Un sistema de fitorremediacin multiproceso persistente para la

descontaminacin de hidrocarburos totales de petrleo (TPHs) de los suelos

Xiao-Dong Huang, Yousef El-Alawi, Jolanta Gurska, Bernard R. Glick, Bruce M.
GreenbergT
Resumen
Mltiples tcnicas que afectan a distintos aspectos de la remocin de contaminantes
pueden mejorar la remocin de hidrocarburos persistentes de los suelos. Hemos
desarrollado un sistema de fitorremediacin multiproceso (MPPS) que se compone de
landfarming (aireacin y exposicin a la luz), bacterias degradadoras de
contaminantes, rizobacterias promotoras del crecimiento de las plantas (PGPR), y el
crecimiento de plantas resistentes a los contaminantes, Festuca alta (Festuca
arundinacea). En este estudio, el MPPS fue aplicado a los suelos contaminados
adquiridos de las tierras de cultivo de la Imperial Oil en Sarnia,Ontario, Cnada. Este
suelo fue contaminado con lodos formados de la refinera de petrleo a un nivel de
aproximadamente 5% (p/p) hidrocarburos totales de petrleo ( TPHs). En un primer
perodo de 4 meses, la eficiencia media de extraccin de los persistentes TPHs por el
MPPS es el doble que el del land-farming por s solo , un 50% ms que la
biorremediacin por s sola, y el 45% ms que la fitorremediacin sola. De forma
importante removi 2,3 y 4 fracciones de petrleo con igual eficacia. Por lo tanto, las
altamente hidrofbicas fracciones recalcitrantes de THP fueron remediadas del suelo
con el MPPS. Despus de un segundo perodo de 4 meses, el MPPS remueve 90% de
todas las fracciones de TPHs del suelo. La fitorremediacin sola fue capaz de extraer
tan slo alrededor del 50% de TPHs en el mismo perodo de tiempo. Los elementos
clave para el xito de la fitorremediacin fueron el uso de especies vegetales que
pueden proliferar en presencia de altos niveles de contaminantes, y cepas de PGPR que
incrementan la tolerancia de la planta y aceleran el crecimiento de las plantas en los
suelos altamente contaminados.
Palabras claves: Fitorremediacin, Rizobacteria promotora del crecimiento de las
plantas, Biorremediacin, Bacteria degradante de TPH.
Introduccin
Los Hidrocarburos totales de petrleo
(TPHs) son uno de los grupos ms
comunes de contaminantes orgnicos
persistentes en el medio ambiente y
son conocidos por ser txicos para
muchos organismos. Hay muchas
fuentes
de
contaminacin
por
hidrocarburos en suelos incluyendo
extraccin de petrleo, transporte,
refinacin y consumo [1,2]. Remediar
de suelos los TPHs persistentes es en
general un proceso lento y costoso. Esto
es particularmente cierto para la
porcin de THPs ms recalcitrante. Por
ejemplo, el alto peso molecular las
fracciones derivadas de lodos de la
refinera de petrleo hace que sean
excepcionalmente difcil de remediar
[1,2].

Para que un proceso de remediacin

sea efectivo, la tasa global de remocin
y degradacin de TPH necesita ser
acelerado por encima de la mecnica
disponible actualmente y de los
procesos microbianos. Recientemente
hemos desarrollado un sistema de
fitorremediacin multiproceso (MPPS)
[3]. Se basa en la combinacin de
mecnica,
microorganismos
y
el
proceso de crecimiento de las plantas
para incrementar la acumulacin de
biomasa, en particular las races de las
plantas en el suelo, y por lo tanto,
acelerar la cintica de remediacin. Los
procesos utilizados son el landfarming,
la
inoculacin
con
bacterias
degradantes de contaminantes y el
crecimiento
de
las
plantas
con
rizobacterias que promueven a la vez
su crecimiento (PGR). El MPPS se
plante para aumentar la tasa general

de remediacin de HAP( Hidrocarburo

aromtico
policiclco)
en
suelos
contaminados con creosota [3,4 ].
La combinacin de varias tcnicas de
remediacin
de
contaminantes
persistentes pueden superar muchas de
las limitaciones que existen para las
distintas tecnologas. Por ejemplo, para
la fitorremediacin, muchas especies de
plantas son muy sensibles a los
contaminantes, incluyendo TPHs [3- 5].
Por lo tanto, las plantas no crecen o
crecen
lentamente
en
suelos
contaminados. Si el crecimiento es
lento,
las
plantas
no
producen
suficiente biomasa para lograr tasas
significativas de remediacin. Adems,
en
la
mayora
de
los
suelos
contaminados, ha decado la actividad
de la poblacin de microorganismos por
lo que tampoco hay suficientes
bacterias para facilitar la degradacin
de contaminantes o para promover el
crecimiento de las plantas [6- 9].
Para la remediacin prctica y efectiva
de una gran variedad de contaminantes
ambientales, es conveniente usar varias
tcnicas o procedimientos para acelerar
la cintica de remediacin y aumentar
el crecimiento de las plantas y la
biomasa microbiana [4-6, 9, 10]. En el
MPPS
que
hemos
desarrollado
recientemente, el uso de rizobacterias
que promueven el crecimiento de la
planta (PGPR) y bacterias degradantes
de contaminantes especficos, ambos,
han sido de vital importancia para hallar
una remediacin exitosa [3, 5, 6, 9, 11,
12]. Para los contaminantes orgnicos,
el
uso
de
bacterias
como
pretratamiento que consumen materia
orgnica en el suelo puede promover el
proceso
de
remediacin
[13,14].
Diversas bacterias son capaces de
metabolizar
rpidamente
algunos
compuestos que estn fcilmente
disponibles. Esto incluye bacterias que
consumen TPH y que se han utilizado
en los suelos [4, 9, 11]. De este modo
se iniciar el proceso de remediacin y
puede bajar el nivel de toxicidad por
TPH en las plantas cuando se utiliza
antes de la fitorremediacin [4, 9, 11].
Adems,
hay
bacterias
llamadas

rizobacterias
que
promueven
el
crecimiento de las plantas (PGPR) que
aumentan la tolerancia de la planta a
TPHs
y
otras
tensiones.
Ellas
promueven el enrgico crecimiento de
las plantas, dando lugar a una ms
rpida y masiva acumulacin de
biomasa [7, 10]. Su trabajo es prevenir
el estrs por la sntesis de etileno y
abastecer a las races de auxinas [15].
El resultado es mayor cantidad de
biomasa (especialmente en las races) y
por lo tanto una remediacin ms
rpida [15,16].
En un estudio anterior con el MPPS,
hemos
realizado
una
serie
de
experimentos de laboratorio para
determinar la eficacia del sistema de
descontaminacin en el suelo de pas
de creosota [ 3]. El sistema se compone
de landfarming, la inoculacin de
bacterias degradantes, y el crecimiento
de las plantas con PGPR. En un perodo
de 4 meses, el MPPS ha retirado un 50%
ms de los HAP suelo que cualquiera de
los procesos simples solos. Para poner a
prueba la eficacia del sistema, en este
estudio,
hemos
llevado
a
cabo
experimentos de remediacin con un
suelo maduro que proviene de un
ambiente contaminado. El suelo es
proviene de tierra agrcola de la
Imperial Oil en Sarnia, Ontario, Canad.
En la realidad los suelos maduros y de
ambientes contaminados se comportan
de manera diferente que los suelos
enriquecidos, en el laboratorio con
respecto a la remediacin.
Los
resultados obtenidos aqu deben ser un
mejor predictor de la forma en que el
MPPS se ejecutar en el mbito como
los
trabajos
previos
con
suelos
enriquecidos. Encontramos que el MPPS
fue ms eficaz que cualquier de los
procesos individuales de extraccin de
TPHs en el suelo. En particular, el MPPS
fue eficaz en remediar las fracciones de
TPHs ms recalcitrantes y con peso
molecular alto. Adems, las tasas de
remediacin de los suelos agrcolas fue
a la par de los
suelos
ricos en
creosota.
2. Materiales y mtodos

2.1.
Preparacin
de
bacterias
degradadoras de contaminantes
Las
bacterias
degradantes
de
contaminantes utilizadas en estos
experimentos fueron aisladas de lodos
de petrleo y obtenidas del Dr. Owen
Ward,
Departamento
de
Biologa,
Universidad de Waterloo. Las cepas de
bacterias
en
la
mezcla
fueron
identificadas mediante anlisis de
cidos grasos (Identificacin Microbiana
Inc. , Newark, DE, USA). El cultivo
contiene tres cepas de bacterias:
Pseudomonas putida, Flavobacterium
sp., y Pseudomonas aeruginosa. Las
bacterias fueron incubadas y crecieron
en medio de enriquecimiento, con
agitacin, durante 4 semanas a
temperatura ambiente en la oscuridad.
El medio de enriquecimiento se
compone de sedimentos de petrleo (50
mg/ L) y sales basales (500 mg/L
K2HPO4, 500 mg/L NaNO3, 200 mg/L
MgSO4*7H2O, 100 mg/L FeSO4*7H2O).
Las bacterias fueron transferidas a 150
ml de medio de cultivo compuesto de
caldo soya (DIFCO Laboratories, Inc. ,
Detroit, MI, EE.UU) y 0,1 % de lodo. Las
bacterias
fueron
cultivadas
a
temperatura ambiente durante 10 das
y luego el cultivo fue diluido con agua
destilada a una absorcin de 0,5 a 600
nm
para
la
rehabilitacin
los
experimentos.
2.2. Preparacin de PGPR
Dos cepas de PGPR, Enterobactor
cloacae UW4 y E. cloacae CAL2, fueron
utilizadas
en
el
sistema
de
fitorremediacin para promover el
crecimiento de la planta e incremetar la
tolerancia
de
la
planta
a
los
contaminantes [7, 10, 17]. Estas cepas
producen cido indoleactico (una
auxina), sidersforos y cido 1aminociclopropano-1-carboxlico (ACC)
desaminasa (que consume el precursor
de etileno). Estos factores contribuyen a
la capacidad de la bacteria para
promover crecimiento de la planta [ 15].
Las bacterias se cultivaron en caldo

trptico
de
soya
a
temperatura
ambiente durante 2 das hasta que
llegaron a una absorcin de 1,0 a 600
nm. Las semillas de las plantas que se
utilizan para la fitorrremediacin fueron
incubadas en la suspensin de estas
bacterias
en
agua
destilada
(absorbancia de 0,5 a 600 nm) durante
2 h y luego secadas al aire antes de la
siembra [ 5].
2.3. Remediacin del suelo
Todos los experimentos se llevaron a
cabo
en
el
invernadero
del
Departamento de Biologa de la
Universidad de Waterloo a partir del 1
de abril hasta el 30 de noviembre de
2003.
La
iluminacin
para
el
crecimiento de las plantas fue luz
natural (luz solar) con un ciclo de luzoscuridad de aproximadamente 16 h/8
h. La temperatura en el invernadero fue
de 25C. Las macetas (39 L 26 A 15 P
cm) usadas en el experimento contena
cada una 12 Kg de suelo (1.2 Kg/L de
suelo secado al aire). Todas las macetas
se regaron da por medio (o cuando fue
necesario ) con suficiente cantidad de
agua del grifo (aproximadamente 1 L)
para mantener la humedad en el suelo
para el crecimiento de la planta. El
suelo fue suministrado por Imperial Oil,
Sarnia, Ontario, Canad. Este suelo
deteriorado provena de tierras de
cultivo las cuales contenan 50g/Kg de
sedimentos de refinera de petrleo. La
referencia del suelo se recogi a partir
de una granja cercana. Para remediar
los TPHs del suelo , cada uno de los
mtodos
que
se
describen
a
continuacin fue probado por separado
y en combinacin con el MPPS. Todos
los experimentos se realizaron por
triplicado.
El
diseo experimental
incluye tres repeticiones de cada
tratamiento y tres muestras para
anlisis de cada replica.

2.3.1. Land-farming
El land-farming se realiz mezclando el
suelo a mano con una azada de
jardinera. Los suelos fueron removidos
dos veces a la semana para exponer
una nueva capa de suelo a la luz y el
aire. El suelo fue regado dos veces a la
semana para mantener la humedad.
Todo el experimento se llev a cabo en
el invernadero por 2 temporadas de
crecimiento (120 das/ao).
2.3.2. Biorremediacin
Un cultivo bacteriano degradante de
contaminantes, con una absorcin de 0,5 a
600 nm, cultivado como en el caso anterior,
fue rociado en el suelo a 10 ml/Kg de suelo.
El suelo fue mezclado para establecer el
contacto de las bacterias con el suelo. El
suelo se ha diluido en 400 ml/kg de suelo en
un estado de saturacin, y, posteriormente, el
suelo se deben regar dos veces a la semana
(o cuando sea necesario ). Este experimento
se ejecute dos veces seguidas para 120 das
cada vez.
2.3.3. Fitorremediacin
Una especie de hierba, Festuca alta
(Festuca
arundinacea)
(Ontario
Semillas, Waterloo, ON, Canad) fue
seleccionada para la fitorremediacin.
Esta
especie
se
ha
utilizado
anteriormente para la fitorremediacin
y se muestra para ser ms tolerante a
los HAP que otras especies [ 12]. Diez
gramos de semillas de la planta fueron
plantados en cada maceta, y la tierra
fue regada con 400 ml de agua por kilo
de suelo hasta saturacin. Las macetas
se colocan en el invernadero y las
plantas crecieron por 120 das. Despus
de 120 das, el suelo era reforestado,
las plantas fueron cultivadas por un
plazo adicional de 120 das. Durante el
perodo de crecimiento, las plantas

fueron regadas cada da ( o cuando fue

necesario).
2.3.4. Sistema
Multi-proceso

de

Fitorremediacin

Los citados tres procedimientos (es

decir, land-farming, la biorremediacin
y la fitorremediacin) se combinaron en
un
MPPS.
Las
semillas
fueron
esterilizadas por lavado con leja 2%
durante 20 min, seguido por varios
lavados con agua destilada. Dos cepas
PGPR (E. cloacae UW4 y CAL 2) a
continuacin, se aplicaron directamente
a las semillas de la planta por remojo
de estas durante 2 h en una solucin
bacteriana con una absorbancia de 0,5
a 600 nm [ 5]. Cada paso se llev a
cabo en forma sucesiva en el
invernadero de la siguiente manera.
Paso 1: Land-farming dos veces a la
semana durante 2 semanas. Paso 2:
inoculacin del suelo con bacterias
contaminantes degradantes (0,5 DO a
600 nm) a 10 ml/l suelo seguida por
incubacin durante 5 das. Paso 3:
plantacin de semillas tratadas con
PGPR. A las plantas se dejaron crecer
durante 100 das. Este experimento
tuvo una duracin de 120 das y, a
continuacin, repite en el mismo suelo.
Se tomaron muestras de suelo y plantas
en los das 0, 30, 60, 90, y 120 y se
analizaron
para
TPHs
(ver
ms
adelante).
2.4 . Extraccin y anlisis de TPH
El nivel de TPH en el suelo se determin
mediante el ensayo de hidrocarburos totales.
Las muestras de suelo (aproximadamente 20
g) de la experimentacin con fitorremediacin
fueron recogidos a los 0, 30 , 60, 90 y 120
das despus del inicio de los experimentos y
fueron almacenados a 4C hasta su anlisis.
El tiempo de almacenamiento de las
muestras recogidas ya no era de 30 das y el

almacenamiento no tuvo efectos en los

niveles de TPH en suelo (datos no
mostrados). Las muestras se dividieron en
dos partes para su anlisis. Una de ellas fue
enviada a Phillip Service, Mississauga, ON,
para anlisis de fraccionamiento. La otra fue
analizada de la siguiente manera. Las
muestras de suelo se secaron al aire a
temperatura ambiente en la oscuridad . El
suelo secado al aire (4 g) se extrajo dos
veces para ultra-sonicacin durante 20
minutos en 20 ml de hexano/ acetona (1:1
v:v) [ 18]. Los extractos se concentran bajo
una corriente de gas de nitrgeno para
permitir que el disolvente se evapore por
completo y, a continuacin, la cantidad de
lodo
extrado
fue
determinado
por
gravimetra.
2.5. Test de toxicidad en el suelo
Cien gramos de suelo tratado por los
diferentes mtodos de remediacin se
coloca en jarras de 100 ml. Treinta
mililitros (ml) de agua se aade a las
jarras y se incuban toda la noche. Diez
Collembolas (Onychiurus folsomi) (6
das de edad) se colocan en cada jarra y
los frascos son cubiertas con papel de
aluminio . Los frascos que contienen los
animales fueron colocados en una
cmara a una temperatura controlada
de 23C y se incubaron por 5 das, con
un bombillo fro flourescente blanco de
20-W.
El
nmero
de
animales
sobrevivientes se cuenta manualmente
al final del 5 da- del perodo de
incubacin [ 19]
3. Resultados
3.1. La efectividad del sistema de
fitorremediacn
multiproceso
para
remover TPHs de el suelo
Para probar la eficacia del sistema de
fitorremediacin multi-proceso para la
extraccin de TPHs en suelos contaminados,

se condujo un experimento con el objeto de

comparar
los
distintos
mtodos
de
remediacin, i. e., land-farming, remediacin
microbiana , fitocorremediacin ( -PGPR) y el
MPPS. Los resultados mostraron que los tres
mtodos
probados
(land-farming,
la
biorremediacin y la fitorremediacin) fueron
capaces de extraer alrededor del 25% del
total de TPHs de los suelos contaminados
(Fig. 1). La extraccin de TPHs por todos los
tres mtodos juntos fue estadsticamente
significativa en comparada con el tratamiento
de suelos contaminados. Sin embargo, las
diferencias en la remocin de TPH no fueron
estadsticamente significativas entre los tres
mtodos individuales. Esto indica que todos
los tres mtodos son capaces de una
modesta remocin de TPHs del suelo (Fig.
1). La examinacin del material de TPH
extrado por el MPPS revel que el nivel TPH
en los suelos se reduj de 50 a 23 g/kg (>
50% extraccin) en un estudio en el cuarto
mes de la temporada de crecimiento (Fig. 1).
Por lo tanto, el MPPS fue capaz de extraer
ms del doble de TPHs del suelo que
cualquiera de los mtodos individuales.
Despus del primer perodo de 4 meses,
los suelos tratados por los mtodos
anteriores fueron tratados de la misma
manera para un segundo perodo de 4
meses. El land-farming no arroj mucha
ms extraccin (10%) de TPHs del suelo
(Fig.
1).
La
efectividad
de
la
biorremediacin fue mucho mejor que
la
del landfarming en la segunda
temporada, con la eliminacin de slo
un 20% adicional de los TPHs en el
segundo perodo de 4 meses .
Comparada con el land-farming y la
biorremediacin, la fitorremediacin,
i.e. , es decir, el crecimiento de la
planta por s sola, es capaz de extraer
ms TPHs (30%) de el suelo (Fig. 1). En
un periodo de 8 meses , la
fitorremediacin sola haba removido
casi el 55% de los TPHs del suelo (de 50
a 22 g/kg). En contraste, el MPPS fue
mucho ms eficaz que cualquiera de los

distintos mtodos de extraccin de

TPHs del suelo . En el segundo perodo
de 4 meses, el MPPS ha eliminado un
40% adicional de la cantidad original de
TPHs del suelo. Por lo tanto, en un
periodo de 8 meses, el MPPS haba
retirado aproximadamente el 90% de
los TPHs del suelo ( Fig. 1).
3.2. La efectividad del sistema de
fitorremediacn
multiproceso
para
remover diferentes fracciones de TPHs
Las fracciones 3A (C16-23), 3B (C23-34)
y 4 (C34-50) de TPHs son los
contaminantes ms recalcitrantes en el
suelo.
Las
molculas
de
estas
fracciones son de alto peso molecular e
hidrofbicas. Por lo tanto, ellas son
resistentes
a
la
remediacin.
Encontramos que el land-farming por s
solo solo es eficaz para remover las

fracciones 2 (C10-16) y 3A, y fue

completamente ineficaz para eliminar
las fracciones 3B y 4 (Fig. 2). La
fitorremediacin fue ligeramente ms
eficaz que el land-farming, pero el
proceso de remediacin fue lento (Fig.
2). Sin embargo, en comparacin con el
land-farming y la fitorremediacin, el
MPPS fue mucho ms eficaz en la
eliminacin de todas las fracciones de
TPHs del suelo. Despus de ambos, 4
meses y 8 meses, el MPPS ha
disminuido
notablemente
los
componentes de las fracciones 3A, 3B y
4 con aproximadamente la misma
eficacia. Cada una de ellas se ha
disminuido en un 90 %, lo que es
compatible con los niveles de la
remediacin total de TPH (Figs. 1 Y 2).
Hay que tener en cuenta tambin, que
ms del 50% de los contaminantes eran
mayores que la fraccin 4(>C50). El

balance de masa basado en los datos

de fraccionamiento implica que del 8090% de C>50 tambin ha sido
removido.

sistema
mucho
ms
eficaz
que
cualquiera de los mtodos individuales
(landfarming, bioremediacin y Fito
remediacin).
Ninguno de los mtodos individuales
fueron capaces de mantener sus tasas
iniciales de recuperacin a medida que
avanzaba el experimento. Al final de los
120 das, la cantidad total de THP
removido por el MPPS fue de un 50%,
mientras que landfarming fue menos de
20%, bioremediacin menos de 30% y
fitorremediacin
aproximadamente
30%. La ventaja del MPPS fue mucho
ms evidente al final de 8 meses. Para
ese tiempo, el MPPS removi el 90% de
THPs del suelo, landfarming removi
solo 20%, bioremediacin 40% y
fitorremediacin 55%. (Fig.3).

Fig.2. Eliminacin de fraccin TPH por el MPPS y mtodos

convencionales. Datos generados del anlisis de TPH de las
muestras de suelo recolectadas despus de 120 (arriba) y 240
(abajo) das de remediacin. Las barras de error son errores
estndar (n=3). Etiquetas (a) y (b) indican diferencias
estadsticamente significativas de los suelos contaminados no

MPPS, respectivamente
(P<0.05).
tratados y el

3.3 Anlisis temporal de remediacin

TPH por cada componente de MPPS.
La efectividad del MPPS y de sus 3
componentes fue evaluada en el
residuo del contenido total de TPH en el
suelo en funcin del tiempo (Fig.3). La
tasa de remediacin se mantuvo
relativamente constante por el MPPS,
resultando en pseudo cintica de orden
cero durante todo el 8 mes. Este
comportamiento de los MPPS hizo el

Fig.3.Cintica de la remediacin de cada componente y el sistema

de multiproceso. TPH remocin de suelo se determin en varios
puntos del tiempo durante dos sucesivas remediaciones de 120
das. Los procesos son los mismos que la Fig.1. Las barras de error
son errores estndar (n = 3).
Fig.4. Toxicidad de los suelos TPH a Colembola tratados por
diferentes mtodos. Se obtuvieron datos de la prueba de toxicidad
para las muestras de suelo recolectadas despus de 120 das de
remediacin. Los indicadores son los suelos contaminados no
tratados, suelos contaminados landfarming, y suelo contaminado
tratado con el MPPS. La referencia es suelo no contaminado. Las
barras de error son errores estndar (n=5). Etiquetas (a) y (b)
indican diferencias estadsticamente significativas de la referencia
y el MPPS, respectivamente (P<0.05).

total de THP removido por el MPPS fue

de un 50%, mientras que landfarming
fue menos de 20%, bioremediacin

menos de 30% y fitorremediacin

aproximadamente 30%. La ventaja del
MPPS fue mucho ms evidente al final de
8 meses. Para ese tiempo, el MPPS
removi el 90% de THPs del suelo,
landfarming
removi
solo
20%,
bioremediacin 40% y fitorremediacin
55%. (Fig.3).
3.4 Toxicidad de TPH contaminados
despus de remediacin de suelos.
Las pruebas de toxicidad en suelos
contaminados no tratados y suelos
remediados fueron realizadas con
Colembola (O. folsomi). Los resultados
mostraron que seguido al landfarming,
el suelo contaminado todava era txico
para Colembola con un 30% de
mortalidad, que era similar a la
toxicidad del suelo sin tratar (Fig.4). Sin
embargo, el suelo contaminado tratado
por 4 meses con el MPPS no mostr
ninguna toxicidad para Colembola (cero
mortalidad). sta reduccin de la
toxicidad se correlacin con los
resultados del anlisis qumico de
fracciones de TPH en el suelo, las cuales
muestran un dramtico decrecimiento
en fracciones 3 y 4 durante el mismo
periodo de tiempo.

severamente deprimida por TPHs en el

suelo, aunque TallFescue es una especie
de planta relativamente tolerante a
contaminantes
orgnicos
[12].La
frecuencia de germinacin de TallFescue
sin
PGPR
(PlantGrowthPromotingRhizobacteriaCrecimiento vegetal con la promocin
de Rizobacterias) en suelo contaminado
con TPH fue solo el 70% de la referencia
de suelo no contaminado (Fig.5). La
disminucin de la germinacin de la
planta resulta en una decrecimiento y/o
retraso en la acumulacin de biomasa,
resultando en ltima instancia en una
tasa ms lenta de remediacin. Por el
contrario la germinacin de las plantas
en MPPS no se efectu por TPHs en el
suelo y tuvo un 100% de la frecuencia
de germinacin (Fig.5).

Fig.5. Eficiencia germinacin de TallFescue con fitorremediacin y

el MPPS. Las barras de error son errores estndar (n=3). Etiqueta
(a) indica estadsticamente diferencias significativas del suelo de
referencia (P<0.05)
Fig.6. Acumulacin de peso fresco y seco de las plantas cultivadas
en suelo contaminado con TPH. Los datos son presentados como
porcentaje de control del crecimiento de las plantas en suelo de
referencia. Despus de 120 das de crecimientos de TallFescue, en
suelo de referencia fue: el total de peso fresco

3.5 Fisiloga de plantas usadas para la

remediacin.
Los TPHs en el suelo son txicos para
varios tipos de organismos como
Colembola mostrado arriba.
TPHs
usadas en altas concentraciones aqu
son tambin txicos para las plantas.
Una etapa de crecimiento de las
plantas que es particularmente sensible
a los contaminantes es la germinacin.
Por lo tanto, el efecto de TPH en el
suelo en la germinacin de TallFescue,
la planta usada para fitorremediacin
en ste trabajo, fue evaluado (Fig.5).
Los resultados muestran que la
germinacin
de
TallFescue
fue

(shoots+roots)~180g/Kg de suelo y el total del peso seco ~25g/Kg

de suelo para el control de las plantas. Etiqueta (a) indica
estadsticamente diferencias significativas del suelo de referencia
(P<0.05).

elTPHs en el suelo contaminado

disminuy grandemente la acumulacin
de biomasa de las plantas (Fig.6). El
efecto de TPHs en presionar la

acumulacin de biomasa fue mayor que

la disminucin de la frecuencia de
germinacin de las plantas. Es decir, la
acumulacin de biomasa de plantas sin
PGPR en suelo contaminado fue inferior
al 60% de las plantas en suelos de
referencia no contaminados (FIG.6). En
comparacin con las plantas usadas en
suelos contaminados, las plantas en el
MPPS
exhibi
crecimiento
considerablemente
mayor.
La
acumulacin de biomasa en el MPPS fue
ms del doble de plantas que en solo
fitorremediacin. Sorprendentemente el
crecimiento de las plantas en el MPPS
en suelo contaminado fue incluso mejor
que las plantas en suelo de referencia
con el 130% de mayor oportunidad y
150% mayor crecimiento de raz (Fig.6).
La combinacin del aumento en la
germinacin de las plantas y el
aumento del crecimiento en el MPPS
probablemente sea un factor clave en la
facilitacin de ms efectividad en
procesos de remediacin.
4. Discusin
Nuestros experimentos muestran que el
SISTEMA
DE
FITORREMEDIACIN
MULTIPROCESO (MPPS) es efectivo en la
remocin de fracciones de TPHs de un
suelo autnticamente contaminado.
Hasta
la
fecha,
landfarming
y
bioremediacin han sido las prcticas
ms usadas para la remediacin de
suelos contaminados por TPH [20,21].
Por ejemplo, algunas refineras difunden
lodo de aceite en la parte superior del
suelo y luego el landfarming para la
descontaminacin [1]. Tpicamente, el
degradamiento de los contaminantes
TPH en el suelo se acumula por muchos
aos. Esto es porque la efectividad de
landfarming, la inoculacin de microbios
y la adicin de nutrientes tienen muy
limitados impactos en remocin de
compuestos orgnicos persistentes y
altamente hidrofbicos [1]. Esto es

consistente con las observaciones

previas,
persiste
que
PAH
(PolycyclicaromatichydrocarbonsHidrocarburos aromticos policclicos)
no fueron removidos de los suelos por el
proceso de landfarming, bioremediacin
o su combinacin con el suelo de
laboratorio con creosota [3].El presente
estudio con lodo de aceite en tierras
cultivadas
contaminado
tambin
demuestra que el landfarming y
bioremediacin, o su combinacin no
son efectivas para la descontaminacin
de fracciones mas grandes de TPHs del
suelo (Table 1).La introduccin de cepas
de organismos degradantes de TPH en
los suelos contaminados para iniciar un
proceso de degradacin microbiana
facilita la descontaminacin de TPHs.
Sin embargo, en muchos casos, al
introducir microorganismos que no
pueden sobrevivir nicamente sobre los
contaminantes
es difcil conseguir
suficiente biomasa microbiana para una
remediacin
eficiente
[20.22].
La
fitorremediacin tiene algunas ventajas
por
encima
de
landfarming
y
bioremediacin, siempre que las plantas
tiendan a crecer en suelo contaminado,
ya

Landfarmingy bioremediacin remueven

algunas fracciones de TPH 2 y 3A del
suelo (Fig.2). Sin embargo, no fueron
eficaces en la eliminacin de las
fracciones que contienen molculas
ms grandes, tales como las fracciones
3B
y
4
(Fig.2).
Curiosamente
fitorremediacin
fue
mucho
ms
efectiva removiendo las fracciones con
menores componentes de carbn y fue
tambin capaz de remover una

pequea cantidad de las fracciones con

componentes de carbn ms grandes.
Por
ejemplo,
la
fitorremediacin
removi un pequeo porcentaje de
fracciones 3A y 4. Sin embargo, la
remediacin sigue siendo muy baja, con
solo el 20% de remocin en los 8 meses
del experimento de remediacin. En
comparacin
con
los
mtodos
anteriores, no slo fue el MPPS ms
eficaz en la eliminacin de las
fracciones con pequeos componentes
de hidrocarburos (i.e., fracciones 3B y
4). Como se discuti anteriormente, los
contaminantes >C50 fueron tambin
remediados. Further, la tasa de
eliminacin fue relativamente constante
durante todo el periodo de 8 meses de
remediacin. Una pregunta que no se
puede responder directamente es el
destino de los TPHs en el suelo. Sin
embargo, con los MPPS, theTPHs en el
suelo fueron disminuidos del 5% (p/p) a
0.5% (p/p) en 8 meses. Es decir, por 1
kilogramo
de
suelo,
las
plantas
remueven 45 gramos de TPHs. El total
de la biomasa/kilogramo de suelo fue
30 gramos seco y pesado, y el total de
races de biomasa fue slo de 15
gramos seco y pesado. Por lo tanto, si
los TPHs no se degradan las plantas
contendran 1.5 gramos de TPHs/ gramo
de tejido o 3gramos/ gramo de races.
Nosotros, por lo tanto, creemos que la
mayor proporcin de TPHs en el suelo
fueron
removidos
(posiblemente
mineralizados).
Una clave para alcanzar la mxima
eficacia y una remediacin ms rpida
fue el uso de procesos de remediacin
complementarios para permitir la
remocin de mezclas complejas de
compuestos contaminantes. En lugares
realmente contaminados, las mezclas
de
contaminantes
en
el
suelo
generalmente seran muy complejas y
un sistema multiproceso de alguna
especie sera necesario [3]. Cada

componente de nuestro MPPS se centra

en
un
grupo
especfico
de
contaminantes
en
la
mezcla.
Landfarming incrementa el potencial
oxidativo
del
suelo,
mejora
la
volatilizacin fsica y la oxidacin
fotoqumica. Esta tambin mejora las
condiciones para los microorganismos
del suelo dando como resultado un
incremente natural de la actividad de
micro-degradacin
[9].
Lo
ms
importante es que el uso de PGPR
proporciona mejor crecimiento de la
planta al incrementar a tolerancia de
ella ante los contaminantes del suelo
[3,5]. Estos resultados son necesarios
en la mayor cantidad de biomasa de
raz para repartir contaminante y
degradacin.
El enfoque de utilizar varios mtodos
acelera mayormente el proceso de
remediacin.
Esto
debe
reducir
significativamente el tiempo necesario
para regenerar suelos contaminados
para otros usos. De los datos
presentados, podramos concluir que
esa
acumulacin
de
biomasa,
particularmente en los sistemas de
races de las plantas es crtica para el
xito del MPPS. Esta caracterstica es
quizs uno de los determinantes ms
importantes para el xito o fracaso de
una estrategia de fitorremediacin. En
este sentido, se cree que es uno de los
mejores mecanismos que utilizan los
PGPR aadidos para promover el
crecimiento de la planta en presencia
de ambientes contaminados como el
TPHs, incluyendo la disminucin de los
niveles de etileno con la desaminasa
ACC. Ms, ellos directamente estimulan
el
crecimiento
de
la
planta
proporcionando
la
auxina,
cido
indolactico proporcionando a la planta
con suficiente hierro a travs de la
accin
bacteriana
de
siderforos
[10,23]. Por lo tanto, el crecimiento de
las races es mantenido incluso bajo

condiciones de estrs de la planta.

Esencialmente,
las
plantas
efectivamente
bajan
las
concentraciones de sustancias txicas
proporcionando grandes cantidades de
biomasa de raz.
5. Conclusiones
Un previo estudio con aceite de pas de
creosota muestra que landfarming,
bioremediacin y fitorremediacin tena
una eficacia limitada en remediacin de
forma Hidrocarburos persistentes suelos
contaminados. En el presente estudio
con lodo de aceite en el suelo
contaminado y tambin se demostr
que estas tcnicas son limitadas en su
capacidad para descontaminar suelos
contaminados con TPH. Sin embargo,
ambos estudios mostraron que la
combinacin
de
varios
procesos,
incluyendo especialmente usado en
PGPR, puede superar las limitaciones
aparentes de los mtodos individuales.
Estos mejoran la efectividad general del
proceso de remediacin. Por lo tanto, la
utilizacin de mltiples mtodos para
mejorar el proceso de remediacin
puede ser una solucin ptima limpiar
los
contaminantes
orgnicos
persistentes mixtos del ambiente. El
MPPS fue capaz de remover mucho ms
TPH del suelo que el landfarming,
bioremediacin y fitorremediacin. La
fitorremediacin no fue mucho ms
efectiva
que
landfarming
y
bioremediacin. Esto debe ser porque la
fitorremediacin no ha sido bien
aceptada por los lugares contaminados.
Por otra parte, la fitorremediacin ha
sido mucho ms efectiva mientras en la
qumica como se entiende mucho en la
qumica
de
los
contaminantes
especficos y mltiples procesos estn
incluidos
con
fitorremediacin.
Especialmente, se debe superar el
estrs qumico en las plantas, como se
logra con PGPR.

Agradecimientos
Agradecemos Duncan Bristow, Larry
Lawlor Paul Wals, Laura Black and
Colette McGarvey de Imperial Oil
Canad Inc., y B. Dowsley y G.
Stephenson de Stantec por las tantas
discusiones
fructferas.
Estamos
agradecidos con Imperial Oil Canad,
Stantec Inc., CRESTech y NSERC por
proporcionar fondos y soporte tcnico
para sta bsquedad.
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