Microscopios

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OPTICA INSTRUMENTAL
DIPL. EN PTICA Y OPTOMETRA
TEMA 6.- EL MICROSCOPIO

Introduccin.
Estructura del microscopio.
Aumento visual.
Distancia de enfoque.
Campo visual.
Profundidad de enfoque.
Diafragma de campo y retculos.
Los oculares.
Apertura numrica.
Luminosidad.
Poder separador.
Tema 6. El microscopio
M. Martnez / A. Pons
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OPTICA INSTRUMENTAL
EL MICROSCOPIO
6.1.- Introduccin
Microscopio: Instrumento ptico subjetivo para la observacin
de objetos cercanos constituidos por detalles cuyas dimensiones
se sitan por debajo del mnimo separable por el ojo.
En principio, una lupa de gran aumento visual entrara en esta
definicin, sin embargo, en la prctica el valor del aumento de la
lupa est limitado, ya que para valores del aumento superiores a
=20 la lente sera demasiado pequea.
Qu solucin aporta el Microscopio?

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OPTICA INSTRUMENTAL
El microscopio proporciona una imagen final muy aumentada
tras un proceso de doble etapa, mediante el acoplamiento de

dos elementos convergentes.
El objetivo proporciona una imagen intermedia real e invertida.
La imagen intermedia sufre un aumento adicional bajo la

accin del ocular.
El acoplamiento del objetivo y el ocular proporciona un
aumento mximo en torno a 2.000

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6.2.- Estructura del microscopio
Objetivo: En la prctica, los objetivos son siempre sistemas
OPTICA INSTRUMENTAL
convergentes muy complejos.

Ocular: En general, el ocular est constituido por:
Lente de campo
Lente de ojo
A la distancia, t, entre el foco imagen del objetivo y el foco
objeto del ocular se le denomina intervalo ptico o longitud
ptica del tubo.
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OPTICA INSTRUMENTAL
Prctica de laboratorio
Construccin del Microscopio
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OPTICA INSTRUMENTAL
6.3.- Aumento visual

Al igual que en el caso de la Lupa, se define el aumento normal
del microscopio como el cociente entre el tamao angular aparente,
w, de la imagen y el tamao angular, wA, que tendra el objeto en el
caso de estar situado a -250mm del observador.
tan w '
tan wA
OPTICA INSTRUMENTAL
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tan w ' y ' 0.25

=
= ob oc
tan wA
y f oc'
El Microscopio proporciona valores altos del aumento visual en un

proceso de doble etapa:
OPTICA INSTRUMENTAL
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= oc oc = 0.25
t
0.25(m) 250 (mm)
=
=
f ob' f oc'
f m' (m)
f m' (mm)
El Microscopio se comporta como una Lupa de focal f m

El aumento visual del Microscopio es negativo
OPTICA INSTRUMENTAL
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Desde un punto de vista comercial el aumento del Microscopio se

suele especificar de la forma
m n, donde m = ob y n = oc
Objetivo m x (entre 10 y 100)

= 2000 (mximo)
Ocular x n (mximo 20)
Los objetivos se disean (aumento y correccin de aberraciones )
para una determinada longitud ptica y, por tanto, no es conveniente
utilizarlos en microscopios con diferente valor de t.
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OPTICA INSTRUMENTAL
6.4.- Distancia de enfoque

La distancia de enfoque o distancia de trabajo, de, es la distancia
desde el plano objeto hasta el vrtice de la primera superficie del
objetivo.
Para el caso ideal de un objetivo constituido por una lente delgada
zob fob
de =
= f +
'
ob
f ob'
ob
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OPTICA INSTRUMENTAL
6.5.- Campo visual

Porcin del objeto que es visible a travs del Microscopio.
Clculo del campo de iluminacin media en el espacio ptico imagen:
El ocular y la pupila del ojo estn en el espacio imagen.
Hay que calcular la posicin del conjugado del objetivo en el espacio imagen.
La imagen final proporcionada por el microscopio est en el infinito.
En los microscopios la montura del objetivo acta siempre como Diafragma
de Apertura (y Pupila de Entrada) y, por tanto, su conjugado en el espacio
imagen es la Pupila de Salida.
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6.5.- Campo visual

OPTICA INSTRUMENTAL
Posicin y tamao de la Pupila de Salida del Microscopio
f oc'2
f oc'
PS = p ob =
ob
a 'p = f oc
' +
' +t
f ob
f ob
' +t
a 'p = f oc' + z p'
Emergencia pupilar
Para una observacin ptima la pupila del ojo ha de

situarse sobre la Pupila de Salida del Microscopio
OPTICA INSTRUMENTAL
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Clculo del campo de iluminacin media en el espacio ptico imagen

El semicampo imagen de iluminacin media es
el ngulo subtendido por la montura del ocular
desde el centro de la pupila del ojo
Campo de iluminacin media en

el espacio ptico intermedio
tan wm' =
oc
2a 'p
2 m' = f oc'
oc
a 'p
OPTICA INSTRUMENTAL
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oc

el espacio ptico intermedio
2 m' = f oc'

el espacio objeto (Campo visual)
f ob' f oc' oc 0.25 oc

2 m =
=
'
t
a 'p
ap
a 'p
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OPTICA INSTRUMENTAL
Campo de iluminacin media en el espacio objeto (Campo visual)
f ob' f oc' oc 0.25 oc

2 m =
=
'
t
a 'p
ap
2 m es inversamente proporcional a y a 'p
Se utilizan oculares compuestos para aumentar el campo
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OPTICA INSTRUMENTAL
6.6.- Profundidad de enfoque

En general: la longitud ptica t f ob'
La posicin de la P.S Plano focal imagen del Microscopio
e = f m'2 Am
2
0.25
e =
Am (Expresada en m)

El Microscopio trabaja en condiciones de AUMENTO NORMAL
Ejemplo
Microscopio de 100 Aumentos
e = 0.025mm = 25 m
Observador de Am = 4 D
La profundidad de enfoque de un Microscopio es reducida.

El mecanismo de enfoque ha de ser muy preciso.
El Microscopio permite medir distancias axiales con gran precisin.
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OPTICA INSTRUMENTAL
6.7.- Diafragma de campo y retculos

El Microscopio compuesto presenta frente a la Lupa la ventaja
adicional de la existencia de una imagen intermedia real.
Sobre el plano de la imagen intermedia pueden situarse los
siguientes elementos :
Diafragma de campo:
Retculo: Elemento transparente, con dibujo de lneas o escala.
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OPTICA INSTRUMENTAL
Para una observacin ptima la pupila del ojo ha de
situarse sobre la Pupila de Salida del Microscopio
Determinacin de la posicin y tamao de la Pupila de Salida
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OPTICA INSTRUMENTAL
Escala de 20 mm
Medida del Aumento lateral del

objetivo y del campo visual
ob = 3.2
2 m 5.6mm
1 div = 0.2 mm
Medicin de objetos
y=
y'
ob
2.2mm
0.7mm
3 .2
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OPTICA INSTRUMENTAL
6.8.- Los oculares

El campo visual de un microscopio es inversamente proporcional
al aumento visual del mismo. Como consecuencia de ello el
campo visual de los microscopios de gran aumento es muy
reducido. Para aminorar este problema, los microscopios, y en
general todos los instrumentos pticos visuales, incorporan
oculares compuestos por dos lentes.
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OPTICA INSTRUMENTAL
Hoc
f '=
f '1 f '2
f '1 f '2
=
t
( f '1 + f '2 ) e
H1 F =
H '2 F ' =
f '1 ( e f '2 )
f '1 + f '2 e
f '2 ( f '1 e )
f '1 + f '2 e
Hoc
f 'oc =
f 'F f 'E
= f 'E
f 'F + f 'E e
H F Foc =
f 'F ( e f 'E )
f 'F + f 'E e
=0
f 'E ( f 'F e )
f '2E
H 'E F 'oc =
= f 'E
f 'F + f 'E e
f 'F
OPTICA INSTRUMENTAL
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a 'p = H 'E F 'oc + z 'p
f 'E2
a 'p = a 'p
f 'F
250 E
2m =
a 'p
El campo aumenta al utilizar oculares compuestos

OPTICA INSTRUMENTAL
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El ocular analizado constituye la forma ms simple de un ocular doble. No es

conveniente, sin embargo, situar la lente de campo sobre la imagen intermedia
proporcionada por el objetivo, ya que:
Es preciso evitar que posibles ralladuras o motas de polvo presentes en la
lente de campo aparezcan superpuestas con la imagen final.
En muchas ocasiones, es necesario colocar sobre esta imagen intermedia
un retculo para poder efectuar mediciones del objeto.
En general, el diseo de los oculares es bastante complejo ya que se ha de
tener en cuenta, adems, la compensacin de aberraciones.
Huygens
Ramsdem
f F' = 3 f E'
f F' = f E'
(3,2,1)
Smbolo del Doblete

( f '1 , e, f '2 )
(3,2,3)
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OPTICA INSTRUMENTAL
Construccin de un Microscopio con ocular doble.

Estudio de la influencia de la Lente de campo:
Posicin y tamao de la Pupila de salida:
La emergencia pupilar disminuye.
El dimetro de la PS no cambia.
Campo visual: Aumenta.
Aumento visual: No vara.
OPTICA INSTRUMENTAL
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yr'
tan w ' = '
tan w '
fA
=
tan wA
y
tan wA =
250
Medida del Aumento visual del Microscopio

con ocular simple y con ocular doble.
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OPTICA INSTRUMENTAL
6.9.- Apertura numrica del objetivo

Para caracterizar la apertura del haz til en un microscopio se utiliza la
denominada apertura numrica. Esta magnitud juega un papel decisivo
tanto en la luminosidad como en el poder separador del microscopio.
AN = n sin
OPTICA INSTRUMENTAL
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AN = n sin
PS = 2 f 'oc sin '
sin ' =
n sin AN
=
ob
ob
PS
AN
AN
= 0.5
m = 500
mm
OPTICA INSTRUMENTAL
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AN = n sin
PS
AN
AN
= 0.5
m = 500
mm
Ejemplo
AN = 0.50
= 40 10 = 400
ob = 40
PS = 500
0.50
= 0.625 mm
400
oc = 10
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Para el caso de objetos extensos, se define la luminosidad como el

cociente entre la iluminacin retiniana en visin a travs del instrumento
ptico, y la obtenida en visin directa.
efPS
E 'r
Ce =
=
E 'A
A
En la prctica totalidad de los casos las pupila de salida del microscopio

constituye la pupila de salida efectiva del acoplamiento.
2
500 AN
500 AN
Ce =
=
A
oc A ob
Ejemplo
OPTICA INSTRUMENTAL
6.10.- Luminosidad
AN = 0.50
= 40 10 = 400
A = 4 mm
500 0.50
Ce = ( 0.75 )
0.02
400 4
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OPTICA INSTRUMENTAL
En el caso en que, sobre un fondo oscuro, el objeto observado es

puntual, o sus dimensiones tan reducidas que su imagen impresiona un
nico fotorreceptor, la luminosidad vale
ef
'r
a PE
Cp =
=
'A
x A
2
Observacin
con instrumento
Observacin directa
Microscopio
Observacin directa
250
'r
=
=
Cp
'A
de
efPE
250
'r
=
=
Cp
'A
de
efPE
PS
f'
f oc
'
= p = oc =
PE
f ob
' +t
zp
' +t )
d e = ( f ob
f ob
'
t
2
ef
PS
250
Cp =

' / t A
f o' b f oc
Cp = 2 Ce
Ganancia en contraste : Gc =
Ejemplo
OPTICA INSTRUMENTAL
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Cp
Ce
= 2
AN = 0.50
= 40 10 = 400
Cp = 2 Ce = 4002 0.02 = 3200
A = 4 mm
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OPTICA INSTRUMENTAL
6.11 Poder separador

El poder separador es la cualidad esencial de un microscopio ya que su
finalidad es proporcionar al ojo imgenes discernibles de los detalles
ms finos de los objetos.
OPTICA INSTRUMENTAL
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Segn se establece en el Tema 3, y supuesto que las aberraciones han

sido convenientemente corregidas, el poder separador est limitado por
el fenmeno de la difraccin y por la estructura discreta de la retina.
A los efectos de la difraccin, y asumiendo que la Pupila de Salida del
Microscopio es menor que la Pupila de Entrada del ojo, el lmite de
resolucin vale:
dif =
0.61
AN
dif =
0.55 m
0.33
m
AN
Con respecto a la influencia de la estructura de la retina, al igual que

en el caso de la Lupa, el lmite de resolucin vale:
ret = 250
tan (A )
1
100
mm =
m
10
A = 80''
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OPTICA INSTRUMENTAL
Si consideramos conjuntamente ambos factores: mic
0.61 100
,
= mx
AN
La interseccin de las dos curvas define el aumento til o superresolvente:
util = 100
AN
0.61
util = 300 AN
0.55 m
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OPTICA INSTRUMENTAL
Ejemplo
AN = 0.5
oc = 10
ob = 15
mic =
oc = 10mm
util = 150
100 100
=
m = 0.67m
150
2
500 AN
500 0.5
Ce =
=
0.75
= 0.13
150 4
A
2m =
250 oc 250 oc
250 10
=
= 0.67 mm
a 'p
f 'oc 150 25
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OPTICA INSTRUMENTAL
AN = 0.5
ob = 30
oc = 10
oc = 10mm
= 300
util = 150
mic = 0.67m
2
mic = 0.67m
500 AN
500 0.5
Ce =
=
0.75
= 0.033
300 4
A
2m =
250 oc 250 oc
250 10
=
= 0.33mm
a 'p
f 'oc 300 25
Ce = 0.13
2m = 0.67mm
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OPTICA INSTRUMENTAL
6.12 Objetivos de microscopio

Los objetivos de microscopio se disean para proyectar sobre el plano
focal objeto del ocular una imagen aumentada del objeto. El diseo de
los objetivos busca la correccin ptima de las aberraciones para
valores de la AN lo ms altos que sea posible.
Cuanto mejor es la correccin de aberraciones y ms alta la AN, mayor
es la dificultad de diseo y, por tanto, el precio del objetivo.
Objetivos acromticos: Son los ms baratos (y comunes). Corrigen
la aberracin cromtica axial para dos (rojo y azul) y la aberracin
esfrica para el verde.
Objetivos semi-apocromticos fluorita (Ph): Corrigen la aberracin
cromtica axial para dos (rojo y azul) y la aberracin esfrica tambin
para dos .
Objetivos apocromticos: Corrigen la aberracin cromtica axial
para tres (rojo, verde y azul) y la aberracin esfrica para dos .
OPTICA INSTRUMENTAL
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OPTICA INSTRUMENTAL
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OPTICA INSTRUMENTAL
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OPTICA INSTRUMENTAL
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OPTICA INSTRUMENTAL
Objetivos de inmersin
AN = n sin
http://www.microscopyu.com/tutorials/java/objectives/immersion/index.html
43 / 48
OPTICA INSTRUMENTAL
Apertura Numrica y distancia de enfoque
http://www.microscopyu.com/tutorials/java/objectives/nuaperture/index.html
OPTICA INSTRUMENTAL
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OPTICA INSTRUMENTAL
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http://www.olympusmicro.com/primer/anatomy/specialobjectives.html
46 / 48
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Ocular
Objetivo
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OPTICA INSTRUMENTAL
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TEMA 6.- EL MICROSCOPIO

Qu solucin aporta el Microscopio?

El microscopio proporciona una imagen final muy aumentada

tras un proceso de doble etapa, mediante el acoplamiento de

La imagen intermedia sufre un aumento adicional bajo la

El acoplamiento del objetivo y el ocular proporciona un

aumento mximo en torno a 2.000

6.2.- Estructura del microscopio

Objetivo: En la prctica, los objetivos son siempre sistemas

convergentes muy complejos.

Construccin del Microscopio

6.3.- Aumento visual

tan w ' y ' 0.25

El Microscopio proporciona valores altos del aumento visual en un

El Microscopio se comporta como una Lupa de focal f m

Desde un punto de vista comercial el aumento del Microscopio se

Objetivo m x (entre 10 y 100)

6.4.- Distancia de enfoque

6.5.- Campo visual

6.5.- Campo visual

Posicin y tamao de la Pupila de Salida del Microscopio

a 'p = f oc' + z p'

Para una observacin ptima la pupila del ojo ha de

Clculo del campo de iluminacin media en el espacio ptico imagen

Campo de iluminacin media en

Campo de iluminacin media en

Campo de iluminacin media en

f ob' f oc' oc 0.25 oc

Campo de iluminacin media en el espacio objeto (Campo visual)

f ob' f oc' oc 0.25 oc

6.6.- Profundidad de enfoque

La posicin de la P.S Plano focal imagen del Microscopio

Microscopio de 100 Aumentos

La profundidad de enfoque de un Microscopio es reducida.

6.7.- Diafragma de campo y retculos

Retculo: Elemento transparente, con dibujo de lneas o escala.

Determinacin de la posicin y tamao de la Pupila de Salida

Medida del Aumento lateral del

6.8.- Los oculares

a 'p = H 'E F 'oc + z 'p

El campo aumenta al utilizar oculares compuestos

El ocular analizado constituye la forma ms simple de un ocular doble. No es

Smbolo del Doblete

Construccin de un Microscopio con ocular doble.

Medida del Aumento visual del Microscopio

6.9.- Apertura numrica del objetivo

PS = 2 f 'oc sin '

Para el caso de objetos extensos, se define la luminosidad como el

En la prctica totalidad de los casos las pupila de salida del microscopio

En el caso en que, sobre un fondo oscuro, el objeto observado es

Cp = 2 Ce = 4002 0.02 = 3200

6.11 Poder separador

Segn se establece en el Tema 3, y supuesto que las aberraciones han

Con respecto a la influencia de la estructura de la retina, al igual que

Si consideramos conjuntamente ambos factores: mic

La interseccin de las dos curvas define el aumento til o superresolvente:

6.12 Objetivos de microscopio

Apertura Numrica y distancia de enfoque

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