Introduccin

La microbiologa es el estudio de los organismos microscpicos (celulares y

subcelulares), principalmente de aquellos que se encuentren por debajo del
poder de resolucin del ojo humano, estos seres tienen un rango de tamao de
10-5 a 10 mm, por ende es necesario el manejo experimental para observar,
describir su morfologa y taxonoma. Para ello se debe tener habilidades de
manejo de los instrumentos de laboratorio (principalmente el microscopio),
saber las tcnicas bsica de preparacin de una muestra fija de bacteria para
tincin, que es un procedimiento preliminar a la mayora de mtodos de tincin
a bacterias.
Se aprender a realizar el mtodo de tincin simple con colorantes bsicos en
cual consiste en destacar el microorganismo completo para que se vean las
formas y las estructuras bsicas.
Parte experimental
EJERCICIO N. 1 PREPARACION DE UNA MUESTRA FIJA DE BACTERIAS
PARA TINCIN
MATERIALES.
-

Muestra conteniendo bacterias

Asa de klle

Lamina porta objetos

Mechero de alcohol

Piseta con agua

PROCEDIMIENTO
1)

Lavar perfectamente los portaobjetos, secarlo con papel seda.

2)
Prender el mechero y esterilizar el asa klle en la flama del mechero
hasta que se ponga al rojo vivo.
3)
Dejar enfriar el asa para evitar que al tomar la muestra los
microorganismos sean destruidos, despus acercar al mechero el tubo de
cultivo, quitarle el tapn y flamear rpidamente la boca del mismo.
4)
Colocar una gota de agua destilada sobre una lmina porta objeto
completamente limpia. Con ayuda del asa de klle coloque sobre la gota una

pequea porcin de la muestra a fijar. Si la muestra que contiene al

microorganismo es lquida puede aplicarse directamente sin la gota de agua.
5)
Distribuya la gota cargada con la muestra en la lmina hasta formar una
pelcula delgada luego seque la lmina al aire o a una razonable distancia
sobre la llama del mechero.
6)
Cuando la pelcula este seca, pase la lmina a travs de la llama del
mechero unas 2 a 3 veces para as fijarlo con calor, cuidando que la pelcula
este hacia arriba y que la lmina no se recaliente. La sobre exposicin al calor
puede alterar la forma y estructura del microorganismo.

EJERCICIO NRO. 02

TINCION SIMPLE CON COLORANTES BASICOS

La tincin simple constituye una tcnica sencilla y directa que a travs del uso
de un colorante, nos permite constatar y diferenciar los microorganismos de
su entorno.
Los colorantes bsicos, los cuales se utiliza ms comnmente para teir
microorganismos, difieren en el grado de reactividad con las clulas, estas
generalmente tiene una superficie cargada negativamente cuando el pH del
medio es cercano a la neutralidad, entonces se aplica el azul de metileno ( ion
positivo) que reacciona con la pared celular por medio de enlaces inicos
dbiles que estn cargadas negativamente a la tasa ms baja, tomando de 50
a 60 segundos para teir apropiadamente una preparacin microbiana. El
cristal violeta es ms reactivo y generalmente requiere solo 10 segundos. La
carbolfucsina es un colorante an ms rpido, requiriendo solo 5 segundos. Su
reactividad es tan grande que ciertamente puede dificultar una tincin
apropiada, sobre todo cuando la muestra contiene abundante materia
orgnica.
MATERIALES.
-

Laminas fijadas de microorganismos

Aceite de inmersin

Vaso de precipitados de 100 ml

Colorantes bsicos

Azul de metileno

Cristal violeta

Carbol-fucsina

Papel secante

Piseta de agua

Soporte para tincin

PROCEDIMIENTO
1)
Coloque las lminas fijadas de microorganismos sobre el soporte para
tincin.
2)
Agregue 5 a 6 gotas de cada colorantes dejando que acten por un
tiempo de 60 segundos para el azul de metileno; 10 segundos para queel
cristal violeta; y 5 segundos para la carbolfucsina.
3)
Una vez cumplido el tiempo para los colorantes, lave cada lmina con
agua destilada.
4)

Seque las lminas al aire o dentro del papel secante.

5)
Examine las preparaciones teidas bajo el objetivo de inmersin (100X)
de un microscopio compuesto.
6)
Elabore esquemas de sus observaciones destacando las diferencias en
tamao forma, y agrupaciones que se presenten.

CUESTIONARIO
2.

El tamao es un parmetro que est determinado genticamente, pero los

valores concretos para cada raza o cepa de bacterias vienen influidos por una
serie de condiciones ambientales (nutrientes, sales, temperatura, tensin
superficial, etc).

Las bacterias suelen presentar un pequeo tamao, por lo general

menor que el de una clula eucaritica tpica. (Obsrverse en el esquema la
comparacin entre el tamao de una bacteria tpica como Escherichia coli (0.5
x 2 mm) y el de una clula eucariota).
Sin embargo, existe un amplio rango de tamaos, segn las especies:
Una bacteria grande es Beggiatoa gigantea, con un tamao similar al de
muchas clulas eucariticas (40 mm).
Sin embargo, los autntico gigantes entre las bacterias se han descubierto
hace poco:
En 1993 se desubri una bacteria que mide 0,5 mm de longitud. Se trata
de Epulopiscium, un comensal del intestino del pez cirujano.
En 1999 se descubri en un lago de Namibia una bacteria (a la que se
bautiz como Thiomargarita) que alcanza los 700 mm.
Bacillus megaterium mide 1.3 x 3 mm.
Una bacteria relativamente pequea es Haemophilus influenzae, que mide
0.25 x 1.2 mm.

Los organismos celulares cultivables ms pequeos que existen son los

micoplasmas, muchos de los cuales no superan los 0.2 mm de dimetro.
Las nanobacterias o ultramicrobacterias miden en torno a 0.05 mm, pero la
mayora no se han podido cultivar, y slo se pueden estudiar al microscopio.

3.

Los principales tipos de formas bacterianas son:

cocos (clulas ms o menos esfricas);

bacilos (en forma de bastn, alargados),
que a su vez pueden tener varios aspectos:
cilndricos
fusiformes
en forma de maza, etc.
Atendiendo a los tipos de extremos, stos pueden ser:
redondeados (lo ms frecuente)
cuadrados
biselados
afilados
espirilos: al igual que los bacilos, tienen un eje ms largo que otro, pero
dicho eje no es recto, sino que sigue una forma de espiral, con una o ms de
una vuelta de hlice.
vibrios: proyectada su imagen sobre el plano tienen forma de coma, pero en
el espacio suelen corresponder a una forma espiral con menos de una vuelta
de hlice.
Otros tipos de formas
filamentos, ramificados o no
anillos casi cerrados
formas con prolongaciones (con prostecas)
Estos distintos tipos de morfologas celulares deben de haberse
originado por mecanismos evolutivos, a saber, por seleccin y estabilizacin
adaptativa frente a las distintas presiones ambientales presentes en diferentes
nichos ecolgicos.