao subsequente da mesma substncia A, ou de outras molculas B, C,
etc.
Vamos reforar os conceitos de alosteria utilizando para isso a mioglobina e a hemoglobina,
duas protenas relacionadas evolutivamente e que foram as primeiras a ter sua estrutura tridimensio-
nal resolvida. Em virtude disso, o fenmeno da alosteria, presente em ambas, poder mais frente
tambm entender as enzimas alostricas.
At recentemente a alosteria era considerada uma propriedade restrita s protenas com es-
trutura quaternria; no entanto, a descoberta de protenas monomricas que apresentam tambm re-
gulao alostrica derrubou esse dogma.
A MIOGLOBINA
A Mioglobina e a Hemoglobina, evolutivamente relacionadas, so denominadas hemoprote-
nas por terem em comum um grupo prosttico
1
denominado Heme. Sua funo principal consiste no
transporte de oxignio, graas ligao reversvel desse gs. O que determina que essas protenas
liguem ou liberem o oxignio apenas a pO
2
2
do entorno; se for baixa, o gs liberado; se for ele-
vada, ele ligado.
A mioglobina, precursora evolutiva das hemoglobinas, uma protena monomrica (s tem
uma cadeia polipeptdica), achada primariamente no tecido muscular, no qual transporta o oxignio
que difunde desde os capilares at as mitocndrias. Em animais que fazem mergulho prolongado, a
alta concentrao dessa protena nos seus msculos permite que desempenhe tambm sua funo de
estocagem de O
2
.
A estrutura terciria da mioglobina tpica de uma protena globular, compacta, com 153 re-
sduos e oito segmentos de hlices alfa que compem 75% da sequncia, unidos por segmentos no
helicoidais (Figura 1).
1 Um grupo prosttico de natureza orgnica e interage fortemente com a protena; sem esse grupo, a protena no
tem a funo biolgica esperada
! p"! a presso parcial de o#ig$nio
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As hlices so dextrgiras
1
e designadas pelas letras A at H. Os resduos do interior so pre-
dominantemente hidrofbicos, enquanto os expostos superfcie so em geral hidroflicos, possibi-
litando a solubilizao da protena. Cada mioglobina possui um grupo prosttico ligado cadeia po-
lipeptdica, denominado Heme. O Heme tem um tomo de Ferro central na forma de Fe
2+
, respons-
vel pela ligao reversvel do O
2
(Figura 2).
1 % denominao de#trgira se refere ao giro da espiral da &lice, para a direita
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Figura 1. Molcula de Mioglobina, com a cadeia polipeptdica
e o grupo Heme (figura gerada pelo programa Pymol para Linux)
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O grupo Heme se localiza no interior de um bolso hidrofbico formado por cadeias late-
rais de resduos apolares que impede a entrada de gua, de forma a evitar a oxidao do Fe
2+
para
Fe
3+
. Se isso acontecer, a forma frrica no liga o oxignio, e temos a forma denominada meta-mio-
globina.
A ligao cadeia polipeptdica feita atravs de uma Histidina, chamada proximal, e a li-
gao do O
2
ocorre na sexta coordenao (veja a Fig. 4). Uma histidina, chamada distal, situa-se
prxima da molcula de O
2
, de forma a perturbar e enfraquecer a ligao Fe-O
2
. Se isso no aconte-
cesse, a ligao no seria desfeita quando cai a pO
2
no meio.
O monxido de carbono (CO) tambm se liga ao grupo Heme na forma Fe
2+
, porm com
uma afinidade muito maior do que o oxignio. Essa ligao, difcil de romper, parcialmente res-
ponsvel pelos efeitos txicos do CO.
Recentemente foi descrita a regulao da afinidade da mioglobina por O
2
pelo lactato,
o que torna a mioglobina uma protena alostrica monomrica. Sendo assim, a curva de liga-
o de O
2
hiperblica (no tem regulao alostrica homotrpica), porm apresenta modula-
o alostrica heterotrpica pelo lactato, o que causa uma diminuio da afinidade pelo oxig-
nio (desloca a curva de ligao pelo gs para a direita).

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Figura 2. Grupo Heme, um tetrapirrol coordenado a um tomo central de erro
(laran!a) (figura gerada pelo programa Pymol para Linux).
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A HEMOGLOBINA
A hemoglobina (Hb) adulta humana formada por um tetrmero simtrico constitudo por
duas cadeias alfa e duas beta (
2

2
) (veja a figura da primeira pgina). Sua funo primria efetu-
ar o transporte de oxignio dos pulmes para os tecidos, onde usado principalmente como aceptor
final de eltrons na cadeia respiratria mitocondrial. No caso de outros vertebrados, como os peixes,
a Hb tem uma estrutura semelhante, e os rgos de troca gasosa so as brnquias, e/ou outros, usa-
dos como respirao acessria (a exemplo de peixes da Bacia Amaznica).
As cadeias de hemoglobina originaram-se da mioglobina por duplicao gnica e evoluo
divergente ao longo de milhes de anos, tendo cada uma um padro de estrutura terciria semelhan-
te, e um grupo Heme igual ao da mioglobina.
O fato da hemoglobina possuir estrutura quaternria, d origem a propriedades no existen-
tes na mioglobina. A curva de ligao de oxignio ilustra as propriedades alostricas da hemoglobi-
na. Seu formato sigmoidal, tpico de protenas nas quais o substrato, neste caso o oxignio, um
efetor ou modulador positivo homotrpico
1
. Quando o oxignio se liga primeira subunidade da
desoxi-hemoglobina, o faz com baixa afinidade, porm aumenta a afinidade das cadeias remanes-
centes pelo gs. Ou seja, a segunda ligao facilitada, a terceira mais ainda, e a maior afinidade
ocorre para a ligao da quarta molcula. Na presso parcial de oxignio dos alvolos, a hemoglobi-
na saturada.
Na medida em que a hemoglobina, contida nos glbulos vermelhos, passa por capilares com
menor pO
2
, vai simultaneamente cedendo parte do seu O
2
e tendo sua afinidade reduzida. Isso asse-
gura que, na baixa pO
2
dos tecidos, especialmente o tecido muscular em exerccio, a hemoglobina
possa liberar o oxignio. Observe, na figura 3, que a curva de saturao da mioglobina hiperbli-
ca, caracterstica de protenas que no tm interao alostrica entre suas subunidades.
1 " prefi#o &omo usado para a interao alostrica na 'ual uma molcula (neste caso "!) interfere na ligao de
outras molculas iguais
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As propriedades alostricas da Hb surgem diretamente da interao do O
2
com o Fe do grupo
Heme, e os efeitos dessa interao sobre a estrutura quaternria da protena. Quando o O
2
se liga ao
tomo de Ferro, ele puxa esse tomo para dentro do plano do anel do grupo Heme. Como o Ferro
ligado Histidina proximal, a alterao transmitida para a cadeia polipeptdica da globina. As mu-
danas conformacionais na interface entre as subunidades levam a alteraes das interaes entre
elas. Essas mudanas incluem a quebra e formao de novas interaes fracas, contribuindo para
uma nova estrutura quaternria.
Veja, na figura abaixo, a ligao entre a histidina proximal e o grupo Heme, e como o tomo
de Fe est deslocado em relao ao anel. A ligao de O
2
causa seu alinhamento e puxa a cadeia
atravs da Histidina.
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Figura 3. Grfico de "atura#$o por oxig%nio da
mioglobina (a&ul) e da 'emoglobina ((ermel'o).
onte)
'ttp)**d+b.unl.edu*,eac'er*-.*/01*/01Lin2"*gr"er(.med.!'mi
.edu*3ra!*4e"earc'*Hemo*'emo.'tml
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Essas alteraes so transmitidas at o bolso de ligao do oxignio, causando uma facilita-
o da ligao do gs, ou seja, um aumento da afinidade.
A conformao de baixa afinidade da Hb denominada de Estado T (tenso), e predo-
mina na forma desoxigenada. Em contraste, a forma R (relaxada), de alta afinidade, predomi-
na no estado oxigenado Hb(O
2
)
4
.
A figura acima mostra o chamado modelo sequencial de alosteria, pelo qual a ligao de
molculas de oxignio por cada subunidade altera sua conformao e os contatos ou interaes com
as demais. Na medida em que a cada passo da oxigenao mais interaes entre as subunidades so
enfraquecidas pelas alteraes conformacionais, torna-se progressivamente mais fcil ligas as de-
mais molculas de O
2
.
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Figura 4. Liga#$o do grupo Heme 5 globina. onte)
indicada na figura.
Figura 5. 6 liga#$o de um 78 a cada "ubunidade da 'emoglobina aumenta progre""i(amente, a cada
pa""o, a afinidade da protena por oxig%nio (cooperati(idade). onte) 9io:umica de .tryer.
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A afinidade por O
2
regulada, tambm, pela ao de efetores heterotrpicos, que se ligam
a outros stios (no no grupo Heme). Praticamente todos tm afinidade maior pelo estado T, de for-
ma que o estabilizam. O resultado disso que a afinidade por O
2
diminui mais ainda. Como exem-
plos podemos citar: o CO
2
, prtons (H
+
), on cloreto (Cl
-
), e 2,3-BPG (2,3-bifosfoglicerato). Vejam
que neste caso esses moduladores interferem na ligao do O2, uma molcula diferente; da o nome
de heterotrpicos.
Na pO
2
elevada dos pulmes, h gs suficiente para se sobrepor ao efeito de diminuio da
afinidade dos efetores heterotrpicos. Durante a ligao de O
2
, as alteraes conformacionais de v-
rias cadeias laterais de resduos da Hb fazem com que sejam liberados prtons para o meio:

4
O
2
+ Hb <--------> nH
+
+ Hb(O
2
)
4
ou seja, a Hb se comporta como cido. Apesar de aumentar a [H
+
], isso no influencia a afinidade da
Hb, pelo pH elevado (7,4-7,5) e a alta pO2. A situao diferente nos tecidos, quando a pO2 e o
pH (~7,2) so mais baixos, e nesse caso, sim, favorecida a liberao do oxignio.
Considerando o que ocorre nos tecidos, percebemos claramente que o CO
2
, H
+
e Cl
-
tenham
como efeito a diminuio da afinidade por oxignio. As clulas produzem CO
2
como subproduto do
metabolismo, ele difunde rapidamente para o sangue, e entra na circulao. Dentro dos glbulos
vermelhos, uma enzima, a anidrase carbnica, hidrata muito rapidamente o CO
2
, de acordo com o
esquema:
CO
2
+ H
2
O --------> H
2
CO
3
------> H
+
+ HCO
3
-
(c. Carbnico) (Bicarbonato)
O bicarbonato difunde para fora da hemcia e levado pelo sangue at os pulmes (transpor-
te iso-hdrico).
Nos tecidos, os prtons dissociados do cido carbnico so ligados pela Hb (aqui agindo
como base), exercendo uma diminuio da afinidade por oxignio, e forando a liberao de mais
gs nos tecidos.
Nos pulmes a alta pO
2
permite a ligao do O
2
levando a Hb da forma T para a forma R, o
que causa a liberao dos prtons. Estes se combinam com o bicarbonato que vem dos tecidos, for-
mando c. Carbnico, que entra nos eritrcitos. Por reverso da reao, a mesma anidrase carbnica
forma CO
2
e H
2
O. O CO
2
liberado para os alvolos e depois eliminado pela expirao.
Entre 80 e 85% do CO
2
levado para os pulmes dessa forma, e o resto na forma ligada
Hb como carbamato nos resduos N-terminais (carbamino-Hb). Esta reao tambm libera prtons,
diminuindo o pH e contribuindo para a liberao do O
2
nos tecidos.
CO
2
+ Hb-NH
2
<-----> H
+
+ Hb-NH-COO
-
Nos pulmes a oxigenao da Hb induz a liberao dos prtons ligados a ela, o que reverte a
reao e o CO
2
liberado.
Como vimos acima, a conformao da Hb e a afinidade por O
2
so sensveis ao pH; esse
efeito denominado Efeito Bohr, no qual o decrscimo do pH induz a liberao do oxignio pela
diminuio da afinidade. A figura 6 mostra o efeito Bohr:
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Percebe-se, claramente, que a nvel dos tecidos, a diminuio do pH causa uma queda na sa-
turao sangunea, ou seja, a Hb responde a uma acidificao do sangue liberando mais O
2
.
Simultaneamente difuso do bicarbonato para fora dos eritrcitos, deve haver a migrao,
em sentido contrrio, de outro on, para manter a neutralidade eltrica. O cloreto desempenha esse
papel, e ao entrar diminui a afinidade da Hb por oxignio (veja a figura abaixo).
O processo contrrio ocorre quando a Hb oxigenada e o CO
2
eliminado.
O 2,3-bifosfoglicerato (2,3-BPG), derivado de um intermedirio da via glicoltica dentro dos
eritrcitos (o 1,3-bifosfoglicerato), um potente efetor alostrico. capaz de se ligar forma deso-
xigenada (T) da Hb, em uma cavidade formada no centro da molcula, entre as cadeias beta. Ao se
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Figura 6. ;feito do pH "obre a afinidade
por oxig%nio. onte) e"t indicada na figura.
Figura 7. tran"porte de /7
8
do" tecido" para o "angue, com o"
efeito" "obre a oxigena#$o
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ligar, estabiliza fortemente a conformao T de baixa afinidade. Veja a figura abaixo:
Na conformao T (desoxigenada), se forma uma cavidade que oferece cadeias laterais car-
regadas positivamente, possibilitando a ligao do 2,3-BPG, estabilizando o estado T e diminuindo
assim a afinidade. Na ausncia do 2,3-BPG, a oxigenao acontece mais facilmente.
Tal qual vimos com os prtons, o aumento da concentrao do 2,3-BPG favorece a transfor-
mao da forma R para a forma T, e diminui a quantidade de O
2
ligado Hb. As molculas de he-
moglobina que tm diferente composio em termos de subunidades, tm tambm diferenas nas
respostas alostricas ao 2,3-BPG. Por exemplo, a hemoglobina Fetal (HbF) liga 2,3-BPG com muito
menor afinidade do que a Hb adulta (HbA). Isso possibilita que a HbF tenha maior afinidade por O
2
,
e permita ao feto obter o gs da circulao materna, atravs da placenta.
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Figura 8. Liga#$o do 8,<=bifo"foglicerato 5 de"oxi='emoglobina, em "tio entre a" cadeia" beta.