ESCUELA DE INGENIERIA QUIMICA E INGENIERIA DE

ALIMENTOS

Anlisis Instrumental_Ingeniera Qumica _2014

Manual de Prcticas de Laboratorio

Ingeniera Qumica

ESCUELA DE INGENIERIA QUIMICA

Manual de prcticas de laboratorio

Anlisis Instrumental 2014

Ingra. Ana Cecilia Daz de Flamenco

Coordinadora de Laboratorio de Anlisis Instrumental
Ao 2014, Ciclo I

Tabla de contenido

Pag.

1. Recomendaciones en el laboratorio.

2. Materiales adicionales

3. Registro de Nota y avance del aprendizaje.

4. Elaboracin de reportes y cuaderno de laboratorio

6. Ejemplo de procedimiento de toma de muestras de suelos

Extraccin Acuosa de sales solubles en suelos.

Determinacin del pH en suelos

16

Titulacin Potenciomtrica de una muestra de vinagre.

24

Espectroscopia Visible.

28

Determinacin del espectro de absorcin del KMnO4 .

30

Determinacin del espectro de absorcin de una sustancia pura ( Azul de Metileno

estndar ).

39

Determinacin de fsforo

41

en suelos.

Determinacin de Hierro en una muestra de agua.

50

Espectroscopia Ultravioleta. Chequeo de Espectrofotmetro.

55

Determinacin del contenido de Ciano-Cobalamina ( Vitamina B12) en un inyectable . 59

Espectroscopia de absorcin en el Infrarrojo.

61

Determinacin cuantitativa de mezclas por examen al Infrarrojo.

75

Fotometra de Llama.

77

ABSORCIN ATMICA Determinacin de metales en aguas

82

Refractometra.

97

Determinacin Refractomtrica de azucares.

99

Polarimetra. Anlisis cuantitativo de una solucin de sacarosa.

10
9

1. Recomendaciones en el
laboratorio.
A continuacin se presenta ciertas normas y recomendaciones que se debern de
poner en prctica durante todas las practicas de laboratorio a realizar.
.
1. Presentar un plan de trabajo esquematizando el procedimiento de la practica a
realizar
2. Toda la cristalera deber estar perfectamente limpia.
3. No pipetear con la boca: lcalis, cido o reactivos peligrosos
4. No devolver al frasco original , si toma ms reactivos que el necesario para
evitar posibles contaminaciones.
5. AL final de la prctica devolver material: cristalera bien lavada
colocar los reactivos en el lugar que se encontraron.

y seca y

6. Es obligacin el uso de la gabacha y de zapatos adecuados.

7. Usar kleenex para limpieza de las celdas.
8. Es obligacin de cada grupo de laboratorio contar con el equipo externo a la
planta piloto necesario para realizar algunas prcticas.
9. Cumplir con los reglamentos de los laboratorios de la escuela de Ingeniera
Qumica e Ingenieria de Alimentos

2. Materiales adicionales
Lista de materiales:

1 caja de madera o de cartn: 29 x 13 x 10.8 cm ( Lx A x h ) (gradilla para

fsforo)
1 pedazo de esponja de poliuretano.
1 pedazo de Durapax (gradilla para PH).
5 frascos plsticos de 100 ml de capacidad (p /PH en suelos)
5 frascos plsticos de 100 ml de capacidad (p /PH en suelos)
cucharilla plsticas o metlicas de 0.25 g., 5 g. y 20 g.
Beaker de 50ml (erlenmeyer de 50ml, tubos viale o frascos plsticos de + /
- 30 ml
Embudos plsticos.
1 pliego de papel Whatman # 1
filtros de 9x9 cm de papel Whatman # 1
Bolsas plsticas de 2 lbs ( cada grupo)
1 frasco mbar de vidrio para la solucin de Carolina del Norte
concentrada
1 frasco plstico de galn par la solucin de Carolina del Norte diluida.
3 frascos plsticos bocones de 1-2 litro de capacidad.
Tamices de 2 mm de abertura.
Pedazo de hule
Rodillo de madera
Rollo de tirro
Rollo de papel toalla ( blanco)
Rollo de papel toalla gris o caf
Rollo de papel higinico doble hoja blanco.
Plumn permanente para rotular
Kleenex de color blanco

3. Registro de Nota y avance del

aprendizaje.
A continuacin se presenta el mapa de progreso que poseer cada alumno, y en el cual
se reportarn la calificacin que adquiri durante cada prctica de laboratorio
realizada.

UN I VE RS ID AD DE EL S ALV AD O R
F ACU L T AD D E IN G E N IE R I A Y ARQ U I TE C T UR A
ES C UEL A D E I N GE N I ER I A Q U M I C A
AN LI S I S IN S T R U M EN T AL

C IC LO I /20 14

HO JA R E C OR D

Al u m no :_ __ __ _ __ __ __ __ _ __ __ __ _ __ __ __ _ C ar n e t: __ __ __ _ __

Ev al ua cio n e s ( 8 0 %)
Ev al u ac i n

No ta (9 0 % ) No ta (1 0 % )

P1
P2
P3
Di sc u si o n e s
Tr a b a jo f i n al

%
20
20
20
10
10

No ta f i n al

Pr ct ic a s d e l a bo r at o rio (2 0 % )
As p ec to

Puntualidad (10%)

De s e m p e o e n el
la bor a to r io ( 5 0 % )
R e por t e ( 4 0 % )
Pr om e dio p ar ci al

10

11

12

13

14

Pr om e dio
tot a l

4. Elaboracin de reportes y
cuaderno de laboratorio
A continuacin se presenta diferentes tipos de formatos de informes de laboratorio.
Cada uno de los formatos se utilizar en las prcticas indicadas por el instructor.

Formato para reportes de laboratorio

TITULO DE LA PRACTICA
Nombre:
Grupo de laboratorio
Fecha de entrega del informe:

I.

Resumen

II.

Materiales y mtodos
a) La descripcin y funcionamiento del
equipo debe incluir:
Nombre del equipo, diagrama en
bloque , sealando fuente, celda ,
sistema de medida o registro, nivel de
precisin del equipo
b) Breve descripcin de los mtodos
para el anlisis de las muestras y el
anlisis e interpretacin de sus
resultados

III Clculos y Anlisis de resultados

IV. Conclusiones

Tablas de datos experimentales, Grficos. ejemplos de

clculo (si son repetitivos slo un ejemplo y se
presenta una tabla de resultados)
Anlisis estadstico.

V. Bibliografa
VI. Anexos

Formato de cuaderno de laboratorio

UNIVERSIDAD DE EL SALVADOR
FACULTAD DE INGENIERIA Y ARQUITECTURA
ESCUELA DE INGENIERIA QUMICA E INGENIERIA DE
ALIMENTOS
Ciclo:
Ao electivo:
Nombre:

Grupo de laboratorio:

Practica :

Fecha de practica:

OBJETIVO GENERAL

DIAGRAMA EN BLOQUE DEL EQUIPO ( Nombre de sus componentes)

DATOS EXPERIMENTALES (A, T, [ ] , etc.)

CALCULOS

OBSERVACIONES

CONCLUSIONES

6.
Ejemplo
de
procedimiento de toma de
muestras de suelos

ivida su finca en reas o lotes que sean uniformes en color y textura del suelo,
pendiente del terreno y sistema de cultivo ( distanciamiento, sobra y fertilizacin
anterior). Es recomendable que cada rea no abarque ms de unas diez a quince
manzanas de extensin. Generalmente la divisin en tablones de una finca puede
servir como base para el muestreo del suelo, pero en ningn caso deben incluirs e en
una misma rea las partes altas de una loma y las hondonas ( hoyas) o los terrenos
planos al pie de la misma, y cando dentro de un rea bastante uniforme se encuentren
lotes muy diferentes del resto, estos deben muestrearse separadamente . Es muy
conveniente sealar previamente en un plano la localizacin de los lotes que van a
muestrearse.
En cafetales ya establecidos, toma la muestra de suelo en la banda de fertilizacin ( es
decir, donde se aplican los fertilizantes). Si se van a intercalar nuevas siembras, tomar
adems, separadamente, muestras en los entresurcos. Si se trata de nuevas siembras en
terrenos baldos, tomar las muestras fuera de la banda de fertilizacin de un cultivo
anterior , o preferiblemente despus que el terreno ha sido rotulado y preparado par
alas nuevas siembras.
Si se dispones de un barreno tubular o de broca para tomar muestras, hundirlo con
movimiento de rotacin hasta 20 cm de profundidad ( 8 pulgadas) , y recolectar no
menos de unas 10 porciones de suelo pro cada rea o lote, de manera de representar
su totalidad. (Debe seguirse una ruta en zig-zag para cubrir el terreno).
Si no se dispones de un tubo muestreador, utilizar una pala plana y hacer con ella una
excavacin en forma de V, cuyo vrtice o fondo est a la profundidad de 20cm .
Retirar con la pala una tajada de una pulgada de espesor, siguiendo la pendiente de uno
de los lados de la V, hasta el fondo; recortar la tajada con un machete para dejarla de
2 pulgadas de ancho, descartando el resto ( ver dibujo anexo).
Las proporciones de suelos recolectadas en un rea, se irn depositando en una bolsa
de polietileno o en una balde del mismo material, perfectamente limpios, en donde se
mezclarn con todo cuidado. Si esta muestra compuesta, representativa del rea , es
muy voluminosa ( esto ocurre sise usa una pala ), mezclarla lo mejor posible y tomar
de ella aproximadamente una libra , que se pondr en una bolsa de polietileno ( 8x12
pulgadas es un buen tamao). Esta muestra reducida se rotula con toda claridad, co n el
nombre de la finca y del propietario y con el nombre o nmero asignado al rea o lote
muestreado, especificando si la muestra corresponde a la banda de fertilizacin o al
entresurco.
Deben tomarse todas las precauciones posibles par no contaminar las muestras con
fertilizantes o cal y otros productos qumicos evitando usar herramientas y envases
sucios para tomar y guardar las muestras.
Una poca conveniente par tomar las muestras es el principio d la estacin seca,
cuando el terreno no esta muy endurecido por la falta de agua. En todo caso , las

muestras deben enviarse con la suficiente anticipacin para que el resultado del
anlisis est listo antes de la poca en que se comprarn los abonos.
NOTAS:
1. Si en el mismo cafetal se han intercalado nuevas siembras y existe un nmero
grande de plantas de uno a tres aos, tomar separadamente una muestra
representativa de estas y otra de los cafetos adultos.
2. Retirar la hojarasca superficial del suelo ,antes de hundir en l el barreno o la
pala.
3. En los terrenos planos la banda de fertilizacin es un sector circular alrededor
del tronco del cafeto, pero en los suelos muy inclinados es un sector
semicircular o media luna en la parte superior o alrededor del tronco.
4. Si se proyecta aplicar yeso para eliminar el aluminio intercambiable debajo de
los 20cm de profundidad des suelo, tomar otra muestra de 20 a 40 cm, en el
mismo sitio en que se tom la muestra superficial.
5. Para evitar la prdida del rtulo de la muestra, o que la tierra lo ensucie y lo
haga ilegible, recomendamos poner la bolsa de la muestra dentro de otra y el
rotulo en medio de las dos.
6. Si el suelo est hmedo, mantener las bolsas sin cerrar y a la sombra. Cerrarlas
justo antes de llevarlas al laboratorio, acomodadas en una caja de cartn o de
otro material aislante ( durapax, etc) , a fin de evitar que se calienten.
En resumen seguir el procedimiento siguiente:
1. Delimitar ( preferiblemente e en un plano) el lote de cafetal a ser muestreado.
2. Obtener un barreno tubular o de broca o una pala plana, un machete y un
balde de plstico limpio y un etiqueta para rotular las muestras.
3. Retirar la hojarasca superficial del suelo y hundir en l el barreno o pala plana,
hasta la profundidad de 20cm, en la banda de fertilizacin.
4. Extraer la muestra y depositarla en un balde limpio.
5. Repetir los pasos 3 y 4 , en diez o ms sitios.
6. Mezclar las diez porciones de suelo perfectamente y colocar aproximadamente
una libra de la mezcla en una bolsa de polietileno de 8x12 pulgadas.
7. Meter la bolsa dentro de otra igual y colocar en medio de ellas la etiqueta
rotulada con el nombre del lote, de la finca y de su propietario.
8. Conservar las muestras en la sombra y protegidas de la contaminacin con
fertilizantes y otros productos qumicos, antes de llevarlas al Laboratorio.
Consultar el texto anterior para seguir el procedimiento apropiado para cada caso
especifico.

INSTRUCCIONES PARA TOMAR MUESTRAS DE SUELOS

El espesor de la toma simple ser de 1pulgada de espesor por 2 pulgadas de ancho.

Esquemas que ejemplifican algunos de los pasos en el muestreo de suelos para
anlisis.
El anlisis fsico-qumico para los suelos se hace con el propsito de conocer :

Propiedades fsicas del suelo, como textura.

Propiedades qumicas del suelo , como acidez y contenido de nutrientes.

Los resultados de estos anlisis son la base par formular las recomendaciones para el
uso eficiente de fertilizantes y enmiendas en los suelos cafetaleros u otros.
Objetivo del muestreo
1. Conocer la disponibilidad de nutrimentos en el suelo.
2. Formular programas de fertilizacin y rentabilidad.
3. Mejorar la productividad y rentabilidad.
4. Llevar los registros de la variacin nutricional a travs de los aos.
Etiqueta para el recipiente que contendr la muestra de suelo:
MUESTRA DE SUELO
PROPIETARIO
FINCA
LOTE O TABLN

MUNICIPIO

FECHA DE MUESTREO
LUGAR DE MUESTREO
BANDA DE FERTILIZANTE

ENTRE SURCO

PROFUNDIDAD DEL MUESTREO.

Prctica

Extraccin Acuosa de sales

solubles en suelos.
Relacin 1: 5 ( para medir conductividad ) .
Referencia : Jakson , Pagina 251, 10-53.
PARTE EXPERIMENTAL

1. Pesar 70 g, de suelo seco por duplicado.

2. Transferir a erlenmeyer de 500 ml.
3. Agregar 350 ml de H 2O libre de CO 2.
4. Tapar el frasco erlenmeyer.
5. Agitar durante 10 minutos.
6. Dejar asentar de 30 minutos a 1 hora.
7. Decantar el sobrenadante.
8. Leer con la conductividad de las muestras.
ESCALA DE CALIFICACIN PARA EL SUELO.

L 50
50 L 200
200 L 500
L 600

m
m
m
m

Suelo pobre en sales

Normales

Puede darse en suelos pesados

Investigar salinidad si PH

PROCEDIMIENTO PARA USO DE MEDIDOR DE CONDUCTIVIDAD MARCA

MIRON L

MARCA: MIRN L CONDUCTIVIDAD.

MODEL : EP

SERIAL: 1210325.

Tiene compensacin de temperatura en forma automtica a 25 C (77 F) para

muestras que estn entre 0 C a 49 C ( 32 F-102 F ).

1. Enjuague la celda tres veces con la muestra a

ser analizada y luego llnela con la muestra
hasta al menos arriba de la parte alta del
electrodo.

2. Seleccione el rango de lectura de trabajo

( perilla que marca rangos para lecturas hasta
0.1, 1, 10, 100 y 1000 /cm ) y luego
presione le botn de lectura directa en
( o micro siemens ) en un rango de X.1

3. Peridicamente chequear la calibracin del

equipo con soluciones estndar ( disponibles
en MYRN LOR DISTRIBUITORS )
adems remueva la tapa del fondo del
equipo para ajustar la calibracin.

NOTA: Reemplace ambas bateras.

10

PROCEDIMIENTO PARA USO DE MEDIDOR DE CONDUCTIVIDAD MARCA

TRACEABLE

Conductivmetro: Equipo Traceable, Control Company

El equipo adems de medir conductividad tambin puede medir resistividad, salinidad,
total de slidos disueltos y temperatura.

RECOMENDACIONES:
-

Use vasos de precipitados limpios

Evite la contaminacin cruzada entre el lavado y enjuague (utilizar vasos de

precipitados diferentes) de la sonda del instrumento de medicin

Enjuagar la sonda con agua destilada

La temperatura de la solucin debe permanecer constante, la temperatura ideal es de

25 C

Asegrese de mantener el flujo a travs de la sonda (o mover la sonda a travs de la

solucin) mientras se hace la lectura. La agitacin ayuda a prevenir la polarizacin,
adems garantiza que la temperatura de la solucin sea relativamente uniforme.

Al finalizar todo el procedimiento lavar y secar la sonda cuidadosamente, para ello

utilice agua destilada y papel de superficie suave.

11

PROCEDIMIENTO
Calibracin: Este proceso conlleva borrar la base de datos
1. Encienda el equipo.
2. Si el equipo ha sido calibrado anteriormente aparecer la palabra CAL en la esquina
superior izquierda de la pantalla.
3. Presione la tecla [CHECK], y observe la aparicin de las siglas CHK en la esquina
superior derecha de la pantalla
4. Posteriormente presione y mantenga presionado la tecla [ENTER] por unos 8
segundos, hasta que aparezca 0 en el extremo izquierdo de la pantalla, lo cual indica
que toda la base de datos de calibraciones anteriores han sido borradas.
5. Por defecto el modo de medicin se encuentra en Conductividad (S/cm), la cual ser
la forma de trabajo de anlisis para el caso; la tecla [MODE] nos ayuda a cambiar el
modo si en caso se desea medir resistividad o una de las dems unidades.
6. Tras la calibracin sumerja la sonda en la solucin estndar para la calibracin (esta
solucin debe estar incluida en el kit del equipo)
7. Espere a que la lectura del equipo se estabilice
8. Ajustar el valor de la conductividad mostrado en el aparato respecto al que se muestra
en la solucin, para ello utilice las teclas con flechas segn sea el caso. NOTA: Cada vez
que se presiona la tecla con la flecha se aumenta o se disminuye en una unidad.

12

La tabla que se muestra en el envase de la solucin estndar posee la siguiente

informacin:
Catalog Number 4173
***CERTIFICATE OF ANALYSIS***
Micromho/cm
1409
Microseimen/cm
1409
710
Ohm-cm
939
PPM D.S.
Temperature
25 C
16 oz (473 mL)
Size
CC9096
Lot Number
10/20/2011
Expiration Date
Control Company
Nota: Las unidades Micromho/cm y Microseimen/cm son equivalentes.
9. Con el valor correcto mostrado en la pantalla presione la tecla [ENTER] para ingresar el
valor del punto de calibracin.

10. Evidencia de una correcta calibracin es la lectura de 0.00 S/cm para la conductividad
del aire

13

11. Finalmente tras realizar los pasos anteriores el instrumento se encuentra calibrado y
listo para cualquier medicin.

Lectura de muestras.
1. Calibre el equipo
2. Sumerja la sonda en la solucin de muestra
3. Realice la lectura del resultado en la pantalla, mientras agita la solucin suavemente,
teniendo el cuidado de no lastimar la sonda del equipo.
4. Al final de la lectura (cuando la lectura sea estable por unos 5-7 segundos) retirar la
sonda y lavarla con agua destilada para realizar una nueva lectura.

14

15

Prctica

Determinacin del pH en
suelos
Referencia : Mtodo Centa
TEORIA

as medidas de potencial directo consisten en comparar el potencial de un

electrodo indicador en contacto con la solucin problema, con el potencial de un
mismo electrodo sumergido en una serie de soluciones patrn del componente a
determinar. Este mtodo recibe el nombre de Mtodo Potenciomtrico Directo.
Este mtodo est basado en el hecho de que cuando el potencial del electrodo se mide,
su resultado es comparado con el potencial constante de un electrodo de referencia.
En este mtodo el pH de una muestra se determina por medio de un medidor de pH
electrnico potencimetro . Este aparato posee un electrodo de referencia y un
electrodo indicador que se sumergen en la muestra y donde la concentracin de
equilibrio del in hidrgeno genera una diferencia de potencial entre los electrodos
que puede ser captada y transformada a una lectura de pH. La propiedad del pH est
referida a : La actividad del in hidrgeno en una solucin y est expresada como el
logaritmo (base 10 ) del hidrgeno ( en moles/L ) a una temperatura dada.
El valor del pH est determinado en la mayora de los casos por el equilibrio del
sistema dixido de carbono-bicarbonato-carbonato. El CO 2 es un gas , y como tal su
solubilidad depende de la presin y la temperatura. La solubilidad de un compuesto en
el agua, est referida a la capacidad de este de asociarse a lso iones H + y OH- del agua
, establecindose as un equilibrio dinmico entre las molculas.

16

EQUIPO

El equipo bsico est formado por :

1. Una unidad bsica del potencimetro.
2. Electrodos ( indicador y referencia o combinado).
3. Un soporte y un sostenedor.
4. Beaker de muestra / patrn.
5. Agitador de vidrio.
Algunos equipos poseen un ajustador que compensa el error debido a la temperatura
de la muestra.
Ventajas del potencimetro
-

La lectura no es afectada por interferencias como en el mtodo de comparacin

por color.

Facilidad de manejo del equipo.

Mayor exactitud en la lectura.

El valor del pH puede ser utilizado para otros equilibrios importantes en el anlisis
de suelos.

17

PARTE EXPERIMENTAL

PARTE 1:

EQUIPO.

a. Equipo medidor de PH (Potencimetro)

PARTE 2:

REACTIVOS

a. Soluciones Buffer ( reguladoras) de PH= 4 , PH=7 , PH=10

b. Soluciones de KCl saturada.
c. Agua destilada y descarbonatada.

PARTE 3: MUESTREO DE SUELOS

NOTAS:
Usar gradillas durapax numerarlas y marcadas (o su equivalente)
Usar frascos plsticos: marcados con punto azul ( tapa, pestaa y frasco).
a. Con una cuchara calibrada medir 20 ml de suelo secado al aire y pasado por
tamiz de 2mm y transferido a un frasco de 60ml.
PARTE 4: PREPARACIN DE LA SUSPENSIN DEL
SUELO.

NOTAS:
Usar agua destilada hervida durante 20 minutos y enfriada con la proteccin de
una trampa de cal sodada (agua descarbonatada).
El agua no tiene que ser descarbonatada del da (puede ser del da anterior).
PROCEDIMIENTO:
a. Con un dispensador plstico calibrado , aadir 50ml de H2O destilada ,
recientemente hervida. Tapar y agitar manualmente por inversin para romper
la capa de suelo formado ms o menos 6 veces.
b. Agitar por 5 minutos en el agitador de vaivn horizontal .

PARTE 5: GENERALIDADES SOBRE CALIBRACIN Y

OPERACIN DEL MEDIDOR DE PH.

NOTAS:
Calibrar el potencimetro con dos o tres soluciones amortiguadoras (PH=4 y
PH= 7 PH= 7 y PH=10) siguiendo las instrucciones del manual del medidor
de PH de cada modelo de equipo. Verificar la estabilidad antes y despus de
cada seria de 11 determinaciones.

18

EQUIPO A
a. Abrir agujero Closed / open
b. Quitar el protector de la punta.
c. Lavar el electrodo con agua ( usar pipeta punta gruesa). Para quitar cristales de
KCl , luego poner cubierta de proteccin.
d. Introducir electrodo en solucin de enjuague de PH=7. Ajustar a valor de
PH=7 con el modo CALIBRATE. Esperar que se estabilice antes de sacarlo
de la solucin de enjuague.
e. Leer buffer PH=7 en uso, esperar a que se estabilice la lectura , luego lavar con
agua destilada suficiente.
f. Introducir electrodo en solucin de enjuague de PH=4. Ajustar con el modo
TEMP y luego sin lavar con agua efectuar lectura de PH=4 en uso. Esperar a
que estabilice la lectura..
g. Repetir todo el proceso. Hasta que los buffer seleccionados den la lectura
esperada, en este momento ya estar listo para leer las muestras.

INSTRUCCIONES DE USO ADECUADO DEL PHMETRO (EQUIPO

THERMO SCIENTIFIC ORION STAR)

pHmetro: equipo Thermo Scientific Orion Star

Durante el proceso, la pantalla indica datos de temperatura y calibracin. La
temperatura aparece en la esquina superior izquierda de la pantalla. El indica que hay
un modo de calibracin o un men de configuracin de calibracin activo. Los conos
man, 2, 4, 7, 9, 10 y 12 indican qu amortiguadores de pH se guardaron despus de
realizar una calibracin de pH. El cono setup slo aparece cuando el medidor est en
modo de configuracin. El cono

indica que condicin de error y cuando se muestra

con el cono , una alarma de calibracin o un problema de calidad de electrodo.

19

1.1 PARTES DEL EQUIPO

1.1.1 Equipo

Figura 1. Equipo utilizado para medir pH.

1.1.2 Pantalla

Figura 2. Pantalla del equipo

20

1.1.3 Teclado

Figura 3. Teclado del equipo

1.2 RECOMENDACIONES:
-

Use vasos de precipitados limpios.

Evite la contaminacin cruzada entre el lavado y enjuague (utilizar vasos de

precipitados diferentes) del electrodo del instrumento de medicin.

Enjuagar el electrodo con agua destilada o desionizada.

La temperatura de la solucin debe permanecer constante.

Al finalizar todo el procedimiento lavar y secar el electrodo cuidadosamente.

21

1.3 PROCEDIMIENTO

1.3.1 Calibracin

1. Prepare el electrodo.
2. En el modo de medicin, presione
lnea superior, presin

hasta que el cono de flecha apunte a la

hasta que aparezca el cono de pH y presione

para iniciar la calibracin.

3. Enjuague el electrodo con agua destilada, luego enjuguelo con un poco del
amortiguador a medir y finalmente colquelo en el amortiguador.
4. Espere a que el cono de pH deje de estar intermitente.
a. Calibracin manual: Cuando el cono de pH deje de estar intermitente, el
medidor indicar el valor de pH real captado por el electrodo. Presione
hasta que el primer dgito que va a cambiar est intermitente,
presione

para cambiar el valor del dgito intermitente y

contine cambiando los dgitos hasta que el medidor muestre el valor

de pH con correccin de temperatura del amortiguador. Cuando el valor
de pH del amortiguador est definido, presione

hasta que el punto

decimal este en el lugar correcto.

5. Presione

para continuar con el siguiente punto de calibracin y repita los

pasos 3 y 4, o presione

para guardar y finalizar la calibracin.

6. Se mostrar el porcentaje de pendiente real del electrodo en el campo principal

y se mostrar

en el campo inferior.

a. Para la calibracin de un punto, presione

editar la pendiente y presione

presione

para

para volver al modo de edicin.

b. Para la calibracin de dos o ms puntos, el medidor pasar

automticamente al modo de medicin luego de mostrar la pendiente.

22

1.3.2 Medicin de pH

1. Enjuague el electrodo con agua destilada o desionizada.

2. Coloque el electrodo dentro de la muestra.
a. Presione

para comenzar la medicin. Una vez que la lectura se

estabiliza (revisar en la pantalla que el cono de AUTO-READ

deje

de estar intermitente), el medidor registra e imprime los datos, y

detiene las operaciones de la pantalla, de forma automtica. Si el
agitador est activado se encender cuando presione

y se apagar

cuando la lectura sea estable.

3. Retire el electrodo de la muestra y enjuguelo con agua destilada o
desionizada; squelo sin frotar, y colquelo en la siguiente muestra y repita el
paso 2.
4. Una vez medidas las muestras, enjuague el electrodo con agua desionizada o
destilada y squelo sin frotar. Introduzca el electrodo en frasco que lo protege.

NOTAS SOBRE L E C T U R A D E L P H D E L A S M U E S T R A S .

Slo para suelos: leer con dos cifras significativas ( 1 decimal); para otras
muestras leer con dos decimales ( 3 cifras significativas).
Se debe procurar que las muestras lean en el rango de los buffers que se
han utilizado para la calibracin
Lavar los electrodos con agua destilada ( usar un lavador de tubo de salida
grueso (piseta) y recoger las aguas de lavado en un beaker o frasco plstico
adecuado de boca ancha).
Agitar nuevamente por 30 segundos inmediatamente antes de leer la muestra .
Introducir el electrodo en muestras hasta 1 pulg. (partiendo de la punta de
ste). Esperar a que estabilice la lectura y luego anotar su valor.
Volver a lavar los electrodos con H 2O destilada (usar un lavador de tubo de
salida grueso (piseta) y recoger las aguas de lavado en un beaker o frasco
plstico adecuado de boca ancha).
En el caso de que solo haya calibrado el equipo con 2 estndares, por ejemplo,
si el potencimetro est calibrado con PH= 7 y PH=4 y la muestra lee por
ejemplo 8.5 debe volver a calibrar el equipo con PH= 7 y PH=10. Esto aplica
solo para cuando se ha usado dos estndares de pH para la calibracin. En el
caso de que se haya usado tres estndares no se necesita hacer este
procedimiento.

23

Prctica

Titulacin Potenciomtrica de
una muestra de vinagre.
OBJETIVOS

Aprender el manejo y calibracin del equipo para Titulacin Potencimtrica

(medidor de pH).

Determinar el volumen en el punto de equivalencia mediante los siguientes

mtodos:

a. Sigmoide
b. Primera Derivada.
c. Segunda Derivada.
d. Gran

TEORIA

os mtodos analticos basados en la medicin de potencial se realizan de dos

maneras uno es el mtodo potenciomtrico directo y el segundo es el de
Volumetra Potenciomtrica , que consiste en seguir el curso de una volumetra por
medicin del potencial de un electrodo sumergido en a solucin que se valora. Este
electrodo tiene que ser sensible a uno o ms de los reactivos participantes en la
reaccin. El punto de equivalencia se localiza por observacin de las variaciones del
potencial de dicho electrodo. La determinacin potenciomtrica del punto final se
puede aplicar a todos los tipos de reacciones volumtricas. Es utilizada con soluciones
coloreadas u opacas en las que no es posible apreciar el viraje de los indicadores.

24

DETERMINACIN DEL PUNTO FINAL. MTODOS GRAFICOS.

La determinacin del punto final de una volumetra potenciamtrica se puede realizar
de varias maneras . La ms directa es un mtodo grafico que consiste en apreciar
usualmente el punto medio de la porcin de la curva que asciende ms abruptamente.
Cuando la curva de titulacin es simtrica, el mximo valor de E

ocurre en el
V
punto de equivalencia. Una curva de titulacin simtrica es obtenida cuando el
poencial del electrodo indicador obedece la ecuacin de Nerst y el numero de moles
del titulante reaccionante son iguales en el balance de la titulacin. Si la reaccin no es
equivalente, el punto de mxima pendiente difiere del punto, de mxima equivalencia .
Sin embargo el error es mnimo si el cambio de potencial cerca del punto de
equivalencia es grande. El punto final ser mejor localizado por un mtodo diferencial
que por el mtodo grfico.
En la presente prctica se determinar la concentracin de una solucin cida
(vinagre) utilizando hidrxido de sodio de concentracin conocida como titulante.

EQUIPO

Los componentes del equipo a usar son:

-

Potencimetro

Bureta para cada titulante

1 agitador magntico c/barra magntica. ( o agitacin manual ).

Soporte para bureta

Luz blanca.

Fondo blanco para titulacin y media luna.

Beaker con solucin problema. ( ver esquema ).

25

Reactivos:
-

Vinagre ( comercial o artesanal ).

H2O destilada

NaOH 0.05 ( solucin estandar. Ver procedimiento para la preparacin de

soluciones valoradas de NaOH manual de Qumica Analtica Cuantitativa ).

PARTE EXPERIMENTAL

A.

CALIBRACIN DEL EQUIPO.

Realizarlo de la misma forma que se explic para el uso de mediciones directas.

B.

TAMAO DE LA ALICUOTA DE MUESTRA.

Hacer un exploratorio de la muestra en base a la concentracin esperada del %

CH3COOH en la muestra , segn sea el caso ( ver tabla 3.1).

Tabla 3.1
% Aproximado Porcin alicota
de muestra
de muestra
(P/V)
(ml)
1
5.0
2
3.0
3
1.0
4
1.00
5
1.0

VNaOH 0.05N a
gastar (ml)
16.67
20.0
10.0
13.35
16.67

1.0

20.00

1.0

23.33

26

Necesidad de hacer diluciones

No
No
No
No
No
Hacer dilucin de 1:2 para gastar
un volumen de 10.0m ml
aproximadamente
Hacer dilucin de 1:2 para gastar
un volumen de 12 ml
aproximadamente

C.

TITULACION POTENCIOMETRICA.
1. Tomar una porcin de alicota de la muestra ( segn tabla 3.1) y agregar
50 ml de agua destilada. ( No se trabajar por triplicado por
limitaciones de equipo ).
2. Preparar el electrodo para las lecturas.
3. Proceder a la titulacin potenciomtrica de la siguiente forma: Aada
volmenes de 0.5 ml hasta llegar a PH cercano a 5.0 luego aada
volmenes de 0.1 ml hasta alcanzar un PH cercano a 7.5 . Contine
titulando adicionando volmenes de 0.5 ml hasta un PH de 11.0 . En
cada una de las adiciones anote el valor del PH.
4. Mediante la aplicacin de los mtodos indicados determine el volumen
del punto de equivalencia.
5. Calcule el % de cido presente en el vinagre utilizando el volumen
promedio de equivalencia.

NOTA: Previamente debi

laboratorio.

haber elaborado la tabla para anotar los datos del

CUESTIONARIO

1. Escriba la reaccin que se da en el punto de equivalencia.

2. Disee la curva de titulacin utilizando conceptos de equilibrio qumico cido
base, utilizando los datos de anlisis obtenidos y la cantidad de agua utilizada.
3. Establecer la ecuacin de la fuerza electromotriz de los dos electrodos
utilizados.
4. Cual es o son las ventajas que observa entre una titulacin con indicador y la
potenciomtrica.
5. En base a la curva de titulacin prctica obtenida, cuales seran los indicadores
adecuados?
6. Calcule en base a datos la Ka del cido actico comparando con los datos
tericos.

27

Prctica

Espectroscopia Visible.
Aplicacin de la Ley de Beer.
OBJETIVOS

Elaborar una curva de calibracin para una sustancia pura y clculos

cuantitativos.

Elaborar el espectro de absorcin de una sustancia para conocer la longitud de

onda a la cual posee mxima absorcin .

TEORIA

as sustancias qumicas en solucin poseen el poder de absorcin de radiacin a

cierta longitud de onda ( ) esto depender de la especie absorbente.
Generalmente , los resultados se expresan en forma grfica como sigue:
A

400

450

500

(nm)

Segn el espectro de absorcin hay una especie que presenta una absorcin mxima a
450 nm. La espectroscopia en general es el estudio de la interaccin de la luz con los
tomos y molculas. La luz o radiacin electromagntica se divide en varis regiones,
una de ellas es la regin visible, la cual presenta un intervalo de longitud de onda ( )
de 380 nm a 800 nm (aunque estos lmites varan de un instrumento a otro).
28

La espectroscopia visible se basa en la absorcin y emisin de radiacin, la cual es

debida a una reestructuracin de los electrones en tomos o molculas .
En el proceso de absorcin, la radiacin incidente lleva al tomo o molcula de un
estado electrnico fundamental a un estado de excitacin de mayor energa. En el
proceso de emisin se produce el efecto contrario. La energa absorbida o emitida es
proporcional a la frecuencia ( ) de la radiacin electromagntica, de acuerdo a la Ley
de Planck.
E h

De donde h ( constante de Planck) = 6.63 x10 27 erg

seg

Sin embargo , es ms frecuente utilizar la longitud de onda ( ) , de la radiacin , la

cual es expresan en nanmetros ( 1nm = 1 x 10 -8 cm )
E

hc

La intensidad de la absorcin depende de:

-

La concentracin de las molculas absorbentes.

El trayecto que debe atravesar la radiacin.

El coeficiente de extincin molar.

Aplicacin de la Ley de Lambert-Beer.

Esta Ley se expresa as: A L C .

En donde C es la concentracin de la solucin generalmente, expresada en moles
por litro por convencin, es el coeficiente de extincin molar, es una constantes (
k
corresponde a
cuando se usan logaritmos comunes).
2.303
L b es el ancho de la celda expresado en centmetros; esencialmente constantes en la
mayora de trabajos experimentales. En los trabajos experimentales que tratan con
mtodos pticos de anlisis son usados los trminos de porcentaje de transmitancia.
%T

P
x100
Po

Donde : P = intensidad de la luz transmitida.

Po = intensidad de la luz incidente.
La espectroscopia visible se emplea en el anlisis cualitativo y cuantitativo de
compuestos orgnicos e inorgnicos . Los grficos de absorbancia ( A ) , contra
longitud de onda ( ) son conocidas como espectro de absorcin. Esto nos indica la
longitud de onda a lo cual posee su mxima absorcin.

29

Prctica

4.A
Determinacin del espectro de
absorcin del KMnO4 .
OBJETIVO

Elaborar el espectro de absorcin de una sustancia pura para conocer la

longitud de onda a la cual posee su mxima absorcin de energa y luego poder
utilizar este valor para la construccin de una curva de calibracin.

MATERIALES

Reactivos:
-

KMnO4

Agua destilada de alta pureza

Materiales:
-

1 Caja de papel Kleenex blanco

1 rollo papel higinico de doble hoja

1 rollo de papel toalla blanco

1 rollo de papel toalla gris

Papel milimetrado

Papel semi-logartmico de 1 ciclo

Cristaleria:
-

2 Celdas o cubetas para espectronic 20 ( que den igual lectura de tramitancia )

1 vidrio

2 frascos de 50 ml
30

1 pipeta de 1 ml.

6 Frascos volumtricos de 50 ml.

1 Frascos volumtricos de 100 ml

1 bureta de 50 25 ml

2 beaker de 400ml para descarte.

1 gradilla metlica para cubetas Spectronic 20

1 gradilla de durapax o bandeja para estndares.

3 beaker de 50ml para descarte.

EQUIPO ESPECTRONIC 20

1. Interruptor de encendido del aparato y control del cero ( Power switch zero).
2. Compartimiento de la muestra . ( Sample holder ).
3. Luz indicadora ( Pilot lamp ).
4. Control de longitud de onda. ( Wavelegth control ).
5. Control para fijar el 100%T

DESCRIPCIN Y OPERACIN DEL ESPECTROFOTOMETRO BAUSCH &

LOMB. ESPECTRONIC 20.
a. Controles frontales:
1. Interruptor de encendido/ control del cero. Es el interruptor principal
que enciende y apaga el aparato, tambin controla el cero utilizndola
perilla. Se calibra a 0% T, con el compartimiento de la muestra vaci y
cerrado , utilizando para ello la perilla de control del cero.

31

2. Compartimiento de la muestra. El tubo conteniendo la muestra

introducida al compartimiento y se cierra.
3. Luz indicadora. Indica que el equipo ha sido encendido.
4. Control de longitud de onda. Este control selecciona la longitud de
onda analtica del instrumento. La longitud de onda seleccionada se
indica sobre la escala de longitudes de onda en la ventana prxima a la
perilla. La escala tiene dos colores, cada color corresponde al rango de
operacin del fototubo del instrumento. La graduacin en negro
corresponde al rango bsico de 324 nm-600 nm , y la graduacin en
rojo para el rango de 600nm-950nm, de la combinacin opcional del
fototubo/filtro.
5. Control para fijar el 100% T. Este control se usa para colocar el
medidor a 100% de T, con una solucin blanco de referencia. El 100%
de T., debe calibrarse cada vez que se cambie longitud de onda. Cuando
se opera a una longitud de onda fija por largo tiempo, peridicamente
se revisa el 100% T, reajustando la lectura si es necesario.
b. Operacin:
1. Encender el aparto con (1) y calentar 25 minutos.
2. Seleccionar la longitud de onda con (4).
3. Colocar la escala a 0% T., con el compartimiento de muestra vaco y la
cubierta del adaptador cerrado.
4. Colocar la solucin blanco de referencia en el compartimiento de
muestra y fijar el 100% T con (5).
5. Colocar la muestra problema, realizar la lectura ya se a con % T,
absorbancia, en la escala de lectura del aparato.

32

EQUIPO UV 1800

CARACTERISTICAS DEL EQUIPO UV 1800 A USAR PARA LAS DETERMINACIONES DE ANALISIS QUIMICO POR
ABSORCION UV Y VIS
Modos de medicin
Equipado en forma estndar con diversos modos de medicin, el UV-1800 permite realizar una gran
variedad de aplicaciones, incluyendo cuantificaciones fotomtricas y de protenas.
Modo fotomtrico
Mide la absorbancia o la transmitancia tanto en una longitud de onda constante como en mltiples
longitudes de onda (hasta 8). En las mediciones con mltiples longitudes de onda, pueden realizarse
clculos sobre los datos obtenidos en hasta cuatro diferentes longitudes, incluyendo el clculo de la
diferencia entre (o la proporcin de) las mediciones obtenidas en dos longitudes distintas.
Modo Espectro
Obtiene los espectros de la muestra escaneando la longitud de onda. Los cambios en la muestra pueden
monitorearse realizando repetidos escaneos. Tambin pueden realizarse operaciones de procesamiento de
datos, tales como el agrandamiento o la reduccin de los espectros obtenidos, deteccin de los picos,
clculos de rea, etc.

Modo cuantitativo
Genera curvas de calibracin a partir del anlisis de soluciones estndares y las utiliza para calcular la
concentracin en muestras incgnitas. Es posible generar diferentes curvas de calibracin (facto K y basadas
en regresin de 1er a 3er orden) a partir varias combinaciones de longitudes de onda (1 a 3 longitudes de
onda y sus derivadas).

Modo Cintico
Mide el cambio en la absorbancia en funcin del tiempo, y de ese modo obtiene los valores de la actividad
enzimtica. Pueden seleccionarse el mtodo cintico de medicin o el mtodo de medicin de la constante
de velocidad. Utilizar este modo en combinacin con un soporte multi-celdas MMC-1600/1600C (serie
8/16) o un posicionador de celdas CPS-240A (6 celdas) permite un anlisis consecutivo de mltiples
muestras.

33

Modo biomtrico (estndar)

Permite un anlisis de AND y protenas, utilizando los siguientes mtodos de cuantificacin:
* Cuantificacin de cido nucleico (cuantifica ADN o protenas utilizando la absorbancia a 260/230 nm o
260/280 nm.
* Cuantificacin de protenas
* Mtodo Lowry
* Mtodo BCA (usando cido bicinconnico)
* Mtodo CBB (usando Coomassie Brilliant Blue G-250)
* Mtodo Biuret

Especificaciones DEL Equipo UV 1800

Intervalo espectral

190,0 ~ 1100,0 nm

Ancho de banda espectral

1nm (190 to 1100nm)

Indicacin de la longitud
de onda

en incrementos de 0.1-nm

Fijacin de la longitud de

en incrementos de 0.1-nm (incrementos de 1-nm al establecer un intervalo de

onda

barrido)

Exactitud espectral
Repetibilidad espectral
Luz espuria
Sistema fotomtrico
Intervalo fotomtrico

0.1nm @ 656.1nm D2
0.3nm (190 to 1100nm)
0.1nm
menos de 0.02% usando NaI a 220nm, NaNO2 a 340nm
menos de 1.0% usando KCl a 198nm
Doble haz
Absorbancia: -4 a 4 Abs
Transmitancia: 0% a 400%
0.002 Abs (0.5Abs)

Exactitud fotomtrica

0.004 Abs (1.0Abs)

0.006 Abs (2.0Abs)
menos de 0.001 Abs (0.5 Abs)

Repetibilidad fotomtrica

menos de 0.001 Abs (1 Abs)

menos de 0.003 Abs (2.0 Abs)

Estabilidad de la lnea de

menos de 0.0003 Abs/hora a 700nm

base

(despus de una hora de encendida la fuente de luz)

Planicidad de la lnea de

0.0006 Abs

base

(190 a 1100nm, despus de una hora de encendida la fuente de luz)

Nivel de ruido

0.00005 Abs, valor RMS a 700nm

Dimensiones

450 (ancho) x 490 (profundidad) x 270 (altura) mm

34

Peso
Impresoras

Memoria

Rendimiento para PC

15kg
DPU, ESC/P, PCL, e impresoras de interfaz USB compatibles con Windows, va
memoria USB y software en PC
Almacenamiento de datos en memoria USB (opcional), en formato texto y/o
formato UVPC
Uso de memoria USB + UVProbe (estndar) bajo Windows XP

* Mtodo de absorcin UV (medicin directa a 280 nm)

Ventajas del equipo UV1800

El equipo ha sido diseado de acuerdo con la actual Farmacopea japonesa, europea y estadounidense, el
nuevo espectrofotmetro UV-1800 UV-VIS posee un ancho de banda medio nominal de 1 nm, la resolucin
ms alta en instrumentos de su especie, en un diseo compacto. Ofreciendo una variedad de prestaciones
fciles de manejar, el UV-1800 puede utilizarse tanto en forma autnoma o contralado por una PC.

Alta resolucin

Cuenta con la ms alta resolucin en su especie* (1 nm), el UV-1800 satisface fcilmente los estndares
requeridos por la Farmacopea europea en cuanto a resolucin de longitud de onda. Adems, al utilizar una
red hologrfica con ngulo de blaze junto con un montaje ptico tipo Czerny-Turner, el resultado es un
sistema ptico compacto y de alta transmisibilidad. Tambin la luz espuria, la repetibilidad de la longitud de
onda y la estabilidad de la lnea de base se han mejorado hasta alcanzar los requerimientos de los usuarios.
(*Hasta marzo de 2007, segn la investigacin de Shimadzu.)
Compacto
De un ancho de tan solo 450 mm, el UV-1800 es uno de los instrumentos ms compactos en su especie, lo
que permite su instalacin en espacios reducidos. Comparado con el UV-1700, el espacio requerido ha sido
disminuido en un 15%, y el ancho ha sido reducido en un 20%.
Fcil manejo
Una memoria USB puede conectarse directamente al UV-1800. Los usuarios ahora pueden analizar los datos
en una PC utilizando el software UVProbe. Adems, los datos de los espectros y de las curvas obtenidas en
funcin del tiempo pueden exponerse y exportarse a una planilla de clculo comercial. Se puede imprimir
con impresoras que soporten cdigos de control PCL, por ejemplo:
HP Business Inkjet 1200 HP Photosmart D5160
El software UVProbe es un componente estndar del instrumento y permite controlar el UV-1800 desde una
computadora. (Se necesita de un cable USB para conectar el equipo a la computadora.)

35

Funciones de seguridad
Las funciones de seguridad del UV-1800 permiten restringir las funciones de acuerdo con la capacidad del
usuario.
Funciones de validacin del instrumento
El UV-1800 ofrece compatibilidad con 9 tems JIS: exactitud de longitud de onda, repetibilidad de longitud
de onda, resolucin, luz espuria, exactitud fotomtrica, repetibilidad fotomtrica, uniformidad de la lnea de
base, estabilidad de la lnea de base, y nivel de ruido.
Mantenimiento
El tiempo de operacin de la lmpara de deuterio (D2) y de la lmpara de halgeno (WI) puede grabarse y ser
exhibido. En consecuencia, el tiempo previsto para reemplazar las lmparas puede constatarse al realizar las
inspecciones peridicas, minimizando el tiempo de inactividad.

PARTE EXPERIMENTAL

1. Determinacin del espectro de absorcin del KMnO 4.

a. Pesar exactamente 10 mg de KMnO 4.
b. Transferir a un baln volumtrico de 100 ml y disolver con H 2O
destilada.
c. Aforar a volumen con H 2O destiladas para obtener una solucin stock
de una concentracin de 100 g/ml.
d. Pipetear 1.0ml de esta solucin y transferir a un baln volumtrico de
50.0ml . Aforar a volumen con H 2O destilada para obtener una
concentracin de 2g/ml.

36

e. Medir la absorbancia o tramitancia de esta solucin en un rango de

longitud de onda que va desde 560 nm a 500 nm, con intervalo de 5 nm
( note que se comienza de la mayor a la menor longitud de onda, lo cual
es importante hacerlo as ).
f. Usar como blanco: H 2O destilada. Chequear calibracin para cada
cambio de . ( Usar 2 celdas o cubetas idnticas, es decir que ambos
leen igual 100% T o igual absorbancia )
g. Hacer las lecturas en %T, luego convertirla a absorbancia usando la
frmula A log T ( T se coloca en esta formula expresndola como
fraccin )
h. Tabular los datos obtenidos ( A vrs. )
i.

Elaborar el espectro de absorcin del KMnO 4

j.

Determinar la al que corresponde el mximo de absorcin del

KMnO4 en agua ( mxima ).

2. Determinacin de la concentracin de una muestra de KMnO 4. Por mtodo de

1 punto.
A una solucin de KMnO 4 proporcionada por su Instructor, determine su
absorbancia a la longitud de onda que corresponda al mximo de absorcin y
encontrar su concentracin, empleando la siguiente frmula:

Cmx

Cst * Amx * FD
Ast

Donde : Cst = concentracin en ppm, del estndar.

Cmx = concentracin en ppm de la muestra.
Amx = Absorbancia de la muestra.
Ast = Absorbancia del estndar.
FD = Factor de diluicin.
NOTA: Absorbancia de la solucin estndar, es la obtenida ala longitud de onda
mxima del KMnO 4 y la Cst es la concentracin en ppm de la solucin de KMnO 4 ,
utilizada anteriormente en la obtencin del espectro de absorcin.
Determinar la absortividad (a ) y absortividad molar ( c ) de la sustancia KMnO 4
.Longitud de onda de la celda (b=1cm) , peso molecular de KMnO 4=158.016 g/mol
3. Elaboracin de una curva de calibracin.
a. Preparar soluciones de 0, 5, 10, 15, 20 y 25 ppm KMnO 4 segn tabla 4.1

37

Tabla 4.1 Preparacin de soluciones estndar de una solucin acuosa de KMnO 4 para elaborar la
curva de calibracin.

Alcota de
Concentracin solucin
( ppm )
intermedia
Stock ( ml)
0
5
10
15
20
25

0
2.5
5
7.5*
10**
12.5

V. F (ml)
50
50
50
50
50
50

NOTA
Hacer la medicin de los volmenes de la solucin intermedia pueden con una bureta de 25
50 ml

b. Fijar la mx encontrada en la parte anterior.

c. Determinar la tramitancia para cada uno de los patrones.

%T
d. Graficar A vrs concentracin y tambin log
vrs concentracin.
100

4. Determinacin de la concentracin de una solucin problema. Por mtodo de

curva de calibracin.
Por medio de la curva de calibracin determinar la concentracin de una muestra
problema que se le proporcionar en el laboratorio.
Leer para la solucin problema su valor de % T , este valor ledo debe estar dentro
del rango de la curva de calibracin . Caso contrario consulte con el instructor.
NOTA: Cada estudiante debe graficar su espectro en papel milimetrado, as como
tambin la curva de calibracin en el laboratorio.

CUESTIONARIO

1. Calcular la concentracin de la solucin problema usando el mtodo de la

curva de calibracin.

38

Prctica

4.B
Determinacin del espectro de
absorcin de una sustancia pura
( Azul de Metileno estndar ).
PARTE EXPERIMENTAL

a. Pesar exactamente 10 mg de azul de metileno estndar.

b. Transferir a un baln volumtrico de 100 ml . Y disolver con alcohol
diluido ( 50 % v/v ).
c. Aforar a volumen con alcohol diluido , para obtener una solucin stock
de una concentracin de 100 g /ml.
d. Pipetear 1.0 ml de esta solucin y transferir a una baln volumtrico de
50.0 ml aforar a volumen con alcohol diluido , para obtener una
concentracin de 2g/ml.
e. Medir la absorbancia de esta solucin en un rango de longitud de onda
( ) de 693 nm a 628 nm , con intervalo de 5 nm.
f. Usar como blanco: alcohol diluido . Chequear calibracin para cada
cambio de .
g. Hacer las lecturas en %T, luego convertirlas a absorbancia usando la
formula apropiada.
h. Tabular los datos obtenidos ( A vrs ).
i.

Elaborar el espectro de absorcin del azul de metileno estndar.

j.

Determinar la longitud de onda al que corresponda el mximo de

absorcin , del azul de metileno estndar .

39

1. Determinacin de la concentracin de una muestra de Azul de Metileno .

Mtodo de 1 punto.
A una solucin de Azul de Metileno proporcionada por su Instructor, determine su
absorbancia a la longitud de onda que corresponda al mximo de absorcin y
encontrar su concentracin, empleando la siguiente frmula:

Cmx

Cst * Amx * FD
Ast

Donde : Cst = concentracin en ppm, del estndar.

Cmx = concentracin en ppm de la muestra.
Amx = Absorbancia de la muestra.
Ast = Absorbancia del estndar.
FD = Factor de diluicin.
NOTA: Absorbancia de la solucin estndar, es la obtenida ala longitud de onda
mxima del Azul de Metileno y la Cst es la concentracin en ppm de la solucin de
Azul de Metileno, utilizada anteriormente en la obtencin del espectro de absorcin.
Determinar la absortividad (a ) y absortividad molar ( c ) de la sustancia puro ( Azul de
Metileno ) .
Longitud de onda de la celda (b=1cm)
Peso molecular de C 16H18ClN3S = 319.85 g/mol

40

Prctica

Determinacin de fsforo
en suelos.
Referencia CENTA N.C
PARTE I: REACTIVOS.

1. Solucin concentrada de Carolina del Norte.

Mezclar 81.2 ml HCl concentrado con 13.4ml H2SO4 concentrado pro litro (
solucin acuosa ).
PROCEDIMIENTO:
1. Prepararlo dentro de la cmara extractora de gases sobre el beaker de 1000 ml (
en bao de agua helada conteniendo 600ml de agua destilada )
2. Adicionar 81.2 ml de HCl concentrado con bureta de 100 ml.
3. Agitacin manual constante.
4. Luego adicionar lentamente 13.4ml de H 2SO4 concentrado con bureta de 25ml.
5. Enfriar y transferir a frasco volumtrocp de 1 L usando umbudo y llevar a
volumen con agua destilada ( 25 C).
6. Repetir lo anterior ( otra preparacin de 1 L)
7. Mezclar los 2 L en un recipiente de capacidad adecuada par mezclarlos
perfectamente.
8. Envasar en frascos mbar de 2.5 L
9. Titular la solucin concentrada para determinar su normalidad verdadera.

2. Solucin de Carolina del Norte Diluida.

1. Para prepara la solucin de Carolina del Norte diluida, diluir: 100ml de NC
concentrada en 2 L de agua destilada.

41

2. Titular la solucin ( diluida ) para comprobar la normalidad ( 0.05N en HCl y

0.25N en H 2SO4 equivalente a 0.075N ).

3. Solucin Vanadato de Amonio 0.25% p/v para suelos.

1. Mezclar 530 ml agua + 530 ml HNO 3 ( esta es la solucin cida 1+1)
2. Enfriar en bao.
3. Pesar 2.5 g de Vanadato de Amonio en beaker de 150ml, transferiri
cuantitativamente a beaker de 1 lt con sln cida (1+1)
4. Agregar 500ml de solucin cida ( 1+1 ) Agitar hasta la disolucin completa .
Adicionar ms solucin cida si no se disuelve.
5. Transferirlo a frasco volumtrico de 1 L. Lavar el be ader con solucin cida (
1+1 ). Adicionarla al frasco volumtrico.}
6. Llevar a cerca de volmenes con solucin cida ( 1+1) y dejar en bao a 25 C
por 15 minutos.
7. Aforar con la solucin cida. Agitar y envasar en frasco mbar ( ver notas).
NOTAS:
1. Enjuagar inmediatamente el frasco volumtrico para que no se manche.

4. Solucin Molibdato de Amonio 5% p/v.

Para suelos y fertilizantes:
1. Pesar en balanza granatara 50 g de Molibdato de Amonio tetrahidratado en
beaker de 150ml.
2. Transferir cuantitativamente a beaker de 1000 ml con agua destilada.
3. Adicionarle 750 ml de H 2O destilada y disolver.
4. Transferir cuantitativamente a frasco volumtrico de 1000 ml.
5. Se lleva a volumen de 1 L con agua destilada a 25C ( V f = 1 L ).
6. Filtrar si es necesario por Whatman No 40 ( apalescente ).
7. Se deposita en envases plsticos por ser una solucin alcalina.

42

5. Mezcla para el desarrollo de color en P para suelos por mtodo Mo-Va.

Materiales : 1 probeta de 100ml y 1 erlenmeyer esmerilado de 125 ml ( o de otro
volumen dependiendo del # de muestras).
Esta es un solucin en la que se mezcla volmenes iguales de dos soluciones:

Solucin A : Solucin Molibdato de Amonio 5 % p/v.

Solucin B: Solucin Vanadato de amonio 0.25% p/v
Para determinar el volumen a mezclar de cada uno se suman el # de muestras, el #
de testigos y lo 8 estndares. A cada uno de ellos se les agrega 2ml de la mezcla .
Ejemplo:
2 gradillas ( 10 muestras + 1 testigo /gradilla )=22
8 estndares = 32 muestras.
30 muestras x 2 ml /muestra = 60ml = V t mezcla.
Vol a mezclar de cada componente =

Vt

V
0.2 t

= Vt mezcla ( + 0.2/2)
= Vt mezcla ( 0.6 )
= 0.6 Vt mezcla.
Luego :
VA VB 0.6 Vt mezcla

Si Vt mezcla = 60 ml

VA VB 0.6 60 ml 36 ml

Se deben mezclar : 36 ml solucin A con 36 ml solucin B

6. Preparacin de la solucin Patron Madre de 1000 ppm de Fosforo.

1. Secar 5 g KH 2PO4 ( patrn primario ) en estufa a 110 C y 2 h. Enfriar en
desecador.

PARTE II: PROCEDIMIENTO PARA EL ANALISIS DE

LOS SUELOS.

1. Muestreo de suelos
A. Con la cuchara de 5g , medir 5 ml de suelo en los frascos plsticos (
situados stos, dentro de gradilla metlica , o de madera ) con ayuda de
embudo plstico, golpeando la cuchara 2 veces sobre el embudo. Si no
se tiene cuchara plstica de 5 g se puede pesar para cada suelo los 5 g en
la balanza semi-analtica o balanza granataria.
43

NOTA: Rasar la medida con esptula em posicin vertical, si se muestrea con

cuchara.
B. Preparacin del extracto de suelo.
I. Agregar con cuchara 0.25 g de Carbn Activado DARCO G-60.
II. Adicionar 25 ml de solucin extractora de Carolina del Norte
diluida a cada muestra y soplar las pipetas.
III. Sellar los frascos completamente con cinta engomada ( o su
correspondiente tapn ) y agitar por 5 minutos sis e hace
mecnicamente ( a 180 rev/min ).
IV. RAPIDAMENTE filtrar por papel wathaman #1 de 9 x 9 cm
(preparado para esto ), recibir en tubos viales o tubos embudo o
beaker de 50 ml.
V. En este filtrado determinar el potasio y e nitrgeno nitrico u
otros elementos menores por absorcin atmica .
VI. Refiltrar en otro papel , si es necesario ( revisar que no se haya
pasado el carbn activado).
VII. Pipetear 5 ml de cada una de los extractos de las muestras, en
tubos de ensayo grandes, medidos con pipetas volumtricas
diferentes.

C. Desarrollo de color.
I. Adicionar con pipeta graduada 2 ml de la mezcla MolibdatoVanadato, primero : a la gradilla de patrones.
II. Inmediatamente, agitar en forma manual cada gradilla durante 30
seg y dejar en reposo por 25 min como mnimo
e
inmediatamente hacer la lectura a 420 nm de longitud de onda
en el colorimetro.
III. Repetir los pasos I y II par a las muestras gradilla por gradilla.
Se debe cronometrar el tiempo entre patrones y muestras de
forma que se lea una gradilla tras la otra.

2. Pesar exactamente 1.1039 g de KH 2PO4 ( patron primario) en vidrio de reloj de

pequeo.
3. Transferir cuantitativamente a frasco volumtrico de 250 ml con agua destilada.
4. Agregar 1/3 del volumen de agua para disolver. Agitar continuamente.
5. Llevar a casi volumen con agua destilada.
6. Poner en bao a 25 C por 15 min
7. Llevar a volumen final (250 ml).

44

PREPARACIN DE PATRONES DE 0,2,4,6,8,10,12,14,16 Y 20 PPM DE P

A. Preparar cada uno de los patrones segn tabla siguiente.

Tabla preparacin patrones de fsforo para suelos

Alicota, en ml de
N.C
Volumen final
ppm de P en Vf
la Sln de 1000 concentracin en
(Vf) en ml
ppm de P
ml
0 ml
1 ml
2 ml
3 ml
2 ml
1 ml
3 ml
4 ml
5 ml
*

10.4
20.8
20.8
20.8
10.4
4..2
10.4
10.4
10.4
*

250
500
500
500
250
100
250
250
250
(-200ml)

0 ppm
2 ppm
4 ppm
6 ppm
8 ppm
10 ppm
12 ppm
16 ppm
20 ppm
14 ppm

* Medir 100ml del patrn de 12 ppm de P y mezclarlos con 100 ml del patrn de 16
ppm P. ( Usar pipeta volumtrica de 100ml, medir primero el de ms baja
concentracin y luego el de ms alta concentracin.

B. Pipetear 5 ml de c/u de los patrones de 0,2,4,6,8,10,12,14,16 y 20 ppm

de P en tubos de ensayo grandes, colocarlos en gradilla rotulada . Usar
una sola pipeta volumtrica de 5 ml, ordenar los patrones de menor a
mayor concentracin.

45

PARTE III.
PROCEDIMIENTO DE
COLORMETRO
(ESPECTRONIC
FOTMETRO, BAUSCH &LOMB).

OPERACIN DEL
20,
ESPECTRO

1. Encendido, Ajuste de cero

a. En el momento de activar el aparato dejar la perilla de
regulacin de cero al mnimo valor.
b. Dejar que los tubos calienten durante unos 10 minutos para
obtener mediciones confiables. El ajuste de cero hacerlo
solamente cuando hayan transcurrido unos 6 minutos.
NOTA: No debe haber tubo-prueba en el instrumento y la cubierta del porta_muestra
debe estar cerrada.

2. Seleccin de la longitud de onda.

Ajuste el control de longitud de onda al valor deseado.
3. Standardizacin del control de luz.
a. Llenar la celda (cubeta de muestra) cerca de la mitad con agua
pura (u otro lquido de referencia o blanco ).
b. Inserte dentro del porta_muestra alineando la marca de la
celda con la lnea del tenedor de muestra. Cierre la cubierta.
c. Ajuste el control de luz como sea requerido hasta leer 100% de
transmitancia.
4. Medida de la muestra.
a. Llenar el tubo prueba (cubeta) cerca de la mitad con agua pura
( u otro lquido de referencia ).
b. Remover la cubeta de referencia y reemplazar con el tubo que
contiene la muestra. Alinear la cubeta como antes. Cerrar la
cubierta.
c. El porcentaje de transmitancia, o absorbancia , puede ser
ahora medido directamente de medidor.

IMPORTANTE: es necesario repetir el paso 3 cada vez que una longitud de onda
diferente es usada. Cuando se ha fijado una longitud de onda de operacin,
peridicamente chequear la desviacin de 100 % ajustarla.

NOTAS:
1. Para las lecturas de patrones y muestras se deben escoger dos celdas que lean
igual ( una para patrones y otra para las muestras).

46

2. Se debe fijar a 100% T con aguada destilada.

NOTAS SOBRE OPERACIN COLORIMETRO.

1. Para calibrar el O tiene que estar fuera la celda con agua pura (lquido de
referencia ).
2. Se chequea el 100% T ( con lquido de referencia )y luego se introduce el tubo
con la muestra a la que le efectuar la lectura.
3. Se leen primero los estndares.
4. Cuando hay una solucin muy concentrada dentro de las muestras, la celda se
lava con agua destilada y se escurre bien antes de introducir la otra muestra.
5. Usar papel toalla ( o higinico doble hoja blanco, que es ms absorbente )
doblado para escurrir la celda y para secar o limpiar la celda se usa papel
kleenex.
6. Encender el equipo para leer una hora antes de empezar a agregar el reactivo
para desarrollo del color.
DESCRIPCIN Y OPERACIN DEL ESPECTROFOTOMETRO BAUSCH &
LOMB. ESPECTRONIC 20.
a. Controles frontales:
1. Interruptor de encendido/ control del cero. Es el interruptor principal que
enciende y apaga el aparato, tambin controla el cero utilizndola perilla. Se
calibra a 0% T, con el compartimiento de la muestra vaci y cerrado ,
utilizando para ello la perilla de control del cero.
2. Compartimiento de la muestra. El tubo conteniendo la muestra introducida al
compartimiento y se cierra.
3. Luz indicadora. Indica que el equipo ha sido encendido.
4. Control de longitud de onda. Este control selecciona la longitud de onda
analtica del instrumento. La longitud de onda seleccionada se indica sobre la
escala de longitudes de onda en la ventana prxima a la perilla. La escala tiene
dos colores, cada color corresponde al rango de operacin del fototubo del
instrumento. La graduacin en negro corresponde al rango bsico de 324 nm600 nm , y la graduacin en rojo para el rango de 600nm-950nm, de la
combinacin opcional del fototubo/filtro.
5. Control para fijar el 100% T. Este control se usa para colocar el medidor a
100% de T, con una solucin blanco de referencia. El 100% de T., debe
calibrarse cada vez que se cambie longitud de onda. Cuando se opera a una
longitud de onda fija por largo tiempo, peridicamente se revisa el 100% T,
reajustando la lectura si es necesario.

47

b. Operacin:
6. Encender el aparto con (1) y calentar 25 minutos.
7. Seleccionar la longitud de onda con (4).
8. Colocar la escala a 0% T., con el compartimiento de muestra vaco y la
cubierta del adaptador cerrado.
9. Colocar la solucin blanco de referencia en el compartimiento de
muestra y fijar el 100% T con (5).
10. Colocar la muestra problema, realizar la lectura ya se a con % T,
absorbancia, en la escala de lectura del aparato.
CUESTIONARIO.

1. Trazar curva de calibracin con las lecturas de %T obtenidas como las

soluciones patrones de 0,4,6,8,10,12,174,16 y 20 ppm de P , siguiendo el mismo
procedimiento que con las muestra.
2. Leer en la curva da calibracin las ppm de P correspondientes al % t de las
muestras.
3. Calcular las ppm de P en la solucin y en la muestra de suelos:

ppm en s ln * 25
5
/
ppm P suelo ppm P en s ln * 5
/

ppm P suelo

4. Haga un comentario acerca del comportamiento de la curva. Analice l grfico.

5. Disee una hoja par tabular los datos de No de suelo, testigo, lectura de
tramitancia, ppm en solucin, que adems de la informacin del mtodo de
anlisis empleado.
6. Disee otra hoja para llevar el registro de las curvas ledas para cada fecha.
7. Disear un formato que contenga la informacin necesaria para el manejo
adecuado y seguro de los reactivos a utilizar en la prctica.
8. Elabore un programa de computadora que calcule las ppm de P en la solucin
de lectura y en las muestras de suelo.
Recomendaciones:
a. Para elaborar el programa analice el comportamiento de la curva y vea:
es una sola curva, son varias curvas, hay puntos de inflexin, de donde a
donde se ve una tendencia constante, cmo es esa tendencia.
b. Evale para cada tendencia el coeficiente de correlacin
c. El programa debe grabarse en un diskette de 3.5 pul. SIN VIRUS. Si
tiene virus, perder el % asignado correspondiente.
d. El programa deber rotularse as: R. Suelos03. Grupo#

48

e. Debe presentarse una impresin del listado del programa.

f. Debe presentarse una impresin del INFORME DE ANALISI DE
SUELOS.
g. Debe presentarse una impresin de una corrida del programa.
h. Programas iguales tendrn una nota de 0.1 y perdern la nota del
reporte.
9. Elaborar y presentar la hoja de INFORME DE ANLISIS DE SUELOS, de
acuerdo al formato que se le anexa.

49

Prctica

Determinacin de Hierro
en una muestra de agua.
Referencia APHA, Pg. 159(11 Edicin), Pg. 208 ( 14 Edicin )
Mtodo de la ortofenantrolina
.
OBJETIVOS

Que el estudiante determine la concentracin de Hierro en una muestra de agua

establecida.

Que conozca la importancia del monitoreo de la concentracin de hierro en

aguas.

TEORIA

as exactitud de las mediciones espectromtricas depende crticamente de la

disponibilidad de celdas parejas, de buen calidad. Estas deben ser calibradas una
contra la otra a intervalos regulares para detectar diferencias que resulten de rayaduras,
marcas y desgaste. Tambin es importante la limpieza adecuada de los lados exteriores
( las ventanas) exactamente antes de que las celdas se inserten dentro de un fotmetro
o de un espectmetro. El mtodo ms adecuado es limpiar las ventanas con un papel
para lentes humedecido con metanol:, se permite que el metanol se evapore,
dejndolas ventanas libres de contaminantes. Se ha demostr4ado que este mtodo es
muy superior al procedimiento usual de limpiar las ventanas con un papel para lentes
seco, el cual tiende a dejar un residuo de pelusas sobre la ventana.
Determinacin de hierro en un agua natural.
El complejo de color rojo anaranjado que se forma entra hierro II y 1,10-fenantrolina
(ortofenantrolina) es til para la determinacin de hierro en el agua que se suministra.
El reactivo es una base dbil que reacciona para forma el ion 1,10-fenantrolinio.
50

FenH+ , en medio cido. La formacin del complejo con hierro se describe mejor pro
la reaccin.

Fe 2 3 FenH

Fe Fen 3 3 H
2

La constante de formacin para este equilibrio es 2.5 x 10 6 a 25C . El hierro II es

complejo cuantitativamente en el intervalo de pH entre 3 y 9 . Usualmente se
recomienda un PH de alrededor de 3.5 para evitar la precipitacin de sales de hierro,
por ejemplo: fosfatos.
Se necesita un exceso de agente reductor, por ejemplo hidroxilamina o hidroquinona,
para mantener el hierro en el estado +2 . Una vez formado el complejo, es muy
estable. Esta determinacin se puede llevar a cabo con un espectrofotmetro ajustado
a 580nm o con un fotmetro que est equipado con un filtro verde.

Comentario del valor recomendado por la organizacin panamericana de la

salud (OP, 1998).
Hierro.
Si el hierro es esencial par la nutricin del hombre, no se considera que el agua potable
sea una fuente importante de ese elemento. En concentraciones de 0.3 mg/L el hierro
mancha la ropa de lavado, las instalaciones de tuberas y da un sabor desagradable a las
bebidas. La presencia de hiero en concentraciones mayores a 0.3 mg/L suele provocar
la formacin de incrustacin en las tuberas y cuando tambin hay aluminio , causa
problemas de suciedad en el agua.
Como se emplea mucho los compuestos de hierro para el tratamiento del agua, se
selecciona un valor gua par el hierro de 0.3 mg/L como valor promedio.

Valores guas recomendados por el Ministerio de Salud Publica y Asistencia

Social de El Salvador.
Debido a que no es remoto que muchas fuentes de agua natural presenten
concentraciones arriba de los valores gua recomendado por la OPS, causados
probablemente por algn tipo de contaminacin industrial o domstica; cada pas
establece valores lmites de concentracin que tienen como base el prevenir la
intoxicacin o envenenamiento del organismo humano.
El Ministerio de Salud Pblica y Asistencia Social de El Salvador establece los valores
lmites, para elemento inorgnicos , bajo los cuales el agua se considera potable.
Dichos valores lmites, para elementos inorgnicos , bajo los cuales el agua se
considera potable. Dichos valores se encuentran resumidos en el cuados 5.1

51

Cuadro 5.1 Valores guas para elementos inorgnicos estableci pro el Ministerio de Salud
Publica y Asistencia Social de El Salvador bajo los cuales el agua se considera potable.

Determinacin Fisicoqumica
PH
Turbiedad (Unidades Jakson)
Slidos disueltos totales
Calcio (Ca)
Magnesio (Mg)
Hierro (Fe) total
Manganeso (Mg) total
Hierro + Magneso
Sulfatos ( SO 4-)
Fluoruros (F-)
Nitratos (NO 3-)

Norma
6.5 a 9.2
No mas de 10
No ms de 560 ppm (560-100ppm)
No ms de 75 ppm
No ms de 125 ppm
No ms de 0.3 ppm
No ms de 0.05 ppm
No ms de 0.3 ppm
No ms de 250 ppm
No ms de 1.4 ppm (27 a 32C )
No ms de 44.3 ppm

Fuente : Caldern y Cruz Monge (1994) . Normas de calidad de agua y control de

vertidos, editado por OPS, El Salvador.

MATERIALES

Reactivos:
-

HCl concentrado.

Reactivo de Hidroxilamina al 10 %. Se disuelven 10 g de NH 2OH.HCl en 100

ml de agua destilada.

Solucin amortiguadora de acetato de amonio 1. Se disuelven 250 g de

NH4C2H3O2 en 150 ml de agua destilada y se agregan 2 gotas de HCl
concentrado.

Orto-Fenantrolina ( 1,10-fenantrolina monohidrato) al 0.1%. Se disuelven 0.1

g de orto-fenantrolina en 100ml de agua redestilada y se agregan 2 gotas de HCl
concentrado.

Solucin de 1000ppm de Hierro. Titrisol Merck o equivalente.

Solucin de 100ppm de Fe. Pipetear 25 ml de patrn de 1000ppm en fraco

volumtrico de 250 ml , adicionarle 20ml de HCl 6 N, llevar a volumen a 25C.

Patrones de Hierro 2.

Hacer nueva curva de patrones al hacer nueva solucin amortiguadora, excepto se se hace una curva
nueva con cada lote de muestras.

52

Para patrones estndares de Hierro.

Si no se tiene Tetrisol entonces:
a. Preparar solucin madre de 1000ppm Fe pesar ------- g de
Fe(NH4)2(SO 4)2.6H2O y llevar a volumen de ------- ml con agua
destilada ( o mejor redestilada).
b. Solucin intermedia de 100ppm de Fe . Pipetear 25ml del patrn de
1000ppm en frasco volumtrico de 250ml , adicionarle 20ml de HCl 6N
, llevar a volumen con agua destilada ( o redestilada).
c. Solucin de 10ppm Fe , la cual se hace cada vez que se va a usar, a
partir de la intermedia. Diluir 5ml del patrn de 100ppm de Fe a 50 ml
de volumen final con agua redestilada.
Materiales.
-

Pipeta volumtrica de 2,3,4,5 ml.

Pipeta graduada de 1,5 y 10ml.

Frascos volumtricos de 25,50,100 y 250ml.

Beaker para descarte.

Beaker para pipeta.

Gradilla para tubos.

PARTE EXPERIMENTAL

PARTE

A.

ESTANDARES

DE

HI ERRO.

1. Preparar una serie de patrones pipeteando con exactitud los volmenes

necesarios de la solucin patrn de hierro ( preparar patrones de 0.001 a
0.010mg de hierro), diluir a 50ml con agua destilada y proceder como la
muestra ( ver tabla 5.1).
2. Leer en el espectrofotmetro a 510nm . Ajustar el aparato con agua destilada a
100% de transmitancia ( cero absorbancia).
3. Trazar la curva de calibracin que incluya un testigo

En trabajos de rutina se usan solamente tres patrones y el cero, 0.4,0.8,1.0

53

PARTE

B.

PROCEDI MI NT O

PARA

MUESTRA.

1. Mezclar cuidadosamente la muestra y tomar una laicota de 50 ml- hacerlo por

duplicado. Llevar a blanco 3.
2. Colocar en un beaker de 125ml . Agregar 2ml de cido clorhdrico concentrado
y 1 ml de reactivo de hidroxilamina. Tapar cada vidrio reloj y poner agitador de
vidrio pequeo.
3. Agregar de 2 a 3 perlas de vidrio y calentar hasta ebullicin para tener la
seguridad de la disolucin de todo el hierro., se continua la ebullicin hasta que
el volumen haya reducido de 15 a 20ml.
4. Enfriar a la temperatura ambiente y se pasa a un baln volumtrico de 100ml.
Transferir cuantitativamente.
5. Diluir hasta el aforo con agua destiladas.
6. Mezclar bien y dejar reposar durante 15 minutos para obtener el mximo
desarrollo de color.

PARTE

C.

HI ERRO

SOLU BLE.

Proceder de la misma manera que para el hierro total, pero filtrando previamente la
muestra por papel Whatman N 42.

el Blanco consiste en tomar alicota de 50 ml de agua destilada y proceder de la misma forma que para la
muestra.

54

Prctica

Espectroscopia Ultravioleta.
Chequeo de Espectrofotmetro.
FUNDAMENTO TEORICO

a validez de las lecturas en un espectrofotmetro debe ser , a menudo

comprobada, verificando el chequeo de propiedades espectrales conocidas, tales
como: escala de longitud de onda y escala de absorbancia o exactitud fotomtrica.

ESCALA DE LA LONGITUD DE ONDA.

Para la calibracin de las regiones ultravioleta y visible , se han sugerido varios
estndar:
5. El espectro de emisin de una lmpara de mercurio.
6. Lneas de emisin del hidrgeno o deuterio, observador en la salida de
una lmpara estndar U.V.
7. Espectro de absorcin del xido de holmio que puede estar como
vidrio o como solucin.
8. El espectro de vapor de benceno. Esta ltima tcnica, es la ms
conveniente para un chequeo rpido en un laboratorio qumico.
ESCALA DE ABSORBANCIA O EXACTITUD FOTOMTRICA
Para propsitos prcticos, se verifican chequeos con soluciones simples que se
preparan fcilmente. As por ejemplo:

55

a. Una solucin de KNO 3 10 g/L en agua destilada debe dar una absrobancia de
0.70-0.71 a una longitud de onda ( ) de 302.0 nm . Y bajo las condiciones
que especifique la bibliografa oficial.
b. Usando solucin de dicromato de potasio 120 mg/L .En H 2SO4 0.01N
Otro chequeo sobre un amplio rango de longitud de onda se puede realizar con una
solucin alcalina de cromato de potasio, dos formas alternativas de preparar esta
solucin son las siguientes:
a. Disolver 0.004 gr de K 2CrO4 grado reactivo, en suficiente KOH 0.05N para
obtener 100 ml de solucin. La solucin de KOH se prepara disolviendo 0.33g
de KOH grado reactivo en suficiente agua destilada para 100ml de solucin.
b. Disolver 0.0030g de K 2CrO7 grado reactivo, en suficiente solucin de KOH
0.05N para obtener 100ml de solucin, esta solucin funciona segn la
ecuacin siguiente:
K2Cr2O7 2KOH 2K2CrO4 H 2O

Produciendo el equivalente de 0.004g de K 2CrO4

La solucin debe ser mantenida en un frasco de vidrio ordinario con tapn de vidrio y
no debe exponerse a la luz innecesariamente . La solucin no debe verterse de la
botella.
Para las calibraciones debajo de 260. La solucin es estable por un perodo de 6 meses.
Para determinaciones a longitudes de onda superior a 260 nm. La solucin es estable
por un perodo de 5 aos.
La absorbancia de esta solucin estndar debe ser medida en una celda de 1cm.
Usando agua destilada como blanco, la temperatura de la solucin debe ser cercana a
25 C.
Marcadas discrepancias, en los valores obtenidos, usualmente indican un mal ajuste en
la escala de longitud de onda o bien excesiva luz dispersa. La linealidad de la respuesta
del detector puede ser mediad con cualquiera de estas dos soluciones usando celdas de
espesor diferentes.

56

PARTE EXPERIMETAL

1. CHEQUEO DE PROPIEDADES ESPECTRALES DEL EQUIPO

A- Verificacin de la exactitud e la longitud de onda.
I. Espectro de Vapor de Benceno.
Se coloca 1 gota de benceno puro en el fondo de una celda de slica de 1 cm de
espesor , tapar la celda y correr lentamente la regin ultravioleta se obtendr un
espectro como el de la figura 1, con picos de valores mximos : 236.3, 241.59,
247.10, 248.08, 252.86 nm.
De acuerdo a as especificaciones de la ASTM ( American Society for Testing and
Materials) debe existir acuerdo entre la exactitud de las longitudes de ondas dadas y
las obtenidas en el instrumento en cuestin , esta exactitud es alrededor de 0.5 nm,
para muchos espectrofotmetros. Para dicha verificacin utilizaremos el rango de
longitud de onda ( ) de 280-220 nm.
II. Espectro de Absorcin del Oxido de Holmio.
Colocar un filtro de xido de Holmio en el portacelda del equipo y correr el rango
de longitud de onda de 540-260 nm.
Obtener el espectro con picos de absorcin mximo a valores de :

536.4 nm.
453.4 nm.
418.5 nm.
360.8 nm.

1nm.
1nm.
1nm.
1nm.

287.6 nm. 1nm.

279.3 nm. 1nm.
B. Verificacin de la exactitud fotomtrica.
Con solucin de dicromatro de potasio a 120 mg/L en H2SO 4 0.01N.
Absorbancia esperada

350 nm.

1.558

313 nm.

0.702

257 nm.
235 nm.

2.107
1.782

0.03 1.528 1.588

0.02 0.682 0.722

0.035 2.072 2.142

0.030 1.752 1.812

57

NOTA: Cuando el valor de la lectura es superior a 3.000 de absorbancia o presenta

valores negativos de transmitanca, ser necesario realizar diluciones hasta obtener un
valor adecuado. El equipo posee una capacidad para almacenar 999 mtodos , de los
cuales hay 9 diferentes ya grabados. En ellos los ms utilizados son : el 2 SCAN
( equivales a un barrido de longitudes de onda) y el 4 CONCENTRATION.

58

Prctica

Determinacin del contenido de

Ciano-Cobalamina ( Vitamina B12)
en un inyectable .
Metodo de anlisis : Espectrofotometra .

FUNDAMENTO TEORICO

a solucin inyectable de vitamina B 12

es una solucin estril de
cianocobalamina en agua, la cual se isotoniza por la adicin de cloruro de
sodio. Posee un contenido no menor del 95% y no mayor del 115% de la
cantidad rotulada de CIANOCOBALAMINA ANHIDRA C 63H80CoN14P.

IDENTIFICACIN.
El espectro de absorcin se da en el rango de 300-400nm 0para la solucin empleada,
la cual exhibe un mximo de absorbancia, similar al de la cianocobalamnia U.S.P
referencia estndar.

ENSAYO.
Diluir con agua un volumen exactamente medido de solucin inyectable de
cianocobalamnia, equivalente a no menos de 3000 g. . La dilucin debe llevarse hasta
obtener una concentracin de 30g/ml . Para llevar una referencia, pesar exactamente
una cantidad de cianocobalamnia U.S.P . Referencia Estandar y luego obtener una
concentracin de

59

30g/ml . Proceder a determinar la absorbancia de ambas soluciones , en celdas

de 1cm y una longitud de onda de 361 nm. Usar como blanco agua.

CALCULO

Determinar el porcentaje de pureza de la vitamina B 12 por la siguiente expresin

matemtica
Cmx

Cst * Amx * FD
Ast

Donde : Cst = concentracin en ppm, del estndar.

Cmx = concentracin en ppm de la muestra.
Amx = Absorbancia de la muestra.
Ast = Absorbancia del estndar.
FD = Factor de dilucin.

60

Prctica

9.a
Espectroscopia de absorcin en el
Infrarrojo.
FUNDAMENTO TEORICO

a regin infrarroja del espectro incluye la radiacin con nmeros de onda

comprendidos entre los 12800 y los 10 cm -1 , lo que corresponde a longitudes de
onda de 0.78 a 1000 um. Tanto desde el punto de vista de las aplicaciones como de
los instrumentos , es conveniente subdividir el espectro infrarrojo en tres regiones
denominadas: infrarrojo cercano , medio y lejano.
Hasta la fecha, la gran mayora de las aplicaciones analticas se han restringido al uso
de una parte de la regin del infrarrojo medio comprendida entre los 4000 y los 400
cm-1 ( de 2.5 a 25 um). Sin embargo en la literatura analtica actual se van encontrando
un nmero creciente de aplicaciones de la espectroscopia infrarroja cercana y lejana.
La espectroscopia infrarroja tiene una gran aplicacin en el anlisis cualitativo y
cuantitativo. Su principal utilizacin ha sido la identificacin de compuestos orgnicos,
que por lo general presentan espectros complejos en el infrarrojo medio con
numerosos mximos y mnimos que resultan tiles al efectuar comparaciones . En
muchos casos, el espectro infrarrojo medio de un compuesto orgnico proporciona
una huella nica , con unas caractersticas que se distinguen fcilmente de los mode los
de absorcin de otros compuestos; solo los ismeros pticos absorben exactamente de
la misma forma.
Para que una molcula absorba radiacin infrarroja debe experimentar un cambio neto
en el momento dipolar como consecuencia de su movimiento vibratorio o rotatorio,
pudiendo as actuar recprocamente , el campo alternativo de la radiacin, con la
molcula y causar cambios e su movimiento.
Cuando la frecuencia de la radiacin iguala a la frecuencia de una vibracin o rotacin
natural de la molcula , ocurre una transferencia de energa que da como resultado un
cambio en la amplitud de la vibracin molecular y por tanto absorcin de la radiacin.

61

El anlisis por espectroscopia de absorcin infrarroja se aplica principalmente en el

campo de la elucidacin de estructuras y en la determinacin de las fuerzas de enlace,
as como en los controles de calidad e identidad y para seguir procesos de reaccin.
Adems de su aplicacin como herramienta para el anlisis cualitativo, las medidas en
el infrarrojo tambin estn encontrando un uso cada vez mayor en el anlisis
cuantitativo. En este caso , su elevada selectividad a menudo hace posible la
cuantificacin de una sustancia en una mezcla compleja, no siendo necesario una
separacin previa. El principal campo de aplicacin de este tipo de anlisis se halla en
la cuantificacin de contaminantes atmosfricos que provienen de procesos
industriales.
Otra utilizacin importante de la espectroscopia de absorcin en el infrarrojo es como
sistema de deteccin en cromatografa de gases, donde su potencial para la
identificacin de compuestos se combina con la notable capacidad de separacin del
os componentes de mezclas complejas que presentan la cromatografa de gases.

62

EQUIPO

DESCRIPCIN
Y
OPERACIN
INFRARROJO IRAFFINITY_1

63

DE

ESPECTROFOTOMETRO

CHEQUEO SEMANAL.
Correr el espectro de poliestireno con el objetivo de determinar su funcionamiento.
Debe hacerse de la siguiente forma: trazar primero la lnea base sin muestra, colocando
la pluma a 95% de transmitancia, una vez trazada la lnea base, reajustar al 100% de T
y con el 100% correr el espectro del poliestireno en el mismo papel que ha sido
trazada la lnea base. El espectro del poliestireno contienen informacin suficiente
para determinar la exactitud del aparato y su calibracin.

PROCEDIMIENTO.

PREPARACIN DE MUESTRAS EN EL I.R.

Una parte sencilla, pero importante en la obtencin de espectros infrarrojos es la
preparacin de muestras, ya que de ellas depende, as como del espectrofotmetro
utilizado la calidad del espectro obtenido.
Pueden registrarse espectros infrarrojos de compuestos gaseosos ,lquidos , slidos y
de soluciones. La sustancia cuyo espectro se desea obtener , se coloca en una celda
adecuada , entre la fuente de radiacin infrarroja y la rendija del monocromador.
ESPECTRO DE GASES
Los espectros infrarrojos de sustancias en fase gaseosa difieren bastante de las
correspondientes a fases condensadas, debido principalmente a la libre rotacin de las
molculas y a que la interacciones intermoleculares son mnimas en los gases, esto da
lugar en los espectros de compuestos sencillos a la aparicin de una estructura fina de

64

bandas, debido a las lneas de rotacin, que desaparecen por completo en los espectros
de fases condensadas.
Las celdas de absorcin para gases estn formadas por un tubo metlico o ms
corrientemente de vidrio a cuyos extremos van pegadas las ventanas de material
transparente ( normalmente de NaCl o KBr ).
La celda va provista de una o dos llaves para la entrada y salida del gas, operacin que
suele realizarse mediante una instalacin ordinaria de vacio.
La longitud mas conveniente de las celdas para gases es de 5-10 cm.
ESPECTROS DE LIQUIDOS
Se utilizan dos tipos de celdas: desmontables y fijas. En las celdas desmontables se
colocan de 2 a 3 gotas de muestra lquida en estudio , entre dos ventanas de material
transparente , el espesor aproximado de la pelcula se regula mediante un separador de
plomo , estao o tefln de grosor adecuado (entre 0.005 y 0.1 mm). La s celdas fijas o
de espesor fijo son anlogas a las desmontables, pero el separador va pegado
hermticamente a las dos celdas utilizando separadores de estao o plomo
amalgamados. Una de las ventanas lleva dos finos conductos (aproximadamente 1 mm
de dimetro ) que sirve para llenar la celda mediante un capilar o una jeringa de
inyeccin.
El material delas ventanas puede ser cloruro de sodio ( 0.2 a 16 ). Bromuro de
potasio ( 1.0 a 25 ) , yoduro de cesio ( 0.1 a 50 ) , cloruro de plata ( 2.5 a 22 ) , con
estos materiales no debe emplearse en ningn caso solventes liquido , acuoso o
alcohlicos. Para soluciones acuosas se usan ventanas de fluoruro de calcio ( 2.1 a 8
) y de istran 2 (0.6 a 14 ).
Para obtener buenos resultados es preciso seguir minuciosamente la pauta en las
tcnicas preparativas as como las condiciones experimentales referidas al
espectrofotmetro , pues dada su sensibilidad la variacin de estas, supone diferencias
que en algunos casos pueden ser importantes , sobre todo en el aspecto cuantitativo.
ESPECTROS DE SLIDOS.
Cuando la muestra es un slido se puede preparar:
a. Pastillas o comprimido de bromuro de potasio.
b. Dispersin en nujol (parafina lquida).
A- PREPARACIN DE PASTILLAS DE BROMURO DE POTASIO.
El dispositivo est diseado para presionar una mezcla de bromuro de potasio y la
muestra problema, en un disco delgado de 13 mm de dimetro , el cual se usa en la
determinacin.
La pastilla comprimida puede ser usada inmediatamente o conservada en atmsfera
seca para determinaciones futuras.

65

El dispositivo es capaz de soportar presiones de 25000 libras, sin embargo , esta sujeta
a corrosin y debe utilizarse debidamente para prevenir fracturas de sus componentes.
El uso de bromuro de potasio , calidad analtica , es lo ms adecuado , ya q ue el
material impuro nos dar interferencia, el KBr grado espectroscpio de Harshaw cuyo
graneado va de 200-325 mallas , es el ms indicado y debe permanecer en un desecador
o preferiblemente en una estufa al vaci a 105C.

TCNICA
1. Secar el Bromuro de Potasio a 105C por 1 hora
2. Tomar aproximadamente 2 a 5 mg de muestra, previamente pulverizada y
secada , con la punta de la micro esptula y colocarla en el mortero de gata.
3. Aadir ms o menos 100 mg de Bromuro de Potasio.
4. Mezclar bien y homogenizar en el mortero.
5. Disponer el equipo para comprimir la pastilla.
6. El dispositivo ya montado se coloca en la prensa , para comprimir , aplicndole
1 a tonelada mtrica de presin.
7. Aplicar vaci durante 2 minutos , ya que de esta forma el KBr experimente una
especie de fusin obtenindose una pastilla bastante transparentes en la que la
sustancia se encuentra en forma de dispersin de grano muy fino.
8. Aplicar de nuevo ms presin hasta alcanzar de 2 2 toneladas mtricas por
minuto.
9. Quitar el vaci y luego la presin.
10. Tomar el dispositivo y colocar la pastilla en un soporte adecuado, luego tomar
el espectro . La transferencia de las pastillas obtenidas dependen mucho de la
humedad de la mezcla, por lo que conviene secar muy bien la sustancia y el
KBr.

PREPARACIN DE LA DISPERSIN EN NUJOL.

El liquido ms comnmente utilizado para dispersin es un aceite mineral que se
conoce con el nombre de Nujol, ste es transparente en el infrarrojo excepto en las
zonas de absorcin caractersticas de los enlaces C-H aproximadamente 2950,1450 y
1375 cm-1 . Se debe de uasr Nujol ( parafina lquida) calidad espectroscpica.

66

TCNICA
1. Colocar 1 miligramo de muestra slida en un mortero de gata.
2. Pulverizar la muestra.
3. Aadir 1 o 2 gotas de Nujol , mezclar bien hasta formar una pasta homognea.
4. Depositar una pequea cantidad en la ventana con movimiento rotativo a
manera de obtener una pelcula fina evitando inclusin de aire , colocar en el
dispositivo portado de celdas , luego corre el espectro.

PREPARACIN DE MUESTRAS LIQUIDAS (SOLVENTES PUROS)

En las celdas de NaCl , aplique una gota de solvente, monte la celda , corra el espectro
de la muestra y determine la identidad con la bibliografa adecuada.

PREPARACIN DE SOLUCIONES
Las muestras slidas pueden registrarse tambin en forma de solucin en un solvente
apropiado. El principal inconveniente es el encontrar un solvente apropiado que sea
transparente en la regin a estudiar. Por ello, para obtener el espectro completo de
una sustancia disuelta es necesario utilizar por lo menos, 2 solventes elegidos
adecuadamente . Los compuestos ms transparentes en infrarrojo son los formados
por pequeas molculas no polares, con tomos pesados, siendo el CS 2 y el CCl4 los
solventes ms utilizados.
Es necesario disponer de parejas de celdas construidas con cuidado para asegurar
idntico espesor .
La muestra de este caso, se prepara como un muestra lquida , usando celdas
desmontables o celdas fijas.

MANEJO DEL EQUIPO DE ABSORCION INFRAROJA

67

IRAFFINITY_1

PROCEDIMIENTO GENERAL PARA AL ANALISIS CUALITATIVO DE MUESTRAS POR EL METODO

DE ABSORCION INFRAROJO SHIMADZU IR-AFFINITY_1
A. Encender el espectrofotmetro IR y el computador
B. Inicializar el programa IR-Solution
C. Conectar el computador por medio del programa con el espectrofotmetro IR utilizando el
comando Measure, comando Admin, Inicializar. Dejar un tiempo de equilibrio de 15
minutos.
D. Permitir que el programa registre las condiciones del equipo y que reconozca
automticamente
el accesorio (celda a utilizar)
E. Dejar correr un barrido de las condiciones iniciales del equipo con la unidad de celda
armada
sin muestra como sigue: utilizar el comando Measure, y presionar BKG para obtener el
espectro blanco (Background).
F. Preparacin de la muestra slidas o liquidas (ver tcnica de preparacin) y colocacin de
sta
en celda adecuada.
G. Obtener los espectros por separado de cada una de las muestras ( estndar) a analizar:
i) Acoplar la celda con muestra (o estndar) en la unidad para la celda del equipo
infrarrojo Shimadzu IR-Affinity.
ii) Analizar la muestra presionando el comando el comando Measure, colectar la
informacin de la muestra en el espacio coment y presionar en Sample para
obtener
el espectro correspondiente para identificar la muestra de los 4000 a los 500 cm-1
H. Limpiar la celda de la manera adecuada (segn la tcnica de preparacin de la muestra
utilizada)
I. Comparar los espectros obtenidos con el patrn de la base de datos del equipo.
J. Para el espectro obtenido identificar los picos caractersticos, segn metodologa vista en
clase.

Obtencin de espectros cuando se utiliza celda desmontable de bromuro de potasio para el

equipo infrarrojo Shimadzu IR-Affinity_1.
- Limpiar el material de ventana de la celda de Bromuro de potasio con algodn impregnado
con acetona grado ACS.
- Armar la celda sin estndar o sin muestra
- Colocar la celda en el compartimiento para celdas espectrofotmetro IR y obtener el
espectro de blanco (Background).
- Sacar la celda, desarmarla y volver a limpiar la celda de la misma forma que se indic arriba
(con algodn impregnado con acetona grado ACS).

68

- Mezclar la muestra solida con nujol en el mortero de gata de acuerdo a la tcnica de

preparacin para este caso.
- Colocar esta mezcla en una cara de la ventana limpia y seca para luego colocar la otra
ventana sobre la anterior, permitiendo que la muestra se distribuya uniformemente y sin
burbujas.
- Armar con cuidado la celda
- Colocar la celda en el Espectrofotmetro IR y obtener el espectro Infrarrojo del estndar o
muestra desde los 4000 a los 400 cm-1
- Sacar la celda y volver a limpiar la celda de la misma manera que antes (con algodn
impregnado con acetona grado ACS)
- Al finalizar dejar las ventanas de celda limpia y seca en desecador.

Para la preparacin de la pastilla de KBr se sugieren las siguientes proporciones:

a) 2-5 mg muestra por 100 mg de KBr
b) 50-100 mg muestra por 150 mg de KBr
c) 25 mg muestra por 100 mg de KBr

69

70

71

72

PARA IDENTIFICACION DE POLIMEROS

73

74

Prctica

9.b
Determinacin cuantitativa de
mezclas por examen al Infrarrojo.
OBJETIVO

Ilustrar los procedimientos y tcnicas de espectroscopia infrarroja cuantitativa

utilizando el mtodo de la lnea base .

FUNDAMENTO TEORICO

omo hemos estudiado anteriormente la cantidad de muestra que intercepta a una

determinada radiacin, en un espectrofotmetro , produce una seal que es
proporcional a la cantidad de energa absorbida por la muestra a una frecuencia de
longitud de onda dada. Esta relacin se expresa matemticamente por la ley deber Lambert, en la forma:
A E b c

En anlisis cuantitativa por espectroscopia infrarroja, la absortividad a o E no es

necesario conocerla, debido a que se pueden preparar estndares con concentraciones
conocidas (Cs). En estas condiciones, cuando se analiza una muestra desconocida, sta
debe trabajarse en la misma frecuencia con el estndar.
De estos tendremos que :
AS ES b cS

AM EM b cM

75

y podemos escribir que :

AM EM b cM

AS
ES b cS

Si se usan las mismas celdas ( exactamente el mismo espesor) y a la misma frecuencia

de trabajo, se tiene que:

AM cM

AS
cS

entonces

cM

AM cS
AS

Generalmente es difcil determinar el valor de transmitancia o absorbancia deb ido a

que hay un sobrelapamiento de bandas o que estn muy prximas. Es estos casos se
hace necesario el uso de la linea base.
En esta prctica se obtendr el espectro de absorcin del benceno, el cual muestra
picos de absorcin caractersticos que pueden utilizarse para determinaciones
cuantitativas.

PROCEDIMIENTO

Prepara soluciones estndares de benceno en tetracloruro de carbono a las

concentraciones porcentuales en peso: 15,20,30 y 50%,
Obtener los espectros infrarrojos del benceno y tetracloruro de carbono puros.
Obtener el espectro de absorcin IR de la solucin al 30% y seleccionar un pico
patrn. Determinar el espectro de las soluciones restantes y medir la transmitancia del
pico seleccionado.
El instructor proporcionar una solucin problema, determine su concentracin
porcentual en peso utilizando la curva de calibracin elaborada.

76

Prctica

10
Fotometra de Llama.
FUNDAMENTO TEORICO

La espectroscopia de Emisin de Llama , conocida tambin por Espectroscopia de

Llama, es un mtodo espectral en el que la excitacin se logra rociando una solucin
de la muestra en una llama.
La solucin de la muestra se pulveriza en una llama mediante un nebulizador, el cual
transforma la solucin de la muestra en un aerosol constituido por diminutas gotitas
de lquido. A continuacin ocurren una serie de procesos encadenados; estos procesos
al final dan como resultado una mezcla de tomos del analito, iones de analito:
molculas de la muestra, molculas del xido del analito y con seguridad una variedad
de especies moleculares y atmicas que se forma n por reacciones entre el
combustible, el oxidante y la muestra . Debido a la gran variedad de procesos
complejos que tiene lugar , no es sorprendente que la atomizacin sea la etapa ms
crtica en la espectroscopia de llama, y la que limita la precisin de estos mtodos. Es
precisamente por la naturaleza crtica de la etapa de atomizacin, que resulta
importante comprender y conocer las caractersticas de las llamas y las variables que
las afectan.
Las funciones de la llama en la espectrometra de emisin son:
1. Convertir los constituyentes de la muestra lquida al estado de vapor.
2. Descomponer estos constituyentes en tomos o molculas simples.
3. Excitar electrnicamente una fraccin de la especie atmica o molculas
resultantes .
Al igual que con otros tipos de espectroscopia de emisin , el control de la fuente es el
aspecto ms importante del mtodo.
Los mtodos fotomtricos de llama han sido aplicados en anlisis cuantitativo de gran
variedad de materiales , entre ellos; lquidos biolgicos, suelos, materiales vegetales,
cemento , vidrio y aguas naturales. La aplicacin mas importante es para la
determinacin de los metales alcalinos.
77

EQUIPO

FOTMETRO DE LLAMA COLEMAN MODELO 51 Ca

a, DESCRIPCIN.
Controles del panel frontal . ( Fig 1. )
1. Encendido y apagado ( ONOFF )POWER.
Interruptor de dos posiciones:
APAGADO (OFF): El poder elctrico est apagado.
ENCENDIDO(ON): El poder elctrico esta encendido.
2. Luz indicador (PILOT LIGHT).
78

Cuando enciende indica que el interruptor de poder esta encendido.

3. Control de Mezclado (MIXER CONTROL).
Con un destornillador se ajusta la aguja de la vlvula empleada para regular la
proporcin de oxigeno y gas combustible.
4. Interruptor del encendedor (IGNITOR SWITCH).
Interruptor elctrico. Cuando se mantiene presionado permite que el
encendedor encienda el gas combustible.
5. Apagado Encendido del gas (GAS , OFF-ON):
Dos posiciones de la vlvula de flujo de gas. APAGADO: detiene el flujo de
gas hacia el quemador.
6. Control de ajuste del cero (ZERO ADJUST CONTROL).
Ajustador continuo para colocar el medidor en un valor bajo cero, mientras es
atomizada una muestra de baja o cero concentracin.
7. Control de estandarizado (STANDARIZE CONTROL).
Ajustador continuo usado para colocar el valor del estndar ms alto.
8. Selector de filtro (FILTER SELECTOR).
Selector de posiciones mltiples, usado para seleccionar el filtro especfico para
el elemento que se quiera determinar.
9. Medidor de cero (METER ZERO).
Un tornillo ajustado para colocar el cero mecnico del medidor con el
interruptor de poder (1) en posicin APAGADO.
10. Bandeja removible la cual acomoda 20 depsitos de muestra.
11. Porta muestra (SAMPLE TABLE)
Acomoda la bandeja de muestra, tiene dos posiciones :
Posicin superior: Permite aspiracin de la muestra.
Posicin inferior: permite girar la bandeja a la posicin de la prxima muestra
para que sea aspirada.
CONTROLES DE LOS TANQUES DE OXIBENO, GAS COMBUSTIBLE Y
MEDIDORES (Fig 3 y 4).
12. Medidor de presin del tanque (TANK PRESSURE GAUGE).
Indica la presin en el tanque de gas.
13. Indicador de la presin de salida (OUT PUT PRESSURE GAUGE).
Indica la presin con la cual el gas esta siendo suministrado desde el regulador.
14. Regulador de la presin de gas (GAS PRESSURE REGULATOR ).
Usado para impedir flujo de gas del tanque y tambin para dar presin de
salida, con la cual est siendo suministrado el equipo. Usado en combinacin
con el indicador de presin de salida.

79

15. Vlvula del tanque (TANK VALVE).

Esta vlvula es parte del ensamble y se usa para liberar el flujo de gas
procedente del tanque.
OPERACIN DE ENCENDIDO.
1. Presionar el interruptor de poder (1) en ENCENDIDO.
2. Chequear que la vlvula ENCENDIDO-APAGADO del gas (5) est en
ENCENDIDO (ON).
3. Presionar el interruptor del encendedor (4) y mantenerlo en esa posicin.
4. Abrir la vlvula del tanque del propano (15) y el regulador de presin (14) a una
presin de 3-5 libras.
5. Soltar el interruptor del encendedor cundo el gas encienda.
6. Abrir la vlvula del tanque de oxgeno (15) y lentamente ajustar hasta obtener
13 lbs de presin con el regulador de presin del tanque de oxgeno(14).
7. Llevar el selector de filtro (8) a la posicin apropiada.
8. Dejar 10 minutos para que el instrumento se estabilice.
9. Llenar los depsitos con las soluciones estndar , colocndolas en la bandeja de
muestra (10) y tabla de muestra(11).
10. Proceder para llevar a cero con el control ajuste del cero (6) . Usando agua bi
destilada o el estndar de ms baja concentracin.
11. Calibrar a 100 con el estndar de ms alta concentracin usando el control de
estandarizacin. (7).
12. Tomar la lectura delos otros estndares para elaborar curva de calibracin y de
las muestra problemas, para determinar su concentracin a partir de la
concentracin de la curva.
13. Es conveniente verificar los pasos 10 y 11 para chequear la calibracin.
OPERACIN DE APAGADO.
1. Cerrar la vlvula del tanque de oxgeno (15) y observar que los controles de
presin 12 y 13 indiquen cero. Luego cerrar el regulador de oxgeno (14) , la
llave debe de girar libremente.
2. Cerrar la vlvula del gas propano (15) y observar qu controles de presin
indique cero. Luego cerrar el regulador (14), la llave debe girar libremente.
3. La vlvula del gas (5) debe quedar en encendido (ON) con el objeto de que
cualquiera escape de gas que ocurre no se acumule en el aparato.
4. Apagar el interruptor del poder.
5. Esperar que el instrumento se enfre y cubrirlo.
NOTA: Es recomendable que el equipo se mantenga en posicin ENCENDIDO
(ON) el interruptor de poder, a fin de proporcionarle estabilidad de deshumidificacin.

80

PARTE EXPERIMETAL

1. Elaboracin de curvas de calibracin para Sodio y Potasio.

Preparacin de estndares para elaborar curva de calibracin:
a. Para preparar la solucin estndar de sodio (Na) proceder en la forma
siguiente:
1. Pesar 2.5421 g de NaCl, el cual ha sido previamente desecado
por 5 horas a 100C.
2. Diluir a 1000 ml de agua destiladas, se tiene as una
concentracin de 1000 ppm. De Na
3. Partiendo de la solucin anterior prepare una serie de 4
diluciones cuyas concentraciones sean:
a. 5 ppm
b. 10 ppm . Preparar de cada uno 50 ml.
c. 15 ppm
d. 20 ppm
b. Para preparar la solucin estndar de potasio (K) proceda en la forma
siguiente:
1. Pesar 1.9067 g de KCl previamente desecado por 5 horas a
100C
2. Diluir a 100000 ml con H 2O destilada , esta solucin tiene una
concentraciones de 1000 ppm de K.
Partiendo de la solucin madre prepare una serie de 4 diluciones , cuyas
concentraciones son:
a.
b.
c.
d.

10 ppm.
20 ppm
30 ppm
40 ppm

c. Determine las lecturas de intensidad de emisin de cada una de las

diluciones preparadas , en el fotmetro de llama, calibrando el cero con
agua destilada y el 100 con el estndar de ms alta concentracin y
elaborar curva de calibracin graficando intensidad de emisin contra
concentracin.

81

Prctica

11
ABSORCIN ATMICA
Determinacin de
metales en aguas
FUNDAMENTO TEORICO

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83

84

85

86

87

88

89

90

91

Generalidades sobre al anlisis de metales pesados en aguas

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93

94

PARAMETROS DEL EQUIPO PARA LA DETERMINACION DE HIERRO EN

AGUA POR ABSORCION ATOMICA

Preparar los estndares de hierro de acuerdo a las siguientes concentraciones:

Leer las absorbancias para los estndares de la curva de calibracin.

Leer las absorbancias de las muestras problemas a analizar
Calcular la concentracin del metal en la muestra original

95

REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS

96

Prctica

12
Refractometra.
FUNDAMENTO TEORICO

uando un rayo de luz penetra en un medio en que su velocidad de propagacin es

diferente (con respecto al medio original), el rayo sufre una desviacin conocida
con el nombre de REFRACCION.
El fenmeno puede representarse de la siguiente forma:

= ngulo de incidencia
= ngulo de refraccin.

La expresin matemtica para evaluar la refraccin se denomina INDICE DE

REFRACCIN y se expresa como :
n

sen
sen

Con respecto al aire

El ndice de refraccin de una sustancia se determina ordinariamente, midiendo el

cambio de direccin ( refraccin ) de una radiacin colimada cuando pasa de un medio
a otro. Es mucho mas cmodo medir el ndice de refraccin respecto a algn medio
distinto del vaco y se emplea a menudo el aire, como un estndar para este objeto.
Junto con la densidad, el punto de fusin y el punto de ebullicin, el ndice de
refraccin es una de las constantes fsicas clsicas que puede usarse para describier una
especie qumica.
Aunque es una propiedad no especfica , pocas sustancias tienen ndices de refraccin
idnticos a una temperatura y una longitud de onda dadas. As, esta constantes es til

97

para confirmar la identidad de un compuesto y medir su pureza. Adems , se emplean

determinaciones de ndices de refraccin para el anlisis cuantitativo de mezclas
binarias; y combinado con otras mediciones, el ndice de refraccin ofrece informacin
de la estructura y el peso molecular de una sustancia.
El ndice de refraccin es valioso en anlisis cualitativo y cuantitativo ; pero , para que
los resultados sean confiables es necesaria una calibracin del aparato.
La calibracin puede hacerse midiendo el ndice de refraccin de sustancias puras. Por
ejemplo a 25C el aguan ( N=1.3325); el cloroformo (N=1.44283); el benceno (
N=1.4979). Si al realizar la medicin de los lquidos anteriores, no se observa, e l
valore indicado, se puede efectuar una correccin de dos maneras:
a. Haciendo una correccin de ndice de refraccin experimental mediante
la frmula siguiente:

N REAL NOBSERVADO T x Factor de correccin

N REAL NOBSERVADO T AMBIENTE T TERICO * 4 x10 4

b. Ajustando directamente el aparato ( cuando posea un dispositivo de
ajuste ).
Otra condicin para obtener el anlisis seguro de una muestra exige que el sistema a
cuantificar presente una curva de composicin-ndice de refraccin casi lineal, para los
componentes de inters.
Generalmente esta condicin se cumple para rangos pequeos de concentracin y
componentes qumicamente similares; sin embargo , algunos sistemas presenta
mximos o mnimos en sus valores que se desvan de la curva de calibracin.
La REFRACTOMETRIA, presenta las siguientes ventajas:
a. Facilidad y rapidez
b. No destruya la muestra
c. Requiere una cuantas gotas de muestra.

PARTE EXPERIMENTAL

1. CALIBRACIN DEL EQUIPO:

Determinacin del ndice de Refraccin de sustancias puras. Limpiar los prismas
del refractmetro con alcohol etlico, poner de 2 a 3 gotas del lquido a ser
analizado y cerrar el prisma. Leer la temperatura a la cual se hace la determinacin.
Medir el ndice de refraccin de cuatro lquidos puros proporcionados por su
instructor y comparar los valores experimentales con los valores tericos.

98

Prctica

12.a
Determinacin Refractomtrica de
azucares.
OBJETIVO

Adiestrar al estudiante en el manejo del refractmetro y cuantificar el azcar de

una muestra de jugo de caa o soluciones azucaradas.

EQUIPO

DESCRIPCIN
El refractmetro de ABBE 3L B. & L. , consiste de un prisma refractor ensamblado
con un iluminador , una escala de medicin interna y un sistema de prismas
compensadores.
Prisma de Refraccin
El prisma ensamblado consiste de un prisma superior y otro inferior. El superior
contiene iluminacin y normalmente es abierto, el inferior contiene la medicin del
prisma .
Para medir el ndice de refraccin de muestra lquidas, se hace, formando una pelcula
fina entre dos prismas.
El nmero de slidos se mide aplicando el slido con un lquido de contacto sobre la
superficie del prisma inferior. En ambos casos, entre la muestra y el prisma se genera
una reflexin total (lnea de borde) la cual es visualmente observada en la parte ptica
del equipo.

99

La medicin del ngulo crtico nos determina el ndice de refraccin de la muestra. El

prisma superior e inferior pueden tener la circulacin de un lquido , para mantener la
temperatura constante. Un termmetro est midiendo esta temperatura para controlar
que esa constante.

Ocular :
Es usado para observa ambas escalas y el
muestra.

campo de reflexin , que provoca la

Escala:
El instrumento contiene escalas de lectura de 1.30 a1.70 N y de O-85% de slidos
totales disueltos. Estas escalas son observadas por medio del ocular del instrumento.
Los valores de las tablas internacionales (tomados a 20C) son la base de la escala de
slidos disueltos.

OPERACIN GENERAL DE UN REFRACTOMETRO

El refractmetro de ABBE 3l B. & L., provee mxima precisin y es de fcil
operacin. Para mantenerlo en buen estado, asegrense de limpiarlo y secarlo antes de
guardar, poner mucha atencin en el cuidado de los prismas.
1. Usar detergentes no inicos para limpiar los prismas despus de poner la
muestra y guardar el prisma superior cuando no se usa porque el vidrio es
bastante blando y fcilmente puede rasgarse.
2. El material alrededor de los prismas es de una resina epoxy la cual es resistente
, sin embargo son pocos los solventes conocidos que atacan y que no pueden
ser utilizado en este instrumento.
a. N.N. Dimethyl formamida
b. Fenoles, cresoles y otros cidos.
c. Soluciones de cido actico.
d. N.N. Dimethyl acetamida.
Se ha encontrado que algunas sustancias al permanecer en contacto con los prismas
por perodos prolongados y a altas temperaturas, pueden mencionar daos al material
que los rodea; entre ellas tenemos:
a.
b.
c.
d.

Tetrahidrofurano.
Mezcla de steres especialmente acetato de metyl , acetato de vinilo.
Algunas lacas, thiners.
Minerales fuertes cidos y bases podran opacar los prismas por lo que
no deber ser utilizados.

100

INSTRUCCIONES PARA EL USO ADECUADO DEL REFRACTOMETRO DE ABBE

1. GENERALIDADES
Refractmetro de ABBE: Bausch and Lomb, DIGITANA AG
El equipo es capaz de determinar la velocidad de propagacin de la luz en un medio o
sustancia, por medio de la medicin del ndice de refraccin.

Figura. Refractmetro de ABBE

2. RECOMENDACIONES
Use vasos de precipitados limpios (para las muestras)
Utilice papel de superficie suave al momento de limpiar los prismas del equipo
Limpiar y secar ambos prismas (prisma de refraccin y prisma de iluminacin) al
momento de guardar el equipo
Evite golpes que puedan daar el sistema de iluminacin o el sistema ptico
Tenga el cuidado de apagar el sistema de iluminacin antes de desconectar el equipo
de la fuente de energa elctrica
Manipule la perilla de enfoque con delicadeza, esto conllevara a una medida ms
precisa

101

2.2 PROCEDIMIENTO
2.2.1 Calibracin
1. Conecte el equipo a una fuente de corriente alterna
2. El equipo se calibra colocando una gota agua destilada en la superficie del prisma de
refraccin
3. A continuacin se procede a leer, notar que la lnea horizonte se encuentra
desenfocada y no coincide con la interseccin de los dimetros del campo, para lograr
dicha interseccin se debe girar la perilla de enfoque hasta que la lnea horizonte se
muestre como en la figura:

Figura Interseccin de la lnea horizonte con los dimetros de los campos

4. La lectura de la escala debe ser de 1.333 de ndice de refraccin (0% Brix), para
poder realizar esta lectura se debe mover el mando de medida hacia atrs.

Figura 7. Lectura del refractmetro de ABBE para el agua

5. Luego de ajustar el ndice de refraccin levantar el prisma de iluminacin y limpiar
ambos prismas con papel de superficie suave (con el cuidado de no rayarlos). El equipo
est listo para realizar medidas.

102

Figura . Proceso de limpieza de los prismas

2.2.2 Lectura de muestras.
1. Abrir el prisma secundario (o prisma de iluminacin) y colocar una gota de la
muestra a medir sobre el prisma primario (o prisma de refraccin)
2. Cerrar cuidadosamente el prisma secundario y observar por el ocular
3. Girar la perilla de enfoque hasta lograr la interseccin de los dimetros de los campos
con la lnea horizonte

Figura. Secuencia del ajuste de interseccin de la lnea horizonte con los dimetros de
los campos
7. Leer la escala de ndice de refraccin para la muestra, moviendo el mando de
medicin hacia atrs. Anote los resultados
8. Limpie los prismas con agua destilada y papel de superficie suave
9. Repita los pasos anteriores para cada uno de las mediciones que se requieran

103

Figura. Medicin de una muestra (P)

Nota: Realizar la medicin de las muestras o curva de calibracin de las ms diluda a
la ms concentrada para evitar exceso de giros en la perilla de enfoque y disminuir los
riesgos de malas lecturas

INSTRUCCIONES DE USO ADECUADO DEL REFRACTOMETRO PORTATIL

Refractmetro Porttil:
Instrumento utilizado para determinar el ndice de refraccin, basa su funcionamiento en
el estudio de la refraccin de la luz, la unidad de medida con la que ste trabaja es
grados Brix (Bx).

Figura. Refractmetro porttil

104

RECOMENDACIONES
-

Evite que se formen burbujas de aire, ya que esto podra tener un efecto negativo en el
resultado de medicin. Moviendo ligeramente la tapa conseguir repartir ms
homogneamente el fluido de prueba. Mantener limpios tanto el cubre objetos como
el prisma, la suciedad puede influir negativamente sobre la precisin en la medicin
del refractmetro
Evite las ralladuras sobre el prisma, ya que stas tambin pueden tener una influencia
negativa en la medicin.
En la limpieza utilice slo un papel de superficie suave y evite limpiadores agresivos,
seque perfectamente el aparato tras su limpieza.
Limpiar el aparato simplemente con papel de superficie suave y nunca bajo el agua, ya
que sta podra penetrar en el aparato.
Evite golpes o cadas que podran daar el sistema ptico.
Guarde el aparato en un lugar seco.

PROCEDIMIENTO
Calibracin
1. Tomar el equipo de su estuche, manipularlo con cuidado
2. Colocar una gota de agua destilada en la superficie del prisma
3. Realizar la lectura correspondiente, colocarse a contraluz para que la marca de los
campos sea ms legible; si el equipo se encuentra calibrado sta debe ser de 0% Brix,
en caso contrario se procede a calibrar

Figura. Lectura del refractmetro porttil para el agua

4. Para la calibracin se manipula el tornillo de ajuste hasta lograr la medida deseada,
utilice el destornillador del kit del equipo (Ver procedimiento en el video
correspondiente)

105

Figura. Destornillador para calibrar el instrumento

3. Al finalizar el proceso de calibracin limpiar el cubre objetos y el prisma, para ello
utilice papel de superficie suave

Figura. Limpieza adecuada del refractmetro porttil

Lectura de muestras
1. Colocar una gota de de la muestra o solucin de la curva de calibracin en la
superficie del prisma.
2. Colocar el cubre objetos y leer colocndose a contraluz, de esta forma las lecturas
son ms claras y se evitan errores. No olvide anotar los resultados.
3. Lavar el prisma y el cubreobjetos con unas gotas de agua destilada y secar con papel
de superficie suave (para evitar rayar el prisma).
4. Repita los pasos anteriores para cada lectura de muestra o solucin problema.

106

Figura. Forma correcta de colocar una gota de muestra en el prisma del equipo

PARTE EXPERIMENTAL.

1. PREPARACIN DE LA CURVA DE CALIBRACIN.

a. A partir de sacarosa pura y agua destilada, preparar una serie de
soluciones 0,2,5,10 y 15% p/v de concentracin o preparar 100 ml de
cada una.
b. Determinar el ndice de refraccin de cada solucin y hacer una grfica
de los resultados obtenidos vrs. Concentracin en % p/v.

2. CONCENTRACIN DE SACAROSA EN UNA SOLUCION PROBLEMA.

a. Solicitar al instructor una solucin problema y determinar , con ayuda
de la grfica , la concentracin.

107

CUESTIONARIO

1. Graficar ndice de refraccin contra concentracin.

2. Determinar la concentracin de la muestra.
3. Utilizando la tabla de refracciones atmicas, determinar la refraccin molar de
la sacarosa.
4. A partir del ndice de refraccin de la muestra, determinar la refraccin
especfica ( solicitar al instructor la densidad de la muestra).
5. A partir de la refraccin especfica calcular la refraccin molar y comparar el
resultado con el obtenido en ( 2 ). En caso de no coincidir los resultados,
explicar la discrepancia.
6. Un haz luminoso al pasar dela aire al agua adquiere una velocidad V 1 , otro haz
durante el mismo proceso presenta una velocidad V 2. . Si V 2 es cuatro veces
menor que V 1 , conteste lo siguiente:
a. Cul haz presentar mayor ndice de refraccin.
b. Cul de los dos haces, presentar menor ngulo de refraccin.

108

Prctica

13
Polarimetra. Anlisis cuantitativo
de una solucin de sacarosa.
OBJETIVO

Adiestrar al estudiante en el manejo del polarmetro.

Construir la grafica concentracin vrs rotacin ptica para la sacarosa y

aplicarla al anlisis de muestra que la contenga .

FUNDAMENTO TERICO.

a actividad tica es una medida de la capacidad de ciertas sustancias para hacer

girar luz polarizada plana. La actividad ptica de muchas sustancias es funcin de
su constitucin qumica. As como de su concentracin, consecuentemente la
determinacin del poder rotatorio a la carencia de sta , sirve para establecer la
identidad y pureza de una determinada sustancia.
La polarimetra puede definirse como el estudio de la rotacin de luz polarizada por
sustancias transparentes. La direccin y el grado de rotacin es til para anlisis
cualitativo y cuantitativo , y para la elucidacin de estructuras qumicas.
La rotacin especfica ( ) de un lquido , es la rotacin angular en grados ledos en la
escala, usando un tubo de 1 dm ( 100mm) de longitud , calculado en base a la gravedad
especifica de 1C , referida al agua. En caso de soluciones pticame nte activas, la
rotacin especfica es calculada en base ala concentracin del 1 g de soluto/100ml de
solucin. El clculo del poder rotatorio ptico de un lquido pticamente activo se
determina por las siguientes frmulas:

109

1. Para sustancias lquida :

2. Para soluciones :

100
Lp

100
LC

Donde:
= Rotacin leda en grados, a temperatura T, utilizando lmpara de sodio.
L = Longitud del tubo en cm.
= Gravedad especifica del lquido o solucin a la temperatura de observacin.
P = Concentracin de la solucin expresada en g de sustancia activa en 100ml de
solucin.
C = Concentracin de la solucin expresada como g de sustancia activa en 100ml de
solucin.
Frecuentemente la rotacin angular aumenta linealmente con la concentracin.
Algunas sustancias muestran diferentes comportamiento segn el solvente . Tambin
se han observado variaciones hiperblicas y parablicas con la concentracin.
La sacarosa y la mayora de azcares producen variaciones aproximadamente lineales.

EQUIPO

El modelo SR-6 es un polarmetro que permite lecturas con una exactitud de 0.1 , con
la ayuda de un Vernier y un lente de aumento.
El Sr-6 puede utilizarse con tubos de diferentes longitudes , uno de los extremos del
tubo tiene un dimetro mayor con el objeto e facilitar la salida del aire que pudiese
alterar la medida, este extremo se coloca hacia arribaEl polarmetro utiliza como fuente de energa radiante , una lmpara de sodio en
combinacin con un filtro anaranjado. (589nm)
Consta de las siguientes unidades:
a. Fuente de poder
b. Unidad analizadora.
La fuente de poder se conecta al toma corriente; y el terminal dela unidad analizadora,
o sea la lmpara que se indica por el piloto encendido en la fuente de poder.

110

MANEJO
1. La escala circular al frene debe girarse de una manera que ambos ceros, (el de la
escala superior u el del Vernier), coincidan.
2. Ajustar el enfoque de manera que se note la lnea divisoria de las medias
sombras hasta observar igual brillantez en ambos.
3. Insertar el tubo de medicin con la solucin de manera que el extremo de
mayor dimetro queda en la parte superior; si la media sombra obscura aparece
al lado derecho, la sustancia rota la luz hacia la derecha, es decir, se trata de una
sustancia dextrgira y viceversa, si el campo oscuro aparece a la izquierda la
sustancia es levgira.
4. Mover la escala circular hasta que ambas mitades presenten igual brillantez, el
grado de rotacin se lee en la escala con la ayuda del Vernier.
5. Hecha la determinacin , lave debidamente el tubo , el cual debe guardarse
limpio y seco.
Figura 1. Polarmetro modelo SR-6.

Partes:
1.
2.
3.
4.
5.
6.

Lmpara de Sodio.
Tubo porta muestra
Escala para medir el ngulo de rotacin
Lente de aumento
Ocular
Control manual para determinar el ngulo de rotacin.

111

PARTE EXPERIMENTAL

1. PREPARACIN DE LA CURVA DE CALIBRACIN.

Se pueden utilizar las mismas soluciones preparadas en refractometra , es decir :
1. A partir de sacarosa pura y agua destilada, prepara una serie de soluciones
0,2,5,10 y 15% p/v de concentracin . Prepara un volumen de 100ml de cada
una.
2. Determinar la rotacin ptica de cada solucin utilizando tubos de muestra de
200ml
3. Elaborar la curva de calibracin. ( vrs [ C ] ) .

2. MUESTRA PROBLEMA.
Seguir las siguientes indicaciones:
1. Solicitar al instructor una solucin problema y leer su rotacin ptica.
2. Empleando la curva de calibracin , obtener la concentracin de azcar de la
muestra.
3. Calcular la rotacin especfica para la solucin problema empleando la frmula
correspondiente.

CUESTIONARIO.

1. Graficar la rotacin ptica.

2. Determinar la concentracin de la muestra.
3. Calcular la rotacin especfica de la muestra.

112