C OL E G I O D E P O S TGR A D UAD O S

Institucin de Enseanza en Ciencias Agrcolas

Campus Montecillo

ECOLOGA QUMICA DE INSECTOS

ENT-665
Prctica 1
INTRODUCCIN A LA CROMATOGRAFA DE GASES Y
ESPECTROMETRA DE MASAS
INTRODUCCIN
Cromatografa.
Se define a la cromatografa como un mtodo fsico de separacin en el cual los
componentes a separar se distribuyen entre dos fases, una de las cuales constituye la fase
estacionaria, de gran rea superficial, y la otra es un fluido (fase mvil) que pasa a travs o
a lo largo de la fase estacionaria. La fase estacionaria puede ser un slido o un lquido de
gran rea superficial dispuesto sobre un slido que acta como soporte. La fase mvil es un
fluido (puede ser gas, lquido o fluido supercrtico) que se usa como portador de la mezcla.
En la cromatografa ocurren dos fenmenos muy importantes y que son prcticamente los
rectores del proceso de separacin: la adsorcin y la desorcin. La primera es la retencin
de un compuesto en los sitios activos de la superficie de la fase estacionaria que puede ser
fsica o qumica. La adsorcin depende de la naturaleza de la substancia adsorbida, de la
temperatura, de la naturaleza del adsorbente, y de la concentracin. La desorcin es la
separacin del compuesto de la fase estacionaria.
Para el anlisis de muestras por cromatografa de gases, es necesario considerar la
naturaleza qumica de esta. Para esto se debe saber que la elusin de un compuesto qumico
depender de su afinidad con la fase estacionaria. Esta afinidad se establece de acuerdo con
la polaridad de la fase estacionaria (columna) y la polaridad de los compuestos qumicos a
analizar. Para comprender esta afinidad es necesario recordar que lo similar disuelve a lo
similar por ejemplo: los hidrocarburos son compuestos no polares y son solubles en
disolventes no polares como el hexano; por lo tanto para el anlisis de muestras no polares
necesitamos una columna no polar (fase estacionaria) y el disolvente deber ser no polar.
Bsicamente, un cromatgrafo de gases (Figura 1) consiste de seis partes:
1.- Un suministro de gas acarreador (fase mvil).
2.- Un sistema de inyeccin de la muestra.
3.- La columna de separacin (fase estacionaria).
4.- El detector.
5.- Un electrmetro y registrador de grfica de rollo (quiz con un integrador).
6.- Compartimientos separados con termostatos para contener las columnas y el detector y
poder regular su temperatura o programar la temperatura de la columna.

Entomologa y Acarologa/Ecologa Qumica de Insectos

jcibrian@colpos.mx, tel. 55 58045900-1657, 595 9511580

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Figura 1. Esquematizacin de un tpico cromatgrafo de gases.

Detectores
El detector es un dispositivo que indica y cuantifica los componentes separados por la
columna. Un gran nmero de detectores han sido descritos y usados en cromatografa de
gases (GC).Los dos detectores ms significativos en CG son el Detector por Conductividad
Trmica (TCD) y el Detector por Ionizacin en flama (FID).
El FID es probablemente el detector ms popular y utilizado en cromatografa de gases. En
este detector se produce la combustin de los compuestos orgnicos en una flama de
hidrogeno-aire produciendo iones, esos iones son colectados y convertidos en corriente
produciendo una seal. Entre otros detectores, utilizados en cromatografa de gases, se
puede sealar al de conductibilidad electroltica (ELCD), al fotomtrico de flama (FPD) al
detector de nitrgeno-fsforo (NPD) y al espectrmetro de masas.
Espectrometra de Masas
La Espectrometra de Masas (EM) es una poderosa tcnica de deteccin de compuestos que
con frecuencia se encuentra como detector en la Cromatografa de Gases; la EM, adems de
registrar la presencia de compuestos, genera informacin para la identificacin y
confirmacin de los mismos a travs de los espectros de masas. Un tpico espectrmetro de
masas funciona a muy baja presin (vacio) y puede ser dividido en tres partes
fundamentales: la fuente de ionizacin, el analizador y el detector (Figura 2). En la fuente
de ionizacin, la molcula es colisionada por electrones, lo que genera iones moleculares o
quasimoleculares (dependiendo del tipo de ionizacin) as como fragmentos de la molcula
ionizados, luego estos iones son transportados al analizador, que solo deja pasar los iones
seleccionados previamente, y finalmente, el detector (multiplicador de electrones,
generalmente) registra un espectro de masas en formato abundancia versus masa/carga.
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Cuadrupolo
Filamento

Ionresonante

Compuesto
Electrones

Fuente de ionizacin

Ionno
resonante
Analizador de masas

Detector

Figura 2. Esquematizacin de los componentes de un espectrmetro de masas.

Anlisis cualitativo y cuantitativo
Un cromatograma es la seal que produce un detector en respuesta a la presencia de un
analito. Consiste en una serie de picos (igual al nmero de compuestos separados). A partir
del cromatograma se obtienen datos analticos cualitativos y cuantitativos.
El parmetro cualitativo en CG, es el tiempo de retencin (TR) y es definido como el tiempo
transcurrido entre la inyeccin de la muestra y la aparicin de un pico cromatogrfico.
Adems, se puede realizar la identificacin y confirmacin de compuestos por su
fragmentacin patrn gracias al espectrmetro de masas. El principio bsico de la
cuantificacin es que el rea (o altura) de los picos registrados en el cromatograma es
proporcional a la concentracin de compuesto inyectado. As, es fundamental para la
confiabilidad del anlisis que el rea de los picos sea medida lo ms exacta y
reproductiblemente posible. Existen varias tcnicas para la determinacin del rea de un
pico cromatografico, ella integracin manual, se utilizan los mtodos geomtricos o por
triangulacin, es decir, se trazan lneas tangentes a cada lado del pico. La altura se mide
desde la lnea base hasta la interseccin de las dos tangentes. El ancho se mide tomando la
interseccin de las dos lneas tangentes con la lnea base. Luego se utiliza la frmula
A=1/2*Altura del Pico* Base del Pico para determinar el rea. En la actualidad la
integracin se realiza de manera electrnica con el uso de algn software.
OBJETIVOS
Objetivo general
Conocer los fundamentos de cromatografa de gases y espectrometra de masas.
Objetivos especficos
Observar los diferentes componentes de un cromatografo de gases.
Comprender los procesos qumicos y fsicos que hacen posible la separacin e
identificacin de los diferentes compuestos qumicos.
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MATERIALES Y MTODOS
En esta prctica se encender y calibrar el cromatografo de gases HP-6890 y el
espectrmetro de masas HP-MSD-5973 bajo el siguiente procedimiento:
ENCENDIDO DE EQUIPO GC-MSD
1. Verificar que todo este conectado.
2. Abrir el cilindro de helio. (Contenido del tanque >400 psi; Presin de salida 60 psi).
3. Encender la computadora.
4. Encender el CG y verificar en la pantalla del equipo que la columna tenga flujo
(mximo 2 mL/min). Presione Flow en el tablero del GC.
5. Retirar la cubierta del Detector (MSD) jalando cuidadosamente hacia arriba y luego
hacia delante.
6. Verificar que la llave de vaco este cerrada y mientras presiona el botn de encendido
del MSD, recrguese en la puerta del detector (base de aluminio aun costado)
(Reagents: Gas off).
7. Abrir el programa GC-MS instrument # 1 (se abren tres ventanas: TOP, HP
Chemstation y GC-MS instrument # 1). Clic en YES.
8. En la ventana GC-MS instrument # 1, ir al men Method, opcin Load, y abrir el
mtodo DEFAULT.M. clic en YES.
9. Realizar el vaco del MSD; en la ventana del GC-MS instrument # 1, ir a al men
View, seleccionar Diagnostics/Vacuum Control, a su vez, seleccionar el men
Vacuum y por ltimo Pump Down. Clic OK, OK, OK, OK, OK).
10. Encender el controlador de la lectura de bomba de vaco y esperar el tiempo
especificado de vaco (dos horas). Finalmente, realizar la calibracin del equipo.
CALIBRACIN DEL EQUIPO MSD-5973
1. Abrir el men View y seleccionar la opcin Manual tune, en la parte inferior de la
ventana aparece una franja verde y en la franja blanca escribir: SCAN 10, 100, (Enter);
el resultado es una ventana en la que se observan los valores de las masas, verificar que
en la grfica las masa 18 (agua) y 28 (nitrgeno) sean menores a 20% y 10%
respectivamente, de lo contrario, esperar a que los valores sean los especificados. En
este procedimiento el filamento queda funcionando por lo que se debe apagar: ir a
Execute y seleccionar MS OFF.
2. Abrir el men View y seleccionar Instrument Control, en esta ventana, abrir el men
Qualify y seleccionar la opcin Checkout tune, despus de 2 minutos
automticamente se imprime un informe de sintona automtica, HP5973 Autotune.
Verificar que las relaciones isotpicas de las masas 69, 219 y 502 estn cercanas a
1:4:10 y que el ancho de pico (PW50) este dentro del rango de 0.55 0.1.
3. Abrir men Qualify y seleccionar opcin Tune Evaluation, automticamente se
imprime un informe de verificacin del sistema, System Verification-Tune (Detector
optimization) Portion, verificar que las opciones de la hoja de evaluacin tengan OK.
Archivar informes Autotune & System Verification.

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APAGADO DEL EQUIPO GC-MSD
1. En la ventana GC-MS instrument # 1, ir al men Method, opcin Load, y abrir el
mtodo APAGAR.M. Clic en YES.
2. Apagar el lector de la bomba de vaci.
3. Realizar el venteo: en la ventana del GC-MS instrument # 1, ir a al men View,
seleccionar Diagnostics/Vacuum Control, a su vez, seleccionar el men Vacuum y por
ltimo Vent (clic en OK). Se abre una pequea ventana que indica el progreso del
venteo y el tiempo estimado.
4. Una vez transcurrido el tiempo y la temperatura de MS Source sea 100 C se puede
apagar el MSD.
5. Cerrar programa el GC-MS instrument # 1 apagar la computadora e impresora.
6. Apagar el GC y cubrirlo con plstico.
7. Cerrar el cilindro de gas
CUESTIONARIO
1. Qu gases son utilizados normalmente en cromatografa de gases?
2. Deben las muestras ser vaporizadas antes de entrar a la columna?
3. Cual fue el problema principal a vencer al combinar la cromatografa de gases con
espectrometra de masas?
4. Cul es la ventaja entre el acoplamiento entre la cromatografa de gases y
espectrometra de masas?
5. Mencione cinco cosas bsicas que no deben hacerse con las columnas capilares?
6. Cuando se va a instalar una nueva columna, los cortes en la misma deben ser
perfectos Por qu?
7. Cual es la fase estacionaria contenida en las columnas OV-1 y Carbowax 20 M.?
8. Cules son las funciones del puerto de inyeccin?
9. Defina claramente el concepto de polaridad
10. Cules son los modos de adquisicin de datos en que trabaja el espectrmetro de
masas?
11. Elija dos compuesto, interpretar a profundidad y justifique dos de los iones ms
importantes para la caracterizacin de tales compuestos.
Comentarios
LITERATURA CONSULTADA
Agilent Technologies. 2000. Operacin de la Chemstation Agilent del GC-MSD y del equipo. Manual para el
usuario. Agilent Technologies. 564 p.
Biemann, K. 1991. Mass spectrometry in trace organic analysis. Pure & Appl. Chem. 63(11):1637-1646.
Fowlis I. A. 1995. Gas Chromatography: Analytical Chemistry by Open Learning. 2 nd ed. Jonh Wiley & Sons.
Chichester, England. 258 p.
Grob R. L. 1995. Modern practice of gas chromatography. 3rd ed. Jonh Wiley & Sons. New York, USA. 258 p.
Matovsk, K., and S. J. Lehotay. 2003. Practical approaches to fast gas chromatography-mass spectrometry.
Journal of Chromatography A, 1000:153180.

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