UNIVERSIDAD AUTNOMA BENITO JUREZ DE OAXACA

FACULTAD DE CIENCIAS QUMICAS

MANUAL DE PRCTICAS DE LABORATORIO

CARRERA

PLAN DE ESTUDIOS

QFB

2009

PRCTICA
NMERO

CLAVE DE LA
ASIGNATURA

NOMBRE DE LA ASIGNATURA

INMUNOLOGA
NOMBRE DE LA PRCTICA

FECHA Y
DURACIN

6
Factor Reumatoideo y Protena C Reactiva
1 sesin
1
INTRODUCCIN
Los factores reumatoideos (FR) son autoanticuerpos antifragmento Fc de la IgG que dan lugar a la
formacin de inmunocomplejos capaces de fijar complemento y de actuar sobre las membranas
celulares, la pared vascular y la sinovial. Provocan alteraciones (aumento de la permeabilidad y
reacciones inflamatorias) que finalmente, conducen a la destruccin de la membrana sinovial, cartlago y
hueso. Son anticuerpos contra antgenos no especficos de rgano que puede encontrarse en suero y en
lquido sinovial. Se postula que su aparicin puede deberse a factores genticos, persistencia de
antgenos heterlogos y a la modificacin de una inmunoglobulina IgG con especificidad a un
determinado antgeno. La unin con este antgeno provocara un cambio conformacional en su
estructura que hace que sea reconocida como extraa por el sistema inmune. Tienen distinto tamao
molecular y distinta especificidad.
La Protena C Reactiva (PCR) es una protena de fase aguda que aumenta en el suero resultado de la
liberacin de interleuquina 6. Indica presencia de inflamacin pero algunos tumores malignos como
enfermedad de Hodgkin y carcinoma renal pueden producir IL-6 que inducen una respuesta de fase
aguda, con fiebre y altas concentraciones de PCR. Es una protena no glicosilada de sntesis heptica,
la sntesis extraheptica no contribuye a los niveles en suero. La sntesis normal diaria es de 1-10
mg/da incrementando a 1 gr/ da en casos de inflamacin aguda. La vida media en circulacin es de 19
horas. La funcin biolgica es la unir una gran cantidad de sustancias endgenas y exgenas y su
remocin de la sangre y los tejidos por opsonizacin.
2
OBJETIVOS
Determinar mediante un mtodo de aglutinacin con ltex la presencia de Factor Reumatoideo y
Protena C Reactiva como auxiliares en el diagnstico de transtornos inflamatorios.
3
FUNDAMENTO
Factor Reumatoideo en ltex: es una prueba rpida de aglutinacin basada en una modificacin de la
tcnica de Singer, para la deteccin directa y la semicuantificacin en placa de los factores
reumatoideos (FR) presentes en el suero. La determinacin se efecta ensayando una suspensin de
partculas de ltex recubiertos con gamma globulina humana frente a los sueros problema. La presencia
o ausencia de aglutinacin visible es indicativa de la presencia o ausencia de FR en las muestras
ensayadas.
Protena C Reactiva en ltex: es una prueba rpida de aglutinacin en placa basada en la tcnica de
Singer, para la deteccin directa y la semicuantificacin de la protena C-reactiva (PCR) en suero.
La determinacin se efecta ensayando una suspensin de ltex recubierto con anticuerpos anti-PCR,
frente a los sueros problema. La presencia de aglutinacin es indicativa de un aumento del nivel de PCR
por encima del lmite superior del intervalo de referencia de las muestras ensayadas

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A

PROCEDIMIENTO
EQUIPO, MATERIAL Y REACTIVOS NECESARIOS

MATERIAL DE APOYO
Material comn de laboratorio.

REACTIVOS:

Reactivo de ltex-Factor Reumatoideo

Reactivo de ltex-Protena C reactiva
Solucin amortiguadora de glicina-cloruro de sodio pH 8.2
Solucin salina isotnica

MATERIALES:

Placa serolgica de fondo oscuro

Aplicadores de madera
Tubos para toma mltiple sin anticoagulante con gel
separador
Agujas para venopuncin
Torniquete
Torundas de algodn

MATERIAL BIOLGICO:

Suero de paciente.

APARATOS E INSTRUMENTOS

Centrfuga.
Pipetas automticas de volumen variable 10 a 100 uL

B
DESARROLLO DE LA PRCTICA
PREPARACIN DE LAS MUESTRA BIOLGICA.
1. Extraccin de una muestra de sangre venosa.
a. Realizar la extraccin de una muestra de sangre total por puncin venosa en un tubo sin
anticoagulante.
b. Esperar 15 minutos para que la muestra coagule completamente.
c. Centrifugar la muestra para obtener el suero durante 5 minutos a 2500 r.p.m.
d. Concluido el proceso de centrifugacin verificar que el gel separador se encuentre entre
las dos fases de la sangre total y que el suero sea transparente y no presente hemlisis.
PROCEDIMIENTO.
Factor Reumatoideo (FR). Por el mtodo de aglutinacin en latex en placa, utiliza una suspensin
estabilizada de partculas de latex sensibilizadas con IgG humana.
1. El suero se inactiva previamente calentando en bao serolgico a 56C por 15 min o 60C por 1
min. Ya inactivado se diluye 1:20 con amortiguador de glicina-cloruro de sodio colocando 0.1 ml
de suero y 1.9 ml del amortiguador.
2. Se coloca una gota de la dilucin en la placa de vidrio oscura y se aade una gota del reactivo

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ltex-FR.
3. Se mezcla y se agita suavemente con movimientos rotatorios durante dos minutos.
4. Se busca la aglutinacin macroscpica.
5. La prueba semicuantitativa utiliza diluciones del suero 1/20, 1/40, 1/80, 1/160, 1/320 y 1/640, las
cuales se preparan con 0.5 ml de la dilucin 1/20 en 0.5 ml del amortiguador para una dilucin
1/40 y as consecutivamente.
Protena C Reactiva (PCR). Por el mtodo de aglutinacin en ltex en placa. Utiliza una suspensin
acuosa de partculas de ltex recubiertas de anticuerpos especficos anti- Protena C Reactiva.
1. El suero problema se diluye 1/5, 1/40 con solucin salina isotnica y se coloca una gota de la
dilucin en una placa de vidrio oscuro.
2. Se aade una gota del reactivo ltex-PCR se mezcla bien y se agita suavemente con movimientos
rotatorios por 3 min.
3. Se busca la aglutinacin macroscpica.
4. La prueba semicuantitativa utiliza diluciones del suero a partir de 1/80.

C
EXPRESIN DE RESULTADOS E INFORME DE LA PRUEBA.
Los resultados se expresarn de acuerdo a la ltima dilucin donde se observe aglutinacin
macroscpica.

5
INTERPRETACIN Y CONCLUSIONES
Se elaboraran de acuerdo a los resultados obtenidos y la importancia diagnstica de las pruebas.
6
ANEXOS
CUESTIONARIO.
1. Por qu se inactiva el suero?
2. Explique el fundamento de cada una de las pruebas.
3. Explique el significado clnico de una prueba FR positiva y el de una PCR positiva

REFERENCIAS
LotharT. Clinical Laboratory Diagnostics: Use and assessment of clinical laboratory results, English edition, 1998.
Mandel, Bennett and Dolin. Enfermedades infecciosas principios y prcticas. Editorial Panamericana, 4 edicin; Madrid,
Espaa. Ao 1997
Tietz N. W. Clinical Guide to Laboratory test, edited by W.B. Saunders Company, third edition, United States of America,1995.

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MECANISMO DE EVALUACIN
Puntualidad y asistencia
40%
Bitcora
20%
Reporte
20%
Conocimientos previos
20%
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MEDIDAS DE SEGURIDAD Y SALUD OCUPACIONAL

1. Se deber utilizar antifaz de seguridad.

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2. Se deber tener el cuidado respectivo al manejo de material a altas temperaturas, materiales

corrosivos y txicos.
3. Al pesar o medir reactivos evite tirarlo o derramarlos en el sitio donde se encuentre, en caso de
hacerlo limpiar perfectamente el lugar.
4. Al medir las muestras biolgicas evite tirarlas o derramarlas y sigue los procedimientos
generales de manipulacin para evitar cualquier riesgo biolgico.
5. Cubrir las medidas de seguridad bsicas para el laboratorio.
En caso de accidente (por pequeo que este sea) debe comunicarse de inmediato al maestro
responsable del laboratorio.
10

DISPOSICIN DE DESECHOS QUMICOS, FSICOS Y BIOLGICOS.

1. Los recipientes que tengan residuos de naturaleza lipdica, se limpiarn con papel absorbente
antes de lavarlos en la tarja y estos papeles se tirarn en el bote de basura del laboratorio.
2. Los residuos de origen orgnico se tiraran en el bote de basura respectivo.
3. Los RPBI se desecharn en los contenedores destinados para ello.