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I.

INTRODUCCIÓN

La microbiología ha ido dando nuevos resultados, los primeros se debieron mucho a
las técnicas de aislamiento de cultivos que fueron precedidos por el hallazgo de un
adecuado medio de cultivo, el Agar. Koch encontró que este era un alimento
“universal” de los microorganismos, un polisacárido derivado de las algas pardas.
Un material preparado para el crecimiento de microorganismos en un laboratorio se
denomina medio de cultivo. Algunas bacterias pueden crecer bien en casi cualquier
medio de cultivo; otras requieren de medios especiales y otras no pueden crecer en
ninguno de los medios inertes existentes hasta ahora. Los microbios que se
introducen en un medio de cultivo para que comiencen a crecer se denominan
inoculo. Los microbio que crecen y se multiplican se denomina cultivo.
Los medios de agar suelen utilizarse en tubos de ensayo o placas Petri, los tubos se
denominan tubos en pico de flauta o inclinados cuando el medio se solidifica
manteniendo el tubo en un angulo adecuado para lograr una gran superficie para el
crecimiento. Cuando el Agar se solidifica en un tubo en posición vertical se denomina
profundo. Los cultivos en placas Petri, denominados asi en honor a su inventor,
asistente de Koch, se realizan en placas poco profundas con una tapa que cubre
perfectamente la base para evitar la contaminación.
Existe una clasificación para los tipos de medio. Un medio químicamente definido
es aquel donde su composición química exacta es conocida, este tipo de medio suele
reservarse para el trabajo experimental del laboratorio o para el crecimiento de
bacterias autótrofas. Un medio complejo es aquel donde su composición exacta
varía de un lote a otro, ya que este medio esta hecho de nutrientes como extractos de
levaduras, carne, partes de plantas o proteínas digeridas. Hay medios específicos
para crecer anaeróbicos, es estos se utiliza un ingrediente reductor como tioglicolato
de sodio, que se combina con el oxígeno molecular disuelto para eliminarlo del
medio. También hay medios selectivos, éstos medios en particular proveen nutrientes
que ayudan al crecimiento y predominancia de un tipo particular de bacterias, y a su
vez inhibe que otros tipos de microorganismos estén presentes, un ejemplo de estos
es el medio para crecer la bacteria Neisseria gonorrhoeae. El Medio diferencial nos
permite diferenciar entre varios tipos de bacterias al incorporar a éste ciertas
substancias como sangre, sal, tintes y otros. Si inoculamos el medio con bacterias
que destruyen las células rojas mientras que otras bacterias no destruyen este tipo de
células, podemos diferenciar unas de otras en el mismo medio.
En esta práctica nuestro objetivo fue preparar y esterilizar medios de cultivo de
diferentes características para el cultivo de microorganismos.

2 Disolver los componentes del medio en agua destilada. añadir la cantidad de agua adecuada para conseguir la concentración deseada de los mismos. 4 En el caso del Agar Gelatina y el Agar Almidón se debe tomar en cuenta el orden: primero sales. gasa Balanza Erlenmeyers de 250 y 500 ml Pipetas graduadas Probetas de 100 ml Tubos de Ensayo Espátulas Lápiz marcador de vidrio Papel indicador de pH Papel Aluminio y papel corriente no absorbente Metodología: 1 Cada mesa de trabajo se encargó de la preparación de una cantidad suficiente de un determinado medio de cultivo. únicamente se agita la mezcla hasta la completa disolución de la misma. Dependiendo de la forma en que vaya a utilizarse el medio. Llevar a esterilizar (121°C) durante 15- . en su momento. para asegurar una completa disolución del agar (medios sólidos y semisólidos). Siguiendo las instrucciones del fabricante o del profesor.. segundo azúcares y finalmente los demás. el procedimiento será diferente: a Medios sólidos en placa. para medios líquidos no es necesario calentar.Tapar el matraz con tapón de algodón y cubrir con papel de aluminio.Materiales: - Medios de cultivo o ingredientes deshidratados Agua destilada Algodón.Una vez disuelto el medio se debe esterilizar para evitar el crecimiento de contaminantes. En muchos casos se parte de un preparado comercial con todos los componentes deshidratados. para ser utilizado. 5 Esterilizar la disolución.. por todos los alumnos del grupo de prácticas. 3 Si el medio contiene un agente solidificante (agaragar) hay que calentar el preparado hasta la ebullición del mismo agitando de vez en cuando.

textos señalan que esto no es del todo cierto. RESULTADOS: Caldo Nutritivo Extracto de Carne 0.5% El caldo nutritivo es un medio líquido que contiene 0.. tapar con tapón de aluminio y llevar a esterilizar. Es uno de los medios de cultivo más utilizados en el trabajo de bacteriología desde que Koch lo utilizara en uno de sus experimentos.3% Peptona 0. 0. ya que con el avance del conocimiento de la Microbiología se conoce que las bacterias varían . Una vez estéril repartir en placas de Petri estériles y dejar en reposo para que solidifique. lo que significa que posee todos los nutrientes necesarios para el crecimiento indiscriminado de todo tipo de microorganismos. Y aunque este es un medio complejo y común.3% de extracto de carne que es un concentrado de los componentes hidrosolubles de la carne Fue el resultado de los experimentos de Koch.5% de peptona que es un digerido enzimático de carne.b 20 minutos.Una vez disueltos los componentes repartir en tubos a razón de unos 2-4 ml por tubo. Medios líquidos.

se cultivan de modo sistemático en medios complejos. Un medio químicamente definido es uno del que se conoce la composición química exacta.  Según Stryer (2008). digeridos de proteínas de estas y otras fuentes. 1992). etc. Es por eso que en algunos medios de cultivo se necesita ajustar el pH para evitar la inactivación de algunas enzimas de las que dependen algunos microorganismos para subsistir. existen algunos factores que pueden inhibir agentes microbianos por ejemplo la temperatura. algunas enzimas tienen un pH óptimo y fuera de un rango de de pH determinado. CONCLUSIONES: . DISCUSIONES:  Según Tortora (2002). Los extractos de levadura tienen contenidos particularmente elevados de vitaminas del complejo B. azufre. cuando se agrega agar se convierte en agar nutritivo. fósforo y cualquier otro factor de crecimiento que el organismo no pueda sintetizar. nitrógeno.enormemente sus requerimientos alimenticios y no existe ningún medio capaz de permitir el crecimiento de más de una pequeña fracción de las bacterias que existen en la naturaleza (INGRAHAM. el pH. Es por esto que algunos medios de cultivo son esterilizados antes y luego se les somete a condiciones extremas donde solo pueden proliferar ciertos microorganismos. carne o plantas.  Según Madigan (2003). Casi todas las bacterias heterótrofas y los hongos. Ejemplo: amilasa a ph7. la salinidad. para favorecer el crecimiento microbiano un medio debe proporcionar una fuente de energía así como fuentes de carbono. Si un medio complejo se halla en una forma líquida se denomina caldo nutritivo. compuestos por nutrientes como extractos de levaduras. estas decrecen su velocidad de reacción hasta inactivarse.  Los medios químicamente definidos suelen reservarse para el trabajo experimental del laboratorio o para el crecimiento de bacterias autótrofas.

debiendo ser escogidos de acuerdo al propósito de lo que se quiere hacer: probar reacciones metabólicas.  Partiendo de un medio líquido podemos modificar su consistencia añadiendo agar. con lo que obtendríamos medios en estado sólido. Para el desarrollo de poblaciones bacterianas en medio de cultivo se debe contar con los nutrientes esenciales tales como proteínas (peptona).  Para la preparación de los medios de cultivo es necesario una estricta esterificación. Existen diferentes medios de esterilizar. etc. Además debe estar exento de cualquier microorganismo contaminante. requerimientos del medio. así como fuentes de energía. se podrá remplazar con materias primas llamadas “medios complejos”. lo que permite caracterizarlos de acuerdo a su composición química.  Los medios de cultivo son variados. . uno de los más conocidos es el “Autoclave” donde es necesario altas temperaturas y presión. carbohidratos. vitaminas (complejo B). ya que muy pocos microorganismos pueden degradar este polisacárido. Siempre deben presentar fuentes de los macroelementos. lípidos. H2O y minerales.  No siempre se utilizaran medios de cultivos hechos a base a sustancias puras (medios definidos) debido al alto costo de estos a nivel industrial. debido al bajo valor de estos en comparación de las puras. estado físico y características en el medio. puesto que si no lo está no se podrá llevar a cabo correctamente la identificación de los organismos.

se desglosa la composición de un medio complejo. por lo tanto la demostración de la hidrólisis del almidón puede hacerse tanto en medio líquido como en medio sólido.2%. la aparición de una zona clara alrededor de las colonias significa la hidrólisis del almidón. la enzima amilasa es también una enzima extracelular. Generalmente. Se señala el caso de la levadura Saccharomyces cerevisiae: en un medio definido que contiene glucosa. la molécula del almidón es muy compleja y para su asimilación por las bacterias. un gran número de bacterias son capaces de elaborar una enzima amilasa que hidroliza el almidón con formación de maltosa. Cuando la bacteria no hidroliza el almidón todo el medio permanece azul. utilizado para la producción de penicilina.CUESTIONARIO: 1. A (2003). se obtiene un rendimiento de 10 a 20 g/l de biomasa. mientras que algunas levaduras lo hacen en medios ácidos. estas deben descomponerla (hidrolizarla) en sustancias más simples y facilménte asimilables. ¿Por qué no es necesario ajustar el ph en el caldo nutritivo y si lo es en agar almidón? la mayoría de los microorganismos (con algunas excepciones) se desarrollan en medios neutros (pH 7) o ligeramente alcalinos. es por eso que es necesario ajustar el pH de los medios según los requerimientos de los microorganismos a estudiar.para ello se utiliza NaOH (hidróxido de sodio) para aumentar el pH y HCl (ácido clorhídrico) para bajar el pH. los componentes de los medios complejos son subproductos de alguna industria. por lo que son mucho más baratos que los medios definidos y se utilizan en la mayoría de los procesos industriales. ¿Cuáles son las ventajas de los medios complejos para el cultivo de microorganismos? Según Hernandez.En el agar almidon. mientras que en un medio complejo con melazas de caña o remolacha. En el medio sólido( sobre las placas) al agregar la solución de lugol . el aumento en el rendimiento así como el bajo precio de las melazas son factores muy atractivos para utilizarlo. para evidenciar la formación ácido será necesario agregar un indicador apropiado al medio de cultivo. la maltosa puede ingresar a la célula para ser utilizada. ya que la amilasa es una enzima extracelular. se incuba por 24 horas a 37°c. . los medios complejos se preparan a partir de ingredientes de origen natural cuya composición química no está del todo definida. el rendimiento es de 60 a 100 g/l de biomasa. la hidrólisis del almidón puede ser evidenciada en ausencia de bacterias. adicionar la solución de lugol y comprobar los resultados anteriores. En el Anexo 1.se formará un color azul si no hubo hidrólisis. para el efecto un filtro libre de gérmenes se agrega una solución del almidón al 0. 2. La concentración final de algunos microorganismos depende del tipo de medio de cultivo empleado.

extracelulares. fracciones de ácidos nucleicos. E. su contenido en tiamina es bajo y tiene una alta proporción de ácidos orgánicos lo que le hace que sea una adecuada fuente de carbono para organismos quimoorganotróficos (CAMACHO. Extracto de carne El extracto de carne comercial se obtiene de carne de vaca. vitaminas. Determine la naturaleza química y la función nutritiva de cada uno de los ingredientes que contienen los medios que se ha utilizado. Es una buena fuente de aminoácidos. El crecimiento microbiano se ve influenciado del origen el extracto de levadura. producido por una reacción autolitica o plasmática de dichas células. sales y otros nutrientes El extracto de carne concentrado es rico en hidratos de carbono y fosfatos con lo cual puede interaccionar y sufrir reacciones de Maillard. carbohidratos y vitaminas especialmente del complejo hidrosoluble C y tiene un bajo contenido en sales. ácidos orgánicos. E. E. aminoácidos. y no todos los microorganismos las poseen (CAMACHO. minerales. la cual es hervida durante un periodo de tiempo. Describa el autoclave y su forma de uso . oligopéptidos y aminoácidos junto con otros compuestos solubles que varía según la materia prima de partida. obteniéndose un extracto acuoso que normalmente es suplementado con digestos e proteínas para incrementar el contenido de nitrógeno amino. Para este medio existen muy pocas bacterias que son capaces de asimilar proteínas desnaturalizadas con fuente de nitrógeno ya que este proceso depende de la presencia de enzimas proteolíticas. 4. Por ello este extracto constituye una solución acuosa de péptidos. Extracto de levaduras El extracto de levadura consiste en una solución concentrada de hidrolizado proteico de células de Saccharomyces cerevisias. 2005). Peptonas Se define una peptona como el producto soluble en agua de una digestión enzimática e cualquier fuente proteica cuya composición es una mezcla de polipéptidos.3. 2005). 2005). pues el obtenido de levaduras de cerveza tiene un efecto inhibidor en el crecimiento de algunos microorganismos (CAMACHO.

). vidrio. provocando una modificación irreversible en enzimas e inhiben la actividad enzimática. Sirve para esterilizar material termosensibles como el descartable (goma. etc. etc.Un autoclave es un dispositivo que sirve para esterilizar material de laboratorio. El fundamento del autoclave es que coagula las proteínas de los microorganismos debido a la presión y temperatura. que pueden soportar las temperaturas de autoclave. Con aldehídos: Son agentes alquilantes que actúan sobre las proteínas. Glutaraldehído: Consiste en preparar una solución alcalina al 2% y sumergir el material a esterilizar de 20 a 30 minutos. metal. metal. equipos electrónicos. papel. Es muy peligroso por ser altamente inflamable y explosivo. utilizando vapor de agua a alta presión y temperatura para ello. así como los priones. Este método tiene la ventaja de ser rápido y ser el único esterilizante efectivo frío. ¿Que otro métodos de utilización se emplean para medios de cultivo? Qué ventajas otorgan? Métodos Químicos Estos métodos provocan microorganismos. bombas cardiorrespiratorias. hasta obtener una presión interna de 103 kPa. Puede esterilizar plástico. hidroxilos. 5. amino. etc. etc. aunque recientemente se ha llegado a saber de algunos microorganismos. y además cancerígeno. goma. plástico. y luego un enjuague de 10 minutos. Destruye todos los microorganismos incluso virus. Las autoclaves funcionan permitiendo la entrada o generación de vapor de agua pero restringiendo su salida. sulfhidrilos. . Un tiempo típico de esterilización a esta temperatura y presión es de 15 minutos. Estos compuestos destruyen las esporas. la perdida de viabilidad de los Con óxido de etileno: Es un agente que se une a compuestos con hidrógenos lábiles como los que tienen grupos carboxilos. lo cual provoca que el vapor alcance una temperatura de 121 grados centígrados.

. Impreso en España. Esterilización por gas-plasma de Peróxido de Hidrógeno Es proceso de esterilización a baja temperatura la cual consta en la transmisión de peróxido de hidrógeno en fase plasma (estado entre líquido y gas). en donde se colocan las pastillas y se calienta hasta los 60° C y pueden esterilizar materiales de látex. Décima Edicion. También pueden ser usadas en Estufas de Formol. Editorial Reverté. pag 107 STRYER.Formaldehido: Se utilizan las pastillas de paraformaldehido. 2008. Importancia de la proteasa peptona N°3 en la producción de pigmentos por Streptococcus agalactiae en el medio granada. El material no precisa aireación. etc. BERG. Impreso en España. que después pueden ser expuestos al calor para una rápida esterilización (acción del gas formaldehido). TYMOCZKO. BIBLIOGRAFÍA:    CAMACHO. . . 2005. Y El ciclo de esterilización dura entre 54 y 75 minutos. MADIGAN. MARTINKO & PARKER. Bioquímica. Brock Microbiologia de los microorganismos. que son cajas de doble fondo. plásticos. Tesis UNIVERSIDAD DE GRANADA. goma. Se convierte en agua y oxígeno al final del proceso. Editorial Prentice Hall. 2003. que ejerce la acción biocida. las cuales pueden disponerse en el fondo de una caja envueltas en gasa o algodón. Posee como ventajas: No deja ningún residuo tóxico. E. Las pastillas de formalina a temperatura ambiente esterilizan en 36 hs.