LEVADURA TUBO CON LACTOBACILLUS Piruvato con nitroprusiato + + acetaldehdo + - etanol + - cido lctico - +
La tabla muestra los resultados obtenidos en la determinacin de los productos formados por la fermentacin de la glucosa por accin de la levadura y el lactobacillus. DISCUSIN 1. DETERMINACIN DE PIRUVATO CON NITRO PRUSIATO DE SODIO. Se pueden cambiar las condiciones fisiolgicas para que la enzima piruvato descarboxilasa funcione a una velocidad muy por debajo de su actividad mxima, o se puede usar un agente como el nitro prusiato de sodio que atrape el intermediario y que forme un compuesto que no puede metabolizarse. La piruvato descarboxilasa no es activa en soluciones ligeramente alcalinas, de manera que el piruvato se acumula y su presencia puede demostrarse por la reaccin con nitro prusiato de sodio, entonces se desactiva la enzima piruvato descarboxilasa en solucin alcalina dbil, y de este modo el nitro prusiato de sodio reacciona con el piruvato formando un anillo de coloracin verde; en esta prueba nos dio positivo tanto para la levadura como para el lactobacillus. (*1) En esta reaccin se produce la transformacin de glucosa a piruvato, en condiciones anaerbicas junto con una pequea cantidad de energa en forma de ATP y NADH. Este proceso, se denomina glucolisis, es el proceso ms imprtante del metabolismo de carbohidrtos. De carcter anaerbico, esta ruta la utilizan tanto los organismos anaerbicos como los aerbicos para generar una pequea cantidad de energa en forma de ATP y NADH. En los aerbicos es la fase inicial para preparar a la glucosa en la produccin de energa extra va ciclo de cido ctrico y fosforilacin oxidativa. Esta ltima utiliza NADH como fuente de energa reductora para sintetizar ATP. Las enzimas responsables de la gluclisis se encuentran en el citoplasma celular. La va glucoltica consta de diez (10) reacciones catalizadas por enzimas, usando Glucosa como sustrato inicial. Se divide en dos etapas principales: Etapa I - primeras cinco reacciones; tienen como fin "activar" la glucosa. Es la etapa de inversin porque se consume energa (dos ATP). Etapa II - ultimas 5 reacciones que comienzan con gilceraldehdo 3- fosfto y culminan con piruvato, ambos metabolitos de 3 carbonos. Es la etapa de "ganancia" porque se recupera la inversin inicial de dos ATP y se ganan otros dos. (*2) (*3)
2. DETERMINACIN DE ACETALDEHDO En esta reaccin el cido pirvico es descarboxilado, por accin de la enzima piruvato descarboxilasa, producindose acetaldehdo. Esta reaccin da positiva en la levadura al tomar una coloracin azul, ya que esta reaccin da positivo para condiciones anaerobias que son las que siguen una fermentacin y se produce acetaldehdo, etanol, lactato, entre otros; en condiciones aerobias es resultado es negativo, porque el piruvato es transportado mediante una permeasa especfica al mitocondria, donde sufre una descarboxilacin oxidativa catalizada por el complejo multienzimtico piruvato deshidrogenasa que da origen a CH 3 -CO-CoA (acetil-CoA) que se degrada en el Ciclo de Krebs. (*1) Reaccin global de la gluclisis + Glucosa + 2NAD + + 2ADP + 2 2Piruvato + 2NADH + 2ATP + 2H + + 2H 2 O
3. DETERMINACIN DE ETANOL MEDIANTE SU OXIDACIN CON CIDO SULFOCROMICO A ACETALDEHDO. Los resultados de esta prueba dieron positivos para la levadura, presentndose un color verde, mientras que en lactobacillus se form un precipitado dando la prueba negativa. La oxidacin de un alcohol produce un compuesto carbonilico. Dependiendo del alcohol y del agente oxidante puede resultar que se obtenga un aldehdo, una cetona o un cido carboxlico; en nuestro caso un acetaldehdo. El etanol es un alcohol primario Por lo general es difcil obtener el acetaldehdo, porque la mayor parte de los agentes oxidantes que pueden oxidar al alcohol primario, tambin oxidan al aldehdo. El cido crmico oxida a un alcohol primario y llega hasta el cido carboxlico. Esquema general: paso 1- El cido crmico es protonado, casi de inmediato se rompe el enlace con el cromo para formar agua, la parte parcialmente positiva del cromo se une con la negativa del alcohol para formar un ster cromado:
paso 2- El agua se protona formando un in hidronio, se forma el doble enlace con el oxgeno para formar un aldehdo, el cromo se reacomoda para formar el ion cromito ms estable (*4)
4. DETERMINACIN DEL CIDO LCTICO. La fermentacin lctica es una ruta metablica anaerbica que se desarrolla en el citoplasma de la clula, en este proceso la glucosa se oxida parcialmente para obtener energa y acido lctico. El acido lctico se identifica en los sistemas D y Dm que siguen la ruta de la fermentacin lctica, dada la adicin de el lactobacillus proveniente del yogurt. El mtodo empleado para su determinacin colorimtrica, es la adicin de cloruro frrico (formacin de lactato ferroso que presenta una coloracin amarillo verdoso).
(*5) ESQUEMAS DE LAS REACCIONES DE FERMENTACION ALCOHOLICA Y LACTICA
(*5) Bibliografa (*1) A. Lehninger, D, Nelson y M. Cox. "Principios de bioqumica". Editorial Omega, 2000 (*2) http://www.verema.com/articulos/500449-levaduras-y-la-fermentacion-alcoholica-ii (*3) Ward, O.P. Biotecnologa de la fermentacin. Acribia, S.A. Zaragoza, 1991 (*4) Sanz Esteban, M.; Serrano Barrero, S.; Torralba Redondo, B. Biologa. Oxford University Press. Madrid, 2003. (*5) http://www2.uah.es/tejedor_bio/BBM-II_2F/T4-piruvato-pagina.pdf