MICROBIOLOGIA DE ALIMENTOS

RECUENTO DE STAPHYLOCOCCUS COAGULASA POSITIVA

M. Ximena. Yara A., Jesika A. Guaracas G., Edwin F. Murcia D.,
Bacteriloga docente, Paola Andrea Garca Rincn. Universidad de la Amazona
Avd. Circunvalar, Barrio el Porvenir, Florencia, Caquet, Colombia.
Recibido 17 de Septiembre de 2014
RESUMEN
Para la identificacin de Staphylococcus se tomo una muestra de jugo
Tropicalsimo y se realizaron diluciones en base 10 desde 10
-1
hasta 10
-4
,
posteriormente se realizo la siembra de superficie de cada dilucin y se
incubaron 8 das. El resultado de la prueba fue negativo debido a que el
producto no se encuentra contaminado.
Palabra Clave: ETAs
Toma de MX Llega al laboratorio
Fecha 29/08/14 Fecha 29/08/14
Hora 11:30 am Hora 11:00 am
Marca del producto Tropicalsimo
Sitio de toma

Remitente

Descripcin de la
muestra Cafetera Uniamazonia Flor y Caf
Tipo de empaque Bolsa
Tcnica de anlisis Recuento de Staphylococcus coagulasa positiva
Medio de cultivo Salado de Manintol
Tiempo de incubacin 8 das
Temperatura C 35C
Resultado obtenido No hubo crecimiento positivo de S. aureus.

INTRODUCCION
Los Staphylococcus son
microorganismos que viven en
constante relacin con el hombre y
la gran mayora de estos son
potencialmente capaces de causar
enfermedad. Staphylococcus aureus
es un microorganismo fcilmente
destruido por tratamientos trmicos
con altas temperaturas. Por lo cual
la presencia de esta bacteria o sus
toxinas en alimentos procesados o
en equipos, generalmente indica
contaminacin. (PRT-712.02-024.
2008.) Staphylococcus aureus es un
coco, Gram positivo, anaerobio
facultativo, inmvil, catalasa
positivo, generalmente coagulasa
positiva, no esporulado, mesfilo,
que se agrupa en racimos, de
colonia con pigmento dorado,
amarillo y a veces blanco. Para su
crecimiento requiere de
temperaturas entre 30 37C, Ph
entre 4,2 a 9,3, siendo el ptimo
entre 7,0 a 7,5; tolera
concentraciones de sal hasta del
10% y una actividad acuosa (aw)
mnima de 0,86. (A Martnez, M.
Prieto, F. Sampedro, N. Acosta, Y.
Gamboa J. Mantilla, M. Montoya, J.
Vsquez. 2011.)
OBJETIVOS
General
Determinar las condiciones en las
cuales se genera la activacin y
produccin de S. aureus.
Especifico
Identificar el nmero de UFC de S.
aureus. Presentes en la muestra de
alimento.
METODOLOGIA
Se toman 10ml de muestra liquida
(Tropicalsimo), se le adicionan
90ml de agua peptonada al 0.1%.
se prepara una dilucin tomando
1ml de la dilucin ya preparada y
se le adicionan 9ml de agua
peptonada al 0.1%, repetir proceso
hasta conseguir una dilucin 10
-4
.
Posteriormente con una pipeta
estril tomar 1ml de cada una de las
diluciones preparadas (10
-1
a 10
-4
),
realizar siembra en superficie en
agar salado de manintol. Incubar 8
das, realizar microscopia.
MARCO TEORICO
Las enfermedades transmitidas por
alimentos ETAs, llegan al cuerpo
por medio de los microorganismos,
por tener consecuencias directas en
la salud de las personas; son ms
conocidas como intoxicaciones
alimentarias (I. Perdomo, P.
Melndez 2004).
Las enfermedades de origen
alimentario, las cuales incluyen
intoxicaciones e infecciones, son
producidas por la ingestin de
alimentos o agua, contaminados en
cantidades suficientes con agentes
qumicos o microbiolgicos, debido
a la deficiencia en el proceso de
elaboracin, manipulacin,
conservacin, transporte,
distribucin o comercializacin de
los alimentos y agua. En Colombia,
segn la informacin registrada en
el Sistema de Vigilancia en Salud
Pblica (Sivigila) durante el ao
2009 se presentaron 899 brotes de
enfermedades transmitidas por
alimentos, de los cuales solo en el
56% se identific agente el
patgeno. Segn distribucin por
tipo de agente, el 18,4%
corresponde a la presencia de
Staphylococcus coagulasa positiva,
tanto en alimentos (79%), como en
muestras biolgicas (12,7%) y
superficies (8,5%); lo cual evidencia
que es la primera causa de brotes
de origen alimentario en el territorio
nacional. (A Martnez, M. Prieto, F.
Sampedro, N. Acosta, Y. Gamboa J.
Mantilla, M. Montoya, J. Vsquez.
2011.)
S. aureus es un microorganismo
que produce durante su desarrollo
la enzima coagulasa. Se desconoce
el mecanismo exacto y la estructura
qumica, pero se sabe que esta
enzima desempea cierto papel en
la coagulacin. Acta sobre algn
componente que se encuentra en el
suero para producir un cogulo o
trombo. In vitro, la coagulasa
aumenta la velocidad de
coagulacin del plasma; formando
un cogulo de fibrina.
Bacterias
Plasma Coagulo de fibrina
Coagulasa
(PRT-712.02-026 . 2011.)
RESULTADOS Y DISCUSION

Imagen 1 Tropicalsimo
El resultado de la prueba para
comprobar presencia de
Stahoylococcus aureus. Fue
negativa, demostrando as que es
un producto con una manipulacin
higinica.
Pero para identificar un producto
con Stahoylococcus aureus.
Positivo se realizo la prueba con
carne cruda.
Toma de MX Llega al laboratorio
Fecha 28/08/14 Fecha 29/08/14
Hora 5:00 pm Hora 11:00 am
Marca del
producto Carne cruda
Sitio de toma Jos Ramrez Calle 16 N13-01, Centro
Remitente Jos Ramrez
Descripcin
de la muestra
Fama la Caleita, sin refrigeracin, color
rojo-negruzco opaco
Tipo de
empaque No Posee // Colgada en ganchos
Tcnica de
anlisis
Recuento de Staphylococcus coagulasa
positiva
Medio de
cultivo Salado de Manintol
Tiempo de
incubacin 8 das
Temperatura
C 35C
Resultado
obtenido
crecimiento positivo de S. aureus.
Presencia de levaduras positivo


Imagen 2 Dilucin madre
El agar salado de manintol posea
un color rojo oscuro, luego de
incubar por 8 das su color
disminuyo la intensidad y todo el
medio de cultivo fue invadido por
colonias negras, cremosas y
brillantes. Los Staphylococcus
coagulasa positiva fermentan el
manitol y se visualizan como
colonias amarillas rodeadas de una
zona del mismo color, por lo tanto
se asume que fue coagulasa
negativa.

Imagen 3 dilucin madre 100X
Staphylococcus aureus gram (-),
con una morfologa de racimos de
cocos irregulares, crecimiento
positivo en agar salado de manintol,
aunque segn datos tericos
generalmente es un gran (+), por lo
que se deduce que pudo existir
cierto tipo de contaminacin durante
el proceso se siembra de la
muestra.

Imagen 4 dilucin 10
-2

Se puede observar crecimiento de
hongos, colonias de bacterias y un
poco de contaminacin del medio. El
Staphylococcus aureus se identifica por
su aspecto cremoso, brillante y
redondo. El color negro se debe a la
hidrolisis con lecitina.

Imagen 5 dilucin 10
-2
100X
En la imagen 5 es ms notoria la
contaminacin, pues se observan
levaduras ovaladas, Staphylococcus
aureus y contaminacin. Para
futuras pruebas hay que ser ms
cuidadoso con el medio antes de
sembrar, teniendo en cuenta que el
S.aureus. puede causar
enfermedades como intoxicaciones
y le es muy sencillo llegar a nuestro
organismo.
CONCLUSIONES
La presencia positiva de S.aureus
en la carne cruda, nos ayuda a
implementar ciertas normas de
higiene para prevenir alteraciones
en nuestra salud; generando
conciencia a la hora de ingerir un
alimento expuesto a el ambiente.
BIBLIOGRAFA
Ingrid L. Perdomo. Pilar Melndez
2004. Detyerminacion y aislamiento
de Staphylococcus aureus y
Clostridiuim perfringens
enterotoxigenicos a partir de
alimentos. Rv. Col. Cienc. Quim.
Farm. Volumen 33. Nmero 1.
Disponible en:
http://www.ciencias.unal.edu.co/unci
encias/data-
file/farmacia/revista/V33N1P59-
69.pdf
A Martnez, M. Prieto, F.
Sampedro, N. Acosta, Y. Gamboa
J. Mantilla, M. Montoya, J.
Vsquez. 2011. Evaluacin de
riesgos de Staphylococcus aureus
enterotoxignico en alimentos
preparados no industriales en
Colombia. Identificacin de riesgos
biolgicos asociados al consumo de
leche cruda bovina en Colombia.
Disponible en:
http://www.ins.gov.co/lineas-de-
accion/investigacion/ueria/Publicaci
ones/ER%20STAPHYLOCOCCUS.
pdf
PRT-712.02-024. 2008.
Procedimiento mtodo de recuento
en placa directo Staphylococcus
aureus bam on line 2001. Gobierno
de Chile instituto de salud pblica.
Seccin Microbiologa de alimentos.
Disponible en:
http://www.ispch.cl/lab_amb/doc/mic
robiologia_alimentos/PRT-024.pdf
PRT-712.02-026 2011.
Procedimiento tcnica de coagulasa
en tubo. Gobierno Chile. Seccin
microbiologa de alimentos.
Disponible en:
http://www.ispch.cl/sites/default/files/
documento_tecnico/2011/08/PRT-
712.02-
026%20V%205%20tecnica%20coag
ulasa%20en%20tubo.pdf
CUESTIONARIO
1. Cmo detectar toxina de
Staphylococcus aureus en
alimentos?
En los alimentos se detecta la toxina
de Staphylococcus aureus cuando
se observa un color amarillo o
dorado El aire, el polvo, el agua,
otros alimentos, los humanos y los
animales son algunos de los
"depsitos" de estos
microorganismos. La carne o los
productos de pastelera rellenos de
crema son algunos de los ms
afectados por las enterotoxinas que
produce alguna de las cepas de la
bacteria. (M. CHAVARRAS 2010).
2. Cul es el procedimiento
para evaluar la produccin de
nucleasa termoestable por
Staphylococcus aureus?
1. Realizar siembra para obtener:
Un cultivo de S. aureus ATCC 6538
(control positivo) en caldo cerebro
corazn Incubado por 18-24 horas a
35 1 C.
2 .Un cultivo de S. epidermidis
ATCC 12228 (control negativo) en
caldo cerebro corazn incubado
por 18-24 horas a 35 1 C.
3. Un cultivo de la cepa en estudio
en caldo cerebro corazn incubado
por 18-24 horas a 35 1 C. Puede
utilizarse el cultivo en caldo cerebro
corazn empleado para la prueba
de la coagulasa.
4. Preparar lminas portaobjetos
agregando sobre la superficie 3 mL
de agar TB-DNA. Previamente
fundido. Una vez solidificado el agar
hacer orificios de 2 mm. De
dimetro (10-12 por lmina) y
remover el agar por aspiracin.
5. Calentar el cultivo de las cepas
en estudio y los controles positivos y
negativos a Bao de agua a
ebullicin por 15 minutos.
6. Cada da que se realice esta
prueba colocar en una de las
lminas el control positivo (cepa
de S. aureus ATCC 6538) y el
control negativo (cepa S.
epidermidis ATCC 12228).
7. Llenar cada orificio con un tubo
capilar (0,01 mL 10 L), cuidando
dejar completamente lleno el orificio.
Incubar las lminas portaobjetos en
una cmara hmeda a 35 1C
por 4 horas.
8. Observar a las 4 horas la
aparicin de un halo rosado brillante
que se extiende por lo menos 1 mm
de la periferia de la excavacin lo
que es considerado como reaccin
positiva.
9. Registrar lectura de la prueba
(seccin microbiologa de alimentos
2011)
BIBLIOGRAFA
M. CHAVARRAS. (2010).
Deteccin de estafilococos en
alimentos. Ciencia y tecnologa de
los alimentos. Seguridad
alimentaria. Disponible en:
http://www.consumer.es/seguridad-
alimentaria/ciencia-y-
tecnologia/2010/01/20/190554.php
Seccin microbiologa de
alimentos. (17 de 03 de 2011).
Disponible en:
http://www.ispch.cl/sites/default/files/
documento_tecnico/2011/08/PRT-
712.02-
027%20V%204%20TBDNasa%20c
epas%20S.aureus.pdf.