colonia de ratas Wistar (Rattus norvegicus) del bioterio
del Laboratorio de Neurociencias y Comportamiento de la Universidad Industrial de Santander (UIS) Abstract. Biomedical research still depends on the use of living laboratory animal models. Mice and rats are the most common laboratory animals used in research and testing. Experimental re- sults from research performed with living laboratory animals may be aected by environmental conditions provided to breeding and maintaining of these animals and by infectious agents. A parasi- tological study was undertaken to determine the health status of Wistar/UIS rats maintained in the laboratory of Neurociencias y Comportamiento ; three parasitological methods were used for diagnosis: direct exam, and otation and McMaster camera. Te animals for this study were randomly distributed from each cage, the sample sizes was according to the size of the colony. Te pa- rasites detected were: Syphacia muris, Aspiculuris tetraptera, Giardia muris, Strongyloides sp., Heterakis sp., Balantidium sp., y Toxocara sp.; the prevalences of parasites detected in the investigated rat were: Syphacia muris: 86.06%, Aspiculuris tetraptera: 77.88%, Giardia muris: 21.15%, Strongyloides sp.: 6.73%, Heterakis sp.: 6.25%, Balantidium sp.: 1.44%, and Toxocara sp.: 0.96%. Endoparasite infections are wi- despread in the colony and multiple infections were common. Key words: parasitological methods, direct exam, otation, Mc- Master, prevalences. Resumen. Para la realizacin de este trabajo se utilizaron 208 ratas Wistar/UIS holoxnicas (Rattus norvegicus), 100 machos y 108 hembras mantenidas en el bioterio del Laboratorio de Neurociencias y Compor- tamiento de la adscrito a la Facultad de Salud de la Universidad Industrial de Santander. Para cada sujeto de estudio se registraron fechas de nacimiento y procesamiento de la muestra, peso del animal, consistencia y peso de la materia fecal y el sexo. A los animales de los sujetos de este estudio se les realiz la toma de muestra de la materia fecal realizando una leve presin sobre le regin perianal. La muestra de materia fecal recolectada fue pesada y, posterior- mente, se realiz el procedimiento de anlisis que incluy un examen directo para la determinacin de huevos y larvas por observacin en el microscopio ptico, examen de otacin por el mtodo de Sloss y recuento de huevos en la cmara de McMaster. Los datos obtenidos en el coproanlisis de cada sujeto de la investigacin fueron registrados en tablas de datos de Excel y, posteriormente, fueron analizados como parte del estudio descriptivo-objetivo de este trabajo. Por medio de los anlisis coprolgicos realizados mediante las tcnicas de examen directo, otacin y cmara de McMaster, se pudo determinar la presencia de los siguientes parsitos gastrointestinales en la materia fecal de las ratas Wistar/UIS albergadas en el bioterio del Laboratorio de Neurociencias y Comportamiento de la Facultad de Salud de la : Syphacia muris, Erwing Alexander Muoz Castellanos* * Universidad Cooperativa de Colombia. Trabajo de grado. Comit de Investigaciones en Ciencias Animales. Correo electrnico: cica01.mvz.bga@gmail.com Luis Gabriel Urrea Naranjo** ** Universidad Cooperativa de Colombia. Trabajo de grado. Comit de Investigaciones en Ciencias Animales. Correo electrnico: cica01.mvz.bga@gmail.com Vctor Arcila Quiceno*** *** Docente-investigador. Comit de Investigaciones en Ciencias Animales. Grupo de Investigacin en Ciencias Animales. Universidad Cooperativa de Colombia. Correo electrnico: cica01.mvz.bga@gmail.com Carlos Arturo Conde Cote**** **** Docente-investigador de la Universidad Industrial de Santander (UIS). Director del Bioterio (UIS). Director del Grupo Neurociencias y Comportamiento (UIS). Correo electrnico: cconde@uis.edu.co. Recibido: 15 de noviembre de 2008 Aceptado: 25 de noviembre de 2008 Survey of gastrointestinal parasites in the Wistar/UIS rats colony (Rattus norvegicus) maintained in the animal housin of the laboratory of Neurociencias y Comportamiento Universidad Industrial de Santander (UIS) Revista SpeiDomus Nro 10.indd 17 20/10/2009 01:52:09 p.m. 18 Determinacin de parsitos gastrointestinales en la colonia de ratas Wistar (Rattus norvegicus) del bioterio del Laboratorio de Neurociencias y Comportamiento de la Universidad Industrial de Santander (UIS) RE V I S TA S P E I DOMUS / VOLME N 5 / NME RO 1 0 / E NE RO - J UNI O DE 2 0 0 9 Aspiculuris tetraptera, Giardia muris, Strongyloides sp., Heterakis sp., Ba- lantidium sp. y Toxocara sp. Posteriormente, se determin la prevalencia de estos parsitos, encontrando as: Syphacia muris: 86,06%; Aspiculuris tetraptera: 77,88%; Giardia muris: 21,15%; huevos sin identicar: 8,65%; Strongyloides sp.: 6,73%; huevos de Heterakis sp.: 6,25%; larvas sin iden- ticar: 2,88%; Balantidium sp.: 1,44%, y huevos de Toxocara sp.: 0,96%. Este estudio describe tambin la prevalencia de cada uno de estos par- sitos por rango de edad, el poliparasitismo, la comorbilidad y un anlisis de la sensibilidad y especicidad de las pruebas diagnsticas utilizadas. Por otra parte, se realiz una matriz de correlacin de Pearson entre las variables involucradas en esta investigacin, que se ver ms detallada- mente en el anlisis de los resultados. Palabras clave: coproanlisis, examen directo, otacin, cmara de McMaster, prevalencia. a inuencias triviales, endgenas o exgenas. As, la sensibilidad biolgica de ratones y ratas, comprendiendo el 90% de los animales experimentales usados en todo el mundo, puede ser cambiada por factores genticos y numerosas inuencias ambientales, incluyendo factores fsicos, qumicos y microbianos (virus, bacterias, hongos, parsitos). La prevencin de infecciones naturales (fac- tores microbianos) en ratones, ratas y dems especies de biomodelos, tiene una importancia crucial para poder lograr una amplia gama de objetivos cientcos para los cuales estas especies son usadas. El desarrollo de animales libres de contaminacin microbiana ha permitido explorar las funciones sio- lgicas de la ora normal y los complejos mecanismos de su interaccin con el animal hospedador y con otros agentes microbianos. En este sentido, los animales de experimentacin denidos han sido un modelo para el estudio de enfermedades de origen microbiolgico y procesos relacionados con el sistema inmunolgico. El estado de salud de los biomodelos puede ejercer una profunda inuencia en los resultados experimentales. La nica manera de evitar los efectos negativos de las infecciones naturales, es mediante la erradicacin selectiva de agentes infecciosos para lograr un animal de calidad microbiolgica denida. Introduccin El progreso en las ciencias biomdicas ha conducido obligatoriamente a mayores y grandes renamientos en las tcnicas y metodologas cientcas. En los lti- mos aos, se ha hecho evidente que el renamiento es necesario para garantizar la calidad de los animales de laboratorio. La comunidad cientca ha reconocido cada vez ms que las enfermedades infecciosas en estas espe- cies cambian muchos resultados de las investigaciones. Lamentablemente, la literatura sobre este tema es bas- tante voluminosa, dispersa y a menudo muy confusa, como consecuencia de ello ha tenido un uso prctico muy pobre. Las investigaciones con animales de laboratorio en cualquier campo de la ciencia (biomdica principal- mente) dependen en ltima instancia de la aplicacin rgida de los principios del mtodo cientco y de los principios de control sanitario. La prctica apropiada de estos principios permite tomar datos conables y re- producibles, siendo estos objetivos clave para todos los experimentos con biomodelos, que permiten a la larga el progreso en las ciencias biomdicas. Los sistemas de vida de los biomodelos son no- tablemente complejos y, a menudo, estn sujetos a desviaciones grandes en la respuesta biolgica, debido Revista SpeiDomus Nro 10.indd 18 20/10/2009 01:52:09 p.m. 19 Er wi ng A. Muoz Cast el l anos, Lui s G. Ur r ea Nar anj o, V ct or Ar ci l a Qui ceno y Car l os A. Conde Cot e VOLME N 5 / NME RO 1 0 / E NE RO - J UNI O DE 2 0 0 9 / RE V I S TA S P E I DOMUS Estos animales deben ser protegidos sistemticamente del riesgo de infeccin. Por este motivo, las instalaciones modernas se disean como una compleja barrera fsica manejada con estrictos principios sanitarios, cuyo principal objetivo es el de la prevencin e identicacin de cualquier fuente de contaminacin (1). El efecto de los parsitos sobre el animal de experimentacin va desde muy leve hasta muy grave, dependiendo esto de la carga parasitaria del hospedador y el estado inmunitario del animal. Diversos estudios han demostrado el efecto de los parsitos y su in- uencia sobre los procesos experimentales, por ejemplo los nematodos afectan los estudios sobre nutricin, inducen la proliferacin de linfocitos T y B en bazo y ganglios linfticos; los animales parasitados no se pueden uti- lizar para establecer curvas de crecimiento ni pueden ser utilizados en estudios de comportamiento, entre otros. Para Spironucleus muris se demostr que altera la actividad de los macrfagos, altera la respuesta intrainmu- nitaria y convierte infecciones inaparentes en activas; para Giardia muris, incrementa la morbilidad de infecciones inaparentes por otros agentes infecciosos, interviene en todos los estudios en los que participe el sistema gastrointes- tinal. Como se mencion, todas estas interferencias han sido demostradas con procesos experimentales a lo largo de muchos aos (2). Los animales de la colonia del Bioterio del Laboratorio de Neurociencias y Comportamiento de la , se han mantenido durante muchos aos bajo ciertas condiciones de barrera y control sanitario, pero no se conoce si estos estn exentos de una carga parasitaria; como es sabido la infeccin no es sinnimo de enfermedad, sta simplemente indica la presencia de microorganismos que pueden ser patgenos, oportunistas o comensales, y es importante que los investigadores sepan que no es necesario que se presente la manifestacin clnica de una enfermedad causada por microorganismos para que se afecten los re- sultados experimentales y, dado que estos biomodelos son utilizados para procesos de investigacin cientca biomdica en el campo de la neurociencia y el compor- tamiento, se quiere estudiar cul es la carga parasitaria y qu especies de parsitos estn presentes en esta colonia y, posiblemente, dilucidar si ha habido interferencia en los resultados experimentales debido a estas (3). Materiales y metodologa Se tomaron muestras de materia fecal de 208 ratas Wistar/UIS (Rattus norvegicus), 100 machos y 108 hembras, provenientes del bioterio de la Facultad de Salud de la Universidad Industrial de Santander. Los animales fueron mantenidos bajo ciclos de luz/ oscuridad controlada (12 horas c/u, luz encendida a las 7 a. m. y apagada a las 7 p. m.) y en todos los casos se suministraron 15 gramos de alimento/animal/da, temperatura controlada 21 2 C, humedad relativa promedio 65-75%. La toma de muestra en todos los casos se realiz directamente del ano del animal. Las muestras fueron procesadas en el Laboratorio del Centro Mdico Quirrgico Veterinario de la Universidad Cooperativa de Colombia ( - ) ubicado en el kilmetro 2 va al mar nmero 1-63 y el Laboratorio de Neurociencias y Comportamiento de la adscrito al Departamento de Ciencias Bsicas de la Facultad de Salud de la Universidad Industrial de Santander, en la ciudad de Bucaramanga, direccin carrera 32 nmero 29-31, ocina 203. Las muestras fueron recolectadas de los animales de cada caja por medio de manipulacin directa, lo que permiti hacer la recoleccin de las heces directamente del ano impidiendo algn tipo de contaminacin con el lecho. Las muestras tomadas se recogieron en tubos de ensayo debidamente rotulados y se analizaron mediante tres mtodos: Examen directo Flotacin (Sloss) Cmara de McMaster Resultados Por medio de los anlisis coprolgicos (examen directo, flotacin, cmara de McMaster) realizados, se logr determinar la presencia de parsitos gastrointesti- nales presentes en la materia fecal de las ratas Wistar/ UIS albergadas en el Bioterio de la Facultad de Salud de la . Asimismo, se demostr que la infeccin parasitaria estuvo presente en la mayora de los animales investigados, hallando: Syphacia muris, Aspiculuris tetraptera, Giardia muris, Strongyloides Revista SpeiDomus Nro 10.indd 19 20/10/2009 01:52:09 p.m. 20 Determinacin de parsitos gastrointestinales en la colonia de ratas Wistar (Rattus norvegicus) del bioterio del Laboratorio de Neurociencias y Comportamiento de la Universidad Industrial de Santander (UIS) RE V I S TA S P E I DOMUS / VOLME N 5 / NME RO 1 0 / E NE RO - J UNI O DE 2 0 0 9 sp., Heterakis sp., Balantidium sp. y Toxocara sp.; de igual forma, se pudo establecer la prevalencia, el nivel de poliparasitismo y la comorbilidad, y se estim la sensibilidad, especificidad y valores pre- dictivos positivos y negativos de cada mtodo utilizado como gold standard. El resultado de las tres pruebas. Finalmente, se reali- z una descripcin comparativa por gnero y rangos de edad para la prevalencia de cada parsito. Parsitos gastrointestinales encontrados en ratas wistar/uis Figura. 1. Huevos de Aspiculuris tetraptera Figura. 2. Huevos de Syphacia muris Figura. 3. Larva de Syphacia muris eclosionando El anlisis de los datos mostr que la prevalencia de los parsitos en esta colonia es: Syphacia muris: 86,06%; Aspiculuris tetraptera: 77,88%; Giardia muris: 21,15%; huevos sin identi- car: 8,65%; Strongyloides sp.: 6,73%; huevos de Heterakis sp.: 6,25%; larvas sin identicar: 2,88%; Balantidium sp.: 1,44%, y huevos de Toxocara sp.: 0,96%. Grca 1. Prevalencia de parsitos en la colonia de ratas Wistar/UIS Fuente: Muoz y Urrea (2008) Grca 2. Prevalencia de parsitos por edades 40,00% 2,50% 31,25% 2,50% 2,50% 1,25% 1,25% 1,25% 7,50% 2,50% 7,50% 0,00% 5,00% 10,00% 15,00% 20,00% 25,00% 30,00% 35,00% 40,00% 45,00% 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 Fuente: Muoz y Urrea (2008) Tabla 1. Prevalencia de parsitos por edades Parsito Edad 3 meses 5 meses 10 meses Giardia muris 4,33 12,02 4,81 Syphacia muris 23,08 39,42 23,56 Aspiculares tretaptera 15,38 42,79 19,71 Toxocara sp. 0,00 0,48 0,48 Balantidium sp. 0,00 0,48 0,96 Heterakis sp. 0,00 0,00 6,73 Strongyloides sp. 0,00 0,00 6,73 Huevos no identicados 0,00 4,81 3,85 Larvas no identicadas 0,00 1,92 0,96 Fuente: Muoz y Urrea, 2008 0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 % G iardia m uris Syphacia m uris Aspicula ris tet rapt era H uevos d e To xocora sp. Balantidium sp. H uevos d e H eterakis sp. Strongylo ides sp. H uevos n o Identicados Larva s no I dentica das PARASITO PREVALENCIA % Revista SpeiDomus Nro 10.indd 20 20/10/2009 01:52:09 p.m. 21 Er wi ng A. Muoz Cast el l anos, Lui s G. Ur r ea Nar anj o, V ct or Ar ci l a Qui ceno y Car l os A. Conde Cot e VOLME N 5 / NME RO 1 0 / E NE RO - J UNI O DE 2 0 0 9 / RE V I S TA S P E I DOMUS Es importante resaltar que la mayor prevalencia est dada por los parsitos Syphacia muris, Aspiculuris tetraptera, Giardia muris; asimismo, puede verse que la prevalencia de parsitos es mayor en el rango de edad de cinco meses. Grca 3. Porcentaje de poliparasitismo en la colonia de ratas Wistar/UIS
Fuente: Muoz y Urrea (2008) Tabla 2. Porcentaje de poliparasitismo en la colonia de ratas Wistar/ UIS POLIPARASITISMO Nmero de individuos % P0 4 0.02 P1 44 0.23 P2 99 0.48 P3 37 0.18 P4 17 0.08 P5 2 0.01 P6 1 0.005 Fuente: Muoz y Urrea (2008) Por medio del anlisis descriptivo realizado, se pudo determinar el poliparasitismo, encontrando que la relacin entre dos parsitos fue la ms comn reportada en el 48% de los casos. El anlisis de los datos determin tambin el porcentaje de coexistencia de un parsito especco con otros parsitos. Tabla 3. Poliparasitismo y porcentaje de coexistencia parasitaria PARSITO %P0 %P1 %P2 %P3 %P4 %P5 Giardia muris 0,023 0,205 0,477 0,250 0,023 0,023 Syphacia muris 0,168 0,525 0,196 0,095 0,011 0,006 Aspiculares tretaptera 0,099 0,556 0,222 0,105 0,012 0,006 Huevos de Toxocara sp. 0,0 0,0 0,500 0,500 0,0 0,0 Balantidium sp. 0,0 0,0 0,33 0,667 0,0 0,0 Huevos Heterakis sp. 0,077 0,0 0,231 0,538 0,077 0,077 Strongyloides sp. 0,0 0,071 0,357 0,357 0,143 0,071 Huevos no identicados 0,0 0,167 0,33 0,389 0,056 0,026 Larvas no identicadas 0,0 0,167 0,50 0,167 0,167 0,00 Fuente: Muoz y Urrea (2008) Tabla 4. Nmero de casos de comorbilidad entre los diferentes parsitos reportados por el examen coprolgico Giardia muris Syphacia muris Aspicularis tetraptera Toxocara sp. Giardia muris 44 41 35 1 Syphacia muris 41 179 139 2 Aspicularis tetraptera 35 139 162 2 Toxocara sp. 1 2 2 2 Balantidium sp. 1 3 3 0 Heterakis sp. 4 10 12 0 Strongyloides sp. 3 11 14 0 Tabla 5. Porcentaje de casos de comorbilidad entre los diferentes parsitos reportados por el examen coprolgico Balantidium sp. Heterakis sp. Strongyloides sp. Giardia muris 1 4 3 Syphacia muris 3 10 11 Aspicularis tetraptera 3 12 14 Toxocara sp. 0 0 0 Balantidium sp. 3 1 0 Heterakis sp. 1 13 6 Strongyloides sp. 0 6 14 Fuente: Muoz y Urrea, 2008 0.00 0.05 0.10 0.15 0.20 0.25 0.30 0.35 0.40 0.45 0.50 % P0 P1 P2 P3 P4 P5 P6 NUMERO DE PARASITOS POLIPARASITISMOS % Revista SpeiDomus Nro 10.indd 21 20/10/2009 01:52:11 p.m. 22 Determinacin de parsitos gastrointestinales en la colonia de ratas Wistar (Rattus norvegicus) del bioterio del Laboratorio de Neurociencias y Comportamiento de la Universidad Industrial de Santander (UIS) RE V I S TA S P E I DOMUS / VOLME N 5 / NME RO 1 0 / E NE RO - J UNI O DE 2 0 0 9 Se aprecia en las tablas 4 y 5 la comorbilidad entre los diferentes parsitos reportados por el examen copro- lgico con distintas tcnicas (examen directo, otacin y cmara de McMaster). En la tabla 4, se reporta el nmero de casos y en la 5, su correspondiente porcentaje. La comorbilidad que ms se destaca, teniendo en cuenta el nmero de casos reportados (casillas amarillas tabla 4), es la presentada por los parsitos Giardia muris, Syphacia muris y Aspiculuris tetraptera, donde: Tabla 6. Porcentaje de comorbilidad entre diferentes grupos de parsitos encontrados en los animales muestreados Giardia muris Syphacia muris Aspicularis tetraptera Toxocara sp. Giardia muris 1,00 0,23 0,22 0,50 Syphacia muris 0.93 1,00 0,86 1,00 Aspicularis tetraptera 0,80 0,78 1,00 1,00 Toxocara sp. 0,02 0,01 0,01 1,00 Balantidium sp. 0,02 0,02 0,02 0.00 Heterakis sp. 0,09 0,06 0,07 0,00 Strongyloides sp. 0,07 0,06 0,09 0,00 Balantidium sp. Heterakis sp. Strongyloides sp. Giardia muris 0,33 0,31 0,21 Syphacia muris 1,00 0,77 0,79 Aspicularis tetraptera 1,00 0,72 1,00 Toxocara sp. 0,00 0,00 0,00 Balantidium sp. 1,00 0,08 0,00 Heterakis sp. 0,33 1,00 0,43 Strongyloides sp. 0,00 0,46 1,00 Fuente: Muoz y Urrea (2008) En el 93% de los casos en que se reportaba Giardia muris estaba acompaada de Syphacia muris. En el 78% de los casos que se report Syphacia muris estaba acom- paada de Aspiculuris tetraptera. En el 86% de los casos que se report Aspiculuris tetraptera estaba acompaada de Syphacia muris. Otro anlisis de los datos pretendi evaluar la sensibilidad y especicidad de las pruebas diagnsticas utilizadas. Discusin En relacin con los resultados arrojados por este estu- dio se puede mencionar que solo podran compararse con estudios de otros investigadores en lo que respecta a la prevalencia, ya que los otros anlisis descriptivos aqu realizados no se encuentran reportados en los artculos citados y revisados para la elaboracin de este estudio (4). En este sentido, los parsitos y las prevalencias de cada uno de ellos son similares a los reportados en otras investigaciones, en especial las altas prevalencias de los parsitos Syphacia muris y Aspiculuris tetraptera, hecho que puede ser debido a que los Nematodos tienen un ciclo de vida corto, lo que puede inducir la infeccin en un gran nmero de animales en breves perodos, en especial en las colonias mantenidas bajo condiciones convencionales (5). La dominancia y presencia de los parsitos depende de cmo coexistan en el interior de la rata, de modo que se favorezcan y benecien, generando un ambiente ptimo. Por esta razn, en escala de importancia, prevalencia y comorbilidad del parsito, Syphacia muris, Giardia muris y Aspiculuris tetraptera, cohabitan en mayora y en conjunto plenamente, a excepcin de Giardia muris. En menor escala se encuentran el Toxocara sp. (50%), Balantidium sp. (33,3%) y Heterakis sp. (61,5%), que se presentan tambin en escala baja en un 27%, llegando a ser parte, junto con los anteriormente nombrados, del control principal y riguroso de parsitos, por su apari- cin e importancia a diferente escala, dejando: Toxocora sp., Strongylodes sp. y Balantidum sp. como parte del control general (6). Por medio del anlisis descriptivo realizado, se puede determinar el poliparasitismo, encontrando que la relacin entre dos parsitos fue la ms comn repor- tada en el 48% de los casos de poliparasitismo. El anlisis de los datos determin tambin el porcentaje de coexistencia de un parsito especco con otros parsitos. Referencias 1. Baker DG. Natural Pathogens of Laboratory Mice, Rats, and Rabbits and Teir Eects on Research, Cli- nical Microbiology Reviews; 1998. pp. 231-66. 2. Boorman GA, Lina CZ y Nieuwerkerk HT M. Hexamita And Giardia As A Cause Of Mortality In Congenitally Tymus-Less (Nude) Mice; Clin. Exp. Immunol; 1973. pp. 15, 623-27. 3. Daniels CW y Belosevic M. 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