UNIVERSIDAD TECNOLGICA EQUINOCCIAL

FACULTAD DE CIENCIAS DE LA INGENIERA

CARREA DE INGENIERA AMBIENTAL Y MANEJO DE RIESGOS NATURALES
MICROBIOLOGA GENERAL
Portafolio de Microbiologa 2 Bimestre

Nombre: Milagros Villota

Profesora: Ing. Alexandra Endara.
Curso: 2B

TCNICAS DE SIEMBRA EN CAJAS PETRI.

Tcnica del estriado:
Se limpi el rea de trabajo con alcohol, luego se encendi el mechero y se trabaj en
dentro del rea de seguridad proporcionado por el mechero, luego se esterilizo el asa de
inoculacin al rojo vivo en la llama del mechero, se dej enfriar y se procedi a coger la
muestra (cepa bacteriana) despus se sembr en un cultivo slido, haciendo pequeos
zigzag o estras luego se esterilizo el asa y nuevamente se realiz 4 lneas y esto se repiti
cuatro veces procurando que las primeras lneas no se junten con las ultimas lneas y al
final se realiz un signo el mitad y se etiqueto el cultivo.
Tcnica del hisopado o plateado:
Se trabaj dentro del rea de seguridad proporcionado por el mechero se tom una
muestra de cultivo lquido mediante un hisopo estril. Se extendi la muestra por toda la
placa que contiene agar nutritivo, luego se etiqueto el cultivo.
TCNICAS DE SIEMBRA EN TUBOS DE ENSAYO
Tcnica de puncin o picadura:
Se trabaj dentro del rea de seguridad proporcionada por la llama del mechero despus
con el aguja de inoculacin esterilizada y enfriada se recogi la muestra y se procedi a
sembrar en el tubo que contiene medio de cultivo semislido (SIM) se realiz una puncin
en el fondo del tubo sin que este tope el fondo del tubo. Se etiqueto el cultivo.
Tcnica de cola de pez:
Se trabaj dentro del rea de seguridad proporcionada por la llama de mechero, despus
con el asa de inoculacin esterilizada y enfriada se recogi la muestra y se procedi a
introducir la muestra en el tubo que contiene agra Simmons y al momento de sacar el asa
se realiz movimientos ondulatorios. Se etiqueto el cultivo.
Tcnica de inoculacin en medio lquido:
Se trabaj dentro del rea de seguridad proporcionado por la llama del mechero, con el
asa esterilizada y enfriada se tom la muestra y se introdujo y se agit en un tubo de
ensayo que contiene medio de cultivo lquido (caldo nutritivo). Se etiquet el cultivo.
Para todas estas tcnicas de inoculacin se utiliz la muestra de E coli y se dej incubar
a 37 C por 24 horas, luego se report los resultados referentes a las caractersticas ms
sobresalientes de las colonias encontradas.

4. RESULTADOS

Tcnica de Hisopado
Se introdujo el hisopo en el medio turbio, se esparci por toda la placa, despus
se coloc el hisopo usado en el frasco correspondiente

Tabla 1. Resultados Tcnica de Hisopado

Placa N1

Placa N2

Se observaron colonias Hubo

un
mayor
por todas las placas crecimiento de colonias
incluyendo los bordes.
alrededor del centro de la
placa.

Placa N3
Hubo
un
mayor
crecimiento de colonias
alrededor de los bordes
de la placa.

Figura 1. Tcnica del Hisopado.

Tcnica de Estriado
Se esterilizo el asa de inoculacin, se tom el inoculo se esparci en una esquina
la colonia, despus se esterilizo el asa y se realiz 4 lneas se repiti esto 3 veces
procurando que las primeras lneas no se topen con las ltimas.

Placa N1

Tabla 2. Resultados Tcnica de Estriado.

Placa N2
Placa N3

Se observa colonias en
las 4 lneas realizadas y
se observa tambin, una
colonia aislada en el
centro.

Aparecen
diferentes
colonias muy juntas y a
diferencia de la primera
placa, no se pueden notar
las lneas.

Se ve claramente lneas
pero no se observan
muchas colonias, sin
embargo en el centro de la
placa, si se observa unas
cuantas colonias.

Figura 2. Tcnica de Estriado.

Tcnica de Cola de pez
Se esterilizo el asa, se cogi el inoculo y luego se introdujo en el tubo y se esparci
en forma de zigzag.
Tabla 3. Resultados Tcnica Cola de Pez.
Tubo N1
Tubo N2
Tubo N3
Se ven ciertas partes con Se ven muy pocas
algunas colonias, el resto colonias, el medio se
no cambia, el medio rompe.
permanece igual.

Se
ven
claramente
muchas colonias, el medio
de cultivo cambia de color
a un rosado.

Figura 3. Tcnica Cola de Pez.

Tcnica de Depsito
Se esteriliz el asa de inoculacin, se tom el cultivo y se introdujo en el tubo
revolviendo
Tabla 4. Resultados Tcnica de Depsito.
Tubo N1
Tubo N2
Tubo N3
El medio de cultivo Ocurre lo mismo que en el
cambia a un color amarillo tubo nmero 1.
suave, teniendo en cuenta
que antes era incoloro. Y
se vuelve turbio.

Tiene un color mucho ms

fuerte, tambin se ve ms
turbio que los otros dos
tubos con medios de
cultivo.

Figura 5. Tcnica de Depsito.

Tcnica de Puncin.
Se esterilizo la aguja de inoculacin y se tom el cultivo, despus se introdujo en
el tubo dando un pinchazo hasta el fondo, se sac la aguja y se esterilizo.

Tubo N1

Tabla 5. Resultados Tcnica de Puncin.

Tubo N2
Tubo N3

El medio de cultivo cambia Ocurre lo mismo que en el Ocurre lo mismo que en el

de un color amarillo tubo nmero 1.
tubo nmero 1.

transparente a un negro
muy obscuro. Tambin se
observa en la superficie
una especie de capa color
blanco/gris.

Figura 6. Tcnica de Puncin.

5. CONCLUSIONES

Gracias a la presente prctica se pudo conocer diferentes tcnicas de inoculacin

en diferentes medios de cultivo, a la par de saber cmo interpretar resultados
teniendo en cuenta dichos cultivos.

As tambin se realiz un aislamiento de microorganismos utilizando placas de

cultivo para que, con la ayuda del asa crear un estriado y as observar mejor las
diferentes colonias que los microorganismos pueden crear.

Finalmente, se pudo conocer, la razn del por qu en el mtodo de puncin, el

medio se torn de color negro, el cual nos afirma que existe un crecimiento de
bacterias productoras de SH2 es decir sulfuro de hidrogeno.

6. CUESTIONARIO DE INVESTIGACIN

1- Complete la siguiente tabla.

INSTRUMENTO

Asa de Digralski

GRFICO

TCNICA DE
SIEMBRA
Asa para siembra por
tcnica de diseminacin
en superficie: Extender
homogneamente una
alcuota
sembrada
sobre un medio slido.
(Santos, 2008)

Asa de Inoculacin

Tcnica del estriado

Tcnica de cola de pez
Tcnica de inoculacin
en medio lquido:
Se
emplea
para
transportar o arrastrar o
trasvasar
inculo
(Arroyo, 2004)

Aguja de Inoculacin

Tcnica de puncin o
picadura.
Con una
aguja se toma el
material que se quiere
sembrar
y
se
lo
introduce en el tubo,
con medio semislido.
(Gerard, 2007)

Hisopo

Tcnica de hisopado o
plateado. El mtodo de
hisopado puede ser
usado para recuperar
coliformes (Gutierrez,
2001)

2- Para qu se inoculan tubos con materiales solidos por estras?

Con el fin de enviar un cultivo microbiano para su desarrollo y multiplicacin, se
incuba a una temperatura adecuada para su crecimiento y el objetivo es obtener
colonias aisladas (Santambrosio, 2009).

3- Investigue la aplicacin especfica de las siguientes tcnicas de

inoculacin:

TUBOS
ENSAY
PLACAS
O

PETRI

TCNICAS DE
SIEMBRA
ESTRIADO

USO ESPECFICO:
Esta
tcnica
permite
el
aislamiento
de
microorganismos a travs de la generacin de
unidades formadoras de colonias.

HISOPADO

Es una tcnica que se aplica para la realizacin de

antibiogramas.

COLA DE PEZ

Se utiliza para la siembra de la misma utilizando una

estra ondulatoria.

PICADURA
INOCULACIN
MEDIO LQUIDO

Se lo utiliza cuando se presenta un medio de cultivo

profundo.
Se utiliza en medio de cultivo ligado con la tcnica de
agitacin sin topar el fondo del cultivo.

7. BIBLIOGRAFA:

Bibliografa

Arroyo, F. (2004). Bioquimica. Mexico: LIMUSA Noriega.

Gerard, J. (2007). Microbiologa. Mexico: panamericana.
Gutierrez, S. (2001). Mtodos de Esterilizacin . Mexico: Panamericana.
Santambrosio, E. (25 de Marzo de 2009). http://www.frro.utn.edu.ar. Obtenido de
http://www.frro.utn.edu.ar: http://www.frro.utn.edu.ar
Santos, M. (5 de febrero de 2008). http://www.ictsl.net. Obtenido de http://www.ictsl.net:
http://www.ictsl.net

3. MATERIALES Y MTODOS
DILUCIONES SUCESIVAS
Primero se rotul el material (frasco y tubos), luego se pes 10 gramos de la muestra que se nos design
la cual fue suelo agrcola y luego se coloc en 90 ml de agua de peptona (dilucin 10-1). Se flame la boca
de la botella y se tap luego con movimientos de arriba hacia abajo se homogeniz la muestra, se tom 1
ml de la solucin y se coloc en un tubo que contenga 9 ml de agua de peptona, se homogeniz utilizando
un vortex y as se form la dilucin 10-2, de esta se tom 1 ml y llevo a un tubo que contiene 9 ml de agua
de peptona, se homogeniz utilizando un vortex y as se form la ltima dilucin 10-3. Se incub a 37C x
24 horas. Se pueden realizar ms disoluciones dependiendo el tipo de muestra.

SIEMBRA POR VERTIDO

Primero se rotul las placas, se escribi el nmero de grupo, fecha, medio, microorganismo, temperatura
de incubacin y factor de dilucin.
Se prepar el medio de cultivo en el radio de seguridad proporcionado por la llama del mechero. Se coloc
una alcuota (1 ml) de muestra suelo agrcola en las placas petri vacas y estriles, luego se realiz
movimientos giratorios para que se esparciera por toda la placa, luego se coloc el agar tibio y se procedi
a realizar movimientos que imite al de un 8 con el fin de mezclar el cultivo y el medio y, a la vez, difundir
el agar, luego se colocaron las placas en un agitador de placas. Se dej solidificar el medio de cultivo y
se invirti las placar para incubar a 37C x 24 horas, esto se realizo com todas las de soluciones.

SIEMBRA POR EXTENSIN

Primero se rotul las placas, se escribi el nmero de grupo, fecha, medio, microorganismo, temperatura
de incubacin y factor de dilucin.
Se deposit sobre el medio de cultivo una alcuota (0.1 mL) de muestra suelo agrcola en el centro de la
placa petri con medio de cultivo slido (agar), luego con el asa de Digralsky, se extendi la muestra sobre
toda la superficie de la Placa Petri por lo menos dos veces para asegurar una distribucin uniforme, esto
se realiz con todas las disoluciones, se incub a 37C x 24 horas. Se reportaron los resultados referentes
a las caractersticas ms sobresalientes de las colonias encontradas.

4. RESULTADOS

Para nuestro grupo se nos asign de muestra el suelo agrcola.

Tabla 1. Datos de la muestra (suelo agrcola)

DATOS GENERALES
Muestra

Suelo Agrcola

Lugar de toma de muestra

El Condado

Fecha y hora de toma de la muestra.

17/11/2014 - 15:30

Temperatura:

25C

Humedad relativa:

50%

CARACTERSTICAS
Consistencia

Slida

Olor

Composta

Color

Caf oscuro

TRANSPORTE DE LA MUESTRA
Congelada

No

Refrigerada No

Observaciones y datos adicionales

T ambiente 25C

El suelo es hmedo por lo cual es apto

para el cultivo

Para la muestra que se nos asign la cual fue suelo agrcola realizamos los clculos para determinar
cunto se necesit de diluyente.
=

1
10
=
10
10 +
10g + x = 100g
x = 90ml de diluyente

DILUCIONES SUCESIVAS
Para las disoluciones se parti de nuestra muestra de agua con suelo agrcola de disolucin (10-1), de
esta se tom 1ml y se coloc en un tubo que contiene 9ml de diluyente y nos dio la dilucin (10-2), de este
se tom 1ml y se coloc en un tubo que contiene 9ml de diluyente y nos dio la disolucin (10-3).
Observamos que entre cada dilucin que se realiz en contenido se torna menos turbio y esto consiste en
disminuir la carga microbiana que existe en la muestra y as facilitar el recuento de los microorganismos
presentes en dicha muestra.

Figura 1. Diluciones sucesivas.

SIEMBRA POR EXTENSIN

Se extendi 0.1ml de dilucin en cada una de las placas rotuladas que contienen la muestra de agar
slido, se dej incubar a 37C por 24 horas, despus de transcurrido ese tiempo se observ:
Dilucin (10-1), se observ varias colonias formadas las cuales supero el rango de 30 300 para lo cual
se dividi la placa y el nmero de colonias formadas en una porcin de la placa se multiplico para el
nmero de divisiones, lo cual facilit el recuento de las colonias formadas.

Figura 2. Siembra por extensin (10-1).

Dilucin (10-2), se observ menor carga microbiana lo cual fue ms sencillo contar las colonias formadas.

Figura 3. Siembra por extensin (10-2)

Dilucin (10-3), se observ una mnima cantidad de colonias lo cual nos indica que entre ms diluciones
realicemos menor ser la carga microbiana contenida en la muestra y ser ms sencillo realizar el
recuento.

Figura 4. Siembra por extensin (10-3)

Tabla 2. Reporte de resultados para la tcnica de extensin.

DISOLUCIN
10-1
10-2
10-3

# UFC

FACTOR DE
DISOLUCION
10
100
1000

560
108
41
PROMEDIO
REPORTE DE RESULTADOS (UFC/g)
=
=

.
.

RESULTADO
No se usa
10800
41000
25900
2.59X10-4 UFC/g

= 10800 UFC/g
= 41000 UFC/g

SIEMBRA POR VERTIDO

Se verti 1ml de la dilucin en cada una de las placas vacas rotuladas, se realiz movimientos en 8 para
que se esparza bien la alcuota y luego se procedi a colocar el agar tibio se coloc en el agitador de
placas hasta que se homogenice y solidifique, se dej incubar a 37C por 24 horas, despus de
transcurrido ese tiempo se observ:
Dilucin (10-1), se observ varias colonias formadas las cuales supero el rango de 30 300 para lo cual
se dividi la placa y el nmero de colonias formadas en una porcin de la placa se multiplico para el
nmero de divisiones, lo cual facilit el recuento de las colonias formadas.

Figura 5. Siembra por vertido (10-1)

Dilucin (10-2), se observ menor carga microbiana lo cual fue ms sencillo contar las colonias formadas.

Figura 6. Siembra por vertido (10-2)

Dilucin (10-3), se observ una mnima cantidad de colonias lo cual nos indica que entre ms diluciones
realicemos menor ser la carga microbiana contenida en la muestra y ser ms sencillo realizar el
recuento.

Figura 7. Siembra por vertido (10-3)

Tabla 3. Reporte de resultados para tcnica de vertido.
DISOLUCIN
10-1
10-2
10-3

# UFC

FACTOR DE
DISOLUCION
10
100
1000

1224
688
215
PROMEDIO
REPORTE DE RESULTADOS (UFC/g)

RESULTADO
No se usa
No se usa
215000
215000
2.15x10-5 UFC/g

5. CONCLUSIONES

Al finalizar la prctica se puede concluir que, comparando los mtodos de homogenizacin y tcnicas de
siembra se pudo hacer cultivos de una manera eficaz, as del mismo modo aprender las reglas de recuento
de placas mediante la prctica, sobre todo para poder poner unos resultados correctos.
As tambin el familiarizarse con la morfologa de los microorganismos que se encuentran aislados, que
entra directamente al tema del recuento de cultivos.
As se puede concluir que para cada dilucin que se realiza va disminuyendo la carga microbiana lo que
facilita el recuento total en placas.

6. CUESTIONARIO DE INVESTIGACIN
1. Se tiene 250 g de muestra. Qu cantidad de diluyente se debe emplear para conseguir una
primera dilucin al 1/10?
250 1

= 2500
1 10

2500-250= 2250 ml de diluyente.

2. En qu casos esta tcnica no se usa?

Esta tcnica no se usa cuando existen poblaciones menores a 30 UFC/ml o superiores a 300 UFC/ml
es decir, que no se encuentren en el rango.
3. Reporte los resultados de los siguientes recuentos (indique los clculos realizados)

Chochos
= 297000

=1200000

=3500000
Total= 1.6x105
Chaulafn
=118000

=330000
Total = 2.2x10
Agua de ro contaminado
=4400000

Total= 4.4x105

No se calcula los dems datos, puesto que estn fuera del rango.

Dilucin

Chochos

Chaulafn

Agua de ro
contaminado

10-3
10-4
10-5

297
120
35

118
33
2

655
231
44

Suelo
contaminado con
desechos
orgnicos
MNPC
866
396

7. BIBLIOGRAFA:

-Gerard J. (2007). Introduccin a la Microbiologa (9th ed.). New York: Pearson Education
-Prescott, H. (2005). Microbiologa. Espaa: EDIGRAFOS.
-Annimo. (sin fecha). Manual de Microbiologa. Departamento de Microbiologa y Gentica. Universidad
de Salamanca.
ITEM

PONDERACIN

Formato
Ortografa
Introduccin
Materiales y mtodos
Resultados
Conclusiones
Cuestionario
Bibliografa
TOTAL

ASIGNATURA:
CARRERA: (En Lab)
NIVEL Y PARALELO (En Lab) :
Fecha realizacin :
Fecha presentacin informe:
Prctica N:

Laboratorio de
Microbiologa.
Ingeniera Ambiental
2A
09/12/14
16/12/14
5

CALIFICACIN

0.5
1
2
1
3
1
1
0.5
10

Grupo N 10

TTULO DE LA PRCTICA (Con mayscula, negrilla y centrado):

Mesa N

Integrantes
Paredes Daniel
Jaramillo Carlos
Villota Milagros

PRUEBAS DE DIFERENCIACIN BIOQUMICAS

1. INTRODUCCIN
La identificacin bacteriana se realiza mediante las caractersticas morfolgicas y bioqumicas de los
organismos.
Mediante las pruebas bioqumicas se puede realizar la identificacin de especies bacterianas, existen
numerosas pruebas bioqumicas con medios de cultivo adicionados de indicadores de pH para detectar
la produccin de cido con inhibidores selectivos que facilitan la determinacin de diferentes
actividades metablicas. (Monge, 2005)
Las pruebas bioqumicas pueden proporcionar datos acerca del nicho de la especie en el ecosistema.
Las enterobacterias gramnegativas constituyen un grupo grande y heterogneo de microbios.
Generalmente una prueba bioqumica determina la actividad de una va metablica. (Gerard J, 2007)
Existen diferentes pruebas bioqumicas comerciales entre las ms importantes tenemos galactosidasa
(ONPG), Arginina dehidrolasa, Lisina y ornitina decarboxilasa,Utilizacin de citrato, produccin de
SH2,Produccin de indol, Ureasa, Triptfano desaminasa (produccin de indol), Reduccin de nitratos,
Rojo de metilo, Voges Proskauer.
Hay diferentes medios de cultivo para realizar estas pruebas son: Agar EMB, Agar MacConkey, Agar
Simmons citrato, Agar hierro tres azucares, Agar manitol sal y medio SIM. (Prescott, 2005)

2. OBJETIVOS

El objetivo del presente informe es observar los tipos de metabolismo bacteriano utilizando pruebas
bioqumicas e identificar el tipo de microorganismo.

3. MATERIALES Y MTODOS
Aislamiento de enterobacterias
Se estri en placas Petri con agar para enterobacterias (EMB) y se procedi a incubar a 35C por 24
horas. Se compar con estndares manuales las caractersticas de colonias tpicas de
enterobacterias.
Purificacin
Se tom una asada de las colonias diferentes encontradas en los medios selectivos para
enterobacterias y se procedi a inocular por estriamiento en placas Petri con agar Mac Conkey, luego
se incubo a 35C por 24 horas. Despus se realiz una tincin Gram, una vez que se ha observado un
solo tipo de colonias en las cajas estriadas se determin la clasificacin de Gram de cada una de las
colonias aisladas. Se estri en una caja con agar nutritivo y se incubo a 35C por 24 horas.
Identificacin
A partir de un cultivo puro se realiz pruebas bioqumicas para las colonias de enterobacterias
aisladas y se incubo todas ellas a 35C por 24 horas.
En medio Simmons Citrato se realiz una estra de cola de pez con el asa de inoculacin.
En medio TSI se realiz una puncin y cola de pez con la aguja de inoculacin.

En medio LIA se realiz una puncin y cola de pez con la aguja de inoculacin.
En medio SIM se realiz una puncin con la aguja de inoculacin.
En medio Agar Urea se realiz una estra cola de pez con el asa de inoculacin.
En medio Agar Manitol Sal se realiz una estra cola de pez con el asa de inoculacin.
En medio Caldo RM-VP se realiz un depsito con el asa de inoculacin.

Elaboracin de cepario
En frascos de antibiticos inyectables se coloc agra nutritivo y luego se dej enfriar de modo que
tome forma de pico de flauta, se inoculo por cola de pez las bacterias aisladas e identificadas,
finalmente se rotulo y se entreg en el laboratorio.

Despus de todo este proceso se procedi a la identificacin de la bacteria para lo cual utilizamos el
manual de Bergey.
4. RESULTADOS

Para las siguientes pruebas bioqumicas se utiliz dos medios de cultivo C1 y C6 para lo cual se redact
los resultados en la siguiente tabla.

Tabla 1. Resultados de las pruebas bioqumicas.

Prueba
Bioqumica

Medio de
cultivo

Composici
n

Reaccin

Uso
de Manitol
carbohidratos Sal

-5.0 g/L
enzima
digestiva de
casena
-5.0 g/L
enzima
digestiva de
tejido
animal
-1.0 g/L
extracto de
carne de
vaca
-10.0 g/L Dmanitol
-75.0 g/L
NaCl
-0.025 g/L
rojo de fenol
-15.0 g/L
agar
pH 7.4 0.2
at 25 C

Cambio de color C1: +

crecimiento de C6: +
microorganismo
s

Produccin
de Indol

Triptona
20.0
Peptona 6.1

Al colocar el C1: +
reactivo
de C6: Kovac se da la
produccin de
Indol

SIM

Resultad
o
positivo/
Negativo

Reactivo
usados

Observaciones

Se observ que
el crecimiento
de m.o se dio
fuera
de
la
puncin lo que
indica que los
m.o
son
tolerantes a la
sal y tambin se
dio un cambio
de coloren el
medio.

Reactivo
de Kovac

Se observa que
al colocar el
reactivo
de
kovac el tubo C1
presenta
un

Formacin de
cidos

Uso de
Citrato

Produccin
de Sulfuro

MRVP

Simmos
n
Citrato

SIM

Movilidad
SIM

Sulfato
amnico
ferroso 0.2
Tiosulfato
sdico 0.2
Agar-agar
3.5
pH final: 7.3
+- 0.2
Peptona
10g
Dextrosa 5g
Fosfato
dipotasico
5g
Agua
destilada
1000ml

Sulfato de
Magnesio
0.2
Fosfato de
Amonio 0.2
Fosfato
amnico de
Sodio 0,8
Citrato de
Sodio,
tribsico 2.0
Cloruro de
Sodio 5.0
Azul de
Bromotimol
0.08
Agar-agar
15.0
pH final 7.0
+- 0.2
Triptona
20.0
Peptona 6.1
Sulfato
amnico
ferroso 0.2
Tiosulfato
sdico 0.2
Agar-agar
3.5
pH final: 7.3
+- 0.2
Triptona
20.0
Peptona 6.1

cambio de color
y en el tubo C6
no se presenta
cambio de color.

Rojo de metilo
C1: En el primer C6: medio
Alfa naftanol
KOH
en
el
segundo medio

Cambio de color C1: +

Crecimiento de C6: +
microorganismo
s

No se produjo C1: sulfuro ya que el C6: medio no se

hizo de color
negro.

Los
C1: +
microorganismo C6: +
s se movieron y
crecieron fuera

Rojo de
metilo
Alfa
naftanol
KOH

Con el rojo de
metileno
se
observa que no
se forma el
anillo rojo lo que
indica que la
prueba
bioqumica es
negativa
de
igual
manera
sucede
al
colocar en el
segundo cultivo
el alfa naftol y el
KOH.
En este medio
se observ que
el agar cambio
de color de azul
a verde lo que
indica que la
prueba
bioqumica es
positiva

Se observ que
los medios de
cultivo
no
presentaron una
coloracin
negra lo que
indica que no
hubo
produccin de
sulfuro
dando
las
dos
negativas.
Se observ que
los
microorganismo
s crecieron fuera

Catalasa
-------

Hidrlisis de
la Urea

Lisina
Descarboxilas
a

Gram

Urea

LIA

--------

Sulfato
de la zona de
amnico
cultivo
ferroso 0.2
Tiosulfato
sdico 0.2
Agar-agar
3.5
pH final: 7.3
+- 0.2
Se produjo un C1: +
burbujeo
C2: +

Peptona de
carne 1.0
Dextrosa
1.0
Cloruro de
Sodio 5.0
Fosfato
potsico 2.0
Rojo Fenol
0,012
Agar-agar
12.0

Peptona de
carne 5.0
Extracto de
levadura 3.0
Glucosa 1.0
L-lisina 10.0
Citrato
Frrico
amnico 0.5
Prpura de
Bromocreso
l 0.02
Agar-agar
12.5
pH final 6.7
+- 0.2

del rea que se

realiz
la
puncin lo que
indica que hubo
movilidad.

Agua
oxigenad
a

Al colocar el
agua oxigenada
en la placa se
observ
que
empez
a
burbujear lo que
indica que es
positivo
En
ese
se
observ
un
cabio de color
en le agar dando
como resultado
positiva
la
prueba
bioqumica
lo
que sucedi es
que la bacteria
sintetizo la urea
pero no es su
totalidad lo que
produjo que el
agar renga dos
capas.
En este cultivo
se observ la
produccin de
descarboxilasa
lo
cual
se
produjo
un
cambio de color
en el medio.

Cristal
violeta
Lugol
Alcohol
cetona
Safranina

Se observ que
al realizar un
frotis y colocar
los
reactivos
necesarios
al
mirar
en
el
microscopio se
observa que las
bacterias tiene
forma de cocos
y tiene un color

Cambio de color C1: +

Crecimiento de C2: +
microorganismo
s

Cambio de color C1: +

( morado)
C2: +
Crecimiento de
microorganismo
s

La
muestra C1: observada en el C2: microoscopios
es de color rosa
lo que indica
que es gram (-)

Produccin
de gas

TSI

Caseina
Produccin de C1: +
Pancreatica gas
C6: +
: 10.0
Cambio de color
Peptido de
tejido
animal 10.0
Cloruro de
Sodio 5.0
Lactosa
10.0
Sucruso
10.0
Dextrosa
1.0
Sulfato de
amonio
ferroso 0.2
Thiosulfato
de sodio 0.2
Rojo fenol
0.025
Agar-agar
13.0
pH final: 7.3
+- 0.2

rosa lo que
indica que son
Gram negativas.
En este cultivo
se observ un
cambio de color
y la produccin
de gas ya que el
agra se rompi
dando
como
positiva
la
prueba
bioqumica

Resultado: despus de observar todos los resultados de las pruebas bioqumicas se determin que la
bacteria C1 es Klebsiella Oxytoca y la bacteria C6 es Enterobacter Cloacae esto se pudo comparar en
el manual de Bergey.

Anexos

Figura 1. Prueba de la catalasa.

El Objetivo es buscar la presencia de la enzima catalasa, el perxido de hidrgeno se produce

al utilizar la bacteria el azcar por va oxidativa. Al ser ste un compuesto muy oxidante las
bacterias la eliminan mediante la produccin de la enzima catalasa (H2O2 -> H2O + O2).

Figura 2. Bacteria C1 Tincin Gram.

Figura 3. Bacteria C6 Tincin Gram

Figura 4. Tcnica del estriado C1 y C6.

Figura 5. Pruebas bioqumicas Manitol sal.

Pone de manifiesto la capacidad que poseen determinadas bacterias de utilizar el

malonato de sodio como nica fuente de carbono, con la consiguiente liberacin del
catin, que en presencia de iones agua produce alcalinidad.

Figura 6. Prueba bioqumica medio SIM.

El indol es uno de los productos de degradacin metablica del aminocido triptfano. Las
bacterias que poseen la enzima triptofanasa son capaces de hidrolizar y desaminar el triptfano
(presente en el medio) con produccin de indol.

Figura 7. Prueba bioqumica MRVP.

Rojo de metilo: Esta prueba se fundamenta en el tipo y la proporcin de productos de
fermentacin que se originan de la fermentacin de la glucosa

Figura 8. Prueba bioqumica Simmons Citrato.

Determinacin sobre la capacidad de un organismo de utilizar citrato como nica fuente de
carbono y energa. nicamente las bacterias capaces de metabolizar el citrato podrn
multiplicarse en este medio y, al hacerlo, liberarn iones amonio lo cual basificar el medio.

Figura 8. Prueba bioqumica LIA.

Esta prueba permite diferenciar los microorganimos que producen descarboxilacin o
desaminacin de la lisina. Se pude detectar ademas la produccion de SH2 y es ms sensible
que el TSI para la deteccin de SH2.

Figura 9. Prueba bioqumica Urea.

Determina la capacidad de un organismo de desdoblar la urea formando dos molculas de
amoniaco por accin del enzima ureasa.

Figura 10. Prueba bioqumica TSI.

El agar triple azcar hierro es un medio de cultivo diferencial que permite estudiar la capacidad
de produccin de cido y gas a partir de glucosa, sacarosa y lactosa en un nico medio.

5. CONCLUSIONES

Mediante la presente practica se puede concluir lo siguiente:

Se observ diferentes tipos de metabolismos bacterianos utilizando pruebas bioqumicas as
como tambin el conocimiento proporcionado en clase. De esta forma se pudo saber la
importancia de las pruebas bioqumicas para la caracterizacin e identificacin de
microorganismos.
De igual forma el uso adecuado de los diferentes materiales otorgados en clase es de suma
importancia para un mejor desarrollo de la prctica.

6. CUESTIONARIO DE INVESTIGACIN

1. Por qu es importante trabajar con cultivos puros para identificacin de

microorganismos?
Por qu los cultivos se inician a partir de colonias cristalizadas, de manera que todos los
individuos del mismo tipo, tengan la misma composicin gentica. Los microorganismos de
esta forma podrn ser identificados con absoluta seguridad.

2. Por qu se recomienda evaluar las pruebas bioqumicas primero a las 24 horas

y despus de 48 horas?
Se recomienda comprobar el resultado ya que, las mediciones pueden ser incorrectas si estas
no se hacen en los tiempos seleccionados, ya que las bacterias necesitan un tiempo de 24
horas para crecer completamente, y se revisa despus de 48 horas para ver si no fueron
alteradas por algn factor.

3. Qu pruebas se pueden realizar en un TSI? Describa detalladamente como e

interpretan lo resultados negativos y positivos en las muestras

El Agar hierro 3 azucares: Es un medio de cultivo que gracias a su composicin es uno de los
medios ms empleados en la diferenciacin de bacterias. Se pueden ver pruebas de
fermentacin, asi como tambin produccin de gases.

4. Qu prueba(s) empleara para diferenciar una enterobacteria de una

Pseudomona? y un Streptococcus de un Staphylococcus?
Enterobacterias de pseudomona: produccin de indol, movilidad, crecimiento en citratos,
produccin de urea.
Streptococcus de Staphylococcus: Prueba de Catalasa.

7. BIBLIOGRAFA:

Gerard, J. (2007). Microbiologa. Mexico: panamericana.

Monge, J. (2005). Bilogia General. Costa Rica: Universidad Estatal a Distancia.
Prescott, H. (2005). Microbiologa. Espaa: EDIGRAFOS.
Microbiologa.Dad (28 de marzo del 2010) Guas Laboratorio 1 y 2 recuperado de
http://es.slideshare.net/microbiologia.dad/guias-laboratorio-1-y-2 el 15 de diciembre del 2014.
M. Ramos, T. Volke, L. Prado, K. Shirai, F. Ramirez, M. Salazar. ( 2012) Manual de prcticas de
laboratorio, Microbiologa General. Mxico. Universidad autnoma metropolitana unidad
Itzapalapa.
Annimo. (Sin fecha) Agar TSI recuperado de
http://es.wikipedia.org/wiki/Agar_TSI el 15 de diciembre del 2014.