ASIGNATURA: PARASITOLOGIA I SEMESTRE 2008 INSTRUCCIONES Y RECOMENDACIONES PARA EL DESARROLLO DE LAS CLASES PRACTICAS 1. Las clases prcticas se desarrollarn en el Laboratorio de Parasitologa ubicado en el Local Central 3 Piso. 2. La asistencia del estudiante a la prctica es obli!"o#i! en el horario establecido, con una tolerancia para el ingreso de 5 minutos. Despus de este tiempo, se le consignar como inasistencia. $. l estudiante ingresar al laboratorio pro!isto del material "ue le #ue solicitado en #orma anticipada por la ctedra. %. La prctica ser desarrollada con a$uda de una %ua, la misma "ue ser entregada a un estudiante de cada grupo de prctica, una semana antes de su e&ecuci'n. &. Los estudiantes sern distribuidos en grupos de traba&o, teniendo en cuenta la disponibilidad de e"uipos, materiales $ reacti!os. '. l estudiante en el Laboratorio deber asumir las siguientes medidas de bioseguridad( - )sistir con mandil limpio, guantes $ mascarilla cuando el caso lo re"uiera. - *o beber, comer, #umar o aplicarse cosmticos durante el desarrollo de la prctica. - La!arse las manos con bastante agua $ &ab'n, cuando sea necesario. - +anipular las muestras biol'gicas ,heces, sangre, etc- con mucho cuidado, e!itando la contaminaci'n de su persona, compa.eros $ del ambiente de traba&o. - +ane&ar las pipetas de acuerdo con las instrucciones de la ctedra. D( )i)*)! +!)(#! (l (,"*-i!)"( lo ll(.!#/ -i#(0"!+()"( ! l! bo0!. - Depositar los desperdicios en una bolsa plstica desechable "ue la ctedra ubicar en una de las mesas de traba&o. )l #inali/ar la prctica, un integrante de cada grupo lo sellar $ lo desechar en el recolector de basura "ue se encuentra ubicado en el primer piso del local central. - De&ar la mesa de traba&o, los materiales $ e"uipos completamente limpios $ en orden. 1. C*!l2*i(# !.(#3! o 45#-i-! -( lo, (2*i4o, o +!"(#i!l(, -( l!bo#!"o#io6 ,(#/ -( ()"(#! #(,4o),!bili-!- -(l (,"*-i!)"(. L! 0/"(-#! ,( ()0!#!#/ -( 0o+*)i0!# -( i)+(-i!"o (,"( 7(07o ! l! i),"!)0i! #(,4(0"i.! 4!#! ,(# ,*b,!)!-o 4o# (l (,"*-i!)"(. ES8UEMA PARA LA ELA9ORACI:N DEL INFORME DE PRACTICA: 1 l estudiante presentar un 0n#orme por cada prctica reali/ada al ingresar a la siguiente prctica, el cual deber contener( A. EN LA HO;A DE PRESENTACI:N: - *ombre de la 1ni!ersidad - 2acultad a la "ue pertenece - *ombre de la asignatura - * $ 3tulo de la prctica - C'digo $ nombre del estudiante - *ombre del docente - %rupo $ 4orario de Prctica - 2echa de e&ecuci'n de la prctica - 2echa de presentaci'n de la prctica - 5emestre $ ).o )cadmico. 9. EN EL CONTENIDO: - 3631L7 D L) P89C30C) - 7:;30<75 ) D5)887LL)8 - =10P75 > +)380)L5 130L0?)D75 - 851L3)D75( a. numerar los mtodos de diagn'stico "ue utili/'. b. %ra#icar las obser!aciones reali/adas siguiendo las recomendaciones "ue se indican( - l tama.o de los es"uemas deben ser elaborados de acuerdo con el n@mero de aumento utili/ado. - Los es"uemas dibu&ados deben tener relaci'n con las caractersticas de los parsitos obser!ados, no se aceptar pegado de recortes, #otocopias o copias de imgenes de 0nternet. - 57L1C0A* DL C15307*)807. - 51%8*C0)5 - 828*C0)5 :0:L07%8920C)5( l alumno puede nombrar otras #uentes de in#ormaci'n, adems de las recomendadas en la %ua de Prctica-. PARASITOLOGIA I < 2008 PRACTICA N= 1 AME9AS INTESTINALES 2 COMPETENCIAS: - 0denti#icar a la Entamoeba histolytica, en su #ase de tro#o/oito $ "uiste. - 0denti#icar a las amebas comensales( Entamoeba hartmanni, Entamoeba coli $ Endolimax nana, en su #ase de "uiste. - +ane&ar adecuadamente los siguientes mtodos coproparasitol'gicos( +todo Directo con 5uero 2isiol'gico $ lugol. +todo de Concentraci'n por 2lotaci'n de 2aust. E8UIPOS Y MATERIALES( De la ctedra De los alumnos B +icroscopios binoculares B 3 Lminas portaBob&etos B %radillas B 3 Laminillas cubreBob&etos B 3ubos de ensa$o B 4eces humanas #rescas $ diarreicas. B Pipetas de CD ml B C pa"uete pe"ue.o de detergente B 5uero 2isiol'gico B E bolsas negras grandes para recolectar basura B 5oluci'n de Lugol B %uantes B 5oluci'n de sul#ato de /onc al 33.3F B +andil limpio B )plicadores de ca.a B 4eces conser!adas en 2ormol al CDF PROCEDIMIENTO( C. Entamoeba histolytica, agente etiol'gico de la amebosis, es uno de los proto/oarios pat'genos de ma$or importancia clnica "ue habita el intestino grueso del hombre. n su ciclo !ital presenta la #ase de tro#o/oito $ "uiste. T#o>o?oi"o o >!,( .(("!"i.!( <i!e en la lu/ intestinal $ en los te&idos. 5u tama.o !ara entre CD a GD Hm, con un promedio de C5 a ED Hm. s sensible a los cambios de temperatura $ a la desecaci'n, destru$ndose rpidamente en el medio eIterno. 8*i,"( o >!,( i)+@.il( s resistente a las condiciones des#a!orables del medio ambiente. 5u tama.o promedio es de CE a C5 m de dimetro. RELACION HOSPEDERO<PARASITO: Entamoeba histolytica puede !i!ir en la lu/ intestinal del portador sano sin causar lesiones. Cuando las produce, stas son ma$ormente ulcerati!as $ necr'ticas. Los lugares o #ocos primarios de in!asi'n son generalmente el ciego $ la regi'n del recto sigmoideoJ en algunos casos, puede in!adir secundariamente otros 'rganos produciendo la amebosis eItraintestinal. DIAGNOSTICO PARASITOLOGICO: l diagn'stico e identi#icaci'n del tro#o/oito se reali/a en heces #rescas disentricas utili/ando el +todo Directo con 5uero 2isiol'gico, $ del "uiste, en heces blandas o #ormadas empleando el +todo Directo con Lugol $ los +todos de Concentraci'n por #lotaci'n $Ko sedimentaci'n. l halla/go del "uiste en las heces ser reportado como L=uiste de Entamoeba histolytica / Entamoeba disparA, teniendo en cuenta "ue ambas especies, son mor#ol'gica $ estructuralmente indistinguiblesJ solo se pueden di#erencias utili/ado coproantgenos. O9SERVACI:N DEL TROFOZOITO DE Entamoeba histolytica METODO DIRECTO O EN FRESCO CON SUERO FISIOL:GICO( 5e procede de la siguiente manera( 3 - Colocar una o dos gotas de suero #isiol'gico en una lmina portaBob&etos. - )gregar una pe"ue.a cantidad de heces con un aplicador de ca.a $ homogeni/arla bien sin llegar a los bordesJ la transparencia de la muestra preparada debe permitir leer a tra!s de ella un papel impreso. - Cubrir la preparaci'n con una laminilla $ lle!arla al microscopio para su obser!aci'n con ob&eti!o de MDN. C!#!0"(#3,"i0!,: - 2orma !ariable. - +o!imiento progresi!o con emisi'n de seud'podos largos $ delgados cuando la ameba esta acti!a. - ctoplasma !isible, hialino, casi transparente. - ndoplasma #inamente granuloso con muchas !acuolas digesti!as. - 1n n@cleo !esicular, es#rico, con cariosoma central diminuto. - Presencia de inclusiones citoplasmticas ,!acuolas, hemates $ grnulos de gluc'geno-. La obser!aci'n de hemates en el endoplasma con#irma a la especie Entamoeba histolytica. O9SERVACI:N DE 8UISTE DE Entamoeba histolytica METODO DIRECTO CON LUGOL( l procedimiento es idntico al anterior, s'lo "ue, en !e/ de 5uero 2isiol'gico se utili/a Lugol. MBTODO DE FLOTACI:N Y CENTRIFUGACI:N DE FAUST( 5e utili/a la soluci'n de sul#ato de /inc al 33.3F con densidad de C.COD. Procedimiento( a. n un tubo de ensa$o de CD ml, preparar una suspensi'n #ecal con agua destilada $ aproIimadamente C gr de heces. b. Centri#ugar a E5DD rpm -*#!)"( 1 +i)*"o, desechar el l"uido sobrenadanteJ repetir el la!ado de la muestra hasta obtener un sobrenadante claro. c. Decantar el sobrenadante, agregar la soluci'n de sul#ato de /inc al 33.3F hasta la mitad del tubo, me/clar con el aplicador de ca.a. ).adir la misma soluci'n hasta aproIimadamente C cm del borde del tubo. d. Centri#ugar a E5DD rpm durante C minuto. 5 8C7+0*D) *7 P)8)8 C7* L)5 +)*75 L) C*38021%)D78). e. Colocar el tubo en una gradilla $ con una pipeta a.adir la soluci'n de sul#ato de /inc hasta #ormar en la super#icie un pe"ue.o menisco, cubrirlo con una laminilla $ de&arlo en reposo 5 minutos. #. 3rasladar la laminilla a una lmina portaBob&etos "ue contiene una gota de lugol $ eIaminar inmediatamente la muestra al microscopio a menor $ mediano aumento. Con ob&eti!o de MDN, obser!e 1d. las siguientes caractersticas del "uiste de Entamoeba histolytica / Entamoeba dispar: - 2orma generalmente es#rica con pared "ustica ntida. - Citoplasma #inamente granuloso. - *@cleo !esicular con cariosoma central punti#orme. - l =uiste inmaduro presente( 1no o dos n@cleos. 0nclusiones citoplasmticas( a- !acuola de gluc'geno con bordes di#usos. b- cuerpos o barras cromatoidales con eItremos romos. 4 - l =uiste maduro o 2)5 0*2C3)*3 tiene M n@cleos $ las inclusiones citoplasmticas estn ausentes. 1. AME9AS NO PATOGENAS DEL INTESTINO GRUESO: 4abitan la lu/ del intestino grueso, donde se alimentan generalmente de #ragmentos de heces $ de bacterias entricas. Presentan la #ase de tro#o/oito $ "uiste. n la prctica sern identi#icadas en la #ase de "uiste. a. Entamoeba hartmanni( s #recuentemente llamada Lpe"ue.a histol$ticaP por"ue comparte las mismas caractersticas mor#ol'gicas, a eIcepci'n del tama.o, "ue es menor. l tro#o/oito generalmente mide de O a CD m $ el "uiste de G hasta CD m de dimetro. b. Entamoeba coli( l tro#o/oito es de ma$or tama.o "ue E. histolytica. La emisi'n de seud'podos de bordes romos es lenta, el ectoplasma $ endoplasma es poco di#erenciado $ el n@cleo presenta un cariosoma grande de posici'n eIcntrica. C!#!0"(#3,"i0!, -(l 8*i,"(( - n!oltura "ustica ntida. - 2orma redonda u o!al con presencia de C hasta O n@cleos. - Cuerpos cromatoidales de eItremos agu/ados, !acuola de gluc'geno de borde poco de#inido $ de color caoba al te.irse con Lugol, en loa =uistes 0nmaduros. - Los =uistes +aduros presentan O n@cleos bien di#erenciados con cariosoma eIcntrico. c. Endolimax nana( l tro#o/oito es pe"ue.o ,de O a CDm-, el citoplasma presenta un estrecho ectoplasma claro $ un endoplasma #inamente granular $ !acuolado, el n@cleo con un cariosoma grande altamente re#ringente. Por su pe"ue.o tama.o generalmente son obser!ados en su #ase de "uiste "ue tiene las siguientes caractersticas( - 2orma o!oide, con un tama.o promedio de G a O m. - *@cleo con un cariosoma grande !isible, de posici'n central o eIcntrica. - l =uiste 0nmaduro presenta de C a E n@cleos pe"ue.os, re#ringentes, $ una !acuola de gluc'geno en el citoplasma. - l =uiste +aduro tiene M n@cleos bien di#erenciados. GRAFI8UE TODAS SUS O9SERVACIONES CUESTIONARIO: C. s"uematice en #orma eIplicati!a el ciclo !ital de Entamoeba histolytica. E. 0ndi"ue la #orma de preparaci'n del 5uero 2isiol'gico para el +todo Directo o en 2resco. 3. 0n!estigue por "u se recomienda no parar la centri#ugadora con las mano. M. n lo "ue respecta a Entamoeba histolytica, mencione 1d.( el estadio in#ectante, estadio pat'geno, $ estadio de diagn'stico. 9I9LIOGRAFIA )30)5, ). EDDE. Parasitologa +dica. C ed. Publicaciones +editerrneo. Chile. :)<8, P. $ col. EDDE. Parasitologa Clnica de Craig $ 2aust. 3 ed. dit. +.5.D. +Iico. 5