TEMA 2. IMTRODUCCION AL MICROSCOPIO.

Histologa es la ciencia que estudia todo lo referente a los tejidos orgnicos: su

estructura microscpica, su desarrollo y sus funciones. La histologa se
identifica a veces con lo que se ha llamado anatoma microscpica, pues su
estudio no se detiene en los tejidos, sino que va ms all, observando tambin
las clulas interiormente y otros corpsculos, relacionndose con la bioqumica
y la citologa. Las primeras investigaciones histolgicas fueron posibles a partir
del ao 1600, cuando se incorpor el microscopio a los estudios anatmicos.
Marcello Malpighi es el fundador de la histologa
BREVE HISTORIA SOBRE LA HISTOLOGIA.
El microscopio fue inventado hacia los aos 1610, por Galileo Galilei, segn los
italianos, o por Zacharias Janssen, en opinin de los holandeses. En 1628
aparece en la obra de William Harvey sobre la circulacin sangunea al
observar al microscopio los capilares sanguneos y Robert Hooke publica su
obra Micrographia.
Marcelo Malpighi (1628-1694), fue un anatomista y bilogo italiano considerado
el fundador de la Histologa, lo llaman el padre de la histologa. Tena una gran
capacidad de observacin, encomendndose al estudio microscpico de
plantas, insectos, tejidos animales, embriones y rganos humanos.
Investig en el papel de las papilas linguales y cutneas en la fisiologa del
gusto y del tacto, respectivamente y la capa ms profunda de la piel, que lleva
su nombre, en embriologa, y gracias al uso del microscopio, Malpighi fue el
primero en presentar una evidencia visible de la constitucin detallada de un
embrin en etapas tempranas del desarrollo.
Robert Hooke (1635 - 1703) cientfico ingls. Fue uno de los cientficos
experimentales ms importantes de la historia de la ciencia, polemista
incansable con un genio creativo de primer orden. Sus intereses abarcaron
campos tan dispares como la biologa, la medicina, la cronometra, la fsica
planetaria, la mecnica de slidos deformables, la microscopa, la nutica y la
arquitectura.

En 1665 public el libro Micrographa, el relato de 50

observaciones microscpicas y telescpicas con detallados dibujos. Este libro

contiene por primera vez la palabra clula y en l se apunta una explicacin

plausible acerca de los fsiles.
Hooke en 1665 descubri las clulas observando en el microscopio una
laminilla de corcho, dndose cuenta que estaba formada por pequeas
cavidades polidricas que recordaban a las celdillas de un panal. Por ello cada
cavidad se llam clula.
Marie Franois Xavier Bichat (1771 - 1802). Bilogo y fisilogo francs. Bichat
ha pasado a la historia de la medicina por ser el gran renovador de la anatoma
patolgica, convirtindose en el fundador de la histologa moderna. A travs de
la autopsia y la experimentacin fisiolgica, Bichat estudi los tejidos como
unidades anatmicas fundamentales para la explicacin de las propiedades
fisiolgicas y las modificaciones patolgicas del organismo. Introduce el
concepto de tejido.
Robert Brown (1773- 1858) fue un reconocido botnico escocs recolector de
la flora de Australia a principios del siglo XIX. Descubre el ncleo celular en
plantas.
Matthias Jakob Schleiden (1804 - 1881) fue un botnico alemn que, junto con
su compatriota el fisilogo Theodor Schwann, formul la teora celular en 1838
para las plantas y para el reino animal en 1839. Esta teora celular establece
que la clula es el elemento bsico del organismo, y que las plantas y los
animales son agrupaciones de estas unidades vivas y potencialmente
independientes.
Robert Remak (1815 - 1865) fue un destacado embrilogo, histlogo, fisilogo,
neurlogo, miclogo alemn. De entre sus diversas contribuciones al progreso
cientfico, tambin destaca el descubrimiento de los procesos mitticos,
sealando que las clulas se multiplican por escisin de su ncleo.

En

embriologa por haber reducido el nmero de las cuatro hojas embrionarias

descritas por Karl Ernst von Baer a tres: ectodermo, mesodermo y endodermo.
Fue tambin el descubridor de las fibras nerviosas amielnicas y de las clulas
nerviosas del corazn, hoy llamadas ganglios de Remak.

Poco a poco a travs de la historia queda claro que la clula es el elemento

bsico de los organismos vivos.
Los tejidos se forman por la agrupacin de clulas con igual funcin, dos o ms
tejidos forman unidades funcionales mayores que son los rganos y varios
rganos con funciones relacionadas forman a su vez sistemas.
En todo caso para la histologa es fundamental el anlisis microscpico. El
MICROSCOPIO es el instrumento ms importante de la histologa, debido al
pequeo tamao de las estructuras analizadas.
El tipo ms comn y el primero que se invent es el microscopio ptico. Se
trata de un instrumento ptico que contiene una o varias lentes que permiten
obtener una imagen aumentada del objeto y que funciona por refraccin.
La ciencia que investiga los objetos pequeos utilizando este instrumento se
llama microscopa.
TIPOS DE MICROSCOPIO
Existen muchsimos tipos de microscopios entre los cuales tenemos:
Microscopio ptico

Microscopio simple

Microscopio compuesto
Microscopio de luz ultravioleta
Microscopio de fluorescencia
Microscopio en campo oscuro
Microscopio de contraste de fase
Microscopio electrnico
Microscopio electrnico de transmisin
Microscopio electrnico de barrido

MICROSCOPIO OPTICO SIMPLE:

es aquel que solo utiliza un lente de

aumento. Es el microscopio ms bsico. El ejemplo ms clsico es la lupa. El

microscopio ptico estndar utiliza dos sistemas de lentes alineados.
El objeto por observar se coloca entre el foco y la superficie de la lente, lo que
determina la formacin de una imagen virtual, derecha y mayor cuanto mayor

sea el poder diptrico del lente y cuanto ms alejado est el punto prximo de
la visin ntida del sujeto.
MICROSCOPIO OPTICO COMPUESTO: tiene ms de una lente de objetivo.
Los microscopios compuestos se utilizan especialmente para examinar objetos
transparentes, o cortados en lminas tan finas que se transparentan. Se
emplea para aumentar o ampliar las imgenes de objetos y organismos no
visibles a simple vista. Posee una parte mecnica y una parte ptica
PARTE MECANICA:
Soporte: es lo que mantiene al microscopio esta constituido
por el pie, el brazo y la columna.
Platina: plataforma horizontal con un orificio circular central
sobre el que se coloca la preparacin que permite el paso
de los rayos procedentes del foco de iluminacin situado
por debajo de ella. Es paralela al pie y perpendicular al
brazo.
Cabezal: contiene los sistemas de lentes.
Tubo: es una cmara oscura que tiene en un extremo al
objetivo y en el otro extremo el ocular.
Revolver: es una pieza metlica en forma de casquete,
situada en el extremo del tubo, la cual lleva atornillado los
objetivos de distintos aumentos, es mvil permitiendo rodar
los objetivos.
PARTE OPTICA:
Condensador: produce un haz de luz que ilumina el objeto
estudiado.
Objetivo: aumenta el objeto y proyecta su imagen sobre el
ocular. Hay 2 tipos de objetivos, el objetivo seco el cual es
aquel que no requiere que se coloque ninguna sustancia
entre el objetivo y la preparacin; y el objetivo de inmersin
que son aquellos que requieren que se coloque entre el
objetivo y la preparacin un liquido transparente con ndice
de refraccin superior al aire, se utiliza cuando se quiere
obtener gran aumento. El liquido interpuesto impide la

desviacin de los rayos mas oblicuos y la lente frontal

recoge as muchos mas rayos para la formacin de la
imagen.
Ocular: consta de dos lentes que se encuentran montados
en los extremos de un tubo adaptado a la parte superior del
microscopio, aumenta aun ms la imagen y la proyecta
sobre el ojo del observador.

MICROSCOPIO DE CAMPO OSCURO:

utiliza un haz enfocado de luz muy

intensa en forma de un cono hueco concentrado sobre el espcimen. El objeto

iluminado dispersa la luz y se hace as visible contra el fondo oscuro que tiene
detrs, como las partculas de polvo iluminadas por un rayo de sol que se cuela
en una habitacin cerrada. Por ello las porciones transparentes del espcimen
quedan oscuras, mientras que las superficies y partculas se ven brillantes, por
la luz que reciben y dispersan en todas las direcciones, incluida la del eje ptico
que conecta el espcimen con la pupila del observador. Esta forma de
iluminacin se utiliza para analizar elementos biolgicos transparentes y sin
pigmentar, invisibles con iluminacin normal, sin fijar la muestra, es decir, sin
matarla. Tambin es bastante utilizado en la observacin de muestras
metalogrficas para la observacin de detalles en superficies con alta
reflectancia. El objetivo recibe la luz dispersa o refractada por las estructuras
del espcimen. Para lograrlo, el microscopio de campo oscuro est equipado
con un condensador especial que ilumina la muestra con luz fuerte indirecta.
En consecuencia el campo visual se observa detrs de la muestra como un
fondo oscuro sobre el cual aparecen pequeas partculas brillantes de la
muestra que reflejan parte de la luz hacia el objetivo.
MICROSCOPIO DE LUZ ULTRAVIOLETA: La lente, que habitualmente es de
vidrio es sustituida por lentes de cuarzo y la iluminacin se produce por unas
lmparas de mercurio. No usa filtros y se observa en placas fotogrficas. La
variedad de fluorescencia, si usa filtros, y la observacin es directa. Permite
una resolucin y una amplificacin mayor, dado que la luz ultravioleta tiene
menor longitud de onda, hace visible la localizacin, la diferenciacin y la
absorcin de ciertas sustancias en preparaciones aun en estado vivo.

MICROSCOPIO DE FLUORESCENCIA: es una variacin del microscopio de

luz ultravioleta en el que los objetos son iluminados por rayos de una
determinada longitud de onda. La imagen observada es el resultado de la
radiacin electromagntica emitida por las molculas que han absorbido la
excitacin primaria y remitido una luz con mayor longitud de onda. Para dejar
pasar slo la emisin secundaria deseada, se deben colocar filtros apropiados
debajo del condensador y encima del objetivo. Se usa para detectar sustancias
con autofluorescencia (vitamina A) o sustancias marcadas con fluorocromos.
MICROSCOPIO DE CONTRASTE DE FASE: permite observar clulas sin
colorear y resulta especialmente til para clulas vivas. Este aprovecha las
pequeas diferencias de los ndices de refraccin en las distintas partes de una
clula y en distintas partes de una muestra de tejido. La luz que pasa por
regiones de mayor ndice de refraccin experimenta una deflexin y queda
fuera de fase con respecto al haz principal de ondas de luz que pasaron la
muestra. Aparea otras longitudes de onda fuera de fase por medio de una serie
de anillos pticos del objetivo y del condensador, anula la amplitud de la
porcin fuera de fase inicial del haz de luz y produce un contraste til sobre la
imagen. Las partes oscuras de la imagen corresponden a las porciones densas
del espcimen; las partes claras de la imagen corresponden a porciones menos
densas. Por lo tanto estos microscopios se utilizan para observar clulas vivas,
tejidos vivos y cortes semifinos no coloreados.
MICROSCOPIO DE POLARIZACION: son microscopios a los que se les han
aadido dos polarizadores (uno entre el condensador y la muestra y el otro
entre la muestra y el observador). El material que se usa para ello es un cristal
de cuarzo y un cristal de Nicol, dejando pasar nicamente la luz que vibra en
un nico plano (luz polarizada). Esta luz produce en el campo del microscopio
claridad u oscuridad, segn que los dos nicoles estn paralelos o cruzados.
MICROSCOPIO ELECTRNICO: es aqul que utiliza electrones en lugar de
fotones o luz visible para formar imgenes de objetos diminutos. Los
microscopios electrnicos permiten alcanzar una capacidad de aumento muy
superior a los microscopios convencionales (hasta 2 aumentos comparados
con los de los mejores microscopios pticos) debido a que la longitud de onda

de los electrones es mucho menor que la de los fotones "visibles". Permitiendo

dilucidar estructuras complejas que no pueden ser estudiadas con el
microscopio ptico.
MICROSCOPIO ELECTRNICO DE BARRIDO (MEB): En el microscopio
electrnico de barrido (MEB) la muestra es recubierta con una capa de metal
delgado, y es barrida con electrones enviados desde un can. Un detector
mide la cantidad de electrones enviados que arroja la intensidad de la zona de
muestra, siendo capaz de mostrar figuras en tres dimensiones, proyectado en
una imagen de TV. Su resolucin est entre 3 y 20 nm, dependiendo del
microscopio. Permite obtener imgenes de gran resolucin en materiales
ptreos, metlicos y orgnicos. La luz se sustituye por un haz de electrones, las
lentes por electroimanes y las muestras se hacen conductoras metalizando su
superficie.
UN MICROSCOPIO ELECTRNICO DE TRANSMISIN (TEM, POR SUS
SIGLAS EN INGLS, O MET, EN ESPAOL): es un microscopio que utiliza un
haz de electrones para visualizar un objeto, debido a que la potencia
amplificadora de un microscopio ptico est limitada por la longitud de onda de
la luz visible. Lo caracterstico de este microscopio es el uso de una muestra
ultrafina y que la imagen se obtenga de los electrones que atraviesan la
muestra. Los microscopios electrnicos de transmisin pueden aumentar un
objeto hasta un milln de veces.