TEMA 5: LIQUIDOS BIOLOGICOS.

CITOLOGIA Y
BIOQUIMICA

Bajo el trmino de lquidos biolgicos podemos definir a todos aquellos lquidos

o
fluidos corporales procedentes del organismo, tales como:
Lquido cefalorraqudeo.
Lquido pleural.
Lquido sinovial.
Lquido pericrdico.
Lquido amnitico.
A lo largo de este tema nos vamos a centrar en los que se consideran de mayor
importancia, lquido cefalorraqudeo (LCR), y lquido sinovial.

LQUIDO CEFALORRAQUDEO
El LCR, es el lquido seroso contenido en los ventrculos cerebrales, espacio
subaracnoideo y conducto medular. Se forma principalmente en los plexos
coroideos y espacio subaracnoideo. Su volumen en adulto es de unos 150 ml y
en recin nacido de 10 a 60 ml. Se renueva cada 2-4 horas y la velocidad a la
que se forma es de unos 21 ml /h.
Su aspecto es incoloro, claro y de baja viscosidad. No contiene apenas
fibringeno, contiene pocas protenas, principalmente albmina y globulina, y
su
pH oscila entre 7.28 y 7.34.
Se suelen obtener 2 tubos:
Tubo 1: Para Microbiologa.
Centrifugar con rapidez.

Teir el sedimento con Gram.

A la vez sembrar en medio especial.
Separar 3 ml en tubo estril con tapn de rosca y heparina.
No conservar en frigorfico, pues algunos grmenes se daan.
Tubo 2: Para Citologa, Bioqumica y Serologa.
Hacer estudio sin fijar y antes de que transcurran 2 horas desde la
extraccin.
Centrifugar y usar el sobrenadante.
Se investiga glucosa y protenas.
No conservar durante ms de dos horas, pues los leucocitos consumen la
glucosa.

EXAMEN FSICO
VOLUMEN
Se mide aadiendo agua a otro tubo de ensayo de las mismas caractersticas,
hasta enrasar para no contaminarlo durante la manipulacin.
ASPECTO
Normalmente limpio, claro y sin sedimento. Si se presenta turbio, puede
deberse
a la presencia de leucocitos.
COLOR
Normalmente incoloro. Si el color oscila entre rosa plido, anaranjado o
amarillento se denomina xantocroma y puede deberse a:
Oxihemoglobina.
Metahemoglobina.
Bilirrubina.

Elevada concentracin de protenas (niveles superiores a 150 mg/dl).

Tras una hemorragia subaracnoidea (2-4 horas despus) es normal la
xantocroma, que desaparece tras 4 a 8 das.
COGULOS Y SEDIMENTOS
No deben aparecer cogulos al dejarlo en reposo, pero si lo hacen pueden
indicar:
Cogulos sedimentados, en caso de meningitis purulenta.
Cogulos floculantes, en caso de sfilis.
Cogulos a modo de tela de araa con pelculas suspendidas de la
superficie del lquido en meningitis tuberculosa.

EXAMEN BIOQUMICO
PROTENAS
El LCR contiene muy pocas protenas en relacin al plasma (14 -45 mg/100
ml),
siendo las principales:
Protenas Plasma (mg/l) LCR (mg /l)
Prealbmina 238 17.3
Albmina 36600 236
Transferrina 2040 142
Ig G 9870 802
Ig A 1750 1346
Fibringeno 2960 4940
Beta-lipoprotena 3726 6213
Albminas -> prealbminas -> globulinas.
Un aumento en la concentracin de protenas del LCR puede estar causada
por:

Aumento en la permeabilidad de la barrera hematoenceflica por

inflamacin.
Meningitis purulenta.
Meningitis graves.
Caso de esclerosis mltiple u otras enfermedades degenerativas del SNC.
Alteraciones endocrinas, metablicas, etc.
Aumento de la sntesis de protenas en el SNC.
A) Protenas totales:
Los mtodos utilizados para medir las protenas totales en LCR se clasifican
en:
a) Procedimientos turbidimtricos.
cido sulfosaliclico ms sulfato sdico (SAS).
cido tricloroactico (TCA).
b) Espectrofotometra ultravioleta a 210 nm despus de:
Cromatografa en columna.
Ultra centrifugacin.
c) Mtodo de Lowry utilizando el reactivo de Folin-ciocalteau.
Con blanco.
Sin blanco.
d) Procedimientos modificados del Biuret con medicin a 330 nm.
e) Fijacin de colorante.
Ponceau.
Otros colorantes.
f) Mtodos inmunolgicos.
a) Procedimientos turbidimtricos:

Son muy utilizados, en ellos hay que controlar concienzudamente la

temperatura,
pues existe relacin lineal entre temperatura y turbidez, y la alteracin de la
primera dara resultados poco fiables. Son sencillos, pero se necesitan 500
microlitros de LCR, frente a los 25 - 200 microlitros necesarios para otros
mtodos. Presentan interferencias en la xantocroma.
b) La espectrofotometra ultravioleta a 210 nm se basa en que las protenas
presentan absorbancia intensa entre 210 y 220 nm. Su precisin es mayor que
la
de los mtodos turbidimtricos.
c) El mtodo de Lowry con el reactivo de Folin, se utiliza mucho y tiene dos
fases:
1. Reaccin entre las protenas y el cobre.
2. Reduccin de los cidos fonsfotnsgico y fosfomolbdico, con el complejo
protenas-cobre.
Es un mtodo ms largo de realizar que los mtodos turbidimtricos y presenta
interferencias derivadas de los fenoles.
d) Procedimientos modificados del Biuret.
Son ms largos y difciles que los turbidimtricos y presentan interferencias
derivadas de polipptidos de cadena corta.
f) Mtodos inmunolgicos.
Son mtodos simples y rpidos. Un aumento sensible en la concentracin de
protenas totales indica hiperreactividad capilar (inflamacin, neoplasia,
diabetes..., etc.). Un aumento en la concentracin de las globulinas puede
indicar
plasmocitoma del SNC o esclerosis mltiple.
B) Glucosa

Los valores normales de glucosa en LCR son de 40 - 80 mg/dl (50% - 80% de

la
concentracin en sangre, con pacientes en ayunas).

TEMARIO DE T.E.L.
Federacin de Sanidad de Andaluca
Pgina 37 de 287

Una disminucin de los niveles de glucosa puede indicar meningitis purulenta,

abscesos cerebrales, tumores, etc.
La determinacin de la glucosa en LCR se puede hacer por los mtodos
espectrofotomtricos de:
Folin Wu.
Glucosa-oxidasa.
Ortotoluidina.
C) Enzimas
En LCR estn presentes muchas enzimas (GOT, GPT, etc.), pero solo la LDH
(lactato deshidrogenasa) parece clnicamente til. La LDH aumenta en los
siguientes casos:
Leucemia.
Hemorragia subaracnoidea.
Meningitis bacteriana.
Tumores del SNC.

CITOLOGA
EXAMEN MICROSCPICO
El LCR apenas presenta clulas, suele ser normal:
En adulto, de 0 a 0.5 clulas mononucleadas (linfo y monocitos) por mm 3.

En nio de 0 a 30.
La presencia de hemates suele ser anormal.
RECUENTO CELULAR
Debe efectuarse antes de 1 hora tras la extraccin. Se deben rechazar las
muestras con sangre a simple vista.
Para el recuento se utiliza una cmara cuentaglbulos como la de Neubauer.
Un
aumento anormal de clulas se llama pleocitosis y es causada por tumores
cerebrales, meningitis tuberculosa, etc.
CITODIAGNSTICO
Recuento diferencial:
El primer paso de un recuento diferencial de LCR es concentrar los leucocitos a
travs de distintas tcnicas como:
Centrifugacin, con tincin de Wright del sedimento resuspendido
(tambin con May-Grumwald-Giemsa).
Filtracin con Millipore o Nucleopore, etc.
El paso siguiente consiste en observar al microscopio (100X), contar las clulas
y clasificarlas en; linfocitos neutrfilos, segmentados, clulas endoteliales, etc.,
expresando su concentracin en porcentaje.
Los valores normales suelen ser:
Tipo celular Adulto Recin nacido
Linfocitos 62% 20%
Clulas mesoteliales
y monocitos
36% 72%

Neutrfilos 2% 3%
Histocitos raros raros
Eosinfilos raros raros
En las meningitis purulentas aumenta el nmero de neutrfilos segmentados.
En
las pielonefritis agudas, primero aumento el nmero de neutrfilos y despus el
de linfocitos pequeos.

LIQUIDO SINOVIAL
FUNCIN, RECOGIDA DE MUESTRAS Y MANIPULACIN
Es un ultrafiltrado del plasma al que se une el cido hialurnico, elaborado por
las clulas de la membrana sinovial. Proporciona lubricacin y nutrientes a las
clulas cartilaginosas de la articulacin.
Normalmente la cantidad es de 3-4 ml a no ser que exista derrame,
enfermedad,
etc.
La tcnica de extraccin se denomina artrocentesis y consiste en aspirar
percutneamente todo el lquido de la cavidad sinovial, mediante jeringa de
plstico estril.
El paciente preferentemente estar en ayunas 6-2 horas antes (importante para
los niveles de glucosa). Puede dar informacin sobre:
Sospecha de infeccin (artritis supurativa).
Artritis por cido rico (gota).
Artritis por pirofosfato clcico (pseudogota, etc).
Tubo 1, para serologa:
De 5-10 ml sin anticoagulante.
Centrifugar y usar sobrenadante.

Tubo 2, para bacteriologa:

Sin anticoagulante.
Si se sospecha infeccin por gonococos, sembrar directamente en
Tayer-Martin.
Tubo 3, para citologa/ bioqumica:
Usar heparina como anticoagulante (25 U/ml).
No deben formarse cogulos, si los hay indica tardanza o mala ejecucin
del mezclado.
Puede conservarse a -4 C, para analizar inmediatamente y a -70 C para
serologa.
El examen habitual del lquido sinovial incluye:
Determinacin de su aspecto.
Resultados de la prueba del cogulo de mucina.
Estudio microscpico con luz polarizada compensada.
Tincin de Gram.
Cultivo.
Nivel de glucosa.
Ninguna de estas pruebas, excepto la tincin de Gram y la identificacin de
cristales, puede considerarse altamente especfica para determinar el tipo de
artritis.
EXAMEN MACROSCPICO
El aspecto normal del lquido sinovial es transparente y de color amarillo plido.
La turbidez sugiere inflamacin, aunque no necesariamente.
PRUEBA DEL COGULO DE MUCINA
Sirve para calcular la viscosidad, consiste en colocar una gota del lquido sobre

el dedo pulgar y tocar con otro dedo de la mano. Al separar los dedos, el lquido
debe formar un hilo de 4-6 cm. de longitud. Si el hilo se rompe antes de 3 cm..,
debe considerarse viscosidad menor de la normal.
CITOLOGA
RECUENTO CELULAR DE LEUCOCITOS
Puede hacerse con hemocitmetro, o en cmara de Fuchs-Rosenthal.
Para microscopio ptico normal utilizar diluyente con 0.1% de azul de
metileno (facilita el reconocimiento de leucocitos).
Para microscopio de contraste de fase no es necesario colorante.
Si el lquido aparece muy manchado de sangre, es necesario lisar los
eritrocitos previamente.
Son valores normales:
100.000 leucocitos /microlitro.
Valores normales indican infeccin bacteriana normalmente.
RECUENTO DIFERENCIAL
Para calcular el porcentaje de neutrfilos puede utilizarse:
Tincin de Wright (sin concentrar).
Tincin de Wright del sedimento centrifugado.
Tincin de Wright del lquido concentrado por citocentrifugacin (previa
tincin de Papanicolau)
La tcnica microscpica elegida casi siempre es la de contraste de fase.
Cuando
se dan los resultados de un recuento diferencial, habitualmente solo se hace
mencin al porcentaje de neutrfilos.
El valor normal de estos suele ser del 25%. Un porcentaje muy alto (90% o
ms)

es indicativo de artritis bacteriana.

Morfologa celular:
Clulas AR; son neutrfilos en cuyo citoplasma aparecen, tanto en
microscopia ptica, como de fase, pequeos grnulos (de 10 a 20)
citoplasmticos oscuros con dimetro entre 0.5 y 2 micras. Los grnulos
pueden identificarse claramente con contraste de fase o inmersin en
aceite, y puede ser demostrada su presencia con tcnicas de
inmunofluorescencia. Aparecen en artritis reumatoide, gota y artritis
sptica.
Clulas LE; en el Lupus Eritematoso, aparecen en lquido sinovial unas
clulas de caractersticas particulares denominadas clulas LE.
Grandes clulas histiocticas con inclusiones citoplasmticas, aparecen al
teir con Giemsa y con Papanicolau en el sndrome de Reiter.
Clulas cartilaginosas multinucleares; se presentan en la osteoartritis,
para identificarlas se tie con Papanicolau.
Cristales; se han descrito 4 tipos asociados a las siguientes enfermedades:
Artritis cristales de apatita
Gota cristales de urato monosdico dentro de los neutrfilos y
macrfagos durante el ataque de gota, y fuera de ellos en
poca de no ataque
Pseudogota cristales de dehidrato de pirofosfato clcico
Artritis
crnica
cristales de dehidrato de talco (introducidos en una
intervencin quirrgica)

EXAMEN BIOQUMICO. INTERVALOS DE REFERENCIA DEL LQUIDO

SINOVIAL.
Lquido Sinovial Plasma
Protenas 1-3gr/dl 6-8 gr/dl
Albmina 55-70% 50-65%
Alfa-globulina 5-7% 3-5%
Beta-globulina 8-10% 8-14%
Gamma-globulina 10-14% 12-22%
Glucosa 70-110 mg/dl 70-110 mg/dl
PH 7.3-7.4 7.38-7.44 arterial
7.36-7.42 venoso
Las protenas presentes en lquido sinovial dependen de las presentes en
plasma. Si aumenta el nivel de protenas en plasma, tambin lo hace en el
lquido sinovial.
La concentracin de una protena especfica se expresa normalmente como
cociente lquido sinovial/plasma.
La glucosa en plasma y en lquido sinovial presenta valores muy similares. Es
importante obtener la muestra en ayuno de 6 a 12 horas.
Tambin se presentan enzimas como la fosfatasa cida, LDH y transaminasas,
pero su determinacin parece tener escaso valor clnico.
La determinacin de pH y de lactato proporciona un ndice til de la
inflamacin,
pero es inespecfico de la etiologa.