27/12/2014

Brazilian Archives of Biology and Technology ­ Microbial production of citric acid

 
 

  

Brazilian Archives of Biology and Technology

Services on Demand

Print version ISSN 1516­8913

Article

Braz. arch. biol. technol. vol.42 no.3 Curitiba  1999

pdf in English
http://dx.doi.org/10.1590/S1516­89131999000300001 

 ReadCube

REVIEW

 

Article in xml format
Article references

Microbial production of citric acid

How to cite this article

 

Curriculum ScienTI

 

Automatic translation

Luciana P. S. Vandenberghe I,II; Carlos R. Soccol I *; Ashok Pandey I;
Jean­Michel Lebeault II 

Send this article by e­mail
Indicators

I  Laboratório de Processos Biotecnológicos, Departamento de Engenharia

Cited by SciELO

Química, Universidade Federal do Paraná, CEP 81531­970 Curitiba­PR,
Brazil  
II Laboratoire de Procédés Biotechnologiques, Génie Chimique, Université
de Technologie de Compiègne, 60205­Compiègne, Cedex, France

Access statistics

 
 
ABSTRACT

Related links
Share
More
More
Permalink

Citric acid is the most important organic acid produced in tonnage and is
extensively used in food and pharmaceutical industries. It is produced mainly by submerged fermentation using
Aspergillus niger or Candida sp. from different sources of carbohydrates, such as molasses and starch based
media. However, other fermentation techniques, e.g. solid state fermentation and surface fermentation, and
alternative sources of carbon such as agro­industrial residues have been intensively studied showing great
perspective to its production. This paper reviews recent developments on citric acid production by presenting a
brief summary of the subject, describing micro­organisms, production techniques, and substrates, etc.
Keywords: Citric acid, Aspergillus niger, submerged fermentation, solid state fermentation, substrates
RESUMO
O ácido cítrico é o ácido mais produzido em termos de tonagem e é extensivamente utilizado pelas indústrias
alimentícia e farmacêutica. É produzido principalmente por fermentação submersa utilizando o fungo Aspergillus
niger e leveduras do gênero Candida sp. à partir de diferentes fontes de carbono, como a glicose e meios à
base de amido. No entanto, outras técnicas de fermentação, e.g. fermentação no estado sólido e em superfície,
e fontes alternativas de carbono tem sido intensamente estudadas mostrando grande perspectivas para o
processo. O presente trabalho apresenta um resumo dos últimos avanços sobre a produção do ácido cítrico,
descrevendo de maneira sucinta os trabalhos mais recentes, descrevendo microrganismos, técnicas de produção
e substratos empregados, etc.

 
 

http://www.scielo.br/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S1516­89131999000300001

1/12

 in Soviet Union..5­4%) each year in its consumption. 1983). Other investigations showed the isolation of two varieties of fungi belonging to genus Citromyces (namely Penicillium). and to maintain their production capacity. In 1923. and it was sold at high cost. from the lemon juice imported from Italy.scielo. in England.3 ­ propane tricarboxylic acid). However. mainly due to economic advantage of biological production over chemical synthesis (Mattey. The industrial process was first open by Currie. Applications of citric acid Citric acid is mainly used in food industry because of its pleasant acid taste an its high solubility in water. industrial trials did not succeed due to contamination problems and long duration of fermentation (Rohr et al. Table 1 presents main applications of citric acid. Much attention has been paid on research to improve the microbial strains. who found that Aspergillus niger had the capacity to accumulate significant amounts of citric acid in sugar based medium. the biochemical basis was only cleared in the fifties with the discovery of the glycolytic pathway and the tricarboxylic acid cycle (TCA). This led extensive attempts all over the world to find alternatives way for its production. better successes were achieved using microbial fermentations.br/scielo. 2 ­ hydroxy ­ 1. In the thirties. Currently. approved by the Joint FAO/WHO Expert Committee on Food Additives. 1984). 1992).27/12/2014 Brazilian Archives of Biology and Technology ­ Microbial production of citric acid INTRODUCTION Citric acid (C6H8O7.     MICRO­ORGANISMS USED FOR CITRIC ACIC PRODUCTION http://www. 1997). and the entire production is carried out by fermentation. in 1917. Wehmer observed the presence of citric acid as a by­product of calcium oxalate produced by a culture of Penicillium glaucum. It has got several other applications in various other fields. The pharmaceutical and cosmetic industries retain 10% of its utilization and the remainder is used for various other purposes.php?script=sci_arttext&pid=S1516­89131999000300001 2/12 . There is constant increase (3. In Brazil.2. a natural constituent and common metabolite of plants and animals. showing the need of finding new alternatives for its manufacture. some units were implanted in England. Historical developments Citric acid was first isolated by Karls Scheels in 1874. It is worldwide accepted as "GRAS" (generally recognized as safe). He also showed that high concentrations of sugar favoured its production. Although methods were well developed to synthesis citric acid using chemical means also. is the most versatile and widely used organic acid in the field of food (60%) and pharmaceuticals (10%). Consequently. an improved process employing submerged fermentation was developed in United States (Aboud­Zeid and Ashy. this technique has become the method of ultimate choice for its commercial production. almost the entire demand of citric acid is met through imports. However. and over the period of time. which occurred under limitation of growth. which included chemical and microbial techniques. and in Germany for the commercial production. the global production of citric acid is estimated to be around 736000 tones/year (Química e Derivados. Italian manufacturers had monopoly for its production for almost 100 years.

 fungi and yeasts have been employed to produce citric acid.   http://www. Table 2 shows the micro­organisms used to produce citric acid. namely. aziridine. 1983). however. frequently UV treatment could be combined with some chemical mutagens. However. The main advantages of using this micro­organism are: (a) its ease of handling. To obtain hyper­producer strains. niger and certain yeasts such as Saccharomycopsis sp. "the single­spore technique" and the "passage method" have been used for selecting citric acid producing micro­organisms The single­spore technique has the disadvantage that mineral acid or organic acids (gluconic acid. diploids displayed higher citric acid yields compared to their parent haploids.scielo. the fungus A. (b) its ability to ferment a variety of cheap raw materials. Among these. This fact could be explained by the fact that citric acid is a metabolite of energy metabolism and its accumulation rises in appreciable amounts only under conditions of drastic imbalances. e. According to Das and Roy (1978). capability of utilizing raw materials (starch.g..php?script=sci_arttext&pid=S1516­89131999000300001 3/12 . They were able to obtain fusants with acid production capacities exceeding those of the parent strains in solid state fermentation.br/scielo. a strain yielding high amounts of citric acid from unusual substrates can be obtained from the mutants produced. instead of using the indicator. Most of them. but not in submerged fermentation. Rohr et al. Protoplast fusion appeared to be a promising tool to extend the range of genetic manipulation of A. cellulose. are not able to produce commercially acceptable yields. By using a suitable selection technique on model medium with non­specific carbon sources. there is no single effective technique to achieve hyper­ producing mutants and much remains to be done in this area. as first described by Pontecorvo et al. 1986 ; Islam et al. 1983). N­nitroso­N­methylurea or ethyl methane­sulfonate (Musilkova et al. Kubicek and Rohr (1986) reviewed the strains reported to produce citric acid. Another approach for strain improvement has been the para­sexual cycle. but tended to be less stable (Bonatelli and Azevedo. (1979) improved this method by incorporating a specific stain for citric acid (para­di­methylamino benzaldehyde).. 1986) and UV­radiation (Pelechova et al. The most employed technique to improve citric acid producing strains has been by inducing mutations in parental strains using mutagens. oxalic acid) simulate the presence of citric acid. Among physical mutagens. (1953). niger has remained the organism of choice for commercial production. g­radiation (Bonatelli and Azevedo.     Strains selection and improvement The two principal methods of selecting populations. 1990) have often used. Kirimura et al. are employed for commercial production. pectin containing and other waste materials). niger with respect to citric acid production. (1988a) studied protoplast fusion of production strains. However. Some other aspects of strain improvement could be the resistance to detrimental constituents of fermentation raw materials. only A. 1983 ; Gunde­ Cimerman.27/12/2014 Brazilian Archives of Biology and Technology ­ Microbial production of citric acid A large number of micro­organisms including bacteria. and (c) high yields..

 these residues are very well adapted to solid­ state cultures due to their cellulosic and starchy nature. fermenters are made of high­grade steel and require provision of aeration system. Inoculation is performed either by adding a suspension of spores. a variety of raw materials such as molasses. e.. cane molasses posses difficulties in achieving good fermentation yields. When spores are used. Cooling can be done by an external water film over the entire outside wall of the fermenter. Normally.scielo. Two types of fermenters. For pre­cultivated mycelia. manganese. cane molasses contains calcium. Despite that. and are good substrates for growth and activity of micro­ organisms. 1998. Rohr et al. Generally. crude unfiltered starch hydro­lysates). although the latter is preferred due to the advantages it offers on price. submerged fermentation is concluded in 5 to 10 days depending on the process conditions. or of pre­cultivated mycelia. addition of nutrients and sterilization. size and operation (Rohr et al. Pandey et al.27/12/2014 Brazilian Archives of Biology and Technology ­ Microbial production of citric acid PRODUCTION TECHNIQUES AND RAW MATERIALS Although citric acid is mostly produced from starch or sucrose based media using liquid fermentation.br/scielo.g. Liquid fermentation Submerged fermentation: The submerged fermentation (SmF) process is the commonly employed technique for citric acid production.. a surfactant is added in order to disperse them in the medium.g. In SmF. several starchy materials and hydrocarbons have also been employed. kiwi fruit peel. c). temperature variations). 1983). Various other agro­industrial residues such as apple pomace. coffee husk. cane or beet sugar. However. despite the fact that these solid residues provide rich nutrients to the micro­organisms. The composition of molasses depends on various factors. the kind of beet and cane. In fact. Several advantages such as higher yields and productivity and lower labour costs are the main reasons for this. Both. beet molasses is preferred due to its lower content of trace metals. Consequently. 1994. Fermenters for citric acid production do not have to be built as pressure vessels since sterilization is performed by simply steaming without applying pressure. much remains to be done for developing commercially feasible process utilizing these residues (Pandey 1992. which is preferred due its low cost and high sugar content (40­55%). have been investigated with solid state fermentation techniques for their potential to be used as substrates for citric acid production (Pandey and Soccol. 1999. pineapple waste. It is estimated that about 80% of world production is obtained by SmF. etc.g. although the batch mode more frequently used. dextrose syrups and crystallized dextrose); (ii) raw materials with a high ash content and high amounts of other non sugar substances (e. some pre­treatment is required for the removal/reduction of trace metals. Several attempts have been made to produce citric acid using molasses. Molasses and other raw materials demand pre­treatment. conventional stirred fermenters and tower fermenters are employed. Pandey and Soccol 1998). production procedures. Preferentially. 1999a. cane and beet molasses are suitable for citric acid production. magnesium. transport. which can maintain a high dissolved oxygen level. It can be carried out in batch.b. However. Vandenberghe et al. cane and beet molasses. (1983) classified raw materials used for citric acid production in to two groups: (i) with a low ash content from which the cations could be removed by standard procedures (e. sugar beet cosset. an inoculum size of 10% of fresh medium is generally required. different kinds of media are employed such as sugar and starch based media (Table 3). cassava bagasse. etc.php?script=sci_arttext&pid=S1516­89131999000300001 4/12 .g. methods of cultivation of crops and fertilizers and pesticides applied during cultivation. which have a retarding effect on the synthesis of citric acid. continuous or fed batch systems. iron and zinc.   http://www. wheat straw. conditions of storage and handling (e.

 other Aspergilli. etc.0 and the temperature of incubation can vary from 28 to 30°C. substrate pre­treatment is not required. Citric acid production by SSF (the Koji process) was first developed in Japan and is as the simplest method for its production. yeast and lactic bacteria (Rohr et al. cane syrup or beet molasses are generally used as sources of carbon. (1999a. The most commonly organism is A. the substrate is moistened to about 70% moisture depending on the substrate absorption capacity. Vandenberghe et al. The same yields were found in column reactors only with variable aeration. have been used for citric acid fermentation in SSF. Consequently.br/scielo. molasses is diluted to 15­20% and is treated with hexacyanoferrate (HFC). which might be conserved principally during the first two days when spores germinate. and very little sporulation was observed. 1983; Tisnadjaja et al.php?script=sci_arttext&pid=S1516­89131999000300001 5/12 . Although this technique is more sophisticated. other methods of fermentation. When applied. The trays are made of high purity aluminium or special grade steel and are mounted one over another in stable racks.5­6. Soccol 1994. In the classical process for citric acid manu­facture. 1994. in US. Pandey and Soccol 1998). Frequent contamination are mainly caused by Penicilia. This showed great perspective to use SSF process for citric acid production in simple tray type fermenters. Solid­state fermentation Solid­state fermentation (SSF) has been termed as an alternative method to produce citric acid from agro­ industrial residues (Pandey 1991. The initial pH is normally adjusted to 4.   http://www. The fermentation chambers are provided with an effective air circulation in order to control temperature and humidity. the culture solution is held in shallow trays (capacity of 50­ 100 L) and the fungus develops as a mycelial mat on the surface of the medium. Higher yields were obtained in flasks without any aeration. 1995).. niger. 1992.27/12/2014 Brazilian Archives of Biology and Technology ­ Microbial production of citric acid   Surface fermentation: The first individual process for citric acid production was the liquid surface culture (LSC).     Different types of fermenters such as conical flasks.b) used Erlen­meyer flasks and glass columns for the production of citric acid from gelatinized cassava bagasse. SSF can be carried out using several raw materials (Table 4). Fermentation chambers are always in aseptic conditions. and in 1923 by Chas Pfizer & Co. However there also have been reports with yeasts (Maddox and Kingston. surface method required less effort in operation and installation and energy cost (Grewal and Kalra. such as submerged fermentation were developed. One of the important advantages of SSF process is that the presence of trace elements may not affect citric acid production so harmfully as it does in SmF. After that. Refined or crude sucrose.scielo. glass incubators and trays. Generally. which was introduced in 1919 by Société des Produits Organiques in Belgium. 1988). 1983; Morgant. 1996).

 urea.5 to 5. which assures pH control (Raimbault. the presence of manganese ions and iron and zinc (in high concentrations) could cause the reduction of citric acid yields only in phosphate free medium. the presence of excess of phosphate was shown to lead to the formation of certain sugar acids.niger needed lower concentrations of sucrose than free cells culture. Nitrogen source: Citric acid production is directly influenced by the nitrogen source. Honecker et al. Nitrogen consumption leads to pH decrease. malic and a ­acetoglutaric acid. fructose and galactose. Consequently. There are some critical factors (costs.45 g of citric acid/ g of glucose corresponding to 27 g/L. Potassium dihydrogen phosphate has been reported to be the most suitable phosphorous source. Shankaranand and Lonsane (1994) noticed that there were few differences in the response of A. Urea has a tampon effect.0 g/L was required by the fungus in a chemically defined medium for maximum production of citric acid. A number of divalent metals such as zinc. ammonium chlorure. According to Kovats (1960). (1998) reported how the culturing modality conditions the behavior of the micro­organisms referring to the tendencies of production as a function of the levels of N and P.php?script=sci_arttext&pid=S1516­89131999000300001 6/12 . Consequently. malt extract. Zinc favoured the production of citric acid if added with KH2PO4. 1992). Xu et al. ethanol. which should be considered for substrate determination. e. though the production is minimal (Yokoya. due to the restriction of accessibility to the nutrients in the medium. allow a limited growth and low production. a decrease in the fixation of CO2. 1986). at 30°C and 180 rpm. One another aspect is the presence of trace elements. Galactose contributed to a very low growth of fungi and did not favour citric acid accumulation. sometimes it is necessary to conduce a pre­treatment.27/12/2014 Brazilian Archives of Biology and Technology ­ Microbial production of citric acid FACTORS AFFECTING CITRIC ACID PRODUCTION Medium and its components Carbon source: Citric acid accumulation is strongly affected by the nature of the carbon source. Fermentation was carried out in 8 and 4 days. copper and magnesium have been found to affect citric acid production by A. and with superior productions for the last one. The concentration of nitrogen source required for citric acid fermentation is 0. maltose. Kubicek and Rohr. Phosphates acts at the level of enzyme activity and not at the level of gene expression (Kubicek et al. 1993; Chen. Glucose.scielo. (1985) reported the influence of different sources of carbon on citric acid production by A. Trace elements: Trace element nutrition is probably the main factor influencing the yield of citric acid.Other sources of carbon such as sorbose. 1980). (1984) showed that sucrose was the most favourable carbon source followed by glucose. Consequently. Pintado et al. Shu and Johnson (1948) reported that phosphorous at concentration of 0. it is necessary to maintain pH values in the first day of fermentation prior to a certain quantity biomass production.. It is interesting to note that different strains require distinct nitrogen and phosphorous concentrations in the medium. 1983. 1979). 1994). nitrogen and phosphorous limitation is a crucial factor in citric acid production as there is an interaction between them.; precipitation of trace metals of molasses by potassium ferrocyanide.5%. which occurs in low water activity conditions. and the stimulation of growth. S. manganese. As expected. but decreases the amount of citric acid produced (Hang et al. Phosphorous source: Presence of phosphate in the medium has a great effect on the yield of citric acid. showing an improvement towards low levels of N and P in submerged culture.41 g/g of glucose or 9 g/L which was not so bad. However. The presence of easily metabolized carbohydrates has been found essential for good production of citric acid. peptone. As presented previously. Better results were found for A. Starch. ammonium sulfate. lipolytica produced 0. iron. and toward high levels in solid state culture. pentoses (xyloses and arabinoses).1 to 0.. probably. lactic. Maddox et al. niger. cellulose. Shankaranand and Lonsane (1994) affirmed that the specificity of solid state culture is largely due to a lower diffusion rate of nutrients and metabolites. A high nitrogen concentration increases fungal growth and the consumption of sugars. sorbitol and pyruvic acid slow down growth.. The author used as first order an empirical model based on rotatable design to study the effect of both nutrients. in SSF. the study of their combined effect is necessary (Pintado et al. several raw materials can be employed successfully for citric acid production. niger (Shankaranand and Lonsane. However. a similar behavior was noticed. niger and Saccharomycopsis lipolytica. the addition of chelating agents such as potassium ferrocyanide to the medium proved to be of no use. however. niger. niger to metal ions and minerals in SSF and in SmF systems. manitol. for the two studied strains. e. Physiologically. SSF systems were able to overcome the adverse effects of the high concentrations of these components in the medium.niger strains needed an initial sugar concentration of 10­14% as optimal; no citric acid was produced at sugar concentration of less than 2. Low levels of phosphate favour citric acid production. and 120 g/L for immobilized cells). On the other hand.g. In fact.br/scielo. (1989) reported that A. xylose and arabinose were tested. etc. need of pretreatment). which can act as inhibitors or stimulants.. (1989) showed that immobilized cells of A. 1977). galactose. 1994). in order to obtain high yields (200 g of citric acid/L for free cells culture. http://www. strains with large requirements of N and P seems to be disfavored. As a consequence of this.4 N /liter.g. ammonium salts are preferred. which is very important point in citric acid fermentation (Rohr et al. respectively. Hossain et al. initial sugar concentration was critical for citric acid production and other organic acids produced by A. it is crucial to take into account the interdependence of medium constituents in SmF and. niger with 0. Phosphate is known to be essential for the growth and metabolism of A.

 A pH of 2.. which act in many ways to favour citric acid accumulation. which will cause the pH to decrease. Generally. niger during fermentation (Kubicek and Rohr. Therefore.0 is required for optimum production of citric acid.g. iron cyanide. a higher pH i. especially during the growth phase. 1986). However.. iso­propanol or methyl acetate.. This is an additional reason why small compact pellets are the preferred mycelial forms of A. Aeration: Aeration has been shown to have a determinant effect on citric acid fermentation (Rohr et al. etc.5H2O concentration was 78 mg/L. and Rhizopus sp. 1978; Mannomani and Sreekantiah. ethanol. Magnesium is required both for growth as well as for citric acid production. It is important to maintain the oxygen concentration above 25% saturation and interruptions in oxygen supply may be quite harmful (Kubicek et al.php?script=sci_arttext&pid=S1516­89131999000300001 7/12 .. Whereas the activities of other TCA cycle enzymes increased slightly.025% (Kapoor et al. 1986). 1992; Dasgupta et al. High aeration rates lead to high amounts of foam.4 and 6. pH can drop very quickly until less than 3. A low initial pH has the advantage of checking contamination and inhibiting oxalic acid formation. (1985) argued against a role of membrane permeability in citric acid accumulation. Appropriate alcohols are methanol.. amine oximes. because of economic reasons. Changes in pH kinetics depend highly also on the micro­organism. 5.   PRODUCT RECOVERY The recovery of citric acid from liquid fermentation is generally accomplished by three basic procedures.02­0. Sporotrichum. However Meixner et al. 1980) whereas.27/12/2014 Brazilian Archives of Biology and Technology ­ Microbial production of citric acid Copper was found to complement the ability of iron at optimum level. Besides. the nature of the substrate also influences pH kinetics (Raimbault et al. starch. 1980).5 to 1.4 vvm). the dissolved oxygen tension rapidly falls to less than 50% of its previous value. the addition of antifoaming agents and the construction of mechanical "defoamers" are required to tackle this problem. or changes in lipid composition of the cell wall. The most obvious reason is the secretion of organic acids such as citric. a pH below 2. Pleurotus sp. http://www. 1983).e. Lower alcohols: Addition of lower alcohols enhances citric acid production from commercial glucose and other crude carbohydrate. They also found that coconut oil influenced citric acid production in a sucrose medium when added at 3% (v/w). The optimal amount of methanol/ethanol depends upon the strain and the composition of the medium. Benuzzi and Segovia (1996) reported that the presence of different copper concentrations in the pellet formation medium was very important in order to enhance a suitable structure. 1978). 1995). quaternary ammonium compounds. due to metal contamination. it's usually preferred to start with a low aeration rate (0. Penicillium sp. 3­hydroxi­2­naphtoic. sodium fluoride and potassium fluoride have been found to accelerate the citric acid production. This led to overflow of citric acid as an end product of glycolysis (Kubicek and Rohr..2 was reported to be optimum for the growth of the mould as well as for the production of citric acid (Srivastava and De.0. Some of these are: 4­Methyl­umbelliferone.. pH is more stable (between 4 and 5). For other groups of fungi such as Trichoderma. The influence of dissolved oxygen concentration on citric acid formation has been examined. EDTA. The high demand of oxygen is fulfilled by constructing appropriate aeration devices. Citric acid accumulation decreased by the addition of iron. Optimal concentration of magnesium sulfate was found in the range of 0.5 vvm. 1988; Georgieva et al. benzoic acid. Manganese deficiency resulted in the repression of the anaerobic and TCA cycle enzymes with the exception of citrate synthetase. Some of them are capable to impair the action of metal ions and other toxic compounds influence growth during the initial phase. When the organism turns into filamentous developments.. potassium ferrocyanide has been found to decrease the yield.5 has been found optimum for citric acid production in molasses medium (Roukosu and Anenih. Alcohols have been shown to principally act on membrane permeability in micro­organisms by affecting phospholipid composition on the cytoplasmatic membrane (Orthofer et al. Aeration is performed during the whole fermentation with the same intensity through the medium at a rate of 0. Increased aeration rates led to enhanced yields and reduced fermentation time (Grewal and Kalra. which is also dependent on the viscosity of the fermentation broth. Process parameters pH: The pH of a culture may change in response to microbial metabolic activities. 1979). 1980). generally optimum range being 1­3%. related to cellular physiology. There are many compounds.0­6. The effect of methanol or ethanol have been extensively studied by many authors (Hamissa. A low level of manganese (ppm) was capable to reduce the yield of citric acid by 10%. Ingram and Buttke (1984) found that alcohols stimulate citric acid production by affecting growth and sporulation through the action not only on the cell permeability but also the spatial organization of the membrane. vermiculite. The optimal initial CuSO4. to enhance the biosynthesis of citric acid. 1994). Miscellaneous: Some compounds which are inhibitors of metabolism such as calcium fluoride.br/scielo. Mannomani and Sreekantiah (1987) reported that addition of ethanol resulted in two­fold increase in citrate synthetase activity and 75% decrease in aconitase activity.. acetic or lactic acids. which also had some effect on mycelial growth. With Aspergillus sp. 2­naphtoic acid.scielo.. even if the dry weight has not increased by more than 5%. e.1 to 0. 1983; Dawson et al. for citric acid production. 1997).. while.

. Technol. and Ashy. V. S. (1983) Improved reproducibility of citric acid production in Aspergillus niger.g. and Azevedo. 393­397        [ Links ] Bonatelli Jr.. 37­40        [ Links ] El Dein. Precipitation is the classical method and it is performed by the addition of calcium oxide hydrate (milk of lime) to form the slightly soluble tri­calcium citrate tetrahydrate. Extraction of citric acid from aqueous solution. Crystalization at temperatures higher to this is used to prepare anhydrous citric acid.. (1995) Microbial production of organic acids from carrot processing waste. 56. 45.. G. C. Philipova. Lakshminarayana and Tauro. The precipitated tri­calcium citrate is removed by filtration and washed several times with water. Food Sci. forming citric acid monohydrate.. and Segovia. G.. Citric acid extraction has been described by the Food and Drug Administration (1975) of the United States and by Colin (1960. 9. H. 622­625        [ Links ] Dasgupta. (1960) Fr. LSC. The need of some pre­treatment of raw materials may enhance the fermentation efficiency. K. M. Citric acid extracted by this method has been recommended suitable for use in food and drugs. H.D. J. Appl.php?script=sci_arttext&pid=S1516­89131999000300001 8/12 . extraction. Pat. Biochem.. M. Susuki. Indian J Exp. W. N. I. Biotechnol. K. it is necessary to adapt the right type of raw material to the right technique e. Another area is the strain improvement with improved substrate utilization efficiency. P. Technol. J. M. Ferment. (1986) Effect of interruption of oxygen supply on citric acid production by Aspergillusniger. Process Biochem. A.­C. Petkov. 9. and Hang. T. (1979) Effect of various conditions on production of citric acid from molasses in presence of potassium ferrocyanide by A.. Sci. 4. Y. (1994) Fermentation of orange processing wastes for citric acid production. Ethiraj. 24.. W. and Aleksieva. 761­766        [ Links ] Chaudary. S. Mother liquor containing citric acid is treated with active carbon and passed through cation and anion exchangers. and Thomopoulos. The use of alternative raw materials to produce citric acid by SmF.. Oreopoulou. A. which is filtered off. Y. J. 29.. Pat. Agric. (1994) Production of citric acid in molasses medium: effect of addition of lower alcohols during fermentation..scielo. It is then treated with sulphuric acid forming calcium sulphate. and Roy. D. (1984) Production of citric acid: A review.066. M. Biotechnol. (1992) Influence of methanol on the phospholipid and fatty acid composition of Aspergillus niger IM­13 during citric acid fermentation. A. Tzia. cassava bagasse employed as substrate in SSF. Charakchieva. 8. and Emaish.         [ Links ] Colin. (1994) Response­surface methodo­logy for optimizing citric acid fermentation by Aspergillus foetidus. G. 51­76        [ Links ] Aravantinos­Zafiris. Enzyme Microb.. D. Micobiol. Wastes. R.27/12/2014 Brazilian Archives of Biology and Technology ­ Microbial production of citric acid precipitation. L.211. 65. and Akiyama. S. 105­106        [ Links ] Fukuda. N.. Nasim. 399­405        [ Links ] Colin. or cellulose hydrolysate used in SmF. P.300. S. 61. J. Maddox. One area.   CONCLUSIONS AND PERSPECTIVES Since the beginning of this century. M. Can.003. Biol.. Finally. P. and Mention. 1.. 2. Technol. S. 119­121        [ Links ] Georgieva.. 123­125        [ Links ] Dawson. M. Microbiol. (1962) Fr. S.. J. K. J. A. Several anion­exchange resins are commercially available.. A. aculeatus and A. Khan. However. Sumino.. 1.D. J. (1970) Microbial preparation of citric acid. and SSF seems to be a suitable possibility. 117­120        [ Links ] Benuzzia.221        [ Links ] Garg. Extraction of organic acids made by fermentation. (1978) Improved production of citric acid by diploid strain of Aspergillus niger. Lett. the liquor is concentrated in vacuum crystallizers at 20­25°C. and Brooks.250        [ Links ] Das.. carbonarius. 17.1962). J. Biotechnol.. which needs attention is the development of continuous culture techniques which have been attempted but only at the laboratory scale.C. 32. Ger. 554­ 557        [ Links ] Chen. Comptes Rendus de l'Academie Bulgare des Sciences. C. Food Agric. F.br/scielo.   REFERENCES Aboud­Zeid.. Pat.. and adsorption and absorption (mainly using ion exchange resins). V. I. citric acid production has been intensively studied and great alternatives to this process have been found to follow its great demand. and Vora. R. (1978) Citric acid production from Indian Cane molasses by Aspergillusniger under solid state fermentation conditions. P. (1996) Effect of copper concentration on citric acid productivity by an Aspergillus niger strain. 87­90        [ Links ] http://www.

 C. K. Majumdar. K. K. Jha. Pat. 31. (1947) Production of citric acid in submerged culture.. 25. and Woodams. and Maddox.. E. 331­373        [ Links ] Kubicek. Microb. 17­ 24        [ Links ] Hossain. J. 263­271        [ Links ] Kubicek.. 143­146. 39. and Woodams. Y. E. (1980) regulation of citric acid production by oxygen: Effects of dissolved oxygen tension on adenylate levels and respiration in Aspergillus niger. R. D. 763­764        [ Links ] Hang. Conn. (1986) Semipilot scale production of citric acid in cane molasses by gamma ray induced mutant of Aspergillus niger. E. C.. Biores. Technol. Chem. induced by hydrocarbon substrate..610        [ Links ] Kubicek. E. and Woodams. J. Science des Aliments.. and Bandyopadhyay. M. J. 263­271        [ Links ] Kubicek. 383­384        [ Links ] Hang. P. Cimerman. (1983).. Rev. (1987) Microbial production of citric acid by solid state fermentation of kiwifruit peel. Kawajima. S. M. H. Eur. (1979) An indirect method for the studying the fine control of citric acid fermentation by Aspergillus niger. K. 66. Biotechnol Lett.. O. A. Brooks. 821­825        [ Links ] Kautola. Tanno. O. Mckay.br/scielo. N. K. Oomori. Chaudary. CRC Crit.. Linko. Studies on submerged citric acid fermentation.. Technol. M. (1995) Citric acid production from okara (soy­residue) by solid state fermentation. P. L. E.. Enzyme Microb. A. 26­33        [ Links ] Kroya Ferment. Brooks.. Muller. M.. and Fiechter. P. 133. Y. 383­392        [ Links ] Khare. (1984) Pretreatment of Indian cane http://www. and Takahashi. 8. D. H. Woodams. P.. Yang. and Tauro.         [ Links ] Hamissa. J. J. 6.187. (1978) Effect of alcohol and related compounds on citric acid production from beet molasses by Aspergillus niger. J. Food Sci. 752­756        [ Links ] Islam. O. 393­397        [ Links ] Ingram. (1988a) Improvement in citric acid production by haploidization of Aspergillus niger diploid strains. I. 12. J. 8. N. Appl. (1984) Effects of alcohols on microorganisms. L. 253­254        [ Links ] Hang. Biotechnol. Splittstoesser. E. Eur. Bacteriol. Ind. Westport. S.. Biotechnol. A. Rymowicz. E. (1984) Apple pomace: a potential substrate for citric acid production by Aspergillusniger. 461­471        [ Links ] Kapelli.. and Rohr. and Gandhi. H. A. Microbiol. and Rehm. 4th Edn. Biotechnol Lett. 375­382        [ Links ] Kovats. 253        [ Links ] Ikeno. M. Ferment.php?script=sci_arttext&pid=S1516­89131999000300001 9/12 . F. 52. Y. 157­160.. K. G. Enzyme Microb. P. A. (1970) Citric acid prepared by fermentation. (1986) Citric acid fermentation. 53. F.. D. M. 226­227        [ Links ] Honecker. Technol. K. T. Physiol. K K. Zehentgruber. K. Y. Technol. Adv.. Zehentgruber. 5. Perdhi... (1995) Fungal production of citric acid. Microbiol.         [ Links ] Hang. Citric acid. (1992) The utilization of beet molasses in citric acid production with yeast. Inc.. 7. J. J.. Maddox. Masuda. Y. O.. Appl. I... and Linko. Ind. H. Appl Microbiol Biotechnol. (1978) The role of trycarboxylic acid cycle in citric acid accumulation by Aspergillus niger. In­Industrial Microbiology. A. (1977) Citric acid fermentation of brewery waste. Br. Guha. (1985) Grape pomace: A novel substrate for microbial production of citric acid. G.. 5. (1993) Repression of galactose utilization by glucose in the citrate­producing yeast Candida guilliermondii. and Kalra. P. E. Microbiol. Biotechnol.. El­Kalak. D.. P. A. and Rohr. French..27/12/2014 Brazilian Archives of Biology and Technology ­ Microbial production of citric acid Grewal. M. (1978) Chemical and structural alterations at cell surface of Candida tropicalis. Begum. D. (1975) Citric acid production from various raw materials by yeasts.. Eur. C. C. Y. Panda. 209­234        [ Links ] Gunde­Cimerman.. Ind Eng. K. W.... Microbiol. 3. S. and Sherman. Chem.... T. S. 54. E. Technol. Reed. 11. J. N. I. S. and Buttke. 28.). Biotechnol. O. S. S. (1960) Acta Microbiol. Kawabe. S. Food Sci.scielo. Microbiol. and Choudhury. E. N. (Ed. Microbiol. M. 1. and Waksman..­Y. 5. R... Technol. I. S.. Appl. 166­170        [ Links ] Gutierrez. I. M.. A. M. 9. 709­747        [ Links ] Karow... P. (1984) The effect of the sugar source on citric acid production by Aspergillus niger.... 323­325        [ Links ] Kirimura.. S. 13. Biotechnol. Z. 952­958        [ Links ] Kapoor.. Lee. and Rohr. C. AVI Publishing Co. Bisping. 101­115        [ Links ] Kundu. 19. and Usami. J. B. Appl.. Adv. J. 42. and Rohr.. Ferment. Biotechnol. P. D. (1986) Aspergillus niger mutants for bioconversion of apple distillery wastes. J. S. (1989) Influence of sucrose concentration and phosphate limitation on citric acid production by immobilized cells of Aspergillusniger.

 J. A. (1995) Produção de ácido cítrico utilizando Aspergillus niger em resíduo de abacaxi (Ananas comosus (L) Merril) por fermentação em estado sólido. Effect of manganese deficiency on plasma membrane lipid composition and glucose uptake in Aspergillus niger.. Greenwood.. Y.. M. R. and Rohr. R. A. ProcessBiochem. (1998). A. C. D. (1994) Solid state fermentation: An overview... Dawson. Bioeng. 403        [ Links ] Pandey. J.. (1991) Aspects of fermenter design for solid­state fermentation. Enzyme Microb. J. Appl.. Ferment. (1996) Citric acid production in submerged and solid state culture of Aspergillusniger.. F.. L. 5. 12. 27. L. Rev. for the production of citric acid. Lett. (1980) Physiology and metabolism of two alkane oxidizing and citric acid producing strains of Candida parapsilosis. 271­275        [ Links ] Morgant. P. M. Biotechnol. J... A. Tecnol. J.. Biol. 41. 21. A. T. M. Biotechnol. B. Biol. C. and Rohr. K. (1997) Citric acid production by solid­state fermentation in a packed­bed reactor using Aspergillusniger.php?script=sci_arttext&pid=S1516­89131999000300001 10/12 . K.. H. I. Maddox. H. 1114­1121        [ Links ] Lima. 382­ 332        [ Links ] Nguyen. S. Lett. V. (1973) Citric acid production by Hansenulaanamola var. V. A. Salgueiro. L... H.br/scielo. (in press)        [ Links ] Pallares.. 5.... O. Hanguk Sikpum Kawahakhoe Chi. 22. A. 7. L. Ed. K. 773­783        [ Links ] Lu. C. 27. 815­818        [ Links ] Manonmani. 38. Brazilian Arch. Technol. 3­10          [ Links ] Pandey. M. S. (1990) Selection of a hyperproducing strain of Aspergillus niger for biosynthesis of citric acid on unusual carbon substrates. Ujcova... J.scielo. E.. L. Fencl. L. Wiley Eastern Publishers. M. Soccol. Martinkova. W. Z. 92­94        [ Links ] Mannomani. S. Nigam. R. Lett. Process Biochem. 433­44        [ Links ] Ogawa. A. and P.27/12/2014 Brazilian Archives of Biology and Technology ­ Microbial production of citric acid molasses for increased production of citric acid. 215­223        [ Links ] Omar. 87­132        [ Links ] Meixner. 795­798        [ Links ] Maddox. Seichert. and Martinkova. (1999). Pandey. (1987) Studies on the conversion of cellulose hydrolysate into citric acid by Aspergillusniger. (1992) Citric acid production by Aspergillus niger using media containing low concentrations of glucose or corn starch. Kubicek. 26. (1998) On­line monitoring of citric acid production in solid­state culture by respirometry. J. J.. and Sanroman. R. R. 54. M.. FoliaMicrobiol. D. J. T. 15. (1985) Production of citric acid from sugars present in wood hemicellulose using Aspergillus niger and Saccharomycopsis lipolytica. S. Bioconversion of biomass: A case study of lignocellulosics bioconversions in solid state fermentation. Process Biochem. Biotechnol. Ujcova. (1979) Lipid levels and manganese deficiency in citric acid producing strains of Aspergillus niger. Folia Microbiol.. Stamford. Technol.. 138­ 142        [ Links ] Pintado. Biores. ProcessBiochemistry. L. V. 392­397        [ Links ] Maddox. 63­66        [ Links ] Oh. 26.. and Brooks. 513­518        [ Links ] http://www. H. 37... K. K. Kingston (1983) Use of immobilized cells of yeast.. G. J. Technol. and Machek. 25.. and Lee. In ­ Solid State Fermentation. (1976) Additive effect of ferrocyanide treatment and step change of pH on citric acid production from Iranian beet molasses with Aspergillus niger. (1992) Recent Process Developments in Solid State fermentation. 159­161        [ Links ] Mattey. and Roussos. Petrova. Folia Microbiol. 11. 33. I. E. S. 109­ 117        [ Links ] Pandey. Biotechnological potential of agro­industrial residues: sugarcane bagasse. Lonsane. Biotechnol... K. Doctoral Thesis. Biotechnol.. P. (1983) Effect of changed cultivation conditions o the morphology of Aspergillus niger and citric acid biosynthesis in laboratory cultivation. P. Kubicek. 35. M.. and Soccol. (1992) The production of organic acids. Park. and Rehm. anamola. and Soccol. H. Mischak. J. A. and Sreekantiah. Seichert. Technol. A. Arq. Technol. 355­ 361        [ Links ] Pandey. European J. M. (1988) Effect of additives on citric acid production by Aspergillus niger. and K. Gaime­Perraud. S. J.. FEMS Microbiol. I. New Delhi. 31­33        [ Links ] Pelechova. 379­90        [ Links ] Pandey. Microbiol. A. Bioprocess Eng. Lett. M.. Food Sci. T. FEMS Microbiol. France        [ Links ] Musilkova. 26. C.. T. Brooks and I. 42­49        [ Links ] Orthofer. Rodriguez. K. Spencer.. and Fazeli. Saccharomycopsislipolytica. S. 5. Crit. (1988) Optimization de la production d'acide citrique par Aspergillus niger avec un procédé de surface. Sreekantiah.

. 31. 45. J. T. V. Kothari. Gonzalez. France        [ Links ] Raimbault. 21.. 198        [ Links ] Química e Derivados. B. 8(6). Food Sci.. P.. (1979) An improved method for characterization of citrate production by conidia of Aspergillus niger. A. and Lonsane. M.. Pub        [ Links ] Rane. Enzyme Microb. (1993) Starch hydrolysate. J.. UFPR. A. T. P. 15. and Lonsane. J.27/12/2014 Brazilian Archives of Biology and Technology ­ Microbial production of citric acid Pintado. Kluwer Acad. and Harvey. P. P.. (1980) Fermentation en milieu solide: Croissance des champignons filamen­teux sur substrat amylacé. E... S. A. (1991) Production of citric acid from beet molasses by immobilized cells of Aspergillusniger. K. (1997) Pretreatment of date syrup to increase citric acid production. Vol. J. A.668        [ Links ] Shah. R. Aquiahuatl. Thesis­Professor Titular. (1997) Estudo prevê escassez mudial. P. evolution and perspectives. A. K. J.. Enzyme Microb. O. Eng. J.. J. S. 27. J. M. Pintado. L.. PhD Thesis. J. Microbiol. S. A comparison of two techniques (Adsorption and Entrapment) for the immobilization of Aspergillusniger in polyurethane foam. M. In­ Biotechnology. Curitiba. 10. and Pastrana. Chattoo.php?script=sci_arttext&pid=S1516­89131999000300001 11/12 . 291­294          [ Links ] Roukas. Chem. Ind. 15. V. Food Sci. B. and Kotzekidou. Technol. Gonzalez. and Rehm.scielo. (1986) Production of citric acid from brewery wastes by surface fermentation using Aspergillusniger. J. pp. V. (1997) Solid state fermentation at ORSTOM: History. K.. K. an optimal and economical source of carbon for the secretion of citric acid by Yarrowlipolytica. T. World J. (1994) Ability of Aspergillusniger to tolerate metal ions and minerals in a solid­sate fermentation system for the production of citric acid. Technol. Enzyme Microb. Biotechnol... Microbiol. Starch. P. (1948) Citric acid production by submerged fermentation with Aspergillus niger. 165­168        [ Links ] Shankaranand. S. D. M. K. (1972) Fermentative production of citric acid. 419­454        [ Links ] Rohr. W. K. M. World J.. Stadler. Kubicek. Technol. B. 23. biotrans­formação de resíduo sólido de mandioca por Rhizopus e Basidiomacro­micetos do gênero Pleurotus. Technol. 9. and Kotzekidou. B. Techniques. 2. Reed. 389­ 394        [ Links ] Sardinas. and Sims. and Lonsane. J.). P. B. M. (1983) Citric acid. J.M. J. (1994) Coffee husk: an inexpensive substrate for production of citric acid by Aspergillusniger in a solid­sate fermentation. 56. Ind. and De. M. M. Murado. J. and Lonsane. Biotechnol. C.. (1988) The effect of pH on the production of citric acid and gluconic acid from beet and cane molasses using continuous culture. A. 235­239        [ Links ] Roukas. Biotechnol. T. P. 29. Brazil         [ Links ] Srivastava. 1157­1162        [ Links ] Pintado. Setembro          [ Links ] Raimbault. Roper. Biotechnol.. J. B. Biotechnol. Pat. K. Microbiol. (1993) Sugarcane­pressmud as a novel substrate for production of citric acid by solid­sate fermentation. Lett. Torrado. Process Biochem. (1998). S. Optimization of nutrient concentration for citric acid production by solid ­state culture of Aspergillusniger on polyurethane foams. 273­276        [ Links ] Roussos. Weinheim. (Eds. and Kotzekidou. and Hegde.. L. 149­156        [ Links ] Pontecorvo. H. (1980) Effect of some cultural conditions on microbial citric acid formation. (1994) Contribuição ao estudo da fermentação no estado sólido em relação com a produção de ácido fumárico. and Forbes. Lett. (1994) Caffeine degradation by Penicillium verrucosum in solid fermentation of coffee pulp: critical effect additional inorganic and organic nitrogen sources. (1993) Production of citric acid by Candida lipolytica Y­1095: effect of glucose concentration on yield and productivity. and Lema. 40. S. and Kubicek. S. 316­319        [ Links ] Sanromán.. G.. S. M. Agric. Verlag­Chemie. and Kominek.. L. V. (1987) Influence of some trace metals and stimulants on citric acid production from brewery wastes by Aspergillusniger. 9. G... and Marakatis. Salzbrunn. M.. 51. 13. M. Biotechnol. L. Chem.br/scielo. (1953a) Genetic recombination without sexual reproduction in Aspergillus niger. Microbiol. A. 8. Miron. 289­294        [ Links ] Roukas. 377­380        [ Links ] Shankaranand. Food Sci. M. T. Technol. Appl. 646­651        [ Links ] Rohr. 225­228        [ Links ] Roukas. (1994). In­ Advances in solid substrate fermentation. Fr... C... Trejo. (1993) Joint effect of nitrogen and phosphorus concentrations on citric acid production by different strains of Aspergillus niger grown on an effluent. 1202        [ Links ] Soccol..M. N. J. and Murado. 104­09        [ Links ] Shankaranand. 39­44        [ Links ] http://www. 878­880        [ Links ] Roukas. C. and Johnson. Hannibal. Roussos.113. R. A. 29­37        [ Links ] Shu. D.. Gen. P. Enzyme Microb. 3. 10. J.

 Food and Drug Administration. S. 28.: +55 41 3316­3052 / 3316­3012 Fax: +55 41 3346­2872 babt@tecpar. J... (1975) Citric acid production by yeast. May 26­29. Biores. Food additives: solvent extraction process for citric acid.. (1999c) Solid­state fermentation for synthesis of citric acid by Aspergillus niger. S. VIII Congreso Argentino de Ciencia y Tecnologia de Alimentos. C. Série Fermentações Industriais. and Mitchell. (1999b) Citric acid production by Aspergillus niger in solid­state fermentation on coffee husk. Santa Fé.. J. R. Technol. Sly. L. L. T. J. Pandey. Campinas. R.     *Author for correspondence   Tecpar Rua Prof. Jp. Marchin.. Londrina. (1993) Attempts to improve strain A­10 of Yarrow lipolytica for citric acid production from n­paraffins.­M. D. 1999. A. L. 82p        [ Links ]     Received: May 16. 76.. and Lebeault. K. (1996) Citric acid production in a bubble­column reactor using cells of the yeast Candidaguilliermondii immobilized by adsorption onto sawdust. 1. P. M. Rohr.­M. L. Algacyr Munhoz Mader. 14.. C.. A. (1998) Selection of a strain of Aspergillus for the production of citric acid from pineapple waste in solid state fermentation. C. A. R.. D. P. and Hirose.. 1999;  Accepted: August 16. Appl. Enzyme Microb. and Kubicek. C. Soccol. Soccol. N. G. I. S. 453­460        [ Links ] Xu. P. Gutierrez. L. World J. 3775 ­ CIC 81350­010 Curitiba PR Brazil Tel.br/scielo. III Internatl Sem Biotechnol Coffee Agroindustry. and Lebeault. (1992) Fermentação cítrica.. 30. 49080­49082          [ Links ] Uchio. (in press)        [ Links ] Wojtatowicz.­M. 343­347        [ Links ] Tran. Y. 1999;  Revised: July 20. F. D. Madrid. P. S. Kikuchi.scielo. and Lebeault. C.63.. Pandey.27/12/2014 Brazilian Archives of Biology and Technology ­ Microbial production of citric acid Tisnadjaja. R.. Biotechnol.. ­B. I. Microbiol. 40. Biotechnol.059        [ Links ] Vandenberghe. (1989) The influence of type and concentration of the carbon source on production of citric acid by Aspergillus niger. and Maddox. Soccol. and Erickson. Maeyashiki. Pandey. I. L. M. P. A. Argentina        [ Links ] Vandenberghe. (1999a) Produção de ácido cítrico por fermentação no estado sólido com Aspergillus niger LPB 21 à partir do bagaço de mandioca. Brazil         [ Links ] Vandenberghe. May 13­15. A.  Rafaela.php?script=sci_arttext&pid=S1516­89131999000300001 12/12 . Kokai. E. S. 399­404        [ Links ] U. 553­ 558        [ Links ] Yokoya. C. Process Biochem. 19.br http://www. Technol. Microbiol. Fed Reg. São Paulo..