Modulo Sobre Metodos Espectrofotometricos - Analisis Farmaceuticos II

Universidad de Panam
Facultad de Farmacia
Departamento de Qumica Medicinal y Farmacognosia
Anlisis farmacuticos II
far 310
Profesor
Goy E. Navas, PhD
Objetivos
Reconocer las ventajas y desventajas que plantean los mtodos
espectrofotomtricos para el anlisis de los productos
farmacuticos
Comprender las bases tericas que rigen el fenmeno de absorcin
y su aplicacin al anlisis cualitativo y cuantitativo de
medicamentos
Reconocer los fundamentos de las tcnicas espectrofotomtricas
aplicadas en las especificaciones de calidad contenidas en las
farmacopeas con valor legal en Panam
Comprender las tcnicas cromatogrficas aplicables al anlisis
cualitativo y cuantitativo
Reconocer los principios bsicos y las aplicaciones de las tcnicas de
refractometra, electroforesis y absorcin atmica en el anlisis de
medicamentos
Prof. Dr. Goy E. Navas
Temario
1.
2.
3.
4.
5.
6.
7.
8.
9.
10.
11.
12.
13.
14.
Introduccin al tema de anlisis espectrofotomtrico Principios y

fundamentos
El espectro electromagnticos
Instrumentacin utilizada en espectroscopa (en Laboratorio)
Leyes fundamentales aplicadas a espectroscopa Fundamentos
Leyes fundamentales aplicadas a espectroscopa Aplicaciones
Leyes fundamentales aplicadas a espectroscopa Transiciones
Leyes fundamentales aplicadas a espectroscopa Procesos de
relajamiento absorcin y grupos funcionales de las estructuras
El espectro de absorcin caractersticas
Grupos que absorben en la regin UV-Vis
Regin visible del espectro electromagntico
Anlisis basado en la fluorescencia
Regin infrarroja del espectro
Fundamentos de la cromatografa
Fundamentos de la refractometra, electroforsis y absorcin
atmica
Anlisis espectrofotomtrico
de medicamentos
FUNDAMENTOS
Los mtodos espectrofotomtricos y particularmente en la REGION

ULTRAVIOLETA han sido los mtodos ms usados en las farmacopeas
En la REGIN VISIBLE, tambin han sido un mtodo de eleccin
Se basan en la interaccin de una sustancia qumica con la energa
radiante
Esta energa puede estar en la forma de
LUZ ULTRAVIOLETA
LUZ VISIBLE
LUZ INFRARROJA
RAYOS X
ETC
El efecto de esta interaccin es la absorcin de UNA parte de la energa

incidente por parte de la sustancia que se irradia
Conociendo la energa que incide sobre la muestra y la energa que se
transmite de la muestra se calcula la cantidad absorbida por la sustancia
qumica presente en la muestra
Ventajas y Desventajas
Anlisis espectrofotomtrico
VENTAJAS
Fcil de usar
Confiabilidad
Exactitud y precisin razonables
Mayor sensibilidad que los mtodos antes estudiados en Qumica Analtica
(volumtricos y gravimtricos) (impacto)
Nos permite trabajar a menores rangos de concentracin (impacto):
Mtodos gravimtricos: 0.1 mg/mL
Mtodos volumtricos: 0.1 mg/mL
Mtodos espectrofotomtricos: 0.01 0.001 mg/mL
DESVENTAJAS
No son especficos: no pueden distinguir entre sustancias anlogas
Requieren de comparacin con una sustancia de referencia: las respuesta de
una muestra de concentracin desconocida se compara con la respuesta de
una muestra de concentracin conocida
La exactitud de un anlisis depende de la pureza de la solucin de la

sustancia qumica de referencia y la exactitud con que se prepara
Naturaleza de la energa radiante
La energa radiante (ER) se define como la energa electromagntica o

como radiacin electromagntica
Cmo se genera la energa radiante?
Por efecto del calor sobre una sustancia
Por descarga electrnica
Combinacin de ambas
Dualidad de la naturaleza de la energa radiante por su capacidad de ser

absorbida y emitida
Como partcula (paquetes de energa)
Como onda
La ER se puede definir como un campo electromagntico oscilante que

viaja a travs del espacio, con movimientos como una onda y tambin
como un haz de partculas (llamadas fotones), a la velocidad de la luz
La caracterstica principal de esta energa es que se puede propagar en el
vaco, sin necesidad de soporte material alguno. Ej.: La energa que
proporciona el Sol y que nos llega a la Tierra en forma de luz y calor
Ondas electromagnticas
La frecuencia () (# de ciclos por intervalo de tiempo) y la longitud de onda

() se relacionan por la velocidad de la luz;
La frecuencia y la longitud de onda son inversamente proporcionales:
x=c
y
=c/
En espectroscopa, la energa en la regin visible y ultravioleta del

espectro electromagntico se mide en nanmetros (nm) (una billonsima
parte del metro)
La frecuencia se mide en Hercios y la unidades son ciclos por segundo (cps)
En espectroscopa de la regin infrarroja la frecuencia se mide en nmero

de onda, con unidades en cm-1 ; nmero de onda = 107 / (nm) para que
los nmeros sean ms pequeos
En espectroscopa, cuando se habla de ENERGA pareciera implicar que a
medida que un haz de luz sea ms intenso debera contener ms
ENERGA. Falso!
Cuando se habla de energa de la radiacin, se refieren a la energa de un
solo fotn u onda
La intensidad de la radiacin se mide por el nmero de
fotones u ondas presentes en los haces de luz, lo cual a su
vez se relaciona con el PODER (P) de los haces y no con la
Energa
Por lo tanto, la cantidad de energa presente en cualquier onda

electromagntica depende de la FRECUENCIA de la radiacin y NO de la
INTENSIDAD
Mientras MAYOR sea la FRECUENCIA de una radiacin, MAYOR ser el
contenido energtico de la misma; relacin de proporcionalidad directa
E=h
(1)
Igualmente se esperara una relacin inversa entre la ENERGA y la
LONGITUD DE ONDA
E = hc /
(2)
Combinando las ecuaciones anteriores (1) y (2) llegamos a un enunciado
general
La energa de cualquier onda electromagntica AUMENTA
cuando aumenta la FRECUENCIA y DISMINUYE cuando
aumenta la LONGITUD DE ONDA
10
+ FRECUENCIA ENERGA
- LONGITUD DE ONDA +
11
Formas de energa
12
La energa trmica
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La energa elctrica
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La energa radiante
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22
Fundamentos
Todos los mtodos espectrofotomtricos estn basados en la interaccin

de una sustancia qumica con la energa radiante
La energa radiante puede estar en la forma de luz ultravioleta (UV) o luz
visible (VIS), luz infrarroja, rayos X, ondas de radio
El resultado de esta interaccin en la mayora de los casos es la absorcin
de energa por parte de la sustancia qumica que est siendo irradiada
Al medir la cantidad de energa que pasa a travs de la muestra irradiada
podemos determinar por diferencia la cantidad de muestra (sustancia
qumica) presente que ha interaccionado con la energa radiante y que ha
absorbido dicha energa
E0
23
24
La espectrofotometra se basa en la relacin que existe entre la magnitud

de la radiacin absorbida y la cantidad de sustancia que irradiada
Cuando se hace incidir luz monocromtica (de una sola longitud de onda)
sobre un medio homogneo, una parte de la luz incidente es absorbida
por el medio y otra transmitida
Como consecuencia, la intensidad del rayo de luz se ve atenuada desde Eo
a E, siendo Eo la intensidad de la luz incidente y E la intensidad del rayo de
luz transmitida; atenuacin depende adems del espesor del cuerpo
absorbente
Dependiendo del compuesto y el tipo de absorcin a medir, la muestra
puede estar en fase lquida (o en disolucin), slida o gaseosa
En las regiones visibles y ultravioleta del espectro electromagntico, la
muestra es generalmente disuelta para formar una disolucin
Los anlisis en la regin infrarroja, la muestra puede estar en fase
gaseosa, en solucin lquida, en solucin slido-slido (cristales), en
suspensin oleosa
25
El espectro de absorcin
El espectro de absorcin es una curva que muestra la cantidad de energa

radiante absorbida, Absorbancia, por la sustancia en cada longitud de
onda de una porcin del espectro electromagntico; es decir a una
determinada longitud de onda de la energa radiante
Cada sustancia absorbe una cantidad de radiacin que es distinta a la que
absorbe otro compuesto
El espectro de absorcin de dos sustancias diferentes; cada sustancia tiene
su propio espectro de absorcin
26
Leyes de absorcin de la luz
El fenmeno de la absorcin de la luz

Qu sucede al hacer incidir un haz de energa monocromtica (es decir,
un haz de energa de solamente un estrecho rango de longitudes de onda)
sobre una superficie absorbente?
Si se corrige la Pr, se observa una relacin entre Po y Pt
27
La cantidad de Poder transmitido por un medio homogneo es

proporcional a la cantidad de Poder que se hace incidir sobre dicho medio
La ENERGA transmitida por el medio ser siempre una fraccn de la
Energa total incidente. Esta fraccin se denomina Transmitancia
La Transmitancia mantiene un valor constante para una sustancia

determinada, cuando el espesor del medio absorbente y la longitud de
onda de la energa permanecen constante; por ejemplo, T siempre ser
igual a 2, a un cierto espesor y longitud de onda. Al variar cualquiera de
estos valores T dejar de ser igual a 2.
28
Qu sucede con la Transmitancia cuando se aumenta

el espesor del material absorbente?
El comportamiento de la
energa electromagntica de
acuerdo a la ley de Bourger.
Al graficar T vs espesor se
produce una curva de
decaimiento exponencial
Al graficar el Log T vs el espesor,

se produce una curva lineal
29
Relacin entre Transmitancia y Absorbancia
La Absorbancia es directamente proporcional al espesor del

medio absorbente
30
Ley de Beer
La intensidad de un haz de luz monocromtica disminuye

exponencialmente al aumentar aritmticamente la CONCENTRACIN de
la sustancia absorbente, cuando este haz pasa a travs de un medio
homogneo
En forma anloga llegamos visualizar la relacin entre P y Po . Pero esta vez

la variable es la concentracin c en vez del espesor b.
Llegaremos a una ecuacin similar donde -log T = a c = Absorbancia

Por lo tanto:
A = a c , segn la Ley de Beer
Las leyes combinadas dan lugar a la ley conocida como Ley de Lambert y
Beer o Ley de Bourger-Beer A = a b c la cual enuncia que la Absorbancia
es directamente proporcional al espesor del medio (b) y a la
concentracin(c)
31
Definicin de Absorbancia y Transmitancia
Transmitancia (T) : Es la razn entre la luz monocromtica transmitida (P)

por una muestra y la energa o luz incidente (Po) sobre ella. Tanto la
energa radiante incidente como la transmitida deben ser medidas a la
misma longitud de onda.
%T = 100 P / P0
T = P / P0 = 10-abc
Absorbancia(A) : Se define como la cantidad de energa radiante
absorbida por una sustancia pura o en solucin. Matemticamente,
corresponde al logaritmo negativo de la Transmitancia (T)
A = - log T = 2 log %T
A=abc
Esta ecuacin indica que la absorbancia es una funcin lineal de la
concentracin, donde a es una constante de proporcionalidad llamada
absortividad. La magnitud de a depende de las unidades de b y c. Si la
concentracin c est expresada en moles por litro y la longitud de la cubeta
b en centmetros, la constante a recibe el nombre de absortividad molar
(); Luego A = b c
32
Mediciones de transmitancia y absorbancia
Las mediciones de absorbancia o transmitancia se hacen por comparacin

entre la muestra problema y un estndar arbitrario o referencia.
Como la referencia debe poseer un porcentaje de transmitancia de 100%,
esta es llamada referencia de 100%., o una absorbancia de cero
33
Seleccin de la longitud de onda de trabajo
La longitud de onda de trabajo corresponde, generalmente, a la longitud

de onda en la cual la absorbancia del analito (sustancia a analizar) es
mxima, y recibe la denominacin de Lambda mximo (max).
Para seleccionar el max, se hace un espectro de absorcin o curva
espectral la cual consiste en una grfica de la absorbancia de una solucin
de la sustancia absorbente de concentracin adecuada, medida a distintas
longitudes de onda y en ella se determina el max
Al hacer la curva de calibracin, se debe emplear la longitud de onda de

mxima absorbancia (max.), para obtener una recta con la mxima
pendiente y as tener mayor sensibilidad y precisin al hacer las
mediciones
34
C1
1 >3>2
Abs
max
A1
A2
A3
1>3>2
1
Abs
Conc
A1
C1
A2
C2
A3
C3
35
Curva de calibracin
Uno de los mtodos ms utilizados para determinar la concentracin de

una muestra problema, es el mtodo de la curva de calibracin.
Esta curva de calibracin es una grfica que relaciona la concentracin de
al menos cinco soluciones de estndar de concentraciones conocidas, con
la absorbancia de cada uno de ellos a la longitud de onda mxima ( max)
36
Una vez obtenida la grfica se determina la funcin matemtica que

presenta dicha recta a travs del tratamiento estadstico de regresin de
los mnimos cuadrados, la cual relaciona la absorbancia y la concentracin
de un analito.
La siguiente ecuacin matemtica corresponde a dicha funcin:
A = mc + n
A=abc
Donde A = absorbancia; m = pendiente de la curva, que corresponde al
producto entre la absortividad de la muestra (a) y el espesor (b) de la
cubeta o celda; n es el intercepto de la curva con el eje de las Y;
Luego se mide la absorbancia de la solucin problema y se interpola su
valor en la grfica o se reemplaza en la ecuacin anterior, para obtener el
valor de concentracin del analito
La concentracin de la solucin problema debe estar comprendida en el
rango de concentracin que comprende la curva de calibracin.
37
Si la concentracin de la solucin problema es menor que la concentracin

del estndar ms diluido, debe usarse el mtodo de adicin estndar, que
consiste en adicionar un volumen determinado de un estndar
concentrado a la solucin problema, antes de realizar la lectura y que
permite que esta lectura este dentro de las obtenidas para la curva de
calibracin. En el caso contrario, si la concentracin del analito es mayor
que la concentracin del estndar ms concentrado la solucin problema
deber ser diluida.
A Am
muestra
Cmuestra
La medicin de la absorbancia de la solucin problema debe hacerse a la

misma longitud de onda que fue hecha la curva de calibracin
38
Razn de la absorbancias
Cuando se usa este mtodo para realizar un anlisis cuantitativo, no es

necesario graficar una curva de calibracin.
Se debe asumir que existe una relacin lineal entre la Abs y la
concentracin para hacer un buen uso de esta aproximacin
La siguiente es la aproximacin que se debe usar:
Para el patrn:
Ap = apbpCp
Para la muestra de concentracin desconocida:
Ad = adbdCd
Dado que ap = ad y el espesor de la celda es igual bp = bd ,
Entonces [Ad / Cd ]= [Ap / Cp ] y por lo tanto
Cd = [Ad/Ap] Cp
Por esta va tambin se puede usar esta ecuacin para averiguar la
concentracin de una solucin cuya concentracin se desconoce, siempre
y cuando se conozca la concentracin de la solucin que contiene la
sustancia patrn y la absorbancia de ambas soluciones.
39
La razn de las absorbancias como prueba de identidad y pureza
Si corremos el espectro de dos soluciones de dos sustancias que se quiere

determinar si son idnticas o si su pureza es aceptable, podemos
comparar la razn de los valores de las absorbancias a las mismas dos
longitudes de onda; siempre y cuando el espesor de la celda sea igual y
tambin la concentracin sea la misma en ambas soluciones.
Si la razn de las absorbancias coincide entonces se trata de la misma
sustancia. Si lo que se quiere es demostrar su pureza entonces se compara
la razn de las absorbancias de una sustancia patrn con la razn de las
absorbancias de la sustancia problema.
Sustancia patrn
A1 / A2 = a1 / a2 = constante
Dos sustancias diferentes no
poseen los mismos valores de
las razones de absorbancia,
medidas bajo las mismas
condiciones
40
Espectroscopa de Absorcin UV-Vis
Muchas molculas absorben luz visible o ultravioleta.

La absorbancia de una solucin aumenta cuando la atenuacin del haz
aumenta.
La absorbancia es directamente proporcional a la longitud del paso ptico,
b, y la concentracin, c, de las especies absorbentes.
La Ley de Beer establece que A = bc, donde es una constante de
proporcionalidad, llamada absortividad molar
Muchas molculas absorben radiacin a longitudes de onda diferentes.
Un espectro de absorcin mostrar un nmero de bandas de absorcin
correspondientes a grupos estructurales o funcionales que estn dentro
de la molcula.
Por ejemplo, la absorcin que se observa en la regin UV para el grupo
carbonilo en la acetona es de la misma longitud de onda que la absorcin
del grupo carbonilo en la dietilcetona. Y por qu? Porque en ambos caso el
grupo funcional responsable de la absorcin es el mismo; el grupo
carbonilo.
41
Cuando un fotn de energa radiante es absorbido por una molcula en su

estado basal, se aumenta el contenido energtico de la molcula en una
cantidad equivalente al contenido energtico del fotn.
En este momento se dice que la molcula entra en un estado de
excitacin luego de haber absorbido esa cantidad de energa y al haber
transitado desde el estado basal al estado excitado. Cuando tiene lugar
esta absorcin se da, decimos que ha ocurrido una transicin.
Hay 3 transiciones de inters en una molcula:
Transiciones electrnicas (con energa asociada a la regin UV)
Transiciones vibracionales (con energa asociada a la regin IR)
Transiciones rotacionales (con energa asociada a la regin micro-onda)
Los espectros de excitacin de una molcula son ms bien achatado

debido a la sobreposicin de las transiciones electrnicas, vibracionales y
rotacionales.
42
Energa
En un espectro de excitacin de tomos no hay transiciones vibracionales o

rotacionales ya que no hay enlaces que vibren o roten. Se observan solamente
transiciones electrnicas en su forma ms pura generndose entonces lneas de
absorcin bien definidas.
43
Orgenes de las transiciones electrnicas
Considere el grupo funcional formaldehido

Posee electrones en orbitales sigma ()y el enlace se llama enlace sigma
(enlace sencillo)
Posee electrones en orbitales (pi) y el enlace en que estn se llama enlace
(enlace doble)
Los electrones no compartidos estn en orbitales no-enlazantes n y son los
ms reactivos de los tres tipos de electrones
44
Transiciones *
Un electrn en un orbital es excitado al orbital anti-enlazante *
correspondiente. La energa requerida es grande. Por ejemplo, el metano
(que solo tiene enlace sencillos C-H, y sus electrones nicamente pueden
efectuar transiciones *) muestra una absorcin mxima a 125 nm. La
absorcin mxima debida a transiciones * no se observa en un
espectro tpico UV-Vis (200 nm a 700 nm)
Transiciones n*
Los compuestos saturados que contienen tomos con pares de electrones
no-compartidos (electrones no-enlazantes) son capaces de efectuar
transiciones n*. Estas transiciones generalmente necesitan menor
energa que las transiciones *. Pueden ser iniciadas por una radiacin
de longitud de onda en el rango de 150 nm a 250 nm. El nmero de
grupos funcionales orgnicos con seales n* es pequeo.
45
Transiciones n* y *
La mayora de los estudios de espectroscopa de absorcin, en la regin
UV, de compuestos orgnicos est basada en las transiciones de los
electrones n y al estado excitado *. Esto es debido a que las bandas de
absorcin para estas transiciones caen en una regin del espectro (200 nm
a 700 nm) experimentalmente til. Estas transiciones necesitan un grupo
insaturado en la molcula que proporcione los electrones
46
47
48
El disolvente de la muestra tambin tiene un efecto notable sobre el

espectro de absorcin. Las bandas de absorcin de las transiciones n*
son desplazadas a longitudes de onda menores (desplazamiento azul o
hipsocrmico) cuando se incrementa la polaridad del disolvente. Esto es
debido al incremento de la solvatacin de los electrones n que da como
consecuencia una disminucin de la energa de su orbital
49
Generalmente (aunque no siempre), el efecto opuesto (el desplazamiento

rojo o batocrmico) se observa para las transiciones *. Esto es debido
a las fuerzas polares de atraccin entre el disolvente y el absorbente, que
disminuye la diferencia de energa entre los niveles basal y excitado. Este
efecto es mayor para el estado excitado, y as la diferencia de energa
entre los estados basal y excitado es ligeramente disminuida, dando como
resultado un aumento en la longitud de onda de absorcin
(desplazamiento rojo o batocrmico). Este efecto tambin influye en las
transiciones n*, pero es eclipsado por el efecto azul que resulta de la
solvatacin de los pares de electrones solos
50
Compuesto
Posicin, (nm)
Intensidad, (L/cm .mol)
Fenol
270
1,450
Fenolato de sodio
287
2,600
Compuesto
Posicin, (nm)
Intensidad, (L/cm .mol)
Anilina
280
1,430
Clorhidrato de anilina
254
160
51
Dos consideraciones importantes en torno al

anlisis cuantitativo de medicamentos
La selectividad de los espectrofotmetros es muy baja y por lo tanto se

requiere de procesos de separacin y purificacin de (el/los) principio(s)
activo(s) removiendo las posibles interferencias, e.g., excipientes
Esquemas de dilucin E s necesario hacer diluciones para llevar la
concentracin del analito a concentraciones de trabajo que estn dentro
del rango de linealidad de la concentracin del espectrofotmetro
52
Anlisis espectrofotomtrico del acetaminofn
Longitud de onda de trabajo: 244 nm (transicin

*)
Mtodo de ensayo: Se disuelve cerca de 120 mg de acetaminofn, pesada
con exactitud, en 10mL de metanol en un frasco volumtrico de 500.0mL,
se diluye con agua hasta el aforo, y se mezcla (Paso 1). Se transfieren
5.0mL de esta solucin a un frasco volumtrico de 100.0mL, se diluye con
agua hasta el aforo y se mezcla (Paso 2). Simultneamente se determinan
las absorbancias de esta solucin y de otra solucin patrn de
acetaminofn (SQR) disuelta en el mismo medio, a una concentracin de
12g/mL en una celda de 1 cm de espesor, a una mx de 244nm
utilizando agua destilada como balnco (Paso 3). Calcule la cantidad, en mg,
de acetaminofn a partir de la frmula 10C[Ad/Ap] donde C es la
concentracin en g/mLde la solucin patrn de acetaminofn (SQR), Ad
(absorbancia del desconocido) y Ap (absorbancia de la solucin patrn)
53
Ensayo de la muestra
Datos experimentales para el anlisis:
Peso de la muestra de acetaminofn: 116.8mg que se disuelve en metanol
Concentracin de la sustancia patrn SQR: 12.0g/mL
Ap (absorbancia de la solucin estndar) = 0.612
Ad (absorbancia de la solucin desconocida) = 0.584
La concentracin de la sustancia desconocida (muestra de acetaminofn)
Cd = Cp Ad / Ap = 12.0g/mL 0.584 / 0.612 = 11.5g/mL

Cd es la concentracin de acetaminofn en el Paso 2 (transparencia
anterior)
Si 1.0 mL contiene 11.5g; entonces en 100.0mL debe haber 1,150g =
1.15mg/5.0mL; por lo tanto en 500.0mL deber haber (500.0/5.0)x1.15mg
= 115mg (cantidad de acetaminofn en la muestra)
115mg es la cantidad de acetaminofn en 116.8mg de la muestra pesada
Entonces (115/116.8) x 100% = 98.5% pureza de la muestra!
54
Cuestionario: responda las siguientes preguntas

1.
2.
3.
4.
5.
6.
7.
Cules son los 3 tipos de transiciones moleculares?

En qu regin del espectro electromagntico (microonda, infrarrojo,
ultravioleta, visible, rayos gama, etc.) ocurren las transiciones
electrnicas?
Por qu las especies atmicas solo muestran lneas de absorcin y no
bandas de absorcin?
Cules son los tipos ms comunes procesos de relajamiento que se
observan luego de las transiciones electrnicas?
En los procesos de relajamiento como fluorescencia y fosforescencia, la
energa que se re-emite es de mayor, menor o igual energa que la
energa de excitacin absorbida?
En qu difiere la fluorescencia de la fosforescencia
Arregle las siguiente transiciones en orden ascendente de longitud de
onda:
55
8. Marque con un gancho las transiciones posibles

Sustancia
Metanol
Benceno
Fenol
n-Hexano
Agua
Acetona
Naftaleno
Acido actico
Trietilamina
p-clorofenol
Quinona
Cloroformo
Si es necesario busque las estructuras
56
9.
Cules son las regiones de inters analtico dentro del espectro

ultravioleta? Qu tipo de transiciones ocurren en esos rangos de
longitud de onda?
10. Cules son las dos caractersticas importantes de una banda de
absorcin?
11. Cules son las propiedades moleculares que determinan la posicin de
una banda de absorcin en la regin UV del espectro?
12. Cules son las propiedades moleculares que determinan la intensidad ()
de una banda de absorcin en la regin UV del espectro?
13. Cules son las caractersticas de un grupo cromforo?
14. Cules son las caractersticas de un grupo auxocromo?
15. Qu efecto causa la conjugacin de dos o mas grupos cromforos?
16. Por qu ocurre un desplazamiento batocrmico cuando hay cromforos
conjugados en comparacin a cuando los cromforos no lo estn?
57
Prediga los desplazamientos observados en las

siguientes transformaciones, si acaso alguno, tanto en
posicin como en intensidad
Transformaciones
Batocrmico
Hipsocrmico
Hipercrmico
Hipocrmico
58
Responda las siguientes preguntas
Qu efectos se observan en el espectro de absorcin cuando un

auxocromo se aade a un sistema cromofrico?
Un compuesto X que muestra una mxima de absorcin a 255 nm y una

de 1900 se deshidrohalogen para generar un nuevo compuesto Y que
mostr una max de 270 nm y una de 2100. Qu tipo de desplazamiento
ocurri? A qu conclusin podemos llegar sobre la posicin del nuevo
doble enlace que se gener despus de la deshidrohalogenacin?
59
Aplicaciones cualitativas (pruebas de no-identidad)
No es un mtodo muy usado para fines de identificacin; existen otros

mtodos mejores para comprobar identidad, e.g., infrarrojo, RMN, etc.
No obstante, los desplazamientos batocrmicos e hipsocrmicos observados
con los cambios en el pH de la solucin de una sustancia se usan
ocasionalmente para comprobar la presencia de una sustancia en una muestra
de identidad desconocida o bien para comprobar la ausencia de una sustancia
en dicha muestra
La comprobacin de la identidad de la morfina se ha realizado mediante la
espectroscopa de absorcin observando su espectro de absorcin UV en
solucin acuosa tanto en solucin de HCl como en solucin de KOH
Se observa un desplazamiento batocrmico e hipercrmico en solucin de
KOH; sin embargo, esta NO es una prueba plena ya que cualquier grupo
fenlico presente como contaminante en cantidades suficientes presentara el
mismo comportamiento
No obstante, si la muestra de morfina en cuestin en solucin no presenta un
cambio batocrmico e hipercrmico en solucin de KOH, entonces S
podemos sealar de manera concluyente que la muestra NO es morfina,
siempre y cuando la muestra no contenga impurezas en cantidades
importantes y que absorban fuertemente a la max de medicin
60
Efecto del pH sobre la mxima de la morfina
A0.24
285nm
Observacin: Desplazamiento batocrmico (285 a 298nm) e hipercrmico
(A=0.24 a A=0.65) en solucin de KOH (comparar con espectro inferior)
A0.65
298nm
61
Colorimetra
OBJETIVOS
Estudiar el proceso de absorcin que ocurre en la regin visible del
espectro
Conocer en qu se diferencia de la espectroscopa UV
Reconocer las caractersticas estructurales necesarias para que ocurra
absorcin en la regin visible
Aprender a interpretarlos mtodos colorimtricos y los clculos
correspondientes
62
La colorimetra es la rama del anlisis espectrofotomtrico que estudia la

absorcin de energa radiante de sustancias en el rango de 400 a 700 nm
Violeta Azul
Violeta
(400-450)
Azul
(450-500)
Verde
(500-570)
Amarillo
(570-585)
Verde Amarillo Naranja
Naranja
(585-620)
Rojo
Rojo
(625-700) nm
63
Proceso de absorcin colorimtrica
Al igual que en la regin UV el proceso de absorcin de la energa en la

regin visible es un proceso de excitacin que resulta en una mezcla de
niveles de energa vibracin y rotacional (mayor achatamiento de las
mximas de absorcin)
La principal diferencia entre los procesos de absorcin UV y Vis es la
energa de la respectiva transicin
Un cromforo es un sistema molecular que sufre una transicin del estado
basal al estado excitado
Si la transicin ocurre como resultado de un proceso de excitacin n *
o de * el cromoforo normalmente caer en la regin UV (200-400
nm)
Si a consecuencia de la conjugacin o con la presencia de grupos
auxocromos las mximas de absorcin se desplazan ms all de 400nm y
debajo de 700nm la absorcin ocurre en la regin visible y se analizar por
colorimetra
64
Aplicaciones del anlisis colorimtrico
Diferentes usos de la colorimetra

Para el anlisis de sustancias que poseen color
Para el anlisis de sales metlicas y complejos que absorben fuertemente en la
regin visible
Para el anlisis de sustancias que una vez preparados los respectivos
derivados que resultan de la combinacin con ciertas sustancias
derivatizantes causan desplazamiento de la mxima de absorcin hacia
mayores longitudes de onda
Para el anlisis de sustancias que se convierten a un cromoforo de color que
absorbe en la regin visible pero sin que se combinen ambas sustancias
65
La mayora de los indicadores se pueden analizar en la regin visible del

espectro por colorimetra
Color rojo;
Absorbe en
Vis (550555nm)
Incoloro
Absorbe
en UV
Fenolftaleina: Este es el caso del indicador cido-base y medicamento

catrtico (Ex-lax)
66
Auxiliares de diagnstico Azul de Evans

clnico
Verde indocianina
Antdoto de cianuro
Azul de metileno
67
cloranfenicol
550nm
Derivados de grupos aminos aromticos
68
Grupo cetnicos reaccionan con la 2,4-DNFH para dar un complejo de

color que absorbe a 450nm
69
isoniacida
Hidroxi progesterona
caproato
70

Modulo Sobre Metodos Espectrofotometricos - Analisis Farmaceuticos II

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Universidad de Panam

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