Laboratorio de Inmunohistoquímica2015

Laboratorio de Inmunohistoqumica:
Creado recientemente en las

instalaciones de la ctedra, esta
laboratorio est equipado para la
realizacin de tcnicas bsicas
de Inmunohisto-qumica, las
cuales se desarrollan en el
marco de proyectos de
investigacin elaborados tanto
por los estudiantes de pregrado
como por los profesores de la
unidad acadmica.
Se presta asesora tcnica a
otras dependencias de la
universidad.
Importancia de la Inmunohistoqumica
Como tcnica de laboratorio la Inmunohistoqumica es de vital importancia para el marcaje
selectivo de protenas y otros elementos que pueden estar presentes, tanto en las membranas
celulares, citoplasma, y dems compartimientos citoplsmicos, as como tambin en la
matriz extracelular.
Es de gran utilidad en la identificacin de las estirpes celulares de los tejidos bsicos, de
receptores de membranas, protenas citoslicas, y de cualquier otra estructura para la cual
se halla desarrollado un anticuerpo especfico. Su aplicacin es de indiscutible valor en
anatoma patolgica en el diagnstico de lesiones tumorales y su pronstico y en la
investigavin en general, sobre todo en la definicin del inmunofenotipo de las clulas de
los tejidos.
Es un proceso de numerosos pasos que requiere de un entrenamiento especializado sobre
todo en el procesamiento de los tejidos, la seleccin de todos y cada uno de los reactivos
necesarios apropiados, y lo ms importante: la interpretacin de los inmunomarcajes en las
preparaciones histolgicas.
Fundamento:
La tcnica de Inmunohistoqumica se fundamenta en la reaccin Antgeno - Anticuerpo.

El anticuerpo es el reactivo fundamental y la disponibilidad de antisueros, fracciones de
inmunoglobulinas y anticuerpos monoclonales que permiten marcar antgenos celulares y
tisulares es cada vez mayor.
Los anticuerpos pertenecen a un grupo de protenas denominadas Inmunoglobulinas,
presentes en cinco clases y sintetizadas por clulas conocidas como Plasmocitos, que no
son mas que un ltimo grado de diferenciacin de los linfocitos B.
Loa anticuerpos monoclonales son producidos por un clon indiccidual de plasmocitos,
mientras que los anticuerpos policlonales son producidos por diferentes plasmocitos y en
consecuencia pueden reaccionar con varios fragmentos del antgeno para el que fueron
creados. El animal ms utilizado para la produccin de anticuerpos policlonales es el
conejo, seguido por la cabra, oveja, caballo, entre otros. Para los anticuerpos monoclonales,
el animal de eleccin es el ratn, tal vez por motivos econmicos.
La reaccin antgeno - anticuerpo en la tcnica inmunohistoqumica es incolora y para
hacerla evidente, se utilizan algunos mtodos como la fluorescencia, las reacciones enzimasustrato que convierte al cromgenosin color en un compuesto coloreado que permite
identificar el lugar donde se depositaron los anticuerpos utilizados.
Ficha tcnica del inmunomarcaje indirecto con amplificacin peroxidasa-dab

PROTOCOLO PARA LA TCNICA DE INMUNOPEROXIDASA
Para tejidos incluidos en parafina
DESPARAFINAR:
Xilol: 2 x 5 c/u.
HIDRATACIN:
Alcohol 100%: 2 x 5 c/u.
Alcohol 95 %: 1 x 5
Alcohol 70 %: 1 x 5
Lavado en agua de chorro: 15
DESENMASCARAMIENTO ANTIGNICO:
Tratamiento al calor en olla de presin
Ebullicin en tampn citrato: 130

Enfriamiento a temperatura ambiente
BLOQUEO DE LA ACTIVIDAD DE PEROXIDASA ENDGENA:
Bao en PBS: 2 x 5
Eliminar exceso de lquido del preparado
Solucin de Perxido de Hidrgeno (KIT LSAB): 5
Bao en PBS: 2 x 5
INMUNOMARCAJE:
Bloqueo protico Solucin Bloqueadora DAKO: 10
Incubacin con el Anticuerpo Primario: 30
Bao PBS: 2 x 5
Incubacin con Anticuerpo Biotinilado (KIT): 10
Bao PBS: 1 x 5
Incubacin con Streptavidina-Peroxidasa (KIT): 10
Bao PBS: 1 x 5. Preparar solucin reveladora DAB
Revelacin con DAB (KIT): 10 aprox. (verificar revelacin)
Bao PBS: 1 x 5
Bao en agua destilada. Preparacin para la contracoloracin.
Contracoloracin con Hematoxilina de Mayer: de 30 a 1-2 (verificar coloracin)
Lavado con agua de chorro hasta obtener agua clara.
MONTAJE:
Proceder como de rutina (deshidratacin, xilol)
Montaje en medio permanente: Martex
Inmunomarcaje:
Anticuerpo Primario: Anti
Neurofilamentos
Contracoloracin: Hematoxilina
Resultados:
Clulas (neuronas):
-Soma y prolongaciones ( axones) en color
pardo oscuro de variada intensidad, en
relacin a la cantidad de neurofilamentos
presentes
- Ncleos: azul
Corteza cerebelosa de rata, objetivo 40X
1. El interfern-gamma :
1) es sintetizado por macrfagos.
2) induce a macrfagos a destruir bacterias de forma inespecfica.
3) induce a macrfagos a destruir bacterias de forma especfica.
4) inhibe la expresin de molculas de clase II del MHC.
5) induce a las clulas NK a ingerir bacterias.
2. La respuesta inmune mediada por clulas es :
1) favorecida por deplecin del complemento.
2) suprimida por cortisona.
3) favorecida por deplecin de clulas T.
4) suprimida por antihistaminas.
5) favorecida por la deplecin de macrfagos.
3. El principal factor soluble implicado en la multiplicacin de los linfocitos T
activados es :
1) interfern beta.
2) interfern alfa.
3) interleucina 1.
4) interleucina 2.
5) interleucina 4.
4. Las clulas NK :
1) slo actan frente a clulas infectadas por virus.
2) reconocen antgenos en el contexto de molculas del complejo principal de

histocompatibilidad.
3) son linfocitos granulares grandes.
4) poseen receptores antignicos similares a los de los linfocitos T.
5) no producen interfern gamma.
5. Los linfocitos T citotxicos reconocen :
1) el antgeno asociado a molculas de tipo I del complejo principal de histocompatibilidad.
2) el antgeno asociado a molculas de tipo II del complejo principal de
histocompatibilidad.
3) los polmeros de recubrimiento de los microorganismos.
4) las clulas afectadas por toxinas.
5) la fraccin constante de las inmunoglobulinas.
6. La molcula CD8 :
1) se expresa en linfocitos T cooperadores.
2) se expresa en linfocitos B memoria.
3) tiene homologa estructural con las inmunoglobulinas.
4) interacta con molculas de clase II del complejo principal de histocompatibilidad.
5) interacta parcialmente con el antgeno presentado.
7. Las clulas NK (Natural Killer) :
1) nicamente se encuentran en rganos linfoides.
2) nicamente se encuentran en sangre circulante.
3) pueden fagocitar partculas extraas.
4) son capaces de reconocer determinantes antignicos de clulas tumorales.
5) poseen memoria inmunolgica.
8. Los linfocitos CD8+ :
1) intervienen tpicamente en reacciones de hipersensibilidad inmediata.
2) reconocen antgenos en el contexto de molculas de clase II.
3) median reacciones de citotoxicidad.
4) estn funcionalmente inmaduros cuando abandonan el timo.
5) no aparecen en el tejido linfoide asociado a mucosas.
9. Los antgenos T-independientes se caracterizan por :
1) tener estructura polimrica.
2) ser molculas de bajo peso molecular.
3) ser mayoritariamente de naturaleza proteica.
4) inducir anticuerpos de alta afinidad.
5) ser buenos inductores de memoria inmunolgica.
10. Un suero policlonal obtenido tras repetida inmunizacin sistmica contendr
predominantemente:
1) anticuerpos IgA de tipo srico.
2) anticuerpos IgA monomricos.
3) anticuerpos IgG de baja afinidad.
4) anticuerpos IgG de alta afinidad.
5) anticuerpos IgM de alta afinidad.
11. Una de las funciones del interfern gamma es :
1) disminuir la actividad de las clulas T.
2) disminuir la actividad de las clulas NK.
3) promover la divisin de linfocitos B.
4) aumentar la secrecin de heparina por parte de los mastocitos.

5) inducir la expresin de molculas MHC de clase II sobre clulas histicas.
12. Todas las clulas presentadoras de antgeno se caracterizan por :
1) presentar receptores Fc.
2) expresar MHC clase II.
3) provenir de la serie monocito-macrofgica.
4) liberar interleuquina 1.
5) ninguna de las anteriores es correcta.
13. Una sustancia con capacidad de reaccionar con su anticuerpo especfico pero no de
inducir su sntesis es un :
1) antgeno conjugado.
2) inmungeno.
3) antgeno heterogentico.
4) hapteno.
5) adyuvante antignico.
14. Los anticuerpos anti-idiotipo se dirigen contra la regin :
1) constante de las cadenas pesadas.
2) constante de las cadenas ligeras.
3) variable de las cadenas pesadas y ligeras.
4) constante de las cadenas pesadas y ligeras.
5) 3) y 4) son ciertas.
15. Los monocitos/macrfagos :
1) carecen de sistemas bactericidas tipo oxigeno- dependiente.
2) carecen de peroxidasas e hidrolasas cidas.
3) tienen receptores para la Fc de la IgG y para factores del complemento.
4) tienen receptores para la Fc de la IgG, pero no para factores del complemento.
5) no son estimulados por las linfocinas de las clulas T.
16. Tpicamente, y en comparacin con la respuesta primaria, los anticuerpos de la
respuesta secundaria :
1) aparecen ms lentamente, pero perduran ms tiempo.
2) aparecen con mayor rapidez, pero no perduran ms tiempo.
3) aparecen rpidamente y no son de la clase IgM.
4) no son de la clase IgG.
5) aunque se produce IgM, son sobre todo de la clase IgG.
17. Cal de las siguientes afirmaciones es cierta para los linfocitos NK? :
1) presentan restriccin MHC clase I.
2) requieren clulas presentadoras de antgeno.
3) tienen receptores TCR.
4) son activados por IL-2.
5) presentan marcadores CD4 y CD8.
18. La interleucina 1 la producen :
1) monocitos y macrfagos activados.
2) linfocitos B en reposo.
3) linfocitos T activados.
4) todo tipo de clulas activadas.
5) ninguna de las anteriores.
19. Indique el factor de crecimiento ms importante para los linfocitos T :
1) interleucina 1.
2) interleucina 2.
3) interleucina 3.
4) interleucina 4.
5) interleucina 5.
20. Cal de estas molculas es producida principalmente por el linfocito T? :
1) interfern beta.
2) interleucina 1.
3) insulina.
4) interfern gamma.
21. Los linfocitos B, a diferencia de los T, no presentan :
1) reordenamientos cromosmicos.
2) receptores especficos de antgeno.
3) receptores de complemento.
4) restriccin por antgenos de histocompatibilidad.
5) clulas de memoria.
22. Cul de los siguientes compuestos no es un activador policlonal de linfocitos B? :
1) LPS (bacterias Gram negativas).
2) policitosina.
3) norepinefrina.
4) dextrano.
5) PPD (mycobacterium).
23. Las lectinas no son :
1) protenas oligomricas multivalentes.
2) de origen inmune.
3) de naturaleza no enzimtica.
4) estructuralmente diversas.
5) protenas con afinidad por mono y oligosacridos.
24. Indicar cul de las siguientes afirmaciones es falsa:
1) la transformacin blstica es un proceso de diferenciacin dependiente de antgeno que
ocurre en clulas T y B.
2) algunos antgenos pueden producir una respuesta de anticuerpo en clulas B sin
cooperacin de clulas T.
3) la respuesta de anticuerpos habitual a un nico antgeno es heterognea.
4) los genes que codifican las regiones V de los anticuerpos no estn ligados al MHC.
5) en presencia de antgeno, poblaciones T y B purificadas pueden cooperar, in vitro, para
dar una respuesta de linfocitos B.
25. En el humano, cul de los siguientes linfocitos tiene receptores para la aglutinina
de cacahuete (PNA)?:
1) citotxicos / supresores.
2) facilitadores.
3) timocitos.
4) responsables de la hipersensibilidad retardada.
5) ninguno.
26. Indicar cul de los siguientes productos son secretados por macrfagos :
1) proteasas neutras y a2-macroglobulina.
2) C1, C2 y C5.
3) leucotrienos y tromboxanos.
4) todos los anteriores.
5) ninguno de los anteriores.
27. La lisis resultante de la actividad NK se diferencia de la debida a linfocitos T
citotxicos en:
1) que ocurre solamente sobre clulas autlogas.
2) la ausencia de restriccin por el MHC.
3) los virus son sus elementos diana.
4) estar producidas por clulas plasmticas.
5) necesitar el concurso de anticuerpos especficos.
28. El interfern es producido por :
1) monocitos.
2) polimorfonucleares neutrfilos.
3) macrfagos alveolares.
4) linfocitos.
5) fibroblastos.
29. Los linfocitos B son menos abundantes que los T en los siguientes tejidos, excepto :
1) timo.
2) linfa.
3) sangre.
4) ndulos linfticos.
5) placas de Beyer.
30. Una respuesta inmunolgica timo-independiente se da generalmente cuando el
antgeno es :
1) insoluble en adyuvante.
2) un polisacrido con unidades (epitopos) repetitivos.
3) una protena.
4) un complejo hapteno-protena con grado de conjugacin bajo.
5) autlogo.
31. Los antgenos de clase I sirven de elementos de restriccin para :
1) linfocitos T citotxicos.
2) linfocitos T auxiliares.
3) linfocitos B.
4) linfocitos T supresores.
5) clulas responsables de la actividad NK.
32. El termino apoptosis se referencia a:
1) un programa de muerte celular inducido por una seal recibida en la membrana
citoplasmtica.
2) citolisis causada por perforinas o complemento.
3) necrosis tisular por isquemia.
4) muerte celular debido a proteasas y radicales oxidantes liberados por macrfagos
tumoricidas.
5) activacin celular y proliferacin en respuesta a citokinas.
33. La maduracin de la afinidad de los Ac significa que:
1) aparecen mutaciones en el DNA que codifican las regiones constantes de las
inmunoglobulinas.
2) la afinidad es mayor en las respuestas primarias que en las secundarias.

3) la afinidad aumenta con la estimulacin antignica.
4) un linfocito B que expresa la cadena kappa pasa a expresar la lambda.
5) cuando se estimula un linfocito B, puede expresar el segunda alelo parental del gen de
las inmunoglobulinas, que estaba mudo.
34. Son capaces de ejercer actividad citotxica dependiente de Ac (ADCC) los:
1) eritrocitos.
2) plaquetas.
3) linfocitos B.
4) macrfagos.
5) clulas endoteliales.
35. La respuesta humoral T dependiente se caracteriza por:
1) no generar memoria celular.
2) no generar una maduracin de la afinidad.
3) responder a antgenos lipdicos.
4) responder a antgenos carbohidratados.
5) provocar el cambio de isotipo de IgM a otros isotipos.
36. Los linfocitos B son menos abundantes que los T en los siguientes tejidos, excepto :
1) timo.
2) linfa.
3) sangre.
4) ndulos linfticos.
5) placas de Peyer.
37. En relacin con la inmunogenicidad de los antgenos, seale la afirmacin FALSA.
1) un antgeno es una sustancia inmungena con especificidad antignica.
2) todos los antgenos son sustancias proteicas.
3) los haptenos son molculas de bajo peso molecular con especificidad antignica pero sin
poder inmungeno.
4) la inmnopotencia es la capacidad de una zona de un antgeno para servir como
determinante antignico o eptope.
5) un antgeno posee en su estructura varios eptopes.
38. Respecto a los marcadores de las clulas B, seale la afirmacin FALSA.
1) las clulas plasmticas no expresan HLA-DR.
2) CD 19 y CD 20 son panB.
3) CD21 es el receptor del VEB (virus de Epstein-Barr).
4) CD3 es tpico de las clulas plasmticas.
5) CD54 (ICAM-1 o rec.LFA-1) es tpico del linfocito B activado.
39. A qu marcador de superficie est asociado el TCR? :
1) CD 2.
2) CD 3.
3) CD 7.
4) CD 21.
5) CD 4.
40. Cul de estas NO es una caracterstica de un macrofago totalmente activado?
1) bactericida.
2) tumoricida.
3) presentacin del antgeno.
4) proliferacin.
5) fagocitosis.
41. Cul de estos mitgenos estimula la produccin de linfocitos B? :
1) concanavalina A.
2) anti-CD3.
3) lipopolisacrido gram.
4) fitohemaglutinina.
5) TNF (factor de necrosis tumoral).
42. Qu marcador o receptor de estos es tpico de linfocitos T y B activados?:
1) CD 2.
2) CD 3.
3) Rec. IL-2 (CD 25).
4) Rec. FcIgG.
5) CD 23.
43. En relacin con la clasificacin de los linfocitos helper Th en dos subpoblaciones
segn su produccin de linfocinas, seale la afirmacin FALSA :
1) los Th1 producen Il-2.
2) los Th2 producen IL-4, Il-5 y IL-6.
3) los Th1 regulan la respuesta humoral.
4) los Th2 no producen IFN gamma.
5) son dos subpoblaciones mutuamente excluyentes.
44. En funcin del antgeno, la respuesta humoral puede ser T-dependiente o Tindependiente. Cul de estas NO es una caracterstica de la respuesta Tindependiente?
1) es simple y repetitiva.
2) genera memoria.
3) depende mucho de la dosis.
4) respuesta primaria de IgM.
5) respuesta secundaria de IgM.
45. Respecto a la respuesta inmune celular, seale la afirmacin FALSA.
1) la citotoxicidad celular especfica contra Ags convencionales es mediada por linfocitos
Tc asesinos citotxicos que reconocen determinantes antignicos presentados en la
superficie celular de una clula presentadora asociados a la molcula de clase HLA-I.
2) la fagocitosis es una forma de citotoxicidad celular inespecfica y sin restriccin.
3) la citotoxicidad celular inespecfica se caracteriza por la restriccin HLA-II.
4) las clulas NK (natural killer) se unen a un determinante desconocido destruyendo la
clulas mediante una perforina, siendo el proceso favorecido por la IL-2 y el IFN gamma.
5) la citotoxicidad celular dependiente de anticuerpos (CCDA) se debe a las clulas K, que
reconocen la fraccin Fc de la IgG opsonizando determinantes antignicos en las clulas
que destruyen.
46. La IL-2 es producida por :
1) linfocitos B activados.
2) linfocitos T helper (Th1).
3) macrfagos activados.
4) clulas plasmticas.
5) osteoclastos.
47. Una de estos INFs o interferones es producido sobre todo en los linfocitos T.
Sealelo.
1) IFN alfa.
2) IFN beta.
3) IFN gamma.
4) IFN delta.
5) IFN epsiln.
48. Las clulas T y B difieren en ciertas formas de su activacin y ser til conocer los
marcadores de superficie que reflejan las distintas formas por las que pueden
comunicar con los medios extracelulares. La diferencia ms clara se establece con
reactivos que reconocen receptores antignicos:
1) anti-CD3 (T3) en las T y antiinmunoglobulina en las B.
2) rosetas con hemates de carnero que slo ocurre en las B.
3) anti-CD3 (B3) en las B y antiinmunoglobulina en las T.
4) antiinmunoglobulina G en las T y no en las B.
5) antiinmunoglobulina G en las T y A en las B.
49. Los antgenos T-dependientes:
1) no requieren clulas T cooperadoras para inducir una respuesta de anticuerpos.
2) son estructuralmente ms simples que los antgenos T-independientes.
3) inducen fundamentalmente respuesta mediada por IgM.
4) producen una elevada respuesta a una segunda exposicin al antgeno.
5) producen una dbil respuesta a una segunda exposicin al antgeno.
50. Cuales de las siguientes caractersticas se pueden atribuir a las clulas T
citotxicas:
1) intervienen en mecanismos de citotoxicidad mediada por clulas dependiente de
anticuerpo.
2) no requieren para ejercer su funcin el contacto con la clula diana.
3) son clulas presentadoras de antgeno.
4) la mayora son CD4+, y reconocen pptidos antignicos asociados a molculas de
histocompatibilidad de clase II.
5) la mayora son CD8+, y reconocen pptidos antignicos asociados a molculas de
histocompatibilidad de clase I.
51. Cul de las siguientes afirmaciones sobre los haptenos es FALSA?
1) reaccionan con anticuerpos.
2) estimulan la sntesis de anticuerpos.
3) son molculas pequeas.
4) no estimulan la sntesis de anticuerpos.
5) si se unen a antgenos se convierten en determinantes antignicos.
52. Cules de las siguientes caractersticas corresponden a la interleucina 1 (IL1) ? :
1) capacidad mitognica limitada y pirognica.
2) accin fagocitaria.
3) capacidad de activacin del Complemento (C)
4) induccin de estados antivricos.
5) induccin de la diferenciacin de linfocitos B en clulas plasmticas.
53. Cul de las siguientes linfoquinas es responsable de la activacin de
macrfagos? :
1) interleuquina 4.
2) interleuquina 2.
3) factor de reaccin drmica.
4) linfotoxina.
5) interfern gamma.
54. El cambio de IgM a IgG durante una respuesta de anticuerpos supone que:
1) intervienen dos clones distintos de clulas B, uno para producir IgM y otro para producir
IgG.
2) las clulas B pertenecientes a un mismo clon pueden cambiar el tipo de cadena ligera del
anticuerpo que producen.
3) las clulas B han experimentado una activacin policlonal.
4) las clulas B de un mismo clon pueden cambiar la clase de inmunoglobulina que
producen sin cambiar las regiones variables.
5) la respuesta va necesariamente dirigida frente a dos antgenos distintos.
55. Las clulas T supresoras:
1) son capaces de potenciar a otras subpoblaciones de clulas T y a las clulas B.
2) son las que permiten que se produzca IgG, suprimiendo la produccin de IgM.
3) poseen los mismos marcadores de superficie que las clulas cooperadoras y las de
hipersensibilidad retardada.
4) son capaces de producir tanto supresin especfica de antgenos como supresin
inespecfica.
5) siempre estn restringidas por el Complejo Principal de Histocompatibilidad (MHC).
56. Cul de las siguientes afirmaciones en relacin con la respuesta inmunitaria no es
cierta?:
1) la sntesis y secrecin de anticuerpos corresponde a los linfocitos B.
2) la respuesta inmunitaria se suele iniciar con la produccin de IgM que posteriormente da
paso a la formacin de IgG.
3) todo antgeno selecciona y estimula a un nico clon de linfocitos B, el que reconoce a su
nico determinante antignico.
4) la cooperacin de linfocitos T no siempre es necesaria porque existen antgenos Tindependientes.
5) los coadyuvantes provocan una estimulacin general e inespecfica de la respuesta
inmunitaria.
57. Un clon de linfocitos B slo puede segregar Ac que:
1) pertenezcan a la misma clase de Ig.
2) tengan el mismo idiotipo an cuando pueden pertenecer a ms de una clase de Ig.
3) pertenezcan a diferente clase de Ig y tengan distintos idiotipos.
4) reaccionen con determinantes antignicos distintos pero de un mismo Ag.
5) ninguna de las anteriores es cierta.
58. La molcula CD2:
1) se encuentra presente exclusivamente en los linfocitos T.
2) es Rc para los eritrocitos de conejo.
3) uno de sus ligandos naturales es la molcula CD58.
4) es el Rc citotxico de las clulas NK.
5) ninguna de las anteriores es correctas.
59. Cul de las molculas de superficie no es un marcador de linfocitos B?:
1) CD1.
2) IgM.
3) CD5.
4) Rc para componentes del complemento.
5) Rc para el fragmento Fc de la IgG tipo II (CD32).
60. Respecto a los LGL es falso que:
1) constituyen un 5-10 % de los linfocitos de sangre perifrica.
2) son clulas con capacidad fagocitaria.
3) presenta Rc para la fraccin Fc de la IgG.
4) responden a la IL-2.
5) median la inmunidad de tipo NK.
61. Cul de las siguientes citokinas no es producida por el SMF?:
1) IL1.
2) IL2.
3) IL6.
4) TNF.
5) TNF-beta.
62. Cul de las siguientes citokinas no es producida por los linfocitos T normales?:
1) IL1.
2) IL2.
3) IL3.
4) TNF.
5) 1 y 4.
63. Cul de las siguientes no es un efecto del TNF?:
1) induccin de la sntesis de IL1.
2) induccin de la sntesis heptica de reactantes de fase aguda.
3) induccin de la expresin de HLA-I y II.
4) participacin en los mecanismos del shock sptico.
5) induccin de la sntesis de la lipoprotein lipasa.
64. Cul de las siguientes molculas no representa un Ag de activacin linfocitaria?:
1) CD4.
2) HLA-II.
3) Rc de transferrina.
4) Rc de alta afinidad para la IL-2.
5) CD38.
65. Respecto a la IL1 es falso que:
1) existen dos tipos de IL1, alfa y beta con sus correspondientes Rc.
2) induce la sntesis de otras citokinas como IL6 y TNF.
3) los linfocitos T y B en reposo expresan Rc para la IL1.
4) induce la expresin del Rc de IL2 de alta afinidad en los linfocitos T.
5) tiene efecto pirgeno.
66. Respecto el Rc de IL2 es falso:
1) el Rc de alta afinidad est constituida por una cadena alfa y otra beta.
2) los Rc de baja afinidad estn constituidos por un homodimero beta.
3) los Rc de afinidad intermedia estn constituidos por un homodimero alfa.
4) los linfocitos T en reposo expresan en baja concentracin el Rc de alta afinidad.
5) las clulas NK en reposo expresan preferentemente el Rc de afinidad intermedia.
67. Cul de los siguientes elementos no est implicado en la activacin de los
linfocitos B por Ag T-independientes?:
1) IL1.
2) el contacto con el Ag soluble.
3) IL4.
4) las CPA.
5) IL6.
68. Con respecto a los mecanismos de citotoxicidad mediados por clulas, seale la
respuesta correcta.
1) las clulas T citotxicas reconocen el Ag en el contesto de HLA-I.
2) la citotoxicidad mediada por clulas NK es debida a la interaccin entre un Rc especfico
de las mismas y determinantes antignicos tumorales.
3) la inmunidad de tipo ADCC es mediada por clulas que expresan el Rc FC para la IgG y
que reconocen los Ac unidos al Ag extrao en la superficie de las clulas infectadas.
4) todas las anteriores son correctas.
5) slo 1 y 3 son correctas.
69. Las clulas T producen y secretan unos polipeptidos que se denominan:
1) haptenos.
2) opsoninas.
3) anticuerpos.
4) complemento.
5) linfokinas.
70. De las siguientes afirmaciones sobre las clulas NK indique cuales son incorrectas:
1) son capaces de destruir algunas clulas tumorales.
2) la lisis mediada por estas clulas no est restringida por el MHC.
3) expresan en superficie el TCR.
4) la lisis mediada por estas clulas est restringida por el MHC.
5) los mecanismos de lisis mediados por estas clulas son similares a los de los linfocitos T
citotxicos (CTLs).
71. En la inmunidad celular, la activacin de macrfagos es debida a citocinas
liberadas por:
1) macrfagos.
2) clulas B.
3) clulas de Langerhans.
4) clulas Th2.
5) clulas Th1.
72. Los linfocitos T alorreactivos:
1) slo actan frente a clulas transformadas por virus.
2) son los que son estimulados por superantgenos.
3) slo reconocen antgenos en el contesto de molculas MHC-I.
4) Slo reconocen molculas MHC-II.
5) Responden a molculas MHC heterlogas.
73. El LPS bacteriano se comporta como un:
1) activador policlonal de linfocitos B.
2) agente inmunosupresor.
3) superantgenos.
4) mitgeno de linfocitos T.
5) inductor de niveles altos de memoria inmunolgica.
74. Cul de las siguientes toxinas es un superantgeno?:
1) la colrica.
2) la del sndrome del shock txico.
3) la botulnica.
4) la tetnica.
5) la diftrica.
75. Uno de los siguientes perfiles de produccin de citokinas es caracterstico de las
clulas Th2:
1) IL-2, IFN-gamma.
2) IFN-alfa, IFN-beta, IFN-gamma.
3) IL-4, IL-5, IL-6, IL-10.
4) IL-2, IL-10, IFN-beta.
5) IL-3.
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Respuestas
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4
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5
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2
70
4
80
. El idiotipo de una molcula de anticuerpo est determinado por la secuencia de

aminocidos de :
1) las regiones variables de las cadenas H y L.
2) la regin constante de la cadena L.
3) la regin variable de la cadena L.
4) la regin constante de la cadena H.
5) las regiones constantes de las cadenas H y L.
2. Los determinantes antignicos (epitopos) especficos de clase de inmunoglobulinas
estn asociados con :
1) cadenas L.
2) cadenas J.
3) cadenas H.
4) puentes disulfuro.
5) regiones variables.
3. Los receptores para el antgeno de los linfocitos T y B comparten la propiedad de
que :
1) reconocen al antgeno asociado a molculas de clase II del MHC.
2) su especificidad por el antgeno est determinada por genes de la regin V.
3) reconocen los mismos determinantes antignicos.
4) la IL-3 aumenta la expresin de ambos.
5) presentan dos cadenas L y dos H, codificadas por genes diferentes.
4. La regin D del sistema HLA contiene loci que codifican :
1) molculas de la membrana de macrfagos y linfocitos B.
2) receptores especficos de antgeno en la superficie de linfocitos Th.
3) beta2 -microglobulina.
4) el segmento J (jota).
5) molculas de clase I de las clulas NK.
5. La capacidad de un determinado linfocito B para expresar simultneamente IgM e
IgD en su membrana se produce por :
1) exclusin allica.
2) reduplicacin del DNA.
3) uso de transcriptasa inversa.
4) splicing selectivo de RNA.
5) uso de ambos cromosomas.
6. Los antgenos de clase II del complejo principal de histocompatibilidad humano :
1) estn compuestos por dos cadenas polipeptdicas.
2) slo se expresan en linfocitos B y macrfagos.
3) presentan escasa variacin alotpica.
4) se expresan en la prctica totalidad de los tejidos.
5) no median el rechazo de trasplantes.
7. Un hapteno puede inducir anticuerpos especficos si se :
1) modifica su configuracin molecular.
2) conjuga a un portador que exprese epitopos T.
3) administra por va intravenosa.
4) administra a la vez que un activador policlonal de linfocitos B.
5) administra repetidas veces.
8. El receptor del antgeno de los linfocitos T:
1) es una inmunoglobulina de tipo M.
2) es una inmunoglobulina de tipo D.
3) es una protena del complejo principal de histo-compatibilidad de tipo II.
4) est formado por dos cadenas polipeptdicas glucosiladas.
5) es un glucolpido complejo que promueve la adhesividad celular.
9. El nico isotipo de inmunoglobulina que atraviesa la placenta es :
1) IgA.
2) IgM.
3) IgE.
4) IgD.
5) IgG.
10. La distincin de inmunoglobulinas humanas se basa primariamente en :
1) el nmero de puentes disulfuro.
2) su afinidad.
3) el tipo de cadena pesada.
4) su valencia.
5) su composicin alotpica.
11. La afinidad de un anticuerpo es :
1) medida de la fuerza de su unin a un isotipo.
2) caracterstica de los anticuerpos monoclonales.
3) medida de la fuerza de unin a un epitopo.
4) indicador del grado de analoga con otro anticuerpo.
5) el nmero de lugares de unin de un anticuerpo al antgeno.
12. El receptor antignico de los linfocitos T :
1) tiene el mismo peso molecular que una IgG.
2) presenta dos sitios de combinacin.
3) es de estructura anloga a un anticuerpo.
4) existe en forma circulante, como los anticuerpos.
5) no presenta dominios variables.
13. La funcin principal de las molculas de MHC-I es presentar a los linfocitos T:
1) lipoprotenas bacterianas.
2) cidos nuclicos vricos.
3) oligosacridos.
4) peptidos extracelulares.
5) peptidos intracelulares.
14. La fuerza de unin entre un nico epitopo y un sitio de combinacin de un
anticuerpo, se conoce como:
1) valencia.
2) conectividad.
3) interaccin anti-idiotpica.
4) afinidad.
5) avidez.
15. Los genes que codifican los antgenos del complejo principal de
histocompatibilidad humano:
1) no presentan alelos.
2) se agrupan en 4 loci.
3) se expresan por igual en todas las clulas del organismo.
4) estn localizados en un slo cromosoma.
5) estn localizados en cromosomas distintos.
16. La inmunoglobulina humana de mayor concentracin srica media es la :
1) IgM.
2) IgG1.
3) IgA1.
4) IgD.
5) IgG3.
17. Las molculas de clase II del complejo principal de histocompatibilidad humano :
1) exhiben baja diversidad antignica.
2) se expresan en todas las clulas del organismo.
3) estn integradas por dos cadenas polipeptdicas.
4) no estn asociadas a patologas conocidas.
5) slo se expresan en clulas presentadoras de antgenos.

18. La IgM humana :
1) pasa de la madre al feto a travs de la placenta.
2) es tpicamente dmera.
3) no tiene capacidad para activar el complemento.
4) es la inmunoglobulina que predomina en la respuesta humoral primaria.
5) predomina en secreciones orgnicas.
19. Los idiotopos de un anticuerpo se localizan :
1) en regiones constantes de la cadena ligera.
2) en sus regiones variables.
3) en el fragmento Fc.
4) en regiones constantes de la cadena pesada.
5) en los extremos carboxilo.
20. Los idiotopos son determinantes antignicos que se encuentran :
1) nicamente en las cadenas tipo lambda en las inmunoglobulinas.
2) en las regiones Fc de las inmunoglobulinas.
3) en los dominios CH1 de las cadenas pesadas de las inmunoglobulinas.
4) en las regiones variables de los receptores antignicos.
5) en los antgenos de histocompatibilidad.
21. Las subclases de IgG humana :
1) se encuentran en la sangre en igual proporcin.
2) son estructuralmente idnticas.
3) difieren en su capacidad de activar el complemento.
4) difieren nicamente en su movilidad electrofortica.
5) tienen fragmentos Fc identicos.
22. Los antgenos de clase II del complejo principal de histocompatibilidad humano :
1) son estructuras antignicamente conservadas.
2) son muy polimrficos.
3) no se expresan en clulas T activadas.
4) se expresan en la prctica totalidad de los tejidos.
5) no median el rechazo de trasplantes.
23. Los fragmentos F (ab)2 de una IgG :
1) estn constituidos nicamente por regiones V de las cadenas ligeras y de las cadenas
pesadas.
2) presentan un slo sitio de combinacin.
3) estn compuestos nicamente por regiones C.
4) incluyen la regin bisagra de la IgG.
5) carecen de capacidad de unirse a antgenos.
24. Los antgenos de clase I del complejo principal de histocompatibilidad humano :
1) tienen una expresin celular restringida.
2) presentan la llamada cadena invariante.
3) estn constituidos por un slo polipptido.
4) estn constituidos por dos polipptidos semejantes.
5) son polimrficos.
25. La reaccin de linfocitos mixtos humanos se debe fundamentalmente a :
1) disparidad entre antgenos de histocompatibilidad de clase I.
2) disparidad entre antgenos de histocompatibilidad de clase II.
3) reconocimientos idiotipo-antiidiotipo.
4) reactividades cruzadas entre histotopos.
5) reconocimiento de antgenos de histocompatibilidad alterados.
26. La IgA humana :
1) es la inmunoglobulina predominante en individuos alrgicos.
2) se encuentra en la sangre y en secreciones externas.
3) es tpicamente pentamrica.
4) es la inmunoglobulina con mayor proporcin de carbohidratos asociados.
5) posee alta capacidad activadora del complemento.
27. El isotipo de una inmunoglobulina reside en:
1) la fraccin constante de sus cadenas pesadas.
2) la fraccin constante de sus cadenas ligeras.
3) la fraccin constante de sus cadenas pesadas y ligeras.
4) la fraccin variable de sus cadenas pesadas y ligeras.
5) la fraccin variable de sus cadenas pesadas.
28. Las molculas clase II de histocompatibilidad intervienen en :
1) la educacin de linfocitos T en el timo.
2) la presentacin del antgeno a linfocitos CD4.
3) el rechazo a trasplantes.
4) la cooperacin CD4-linfocito B.
5) todas las anteriores son ciertas.
29. La regin variable de la cadena ligera de la IgA est codificada por los segmentos
gnicos :
1) V, J.
2) V, D, J.
3) V.
4) V, D.
5) Alfa.
30. Cal es la tcnica ms utilizada en histocompatibilidad?:
1) microlinfocitotoxicidad.
2) radioinmunoanlisis.
3) electroforesis.
4) inmunoprecipitacin.
31. Cal es la funcin biolgica ms probable de los antgenos de
histocompatibilidad? :
1) la lisis celular.
2) la activacin del complemento.
3) el rechazo de injertos.
4) la unin de los anticuerpos.
5) la presentacin de otros antgenos.
32. Las molculas de los anticuerpos :
1) estn formadas por cuatro cadenas ligeras y dos pesadas.
2) contienen dos cadenas pesadas cuyos grupos carboxilo terminal estn en la zona de
contacto con las dos cadenas ligeras.
3) se unen a su correspondiente antgeno por los extremos carboxilo terminal de sus
cadenas.
4) no incluyen en su estructura puentes disulfuro.

5) se unen a sus antgenos correspondientes por las zonas amino terminal de sus cadenas.
33. El linfocito T reconoce al antgeno para el que es especfico a travs de una
molcula de membrana denominada :
1) receptor para Fc.
2) receptor para complemento.
3) receptor de la clula T.
4) inmunoglobulina T.
5) receptor de insulina.
34. Los antgenos de histocompatibilidad en el hombre son codificados por un sistema
gentico denominado :
1) sistema de complemento.
2) sistema ABO.
3) sistema HLA.
4) sistema H-2.
35. Indique el fragmento de las inmunoglobulinas que interviene directamente en la
unin al antgeno :
1) Fc.
2) Fab.
3) CH3.
4) cadena J.
36. La clase de inmunoglobulina ms frecuente en las mucosas es :
1) IgG.
2) IgA.
3) IgM.
4) IgE.
5) IgD.
37. Los linfocitos T, a diferencia de los B, no pueden reconocer :
1) antgenos de histocompatibilidad.
2) antgenos tumorales.
3) antgenos propios.
4) antgenos solubles.
5) antgenos ajenos.
38. La interaccin de la protena A del S. Aureus Cowan I con Igs humanas ocurre :
1) con IgG, IgM e IgA.
2) con IgA, IgE e IgM.
3) con IgG1, IgG2, IgG4 y algunas IgM.
4) exclusivamente va el fragmento Fc.
5) con IgG1 e IgG2 por las regiones Fc y Fab.
39. Cul de las siguientes afirmaciones referidas a la IgD es falsa? :
1) tiene un peso molecular mayor que la IgG.
2) no se afecta por la digestin con papaina.
3) contiene alrededor de un 12% de azcares.
4) se desnaturaliza a pH3.
5) todas las anteriores.
40. El control del catabolismo de la IgG humana se lleva a cabo a travs de la regin :
1) CH1 + CL.
2) CH2.
3) CH2 + CH3.
4) CH3 + CH3.
5) VH + CH1.
41. Cul entre las siguientes son los marcadores de las llamadas clulas null? :
1) thy1.
2) Ly.
3) Ia.
4) .
5) receptores para el Fc.
42. Cuales entre los siguientes son los marcadores de las clulas natural Killer? :
1) antgeno .
2) antgenos Ia.
3) receptores para c3b.
4) inmunoglobulina de superficie.
43. Indicar cul de las expresiones siguientes es verdadera :
1) las regiones V estn a veces asociadas con regiones Ck.
2) molculas de IgG1 e IgG2 se distinguen por la secuencia de sus cadenas L.
3) protenas de mieloma de personas diferentes tienen siempre la misma secuencia.
4) la cadena H de la IgG humana se pliega en cuatro dominios.
5) las cadenas L poseen ms azcares que las H.
44. La expresin simultnea de IgM e IgD en la membrana puede provenir de :
1) un mecanismo de maduracin alternativo de un precursor del mRNA nico.
2) la sntesis de una poliprotina con excisin alternativa posterior.
3) la maduracin de linfocito B a clula plasmtica.
4) la unin de un segmento CH diferente a un segmento VH nico.
5) la activacin de diferentes promotores en los genes correspondientes.
45. Comparada con la IgG, la IgA tiene :
1) un contenido en azcares mayor.
2) un contenido menor en azcares.
3) una secuencia de aminocidos distintos en la regin Fc.
4) la misma secuencia en la regin Fc.
5) 1 y 3.
46. Indicar cul de los siguientes receptores existen en linfocitos B humanos :
1) para el fragmento Fc de inmunoglobulinas.
2) de insulina.
3) para factores producidos por linfocitos T.
4) para factores activados de complemento (CR2).
5) todos los anteriores.
47. El tratamiento de IgG humana con papana produce:
1) un fragmento Fc y 2 Fab.
2) dos fragmentos Fc y 1 Fab.
3) un fragmento F (ab)2 y 1 pFc.
4) un fragmento Facb y pptidos pequeos.
5) dos fragmentos Fab y un fragmento pFc.

48. Cul de las caractersticas siguientes puede asignarse al MHC? :
1) fuerte desequilibrio de ligamiento.
2) polimorfismo gentico elevado.
3) asociacin de ciertos alelos con susceptibilidad a enfermedades.
4) la mayora de los antgenos codificados se expresan en la membrana.
5) todas las anteriores.
49. Indicar cul de las expresiones siguientes, referidas a una molcula de anticuerpo
es verdadera :
1) la regin hinge une cadenas L y H.
2) puede tener cadenas L con dos secuencias diferentes en la regin V.
3) el dominio VH es el doble en tamao que VL.
4) la regin Fc corresponde a tres dominios de cadena H.
5) los dominios V y C de cadenas L tienen estructuras terciarias muy semejantes.
50. El componente secretorio est covalentemente unido a :
1) IgM.
2) IgA secretoria.
3) IgA polimrica.
4) IgM e IgA.
5) no se une convalentemente.
51. Las inmunoglobulinas de membrana y los anticuerpos circulantes se distinguen :
1) por reconocer epitopos diferentes.
2) por poseer distinta secuencia C-terminal.
3) por la diferente composicin de las cadenas ligeras.
4) por la ausencia de oligosacrido en la forma de membrana.
5) por su diferente resistencia a la digestin con papaina.
52. Las inmunoglobulinas son protenas sintetizadas por :
1) linfocitos T.
2) macrfagos y monocitos.
3) hepatocitos y macrfagos.
4) linfocitos T y B.
5) linfocitos B.
53. Se quiere obtener fragmentos Famb y pFc a partir de IgG de conejo. Indiquese el
procedimiento :
1) digestin con plasmina.
2) reduccin y alquilacin.
3) digestin con papaina.
4) digestin con pepsina.
5) rotura con BrCN.
54. El sitio antgeno combinante est formado por :
1) aminocidos hipervariables de dominios V.
2) dominios V de cadenas H.
3) dominios VH y CH1.
4) dominios V y C.
5) dominios V homlogos.
55. Las clases de inmunoglobulinas se asignan segn:
1) el coeficiente de sedimentacin.
2) si son polimricas o monomricas.

3) la movilidad electrofortica.
4) la estructura primaria de las cadenas H.
5) la estructura primaria de las cadenas H y L.
56. En un individuo todas las IgG2 poseen :
1) idnticas cadenas H y L.
2) la misma especificidad.
3) las mismas regiones V.
4) las mismas regiones CH.
5) las mismas regiones VH.
57. La beta-2-microglobulina se asocia con :
1) antgenos TC (timocitos corticales).
2) antgenos de clase II (MHC) no covalentemente.
3) antgenos de clase I (MHC) no covalentemente.
4) dominios homlogos de las inmunoglobulinas.
5) 2 y 3.
58. En cuantos grupos de ligamiento (cromosomas) del complemento haploide se
distribuyen los genes que codifican las inmunoglobulinas? :
1) 1.
2) 2.
3) 3.
4) 4.
5) 5.
59. Cal de las siguientes funciones NO corresponde a la IgG?:
1) activacin del complemento.
2) inmunidad a nivel de mucosas.
3) citotoxicidad mediada por clulas dependientes de Ac.
4) opsonizacin.
5) inmunidad neonatal mediada por Ac maternos.
60. En que regin de la inmunoglobulina se localizan los idiotipos :
1) regiones hipervariables.
2) fragmento Fc.
3) regin charnela.
4) regin constante de la cadena pesada.
5) regin constante de la cadena ligera.
61. En que cromosoma humano estn los genes del Sistema Principal de
Histocompatibilidad? :
1) 4.
2) 6.
3) 13.
4) 17.
5) 19.
62. La cadena J est unida covalentemente a:
1) cadenas pesadas de IgA e IgM.
2) cadenas pesadas de IgG e IgM.
3) cadenas ligeras.
4) cadenas pesadas de IgG, IgA e IgM.
5) cadenas pesadas de IgG, IgM e IgD.

63. La especifidad por los antgenos en la molcula de anticuerpo reside en :
1) VL / CH1.
2) CH /CL.
3) VH / CH.
4) VL CL / VH CL.
5) VL / VH.
64. El polimorfismo relacionado con el gran nmero de alelos en los antgenos de clase
I del MHC reside estructuralmente en:
1) los dominios alfa-1 y alfa-2 de la cadena pesada.
2) el dominio alfa-3 de la cadena pesada.
3) el mismo grado a lo largo de toda la cadena pesada.
4) la cadena beta-2 microglobulina.
5) ambas cadenas de molculas de MHC-I.
65. La estructura de los antgenos de histocompatibilidad de clase I es:
1) un heterodmero alfa/beta, con dos dominios por cadena.
2) una cadena alfa, con tres dominios, y una cadena beta-2 microglobulina.
3) una cadena alfa, con dos dominios, y una cadena beta-2 microglobulina.
4) una cadena beta-2 microglobulina.
5) un heterodmero alfa/beta asociado al complejo CD3.
66. Los segmentos gnicos J joining y D (diversidad) de las inmunoglobulinas
codifican:
1) la regin transmembrana.
2) la tercera regin hipervariable (CDR3) del dominio variable.
3) el extremo C-terminal de las cadenas pesadas.
4) el extremo C-terminal de la cadena ligera lambda.
5) el extremo C-terminal de la cadena ligera kappa.
67. Las secuencias N son nucletidos que no estn presentes en las secuencias de los
genes de las inmunoglobulinas en la lnea germinal, y que se aaden a los bloques VJ o
VDJ por accin del enzima:
1) adenosin desaminasa (ADA).
2) citocromo oxidasa.
3) hipoxantina-guanina-fosforribosil-transferasa (HGPRT).
4) retrotranscriptasa.
5) desoxirribonucleotidil transferasa terminal (TdT).
68. El isotipo secretado en mayor cantidad por las mucosas es:
1) IgA.
2) IgD.
3) IgE.
4) IgG.
5) IgM.
69. Cul es el receptor para el antgeno en el linfocito B? :
1) CD 3.
2) Ig superficie.
3) CD 4.
4) CD 10.
5) Rec. IL-2.
70. Qu clase o isotipo de Igs se encuentra en el plasma habitualmente en forma

pentamrica?
1) IgA.
2) IgG.
3) IgD.
4) IgM.
5) IgE.
71. Cul es la Ig de mayor peso molecular en plasma?
1) IgA.
2) IgG.
3) IgD.
4) IgM.
5) IgE.
72. Cul es la Ig de mayor vida media?
1) IgA.
2) IgG.
3) IgD.
4) IgM.
5) IgE.
73. En cul de las siguientes Igs existen variaciones alotpicas?
1) IgG e IgD.
2) IgG e IgA.
3) IgD e IgE.
4) IgM e IgA.
5) IgA e IgD.
74. Cuntos dominios constantes tiene una cadena pesada de IgM o IgE?
1) 1.
2) 2.
3) 3.
4) 4.
5) 5.
75. Cul de las siguientes Igs pasa la barrera placentaria?
1) IgG1.
2) IgG5.
3) IgA1.
4) IgE.
5) igD.
76. Respecto a la variabilidad del repertorio de las Igs. seale la afirmacin FALSA.
1) los isotipos, presentes en la lnea germinal de todos los individuos de la especie,
permiten diferenciar las clases y las subclases de Igs.
2) los alotipos se refieren a las variaciones allicas dentro de los individuos de una especie.
3) los idiotopos son los segmentos hipervariables de las zonas variables del idiotipos del
fragmento Fab de las Igs.
4) el eptopo del eptope o determinente antignico se une al paratopo por fuerzas
covalentes.
5) la variabilidad del repertorio de las Igs reside en la fraccin Fc.
77. En relacin con la IgA secretora, seale la afirmacin FALSA.
1) se trata de un dmero.
2) se mantiene unido por la cadena J.
3) se asocia a una porcin secretora S.
4) la IgA secretora se sintetiza en el MALT.
5) el componente secretor se produce en los linfocitos B activados exclusivamente.
78. Respecto a la estructura de las Igs. seale la afirmacin FALSA.
1) la regin bisagra es una zona de la porcin Fc de la Ig que incluye puentes disulfuro y es
muy vulnerable a enzimas.
2) la papana rompe la molcula de Ig en dos fragmentos Fab y un fragmento Fc.
3) la pepsina rompe la molcula en dos fragmentos Fc y un conglomerado Fab-Fab.
4) el Fc es el responsable de la unin al complemento y a las clulas.
5) las regiones hipervariables determinan los alotipos.
79. Qu Igs son las aglutininas naturales?
1) IgG.
2) igM.
3) IgE.
4) IgA.
5) IgD.
80. Qu Ig forma parte del factor reumatoide (FR) en la mayora de los casos?
1) IgG.
2) IgM.
3) IgE.
4) IgA.
5) IgD.
81. Respecto a la regulacin gentica de las Igs. seale la afirmacin FALSA.
1) estn codificadas en 3 cromosomas diferentes (cadena Kappa en el 2, cadena lambda en
el 22, y cadenas pesadas en el 14).
2) se produce un reordenamiento de los genes con prdida de los exones, intercalados entre
los intrones, que s se expresan.
3) las cadenas pesadas (heavy) se sintetizan por separado de las ligeras (light), con ligero
sobrante de estas.
4) se recombina primero un gen D con un gen J y, posteriormente, con un gen V, para
formar la regin variable de la cadena pesada.
5) la variabilidad de las Igs queda preservada por la variabilidad de los fragmentos gnicos,
la frecuencia elevada de mutaciones somticas.
82. Cul es la diferencia entre la molcula de Ig y el TCR como receptores para el
antgeno?
1) la mayor especificidad de la Ig.
2) la mayor variabilidad de la Ig.
3) el mayor tamao del TCR.
4) la presencia de Ig en plasma.
5) la mayor afinidad del TCR.
83. Cuntas cadenas proteicas componen el complejo receptor del linfocito T (TCR),
asociado al CD3?
1) 1.
2) 3.
3) 5.
4) 7.
5) 10.
84. Qu cromosoma codifica las cadenas del TCR ?
1) Crom. 14, la alfa y la beta.
2) Crom. 14, la alfa y la delta.
3) Crom. 7, la gamma y la delta.
4) Crom. 7, la gamma y la beta.
5) 2 y 4.
85. Qu es la restriccin HLA?
1) la deleccin de los linfocitos B que sean intiles.
2) la necesidad de que se presente el determinante antignico asociado al HLA-I para que
sea reconocido por el LT CD8+.
3) la facilitacin de la diapdesis de los PMNs.
4) la necesidad de que se presente el determinante antignico asociado al HLA-II para que
sea reconocido por el LT CD4+.
5) son ciertas las respuestas 2 y 4.
86. Cules de los siguientes NO son reguladores de la respuesta inmune?
1) red idiotpica-antiidiotpica.
2) linfocinas.
3) relacin linfocitos CD3 a linfocitos no CD3.
4) linfocitos Th helper.
5) monocinas.
87. Los HLA son los antgenos de histocompatibilidad y estn codificados en el CMH
(complejo mayor de histocompatibi-lidad) del brazo corto del cromosoma 6. Seale la
afirmacin FALSA.
1) los HLA-I se expresan en todas las clulas nucleadas del organismo.
2) las clulas B expresan HLA-II en su superficie.
3) la deficiencia de 21-alfa-hidroxilasa est localizada en la regin CMH III.
4) cada individuo hereda un haplotipo de cada progenitor (herencia codominante).
5) las clulas LT helper reconocen los Ags en asociacin con las molculas HLA-II.
88. Cuantos dominios tiene la cadena transmembrana de la molcula de HLA de tipo
I?
1) 1.
2) 2.
3) 3.
4) 4.
5) 5.
89. El C3Nef es:
1) un inhibidor del C3.
2) un anticuerpo contra el C3.
3) un inhibidor de la convertasa C3 de la va alternativa.
4) un activador de la convertasa C3 de la va alternativa.
5) un anticuerpo contra la convertasa C3 de la va alternativa.
90. Cul de los siguientes tipos de inmunocomplejos tiene mayor potencial patgeno?
1) inmunocomplejos de gran tamao.
2) inmunocomplejos con exceso de anticuerpo.
3) inmunocomplejos formados por molculas de IgA.
4) inmunocomplejos con equivalencia Ag-Ac.

5) inmunocomplejos con exceso moderado de antgeno.
91. Los antgenos (Ag) HLA de clase I se expresan en:
1) todas las clulas del cuerpo.
2) slo en los glbulos rojos.
3) slo en las clulas que estn implicadas en el control de la respuesta inmunitaria (B,T y
clulas presentadoras de antgenos).
4) slo en clulas presentadoras de antgenos.
5) todas las clulas del cuerpo menos los glbulos rojos.
92. Los antgenos (Ag) HLA de clase II se expresan en:
1) todas las clulas del cuerpo.
2) slo en los glbulos rojos.
3) slo en las clulas que estn implicadas en el control de la respuesta inmunitaria (B, T y
clulas presentadoras de antgenos).
4) slo en clulas presentadoras de antgenos.
5) todas las clulas del cuerpo menos los glbulos rojos.
93. Una de las siguientes afirmaciones sobre las molculas del sistema principal de
histocompatibilidad (MHC) es falsa:
1) las molculas de clase I se expresan slo en leucocitos y las de clase II en todas las
clulas nucleadas.
2) las molculas de clase I son reconocidas por clulas T citotxicas.
3) en el ser humano constituyen el sistema HLA.
4) presentan alto grado de polimorfismo.
5) las molculas de clase II son reconocidas por clulas T helper.
94. El idiotipo de un anticuerpo est determinado por:
1) la regin constante de la cadena ligera.
2) la regin variable de las cadenas ligera y pesada.
3) la regin constante de las cadenas ligera y pesada.
4) la regin variable de la cadena ligera.
5) la regin Fc.
95. Los sueros usados para el tipaje de los distintos alelos del HLA, por el test de
microcitotoxicidad, pueden ser obtenidos de todas las fuentes siguientes menos:
1) mujeres multiparas.
2) conejos inmunizados con linfocitos humanos.
3) pacientes que han recibido mltiples transfusiones sanguneas.
4) pacientes que han recibido y rechazado transplantes.
5) voluntarios que han sido sensibilizados frente a HLA.
96. Seale la respuesta correcta. El complejo CD3:
1) se asocia unicamente al Rc clonotpico de tipo alfa-beta.
2) se asocia de forma covalente a ambos tipos de Rc clonotpicos alfa-beta, gamma-delta.
3) existe un slo tipo de complejo CD3 que asocia cinco cadenas diferentes.
4) media la traduccin de seales originadas por el reconocimiento del Ag por la clula T.
5) 2 y 4 son correctas.
97. Seale la respuesta incorrecta:
1) los genes del sistema HLA se localizan en el brazo corto del cromosoma 6 junto con
otros genes del TNF.
2) las molculas del HLA-I se expresan en la superficie de todas las clulas nucleadas en
asociacin con la cadena de beta-2 micro-globulina.

3) la respuesta en cultivo mixto linfocitario es mediada principalmente por los Ag HLA-II.
4) aunque la mayora de los monocitos expresan el HLA-II DR y DP, las expresin de DQ
es muy baja en ests clulas.
5) el fenomeno de restriccin MHC implica que el Ag es reconocido por el Rc de la clula
T nicamente cuando ste es presentado por un haplotipo HLA similar al del propio sujeto.
98. En la presentacin de antgeno asociado a molculas de MHC-II:
1) los peptidos antignicos se asocian con nuevas molculas del MHC en el retculo
endoplasmtico.
2) no es necesaria la interaccin peptido-molcula del MHC.
3) los peptidos antignicos exgenos se unen directamente a las molculas de clase II de la
membrana sin previa internalizacin.
4) se produce una internalizacin del antgeno y posterior unin del antgeno procesado a
las molculas de clase II en los endosomas.
5) no es necesario el procesamiento del antgeno.
99. El TCR:
1) se expresa solamente en clulas T CD4+.
2) reconocen antgenos solubles.
3) es expresado tanto por clulas T como por macrfagos.
4) es un homodmero formado formado por dos cadenas alfa de 40 Kd.
5) reconoce antgenos procesados en forma de peptidos asociados a molculas de clase I y
clase II.
100. El TCR consite en:
1) dos cadenas idnticas entre s, asociadas a CD3.
2) un heterodmero, asociado a CD3.
3) cuatro cadenas, iguales dos a dos, unidas por puentes disulfuro.
4) un heterodmero, asociado a CD2.
5) una inmunoglobulina de superficie.
101. Los antgenos del MHC-I:
1) se expresan solo en clulas T activadas y macrfagos.
2) presentan pptidos antignicos derivados de antgenos exgenos.
3) son constituyentes del complemento.
4) se expresan solo en clulas dendrticas.
5) presentan pptidos antignicos derivados de antgenos endgenos.
102. Una clula B puede expresar simultneamente en superficie inmunoglobulinas:
1) de distinta especificidad antignica.
2) con idiotipos diferentes.
3) con distintos marcadores alotpicos para el mismo locus.
4) con cadenas kappa y lambda.
5) de distinto isotipo.
103. Los dominios V de las cadenas ligeras de las inmunoglobulinas:
1) son muy distintos en cuanto al nmero de aminocidos.
2) median la interaccin con el complemento srico.
3) contribuyen a la definicin de idiotipos.
4) son nicamente resultado de la expresin de segmentos gnicos V.
5) no presentan regiones hipervaribles.
104. Las molculas de MHC-II humanas:
1) se expresan esencialmente en todas las clulas nucleadas.

2) slo se expresan en clulas del sistema inmune.
3) slo se expresan en clulas B.
4) se expresan como resultado de estimulaciones fisiolgicas.
5) estn constituidas por dos polipptidos semejantes.
105. Los genes que codifican las Ig humanas:
1) no presentan alelos.
2) slo se expresan bajo estimulacin antignica.
3) estn en el mismo cromosomas.
4) slo se expresan en clulas B maduras.
5) estn en cromosomas distintos.
106. La IgA:
1) activa el complemento por la va clsica.
2) activa mastocitos.
3) es neutralizante en las mucosas.
4) atraviesa la placenta.
5) es muy opsonizante.
107. La distincin de subtipos (subclases de Ig) de Ig se hace en base a:
1) su valencia.
2) su peso molecular.
3) sus cadenas pesadas.
4) sus cadenas ligeras.
5) su coeficiente de sedimentacin.
108. El polimorfismo de los Ag MHC-I radica en:
1) la cadena beta-2 microglobulina.
2) los dominios alfa-2 y alfa-3.
4) toda la cadena alfa.
5) el dominio transmembrana de alfa.
109. Los Ag procesados por proteasas endocticas en las CPA se presentan asociados a:
1) molculas MHC-II.
2) molculas de MHC-I.
3) molculas del complejo CD3.
4) lpidos de membrana.
5) beta-2 microglobulina.
110. Una preparacin pura de IgG1 de ratn, sometida a electroforesis en el gel de
poliacrilamida en condiciones reductoras, dar lugar a:
1) una escalera de bandas de varios pesos moleculares.
2) una banda de 75 kd.
4) dos bandas.
111. La formacin de complejos Ag-Ac:
1) es irreversible.
2) no implica enlaces covalentes.
3) es slo de naturaleza electrosttica.
4) no incluye el establecimiento de puentes de hidrgeno.
5) no incluye interacciones hidrofbicas.

112. Las siguientes clases de inmunoglobulinas incluyen en su estructura, cuando
estn en forma multimrica, una cadena J no inmunoglobulnica:
1) IgG.
2) IgG e IgM.
3) slo IgM.
4) IgM e IgA.
5) IgM e IgD.
113. Las partes polimrficas de las molculas de MHC-I son:
2) los dominios alfa-1 y beta-1.
3) el nico dominio de la cadena beta-2-microglobulina.
4) la parte N-terminal de la cadena beta.
5) no existen zonas polimrficas en estas molculas.
114. Un epitopo es:
1) el grupo qumico reconocido por el Ac.
2) una zona determinate del fragmento Fab de la IgG.
2) un fragmento del DNA que no se replica.
4) una zona de una protena donde cambia el tipo de plegamiento.
5) un surco de una protena incapaz de unir dodecilsulfato sdico.
115. La va alternativa del complemento es activada por :
1) IgG monomrica.
2) IgA.
3) endotoxinas.
4) C1.
5) IL-2.
116. En un individuo deficiente de C3, la presencia de un complejo antgenoanticuerpo da lugar a :
1) produccin de anafilotoxinas.
2) disminucin del factor B.
3) produccin de factores quimiotcticos.
4) activacin de C2.
5) activacin de C5 convertasa.
117. La interaccin de la IgG humana con el componente Clq del complemento se hace
a travs de:
1) el extremo C terminal.
2) dominios C de cadenas pesadas.
3) dominios C de cadenas ligeras.
4) los fragmentos Fv.
5) los extremos N terminales.
118. La va alternativa del complemento:
1) es un sistema innato de defensa.
2) se activa por la accin de los anticuerpos unidos al antgeno.
3) est presente slo en vertebrados de sangre caliente.
4) es un sistema de defensa antitumoral.
5) se activa por la accin del interfern.
119. Cal de las siguientes funciones NO ES ATRIBUIBLE al complemento activado:
1) lisis de clulas extraas.

2) activacin y quimiotaxis de neutrofilos.
3) opsonizacin y fagocitosis de bacterias.
4) relajacin de la musculatura lisa extravascular.
5) incremento de la permeabilidad vascular.
120. La activacin del complemento srico por inmunoglobulinas IgG se hace a travs
de :
1) sus dominios Fv.
2) las regiones Fab.
3) los carbohidratos asociados.
4) sus regiones Fc.
5) sus cadenas ligeras.
121. La interaccin de la IgG humana con el componente Clq del complemento se
realiza a travs de:
1) los extremos N terminales.
2) los extremos C terminales.
3) dominios C de cadenas ligeras.
4) cadenas ligeras.
5) dominios C de cadenas pesadas.
122. El componente del complemento que se encuentra en mayor concentracin en el
suero sanguneo es el:
1) C4.
2) C1.
3) C5.
4) C3.
5) C2.
123. La activacin del complemento da lugar a la aparicin de:
1) molculas con capacidad enzimtica.
2) quimiotctinas.
3) opsoninas.
4) anafilotoxinas.
5) todas las anteriores son ciertas.
124. Indique cal de las siguientes molculas es capaz de activar el complemento por
la va clsica :
1) IgA e IgG.
2) IgD e IgM.
3) IgG1 e IgM.
4) IgE e IgG2.
125. Cul es el principal activador de la va clsica del sistema de complemento? :
1) antgenos HLA de clase I y II.
2) polisacridos bacterianos y protenas virales.
3) complejos antgeno-anticuerpo y agregados de inmunoglobulinas.
4) clq.
126. Indicar cul de las siguientes propiedades NO es asignable a C3a humano :
1) produccin de broncoespasmo.
2) incremento de permeabilidad vascular.

3) supresin de la respuesta de anticuerpos.
4) quimiotaxis de neutrfilos.
5) todas son asignables.
127. El receptor CR2 reconoce preferentemente:
1) virus de Epstein-Bar.
2) c3b, c4b.
3) ic3b.
4) c3d.
5) 1 y 4.
128. El orden de activacin de los cuatro primeros componentes del complemento por
la va clsica es :
1) c1, c2. c3, c4.
2) c1, c3, c4, c2.
3) c1, c4. c2, c3.
4) c1, c4, c3, c2.
5) c1, c3, c2, c4.
129. Cul de los siguientes complejos es la Convertasa de C3?:
1) C4b, 2a.
2) C5b67.
3) C1r, C1s.
4) C3b, Ba.
5) C1s, 2a.
130. El receptor CR1 del Sistema del Complemento reconoce:
1) C1q libre.
2) C3a y C4a.
3) C3d.
4) C3b.
5) C5a.
131. Cul de los siguientes componentes del complemento est en ms alta
concentracin en el suero :
1) C2.
2) C4.
3) C9.
4) C6.
5) C5.
132. Las anafilatoxinas son :
1) fragmentos derivados del C3, C4 y C5.
2) mediadores producidos por los macrfagos.
3) endotoxinas bacterianas.
4) derivados de la bradiquinina.
5) aminas vasoactivas.
133. La molcula de CR1, presente en la superficie de los fagocitos, interviene en
fenmenos de opsonizacin por ser:
1) Rc de C1.
2) Rc de C3b.
3) Convertasa de C3.
4) Rc para Fc de IgG.
5) Rc de C1q.
134. La funcin del componente del complemento llamado S (vitronectina) es:
1) impedir la activacin espontnea de C1.
2) impedir la unin de C5B67 a membranas celulares.
3) catalizar la ruptura del factor B en Ba y Bb.
4) catalizar la ruptura de C3 en C3a y C3b.
5) actuar como opsoninas inespecficas.
135. El dominio de la IgM que interviene en la activacin de la molcula de C1 del
complemento es el:
1) CH1.
2) CH2.
3) CH3.
4) CH4.
5) VH.
136. Respecto al sistema de complemento seale la respuesta incorrecta:
1) la activacin del complemento por la va alternativa tiene menor eficacia que la
activacin por la va clsica.
2) ambas vas convergen en la activacin de C3.
3) determinantes bacterianos pueden activar ambas vas en ausencia de Ac.
4) el FB acta nicamente en la activacin de la va alternativa.
5) la IgM activa exclusivamente la va clsica.
137. Cul de estas protenas forma parte de la va clsica del complemento?
1) C5.
2) B.
3) C7.
4) C4.
5) D.
138. La protena del complemento fundamental en el asa amplificadora de la va
alternativa es :
1) C1.
2) C2.
3) C3.
4) C4.
5) C5.
139. Una de las siguientes protenas del complemento NO es codificada en el brazo
corto del cromosoma 6. Selela.
1) C4a.
2) C2.
3) B.
4) C5.
5) C4b.
140. Cite una protena del complemento comn a la va clsica, a la alternativa y al
complejo de ataque de membrana:
1) C2.
2) C4.
3) D.
4) B.
5) C5.
141. Cite la afirmacin FALSA respecto a la cascada del complemento:
1) la convertasa de C3 de la va clsica es C4b2a.
2) la convertasa de C3 de la va alternativa es C3bBb.
3) la convertasa de C5 de la va clsica es C4b2a3b.
4) la convertasa de C5 de la va alternativa es C3bBbC3b.
5) el principal regulador de la va alternativa es el C1qinh.
142. La interaccin de las Ig con el complemento srico se hace caractersticamente a
travs de:
1) los dominios Fv.
2) los extremos amino.
3) sus cadenas pesadas.
4) las regiones constantes de las cadenas ligeras.
5) los extremos carboxilos.
143. La principal opsonina del sistema de complemento es:
1) C2a.
2) C4b2b.
3) el factor B.
4) C3b.
5) C5a.
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Respuestas
1
1
11
3
21
3
31
5
41
5
51
2
61
2
71
4
81
2
91
5
101
2
3
12
3
22
2
32
5
42
5
52
5
62
1
72
2
82
4
92
3
102
3
3
13
5
23
4
33
3
43
4
53
1
63
4
73
2
83
4
93
1
103
4
1
14
4
24
5
34
3
44
1
54
1
64
1
74
4
84
5
94
2
104
5
4
15
4
25
2
35
2
45
5
55
4
65
2
75
1
85
5
95
2
105
6
1
16
2
26
2
36
2
46
5
56
4
66
2
76
5
86
3
96
4
106
7
2
17
3
27
1
37
4
47
1
57
3
67
5
77
5
87
1
97
4
107
8
4
18
4
28
5
38
3
48
5
58
3
68
1
78
5
88
3
98
4
108
9
5
19
2
29
1
39
2
49
5
59
2
69
2
79
2
89
5
99
5
109
10
3
20
4
30
1
40
2
50
2
60
1
70
4
80
2
90
5
100
2
110
5
111
2
121
5
131
2
141
5
112
2
122
4
132
1
142
3
3
113
1
123
5
133
2
143
4
5
114
1
124
3
134
2
144
5
115
3
125
3
135
3
145
3
116
4
126
5
136
3
146
3
117
2
127
5
137
4
147
3
118
1
128
3
138
3
148
3
119
4
129
1
139
4
149
4
120
4
130
4
140
5
150
ara que un linfocito T reconozca un antgeno a travs de su TCR hace falta

Procesamiento del antgeno: es la degradacin del antgeno proteico hasta pptidos.
Presentacin del antgeno procesado: es la asociacin de algunos de esos pptidos con
molculas codificadas por genes del complejo principal de histocompatibilidad (MHC).
La respuesta se inicia con la activacin de los LT CD4+ que reconocen Ag presentados por
las CPA, que expresan MHC-II. Estos LT CD4+ sern, mediante citocinas especficas y la
expresin de nuevos Rc, los responsables de continuar y mantener la respuesta de los LB,
de los LT CD4+, de los LT CD8+ y la activacin de los macrfagos.
La presencia de Ag extraos en el interior de la clula la detectan los LT, por medio del TcR
que reconoce pptidos antignicos unidos al MHC (presentacin del Ag) en la superficie de
la clula:
El MHC-I presenta Ag virales sobre cualquier clula nucleada infectada. Los Ag son
reconocidos por los LT CD8+.
El MHC-II sobre CPA est especializado en la presentacin de Ag exgenos captados del
medio extracelular por endocitosis o fagocitosis, y que son sometidos a procesamiento
endoctico. Los Ag son reconocidos por los LT CD4+.
El reconocimiento del Ag sobre el MHC, por el TcR, es especfico de pptido y alelo de
MHC (restriccin). Para la completa activacin celular son necesarios segundas seales
esenciales entre LT y CPA.
10.1. CLULAS PRESENTADORAS DE ANTGENO (CLULAS ACCESORIAS).
Las CPA pueden ser tanto clulas nucleadas enfermas que presenten pptidos de parsitos
intracelulares (o de protenas tumorales) a linfocitos Tc via MHC-I como las clulas
profesionales presentadoras de antgenos exgenos a los linfocitos TH va MHC-II. Sin
embargo, a efectos de nomenclatura, a las primeras se les suele designar como clulas
diana, para no confundirlas con las clulas presentadoras profesionales (CPA en sentido
estricto):
Grupo
FAGOCITO
(monocito
/macrfago)
Fagocitosis
+
Tipo de clula
Monocitos
Localizacin
Sangre
MHC-II
Inducible
Macrfagos
Tejidos
(+ a +++)
Macrfagos zona
marginal
Bazo y ganglios
linfticos
Clulas de Kupffer
Hgado
Microglia
Cerebro
Clulas de Langerhans
Piel
(++)
Clula dendrtica
interdigitada
Tejido linfoide
(++)
Tejido linfoide
(-)
Tejido linfoide
Inducible
+
+
CPA constitutiva
no fagoctica
Clulas dendrticas
foliculares
LINFOCITOS
LB y LT (activado)
(- a ++)
CPA facultativas +
Astrocitos
Cerebro
(- a ++)
Clulas foliculares
Tiroides
Inducible
Clulas endoteliales
Fibroblastos
Tejido vascular y linfoide (- a ++)

Tejido conjuntivo
Las CPA o clulas accesorias participan activamente en la iniciacin de la respuesta

inmunitaria. Su funcin es presentar antgenos a los LTCD4+. Las CPA tienen las
siguientes caractersticas:
a) Capacidad de captar y procesar protenas del medio extracelular.
b) Expresin de MHC-II, al que se asocia el pptido antignico, para que sea reconocido
por el TcR.
c) Expresin de molculas de adhesin para aumentar el contacto celular y la baja
afinidad de la unin TcR-MHC/pptido.
Molcula del CPA

ICAM-1
MHC-II
LFA-3
Molcula del Linfocito T

LFA-1
TcR y CD4
CD2 (LFA-2)
d) Expresin de molculas co-estimuladoras en la superficie celular (B7.1 y B7.2) o

secretadas (IL1), que proporcionan segundas seales.
Citokinas secretadas
Citokinas secretadas
Por las CPA
Por los LT
IL-1
IFN-gamma
IL-6
GM-CSF
TNF-alfa
IL-4
IL-10
TNF-beta
IL-12
Las clulas mejor conocidas son los macrfagos y las clulas dendrticas. Los LB pueden
presentar Ag y son importantes en las respuestas secundarias. Las CPA facultativas suelen
intervenir en estados patolgicos como las clulas foliculares tiroideas en la tiroiditis
autoinmunes.
Clula
Origen MHC-II
Macrfago Mdula Variable

sea
Clula
Mdula Alta
dendrtica sea
Present. Lugar de
de Ag a LT presentacin
CD4+
In situ
CD4+
Ganglios
linfticos,
bazo,
CD8+ (?) mucosas
Linfocitos Mdula Constitutiva, CD4+ Th2 Ganglios
B
sea
IL-4
linfticos
Clula
Captacin de Ag Capacidad de
procesamiento
Macrfago Fagocitosis,
internalizacin
va Rc
Muy alta
Molculas
coestimulatorias
S. aumenta tras
activacin
Molcula de Modulacin
adhesin
capacidad
presentadora
S
IFN-gamma,
IL-10,
TGF-beta,
Clula
dendrtica
Fagocitosis (?) Desconocida:

Captacin de
muy eficiente
pptidos por
como
MHC-II y MHC- presentadora
I (?)
Linfocitos B Va Ig de
Muy alta s
superficie +
especficas de
internalizacin Ag. Despus del
(100 a 10000
procesamiento
veces ms
eficaz)
S. Aumentan tras S
activacin
IFN-gamma,
otras citocinas
S. Aumenta tras
activacin
IL-4,
IL-13,
IL-10
10.2. PROCESAMIENTO DEL ANTGENO: Ag extracelulares e intracelulares.

Slo el 1% del Ag interviene en la respuesta inmunitaria, y el resto se degrada y se excreta.
Es el paso limitador del ritmo de las reacciones inmunitarias.
10.2.1. BIOSNTESIS DE LAS MOLCULAS DEL MHC.
Las molculas del MHC son glicoprotenas de membrana que se sintetizan y transportan
hasta la membrana siguiendo las rutas establecidas.
10.2.1.1. MOLCULAS DE CLASE I:
Son heterodmeros constituidos por una cadena pesada alfa y otra ligera de beta-2
microglobulina que se sintetizan en el RER, donde se unen, formando un heterodmero
fsicamente inestable en condiciones fisiolgicas. Dentro del RE, la cadena alfa se une a la
CALNEXINA, que estabiliza el dmero alfa-beta2 microglobulina e impide el transporte
fuera del RE de los dmeros que no han unido el pptido antignico (la calnexina slo es
desplazada por el pptido antignico). Cuando se une el pptido, se forma un trmero
estable que viaja hasta la membrana citoplasmtica.
10.2.1.2. MOLCULAS DE CLASE II
Constan de dos cadenas (alfa y beta) que forman un heterodmero. Las cadenas se
sintetizan en el RER, donde se asocian a una tercera cadena invariante (Ii), formando un
trmero. La cadena invariante:
Estabiliza la molcula de MHC-II,
Bloquea la cavidad de unin al pptido dentro del RE y evita que los pptidos
derivados de procesamiento citoslico puedan unirse al MHC-II.
Contiene una secuencia seal que dirige al trmero hacia los endosomas, va aparato de
Golgi. La molcula MHC-II pueda viajar desde el REr a un compartimento endosmico de
pH bajo donde se encontrar con pptidos derivados de endocitosis/fagocitosis.
10.2.2. VAS DE PROCESAMIENTO-PRESENTACIN DE ANTGENOS.
Hay dos vas principales de procesamiento y presentacin antignica, dando lugar a una
especializacin de las molculas de MHC:
MHC-I: presenta antgenos endgenos.
MHC-II: presenta antgenos exgenos.
10.2.2.1. LA VA ENDGENA: PRESENTACIN POR MHC-I.
Los estadios del procesamiento de Ag intracelular son los siguientes:

a) Sntesis del Ag tras la infeccin. El Ag tiene que estar localizado en el citosol y debe ser
sintetizado de novo.
b) Proteolisis de protenas en el citosol para producir los pptidos antignicos. Las
proteasas que degradan los Ag situados en el citoplasma, estn codificados en el MHC-II
(LMP) y se encuentran en un orgnulos llamado PROTEOSOMA. Los proteosomas estn

formados por subunidades polipeptdicas unidas no covalentemente, de proteinasas
(endopeptidasas) multicatalticos que se expresan ubicuamente y se hallan en todo el reino
animal. Este complejo es ATP-dependiente y no lisosmico.
c) Transporte de los pptidos al lumen del RE mediado por las protenas TAP, que
estn ancladas en la membrana del RE y Golgi. Es un transporte activo dependiente de ATP,
selectivo de tamao (10 aminocidos del pptido) y secuencia (seleccin). Las TAP estn
codificadas dentro de la regin MHC-II. El transportador selecciona para su paso al lumen
del RER a aquellos pptidos de tamao y caractersticas apropiadas para que luego sean
anclados al surco del MHC-I.
d) Unin de pptidos a molculas de nueva sntesis de MHC-I para formar complejos

MHC-pptido. La unin es especfica segn alelo. Los pptidos antignicos de 8 o 9
aminocidos son los que logran mejor este efecto.
e) Transporte del complejo a la superficie. Las molculas de MHC-I que no unen
pptidos no se transportan a la superficie.
10.2.2.2. LA VA EXGENA: PRESENTACIN POR MHC-II.
Los estadios del procesamiento de Ag extracelular son los siguientes:

a) Captacin de Ag por las CPA sigue un mecanismo de endocitosis mediada por Rc (Rc
de Fc, C3b, de lectinas o Ig de superficie).
b) Internalizacin del Ag en vesculas intracelulares de bajo pH. El tratamiento de las
CPA con agentes lisosomotrpicos (cloroquina o cloruro amnico), alcaliniza las vesculas
endocticas y bloquea la presentacin.
c) Procesamiento del Ag, que incluye desnaturalizacin de la protena y proteolisis
parcial que genera pptidos inmunognicos. Los pptidos generados se unen a las
molculas de MHC-II en vesculas de bajo pH (endosomas).
d) Por otro lado, los complejos Ii:MHC-II viajan por vesculas hasta un tipo de
compartimento cido, donde permanecen unas 2-4 horas. Durante este tiempo la cadena Ii
es rota ordenadamente por proteasas (como la catepsina L) en varios sitios, de modo que la
MHC-II queda unida a un fragmento (llamado CLIP) que sigue cubriendo su surco. En
algn momento de este proceso la vescula ascendente que contiene CLIP:MHC-II se
fusiona con una vescula descendente que contiene pptidos procedentes de
endocitosis/fagocitosis de antgenos exgenos.
e) Posteriormente ocurre el desplazamiento de CLIP, debido a que ahora MHC-II se asocia
con la molcula HLA-DM (se trata de una forma especial de MHC-II dedicada a esta tarea,
y sin capacidad de unir pptidos). Esta misma HLA-DM cataliza ahora la entrada de
pptidos al surco de la MHC-II, con lo que ste queda estabilizado. La Unin de los
pptidos a molculas de MHC-II para formar el complejo MHC-II/pptido especfico de
alelo. La unin es independiente de las protenas TAP.
f) Transporte del complejo a la superficie celular. Finalmente el MHC-II unido al

pptido termina de hacer su viaje ascendente: la vescula membranosa se fusiona con la
membrana celular, quedando expuesto al exterior el complejo MHC-II unido fuertemente al
pptido (el pH neutro del exterior estabiliza an ms la unin).
10.2.2.3. SEPARACIN DE LA VA EXOGENA.
Como es lgico, las clulas presentadoras de antgeno (APC) expresan simultneamente

MHC-II (por ser APC profesionales) y MHC-I (por ser clulas nucleadas somticas).
Cmo evitan estas clulas que las MHC-II se unan al mismo tipo de pptidos endgenos
que deben unirse en el RER a las molculas de MHC-I? La explicacin reside precisamente
en el hecho de que el complejo MHC-II es cubierto a nivel de su surco por la cadena
invariante (Ii), lo que evita que pptidos endgenos procedentes de la ruta citoslica ocupen
dicho surco.
Los pptidos se unen fuertemente a las molculas de clase I. La hendidura de unin es
muy pequea y slo acoge a pptidos cortos (8-10 aminocidos) y les impide unirse a
protenas intactas. La hendidura de unin de las molculas de clase II tiene una
configuracin abierta que permite la unin de protenas intactas o pptidos largos. Esta
permisividad da lugar a un espectro ms amplio de pptidos capaces de unirse a clase II.
El lugar de unin de la molcula de clase II est, hasta llegar a los endosomas, ocupado por
un segmento especfico de la cadena invariante (Ii), la regin CLIP, que impide su
reconocimiento por parte de otras protenas o pptidos residentes o transportados al RE. La
disociacin por proteolisis del complejo MHC-II/Ii libera el sitio de unin que se une
principalmente a protenas parcialmente degradadas. La unin del pptido induce un
cambio conformacional en la estructura del MHC-II que tambin contribuye a su
estabilidad global.
10.2.3. CARACTERSTICAS DE LOS PPTIDOS ASOCIADOS A MOLCULAS DE MHC.
a) Los ligandos naturales de las molculas de MHC-I tienen las caractersticas siguientes:
Son secuencias lineales de 8-10 aminocidos.
Son especficos de alelos y los pptidos que se unen a cada alelo tienen caractersticas
estructurales homlogas.
Los motivos estructurales alelo-especficos se basan en la homogeneidad de los
extremos N- y C-terminal.
b) Los ligandos naturales de las molculas de MHC-II tienen las caractersticas siguientes:
Son ms largos que los asociados a MHC-I (10-25 aminocidos).
No muestran una homogeneidad especfica de alelo tan clara.
Los motivos estructurales alelo-especficos de los pptidos se basan en la homogeneidad
de la regin central del pptido antignico.
10.3. CLULAS IMPLICADAS EN EL PROCESO DE PRESENTACIN DEL
ANTGENO EN LOS ORGANOS LINFOIDES.
rea
Seno subcapsular
CPA
Macrfagos de la zona
marginal
Corteza (folculos y Clulas dendrticas
reas B)
foliculares
Mdula
Macrfagos clsicos
Ag
Polisacridos, Ficoll,
flagelina
Inmunocomplejos
fijadores de
complemento
Mayora de Ag
Persistencia
++++
+++
Paracorteza (rea
T)
Clulas dendrticas
interdigitadas
Ag sensibilizadores de la ++
piel
Los Ag procedentes de la periferia se desplazan por los vasos linfticos (libremente o sobre
las CPA), hasta que llegan a los ganglios linfticos, donde se mueven selectivamente hacia
reas especficas y estimulan a los linfocitos. Algunos Ags permanecen durante mucho
tiempo en los ganglios linfticos, proporcionando una fuente de estimulacin antignica
constante, mientras que otros se degradan con rapidez o se pierden por los linfticos
eferentes.
Las clulas dendrticas interdigitadas (IDC) son:
Las ms efectivas en la activacin de LT CD4+ quiescentes, aunque tambin pueden ser
activadas por LB y macrfagos.
Las IDC captan el Ag por pinocitosis o lo procesan en la superficie celular.
Las IDC son ms eficaces en promover la proliferacin de LT CD4+. Las IDC son las
principales CPA en la respuesta primaria.
Los LB Tienen Ig de superficie que unen Ag, despus es endocitado, y presentado
asociado en HLA-II. Son las CPA ms efectivas cuando la concentracin de Ag es baja
y en la respuesta secundaria.
Artculos relacionados:
Antgenos del MHC
Test: Preguntas tipo test de la seccin de inmunologa humoral y celular
Test: Preguntas de la seccin de molculas que participan en el reconocimiento

antignico
Test: Preguntas tipo test de la seccin de organizacin del sistema inmune
Gentica del MHC
01/06/2009
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Northern blot
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Carece de fuentes o referencias que aparezcan en una fuente

acreditada.
Por favor, edtalo para mejorarlo, o debate en la discusin acerca de

estos problemas.
Estas deficiencias fueron encontradas el 11 de abril de 2011.
Northern blot, hibridacin northern o ensayo northern es una tcnica de deteccin de

molculas de cido ribonucleico (ARN) de una secuencia dada dentro de una mezcla
compleja (por ejemplo, un ARN mensajero para un pptido dado en una muestra de ARN
total). Para ello, se toma la mezcla de ARN y se somete a una electroforesis en gel a fin de
separar los fragmentos de acuerdo con su tamao. Tras esto, se transfiere el contenido del
gel, ya resuelto, a una membrana cargada positivamente en la que se efecta la hibridacin
de una sonda molecular marcada radiactiva o qumicamente.1
El nombre de la tcnica deriva de la que detecta cido desoxirribonucleico (ADN),
denominada Southern blot en honor a su inventor, Edwin Southern (1975). En 1977, James
Alwine, David Kemp y George Stark en la Universidad de Stanford[cita requerida] desarrollaron
el northern blot y lo denominaron empleando el punto cardinal opuesto (northern,
septentrional en ingls, frente al meridional southern).
ndice
1 Procedimiento
o
1.1 Geles
1.2 Sondas
2 Aplicaciones
3 Ventajas y desventajas
4 Northern blot inverso
5 Referencias
6 Vase tambin
Procedimiento
El procedimiento general comienza con la extraccin del ARN total de una muestra de
tejido homogeneizado. El ARNm se puede aislar mediante cromatografa para retener
solamente los ARN con colas de poli(A). Las muestras de ARN se separan entonces
mediante electroforesis en gel. Dada la fragilidad de los geles y la dificultad para que las
sondas penetren en la matriz, las muestras de ARN, separadas por tamao tras la
electroforesis, se transfieren a una membrana de nailon, bien por capilaridad o empleando
un sistema de vaco.
Los sistemas de capilaridad inica se utilizan pra transferir el ARN desde un gel
de electroforesis a una membrana de northern blot.
Una membrana de nailon cargada positivamente es el soporte ms eficaz para realizar la

hibridacin en el northern blot ya que los cidos nucleicos, que estn cargados
negativamente, tienen una alta afinidad por estas membranas. El tampn de transferencia
que se usa en el ensayo suele contener formamida, dado que esta reduce la temperatura de
interaccin de las muestras, lo que evita la utilizacin de altas temperaturas que podran
degradar las molculas de ARN. Una vez que el ARN se ha transferido a la membrana, se
inmoviliza mediante enlaces covalentes formados con la membrana, lo cual se consigue por
medio de luz ultravioleta o calor. Despus del marcaje de la sonda, sta se hibrida con el
ARN en la membrana. Las condiciones experimentales que pueden afectar la eficiencia y
especificidad de la hibridacin estn determinadas por las condiciones inicas, de
viscosidad, la presencia de ARN bicatenario, bases desemparejadas y composicin de las
mismas. Finalmente, la membrana debe lavarse para asegurar que la sonda se ha unido de
forma especfica y para evitar ruido de fondo en las seales emitidas por la misma. Estas
seales pueden cuantificarse mediante densitometra. Para crear controles y poder
asegurarnos de que no se estn mostrando genes que no nos interesen se puede realizar
posteriormente la determinacin empleando chips de ADN o RT-PCR.
Geles
El RNA puede correr en un gel de agarosa para mostrar las subunidades

ribosomales 28s (banda superior) y 18s (banda inferior).
Las muestras de ARN se separan habitualmente en geles de agarosa que contienen

formaldehdo como agente desnaturalizante del ARN. Los geles pueden teirse con
bromuro de etidio u otro agente intercalante y se visualizan generalmente bajo luz
ultravioleta. Tambin pueden usarse geles de poliacrilamida con urea, aunque esto suele
limitarse a fragmentos de ARN o miARN, ya que poseen un tamao de poro ms pequeo,
por lo que el ARN que suele utilizarse no podra desplazarse por el gel. Suele utilizarse
adems un patrn de ARN con muestras de tamao conocido para poder estimar el tamao
de las muestras en estudio.
Sondas
Las sondas para el ensayo northern estn compuestas por cidos nucleicos con una
secuencia complementaria a todo o parte del RNA que nos interesa. Pueden ser de DNA,
RNA o oligonucletidos, con un mnimo de 25 bases complementarias para nuestra
secuencia diana. Las sondas de RNA o ribosondas que se transcriben in vitro ayudan a
prevenir el ruido de fondo. Normalmente, el DNA complementario se sintetiza con
cebadores para la secuencia RNA de inters para actuar como sonda en el Northern blot.
Las sondas requieren ser marcadas bien con istopos radiactivos (32P) o con
quimioluminiscencia, ya sea con fosfatasa alcalina o con peroxidasa de rbano, las cules,
tras la adicin de su sustrato especfico producen una emisin de luz detectable. El marcaje
por quimioluminiscencia puede hacerse de dos formas: Por un lado, la sonda puede estar
unida a la enzima o bien unida a un ligando (p.ej, biotina) para la cual hay un anticuerpo
(avidina o estreptavidina en este caso) est unido a la enzima que revelar el marcaje. Los
Rayos X pueden detectar tanto las seales radioactivas como las quimioluminiscentes,
siendo preferida por muchos investigadores la segunda, dada su mayor rapidez, sensibilidad
y reduccin de los riesgos para la salud que conlleva trabajar con compuestos radioactivos.
Aplicaciones
El ensayo northern permite observar un patrn particular de expresin gentica entre
tejidos, rganos, estadios del desarrollo, niveles de estrs ambiental, infecciones causadas
por patgenos y durante el curso del tratamiento de las mismas. Esta tcnica se ha utilizado
para mostrar la sobreexpresin de oncogenes y la desregulacin de genes oncosupresores en
clulas cancerosas cuando son comparadas con tejidos normales.
Los patrones de expresin obtenidos nos ayudan a conocer las funciones de los genes.
Desde que el RNA se separ por su tamao, las sondas contra el mismo pueden darnos una
idea de su tamao, sugerir ayuste alternativo, o motivos repetidos en la secuencia. La
variacin en el tamao del producto de un gen puede adems indicarnos deleciones o
errores en el proceso de transcripcin. Alterando la sonda podemos conocer la secuencia e
incluso determinar que regin del RNA ha sido delecionada.
Ventajas y desventajas
El anlisis de la expresin gnica puede realizarse por diversos mtodos, como RT-PCR,
ensayos de proteccin de RNasa, chips de ADN, anlisis seriado de expresin gnica as
como el ensayo northern. Los chips de ADN son los ms utilizados y son generalmente
consistentes con los datos obtenidos por el ensayo northern. No obstante, en ocasiones ste
es capaz de detectar pequeos cambios en la expresin de genes que los chips de ADN no
pueden identificar.
Ventajas adicionales de usar el ensayo northern incluyen la capacidad de definir el tamao
de la cadena de ARN, la capacidad de observar los productos del empalme alternativo, la
posibilidad de usar sondas con homologa parcial, la habilidad de medir el tamao y la
calidad del ARN antes de realizar la inmovilizacin en la membrana y finalmente la opcin
de guardar la membrana para ser analizada en repetidas ocasiones en el futuro.2
Un problema comn del ensayo northern es la degradacin de la muestra por ribonucleasas
(endgenas de la muestra o a travs de contaminacin ambiental), que puede evitarse con
una apropiada esterilizacin de los materiales as como el uso de inhibidores de RNasas
como el dietilpirocarbonato.
Northern blot inverso

En esta versin alternativa del mtodo el cido nucleico que acta como sustrato (fijo en la
membrana) est formado por fragmentos aislados de ADN, mientras que la sonda est
formada por ARN obtenido de los tejidos y etiquetada con material radioactivo.
Esta variante es ms compatible con el uso de un chip de ADN, que se ha convertido en
practica comn en la parte final de la dcada de 1990 y la primera del siglo XXI. Ambas
prcticas requieren la fijacin de fragmentos de ADN como su hibridacin con sondas de
ARN celular. De esta manera el proceso inverso, aunque inicialmente era poco comn,
permiti que el northern blot evolucionara hasta tener un lugar en el desarrollo de los
perfiles de expresin gnica.
Referencias
1.
Watson, J, D.; Baker, T. A.; Bell, S. P.; Gann, A.; Levine, M. et Losick,
R (2004). Molecular Biology of the Gene (Fifth edition edicin). San
Francisco: Benjamin Cummings. ISBN 0-321-22368-3.
2.
Streit, S; Michalski, C; Erkan, M; Kleef, J; Friess, H (2009).

Northern blot analysis for detection of RNA in pancreatic cancer cells
and tissues. Nature Protocols 4 (1).
Vase tambin
Southern blot
Western blot
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Ver trabajos relacionados
Mtodos y aplicaciones de la Biologa Molecular en

Biomedicina
Enviado por vladimirruiz
1.
2. Resumen
3.
4. Principios de clonacin molecular
5. Mtodos de anlisis de cidos nucleicos

6. Mapas de restriccin
7. Reaccin en cadena de la polimerasa
8. Secuenciacin nucleotdica del ADN
9. Proyecto del Genoma Humano
10.Campos de aplicacin de la tecnologa del ADN recombinante
11.Conclusiones
12.Referencias bibliogrficas
RESUMEN
Se ofrecen elementos conceptuales sobre algunos de los mtodos de biologa molecular de
ms amplio uso en biomedicina. Las principales aplicaciones de estas tcnicas son en el
diagnstico de enfermedades hereditarias, infecciosas y neoplsicas as como en estudios de
regulacin de la expresin gnica y en la terapia con protenas recombinantes. El Proyecto
del Genoma Humano tom como base para su ejecucin muchas de estas tcnicas, al
tiempo que ha permitido el desarrollo de nuevas metodologas y el perfeccionamiento de
las ya existentes. Con la aplicacin de las tcnicas de biologa molecular en medicina, se ha
abierto tambin la posibilidad de llevar a cabo la terapia gnica en humanos.
Palabras clave: cido desoxirribonucleico (ADN), enzimas de restriccin, reaccin en
cadena de la polimerasa, hibridacin, secuenciacin del ADN, genoma, terapia gnica
INTRODUCCIN
La estructura que conocemos hoy como ADN (cido desoxirribonucleico) fue descrita por
Watson y Crick en el ao 1953. Tras este hecho confluyeron ideas y nuevos enfoques
experimentales que condujeron a lo que ha sido denominado como dogma central de la
gentica molecular, que establece que la informacin gentica fluye del ADN al ARN
(cido ribonucleico) y de este a la protena, y por tanto es el ADN el material que almacena
la informacin gentica en unidades de informacin hereditaria denominadas genes. An
cuando este enunciado es cierto para la mayora de los seres vivientes; se ha comprobado
que en determinados virus la informacin gentica se almacena en forma de ARN y esta
puede ser transferida del ARN al ADN a travs de un proceso de transcripcin inversa
(Moreno, 1996).
Al igual que en las protenas, el ADN y el ARN estn compuestos por repeticiones de
pequeos bloques, pero con la diferencia de que en lugar de aminocidos, se trata de
molculas ms complejas conocidas como nucletidos. Los nucletidos, en el ARN, estn
dispuestos en una sola cadena resultante de la copia del ADN en forma complementaria; en
cambio, en el ADN, los nucletidos se sitan formando dos cadenas orientadas en
direcciones opuestas y enrolladas alrededor de un eje imaginario formando una doble hlice
(Moreno, 1996).
El genoma es la informacin gentica con que cuentan los seres vivos, la cual est
almacenada en los genes y estos a su vez en los cromosomas. Los cromosomas estn
compuestos por ADN y un grupo de protenas llamadas histonas. El genoma humano
contiene cerca de 3 billones de nucletidos (pares de bases, pb) (National Human Genome
Research Institute, 2004) presentes en 46 cromosomas (22 autosomas y 2 cromosomas
sexuales).
En las ltimas dcadas la tecnologa de recombinacin del ADN tambin conocida como
ingeniera gentica, o ms acertadamente recombinacin gentica in vitro, ha revolucionado
la Biologa. El campo de la salud es, uno de los ms beneficiados con el desarrollo de esta
tecnologa. Las investigaciones que se realizan en esta rea estn enfocadas a un
diagnstico oportuno de enfermedades, as como su posible tratamiento a travs de la
terapia con molculas recombinantes e introduccin de genes. Adems, la manipulacin de
genes proporciona una herramienta fundamental para la eliminacin futura de
enfermedades mortales para el hombre (Cerezo & Madrid, 1995). Por estas razones resulta
til que el mdico de asistencia est familiarizado con conceptos bsicos sobre biologa
molecular, su aplicacin en la investigacin biomdica, y en especial con sus posibles
aplicaciones clnicas, conceptos estos que aparecen cada vez con mayor frecuencia en toda
la literatura biomdica, tanto bsica como clnica.
Principios de clonacin molecular
La denominacin "ADN recombinante" se refiere a combinaciones muevas de ADN

creadas entre secuencias o fragmentos de esta molcula (los cuales son de inters por
alguna razn) y molculas de ADN bacteriano (o de otra clase) capaces de duplicarse
indefinidamente en el laboratorio (Freifelder, 1983). En este proceso, primero se obtiene un
fragmento del ADN de inters denominado inserto, el cual se une a otra molcula de ADN
(generalmente de mayor tamao) llamado vector. Posteriormente se lleva a cabo el proceso
de clonacin molecular en s, en el cual se introduce el ADN recombinante en una clula
receptora y esta finalmente al multiplicarse da lugar a nuevas clulas con similares
caractersticas a ella; obtenindose de esta manera lo que se denomina un clon. Por
consiguiente un clon no es ms que un grupo grande de clulas, molculas de ADN o
bacterias que surge de una clula o molcula ancestral y son idnticas a esta; y clonacin es
el proceso que le da origen (Granner, 1992; Plata 1996).
Las clulas receptoras del ADN hbrido pueden ser tanto procariotas como eucariotas y el
proceso de introduccin del mismo se denomina transformacin para las primeras y
transfeccin para las segundas (Cerezo, 1995).
Para llevar a cabo la clonacin molecular se requiere lo siguiente:
a) Una fuente adecuada de ADN: Las fuentes ms importantes de ADN para clonacin
son el ADN genmico (cromosmico) que contiene los genes completos y lo que se conoce
como ADN complementario (ADNc) que se obtiene a partir del ARN mensajero (ARNm)
bajo la accin de la enzima transcriptasa reversa o transcriptasa inversa (Freifelder, 1983 &
Plata, 1996). Esta enzima es capaz de sintetizar ADN a partir del ARN el cual le sirve como
molde. El empleo de una u otra fuente depende de los objetivos que se persigan con el
estudio a realizar.
b) Vectores de clonacin (ADN recombinante): Un vector de clonacin es una molcula
pequea de ADN que puede replicarse de manera autnoma en un husped (clulas
bacterianas o de levaduras), a partir de las cuales es posible aislarlo en forma pura para el
anlisis. Los vectores se utilizan para clonacin porque pueden seguir su desarrollo normal
a pesar de que secuencias adicionales de ADN sean incorporadas en su material gentico; se
autorreplican utilizando la maquinaria enzimtica de la clula husped, y en este proceso,
no se mezclan con el ADN genmico de la clula (Plata, 1996).
Debido a que los vectores de clonacin pueden generar un gran nmero de copias por
clula, ya que los huspedes bacterianos o de levaduras pueden crecer indefinidamente en
el laboratorio, es posible obtener grandes cantidades de secuencias del ADN de inters.
Cierto nmero de vectores se utiliza de modo comn para este propsito, cada uno con
ventajas y limitaciones y dentro de ellos tenemos:
Plsmidos: Son molculas circulares de ADN de doble cadena que se replican de modo
extracromosmico en bacterias, o menos comnmente en levaduras (Lehninger, 1993;
Ministerio de Educacin, 1981). En ellos se encuentran genes que le confieren al organismo
que los posee resistencia a algunos antibiticos, as como genes involucrados en la
produccin de toxinas y la degradacin de productos naturales (Stryer, 1995).
Bacterifagos: Son virus que infectan a las bacterias y estn constituidos, segn su clase,
por un ncleo de ADN o ARN y una cubierta proteica; algunos presentan una cola, y son
incapaces de replicarse autnomamente por lo que necesitan infectar a la clula para poder
hacerlo. Dentro de los fagos ms utilizados como vehculos moleculares de clonacin, se
encuentran el lambda (l ) y sus derivados (Cerezo, 1995; Freifelder, 1983; Granner, 1992;
Moreno, 1996; Plata, 1996; Stryer, 1995).
Csmidos: Son bsicamente plsmidos que emplean la habilidad de las partculas
infecciosas del bacterifago l para "empaquetar" de manera eficiente grandes piezas
lineales de ADN e introducirlas en las clulas bacterianas. Estos vectores se reproducen de
igual manera que los plsmidos en las bacterias (Granner, 1992; Lehninger, 1993).
"Cromosomas artificiales" de levadura: Adems de los vectores anteriormente
mencionados, existe otro tipo que permite clonar hebras de ADN de gran tamao y que se
conocen como cromosomas artificiales de levadura (YAC, del ingls yeast artificial
chromosome). Este tipo de vector es capaz de replicarse en el husped Saccharomyces
cerevisiae (levadura comn usada en panadera) y tiene la estructura semejante a los
cromosomas de levadura normales (Plata, 1996).
c) Enzimas que permitan la escisin o corte en sitios especficos del fragmento de ADN
a clonar y su posterior fusin con el vector: Existe un grupo de enzimas con funciones
diferentes que tienen gran aplicacin en ingeniera gentica; de ellas ya se ha mencionado a
la transcriptasa inversa. Nos referiremos con ms detalle ahora a las endonucleasas de
restriccin o enzimas de restriccin y a la ADN ligasa como tiles herramientas en el
proceso de clonacin de genes.
Endonucleasas de restriccin: Las endonucleasas son enzimas que cortan al ADN en
secuencias especficas dentro de la molcula (contrario a las exonucleasas, que digieren a
las molculas de ADN por sus extremos) (Granner, 1992). Estas enzimas se encuentran en
una amplia variedad de especies bacterianas y su funcin biolgica consiste en reconocer y
romper el ADN ajeno que puede penetrar en la clula (por ejemplo, ADN procedente de
bacterifagos) (Lehninger, 1993). De esta forma estas endonucleasas restringen el
funcionamiento de los fagos en el interior de la bacteria, motivo por el cual originalmente
se les llam enzimas de restriccin (Granner). El ADN propio, sin embargo, no es digerido
porque las bacterias cuentan con un mecanismo que impide que esto ocurra. As, al conferir
la naturaleza este sistema de defensa a las bacterias, otorg tambin a los cientficos un
arsenal de enzimas altamente especfico para manipular el ADN (Granner; Lehninger;
Merino & Gamba, 1996).
ADN ligasa: La ADN ligasa es una enzima que tiene la capacidad de formar enlaces
fosfodister en una cadena de ADN rota, pudiendo unir covalentemente ADNs de diferentes
orgenes para formar molculas hbridas. Existen diversos mtodos en los que se aprovecha
la accin de esta enzima para la unin del fragmento a clonar con el vector; la seleccin de
uno u otro depende de las caractersticas de los extremos de ambas molculas de ADN
(Cerezo & Madrid, 1995).
d) Mtodos de transformacin o transfeccin celular: Una vez obtenido el ADN

recombinante, el prximo paso es introducirlo dentro de una clula husped que le ofrezca
la maquinaria necesaria para su autorreplicacin. Como no es objetivo de este trabajo
explicar en detalles cada uno de los mtodos que existen para estos fines, nos limitaremos
slo a mencionar algunos de los ms empleados que son: electroporacin, transfeccin
mediada por calcio-fsforo o DEAE-dextrn, empleo de polibreno, fusin de protoplastos,
empleo de liposomas, microinyeccin directa al ncleo, uso de virus (Cerezo & Madrid,
1995; Freifelder, 1983; Plata, 1996; Lehninger, 1993; Stryer, 1995), entre otros.
e) Mtodos para analizar los clones resultantes hasta la identificacin del que contiene
el gen de inters: Un importante paso en el proceso de clonacin es la identificacin de
aquel clon o clones que contienen el ADN recombinante. An en las mejores condiciones
los plsmidos se mantienen de forma estable slo en una minora de la poblacin
bacteriana. Para identificar estos transformantes se emplean varios mtodos, los cuales
tambin solamente sern mencionados. As tenemos los ensayos de hibridacin (Freifelder,
1983; Lehninger, 1993; Mercado & Gamba, 1997; Plata, 1996), los mtodos inmunolgicos
(anticuerpos radiactivos, inmunoprecipitacin) (Freifelder; Plata), el empleo de marcadores
de seleccin (Freifelder ), etc.
Mtodos de anlisis de cidos nucleicos.
Hibridacin molecular.
La hibridacin molecular es uno de los pilares de la mayor parte de las metodologas que se
utilizan en el laboratorio de biologa molecular. Un grupo de estas tcnicas se ha diseado
para identificar determinadas secuencias en los cidos nucleicos.
La hibridacin se refiere al apareamiento especfico que ocurre entre cadenas de cidos
nucleicos con secuencias complementarias, proceso que es anlogo a la reaccin antgenoanticuerpo, pero con la diferencia de que en la hibridacin en lugar de anticuerpos se
emplean las llamadas sondas (Mercado & Gamba, 1997). Las sondas no son ms que
fragmentos cortos de ADN o ARN sintetizados in vitro y que se marcan con sustancias
radiactivas fluorescentes o de otro tipo a fin de hacer posible su posterior deteccin y de
esta manera la identificacin de la secuencia de ADN o ARN de inters (Cerezo & Madrid,
1995; Mercado & Gamba).
A continuacin se sealan diferentes procedimientos de laboratorio que utilizan el principio
de hibridacin y en los que la variacin est dada por el tipo de cido nucleico utilizado, el
soporte en que se lleva a cabo la hibridacin y la forma de colocar los cidos en la
membrana.
Southern blot: Es una tcnica empleada para detectar secuencias especficas de ADN. Para
llevar a cabo hibridaciones de este tipo, se asla el ADN de un tejido o lnea celular, luego
se purifica, y se digiere con enzimas de restriccin especficas. Los fragmentos generados
se separan mediante electroforesis y despus son transferidos a la membrana que sirve de
soporte (gel de agarosa). Este proceso se lleva a cabo colocando el gel de agarosa sobre
papel filtro previamente remojado en una solucin llamada de transferencia (solucin salina
concentrada). A continuacin se sita la membrana sobre el gel y encima de esta una pila de
papel filtro seca, y por capilaridad la solucin de transferencia es atrada a la pila de papel
filtro, arrastrando consigo al ADN hacia la membrana, donde queda inmovilizado
conservando la misma posicin relativa que ocupaba en el gel. Luego, el ADN puede ser
hibridado en la membrana con una sonda marcada (Cerezo & Madrid, 1995; Correa-Rotter
& Gamba, 1997).
Debido a que la transferencia del ADN del gel a la membrana se produce por capilaridad,
con el mismo principio utilizado por aos para limpiar manchas con papel secante, el
proceso se conoce en ingls como blotting; Southern propuso utilizar el trmino blot
(secado) o blotting para referirse a esta tcnica y actualmente se conoce como Southern blot
(Mercado & Gamba, 1997).
Esta tcnica se ha empleado para el diagnstico y caracterizacin de diversas
inmunodeficiencias, la distrofia muscular de Duchenne, la hipoplasia adrenal congnita, la
deficiencia de glicerol-quinasa, la distrofia miotnica severa y en anlisis de mutaciones de
genes en clulas B de leucemia linfoblstica crnica, entre otras enfermedades (Cerezo &
Madrid, 1995).
Northern blot: Es una variante del mtodo anterior en el que en lugar de utilizar ADN
como sustrato de estudio, se emplea ARN. El procedimiento que se sigue es similar al
Southern blot y por analoga con este se le conoce como Northern blot. Esta tcnica se ha
aplicado en estudios de la modulacin de la sntesis de interleucina 6 en pacientes con
artritis reumatoide, en el anlisis de expresin de receptores que participan en la sntesis de
molculas en cultivos celulares, en anlisis de mutaciones y alteraciones del RNAm de
enzimas, y en la regulacin de la expresin gnica de marcadores moleculares de clulas
leucmicas humanas y molculas del reconocimiento inmunolgico (Cerezo & Madrid,
1995).
Leer ms: http://www.monografias.com/trabajos20/biologia-molecular/biologiamolecular.shtml#ixzz3g0DM5E4n
https://prezi.com/v1fsfwc3a8b7/turbidimetria-nefelometria/
En esta pgina
Qu son los marcadores de tumores?
Cmo se utilizan los marcadores de tumores en el tratamiento del cncer?
Cmo se miden los marcadores de tumores?
Ofrece el Instituto Nacional del Cncer pautas para el uso de los marcadores
tumorales?
Cules marcadores de tumores se usan actualmente y para qu tipos de cnceres?
Pueden los marcadores de tumores usarse como exmenes selectivos de deteccin

de cncer?
Qu clase de investigacin se est haciendo para formular marcadores de tumores

ms precisos?
Qu son los marcadores de tumores?

Los marcadores de tumores son sustancias producidas por las clulas cancerosas o por otras
clulas del cuerpo como respuesta al cncer o a ciertas afecciones benignas (no cancerosas).
La mayora de los marcadores de tumores son producidos tanto por las clulas normales
como por las clulas cancerosas; sin embargo, se producen en concentraciones ms altas en
enfermedades cancerosas. Estas sustancias pueden encontrarse en la sangre, en la orina, en
la materia fecal, en tejido de tumores o en otros tejidos o lquidos del cuerpo de algunos
pacientes con cncer. La mayora de los marcadores de tumores son protenas. Sin embargo,
ms recientemente, los patrones de expresin de los genes y los cambios de ADN han
empezado a usarse como marcadores de tumores. Los marcadores del segundo tipo se
evalan especficamente en el tejido tumoral.
Hasta ahora, se han caracterizado y se usan en la clnica mdica ms de 20 diferentes
marcadores de tumores. Algunos estn asociados con un solo tipo de cncer, mientras que
otros estn asociados con dos o ms tipos de cncer. No existe un marcador de tumores
"universal" que pueda detectar cualquier tipo de cncer.
Hay algunas limitaciones para el uso de marcadores de tumores. Algunas veces, situaciones
benignas pueden causar que aumenten las concentraciones de algunos marcadores de
tumores. Adems, no todas las personas que tienen un tipo particular de cncer tendrn una
concentracin elevada de un marcador de tumores asociado con ese cncer. Y, an ms, no
se han identificado los marcadores de tumores para cada tipo de cncer.
Cmo se utilizan los marcadores de tumores en el

tratamiento del cncer?
Los marcadores de tumores se usan para ayudar a detectar, a diagnosticar y a controlar
algunos tipos de cncer. Aunque una concentracin elevada de un marcador de tumores
puede sugerir la presencia de cncer, este hecho solo no es suficiente para diagnosticar
cncer. Por lo tanto, las mediciones de los marcadores tumorales se combinan en general
con otras pruebas, como con biopsias, para diagnosticar el cncer.
Se pueden medir las concentraciones de los marcadores tumorales antes del tratamiento
para que los mdicos puedan planificar una terapia adecuada. En algunos tipos de cncer, la
concentracin de un marcador de tumores refleja el estadio (extensin) de la enfermedad y
el pronstico del paciente (resultado probable o curso de una enfermedad). Ms
informacin sobre estadificacin est disponible en la hoja informativa Estadificacin del
cncer.
Los marcadores de tumores pueden tambin medirse peridicamente durante la terapia para
cncer. Un descenso de la concentracin de un marcador de tumores o el regreso a la
concentracin normal del marcador puede indicar que el cncer est reaccionando al
tratamiento, mientras que si no hay cambio o hay un aumento puede indicar que el cncer
no est reaccionando.
Los marcadores de tumores pueden tambin medirse despus de que haya terminado el
tratamiento para revisar la recurrencia (el regreso del cncer).
Cmo se miden los marcadores de tumores?

Un doctor toma una muestra de tejido del tumor o de lquido del cuerpo y lo enva a un
laboratorio, en donde se usan varios mtodos para medir la concentracin del marcador de
tumores.
Si el marcador de tumores se usa para determinar si el tratamiento est funcionando o si hay
una recurrencia, la concentracin se medir en muchas muestras tomadas en un perodo de
tiempo. En general, estas mediciones "en serie", que indican que la concentracin de un
marcador est en aumento, que est igual, o que est disminuyendo, son ms importantes
que una sola medicin.
Ofrece el Instituto Nacional del Cncer pautas para el

uso de los marcadores tumorales?
No, el NCI no tiene pautas o directrices de ese tipo. Sin embargo, algunas organizaciones
nacionales e internacionales s tienen pautas para el uso de marcadores de tumores en
algunos tipos de cncer:
La Asociacin Estadounidense de Oncologa Clnica (ASCO) ha publicado

pautas para la prctica clnica sobre una variedad de temas, incluso
sobre marcadores de tumores para cncer de seno, para cnceres
gastrointestinales, para cncer de testculo y tumores extragonadales de
clulas germinativas en hombres. Estas pautas, llamadas What to Know:
ASCO's GuidelinesNotificacin de salida, estn disponibles en el sitio web
de ASCO.
La Academia Nacional de Bioqumica Clnica publica pautas de prctica

mdica de laboratorio, incluso Use of Tumor Markers in Clinical Practice:
Quality RequirementsNotificacin de salida, la cual se enfoca en el uso
apropiado de los marcadores de tumores para cnceres especficos.
Cules marcadores de tumores se usan actualmente y

para qu tipos de cnceres?
Varios marcadores de tumores se usan actualmente para una amplia gama de tipos de
cncer. Aunque es posible hacer el anlisis de la mayora de esos marcadores en
laboratorios que satisfacen las normas establecidas por Clinical Laboratory Improvement
Amendments, algunos no pueden analizarse y, por lo tanto, tal vez se consideren
experimentales. La lista de abajo contiene los marcadores de tumores que se usan
ordinariamente en la actualidad.
Activador del plasmingeno urocinasa (uPA) e inhibidor del activador del plasmingeno
(PAI-1)
Tipo de cncer: Cncer de seno
Tejido analizado: Tumor
Cmo se us: Para determinar la malignidad del cncer y guiar el

tratamiento
Alfa-fetoprotena (AFP)
Tipos de cncer: Cncer de hgado y tumores de clulas germinativas
Tejido analizado: Sangre
Cmo se us: Para ayudar a diagnosticar cncer de hgado y vigilar la

reaccin al tratamiento; para evaluar el estadio, el pronstico y la
reaccin al tratamiento de tumores de clulas germinativas
Anlisis de mutacin del EGFR
Tipo de cncer: Cncer de pulmn de clulas no pequeas
Cmo se us: Para ayudar a determinar el tratamiento y el pronstico
Anlisis de mutacin del KRAS
Tipos de cncer: Cncer colorrectal y cncer de pulmn de clulas no

pequeas
Cmo se us: Para determinar si el tratamiento con un tipo especfico de

terapia dirigida es el adecuado
Antgeno carcinoembrionario (CEA)
Tipos de cncer: Cncer colorrectal y cncer de seno
Cmo se us: Para revisar si el cncer colorrectal se ha diseminado; para

buscar la recidiva del cncer de seno y evaluar la reaccin al tratamiento
Antgeno prosttico especfico (PSA)
Tipo de cncer: Cncer de prstata
Cmo se us: Para ayudar en el diagnstico, evaluar la reaccin al

tratamiento y buscar la recurrencia (recidiva)
CA15-3/CA27.29
Cmo se us: Para evaluar si el tratamiento est funcionando o si la

enfermedad ha regresado
CA19-9
Tipos de cncer: Cncer de pncreas, cncer de vescula biliar, cncer de

conducto biliar y cncer gstrico
Cmo se us: Para evaluar si el tratamiento est funcionando
CA-125
Tipo de cncer: Cncer de ovarios
Cmo se us: Para ayudar en el diagnstico, en la evaluacin de la

reaccin al tratamiento y en la evaluacin de la recidiva
Calcitonina
Tipo de cncer: Cncer medular de tiroides
Cmo se us: Para ayudar en el diagnstico, para revisar si el

tratamiento est funcionando y evaluar la recidiva
CD20
Tipo de cncer: Linfoma no Hodgkin
Cmo se us: Para determinar si el tratamiento con una terapia dirigida

es el adecuado
Cromogranina A (CgA)
Tipo de cncer: Tumores neuroendocrinos
Cmo se us: Para ayudar en el diagnstico, en la evaluacin de la

reaccin al tratamiento y en la evaluacin de la recidiva
Cromosomas 3, 7, 17 y 9p21
Tipo de cncer: Cncer de vejiga
Tejido analizado: Orina
Cmo se us: Para ayudar en la vigilancia de recurrencia (recidiva) de

tumores
Fibrina y fibringeno
Cmo se us: Para vigilar el avance y la reaccin al tratamiento
Fragmentos de citoqueratina 21-1
Tipo de cncer: Cncer de pulmn
Cmo se us: Para ayudar en la vigilancia de recurrencia (recidiva)
Gen de fusin BCR-ABL
Tipo de cncer: Leucemia mieloide crnica
Tejido analizado: Sangre y mdula sea
Cmo se us: Para confirmar el diagnstico y vigilar el estado de la

enfermedad
Gonadotropina corinica humana (Beta-hCG)
Tipos de cncer: Coriocarcinoma y cncer de testculo
Tejido analizado: Orina o sangre
Cmo se us: Para evaluar el estadio, el pronstico y la reaccin al

tratamiento
HE4
Cmo se us: Para evaluar el avance de la enfermedad y vigilar la

recurrencia (recidiva)
HER2/neu
Tipos de cncer: Cncer de seno, cncer de estmago y cncer de

esfago
Cmo se us: Para determinar si el tratamiento con trastuzumab es el

adecuado
Inmunoglobulinas
Tipos de cncer: Mieloma mltiple y macroglobulinemia de Waldenstrm
Tejido analizado: Sangre y orina
Cmo se us: Para ayudar a diagnosticar la enfermedad, evaluar la

reaccin al tratamiento y buscar si ha habido recurrencia (recidiva)
KIT
Tipos de cncer: Tumor del estroma gastrointestinal y melanoma mucoso
Cmo se us: Para ayudar en el diagnstico y determinar el tratamiento
Lactato deshidrogenasa
Tipo de cncer: Tumores de clulas germinativas
Cmo se us: Para evaluar el estadio, el pronstico y la reaccin al

tratamiento
Microglobulina -2 (B2M)
Tipos de cncer: Mieloma mltiple, leucemia linfoctica crnica y algunos

linfomas
Tejido analizado: Sangre, orina o lquido cefalorraqudeo
Cmo se us: Para determinar el pronstico y vigilar la reaccin al

tratamiento
Mutacin BRAF (V600E)
Tipos de cncer: Melanoma cutneo y cncer colorrectal
Cmo se us: Para pronosticar la reaccin a terapias dirigidas
Protena de matriz nuclear 22 (NMP22)
Cmo se us: Para vigilar la reaccin al tratamiento
Receptor de estrgeno (ER) y receptor de progesterona (PR)
Cmo se us: Para determinar si el tratamiento con terapia hormonal

(como con tamoxifeno) es adecuado
Reordenacin de genes ALK
Tipos de cncer: Cncer de pulmn de clulas no pequeas y linfoma

anaplsico de clulas grandes
Cmo se us: Para ayudar a determinar el tratamiento y el pronstico
Sello de 5 protenas (Ova1)
Cmo se us: Para evaluar la masa plvica antes de operacin para lo

que se sospecha ser cncer de ovario
Sello de 21 genes (Oncotype DX)
Cmo se us: Para evaluar el riesgo de recurrencia (recidiva)
Sello de 70 genes (Mammaprint)
Cmo se us: Para evaluar el riesgo de recurrencia (recidiva)
Tiroglobulina
Tipo de cncer: Cncer de tiroides
Cmo se us: Para evaluar la reaccin al tratamiento y buscar la

recurrencia (recidiva)
Pueden los marcadores de tumores usarse como

exmenes selectivos de deteccin de cncer?
Ya que los marcadores de tumores pueden usarse para evaluar la reaccin de un tumor al
tratamiento y para el pronstico, los investigadores han esperado que los marcadores
podran ser tiles tambin como exmenes de deteccin que tengan la finalidad de detectar
el cncer inicial, antes de que haya sntomas. Para que un examen de deteccin sea til,
deber tener una sensibilidad muy alta (capacidad para identificar correctamente a la gente
que tiene la enfermedad) y especificidad (capacidad para identificar correctamente a la
gente que no tiene la enfermedad). Si un examen es altamente sensible, identificar a la
mayora de la gente que tiene la enfermedad; es decir, tendr muy pocos resultados
negativos falsos. Si un examen es altamente especfico, solo un nmero pequeo de gente
tendr un resultado positivo pero que no tiene la enfermedad; en otras palabras, tendr muy
pocos resultados positivos falsos.
Aunque los marcadores de tumores son tiles en extremo para determinar si un tumor est
reaccionando al tratamiento o para evaluar si el cncer ha regresado, ningn marcador de
tumores que ha sido identificado hasta ahora es suficientemente sensible o especfico para
usarse por s mismo como examen de deteccin de cncer.
Por ejemplo, el anlisis del antgeno prosttico especfico (PSA), el cual mide la
concentracin de PSA en la sangre, se usa con frecuencia para examinar a hombres para
buscar cncer de prstata. Sin embargo, una concentracin mayor de PSA puede ser
causada por afecciones benignas de prstata as como por cncer de prstata, y la mayora
de los hombres que tienen una concentracin elevada de PSA no tienen cncer de prstata.
Los resultados iniciales de dos estudios grandes aleatorizados, controlados, el Estudio de
Exmenes de Deteccin de Cncer de Prstata, de Pulmn, Colorrectal y de Ovarios,
PLCO, y el Estudio Europeo Aleatorizado de Exmenes de Deteccin de Cncer de Prstata
indicaron que las pruebas de PSA a lo ms llevaron a solo una reduccin pequea del
nmero de muertes por cncer de prstata. Adems, no est claro si los beneficios del
examen de deteccin con PSA superan los perjuicios de las pruebas de diagnstico y de los
tratamientos resultantes por cnceres que en muchos casos nunca habran de poner en
peligro la vida de un hombre.
En forma semejante, los resultados del estudio PLCO indicaron que el CA-125, un
marcador de tumores que a veces est elevado en la sangre de mujeres con cncer de
ovarios pero que puede tambin estar elevado en mujeres con enfermedades benignas, no es
suficientemente sensible o especfico para que se use junto con la ecografa transvaginal
para buscar cncer de ovarios en mujeres con un riesgo ordinario de la enfermedad. Un
anlisis de 28 marcadores potenciales de cncer de ovarios en la sangre de mujeres que ms
tarde presentaron cncer de ovarios encontr que ninguno de esos marcadores se
desempe tan bien como el CA-125 en detectar la enfermedad en mujeres con riesgo
ordinario.
Qu clase de investigacin se est haciendo para

formular marcadores de tumores ms precisos?
Los investigadores de oncologa acuden a la proteinmica (el estudio de la estructura,
funcin y patrones de expresin de las protenas) con la esperanza de formular nuevos
biomarcadores que puedan usarse para identificar enfermedades en sus estadios iniciales,
para predecir la posibilidad de recurrencia del cncer despus de que haya terminado el
tratamiento.
Los cientficos estn evaluando tambin los patrones de expresin gnica en su capacidad
para ayudar a determinar el pronstico de un paciente o su reaccin a la terapia. Por
ejemplo, el estudio TAILORx patrocinado por el NCI asign a mujeres con cncer de seno
con receptor de hormonas y ganglios linfticos negativos que se han sometido a ciruga
para tratamientos diferentes basndose en su puntuacin de recidiva de la prueba Oncotype
DX. Uno de los objetivos del estudio es determinar si las mujeres cuya puntuacin indica
que tienen un riesgo intermedio de recurrencia (recidiva) se beneficiarn al aadirse
quimioterapia a la terapia hormonal o si tales mujeres pueden evitar la quimioterapia sin
peligro. El estudio ha reclutado el nmero requerido de participantes que sern observadas
durante varios aos antes de que se disponga de resultados.
La Red de Investigacin de Deteccin Precoz est formulando y probando algunos
biomarcadores con base en la genmica y la proteinmica.
El Programa para la Evaluacin de Pruebas Clnicas de Cncer (PACCT), una iniciativa del
Programa de Diagnstico del Cncer de la Divisin de Diagnstico y Tratamiento del
Cncer del NCI, ha sido concebido para asegurar que la formulacin de las pruebas de
laboratorio futuras es eficiente y eficaz. El grupo estratgico de PACCT, el cual incluye a
cientficos de universidades, de la industria y del NCI, est concibiendo los criterios para
evaluar los marcadores que estn listos para una formulacin ulterior. El objetivo de
PACCT es tambin mejorar el acceso a especmenes humanos, hacer reactivos estndar y
controlar los materiales, as como apoyar los estudios de validacin. Un nuevo programa, el
Programa de Formulacin de Valoracin Clnica, permite que el NCI ayude en la creacin
de valoraciones prometedoras que puedan predecir cul tratamiento pueda ser mejor o que
ayude a indicar la malignidad de un cncer en particular.
Bibliografa selecta
1. Bigbee W, Herberman RB. Tumor markers and immunodiagnosis. In: Bast
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[PubMed Abstract]
Recursos relacionados
Anlisis del antgeno prosttico especfico (PSA)
Estadificacin del cncer
Resultados de pruebas de laboratorio
Revisin: 7 de diciembre de 2011
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Institutos Nacionales de la Salud
Instituto Nacional del Cncer
GobiernoUSA.gov
NIH ... Transformacin de Descubrimientos en Salud
10.2
Tcnicas De Hibridacin
The Southern blot es un mtodo

para sondear la presencia de una secuencia especfica de ADN en una muestra
de ADN. Muestras de ADN antes o despus de la digestin de la enzima de
restriccin se separan por electroforesis en gel y luego transferidas a una
membrana por Blot a travs de la accin capilar. La membrana entonces est
expuesta a una sonda de ADN etiquetada que tiene una secuencia base de
complemento a la secuencia de ADN de inters. Protocolos ms originales
utilizan etiquetas radiactivas, ahora existen alternativas sin embargo no

radiactivas. Southern Blot es menos utilizada en Ciencias de laboratorio debido
a la capacidad de otras tcnicas, tales como PCR, para detectar secuencias
especficas de ADN de muestras de ADN. Estas manchas se siguen utilizando
para algunas aplicaciones, sin embargo, como el nmero de copia de transgen
en ratones transgnicos, o en la ingeniera de lneas de clulas madre
embrionarias de gene knockout de medicin.
Western Blot
Anticuerpos contra la mayora de las protenas se puede crear inyectando
pequeas cantidades de la protena en un animal como un ratn, conejos,
ovejas o burro (anticuerpos policlonales) o producido en cultivos celulares
(anticuerpos monoclonales). Estos anticuerpos pueden utilizarse para una
variedad de tcnicas analticas y preparativas.
En western Blot, protenas en

primer lugar se separan por tamao en un gel fino entre dos placas de vidrio
en una tcnica conocida como SDS-PAGE (electroforesis en gel de
poliacrilamida sodio Dodecil sulfato). Las protenas en el gel luego son
transferidas a un PVDF, nitrocelulosa, nylon o otra membrana de soporte. Esta
membrana, a continuacin, puede ser sondeada con soluciones de anticuerpos.
Los anticuerpos que se unen especficamente a la protena de inters, a
continuacin, pueden visualizarse por una variedad de tcnicas, incluyendo
productos coloreados, quimioluminiscencia o autorradiografa.
Northern Blot
The northern blot se utiliza para estudiar los patrones de expresin de un tipo
especfico de la molcula de ARN como comparacin relativa entre un conjunto
de diferentes muestras de ARN. Es esencialmente una combinacin de
desnaturalizacin electroforesis en gel RNA y una mancha. En este proceso de
ARN est separado basado en tamao y es transferido a una membrana que
luego es sondeada con un etiquetado como complemento de una secuencia de
inters. Los resultados pueden visualizarse a travs de una variedad de formas
dependiendo de la etiqueta utilizada; Sin embargo, la mayora como resultado
la revelacin de bandas que representa el tamao del ARN detectado en la
muestra. La intensidad de estas bandas est relacionada con la cantidad del
objetivo del RNA en las muestras analizadas. El procedimiento es utilizado
comnmente para estudiar cundo y cunto expresin gnica ocurre midiendo
cunto de ese ARN est presente en diferentes muestras. Es una de las
herramientas ms bsicas para determinar en qu momento y bajo qu
condiciones, algunos genes se expresan en tejidos vivos.
Publicado por carlos Gonzalez en 17:54 No hay comentarios:

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10.1 Mtodos de purificacin
Todoslostiposdemacromolculasbiolgicastienenunacaractersticaencomnquevaapermitir
eldesarrollodeunmtododeseparacinespecificoparaellas.Estosmtodosdebenser
completamentebiocompatiblesparaquepuedanserposteriormentetilesalinvestigadory,al
mismotiempo,losuficientementepotentesparapermitirelaislamientodelamolculadeseadade
entreunmezclacomplejademulticomponentesquehacenlasvecesdecontaminantesdenuestra
molculaencuestin.Enestesentido,lacromatografaencolumnahademostradoseruna
herramientamuytilyaquesedisponedevariosmecanismosdeseparacin.Lamodificacindelas
diferentesfasesestacionariasyaexistentes,ascomoeldesarrollodenuevaseslabaseprincipal
paralaobtencindelascondicionesnecesariasparalarpidayeficienteseparacinde
biomolculas.
Cromatografa de penetrabilidad. El
componente bsico es una columna empaquetada con una matriz en gel
especial, que son partculas de un polmero orgnico de estructura
tridimensional, que originan una red de poros hidroflicos equilibrados con un
tampn acuoso. La tcnica consiste en que las molculas de gran tamao no
penetran por los poros del polmero, por lo que migran mucho ms
rpidamente que las de menor tamao que s son capaces de penetrar por los
poros de la matriz.
Cromatografa de intercambio inico. Es el mtodo ms utilizado para la

separacin de cidos nucleico. El mecanismo bsico es el intercambio
reversible de los iones en solucin con los grupos funcionales unidos
covalentemente a una fase estacionaria insoluble llamada resina. Por ejemplo,
un cido nucleico con carga negativa a pH 7,0 se unir a un intercambiador
inico con grupos cargados positivamente, pero eluir de la columna al
cambiar al pH del tampn (tampn de elucin) ya que los iones del tampn de
elucin interaccionan con los grupos cargados del cido nucleico o del
intercambiador inico, respectivamente; primero eluirn de la columna las
molculas cargadas positivamente que no se unen a la fase estacionaria y
posteriormente, al aadir el tampn de elucin, eluirn las molculas con poca
carga negativa neta y luego las de mayor carga negativa neta.

Unidad 10
SEP
SNEST
DGEST
INSTITUTO TECNOLGICO DE CIUDAD ALTAMIRANO
UNIDAD 10 TCNICAS DE LA BIOLOGA MOLECULAR
Nombre del Alumno: Gonzalez Aguirre Carlos Alberto
Nmero de Control: 09930040
Carrera: Lic. Biologa
Ciudad Altamirano, Gro. Mxico. JUNIO del 2012
Introduccin.
En principio se denomina as a todas las tcnicas de laboratorio

que se usan para aislar ADN o extraerlo en alta pureza,
visualizarlo para ver su estado, cortarlo y pegarlo (nacimiento de
la Ingeniera gentica), amplificar una regin en una enorme
cantidad de molculas (clonacin de fragmentos en bacterias u
otros vectores como virus y PCR), corte de una determinada
regin con enzimas de restriccin para ver si por una mutacin
se gana o se pierde un sitio de restriccin (anlisis de
mutaciones por RFLP o Restriction fragment lengt
polymorphism), que siginifica: diferencias en los tamaos de los
fragmentos de restriccin debido a polimorfismos en el ADN
entre otras.
Todas estas tcnicas tiene diversas aplicaciones generalmente
en el diagnstico de enfermedades hereditarias, bsqueda de
alelos ms o menos frecuentes asociados a una caracterstica
que nos interesa seleccionar, diagnstico de contaminacin
bacteriana en alimentos (deteccin de Escherichi coli 0257,
cepas difrenctes de Salmonellas, Mycobacterium sp) diagnstico
viral o de infeccin viral (HIV, Hpatitis C, PIF, otros), seleccin de
marcadores moleculares para asistir en el mejoramiento
gentico de una especie, test de paternidad, diganstico de
identidad forense, etc.
Objetivo
ConoceryaplicarlasbasesmolecularesdelADNparasumanipulacinyenelmejoramiento
genticodeespeciesdeintersalimenticio,mdicoyecolgico.
Tarea...! Unidad 9
LAS BACTERIAS DE DIFERENTES ESPECIES PUEDEN COMPARTIR PLSMIDOS
Las bacterias de diferentes especies SI pueden compartir plsmidos, por los

estudios realizados por cientficos de Suecia.
Cientficos de Suecia han descubierto que la parte de cido desoxirribonucleico

(ADN) bacteriano que normalmente porta la resistencia a antibiticos posee la
capacidad de transmitirse entre distintos tipos de bacteria y adaptarse a
especies bacterianas muy distintas. Los descubrimientos, presentados en la
revista Nature Communications, arrojan luz sobre cmo los plsmidos IncP-1
pueden aumentar la posibilidad de que se produzca una propagacin de genes.
Los avances mdicos proporcionan ms y mejores tratamientos para aquellos

que los necesitan, pero cada vez ms bacterias presentan resistencia a los
antibiticos ms comunes.
Nuestros resultados muestran que los plsmidos del grupo IncP-1 han existido
y se han adaptado a bacterias muy distintas, explica Peter Norberg del Instituto
de Biomedicina de la Universidad de Gotemburgo, autor principal del estudio.
Tambin se han recombinado, lo que implica que un nico plsmido puede
considerarse como un intrincado rompecabezas de genes, de tal modo que
cada uno se ha adaptado a distintas especies de bacterias.
Cita Bibliografica:
http://cordis.europa.eu/fetch?
CALLER=ES_NEWS&ACTION=D&SESSION=&RCN=33376
martes, 5 de junio de 2012

Conclusion unidad 9
Concluimos en esta unidad 9 que, la transduccin, que es un proceso por el

cual las bacterias transfieren DNA a otro bacteria receptora, utilizando fagos.
La conjugacin, es el proceso por el cual bacterias intercambian plsmidos F, a
travs de estructuras llamadas pilis. Y por ultimo la transformacin es el
mecanismo por el cual una bacteria puede tomar DNA del medio. Estos son los
procesos por el cual las bacterias pueden recombinan sus genes y se vuelven
ms adaptables al medio.
Tarea..! unidad 8
Una dinmica de co-regulador complejo controla el promotor de BRCA1
Se han tratado clulas MCF-7 con 10 nM de estradiol durante 24 horas y se encontr un nio
de seis a siete veces mayor en tanto madura y unspliced ARN (incipiente) BRCA1 Por
inmunoprecipitacin de cromatina (CHIP), encontramos que el promotor de BRCA1muestra
la precarga de un preparado de RNA polimerasa II (Pol II) y P300 histona acetiltransferasa
(HAT) complejo sin la estimulacin del estrgeno, lo cual es consistente con los promotores de
muchos de los ltimos estudios del genoma completo. Ni P300 o Pol II montaje ni activacin
asociada a la metilacin de histonas (H3K4Me3) un aumento sustancial de sus niveles
elevados de estrgenos despus de la estimulacin, aunque la unin por el factor de
transcripcin CREB aument ms en particular Notablemente, en contraste con Pol
II, p300 y H3K4Me3 histonas, tanto histona H4 y acetilacin H3 sustancialmente aumentado
Estas observaciones sugieren que un gran paso reglamentario despus de la induccin de
estrgenos en el promotor de BRCA1 incluye eventos relacionados a un aumento de promotor
proximal acetilacin de las histonas que se producen despus de la contratacin inicial de
la P300 y la maquinaria de transcripcin basal.
Literatura
Citada:
http://books.google.com.mx/books?
id=zg9DdX1X1IoC&pg=PA35&dq=control+genetico+del+gen+BRCA&hl=es&s
a=X&ei=fVLNT4vREuqQ2AWV4OSPAg&ved=0CDgQ6AEwAA#v=onepage&q=c
ontrol%20genetico%20del%20gen%20BRCA&f=false
lunes, 4 de junio de 2012

9.2.2 Qumicos
Basados en la formacin de complejos que las clulas sean capaces de adquirir

e incorporar, bien sea directamente mediante la ruta endoctica o a las
membranas.
Actualmente uno de los campos de estudio ms importantes por lo que se
refiere a les tcnicas de transferencia de genes, son los estudios realizados con
los llamados vectores sintticos, con tal de evitar los problemas derivados de la
utilizacin de virus para la transferencia de genes.
Los vectores sintticos son de produccin sencilla, altamente estables, y se

pueden conseguir grandes construcciones.
Mtodo del fosfato clcico. Basado en la obtencin de un precipitado entre

el cloruro de calcio y el DNA en una solucin salina de fosfatos. En esta
situacin
co-precipitan
formando
unos
agregados
que
son
endocitados/fagocitados por las clulas. Aparentemente el agregado con calcio
protege al DNA de la degradacin por las nucleasas celulares. El tamao y la
calidad del precipitado es crtico para el xito del proceso, que se ve afectado
por factores tales como pequeos cambios en el pH de la solucin, etc...
Mtodo del DEAE dextrano. Basado en la obtencin de complejos entre la

resina DEAE y el DNA. Los polmeros de DEAE dextrano o polybreno tienen una
carga que les permite unirse a las muy negativamente cargadas molculas de
DNA. El DNA acomplejado se introduce en las clulas mediante choque
osmtico mediante DMSO o glicerol. El uso de DEAE dextrano se limita a las
transfecciones transientes.
Mtodo DNA desnudo. El DNA desnudo (tcnica en fase altamente

experiemtal) es incapaz de entrar en una clula y an consiguiendo entrar en
ellas es rpidamente degradado. La lnea de investigacin busca incorporar
esas secuencias de DNA a un transportador, que le encierra y le lleva hasta la
clula Diana en dnde a travs de interacciones de membrana se asocia con
ella
para
entregar
el
material
al
interior.
Los problemas que encontramos son que el DNA (rico en cargas -) por ser
estructura polar tiene muchas dificultades para cruzar la membrana
plasmtica. Adems el DNA codificante para 1 gen es aproximadamente de 10
kb, esto representa la longitud aproximada de una clula, en el caso de
encontrar
el
DNA
sin
ningun
tipo
de
compactatcin.
Mtodo Pptidos fusiognicos Los pptidos fusiognicos surgen en una

linea de trabajo que nos permita paliar aquellas caractersticas del DNA
desnudo que nos impiden la entrada.

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10.2 Tcnicas De Hibridacin
10.1 Mtodos de purificacin
Unidad 10
Tarea...! Unidad 9
Conclusion unidad 9
Tarea..! unidad 8
9.2.2 Qumicos
9.2 Mecanismos De Transferencia Artificial
9.1 Mecanismos De Transferencia Natural
SEP
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CURSO FORMACIN TCNICO EN "LABORATORIO DE DIAGNOSTICO CLNICO"
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Resumen - Anlisis BIOQUMICO (fundamentos y tcni...
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APUNTES - MUESTRAS BIOLOGICAS
Resumen - Anlisis BIOQUMICO (fundamentos y tcnicas) => dedicado a

Isabel M Cruces
Tema 1 - Medida de los analitos por

fotometra y espectrofotometra
1. Espectro electromagntico: distribucin energtica del conjunto de la
radiacin electromagntica.
2. Interaccin de la energa radiante con la materia

La energa radiante (radiacin electromagntica) puede manifestarse como
movimiento ondulatorio (radiacin electromagntica) o como si estuviese
integrada por un flujo de partculas discretas o paquetes ondulatorios energticos
denominados fotones, es decir presentando propiedades electromagnticas y
energticas. Ambos modelos son complementarios.
2.1.
Parmetros ondulatorios:
Amplitud(A): longitud del vector elctrico mximo en la onda.
Longitud de onda (): distancia entre dos puntos que se encuentran

en el mismo punto de vibracin.
Perodo (T): tiempo en segundos (s) que tarda una partcula en realizar
una vibracin completa.
Frecuencia (v): nmero de oscilaciones completas que una partcula

realiza en una unidad de tiempo, generalmente un segundo.
3. Comportamiento
electromagntica
de
la
materia
ante
La materia est constituida por tomos, iones o molculas.
la
radiacin
En los tomos los electrones se disponen en orbitales ms o menos alejados

del ncleo adoptando una configuracin caracterstica.
En las molculas los enlaces covalentes entre tomos se forman porque los
electrones que los constituyen se localizan alrededor de los dos centros
atmicos, de tal manera que se minimizan las fuerzas de repulsin. Las zonas
interatmicas, ocupadas por electrones enlazantes, se conocen como orbitales
moleculares y se pueden considerar como la superposicin de orbitales
atmicos.
Cuando se incide sobre la materia con una energa radiante, tienen lugar
determinadas transiciones electrnicas desde unos orbitales a otros. Estas
transiciones electrnicas determinan cambios en el estado energtico de
tomos o molculas, cambios que son caractersticos de cada especie atmica
o molcula, por ello cada tomo o molcula absorbe una energa radiante de
caractersticas definidas.
En base a este comportamiento, se aplican las tcnicas analticas

espectroscpicas para identificar y/o cuantificar en muestras biolgicas los
parmetros indicadores de estados fisiolgicos o patolgicos
3.1. Absorcin atmica: en los tomos, los electrones ocupan alrededor del ncleo
determinados niveles energticos que definen orbitales caractersticos para
cada tipo de tomo. En estas condiciones, un tomo, se encuentra en su
estado fundamental o de menor energa, su configuracin electrnica es
estable y tiende a mantenerla o a recuperarla si sta ha sido alterada, por
incidir sobre ella radiacin
3.2.
Absorcin molecular: los espectros de absorcin de las molculas

poliatmicas son ms complejos que los espectros atmicos al presentar un
mayor nmero de transiciones entre sus numerosos estados, esto supone una
gran cantidad de lneas espectrales, tantas que se superponen entre ellas
dando lugar a los espectros de bandas que abarcan un intervalo considerable
de longitudes de onda.
3.3.
Emisin: proceso que se produce cuando la materia se relaja y cede su exceso

de energa en forma de fotones.
4. Ley de Lambert-Beer
Ley que indica la relacin directamente proporcional que existe entre la

absorbancia de una muestra y su concentracin, al ser constantes los valores
del trayecto ptico, la longitud de onda de la radiacin incidente, la
absortividad (cantidad de luz absorbida por una solucin.
La relacin directamente proporcional entre la absorcin de la radiacin
por parte del analito y su concentracin en la muestra no es lineal en cualquier
situacin. Existen una serie de condiciones limitantes o desviaciones de esta
ley que dependen de determinadas caractersticas del analito o que tienen un
origen instrumental o qumico, en las que la relacin no presenta linealidad.
Estas desviaciones son:
Dependientes de las caractersticas del analito
Limitaciones qumicas
Limitaciones instrumentales
La Ley de Lambert-Beer se cumple para un trayecto ptico de 1 cm (cubeta

estandarizada).
4.1.
Curva de calibracin: representacin grfica en un eje de coordenadas de

absorbancia (ordenadas) frente a concentracin (abscisas). Para construir la
curva de calibracin (que debe ser una recta) se ensayan varias soluciones de
concentraciones conocidas y se determinan sus absorbancias, luego se
representan grficamente sus concentraciones frente a sus absorbancias.
La concentracin de la muestra a analizar se obtiene por interpolacin de su

absorbancia en la curva de calibracin.
4.2.
Linealidad: en las determinaciones fotomtricas se debe conocer la

linealidad, que es el intervalo de concentraciones del cromgeno entre las
cuales existe una relacin lineal entre concentracin y absorbancia.
5. Conceptos
Fotometra: medida de las magnitudes relativas a las radiaciones,
evaluadas segn la impresin visual producida por stas y basndose en
ciertas convenciones.
Fotmetro: instrumento que sirve para medir la intensidad de una fuente
luminosa.
Espectrmetro: aparato utilizado para medir la distribucin de una

radiacin compleja en funcin de la longitud de onda o de la frecuencia si se
trata de ondas y de la masa o de la energa de las partculas individuales si se
trata de partculas.
Espectrofotometra: en qumica analtica es una tcnica de medicin que

asocia el anlisis espectral de la espectroscopia a la medicin de magnitudes
fotomtricas relativas, en la mayora de los casos relacionados con las
propiedades de la materia.
Permite aislar, en la radiacin compleja emitida por una fuente, una

radiacin casi monocromtica que caracteriza cualitativa y cuantitativamente
la materia que ha atravesado.
En el rango de concentraciones adecuado las leyes de absorcin de LambertBeer permiten un anlisis cuantitativo.
6. Tcnicas espectroscpicas analticas
Cada tipo de radicacin afecta a un nivel diferente de la estructura atmica

y molecular, esto nos permite clasificar diferentes tipos de tcnicas
espectroscpicas.
7. Sistemas pticos espectroscpicos
Espectrofotmetro: instrumento que combina las propiedades del

espectrmetro y del fotmetro y permite la determinacin de intensidades
relativas de radiaciones simples, elegidas a voluntad entre las muestras
dadas.
Un espectrofotmetro consta de:
Fuente de radiacin: es el origen de la emisin energtica en forma de

radiacin electromagntica lo suficientemente potente y estable para
que sea posible su deteccin y su medida una vez que ha atravesado la
muestra.
Sistema de depsito de la muestra biolgica
Selector de longitud de onda: tiene la funcin de seleccionar o

discriminar una banda estrecha de longitud de onda de las procedentes
de la fuente de radiacin con la finalidad de aumentar la sensibilidad de
la medida de absorbancia.
Detectores: sistemas que amplifican y transforman la energa radiante

no absorbida por la muestra en energa elctrica y la convierten en una
seal elctrica y cuantificable.
Sistemas de registro y presentacin de datos.
Los sistemas pticos utilizados en espectrofotometra tienen su base en stos

cuatro fenmenos:
1. Absorcin
2. Emisin
3. Dispersin
4. Luminiscencia-fluorescencia, fosforescencia y
quimioluminiscencia.
Aplicaciones clnicas
Muchos de los mtodos analticos espectrofotomtricos resultan de la
aplicacin de la ley de Lambert-Beer. La selectividad en la absorcin o
emisin de energa por parte de la materia, ha hecho posible el desarrollo
de mtodos analticos cuya finalidad es la deteccin en fluidos y tejidos
biolgicos de:
Ausencia o presencia de parmetros analticos.
Cuantificacin de la concentracin de estos parmetros.
La actividad de numerosas enzimas.
Estos parmetros son indicadores de determinados estados tanto

fisiolgicos como patolgicos y, junto a otras pruebas, permiten la
prevencin, el diagnstico, el tratamiento o la evaluacin del seguimiento
del tratamiento de estos estados de salud.
TEMA 2 - ESPECTROFOTOMETRA UV-VISIBLE
1)
Definicin y fundamentos:
La espectroscopia ultravioleta-visible o espectrofotometra ultravioleta-visible
(UV/VIS) es una espectroscopia (estudio de la interaccin entre la radiacin
electromagntica y la materia) de fotones y una espectrofotometra. Utiliza
radiacin electromagntica (luz) de las regiones visible, ultravioleta cercana
(UV) e infrarroja cercana (NIR) del espectro electromagntico. La radiacin
absorbida por las molculas desde esta regin del espectro provoca
transiciones electrnicas que pueden ser cuantificadas.
Todas las sustancias pueden absorber energa radiante. La absorcin de las

radiaciones UV, visibles e IR depende de la estructura de las molculas, y es
caracterstica para cada sustancia qumica. El color de las sustancias se debe a
que absorben ciertas longitudes de onda de la luz blanca que incide sobre ellas
y slo dejan pasar a nuestros ojos aquellas longitudes de onda no absorbida.
Esta espectrofotometra utiliza radiaciones del campo UV de 80 a 400 nm,
principalmente de 200 a 400 nm (UV cercano) y de luz visible de 400 a 800
nm, por lo que es de gran utilidad para caracterizar las soluciones en la regin
ultravioleta-visible del espectro. Se rige por una ley muy importante: la
ecuacin de Beer-Lambert.
1.1. Fuentes de radiacin:
Lmparas descarga de Deuterio e Hidrgeno. La excitacin elctrica a presin

reducida de estos elementos genera una radiacin continua en la banda
espectral correspondiente al UV
Lmparas de filamentos de Tungsteno. Origina radiacin de la regin visible e

infrarrojo cercano del espectro entre 350-2.500nm
Lmparas de arco de Xenn. La excitacin elctrica de una atmsfera de

Xenn genera una radiacin continua en la banda espectral de 250 a 600 nm
2) Finalidad diagnstica:
La espectrometra UV/Visible se utiliza habitualmente en la determinacin
cuantitativa de soluciones de iones metlicos de transicin y compuestos
orgnicos muy conjugados.
Soluciones de iones metlicos de transicin

Las soluciones de iones metlicos de transicin pueden ser coloreadas (es
decir, absorben la luz visible) debido a que los electrones en los tomos de
metal se pueden excitar desde un estado electrnico a otro. El color de las
soluciones de iones metlicos se ve muy afectado por la presencia de otras
especies, como algunos aniones o ligandos.
Compuestos orgnicos
Los compuestos orgnicos, especialmente aquellos con un alto grado de
tambin absorben luz en las regiones del espectro electromagntico visible o
ultravioleta. Los disolventes para estas determinaciones son a menudo el agua
para los compuestos solubles en agua, o el etanol para compuestos orgnicos
solubles. Los disolventes orgnicos pueden tener una significativa absorcin de
UV, por lo que no todos los disolventes son adecuados para su uso en
espectrometra UV. El etanol absorbe muy dbilmente en la mayora de
longitudes de onda. La polaridad y el pH del disolvente pueden afectar la
absorcin del espectro de un compuesto orgnico.
Aunque los complejos de transferencia de carga tambin dan lugar a colores,
stos son a menudo demasiado intensos para ser usados en mediciones
cuantitativas.
El espectrofotmetro UV/Vis puede utilizarse como detector para la

Cromatografa Lquida de Alta Resolucin HPLC. La presencia de un analito da
una respuesta que puede ser proporcional a la concentracin. Para resultados
precisos, la respuesta del instrumento al analito debe compararse con la
respuesta a un estndar, lo que es muy similar al uso de curvas de calibracin.
La respuesta para una concentracin particular se conoce como factor de
respuesta.
3)
Ventajas e inconvenientes:
Ventajas:
1)
Rapidez
2)
Uso fcil
3)
Precisin extrema
4)
Versatilidad
5)
Eficiencia en el costo
6)
Sensibilidad
7)
Anlisis de superficies irregulares y materiales duros
8)
Preparacin mnima de la muestra

- Inconvenientes:
1) En aquellas muestras que requieren disolucin es necesario que esta
se lleve a
cabo en el disolvente adecuado; y si estamos utilizando una celda de
paso fijo
es necesario asegurarse que la distancia no vare para anlisis
cuantitativo.
2) Los problemas asociados con dichas celdas incluyen la aparicin de
burbujas
que dan lugar a bandas errneas.
3) Suele aparecer la banda del disolvente, pudiendo llegar a interferir.
4) Las ventanas de las clulas no estn completamente paralelas.
5) En slidos, hay problemas a la hora de tomar la misma cantidad de
muestra.
Tema 3. Nefelometra y turbidimetra
DEFINICIN: QU ES?
Nefelometra y / o Turbidimetra son mtodos analticos basados en la dispersin de

partculas suspendidas en lquidos.
-Turbidimetra: es la medicin de la luz transmitida a travs de una suspensin, tiene la

ventaja de permitir la valorizacin cuantitativa, sin separar el producto de la solucin. Las
mediciones, pueden efectuarse con cualquier espectrofotmetro.
-Nefelometra: mide la luz dispersada en direccin distinta a la luz emitida (generalmente
con ngulos que oscilan entre 15 y 90). Utiliza como instrumento el nefelmetro (en el
que el detector se ubica con un ngulo que oscila entre 15 y 90 ej. a 90). Se
suele utilizar para concentraciones ms diluidas. Permite mayor sensibilidad con
concentraciones menores de partculas suspendidas. Constituye un mtodo ms exacto
para la medida de la opacidad.
FUNDAMENTO: EN QU SE BASA?
Cuando la luz atraviesa un medio transparente en el que existe una suspensin de partculas
slidas, se dispersa en todas direcciones y como consecuencia se observa turbia.
La turbidez es la propiedad ptica de una muestra que hace que la radiacin sea
dispersada y absorbida ms que transmitida en lnea recta a travs de la muestra. Es
ocasionada por la presencia de materia suspendida en un lquido. Y para medirla
utilizamos ambos mtodos. La dispersin no supone la prdida neta de potencia radiante,
slo es afectada la direccin de la propagacin, la intensidad de la radiacin es la misma
en cualquier ngulo.
En la turbidimetra se compara la intensidad del rayo de luz que emerge con la del que
llega a la disolucin. En cambio, en la nefelometra la medida de la intensidad de luz se
hace con un ngulo de 90 con respecto a la radiacin incidente.
El instrumento usado en la nefelometra, el nefelmetro en cambio en

turbidimetra se utiliza el turbidmetro que es un fotmetro de filtro.
El procedimiento de la nefelometra generalmente es emprico y slo se consideran 3

factores:
1. La concentracin: Mayor sea el nmero de partculas, mayor es la dispersin.
2. Tamao de la partcula: Factores como el pH, la velocidad y orden de la mezcla,
concentracin de los reactivos y la fuerza inica.
3. Longitud de onda: Generalmente las muestras se iluminan con luz blanca, pero si estn
coloreadas, se debe escoger una porcin del espectro electromagntico en la que la
absorcin del medio se reduzca al mnimo
Diferencias turbidimetria y nefelometra

La nefelometra se basa en la medicin de radiacin dispersa, en cambio la turbidimetra
en la medicin de la intensidad de un haz disminuido.
Factores para la eleccin entre turbidimetra y nefelometra:
- Intensidad de la radiacin transmitida o dispersada con la intensidad de la

radiacin procedente de la fuente.
La mejor eleccin cuando la muestra contiene pocas partculas dispersantes es la
nefelometra. La turbidimetra es buena cuando las muestras contienen grandes
concentraciones de partculas dispersantes.
- Tamao de las partculas dispersantes. En la nefelometra la intensidad de la

radiacin dispersada a 90 es mayor si las partculas son bastante pequeas para que se
produzca una dispersin Rayleigh. Si las partculas son mayores la intensidad de la
dispersin disminuir.
En turbidimetra la seal consiste en la disminucin relativa de la radiacin
transmitida, por lo que el tamao de las partculas dispersantes es menos importante.
FINALIDADES: PARA QU SE UTILIZA?

Se utilizan normalmente en el anlisis de la calidad qumica del agua, para
determinar la claridad y para el control de los procesos de tratamiento. Tambin para la
determinacin de iones sulfato.
Turbidimetra:
-Se utiliza para el anlisis de fibringeno, triglicridos, complejos Ag-Ac y otras

sustancias.
- Aplicable cuando la dispersin es suficientemente grande (concentracin alta de
partculas).
Nefelometra:
- Preferible para concentraciones bajas de partculas, ya que la dispersin es
menor y la disminucin de intensidad del haz incidente es pequea.
- Se suele utilizar para medir concentraciones especficas de colonias de bacterias
en algn medio de cultivo, o de muchas protenas utilizando el principio de dispersin
luminosa molecular.
TEMA 4 - FLUORIMETRA Y
QUIMIOLUMINISCENCIA
FLUORESCENCIA, FOSFORESCENCIA Y QUIMIOLUMINISCENCIA
Dentro de los fenmeno llamado luminiscencia

fluorescencia, fosforescencia y quimioluminiscencia.
se
encuentran
el
de
FLUORESCENCIA
Definicin y fundamento
Es la luminiscencia causada nica y exclusivamente por rayos ultravioleta. El
trmino fluorescencia proviene del mineral que presenta este fenmeno por
naturaleza, la fluorita.
La fluorescencia se produce cuando una molcula absorbe luz de una

determinada longitud de onda(energa), y emite luz de una longitud de onda
superior (menor energa).
Cuando una molcula es excitada por un haz de luz de una intensidad y

energa determinadas, absorbe energa y se produce el paso de sus electrones
de un estado basal a un estado excitado, liberando esta energa en forma de
luz, resultando en una emisin fluorescente o fluorescencia.
Fluorimetra
La fluorimetra combina la fotometra con la alta sensibilidad y especificidad
del fenmeno fluorescente. Para la medida de la fluorescencia se usan:
- Fluormetros que usan filtros interferenciales o filtros de vidrio.
- Espectrofluormetros que usan prismas o redes de difraccin.
Los componentes bsicos de estos aparatos son:

1. Fuente de luz de excitacin (energa radiante): Se pueden emplear lmparas
de arco de xenn o lmparas de mercurio
2.
Rendijas
de
excitacin
y
emisin: Son
espectrofotmetro(orientan el haz de luz).
iguales
las
del
3. Monocromadores (de excitacin y de emisin):

- Monocromadores de excitacin: para seleccionar la longitud de onda de
excitacin deseada.
- Monocromadores de emisin: para eliminar las longitudes de onda emitidas
no deseadas
4. Cubetas: De slice o cuarzo. Las de plstico pueden causar fluorescencia

adicional con prdida de sensibilidad.
5. Detector: Fototubos multiplicadores capaces de cuantificar la pequea seal

fluorescente.
Los fluormetros estn diseados en ngulo recto para que la luz procedente de
la lmpara (de excitacin) no llegue al monocromador de emisin y al detector.
La mayor ventaja de la fluorimetra => su enorme sensibilidad (respecto a

las tcnicas colorimtricas) por el aumento de la intensidad de la radiacin de
excitacin y la sensibilidad del dispositivo de deteccin.
La seal fluorescente depender => del solvente, pH, temperatura, de la

absorbancia de luz por la solucin, de interferentes que aporten fluorescencia
no deseada, de compuestos que atrapan luz (atenan la fluorescencia que se
pierde en forma de calor).
Aplicaciones
En bioqumica:
- anlisis de alimentos y frmacos.
En bioqumica clnica:
- muestras biolgicas de iones, enzimas, coenzimas, vitaminas, algunos
medicamentos, etc.
Su gran aplicacin es el fluoroinmunoanlisis que utiliza Ac marcados con una
sustancia fluorescente, especficos de la sustancia a estudiar.
FOSFORESCENCIA
Definicin
La fosforescencia es un fenmeno en el cual ciertas sustancias tienen la
propiedad de absorber energa y almacenarla, para despus emitirla
gradualmente en forma de luz .
El principio fsico en el que se basa la fosforescencia es el mismo que el de la

fluorescencia, la principal diferencia radica en la forma de emitir la luz
absorbida. En la fluorescencia es casi simultnea, y en la fosforescencia es
retardada.
En la fosforescencia, los tomos poseen estados metastables donde se pueden

almacenar energa durante un tiempo relativamente largo. Y, emiten esta
energa absorbida (con longitud de onda bastante mas larga que la de
absorcin) de forma gradual, durante minutos, horas e incluso das.
Fosforimetra
Tcnica espectroscpica luminiscente basada en la deteccin y anlisis de la
emisin de radiaciones electromagnticas de una especie excitada por
absorcin de fotones.
Los mtodos fosforescentes y fluorescentes se complementan, ya que los
compuestos fuertemente fluorescentes presentan una dbil fosforescencia y
viceversa
Ventajas (con respecto a la fluorescencia)

- Ms tiempo de vida
- Ms sensibilidad
- Ms selectividad
- Ms linealidad de la respuesta
- Posibilidad de utilizar concentraciones de < ng/ml
Inconvenientes
- Necesidad de utilizar bajas temperaturas (nitrgeno lquido).
- Imprecisin en las medidas.
- Cierta dificultar experimental.
Tipo de luz utilizada:

- Ultravioleta
- Visible
- Infrarrojo prximo
Aplicaciones
- Presencia de frmacos en sangre
- Presencia de frmacos en orina (til para control de dopaje)
- Presencia de Uranio en orina, suelo, agua, vegetales, filtros,...
- Determinacin de cidos nucleicos, aminocidos, pirina, pirimidina, enzimas,
hidrocarburos del
petrleo, vitaminas, pesticidas,...
Aparatos utilizados en fosforimetra

Se utiliza el fosformetro o espectrofosformetro, este aparato presenta dos
componentes adicionales al fluormetro:
Fosforoscopio, u obturados rotatorio. ste alterna la irradiacin de la muestra y

la medicin de la intensidad de fosforescencia, despus de un tiempo
determinado.
Un compartimento especfico, para la muestra, que permita mantener la
muestra a la temperatura adecuada (Nitrgeno lquido). Suele ser con ventanas
de cuarzo.
QUIMIOLUMINISCENCIA
Definicin
Fenmeno que en algunas reacciones qumicas, la energa liberada no slo se

emite en forma de calor o de energa qumica sino en forma de luz.
Fundamento
Normalmente, en estas reacciones de quimioluminiscencia se liberan
molculas con estado excitado que al bajar a su estado emiten la diferencia de
energa en forma de luz.
A medida que progresa la reaccin, los cambios de la composicin qumica y la
luz, disminuyen hasta desvanecerse por completo como resultado de la
conversin. Generalmente la quimioluminiscencia es muy breve.
Relacionado con la quimioluminiscencia:
Bioluminiscencia: fenmeno producido por reacciones qumicas de origen

biolgico, uno de los casos ms conocidos es la luz emitida por las lucirnagas,
tambin algunas bacterias, hongos, insectos...
Tipos de quimioluminiscencia:
Quimioluminiscencia directa: marcaje de sustancias slidas con ster de
acridina (quimioluminiscente) recubiertas por Acs especficos contra la
sustancia a analizar. Cuando se oxida la sustancia empleada para el marcaje se
emite luz.
Quimioluminiscencia indirecta: emplea como marcaje una enzima y

produce una fuerte emisin de luz.
Permite hacer numerosas lecturas y aumentar la precisin.
Ventajas
- Alta sensibilidad y especificidad.
- Alta precisin.
- No emplea radioactividad.
- No genera riesgo contaminante ni ruido de fondo.
- Equipo automatizado y fcil manejo.
- Los resultados obtenidos son equiparables con Radioinmunoanlisis.
Aplicaciones
- No es muy usada en la clnica.
- Anlisis medioambientales (restos de impurezas en el aire, contaminantes
atmosfricos...)
- Clnica forense (para la determinacin de rastros de sangre)
Diferencia entre fosforescencia, fluorescencia y quimioluminiscencia:

el el fenmeno fosforescencia es el mismo que el de la fluorescencia, la principal
diferencia radica en la forma de emitir la luz absorbida. En la fluorescencia es
casi simultnea, y en la fosforescencia es retardada, y en la
quimioluminiscencia se basa a partir de reacciones qumicas liberando
energa en forma de luz que se va apagando a medida que cesa la
reaccin.
Tema 5
Espectrofotometra de absorcin atmica y
fotometra de llama
ESPECTROFOTOMETRA DE ABSORCIN ATMICA
Es una tcnica para determinar la concentracin de un elemento metlico
determinado en una muestra. Puede utilizarse para analizar la concentracin de ms de
62 metales diferentes en una solucin. Los elementos a analizar se encuentran en forma
de vapor de tomos. Ahora bien, en absorcin atmica existe una fuente independiente
de luz monocromtica, especfica para cada elemento a analizar y que se hace pasar
a travs del vapor de tomos, midindose posteriormente la radiacin absorbida.
Para poder analizar la muestra es imprescindible tenerla atomizada utilizando un flujo
de gas oxidante mezclado con gas combustible, es decir, que mediante un flujo la
muestra lquida o en disolucin va a ser aspirada por un capilar; Cuando la solucin sale
del capilar el gas la dispersa en forma de fina niebla. Para que la precisin de los anlisis
sea buena hay que poder reproducirlas en todas las medidas: el flujo de los gases y el
tamao de gota.
En esta atomizacin se dan 3 fases:
DESOLVATADA
El liquido disolventes evapora y la muestra permanece seca.
VAPORIZACIN
La muestra slida se evapora a gas.
ATOMIZACIN
Los compuestos de la muestra se dividen en tomos libres.
En un espectrofotmetro de AA es necesario utilizar una llama aunque esta tambin la

podemos sustituir por un horno de grafito. Las llamas utilizadas en la AA son similares
a la tcnica de emisin de llama
Llama de aire-hidrocarburos
Llama de aire acetileno
Llama de oxido nitroso-acetileno

La temperatura de la llama es lo suficientemente baja como para no excitar los tomos de
la muestra de su estado basal. Segn la temperatura encontramos tres tipos de llamas:
llamas fras.
llamas calientes.
llamas mas calientes.
La ms utilizada en analtica clnica es la Llama caliente ya que puede atomizar hasta 30

elementos.
COMPONENTES:
Fuente de luz: lmpara de ctodo hueco que consiste en un nodo de wolframio y un
ctodo cilndrico cerrados hermticamente en un tubo de vidrio lleno de nen/argn, y el
ctodo est constituido con el metal cuyo espectro se desea obtener
Quemador: es un mechero en el cual se dan dos procesos; Nebulizacin y Atomizacin

de la muestra para obtener una mayor sensibilidad.
Monocromador: son prismas o redes de difraccin que sirven para hacer pasar la luz
atreves del sistema ptico.
Detector: el sistema de deteccin puede estar formado por foto celdas, fotomultiplicador,
etc. Que reciben la energa lumnica proveniente de la muestra y la convierte en una seal
elctrica proporcional a la energa recibida.
NOTA: Las cubetas a utilizar pueden ser de cristal o de plstico, macrocubetas o

microcubetas.
APLICACIONES
En qumica analtica se emplea para medir las concentraciones de elementos
metlicos en los lquidos biolgicos, los principales metales que se miden son:
Aluminio- arsnico-bario cadmio- calcio- cobre- cromo- hierro-litio-magnesio-manganesomercurio-nquel plata-platino- plomo -selenio y zinc.
FOTOMETRIA DE LLAMA
Es una tcnica de emisin que utiliza una llama como fuente de excitacin y un
fotodetector electrnico como dispositivo de medida. Se pueden realizar anlisis
monoelementales o multielementales, en este segundo caso se emplean sistemas
selectores entre la muestra y el detector que son capaces de discriminar en un periodo
de tiempo corto varias longitudes de onda de emisin de los diferentes elementos que se
pretenden analizar en la muestra.
En la fotometra de llama se pueden realizar 2 tipos de anlisis:

ANALISIS CUALITATIVO
Identifica los componentes de una muestra y examina las longitudes de onda del
espectro de emisin (la muestra debe estar disuelta)
ANALISIS CUANTITATIVO
Es ms sencillo y preciso, sirve para detectar metales alcalinos o alcalino trreos tambin
determina la cantidad de sustancias en una muestra.
El equipo de llama se compone de:
MONOCROMADOR: Prismas
FOTODETECTOR: Dispositivo encargado de captar la seal ptica proveniente del

monocromador y transformarlo en una seal electrnica capaz de ser convertida en un
valor legible.
MEDIDOR: Se encarga de tomar la D.O de la muestra.
REGISTRADOR: convierte un resultado en valor numrico.
La llama en el espectrofotmetro durante el anlisis requiere combustible y oxidante,

tpicamente en forma de iones.
Estos mtodos a menudo son capaces de analizar elementos metlicos en ppm, billones
e incluso hasta rangos ms bajos de concentracin. Se debe controlar las etapas
necesarias de los tomos que constituyen una muestra hasta su estado fundamental, para
ello; hay que sustituir la llama por una cmara de grafito y con esto aumenta
tambin la sensibilidad.
Es esencial que la temperatura de la llama se mantenga constante, para lo cual se
precisan reguladores.
ATOMIZADORES CON LLAMA

Su funcin es convertir los tomos combinados de la muestra en tomos en estado
fundamental, para ello es necesario suministrar a las muestras una cantidad de energa
suficiente para disociar las molculas y romper sus enlaces.
FUNCIONES BASICAS DE LA LLAMA:

Permite pasar la muestras a analizar de estado liquido a gaseoso.
Descompone los compuestos moleculares en tomos individuales o molculas sencillas.
Excita estos tomos o molculas.
Las condiciones que debe cumplir una llama deben de ser, que tenga la temperatura
adecuada y que en ella se forme un ambiente gaseoso que permita las funciones
mencionadas. Adems el ruido de fondo de la llama no debe interferir en las
observaciones.
APLICACIN:
Es una tcnica aplicable para la cuantificacin de diversos componentes como los

elementos alcalinos o alcalinotrreos, aunque en realidad solo se miden
concentraciones de sodio (Na) potasio (K) y litio (Li), pero suele utilizarse otras
tcnicas para esta medicin ya que resulta ms econmicas; Las muestras habitualmente
utilizadas son lquidos biolgicos que deben de estar en solucin acuosa con
determinados diluyentes y estos suelen contener litio o cesio.
Cono interno: hay una combustin parcial es decir sin equilibrio trmico en esta se
forman productos de oxidacin intermedios, se produce una gran emisin de luz
(proviene del combustible, no de la muestra), es muy poco utilizada en el trabajo analtico
Zona interconal: o llamada parte caliente de la llama y en ella tiene lugar una
combustin completa. Es la ms utilizada en anlisis
Cono externo: es la zona de combustin secundaria. Se enfra por el aire circundante
y es una zona poco til.
Tema 6 - Refractometra y Reflectancia

REFRACTOMETRIA
Es una tcnica analtica que consiste en la medida del indice de refraccin de

un lquido con objeto de investigar su composicin si se trata de una disolucin
o de su pureza si es un compuesto nico. La medida continua en una columna
cromatogrfica puede indicar la composicin o pureza del eluyente.
Principios bsicos
La refractometra de la luz es un fenmeno de desvo que experimenta el haz
incidente al atravesar una solucin, ocasionado por la diferente naturaleza del
aire y de la solucin sobre la que incide. El ngulo de desvo se denomina
ngulo de refraccin.
Se conoce como ndice de refraccin (n) de una solucin a la relacin
entre la velocidad de la luz en el aire y la velocidad de la luz a su paso
por esta solucin. Su valor es directamente proporcional a la cantidad
de sustancias disueltas en la misma. Esta relacin vara dependiendo de
caractersticas como la concentracin de sustancias disueltas, el tipo de
disolvente, etc. Se puede calcular la concentracin de solutos en una solucin
midiendo su ndice de refraccin.
En suero y plasma, el indice de refraccin depende fundamentalmente de la
protena mayoritaria, la albmina.
Refractmetro clnico
Son instrumentos basados en el fenmeno de la refraccin de la luz para
medir la concetracin de sustancias disueltas en una solucin acuosa. Las
determinaciones se realizan gracias a la refraccin entre el prisma, de ndice de
refraccin elevado y la muestra.
En el caso de muestras de baja concentraccin, la diferencia entre los ndices

de refraccin de la muestra y el prisma es elevada y el ngulo de refraccin es
amplio. Cuando las muestras presentan una concentracin de solutos
elevada, la diferencia entre los ndices es menor y, por lo tanto el
ngulo de refraccin es tambien menor.
En el laboratorio de anlisis clnicos se emplea el refractmetro para la
medicin de la concentracin de solutos tales como la albmina en muestras
sricas y/o plasmticas , y la medida del peso especfico en orina.
REFRACTMETRO
Medida
-Colocar sobre el prisma una (s) gota (s) de la solucin a analizar y cerrar la
placa.
-Dejar un tiempo para que la solucin problema fluya sobre la superficie del
prisma.
-Dirigir el refractmetro hacia la luz para obtener un buen contraste luzsombra.
-Rotar el ocular hasta enfocar la escala.

-Mirar por el ocular leyendo directamente en la escala de concentracin .
-Corregir la medida si la temperatura es diferente a la de calibracin del
refractmetro.
Utilizacin
En la actualidad se emplea poco ya que sus medidas estn incluidas en otros
sistemas analticos ms sencillos, rpidos (como la tira reactiva) y
automatizados (auto-analizadores que incluyen tanto el peso especfico como
la concentracin de albmina).
Donde se emplea
-en la industria vitivincola: para determinar los azcares totales de un
mosto y a partir de alli poder hacer una estimacion del grado alcoholico
-en la industria alimenticia: en los laboratorios de bromatologia
-en veterinaria.
REFLECTOMETRA
ESPECTROFOTOMETRIA DE REFLEXION
1. TIPOS DE REFLEXIN
Cuando un haz de luz incide sobre una superficie, la luz es reflejada por esta
superficie, producindose a la vez dos tipos de reflexin:
--Una reflexin especular, en donde la luz es reflejada como lo hara en un
espejo.
--Una reflexin difusa (reflectancia), que consiste en la reflexin producida al
penetrar la luz en las capas internas de la superficie iluminada.
Dentro de la fase solida, la luz sufre una serie de fenmenos de absorcin y
dispersin.
Este tipo de reflexin es de inters para las mediciones que se
realizan con las tcnicas de qumica seca.
2. ESPECTROFOTMETRO DE REFLEXION
La fotometra de reflectancia implica la medida de la intensidad de la luz que
es reflejada por una fase slida, tras iluminar sta con un haz de luz de una
longitud de onda que es absorbida por los productos de inters.
Los espectrofotmetros de reflexin miden la reflectancia y la

relacionan con la concentracin del analito de inters.
Sus componentes son:

a. Fuente de luz: se emplean dos tipos de lmparas, que pueden ser de haluro
de tungsteno o de xenn.
b. Sistemas pticos: consisten en combinaciones de lentes, espejos y filtros.
c. Reactivos de fase slida: aqu radica una de las diferencias
fundamentales con la fotometra de absorcin. La muestra se situa en los
reactivos de fase solida (tiras reactivas, reactivos multicapa). Todos los
componentes necesarios para que se produzca la reaccin se encuentran
impregnados en estas unidades, en las que tiene lugar la reaccin y la lectura.
d. Detector y procesador de datos
e. Lectura: se puede hacer de dos formas
Lectura sobre la superficie

La muestra se aplica sobre la superficie del reactivo, difunde y se produce la
reaccin. El color resultante se determina midiendo la reflectancia sobre la
superficie. Este mtodo se emplea en los sistemas que utilizan tiras
reactivas.
Lectura por el reverso de la superficie

La muestra se aplica sobre la superficie del reactivo, difunde y se produce la
reaccin. La lectura se hace por el reverso de la superficie de la muestra. Este
mtodo se emplea en los sistemas que utilizan reactivos multicapas o
slides.
3. REACTIVOS PARA QUMICA SECA

Los reactivos de qumica seca constituyen la manera de introducir la muestra
en los fotmetros de reflexin. Son unidades de reaccin con una slida:
poseen en forma deshidratada, todos los componentes que se
necesitan para la identificacin de un analito determinado.
Modo de empleo: la muestra que contiene el analito a determinar (suero,
plasma, sangre total, orina) se aplica sobre la superficie del reactivo en fase
slida, y a partir de esta difunde a la matriz, disolviendo los componentes de
reaccin que contiene; cuando los reactivos se disuelven se produce la
reaccin, que se cuantificara por fotometra de reflectancia.
Todos los sistemas constan de tres partes:
Parte soporte
Est constituida por una lamina de plstico, sobre la cual se construye el
reactivo de fase solida.
Parte reflectante
Su funcin es reflejar la luz; est hecha de materiales reflectantes como
metales, o materiales fibrosos como el papel.
Parte reactiva
Contiene, en forma deshidratada todos los reactivos y sustancias auxiliares
necesarias para que se produzca una reaccin. Los reactivos son reconstituidos
mediante rehidratacin por el agua de la muestra
A veces se aaden otras capas con funciones complementarias como una capa
difusora (con lo cual la muestra difunde rpidamente hacia los laterales y se

distribuye uniformemente) o una capa separadora de plasma (la utilizan los
sistemas preparados para trabajar con sangre total, su funcin es retener
las clulas y permitir el paso del plasma hacia la matriz del reactivo).
La estructura de las capas depende del sistema reactivo de fase solida que se
trate, variando de unos a Otros.
4. SISTEMAS REACTIVOS
Los reactivos de fase slida empleados en la qumica seca se engloban en dos
tipos: las tiras reactivas y las pelculas multicapa.
Tiras reactivas
Se utilizan para:
-anlisis de orina
-autocontrol de la glucemia
-en sistemas de diagnstico rpido en la consulta mdica y a la cabecera del

enfermo.
Consisten, bsicamente en un soporte de plstico que sirve de soporte a una
matriz de celulosa que contiene los reactivos secos necesarios para que se
produzca una reaccin con el componente a estudiar.
Tira reactiva del sistema Seralyzer (Ames): consiste en una matriz de

celulosa impregnada de reactivos secos que se unen a una lamina soporte de
plstico; sobre ella lleva una franja cdigo, que tiene como finalidad ser leda
cuando se la inserta en el instrumento.
Tira reactiva del sistema Reflotron (Boheringer Mannheim): consta de

una lmina soporte al cual se le adhiere el sistema reactivo separado en dos
zonas:
-una est unida a la lamina. Incluye una serie de capas destinadas a la
preparacin de la muestra.
-la otra se encuentra inicialmente separada de la lmina soporte, y se pone en
contacto con ella por simple presin cuando se desea que el plasma entre en
contacto con los reactivos para desencadenar la reaccin; esta zona lleva en su
superficie una laminilla transparente a travs de la cual se realizara la lectura.
La disposicin en dos bloques hace posible que la parte destinada a la
preparacin de la muestra se puedan llevar a cabo etapas de
preincubacin o eliminacin de interferentes.
Esta tira incorpora tambin una capa separadora de fibra de vidrio para la
obtencin de plasma, con lo cual evitamos la centrifugacin previa al anlisis.
Ventajas de las tiras: al mantener los reactivos deshidratados aportan una

prolongada estabilidad al sistema, que puede ser de meses e incluso de uno o
dos aos.
Pelculas multicapa o slides
Estn constituidas por diferentes capas muy finas, a travs de las cuales se van
produciendo todas las etapas necesarias para la determinacin cuantitativa del
analito. Tiene la apariencia de una diapositiva y est constituido por cuatro
capas (que incluyen todos los componentes del sistema). El sistema de ms
amplia implantacin es el Ektachem (Kodak).
Capa difusora:
sobre ella se deposita la muestra. Lleva sustancias capaces

de reflejar la luz, es la superficie reflectante. Homogeneza la muestra antes de
que llegue a la capa reactiva, distribuyndola por toda la superficie. Retiene
clulas, cristales y pequeas y grandes molculas, as la muestra se convierte
en un filtrado libre de protenas, eliminndose las interferencias.
Capa reactiva: pueden ser una o varias, son las que
Capa soporte:
contienen los reactivos.
est hecha de plstico transparente y sobre ella se depositan

todas las dems capas una tras otra. Tiene doble funcin: servir de soporte y
dejar pasar la luz, ya que la lectura se hace por la parte inferior (la opuesta a la
de la aplicacin de la muestra).
5. INSTRUMENTOS DE MEDIDA PARA

BIOQUIMICA SANGUNEA
Son tres los sistemas que se emplean actualmente. Dos de ellos trabajan con
tiras reactivas: Seralyzer y Reflotron; el tercero trabaja con slides o reactivos
multicapa.
Seralyzer (Ames)
Emplea tiras reactivas. Tras aplicarle la muestra de suero se coloca la tira
una plataforma termostatizada a 37 que se introduce en el aparato. All
irradiado por un haz de luz que incide sobre la zona reactiva de la tira; all
produce la reflexin. Los valores de reflectancia son convertidos en valores
concentracin.
en
es
se
de
Reflotron
-Emplea tiras reactivas. Se puede trabajar con sangre total, suero o plasma; ya
que incorpora una capa separadora, que consigue la separacin de los
eritrocitos del plasma.
-Despus de aplicar la muestra, la tira reactiva se introduce en el aparato. El
plasma pasa al reservorio situado en la parte inferior de la tira; la reaccin
comienza cuando (por accin del aparato) se presiona la capa reactiva sobre la
capa reservorio del plasma.
-La luz reflejada por la zona de reaccin se recoge en un detector de medida,
que convierte los valores de reflectancia en valores de concentracin.
Ektachem
Emplea los slides. Ofrecen medianos y grandes analizadores, cuya finalidad es
ser utilizados en el laboratorio clnico.
La muestra de suero se aplica en la superficie del slide por el autoanalizador,
luego es transferida a una cmara de incubacin. La muestra se difunde a
travs de las capas, producindose la reaccin. La lectura se produce por
irradiacin que incide en la cara inferior del slide. La luz reflejada es recogida
por un detector.
6. SISTEMAS PARA ANLISIS DE ORINA

Los dos sistemas ms difundidos para anlisis de orina son: Sistema Clinitek y
Sistema Urotron. Ambos incluyen las tiras reactivas y los lectores de tira de
orina.
Estructura de las tiras reactivas:

-un soporte (lamina de plstico blanca).
-zonas de papel impregnando con los reactivos, que van fijados al soporte.
-cada zona reactiva tiene impregnados reactivos distintos, de manera que cada
uno tomara una coloracin diferente cuya intensidad depender de la
concentracin del componente en la orina.
Modo de empleo:
1.
Sumergir la tira reactiva en la orina
2.
Eliminar el exceso de orina
3.
Leer el resultado. Se puede hacer visualmente sobre una carta de colores o

empleando un fotmetro de reflexin.
Sistema Clinitek
Se emplea la tira reactiva Multistix-10-SG.
Est preparada para la determinacin de diez parmetros:
-
Glucosa
Bilirrubina
Cuerpos cetnicos
densidad
sangre
pH
protenas
urobilingeno
nitritos
leucocitos.
Esta tira aporta la ventaja de poder hacer la determinacin de densidad de la
orina sobre una de las zonas reactivas.
Sistema Urotron
Se emplea la tira reactiva COMBUR-9-TEST.
Est preparada para la determinacin de nueve parmetros:
-
glucosa
bilirrubina
cuerpos cetnicos
angre
pH
protenas
urobilingeno
nitritos
leucocitos.
7. VENTAJAS Y DESVENTAJAS DE LA
QUIMICA SECA
VENTAJAS:
-
el usuario solo necesita aplicar la muestra al reactivo en fase slida para

iniciar el anlisis, que tiene lugar en unos minutos
no se precisa preparacin previa de los reactivos. Son nicos para cada

parmetro y desechables.
Tienen larga estabilidad
Son fciles de almacenar.
DESVENTAJAS:
-
Su costo es ms elevado que el de la qumica convencional

No es prctico para laboratorios con gran carga de trabajo, ya que por cada
tira solo se puede realizar la determinacin de un analito.
UTILIDADES DE LA QUMICA SECA
Se pueden hacer todo tipo de determinaciones bioqumicas, electrolitos,

enzimas, perfil lipdico y pruebas derivadas.
En los laboratorios clnicos de hoy en da, se emplea esta tcnica para
el anlisis de orina, mediante el uso de la tira reactiva.
CUADRO RESUMEN DE LOS TEMAS 1-6
Tema 7 - CENTRIFUGACIN
Fundamentos de las tcnicas de centrifugacin - es una tcnica de
separacin de particulas que se basa en la distinta velocidad de
desplazamiento de las partculas en un medio lquido al ser sometidas a un
campo centrifugo; cuando se centrifuga una solucin => se rompe la
homogeneidad y se produce la separacin de solvente y soluto y las 1s
partculas en sedimentar son las de mayor masa.
Velocidad de sedimentacin - es proporcional a la masa de la partcula y

esta propiedad nos permite separar partculas de diferente masa => a (+)
masa => (+) velocidad de sedimentacin.
ge (gravedad efectiva) - es el tiempo que provoca la sedimentacin forzada

cuando se acelera; para acelerar la sedimentacin se puede aumentar la W
(velocidad angular); a (+) W => (+) velocidad de sedimentacin; la velocidad
de sedimentacin es util para caracterizar partculas y en concreto se usa un
valor que llamamos coeficiente de sedimentacin, que es una caracterstica de
todas las partculas que nos da informacin de dicha partcula; conocerlo, nos
facilita conocer => tamao, densidad y forma de las partculas y adems nos
permite disear mtodos de aislamiento de partculas.
Tipos de centrifugas:
1)- de sobre mesa o baja velocidad o "clnicas": son de pequeo tamao,
no necesitan refrigeracin, max.velocidad hasta 10.000 rpm, tiles para
partculas grandes (clulas, precipitados,...)
2)- microfugas: son una variante de la anterior; tubos cortos para volmenes
muy pequeos, no necesitan refrigeracin, velocidad mas de 10.000 rpm, para
volmenes pequeos, se usan en biologia molcular.
3)- alta velocidad: velocidad entre 18.000 y 25.000 rpm, necesitan
refrigeracin, algunas tienen sistema de vacio, tiles para separar fracciones
celulares (membranas, orgnulos) pero no sirven para virus ni ribosomas o
macromolculas.
4)- ultra-centrifugas: velocidad a partir de 50.000 rpm, necesitan
refrigeracin, sistema de vacio; hay 2 tipos => 1.analticas (analizan las
propiedades de la sedimentacin, tienen detectores, determinan la
concentracin de parametros mediante la DO) 2.preparativas (preparar la
muestra para luego analizar => aislar virus, macromolculas)
Tipos de rotores:
a)- flotantes o basculantes: posicin de 90 con el eje, los tubos
utilizados estn unidos al brazo del rotor por su parte superior; se usan
para volmenes pequeos de muestra; se utiliza en biologa molecular.
b)- de ngulo fijo/angulares: en ngulo fijo (+ o - entre 20-30 con el eje);
son para volmenes mas grandes y se usan en clnica habitualmente;
c)- rotores verticales: se produce en vertical (ngulo 0); para volmenes
muy grandes; se consigue un "pellet" (sedimento muy poco concentrado);
gradiente de densidad isopcnica.
Centrifugacin analtica con

esta
se
pretende
estimar
propiedades fsicas de alguna partcula en concreto, es decir, sus propiedades
hidrodinmicas; para esto se tiene que cumplir:
- aplicacin en sustancias, en mezclas lo + puras posibles y no a grandes
mezclas
- se pueden aplicar velocidades elevadas de giro sin que repercute en la
muestra
- rotor utilizado: deben permitir alinear el tubo con los sistemas pticos que
miden la sedimentacin en cada momento.
Caractersticas:
- poco volumen de muestra
- pureza elevada
- velocidad de giro elevada
- en BQ se utiliza para determinar el coeficiente de sedimentacin y saber que

particulas, que composicin tiene la muestra
- los sistemas pticos miden la DO de la muestra
Aplicaciones:
- averiguar la pureza de un compuesto
- determinar la proporcin relativa de sus componentes
- en investigacin => para conocer e interpretar las estructuras moleculares de
diferentes compuestos.
Centrifugacin preparativa - a diferencia de la anterior, es la tcnica que

nos permite preparar o adecuar la muestra para su posterior anlisis; hay 2
mtodos:
A)- Centrifugacin preparativa diferencial; es el mtodo mas comn de

separacin que nos permite separar las partculas en funcin de su velocidad
de sedimentacin (e.j.sangre); el resultado es la obtencin de un sobrenadante
y un "pellet" (material sedimentado); es inespecfico, ya que a priori, no se
conoce en que fraccin va a quedar cada partcula; muy til para separar
clulas y orgnulos sub. celulares.
B)- Centrifugacin preparativa en gradiente de densidad: es mas

compleja que la anterior; presenta muchas ventajas ya que permite la
separacin de varios o todos los componentes de la muestra; en los tubos hay
un fluido que de arriba abajo va de menos a mas denso; esto permite separar
la muestra por gradiente; la muestra se va colando segn su masa y densidad;
esto implica la utilizacin de un soporte fluido cuya densidad aumenta de la
parte superior hacia la parte inferior; las caractersticas de este gradientes del
fluido son:
- material inerte (no altera la muestra)
- que no se vea alterado por cambios de temperatura (resistente)
- que no absorba radiacin UV (no interfiera en la medicin)
- ser isoosmotico (ni hipo ni hiper respecto a la muestra)
- no ser corrosivo, inflamable
- ser asptico
- el intervalo de densidad debe ser suficiente
- re-utilizable
Ejemplos de fluidos gradientes que pueden separar las partculas de inters:
- Sacarosa (alta viscosidad => para estudio de protenas)
- Ficoll (polisacrido de alto peso molcula; menos viscoso que la anterior; para
separacin de clulas y orgnulos subcelulares)
- Percoll (menos viscoso que las anteriores; para estudios de fisiologa vegetal
(micro-algas) y en investigacin.
Hay 2 tipos de fluidos - zonal (masa) y isopcnica (densidad)
Zonal - se lleva a cabo mediante un gradiente de densidad y las partculas se
separan en funcin de su masa; a (+) masa (+) velocidad de sedimentacin
(+) abajo; para protenas, macro-molculas, y estructuras subcelulares;
caractersticas => si parte de la muestra tiene poco peso no podr con la
centrifugacin atravesar las zonas mas densas del fluido; cuanto (+) grande
=> se sedimentara (+) abajo (atravesar las zonas mas densas); la densidad
mxima del soporte tiene que ser inferior o como mucho igual a la de densidad
mxima de la muestra, porque si es muy denso no podrn atravesar, pero si es
muy bajo quedarn apelotonados todas abajo.
Isopcnica - cada partcula se quedar (se coloca) donde encuentra su propia

densidad; para lipoprotenas (LDL) segn su densidades; caractersticas => la
densidad mxima del soporte fluido tiene que ser mayor a la densidad mxima
de la muestra (porque si la muestra tiene componentes de 15 de densidad y el
liquido solo 10, cuando centrifugamos los de 15, 13, 11... quedarn abajo sin
separarse).
Definicin de gradiente de densidad - es la distribucin no homognea de

un fluido en la que concentracin del mismo va de menos a mas
(columna) consiguindose as una distribucin gradual de densidad.
Tema 8 - CROMATOGRAFIA
La cromatografia - agrupa un importante y diverso conjunto de mtodos que

permiten separar componentes que estn estrechamente relacionados en
muestras complejas; la muestra a trabajar se disuelve en FM (fase mvil) que
puede ser gas o liquido y este FM se hace pasar a travs de FE (fase
estacionaria) que esta incluida en un soporte que puede ser una columna o
una superficie solida; las 2 fases (FM y FE) se eligen de manera que los
componentes de la muestra se distribuyen de forma distinta entre ambas; los
componentes que se unan fuertemente a la FE se mueven (+) lentamente con
el flujo de la FM; los componentes de la muestra dbilmente unidos a la FE
se movern rpidamente al ser arrastrados por la FM; Conclusin: la diferente
movilidad de los diferentes componentes de la muestra hacen posible
la separacin de los mismos y esto permite un estudio tanto cualitativo como
cuantitativo de la muestra.
MUESTRA (diferentes componentes) => disuelto en FM (fase mvil) de forma

gas o liquido => pasar por FE (fase estacionaria) con soporte (columna o
superficie
solida)
=> SEPARACIN:
componentes
con
(-)
afinidad
(movilidad RPIDA) y componentes con (+) afinidad (movilidad LENTA) =>
Resultado en BANDAS para su anlisis cualitativo y cuantitativo de la MUESTRA.
Ventajas de la cromatografia - son mtodos rpidos, simples, tienen un

moderado coste, un amplio campo de aplicacin como mtodo de separacin y
ademas, la posibilidad de llevar a cabo un anlisis cuantitativo, una vez que se
han separado los componentes (cualitativo) en bandas.
Clasificacin de los mtodos Cromatogrficas
Cromatografia de ADSORCIN - es la mas antigua (la que se hizo); FE es

solida, FM es liquido o gas; la separacin depende de la polaridad (segn las
cargas +/- de las molculas) de las molculas de la muestra (soluto); se suelen
hacer en columna; las sustancias a separar (muestra) se colocan disueltas en
la parte superior de la columna; los distintos disolventes que van pasando por
la columna, separar los componentes por la diferente solubilidad de cada uno
en el lquido disolvente; tras la cromatografia cada componente eluye en
momentos diferentes y as son separados y cuantificados; adsorbentes (FE)
=> e.j. carbonato clcico; disolventes (FM) e.j. acetona, metanol, agua.
Utilidad => se usa para la separacin de diversas sustancias en orina.
Cromatografia de REPARTO - FE suele ser liquido y FM liquido o gas (+

soluble + acuosa); se puede hacer en columna o plana; Rf (factor de retencin)
=> d1 o d2 o d3/ d (es la distancia recorrida proporcionalmente por dicha
sustancia d1/d2/d3 dividido entre el frente cromatogrfico/ d); permite separar
la sustancia segn su solubilidad.
Cromatografia de INTERCAMBIO INICO

Las sustancias se separan por el intercambio de iones; se basa en
la interaccin inica del soluto con la FE que tiene grupos funcionales
cargados; FM suele ser liquido FE solido; se hacen en columna; el soporte (FE)

suele ser una resina cargada positivamente o negativamente; si su carga (del
soporte) es positiva => la elucin (lo que sale de la columna) cargada
positivamente y si la columna es negativa => el eluyente sera negativo; para
conseguir separar las otras cargas retenidas en la columna, se introduce
un tampn de ph adecuado en la columna para que las cargas retenidas se
eluyan. Utilidad => en BQ para separar amino cido, pptidos, protenas,
nucletidos y todos los compuesto de naturaleza inica (Hb, isoenzimas).
Cromatografia de PENETRABILIDAD o exclusin MOLECULAR

(exclusin por tamao)
Llamada filtracin de geles; se lleva a cabo en gel (como FE) de forma
esferas que estn llenos de poros que pueden ser de mayor o menor
tamao segn la sustancia utilizada para fabricar el gel; separa sustancia
en funcin de su tamao y forma (no afecta el eluyente, el pH ni la
fuerza inica); los de mayor tamao no caben en el poro y pasan por entre las
esferas y llegan los primeros; una vez introducidas en el gel, las molculas mas
pequeas tardaran mas en salir de la red porosa; quedaran retenidas (+)
tiempo; Las de mayor tamao, al no caber en el poro, pasan entre las esferas y
eluyen las primeras; a (+) tamao => (+) velocidad; a (-) tamao => (-)
velocidad (son los ltimos en salir, porque se retienen en los poros); Fe es
solida (gel) y FM es liquida (puede ser agua o solucin electroltica);
la elucin solo depende de la forma y tamao de la partcula. Utilidad =>
separar
sustancias
de
gran
peso
molecular
(pptidos, protenas, polisacridos, cidos nucleicos, purificacin de
ciertas
sustancias, etc.).
Para realizar estudios - Cromatografia de AFINIDAD

FE es solida (gel) y FM es liquida; Gel recubierto de Ac anti algo (hormonas,
enzimas...); metemos la muestra con distinta composicin, tenemos Ac anti
alguno de sus componentes; los dems componentes eluirn a travs de la
columna; quedara el Ag y estos podrn salir modificando el ph de la unin.
Utilidad => para saber si hay algunas enzimas, hormonas, vitaminas... (para
enfermedades que buscan una de las enzimas o hormonas y que cantidad
hay).
Anlisis cualitativo (identificacin)

Si comparamos la informacin de la espectroscopia de masas o RMN con la
cromatografia, este es limitada; la cromatografia nos da datos del tiempo
de retencin y
de
la posicin de
la
sustancia
en
la
FE
tras
la elucin (extraccin de una sustancia del medio que le ha adsorbido); los
datos de inters se obtienen a partir de cromatogramas obtenidos de una
misma sustancia problema, con diferentes FM y a diversas temperaturas
de elucin; es una tcnica muy utilizada para detectar la presencia o ausencia,
de determinados componentes en mezclas de las que se conoce su identidad;
si en la cromatogrfica no aparece el pico de una determinada sustancia,
significa que este ausente ( o a concentracin inferior); se utiliza para
favorecer anlisis espectroscpicos posteriores
de
muestra
muy
compleja; separacin previa para un estudio posterior de las diferentes bandas
igual no siempre ha de ser propio al cuantitativo (solo se sabe si hay o no hay
estos componentes);
CROMATOGRAMA
Anlisis cuantitativo (cuantificar)

Segn las tcnicas:
- en la cromatografia plana => el rea cubierta por las sustancias separadas,
las bandas, se recortan, diluyen y en una cubeta se mide
la concentracin espectrofotometricamente.
- en la cromatografia en columna => la altura o el rea de los diferentes picos
obtenidos nos dar la informacin cualitativa al compararlos con determinados
patrones.
Para esto se realizan cromatogramas de distintos patrones, obtenidos
con diluciones de un patrn cuya composicin es similar a la de la muestra
problema
y
se
representan grficamente las
alturas
o reas de
pico segn la concentracin; la representacin dar una linea recta, luego se
comparan
los
datos
de
nuestra
muestra
con
la grfica;
los anlisis cuantitativos estn basados en la grfica as obtenida.
Cromatografia plana - FE se encuentra extendida en una superficie plana y

FM es liquida y se desplaza por capilaridad o por adsorcin; 2 tipos =>
1)- Cromatografia en papel (PC) - FE generalmente es liquida, se encuentra

adsorbida entre las fibras de una tira de papel; tambin interviene un proceso
de adsorcin sobre el soporte solido (cromatografia de reparto); tcnica:
- colocar en una tira de papel de filtro una gota de solucin de la muestra con
un capilar o micro-pipeta (el dimetro no > 5 mm)
- dejar secar
- colocar la tira en una cubeta de vidrio cerrada con eluyente liquido; el proceso
puede tener lugar de 2 formas => ascendente (el eluyente sube por el
soporte de papel apoyando en el fondo del recipiente) o descendente (el
papel se mantiene colgado de la parte superior del recipiente y el eluyente va
descendiendo); el descendente es mas rpido, pero no obtienen buenas
separaciones;
- dejar que este fluya por la tira de papel (desarrollo del cromatograma)
- al finalizar, sacar la tira de la cubeta sealando el nivel exacto alcanzado por
el liquido, secar y proceder al revelado.
Rf = distancia recorrido por la sustancia (d1/d2/d3)
distancia recorrido por el liquido de desarrollo
El valor de Rf esta condicionado por factores => la composicin del liquido
de desarrollo, la temperatura de realizacin de tcnica, las caractersticas del
soporte (grosor, tamao de poro etc.); para considerar el valor de Rf
como caracterstico de cada sustancia, es necesario especificar las condiciones
en que se ha realizado la medicin; es imprescindible estandarizar las
condiciones (Ta, pH, etc.)
Revelado con procedimientos fsicos => pulverizar una sustancia

fluorescente (e.j.fluoresceina) sobre el soporte de papel y al iluminarlo con
fuente de luz ultravioleta, se observan las distintas manchas oscuras sobre un
fondo fluorescente.
Revelado con procedimientos qumicos => pulverizar el soporte de papel
con agentes reveladores que den reacciones coloreadas con los distintos
componentes de la muestra problema.
La determinacin cuantitativa de cada componente se hace mediante
fotometra (medida del color de las distintas manchas obtenidas tras el
revelado)
o
someter
una
mezcla
de patrn al
mismo desarrollo cromatogrfico del problema y comparar los resultados.
2)- Cromatografia en capa fina (TLC) - tcnica de reparto liquido-liquido

que tambin interviene un proceso de adsorcin; el soporte de FE es un
material poroso, pulverulento, extendido sobre una superficie de
vidrio, plstico o metal (e.j.celulosa, gel de silice/oxido de aluminio/silicato
magnesico, poliamida); FM fluye por capilaridad; es una tcnica mas rpida,
mas sensible y fiable que PC. Utilidad => separacin de sustancias de bajo
peso molecular (amino cidos, lpidos, hidratos de carbono, etc.); se suele
hacer de forma ascendente (semejante al PC) y frecuentemente se utiliza
la tcnica bidimensional, combinando 2 sistemas distintos de disolventes;
la elucin se realiza mediante el raspado de las distintas manchas en el
soporte y posterior extraccin con disolventes adecuados; una vez extrados,
se
procede
la identificacin (anlisis cualitativo)
y
su cuantificacin (anlisis cuantitativo); Drogas => en papel.
Cromatografia en columna - se realiza el transporte de una sustancia

a travs de una columna por la adicin continuada de FM (puede ser liquido o
gas); el desplazamiento (por presin o por gravedad) de los distintos
componentes de la muestra es decir, su velocidad de migracin, depende del

tiempo que permanezcan en la FM; el 1er eluyente que sale de la columna es
el que tiene (-) afinidad con la FE; FE se encuentra en el interior de la columna;
la diferencia de velocidad de los distintos componentes al atravesar la columna
permite su separacin; el tiempo que pasa desde que se inyecta la muestra en
la columna hasta que el pico alcanza el detector => tiempo de retencin (tR);
el proceso sera mas efectivo cuanto mas separadas aparezcan unas bandas de
otras; ensanchamiento de bandas => este efecto no deseable se puede
producir
durante
la separacin cromatogrfica,
lo
que
disminuye
la resolucin de la tcnica que es la capacidad de una columna para separar 2
sustancias; se produce una difuminacin (solapamiento), se mezclan los
componentes
de
las
bandas;
para
evitar,
se
utiliza
columnas
de desarrollo suficientemente largas que van a incrementar el grado
de resolucin cromatogrfica y as obtener el mximo rendimiento del proceso
(optimizacin: conseguir que los distintos componentes de una mezcla se
separen totalmente y en el menor tiempo posible); tcnica =>
(1)- se inyecta la muestra en la columna
(2)- adicin continuada de FM
(3)- desplazamiento de los distintos componentes de la muestra
(4)- aislamiento de las distintas sustancias que hayan podido separadas (pasar
suficientemente FM a travs de la columna) hasta que las diferentes fracciones
individuales salgan y detectadas por el detector o recogidas
(5)- a la salida de la columna, un detector identificara cada una de las
fracciones
(6)- con la seal recogida por el detector se obtiene una grfica donde
aparecen una serie de picos (cromatogrfico) que se utiliza para
el anlisis cualitativo y cuantitativo.
Aplicacin => determinacin de Hb-glicosilada; separacin de sustancia en
orina, en BQ => separacin de amino cidos, pptidos, protenas, nucletidos,
Hb, isoenzimas, polisacridos;
purificacin de
sustancias,
muestras orgnicas complejas, compuestos rgano-metlico.
Cromatografia de gases
La muestra se volatiza y luego se inyecta en una columna cromatogrfica; este
proceso se lleva a cabo por la accin de un gas inerte (FM) cuya funcin es la
de transportar la muestra a travs de la columna; la mas utilizada es la
cromatografia de gas-liquido (GLC) con FM gaseosa y FE liquida retenida sobre
la superficie de un solido inerte.
Componentes bsicos:
(1)- Gas portador (FM): qumicamente ha de ser inerte, a la presin adecuada y
sin agua e impurezas (puede ser => He, N, H, CO2)
(2)- Sistema de inyeccin de la muestra: volatiliza la muestra; el sistema mas
utilizado para la inyeccin de la muestra es con una micro-jeringa aplicada en
la cabeza de la columna
(3)- Columnas de desarrollo: hay 2 tipos => de relleno (empaquetadas) y
capilares (tubulares abiertas); hoy en da se utilizan las capilares por su gran
rapidez y eficacia
(4)- Sistema de deteccin: el detector ideal debera tener adecuada
sensibilidad, buena estabilidad, gran reproductibilidad, amplio margen de
temperaturas, reducido tiempo de respuestas, alta fiabilidad, fcil manejo, no
destruir
la
muestra;
los
mas
usados
=> ionizacin de
llama,
conductividad trmica, termoinicos, captura electrnica, emisin atmica.
Aplicacin =>
para anlisis cualitativo,
recurrir
a
=> los
tiempos
o volmenes de retencin de las sustancias analizadas; para el cuantitativo, se
utilizan => los picos o reas del cromatograma obtenido; las aplicaciones mas
importantes son:
- mtodo de separacin inmejorable
para
muestras orgnicas complejas,
compuestos rgano-metlicos y sistemas bioqumicos;
- proporcionar un medio adecuado que puede llevar a cabo anlisis mas
complejos.
Cromatografia de lquidos de alta resolucin (HPLC)

Son mtodos mas utilizados en la actualidad, que se caracterizan por =>
- permite estudiar lquidos utilizando columnas capilares (+) largas, (-) tiempo
para (+) resolucin
- su gran sensibilidad
- su capacidad para proporcionar determinaciones cuantitativas exactas
- su gran utilidad a la hora de separar sustancias no voltiles o termo-lbiles
- poder ser utilizados para sustancias de gran inters en la industria en muchos
campos de la ciencia
Esta tcnica puede ser utilizada para separar => plaguicidas,
hidrocarburos, aminocidos, protenas, cidos nucleicos, azucares, drogas,
terpenoides (molcula vegetal)
Los componentes bsicos:
(1)- sistema impulsor de la FM: debe estar libre de vibraciones para no afectar
el flujo
(2)- inyector: en actualidad es un dispositivo que evita las interferencias en la
corriente de disolvente
(3)- formador de gradiente (no es indispensable): actualmente con una sola
bomba
(4)- columna: material plstico compresible que elimina los espacios muertos
de la columna
(5)- detector: 3 sistemas bsicos (la absorbancia, el indice de refraccin, la
fluorescencia
(6)- registro-integrador: se obtiene una grfica en forma de picos
(cromatograma) que identifica las sustancias analizadas y se puede calcular
para el anlisis cuantitativo.
Tema 9 - ELECTROFORESIS
Electroforesis - proceso de la separacin de las especies cargadas de iones
o partculas coloidales en funcin de su distinta velocidad de migracin,
cuando estn sometidas a la accin de un campo elctrico; velocidad
de migracin (movilidad electrofortica:
unidad
/tiempo) =>
la
velocidad de desplazamiento de las diferentes sustancias durante el transcurso
de la electroforesis; el desarrollo de la tcnica electrofortica, depende de la
densidad de carga y condicionada por una serie de parmetros (pH, fuerza
ionica, diferencia de potencial del campo elctrico aplicado, la naturaleza de la
muestra, interacciones entre la muestra y soporte elegido); es
una herramienta practica para el analisis de compuestos biologicos y un
metodo analtico/preparativo => separa macromoleculas en una mezcla para
la posterior tecnicas mas complejas; la sustancia se desplaza
en funcin de su carga y que depende de: (1) la carga de la sustancia (2)
el voltaje del campo elctrico creado (3) el coeficiente de friccion/rozamiento
entre el soporte y la sustancia => sustancias (+) se dirigen hacia el polo
negativo (ctodo) y las (-) hacia el polo positivo (nodo);
Los componentes bsicos de un equipo de electroforesis

- Fuente de alimentacin elctrica: su intensidad en funcin de las
necesidades de la separacin de muestras; el voltaje aplicado influye en el
resultado de la electroforesis; el calentamiento que se puede generar del
aumento del voltaje se soluciona con un sistema de refrigeracin.
- Cubeta: donde se coloca la solucin tampn; tiene que garantizarse su
correcta limpieza
- Puente salino: tiene que estar en contacto con el tampn utilizado,
depositado en la cubeta; sobre el colocaremos nuestro soporte
- Tampn amortiguador: fijar pH adecuado => proporciona una
fuerza inica que permite el movimiento de cargas; no se ha de utilizar
el tampn para
mas
de
2
o
3
separaciones;
a
+ concentracin del tampn - migracin (lenta)
=>
peor separacin y resolucin.
- Soporte: sobre el donde se coloca/se aplica la muestra con un aplicador y
donde aparecen las bandas con las sustancias separadas tras el
proceso electrofortico;
se
puede
realizar
directamente
en
una solucin tamponada (electroforesis libre) o sobre un soporte que permita
que las fracciones quedan permanentemente separadas y hacer
su cuantificacin (electroforesis zonal); la eleccin del tipo de soporte depende
del objetivo del anlisis.
Producto de transparentado (para el acetato de celulosa)

Cubeta de tincin
Equipo de revelado
Peine
Las cmaras de electroforesis preferibles son aquellas cuyo tamao es

reducido, porque =>
- presentan una menor superficie de evaporacin
- las diferencias de temperatura se minimizan entre un compartimento y otro
- permiten una reduccin del tamao de las aplicaciones y pueden procesar
mas muestras al mismo tiempo
Factores que intervienen en el desarrollo electrofortico (condicionan
su utilidad en el laboratorio):
(1)- carga neta de la sustancia en migracin (es el grado de ionizacin)
de las distintas sustancias en la muestra sometida a electroforesis, depende de
pH del medio en el que se lleva a cabo todo el proceso (se determina por
la utilizacin del tampn adecuado); es importante en sustancias como
protenas que tienen un carcter anftero => puede ser (+) o (-);
punto isoelctrico (pi) => valor pH con cargas (+) y (-) es = 0 (cargas neta
nula) => sustancia no migra (permanece inmvil en el punto de aplicacin; si
pH final > pi => esta cargada (-), la sustancia migrara hacia el polo
(+)/nodo y si pH final < pi => esta cargada (+), migrara hacia el polo
(-)/ctodo;
(2)- fuerza inica del

medio
- tambin depende
del tampn;
la
corriente elctrica es transportada por todos los iones presentes en la muestra
y en el tampn; cuando mas concentrado el tampn, mas corriente
transportada por los iones de el y menos sera la transportada por la muestra
(migra mas despacio); la concentracin del tampn debe ser suficiente para
mantener constante pH adecuado y proporcionar fuerza inica que permita el
movimiento de cargas => si es > a la requerida => la migracin de las
sustancias
en
la
muestra
sera
mas
lenta
(no
se
consigue
la separacin deseada)
(3)- estructura y el tamao de la sustancia - es importante en aquel

proceso electrofortica que selecciona las molculas en funcin de su tamao
=> retiene las partculas mas grandes y deja pasar la pequeas.
(4)- potencial del campo elctrico aplicado durante el proceso- cuanto

mas potencial elctrico aplicado => mas la movilidad electrofortica de una
sustancia;
aun as,
aumentar
el
voltaje
para
acelerar
el
proceso electrofortico puede tambin aumentar la temperatura y puede
causar
=> alteracin debidas
al
calor
(las protenas plasmticas se
desnaturaliza por el calor) y evaporacin del tampn utilizado (queda +
concentrado
y
aumenta
su
fuerza inica =>
dificulta
el desarrollo electrofortico)
(5)- soporte - se emplea en electroforesis zonal => al final del proceso las
fracciones quedan permanentemente separadas y sea fcil proceder a
su cuantificacin (electroforesis libre => se realiza directamente en
una solucin tamponada); tipos de soporte (depende del objetivo del anlisis)
=> no restrictivos: acetato de celulosa y gel de agarosa (se usa
en diagnsticos clnicos);
su separacin electrofortica solo
se
hace
en funcin de su carga elctrica (aun as, las sustancias con elevado peso
molecular se ven frenadas o no se desplazan totalmente); restrictivos: gel
de almidn y gel de acrilamida/ poliacrilamida (ofrecen alguna resistencia en
proceso que depende del tamao de los poros del soporte, del tamao
y caractersticas estructurales de la sustancia muestra); proporcionan buenas

separaciones de las fracciones.
-Acetato de celulosa: su estructura deja gran cantidad de huecos de aire;

cuando se sumerge en el tampon estos huecos se llenan y el tampn es el
encargado de transportar la corriente elctrica por el soporte y se produce la
electroforesis; "el cellogel" es el mas usado; ventajas => fcil manipulacin,
rapidez de ejecucin, elevada productividad, fcil lectura; desventaja => es
material
opaco
y
puede
hacer
desaparecer
las
bandas
mas dbiles al transparentar-lo; no es del todo uniforme en su porosidad;
puede producir distorsiones en el trazada electrofortica; puede producir
efectos hipercrmicos (no debidos a la muestra);
-Gel de agarosa: tiene elevado tamao de poro, formado por
agarosa; ventajas => mayor solucin (por la uniformidad de los poros que
favorece
la
misma
velocidad
del
desplazamiento
=>
banda homognea y ntida), ausencia de efectos cromatogrficos (adsorcin/
intercambio inico), no reacciona qumicamente con la muestra, transparencia
completa (contiene mucha agua) que evita la distorsin en el trazado y
resultados errneos por efectos hipercrmicos que producen otros medios
opacos; carece de cargas elctricas; no presenta problemas de endosmosis; es
adecuados para la cuantificacin por densitometra; inconveniente => solo
separa en funcin de las cargas, por su elevado tamao de poro;
-Gel de almidn: es difcil de preparar (considerable dificultad para obtener

un
soporte
de
espesor
y
porosidad
uniforme)
y
es
de preparacin extempornea => desventaja; ventaja => proporciona un
mayor numero de fracciones de la muestra a separar que otros soportes.
-Geles de poliacrilamida, ventajas => proporcionan mayor n de fracciones

y mejor resolucin en las bandas por lo que se usan en investigacin; el
tamao del poro puede variarse segn la composicin del gel, por lo que
pueden
separar
las
sustancias segn su
carga
y
tamao;
son qumicamente inertes.
(6)la intensidad
y caractersticas generales
de
la
corriente elctrica aplicada - el voltaje aplicado es muy decisivo: mayor
voltaje => mejor es la resolucin; pero esto puede generar el calor y
la evaporacin de parte del agua contenida en el soporte y puede deteriorar la
muestra; electroforesis convencional sobre gel de agarosa, no tiene este
problema, dada la breve duracin del proceso (20 minutos y el moderado
voltaje; en cambio, los sistemas que utilizan voltajes elevados deben llevar
dispositivos de refrigeracin que mantiene la temperatura durante todo el
proceso.
(7)- el revelado - se puede recurrir a diversos procedimientos, en funcin de

la
sustancia
y
de
la
sensibilidad
requerida;
electroforesis
de protenas plasmticas => utilizan el colorante azul de coomasie que
proporcionan mayor sensibilidad y capaz de detectar desde 1/2 microgramo de protena; la utilizacin de sustancias fluorescentes como la
fluoresceina aumenta la sensibilidad hasta 1 nanogramo; la tincin de plata
mejora unas 100 x la sensibilidad obtenida con el colorante de coomasie.
Electroforesis de Protenas
Su realizacin es posible, porque tienen diferente masa, tamao, peso
molecular (a mas peso molecular (pm) => menos movilidad electrofortica),
estructura y carcter anftero (pueden estar cargadas positivo (+) o negativo
(-), lo que conseguimos con la influencia de pH).
Se utiliza tampn Veronal (pH 8,6) => todas las fracciones proteicas del suero
se encuentran cargadas (-) => aplicando a muestra en el ctodo, migraran
hacia el nodo /el polo (+); procedimiento:
(a)- sumergir 10 minutos las tiras de acetato de celulosa en el tampn
(b)- colocar las tiras en el puente de la cubeta de electroforesis, una vez
eliminado el exceso de humedad
(c)- proceder al deposito individual de la muestra sobre el soporte, mediante
"el aplicador" (micro o macro)
(d)- introducir el puente de la cubeta, en contacto con el tampn depositado en
la misma
(e)- tapar la cubeta, conectar todo el dispositivo a una fuente de corriente
continua ajustando la intensidad de corriente en funcin de las necesidades
(f)- transcurrido el tiempo adecuado de migracin, desconectar el equipo y
revelar las tiras mediante la tincin adecuada que se fije especficamente a la
muestra procesada; si la muestra es plasma, saldr una banda mas
(fibringeno); si el soporte es de acetato de celulosa, la muestra de suero
obtiene 5 bandas => albumina (la que mas migra), alfa-1, alfa-2, beta (cuando
el soporte es gel de agarosa, esta banda se divide en 2: beta-1 y beta-2),
gamma (es la que menos se desplaza en suero no patolgicos/la banda mas
ancha).
(g)- proceder a la cuantificacin de cada una de las fracciones obtenidas => se
puede utilizar el aparato espectrofotometra o densitometra.
Espectrofotometra => recortar cuidadosamente cada una de las bandas

obtenidas; introducir cada banda en un tubo con una sustancia capaz de
disolverla completamente; realiza la lectura del color (la DO obtenida de cada
banda es proporcional a la concentracin de la sustancia incluida)
Densitometra => transparentar el fondo de tira mediante una sustancia

transparentadora adecuada (importante conseguir el punto optimo de
transparentado de las tiras); introducir la tira en un densitmetro, se obtiene
una grfica, en el que aparecen cuantificadas cada una de las fracciones
presentes
en
la
sustancia
sometida
a
la separacin electrofortica; densitmetro (el
aparato)
produce
proteinograma; albumina: la mas abundante y la que migra mas lejos (peso
molecular inferior => queda menos retenida); gamma globulina: la banda es
mas ancha y la de mayor peso molecular => menos se desplaza; alfa1globulina: es la menos abundante con peso molecular menos que albumina; si
es patolgico se ve una alteracin en alguna de las bandas; beta globulina:

tiene menos peso molecular que alfa-1 y alfa2.
Precauciones generales (durante el proceso electrofortico)

- sumergir completamente las tiras (gel de agarosa o de acetato de celulosa)
para evitar burbujas que podran dar lugar a manchas opacas sobre la tira;
- aplicar la muestra en forma de linea fina, mediante un capilar o un aplicador
para evitar el exceso que podra dar lugar a distorsin en el trazado;
- no utilizar el tampn para mas de 2 o 3 procesos electroforticos
- asegurar el contacto con los electrodos (preferentemente de grafito)
- garantizar la correcta limpieza de la cubeta y de todos los recipientes
utilizados
- mantener un estado de hidratacin de las tiras (ni demasiada humedad para
evitar la difusin de las bandas, ni demasiada sequedad que podra propiciar el
deposito de protenas en exceso)
Otras
aplicaciones
de
forma
semejante
a
la electroforesis
de protena, tambin se realiza con frecuencia en el laboratorio, la de otras
sustancias de gran inters clnico => lipoprotenas, hemoglobina y otras
susceptibles de ionizacin en funcin del pH.
Electroforesis de muestras de orina - la deteccin de la protena de

Bence-Jones => aparece como 1 o 2 bandas en la zona beta-gamma y mas
raramente en la zona de alfa-2 o alfa-1; el mtodo electrofortico es el
procedimiento mas seguro para su deteccin, ya que el llamado "test de
calor" para la bsqueda de esta protena proporciona aproximadamente 2/3 de
falsos negativos y 1/5 de falsos positivos y las tiras reactivas que
detectan protenas en orina no son tiles para el hallazgo de protena de
Bence-Jones.
Interpretacin de los distintos trazados electroforticos - la mayora se

realiza por una persona experta, es suficiente para obtener una interpretacin;
frecuentemente, se proporciona mayor informacin sobre la relacin entre los
distintos trazados o patrones electroforticos y ciertas patologas; dichos
patrones proporcionan informacin acerca de lo que ocurre en el organismo
durante determinados procesos; las enfermedades tienen patrones

predominantes, sin embargo, al no ser especficos, no permiten por si solos
llevar a cabo el diagnostico.
Electroforesis capilar y su diferencia con la convencional

Electroforesis convencional (explicado anteriormente) => ha sido utilizado
durante muchos aos para separar especies complejas de elevado peso
molecular de inters biolgico y bioqumico; se puede utilizar un sistema
de refrigeracin para evitar el calentamiento (efecto Joule) que se produce al
aumentar el potencial elctrico (as conseguir mas velocidad) que puede
afectar negativamente a la calidad de la separacin y resolucin); el soporte es
papel o gel.
Electroforesis capilar => es una tcnica alternativa para paliar la dificultad
del calentamiento que se produce (efecto "Joule" => la dependencia directa
entre velocidad/resolucin y campo elctrico); se utiliza como soporte un tubo
capilar con un dimetro interno < a 0,1 mm y longitud entre 50 cm - 1 m; el
soporte de la tecnologa utilizada ofrecen separaciones con volmenes de
muestra extraordinariamente pequeos (0,1 - 10 nL), con una
elevada resolucin y rapidez y los resultados son mas fiables; no
hay manipulacin => todo esta automatizado y digitalizado; se puede
aumentar el campo elctrico sin peligro; la tecnologa de la electroforesis
capilar
permite
evaluar
de
forma
cuantitativa
cualquier parmetro estable incluido en
una
muestra liquida;
Utilidad
=> anlisis de protenas,
vitaminas,
grasas,
carbohidratos,
pesticidas, anlisis gentico, iones.
Tema 10 - BIOLOGA MOLECULAR

Las tcnicas de biologa molecular
se
aplican
en
el
laboratorio clnico (microbiologia, bioquimica, hematologa etc.) para el
diagnostico de patologas de origen genetico de las que es conocido el gen
causante; se basan en la capacidad de los acidos nucleicos de auto-reconorse
=> detectar y unirse unica y exclusivamente a su secuencia complementaria;
capacidad de auto-duplicarse; se usan en tcnicas de transferencia de
Southern
Blot
y
de
Northern Blot y
las tcnicas de ampliacin de cidos nucleicos mediante RCP/PCR para el
diagnostico de enfermedad infecciosas, anlisis de paternidad y un patrn de
huellas de ADN;
ADN /acido desoxirribonucleico => una larga molcula nica de doble

cadena (bicatenario /dicatenario) formada por la unin de 2 cadenas
helicoidales de polinucletidos enrollados a lo largo de un eje comn; las
cadenas corren en direcciones opuestas; esta en el ncleo; esta formado por
cadenas nucletidos en los que el azcar (pentosa) es la desoxiribosa y las
bases nitrogenadas son la purnicas (adenina, guanina) y pirimidnicas
(citocina, timina); situado en el ncleo y forma cromosoma; es donde se
guarda la informacin necesaria para fabricar protenas; es un cdigo que
se traducir en amino cidos y luego protenas.
ARN /acido ribonucleico => es una molcula (con variaciones ARNn, ARNt,
ARNr, etc.) formada por una nica cadena (monocatenario) helicoidal
compuesta de una sucesin de nucletidos; sale del ncleo (esta en el
citoplasma); es la sucesin de nucletidos, donde el azucar/pentosa es la
ribosa y las bases nitrogenada son purnicas (adenina, guanina) y
pirimidnicas (citocina y uracilo); no forma cromosoma; es el encargado de
transmitir
la informacin que
guarda
el
ADN
(intermediario
para
la sntesis protenas).
Hibridacin de cidos nucleicos - consiste en la fijacin "in vitro" de ADN o

ARN marcada (en la mayora con un isotopo radioactivo, sustancia qumica o
enzimas) a su correspondiente cadena complementaria procedente de la
muestra biolgica perteneciente al paciente; esta tcnica se basa en la
capacidad de los cidos nucleicos de autor-reconocerse => detectar y
unirse nica y exclusivamente a su secuencia complementaria; reactivos
necesarios: (1) acido nucleico diana de la muestra (2) sondas de hibridacin
=> fragmentos de cidos nucleicos marcados, se elaboran en el laboratorio y
su secuencia de bases es complementaria a la secuencia genmica del ADN
diana.
Los sistemas de marcaje de sonda o sistemas indicadores - sistema

mediante los cuales se marca la secuencia gnica => para poder visualizar
una secuencia de ADN/ARN conocida y facilitar el posterior sistema
de deteccin de la enfermedad determinada y lectura de resultados; esta
secuencia de ADN es la que se busca en la muestra del paciente, son
especificos porque contienen una secuencia de bases que es complimentaria a
la secuencia genmica del DNA diana; tipos de sonda:
a. Qumico - la sonda se une a sustancias qumicas
b. Radioactivo - se incorporan a la estructura molecular de la sonda isotopos
radiactivos
c. Enzimtico - se une la enzima y la secuencia de acido nucleico mediante una
cadena carbonada
d.
Antignico
se
dota
a
la
secuencia
de
capacidad antignica modificando alguno de sus nucletidos
la
sonda
de
e. Colorimtrico - se une la sonda a compuestos coloreados o capaces de

formar compuestos coloreados; Bromuro de Etidio => se usa como
marcador rpido de ADN, que tiene la capacidad de intercalarse en las cadenas
de ADN, y al incidir con luz UV emite una luz rojiza anaranjada que es mayor
cuando este unido el ADN (sirve para detectar el ADN).
Tcnicas de hibridacin
(1) Extraccin del
acido
nucleico/ purificacin de cidos nucleicos
(tcnica del fenol-cloroformo) => se dispone en el mercado de sistemas de
aislamiento
de
ADN
a
partir
de
sangre perifrica o
de clulas en suspensin (leucocitos)
para
la obtencin de
ADN
puro; tcnica de extraccin:
- lisis celular => romper la membrana celular y nuclear con solucin de lisis
celular (mediante la accin del reactivo y incubacin)
- desproteinizacin => quitar todo lo que no sea material gentico con
la tcnica de fenol-cloroformo; las protenas parcialmente degradadas, se
eliminan de la disolucin mediante una extraccin con fenol-cloroformo
(mediante aplicacin de reactivo, centrifugacin y decantacin repetitivo)
- comprobacin de la efectividad de la desproteinizacin (mediante
lectura
de
absorbancia
por espectrofotometra)
=>
se
calcula
la relacin de absorbencias a las 2 ondas y la relacin optima oscila entre 1,6
(260) y 2 (280); es para comprobar si la muestra es pura.
Aplicacin => diagnostico de leucemia mieloide crnica (LMC) y talasemias
(2) Tcnica de Southern Blot - fases:
- purificacin de cidos nucleicos con tcnica de fenol-cloroformo => obtener
ADN puro
- digestin del ADN por EdR: incubacin de ADN o ARN de la muestra con EdR
(endonucleasas de restriccin => enzimas que seccionan la cadena);
objetivo: romper el ADN en diversos fragmentos; se incuba la EdR con el ARN
a 37oC y se comprueba la efectividad del proceso, disolviendo una
pequea cantidad de ADN en azul de bromofenol y realizar una electroforesis

en un minigel de agarosa => se observan sus fragmentos bajo la luz UV (se
obtienen diferentes fragmentos de ADN con regiones diana);
- separacin de los fragmentos de ADN: disolver el gel de agarosa;
- desnaturalizacin del gel: mezclar el gel de agarosa con diferentes soluciones
de desnaturalizacin, centrifugar y decantar el sobrenadante hasta que quede
limpio; desnaturalizacin del ADN => separar las dos hebras de ADN para
poder juntarse con el hbrido (en un medio astringente para que no se unan
entre ellas) mediante calor (alerta: no fundir el gel porque se estropea el ADN).
- electroforesis (para separar los fragmentos por tamao); en gel de agarosa o
poliacrilamida.
- transferencia a un filtro de nitrocelulosa: hacer pasar el gel por
una batera de solucin de elevada fuerza inica => afinidad por el ADN; fija
las bandas a un soporte mas estable antes de la hibridacin; Por absorcin, por
capilaridad, ascienden las bandas al papel de nitrocelulosa que es muy
resistente y manejable (fijadas para siempre).
- prehibridacin e hibridacin de cidos nucleicos: la unin de las sondas
marcadas (con isotopos radiactivos) con el ADN diana desnaturalizado (para
marcar
la
secuencia gnica,
si
esta
o
no);
se
realiza
en
una cmara de hibridacin con condiciones controladas de temperatura a 42C,
pH, humedad, concentracin de sales, medio astringente etc; se uniran a la
sonda, no entre ellos;
- lavado y revelado: una vez acabado el proceso de hibridacin, se elimina el
exceso de radiactividad con un lavado de filtros (para quitar el exceso de
radiacividad), se procede el secado, se pone en contacto con la pelicula
radiografica; unos dias despues revelar la pelicula y lectura de resultados
segun el metodo de marcaje usado. Presencia o ausencia del fragmento de
acido nucleico responsable de la enfermedad genetica y se realiza la lectura de
los resultados.
La deteccin /lectura de los resultados:

- marcaje qumico => mediante quimioluminiscencia (se mide la luz emitida
por las sondas de la muestra con espectroscopia de luminiscencia)
- marcaje radiactivo => autorradiografa recuento de centelleo (medir la
cantidad de radiactividad emitida por la muestra; p.e. isotopos 32P, 125I)
marcaje enzimtico =>

espectroscopia
(se
aade
al
medio
un
sustrato cromgeno que al reaccionar se convierte en producto coloreado; a
mas color, mas cantidad de muestra; el color es lo que se busca)
- marcaje antignico => espectroscopia y microscopia (Ac contra ese Ag que
esta marcada la sonda; el Ac estar marcado con fluorescencia)
- marcaje colorimtrico => espectroscopia (lectura de la DO absorbida por la
muestra)
Aplicacin => deteccin de
varias patologas.
talasemias
alfa,
reordenamiento
de
genes,
Astringencia => el grado de inters o afinidad de la sonda por su acido

nucleico diana; cuando las condiciones del ensayo son optimas => aumenta su
nivel.
Digoxigenina => es una sustancia capaz de reaccionar qumicamente y

formar compuestos coloreados; se une a la sonda de marcaje; es un
marcador antignico, qumico y colorimtrico.
Bromuro de etidio => es un marcador rpido de cidos nucleicos; es

mutagnico y cancergeno; tiene la capacidad de intercalarse en el ADN
cuando se expone a la luz UV, emite un color naranja, rojizo que es mayor
cuando este unido al ADN; sirve para detectar el ADN.
Azul de bromofenol => es un indicador de pH, se disuelve en el gel; es

usado como frente electrofortico, para poder ver (azul) como corre el gel y
asegurarnos que las bandas no se salgan (tiene menos peso que el ADN y corre
mas).
Western
Blot
=>
la
misma tcnica pero
para
el
estudio
de
las protenas; sntesis de determinadas protenas (enfermedades); se hacen
con marcadores Ac anti esa protena.
EdR (endonucleasas de restriccin) => son enzimas (hay + de 100

diferentes) que seccionan una cadena de ADN tras reconocer una secuencia
especifica constituida entre 4-8 pares de bases nitrogenadas que delimitan las
denominadas zonas de restriccin; estos fragmentos se podran separar y
reconocer por electroforesis en gel de agarosa o poliacrilamida y van a ser
utilizadas de secuencias de ADN (y ARN) para cortar trozos grandes de ADN en
fragmentos mas pequeos; el ARN no se corta porque ya lo encontramos de
diferentes tamaos; con la electroforesis los separaremos por tamao
son extrados de microorganismos; pueden ser romos o cohesivos; en
la tcnica Northern Blot no se necesitan (no hace falta cortar) ya que el ARN
son copias pequeas de ADN.
Tcnica de Northern Blot - es similar a la tcnica de Southern Blot; la

diferencia es que se utiliza ARN; la composicin y estructura del acido nucleico
es diferente por lo que las tcnicas sern similares desde el momento de
la desnaturalizacin del ADN en la tcnica de Southern Blot; muchas veces se
trabaja con el ARN porque no se rompe / no se ha de desnaturalizar => son
trozos pequeos, no necesitan endonucleasas de restriccin.
Ampliacin de cidos nucleicos

cadena de la polimerasa)
mediante
PCR/RCP
(reaccin en
PCR => es un proceso de amplificacin selectiva y enzimtica "in vitro" de

una secuencia de ADN de hasta 3 kb; es una tcnica de gran especificad y
sensibilidad, pero puede dar un falso negativo si la muestra esta contaminado;
el proceso del termociclador:
1- extraccin y purificacin de la molcula de ADN de la muestra problema
(lisis celular, desproteinizacin para obtener ADN puro y comprobacin de la
efectividad de la desproteinizacin); ADN diana o target ADN => pocillo
2- desnaturalizacin de la doble hlice de ADN, mediante la aplicacin de
calor (se produce la separacin de las 2 hebras) para favorecer la unin de los
cebadores; el termociclador la desnaturaliza a 90-95 - 20"; se aaden

cebadores en exceso; pocillo => ADN
3- hibridacin de las cadenas por separado con los cebadores /primers (4060 - 20"), que son cadenas de 15 o 20 nucletidos que se van a unir al ADN
por los extremos opuestos de las cadenas complementarias; son necesarios 2
por PCR, cada uno complementario a una cadena del ADN, se encuentran en
exceso de concentracin para favorecer el proceso; se obtienen mediante
sintetizadores de ADN, una vez conocida la secuencia del ADN diana; pocillo
=> primers
4- extensin del complejo cebador-ADN mediante la accin de la polimerasa
(70-75C - 30"); se obtiene a partir de la bacteria termus aquaticus (Taq-P) que
es resistente al calor a pesar de ser una proteica; se aaden desoxinucletidos
(dNTP) para ir uniendo y copiando la diana y la Taq-Polimerasa que va a
catalizar la reaccin de elongacin de un cebador fijado en el extremo 3' a una
cadena molde de ADN; para ello, une dNTP al extremo 3' del cebador
en direccin al extremo 5' del ADN molde; pocillo => Taq-polimerasa + dNTP
5- renaturalizacin => se baja un poco la temperatura para facilitar la unin/
que se enrosquen (unin de la copia con el ADN diana 45-60)
6- repeticin de los ciclos de extensin hasta que se alcance la dimensin que
se haba pautado.
7- deteccin del ADN amplificado por electroforesis o hibridacin de ADN.
En
los
pocillos
=>
cebadores, desoxinucletidos (dNTP),
reactivos.
ADN
diana,
primers
Taq-polimerasa, tampn y
o
otros
Ventajas de la tcnica =>

- necesita menor cantidad de muestra y es capaz de detectar cantidades de
acido nucleicos muy pequea del orden nanogramos;
- permite amplificar de manera selectiva y enzimtica "in vitro" un fragmento
de acido nucleico (ADN/ARN) y hacer copias en un tiempo muy corto;
- permite la deteccin de una sola molcula de ADN en la muestra problema a
pesar de estar mezclada con otras molculas de ADN diferentes, se consigue
fabricar mltiple copias de una secuencia de 1 ADN
Aplicacin: Hibridacin cidos nucleicos
=>
LMC, deteccin de
talasemias, hemofilia, fibrosis qustica; Genticas => diagnostico de
enfermedad infecciosa (bacilo de Koch, clamidia, meningitis); Investigacin
=> enfermedad oncolgica (han abierto un gran abanico y avance en el
estudio de muchas enfermedades; pruebas de paternidad; Conocimiento y

tipaje vricas y bacterianas; las tres tcnicas van unidas en la PCR;
un patrn de huellas de ADN, VIH en fase de incubacin, para las donaciones
de sangre, paleontologia, antropologia, ciencias forenses, criminologia.
Cebadores - son oligonucletidos que hibridan con el ADN desnaturalizado

que se pretende amplificar en extremos opuestos de las cadenas
complementarias; son necesarios 2 cebadores/RCP cada complementario a una
cadena del ADN; siempre se encuentran en exceso de concentracin para
favorecer el proceso; se obtienen mediante sintetizadores de ADN, una vez
conocida la secuencia del ADN diana; se seleccionan de manera emprica.
Oligonucletido - secuencia corta de ADN (grupo de 15-30 nucletidos)
Nuclesido - es molcula formada por la unin de 1 pentosa con 1 base
nitrogenada con enlace covalente
Nucletido - es la unin de un nuclesido con acido fosfrico (pentosa + base
nitrogenada + fosfrico)
Sonda - fragmento de acido nucleicos marcados y formados por entre 15100 nucletidos; se elaboran en el laboratorio y su secuencia de bases es
complementaria a la secuencia genmica del ADN diana.
Tema 12 - Estudio general del metabolismo

de las protenas
Protenas - son macro-molculas de masa molecular elevada, formadas
por aminocidos unidos mediante enlaces peptdicos; pueden estar formadas
por una o varias cadenas; son biomolculas formadas bsicamente por C - H O y N; suelen ademas contener azufre y algunas contienen ademas fsforo,
hierro, magnesio o cobre entre otros elementos; son las mas abundantes de
las biomolculas => 50% del peso seco de las clulas; son sustancias
muy verstiles;
se
forman
en
el
ribosoma
a
partir
de
la informacin suministrada por los genes; la unin de aminocidos da lugar a:
- oligopptido: numero de aminocidos < 10
- polipptido: numero de aminocidos > 10
- protena: numero de aminocidos > 100
"En los enlaces peptdicos, el grupo carbxilo se une al grupo amino de otro AA
y libera una molcula de H2O (agua)".
AAs
son
compuestos anfteros (anfolitos)
=>
puede
comportarse
como cidos o
como
bases;
cada
AA
posee
un
punto isoelctrico (Pi) caracterstico; al pH de su Pi tienen carcter neutro =>
no presentan carga neta alguna; a pH fisiologico, el grupo amino se
encuentra protonado (-NH3+) y el carboxilo sin protonar (-COO-) =>
zuitterion; los alfa-aminocidos pueden representarse por NH2-CHR-COOH,
siendo R un radical o cadena lateral caractersticas de cada aminocido;
grupos
R
son
muy
variados qumicamente;
20 aminocidos forman protenas (aminocidos proteicos

=>
esencial/proviene de la dieta y no esencial/sintetizados por el organismo),
mientras otros nunca se encuentran en ellas; AA esencial => arginina,
histidina, isoleucina, leucina, lisina, metionina, fenilalanina, treonina, triptfano
y valina; todas las protenas son cadenas lineales compuestas de algunos de
estos 20 aminocidos;
Clasificacin de los aminocidos - segn lo que poseen la cadena lateral

- aminocidos alifticos => cadena hidrocarbonada (glicina, alanina, valina,
leucina isoleucina)
- aminocidos aromticos => posee un anillo aromtico (prolina, fenilalanina,
tirosina, triptfano)
- aminocidos azufrados => poseen tomos de azufre (cisteina y metionina)
- aminocidos hidroxilados
=>
hidrofilicos y reactivos (serina, treonina)
cadenas alifticas hidroxiladas /mas
- aminocidos cidos y sus amidas => de naturaleza cida y sus amidas

(cido asprtico, asparragina, cido glutmico, glutamina)
- aminocidos bsicos => muy polares (lisina, arginina, histidina)
Alteraciones de aminocidos:
- aminoacidopatas: errores metablicos congnitos
- dficit enzimtico: fenilcetonuria (falta de fenilalanina hidroxilasa), trastornos
del ciclo de urea/hiperamoniemia, albinismo (falta de tirosinasa)
- fallos en el transporte de aminocidos: cistinuria (fallo en la reabsorcin renal
o fallo en la absorcin intestinal)
Catabolismo
de aminocidos AA endgeno y exgeno se
cataliza
mediante transaminacin o por desaminacin oxidativa, tiene lugar en el
higado y en el musculo; cuando se necesitan, AA se utilizan para
la sntesis de protenas/proteognesis (transaminacin)
y
otros
productos biolgicos; el destino de la cadena hidrocarbonada es =>
formacin de Acetil CoA para: la sntesis de glucosa (gluconeognesis), el
ingreso en el ciclo de Krebs para la obtencin de energa o para la sintesis de
grasas/lipogenesis; el grupo amino => cuando no es utilizado para
la transaminacin es degradado hasta amoniaco (desaminacin oxidativa) que
el higado transforma en urea (ciclo de la urea) y glutamina; algunos AA son
utilizados en la sntesis de productos de gran inters biolgico (hormonas,
neurotransmisores, enzimas, nucletidos, etc).
Estructura de las protenas:

- la estructura primaria: determinada por la secuencia de AA en la cadena
proteica (el numero de AA presentes y el orden en que estn enlazados);
- la estructura secundaria: es el plegamiento que la cadena polipeptdica
adopta gracias a la formacin de puntes de hidrgeno entre los tomos que
forman el enlace peptdico; se distingue varios tipos de conformaciones
=> conformacin al
azar, hlice alfa,
hoja
beta,
giros
beta, conformacin del colgeno, estructuras supersecundarias;
- la estructura terciaria es la disposicin tridimensional de todos los tomos que
componen la protena; es la responsable directa de sus propiedades biolgicas;
esta determinada por la secuencia de AA (estructura primaria);
la
estructura cuaternaria: protenas con
cadena polipeptdica (oligomrica).
mas
de
una
Clasificacin de las protenas

(1) segn su composicin:
simples
=>
solo aminocidos (albumina);
conjugadas => ademas de AA posee un componente no proteico
(nucleoprotenas => acido nucleicos, fosforoprotenas, cromoprotenas/
colorante, glucoprotenas/ hidrato de carbono, lipoprotenas/ lpidos)
(2) segn su disposicin espacial: fibrosas => cadenas polipeptdicas en
paralelo a un eje unidos por puentes di-S e H (colgenos); globulares => una o
mas hlices alfa enrolladas sobre si mismas en estructura compacta
(hormonas, enzimas, anticuerpos)
(3) segn su funcin biolgica:
estructurales
(colgeno);
transporte
(albumina, hemoglobina, transcobalamina); catalizadores biolgicos (enzimas);
mensajeros qumicos (hormonas); defensa inmunolgica (anticuerpos);
(4) segn su localizacin: hsticas/tejidos; hemticas/en el plasma.
Protenas plasmticas - existe mas de 125 distintas, forman parte de un

sistema metablicamente dinmico; funciones:
- fuente de nutricin para los tejidos (sobretodo la albumina)
- mantenimiento del equilibrio osmtico (adecuada distribucin hdrica en los
diferentes compartimentos del organismo)
- amortiguadores o tampones fisiolgicos (regular pH)
- transporte de diversas sustancias (iones, bilirrubina, cidos grasos,
hormonas, frmacos)
- funciones defensivas (gammaglobulinas/ inmunoglobulina/ anticuerpos)
- otras funciones => factores de coagulacion, inhibidores enzimticos, proenzimas, enzimas, etc.
Protenas totales => la suma de las concentraciones de todas y cada una de
las protenas presentes en el plasma; VN 6-8 g/dl; el aumento
=> disminucin relativa del volumen de liquido plasmtica (hipovolemia
o deshidratacin); la cantidad no varia, sino la proporcin entre estas y el nivel

hdrico
del
organismo;
la disminucin =>
aumento
del
volumen plasmtico (retencin de lquidos), disminucin en
la sntesis de
albumina
(alteracin heptica, desnutricin),
descenso
en
la produccin (hipogammaglobulemias)
o
aumento
de
las
perdidas
(quemaduras internas, sndrome nefrtico)
de
la fraccin de
las
gammaglobulinas (hipoproteinemia).
Estudio de las diferentes fracciones de protenas plasmticas:
- electroforesis => separa fsica-qumicamente y cuantifica las fracciones
mas
importantes
de protenas plasmticas obteniendo
el patrn electrofortica (en acetato de celulosa : albmina, alfa1, alfa2, beta y
gamma globulinas); en cada fraccin hay protenas con movilidad semejante
aunque muy distintas en estructura y funcin; por eso, para obtener
mas especificidad usamos la inmunoelectroforesis;
- inmunoelectroforesis => combina la separacin electrofortica con
la provocacin de
reacciones inmunolgicas entre
las protenas y
Acs especficos frente a ellas (complejos Ag-Ac); las fracciones proteicas se
detectan mediante la aparicin de arcos de precipitacin; importante
cualitativamente por detectar un gran numero de fracciones y detectar
inmunoglobulinas anmalas;
- inmunodifusin radial (proteinograma sola no se puede usar para
diagnostico, hay que hacer serologia completa) => es una tcnica de tipo
inmunolgico, consiste en colocar el suero a analizar en un pocillo practicado
en una placa de agar, impregnada de Ac contra la protena que se desea
valorar
(por adsorcin cada protena queda
atrapada
con
su
Ac);
la reaccin entre los dos forma un anillo de precipitacin cuyo dimetro es
proporcional a la cantidad de protena presente en la muestra; se cuantifica
usando patrones.
Fracciones de protenas en el plasma

Prealbmina => la informacin/el indicador de la nutricin proteica, sobre
todo en bebes y prematuros; transporta la vitamina A; no aparece en
electroforesis.
Albmina => 55% de total; esencial en la nutricin; contiene todos los AA
esenciales; responsable de presin osmtica (retiene agua); regula equilibrio
cido-bsico (tampn pH);
transportar
sustancias;
se
une
a lpidos formando lipoprotenas; su vida media 15 das.
Globulinas
=>
grupo heterogneo,
formados
por protenas y protenas conjugados (glucoprotena, lipoprotena); se separan
(mediante electroforesis) en 3 grupos alfa, beta y gamma;
- alfa => 14-15% de total; tienden a aumentar cuando hay un dao hstico
activo; aparece en muchos procesos/ es inespecifica: traumatismo, procesos
malignos, inflamacin); de divide en alfa1 (subfraccin: alfa1-antitripsina,
alfa1-lipoprotenas, transcobalamina, protrombina) y alfa 2 (subfraccin:
ceruloplasmina,
haptoglobina,
alfa2-lipoprotenas,
eritropoyetina,
alfafetoproteina);
- beta => 12-14% de total; es estable, no suele aparecer alterada;
- gamma => 17% de total; son las inmunoglobulina (IgG,IgA,IgM,IgD,IgE)/ Acs
de inmunidad humoral; su movilidad electrofortica es muy variada (banda
ancha en proteinograma); protena C: reactante de fase aguda (altamente
sensible); utilidad de de la protena C reactiva (PCR) en suero => aunque no
sirve como prueba diagnostica, pero ayuda a establecer el diagnostico de
inflamaciones
agudas,
necrosis hsticas (es
inespecifica);
es fcilmente alterable por un gran numero de enfermedades; nos sirve como
complementaria para el seguimiento de enfermedades y ver la efectividad de
un tratamiento.
Fibringeno => en una electroforesis, migra entre beta y gammaglobulinas;
es un reactante de fase aguda; es un precursor de la fibrina (coagulacion).
Alteraciones de las protenas plasmticas

(1) disproteinemias => alteraciones en la distribucin de las fracciones
obtenidas tras una electroforesis
- hipoalbuminemia => por sntesis insuficiente (malnutricin/dficit de
determinados AA y insuficiencia heptica/fallo en la sntesis de albumina);
por eliminacin y degradacin excesiva (sndrome nefrtico/se pierde albmina
por la orina, alteraciones gastrointestinales/perdida por heces, quemaduras
extensas /se pierde por la piel);
- hipo-gamma-globulinemia => disminucin de las gamma-globulinas, por
deficiencias en el sistema inmunitario;
- hiperglobulinemia (alfa, beta y gamma) => aumento de las alfaglobulinas (en inflamaciones agudas, tumores y necrosis de tejidos); aumento
de las alfa y beta globulinas (caracterstico del sndrome nefrtico/enfermedad
renal); aumento de las gamma-globulinas (en inflamaciones, hepatopatas,
enfermedades de colgeno/artritis reumatoides, esclerodermia/acumulacin de
colageno/tejido conjuntivo en la piel y otros rganos)
(2) paraproteinemias => presencia en el plasma de alguna Ig anormal y/o de

alguno de sus fragmentos; son el producto de una actividad espontanea y
excesiva de un "clon" proliferante de linfocitos B (gammapatas monoclonales)
que suele ocurrir en: mieloma multiple/ tumor de las clulas plasmticas,
leucemias y linfomas; y tambin como consecuencia de ditesis hemorragica,
lesiones renales, sndrome de hiperviscosidad;
(3) crioglobulinemias => circulacin en plasma de Ig que precipitan al
descender la temperatura; causas: trastornos circulatorios en las regiones
distales de las extremidades y por inflamaciones de los vasos/vasculitis;
(4) alteraciones de alguna banda (defectos aislados de alguna fraccin) =>
defectos
de
las protenas plasmticas debidos
a
trastornos
de
la
propia sntesis proteica (hereditario/adquiridos);
(5) alteraciones de la proteinemia total => hiperproteinemia autentica
(no causado por hemo-concentracin /suele ser debida a un aumento de
globulina alfa, beta o gamma; la mas frecuente es de gamma-globulinas;
hipoproteinemia => disminucin de las 2 fracciones importantes (albumia y
gamma-globulinas)
Mtodos generales
de determinacin de protenas - cuantificacin de protenas en suero y en
orina
Protenas totales
=>
se
utiliza
el
mtodo de
Biuret;
es determinacin colorimtrico directo "in vitro" de protenas en suero o
plasma; fundamento => en disolucin alcalina, las protenas forman con los
iones cobre (Cu2+) un complejo coloreado de gran estabilidad, cuantificable
espectrofotomtricamente; el reactivo contiene CuSO4 (sulfato de cobre)
en solucin acuosa alcalina; la reaccin se produce en los pptidos y
las protenas por
la destruccin de
su
enlace peptdico (liberando
los aminocidos); la reaccin se basa en la formacin de un compuesto de
color violeta (intensidad de color = la concentracin de protenas) debido a
la formacin de un complejo de coordinacin entre los iones Cu2+ y los pares
de electrones no compartidos del nitrgeno que forma parte de los

enlaces peptdicos; mtodo => 20 lambdas de muestra (suero o plasma)
o solucin de protenas + 1 ml de reactivo (mezclar) => dejar reaccionar 10
minutos a temperatura ambiente => medir la absorbancia a 540
nm; reaccin de
Biuret
=>
complejo
de coordinacin formado
en solucin alcalina entre los iones cpricos y los tomos nitrgeno nuclefilos
de cuatro moleculas de Biuret.
Determinacin de albumina (metodos de fijacin de colorantes)

- fundamento => a un pH acido, la albumina (nicamente) se
combina especficamente con el verde de bromocresol para forma un complejo
coloreado que se determina fotomtricamente; es un metodo colorimtrico;
- determinar a la vez albumina y protenas totales es fundamental para el
estudio del metabolismo proteico;
- detectar las alteraciones del nivel de albumina (protena mayora) tienen

un inters clnico muy significativo.
Determinacin de protenas totales

en
orina
(metodos
turbidimtricos) - el mas utilizado es el del acido tricloroactico; es de gran
exactitud y precisin; fundamento => determinan espectroscopicamente, la
turbidez debida a la presencia de protenas.
Proteinograma de algunas enfermedades:

- Cirrosis heptica => la fraccin albumina desciende por hepatopata e
insuficiencia heptica y la fraccin de gamma globulina aumenta por la cirrosis.
- Sndrome nefrtico (B) => disminucin de la albmina por enfermedad renal
(se pierde en orina); hay aumento de las globulinas alfa2 porque se producen
mas protenas para compensar la perdida de protena renal; descienden las
gamma globulina.
- Respuesta inflamatoria crnica (C) => aumento de alfa 2 por los reactantes
de fase aguda y de gamma por produccin continuada de inmunoglobulinas;
disminuye albumina al aumentar las gamma en proporcin (pero no por
perdidas)

de los lpidos
Lpidos - conjunto de molculas orgnicas, compuestas principalmente por C ,
H y O, tambin pueden contener fsforo(P), azufre(S) y N; se caracteriza por
ser
hidrofbicas
o
insolubles
en
agua
y
solubles
en
disolventes orgnicos (bencina, alcohol, benceno y cloroformo); existen =>
(1) molculas esenciales (fuente exgeno), (2) molculas que requieren ciertas
modificaciones para ser funcionales y (3) moleculas no esenciales (se
sintetizan sobretodo en el hgado).
Clasificacin de lpidos:
1- saponificable => contiene acido graso (AG) como unidades bsicas;
su molcula formada por una larga cadena hidrocarbonada y un
grupo carbxilo terminal; AG se dividen en saturados e insaturados; AG
esenciales no pueden ser sintetizados por el organismo (acido linoleico, acido
linolnico y acido araquidnico) => se obtiene por la dieta.
(a) simples (solo contienen C,H y O); acilglicridos => esteres (unin) de AG
con glicerol/glicerina mediante una esterificacin; 1 molcula de glicerol puede
reaccionar con 1-3 moleculas de AG (mono, di o tri-acilglicridos); tiene forma
solido (grasas) y lquidos (aceites) a temperatura ambiente.
(b) complejos/lpidos de membrana => contiene ademas de C,H y
O, tambin N,P,S o otra biomolculas (glcido); fosfolpidos => todas las
membranas activas de las clulas poseen una bicapa de fosfolpidos
(fosfoglicrido, fosfoesfingolpidos); glucolpidos => forman parte de la
bicapa lipdica de la membrana celular como glicoclix: reconocimiento celular
y receptores antignicos (cerebrsidos, ganglisidos).
2- insaponificables (no tienen AG)

(a) terpenos/terpenoides/isoprenoides => aceites esenciales, el fitol
(clorofila), vitaminas A,K y E, carotenoides (pigmentos fotosintticos) y el
caucho;
(b) esteroides => cidos biliares, hormonas sexuales, corticosteroides,
vitamina D y colesterol (componente de las membranas celulares);
(c) eicosanoides/icosanoides => prostaglandinas, tromboxanos y
leucotrienos
(mediadores
del
sistema
nervioso
central,
procesos
de inflamacin y respuesta inmune)
Funciones de lpidos:
- Fuente energtica
- Principal forma de almacenamiento de energa a largo plazo en forma de
triacilglicridos (en todas las clulas, sobretodo en los adipocitos
=> funcin lipognesis y liplisis)
- Componentes estructurales de las membranas celulares y de
las lipoprotenas plasmticas
- Agentes emulsionantes
- Participan en la regulacin del metabolismo mediante sus funciones de
segundos mensajeros, transportadores, cofactores, hormonas, vitaminas,
prostaglandinas, etc.
- Precursores de otras moleculas como hormonas
- Involucradas en respuesta inmunolgica
Triglicridos (TG) - compuestos formados por la esterificacin de la

glicerina/glicerol con 3 AG; funcin principal => trasportar la energa hasta
los rganos de deposito y su destino final es que sus cidos grasos sean
almacenados o utilizados como fuente de energa; lpidos almacenados como
TG
constituyen
la
principal
reserva energtica del
organismo;
son depsitos condensados de energa metablica; en estado inanicin, fri,
ejercicio etc., se produce una rpida movilizacin de los TG que se
hidrolizan/liplisis => el glicerol y AG formados pasan a sangre;
TG endognos: producidos por la sntesis en el higado mediante los AG
disponibles y mediante la transformacin de los hidratos de carbono; TG
exgenos: producidos por la absorcin intestinal de las grasas digeridas de la
dieta; VN de TG en suero => < 160 mg/dl.
Lipognesis - se produce en las clulas, sobretodo las adiposas (adipocitos)

=> especializados en la sntesis y almacenamiento de lpidos; AG procedentes
de la ingesta son esterificados con glicerol para formar triglicridos; este
proceso
es
estimulada
por
la
insulina
=>
impide
la movilizacin de cidos grasos al inhibir la accin de las lipasas, favoreciendo
la acumulacin de triglicridos.
Liplisis - consiste en la movilizacin de los triglicridos (almacenados en el
tejido adiposo) cuando son requeridos como combustible; mediante la lipasa,
TG se transforman en AG + glicerol; los AG liberados difunden por la sangre,
unidos a la albumina para ser transportados a los rganos diana donde se
utilizaran como fuente de energa => ruta catablica de beta-oxidacin (se
lleva a cabo en las mitocondrias: AG => acetil CoA => entrar al ciclo de Krebs
para obtener ATP); las hormonas implicadas que estimulan la liplisis =>
adrenalina, noradrenalina, glucagn, GH (hormona de crecimiento) y
adrenocorticotropa.
Colesterol - es un lpido insaponificable; englobado dentro de los esteroides;

se
transporta
en
plasma
unido
a protenas (formando
parte
de
las lipoprotenas LDL, HDL, IDL, VLDL); funcin => (1) componente estructural
fundamental de las membranas celulares (2) precursor de hormonas sexuales y
de
las
hormonas
de
la
corteza
suprarrenal
(3) participa en
la sntesis de cidos biliares; fuentes exgenos/de alimentacin => supone la
1/3 parte del colesterol del organismo y se encuentra en su mayor parte libre;
fuente endgeno => sintetizado en el higado y en el intestino; supone las 2/3
partes del colesterol del organismo.
Lipoprotenas - son complejos macromolculas esfricos formadas por

un ncleo que
contiene lpidos apolares
(colesterol
esterificado
y triglicridos) y una capa externa polar formada por fosfolpidos,
colesterol libre y protenas (apolipoprotenas); sintetizadas en el hgado y
en el intestino y posteriormente sufren transformaciones en la sangre y en los
tejidos; funcin => permite la solubilizacin de los lpidos que posean y los
transporta de un lugar a otro en el organismo, para su sntesis,
almacenamiento y consumo; los mas importantes cuantitativamente son

las lipoprotenas encargadas del transporte de colesterol, TG y
fosfolpidos;
la proporcin de
cada
uno
de
sus
componentes
propiedades fsica -qumica de las lipoprotenas;
determina
la
Quilomicrones
=> partculas mas
grandes
y
no
presentan
movilidad electrofortica; sintetizadas en el intestino a partir de TG, C y
fosfolipidos; vida media < 30 minutos; funcin principal: transportar
TG exgenos a los tejidos para su catabolismo (utilizados o almacenados);
residuos de Quilomicrones /remanente/ desgastados => eliminados por el
higado.
VLDL => movilidad electrofortica entre gamma y beta-globulina; sintetizada
en el higado e intestino a partir de los lpidos exgenos y endognos (fruto del
catabolismo de hidrato de carbono); funcin: transportar TG endognos ;
degradados por lipoprotein-lipasa => forman IDL y retiradas de la circulacin o
utilizadas para la sntesis de LDL.
LDL
=>
movilidad electrofortica
en
el
grupo
beta-globulina;
producto metablico de la degradacin de VLDL; sintetizada en el higado e
intestino
a
partir
de
colesterol
libre,
fosfolipidos
y apoprotenas CyE; funcin =>
transportar
80%
del
colesterol
circulante
hacia
las clulas de
los
tejidos
(que
poseen
receptores especficos para las LDL) => utilizado para la sntesis de las
membranas celulares y hormonas esteroideas; LDL son metabolizadas en
los lisosomas => originan colesterol libre que inhibe la sntesis endgena de
colesterol, impide la entrada de colesterol a las clulas, estimula el proceso
de esterificacin del colesterol libre del citoplasma;
HDL => movilidad electrofortica en el grupo alfa-globulina; sintetizada en el
higado e intestino; funcin => captan el colesterol libre de las clulas de los
tejidos perifricos por la accin de la enzima LCAT (lecitin-colesterolaciltransferasa);
Propiedades fsico-qumica y funcionales de las LP (la cantidad del

contenido)
Lpidos: Q > VLDL > LDL > HDL (de mas a menos)
TG: Q > VLDL > LDL > HDL (de mas a menos)
Protenas: Q < VLDL < LDL < HDL (de menos a mas)
Colesterol: Q < VLDL < LDL < HDL (de menos a mas)
Fosfolpidos: Q < VLDL < LDL < HDL (de menos a mas)
se clasifican segn su densidad (a mayor densidad menor contenido
en lpidos) =>
- quilomicrones < 0,95 g/ml
- lipoprotenas de muy baja densidad /VLDL 0,940 - 1,006 g/ml
- lipoprotenas de densidad intermedia /IDL 1,006 - 1,019 g/ml
- lipoprotenas de baja densidad /LDL 1,019 - 1,063 g/ml
- lipoprotenas de alta densidad /HDL 1,063 - 1,21 g/ml
Lipoprotena =>
parte lipdica +
parte
proteica
(apoprotena); funcin de apoprotena => como componente estructurales
de las LP (contribuyen a la solubilizacin de los lpidos); como cofactores de
diversas enzimas; permiten que las LP sean reconocidas por receptores de la
superficie celular.
Metabolismo de las lipoprotenas:

Tras la ingestin de grasas, una vez absorbidas, las clulas intestinales forman
los Quilomicrones (TG, colesterol y fosfolpidos); su funcin sera la de
transportar los TG exgenos a los tejidos a travs de los capilares donde por
la accin de la lipoprotein-lipasa sern hidrolizados dando glicerol
y cidos grasos; el glicerol sera utilizado para la sntesis de glucosa
(glucognesis)
y
los
AG sern almacenados
en
los
adipocitos
o sern transportados por la albumina, (ya que no van unidos a lipoprotenas),
a travs del proceso B-oxidacin para obtener acetil CoA, ingresara en el ciclo
de Krebs para obtencin de energa; Los residuos de los Q (sin TG) se
eliminan va heptica; las VLDL son sintetizadas sobretodo en higado y
su funcin ser la de transportar los TG endognos que tambin son
degradados por la lipoprotein-lipasa en los capilares, repitindose el ciclo
explicado anteriormente y va a quedar un remanente rico en colesterol que son
las IDL que o bien son retirados al higado o utilizados para la sntesis de LDL.
Las LDL formadas se originan por la degradacin de VLDL; su funcin principal
es la de transportar el colesterol circulante hacia las clulas de los
tejidos perifricos que poseen receptores especficos para las LDL; Las LDL son
metabolizadas y darn colesterol libre que las HDL (sintetizadas en el higado e
intestino) van a ir captando de los tejidos perifricos y acumulando en su
interior para ser transportado al higado para su degradacin o hacia
las glndulas endocrinas para la sntesis de hormona esteroides; si hay exceso
de LDL, se acumulara en las arterias produciendo ateromas.
Beta-oxidacin => constituye una ruta catablica de los AG en la cual se

produce la eliminacin secuencial de unidades de 2 tomos de carbono, de
manera que se va degradando el AG activado hasta transformarse en Acetil

CoA, que entrara en el ciclo de Krebs para la obtencin de energa (objetivo);
tiene lugar fundamentalmente en las mitocondrias.
Cuerpos cetnicos => se forman en la mitocondria del higado

(hepatocitos)/cetognesis a partir de acetil CoA; su concentracin en sangre es
baja,
su
aumento
puede
ocasionar disminucin del
pH sanguneo (acidosis/cetoacidosis); funcin => en situaciones especiales
(ayuno prolongado y diabetes mellitus) es suministrar energa al corazn y
cerebro;
Recorrido del transporte de lpidos
Va exgena => colesterol y triglicridos (cidos grasos + glicerol) que
proviene de la dieta => forman quilomicrones => pasa a la sangre hasta los
capilares del tejido adiposo y muscular => degradados por lipoprotein-lipasa
=> mono y diglicridos => entran a la clula; el resto del quilomicron se une a
las HDL y captados por el higado; el remanente puede formar ateromas en los
vasos sanguneos;
Va endgena => VLDL (sintetizada por el higado) ricas en triglicridos,
degradadas por la lipoprotein-lipasa, en estado de ayuno los transporta hasta
los tejidos; el remanente es captada por las fracciones de HDL; remanente de
VLDL (IDL) tiene un potencial aterognico y un 50% captado por el higado
a travs de receptores LDL; el LDL altamente aterognic contiene
principalmente colesterol y la funcin de transporta-lo a los tejidos que lo

requieren
(gnadas, glndulas adrenales, clulas alta
tasa
de divisin);
Hgado tambin tiene la funcin de remover estas LDL a travs del receptor
LDL. 2/3 de la LDL se remueven de esta forma y el resto en las clulas de
Kupffer,
las clulas musculares
lisas
y
los macrfagos,
sin
mediar ningn receptor; esta ultima va se cree que participa en el proceso
aterognico.
Clasificacin de las hiperlipoproteinemias - una de las clasificaciones mas

utilizadas es la de Fredrickson, modificada posteriormente por la OMS
(incluyendo 1 tipo mas); es nicamente descriptiva y no refleja lo ocurrido con
la HDL.
Tipo I => aumentado Quilomicrones, Colesterol plasmtico y TG plasmtico;
aspecto de suero turbio/cremoso (reposar en la nevera => se forma una
capa cremosa en la superficie y el resto se aclara; significa que hay un exceso
de Quilomicrones, as como un aumento de colesterol total y TG)
Tipo IIa => aumentado LDL, Colesterol plasmtico; aspecto de suero claro
Tipo IIb => aumentado VLDL, LDL, Colesterol y TG plasmtico; suero turbio
(no forma costra)
Tipo III => aumentado IDL, Colesterol y TG plasmtico; suero turbio (no forma
costra)
Tipo IV => aumentado VLDL, Colesterol y TG plasmtico; suero turbio (no
forma costra)
Tipo V => aumentado Quilomicrones, VLDL, Colesterol y TG plasmtico;

suero turbio/ lechoso (reposar en la nevera => se forma una capa cremosa
en la superficie y el resto no se aclara; significa que hay un exceso de
Quilomicrones y de VLDL, as como un aumento de colesterol total y de TG).
Estudio del metabolismo lipdico

A-Alteraciones de las fracciones lipdicas circulantes
fundamentalmente con la aterosclerosis, ocasionadas por:
relacionada
1- aumento de las fracciones lipdicas circulantes /hiperlipemias (la mas

importante) => hipertrigliceridemia, hipercolesterolemia, aumento de las HDL
y incremento plasmtico de los AG libres.
2- disminucin de las fracciones lipdicas /hipolipemias (menos frecuente); se
producen como consecuencia de (1) una disminucin en el aporte o en
la absorcin de nutrientes => malnutridas o sndromes de mal-absorcin (2)
una sntesis insuficiente de apoprotenas => enfermedad gentica (3) un
aumento
de
la degradacin de
las lipoprotenas =>
trastornos
hormonales/enzimticos;
la abetalipoproteinemia: trastorno hereditario poco frecuente => no pueden
sintetizar la apo-B => no se pueden sintetizar las LP que la contienen
(quilomicrones,
y triglicridos;
LDL
VLDL)
=>
descenso plasmtico de
colesterol
un aumento de catabolismo de un tipo de LP => las fracciones lipdicas que

transportan esta LP en sangre, disminuye (e.j.catabolismo acelerado de LDL
=> causa una hipocolesterolemia);
3- aparicin de LP de estructura anormal en sangre /dislipoproteinemias
B-Estudio de los trastornos por el deposito anormal de los lpidos en

el organismo (no circulante!!) - en las neuronas puede dar lugar a
manifestaciones neurolgicas diversas y deficiencia mental y en los rganos,
aumenta su volumen.
- lipodistrofias: atrofias localizadas del tejido adiposo => reducida respuesta
de la insulina (SIDA)
- hgado graso o esteatosis: la sntesis de TG supera la capacidad de
transformarlos en VLDL => se acumula exageradamente en el higado
(diabetes, alcoholismo);
- lipoidosis: raras enfermedades hereditarias de tipo metablico => dficit de
algunas enzimas encargadas de la degradacin lipidica (acumulo de lpidos en
los tejidos);
Hiperlipemias - clasificacin:
(1) Hipertrigliceridemia
- el aumento de TG a consecuencia de una elevacin de la sntesis o de un
descenso en la degradacin
- en general puede estar causada por => dieta inadecuadas, trastornos

hereditarios, manifestacin secundaria de otras enfermedades;
- causadas por aumento de la sntesis => aporte calrico, alcoholismo,
diabetes/dficit de insulina activa la lipasa, trastornos (mecanismos
de actuacin complejos - no precisados); debidos a la disminucin de
la degradacin => diabetes, trastornos (fallo en mecanismos del catabolismo
de
TG);
consecuencias
=>
dolor
abdominal,
hepatoesplenomegalia, formacin de xantomas.
(2) Hipercolesterolemia
- el aumento de los niveles de colesterol causado por aumento de la sntesis o
a un defecto de la degradacin de las lipoprotenas que se ocupan de su
transporte (la mayoritariamente un aumento de colesterol de las LDL);
- en general puede estar causadas por => dietas poco equilibradas,
herencia, manifestacin secundaria de otras enfermedades;
- causadas por el aumento de la sntesis => sndrome nefrtico (estimula
la accin de lipoprotein-lipasa), aumento de la sntesis de LDL y ciertas
enfermedades
hereditarias;
debidos
a
la disminucin de
la degradacin =>
dietas
ricas
en cidos grasos
insaturados
y
colesterol, dficit de hormonas tiroideas, trastornos hereditarios/gentico;
consecuencias
=>
aterosclerosis,
otras
(alteraciones
corneales, formacin de ndulos o placas en parpados y la piel /xantomas) por
el aumento de macrfagos cargados de Colesterol.
(3) Aumento de HDL - causados por hiper-alfa-hiperproteinemia familiar,

ejercicio fsico regular, consumo de alcohol moderado, mujeres (cantidad de
estrgenos); consecuencias => aumento de HDL protege el desarrollo de la
aterosclerosis (HDL retiran el colesterol de los tejidos y la pared arterial hasta
el hgado para su eliminacin).
(4) Aumentado de los cidos grasos libres - AG libre son transportados por
la
albumina;
aumentan
cuando
hay hiper-secrecin de
hormonas
/catecolaminas => activan la lipasa => liplisis en el tejido adiposo; causas
=> situaciones de estrs (aumentan las catecolaminas/produce AG), neoplasia
de la mdula adrenal con secrecin de catecolaminas, ayunas y diabetes;
consecuencias => AG libres son captados por el hgado => aumentar
la produccin de cuerpos cetnicos y VLDL;
Valor normal de colesterol total < 200 mg/dl (leve 200-249, moderada 250299, grave >299)
Valor normal de c-HDL en hombres > 37 mg/dl; en mujer > 47 mg/dl
Valor normal de c-LDL optimo < 100 mg/dl; aceptable 100-129 mg/dl
Valor normal de TG/triglicridos < 160 mg/dl (limite de alto riesgo 160-199, alto
riesgo 200-499)
Investigacin en el laboratorio de las dislipemias
Dislipemias - conjunto de alteraciones patolgicas que afectan al
metabolismo de los lpidos, caracterizadas por alteracin de los niveles
normales de lpidos circulantes;
Metodos de exploracin selectiva - estudio de aquellas personas que:
- son consideradas de alto riesgo, en base a sus antecedentes familiares de
enfermedades cardiovasculares o a la presencia de hipercolesterolemia en un
familiar en primer grado;
- presentan una gran probabilidad de sufrir una hiperlipemia, asociada a otras
alteraciones metablicas (hipertensin, diabetes, enfermedad renal crnica,
etc.)
Fuentes de error que podran impedir un diagnostico correcto => un
tratamiento inadecuado:
- Biolgicas:
existen
diferencias
apreciables
niveles lipdicos en funcin del sexo, la edad, la raza.
en
los
- Socio-ambientales: dieta, obesidad, consumo de sustancias toxicas (tabaco,

alcohol), ejercicio fsico.
- Manipulacin de la muestra: ayuno previo a la recogida, anti-coagulantes,
almacenaje, transporte
- De tipo clnico:
concurrentes.
tratamiento farmacolgico,
embarazo,
enfermedades
Condiciones pre-analticas en un estudio de lpidos

Condiciones pre-analticas (previas a la extraccin)
- ayuno mnimo 12 horas
- durante 2/3 semanas el paciente ha de mantener su dieta y estilo de vida
normal
- evitar el ejercicio intenso 3 horas antes
- suspender cualquier medicacin como estrgenos, anticonceptivos orales,
salicilatos (al menos 1 mes antes)

- si el paciente ha tenido una enfermedad leve retrasar la extraccin 3
semanas
- si el paciente ha tenido una enfermedad grave retrasar la extraccin 3 meses
- confirmar el diagnostico, repitiendo la prueba 2/3 x durante 2/3 semanas
Condiciones de la muestra
- utilizar siempre suero, si usamos plasma que sea con EDTA
- tras 48 horas realizar la determinacin de triglicridos y colesterol???
- si queremos separar lipoprotenas, aadir una solucin conservante a la
muestra y se tiene que determinar 3/4 das despus de la extraccin???
- conservar la muestras refrigeradas a 4oC
Metodos diagnsticos para el estudio de los lpidos

AMetodos
generales:
el
objetivo
alteraciones orgnicas generales de una dislipemias.
es
determinar
las
En laboratorio general:
(1) Anlisis del
colesterol
metodos enzimticos
los
TG
totales
=>
mediante
(2) Anlisis del colesterol HDL => se determina tras la precipitacin del
resto de las lipoprotenas (que contienen apo-B) con reactivo policatinicos; el
HDL se determina en el sobrenadante, por metodos enzimticos.
(3) Deteccin de quilomicrones => se determina por el aspecto lechoso y
opalescente del mismo; en estos casos se confirma su presencia dejando el
suero toda la noche a 4C de manera que forman una capa cremosa flotante.
(4) Anlisis del colesterol-LDL => estimar el c-LDL (disponiendo de los
datos de colesterol total, triglicridos y c-HDL) mediante la formula de
Friedelwald, siempre que las cifras de TG sean inferiores a 200 mg/dl (cuando
TG > 200mg/dl, la aplicacin de esta formula implica importantes errores
de valoracin); la formula => c-LDL = colesterol total - TG/5 - c-HDL
(5) Determinacin de apoprotenas AI y B => esta prueba se ha incluido

recientemente, debido a que existe una fuerte relacin entre la presencia de
estas apoprotenas y las enfermedades cardiovasculares; aumento de la apo-B
=> aumenta el riesgo de enfermedad cardiovascular; disminucin de la apo-AI
=> factor de riesgo de cardiopata isqumica.
En laboratorio especializado - se realiza mediante la separacin de las
distintas fracciones de lipoprotena (por cualquier metodos) => se determina
Colesterol, TG, fosfolipidos y protenas; metodos de separacin => 1mtodo combinado, 2-ultracentrifugacin secuencial, 3-ultracentrifugacin en
gradiente de densidad => se lleva a cabo en un nico ciclo
de ultracentrifugacin, gracias a un gradiente continuo de densidad, a lo largo
del tubo; cada LP flota a la altura correspondiente a su densidad.
B- Metodos especficos - el objetivo es el diagnostico origen gentico de las

dislipemias primarias (estudio gentico): muy especificas, encaminadas al
diagnostico de una dislipemia concreta (determinacin de apo-B => ante
niveles de LDL disminuidos y TG normales o disminuidos, se deben determinar
los niveles de apo-B para descartar una hipo o abetalipoproteinemia.

de
los hidratos de carbono
Concepto de metabolismo y ruta metablica (anablica - catablica)
Metabolismo - conjunto de todas las transformaciones qumicas que se
producen en una clula o en un organismo; rutas metablicas => reacciones
catalizables enzimticamente que convierte un precursor (sustrato inicial) en

producto
final
(para
utilizar
o
desechar)
a travs de
diversos
intermediarios metablicos/ metabolitos; reacciones catablicas =>
degradan biomolculas y obtienen energa que sera usada en las reacciones
anablicas
para
sintetizar/fabricar biomolculas; todos
los
procesos
transcurren de manera conjunta en el espacio (la mitocondria) y en el tiempo,
comparten en muchas ocasiones intermediarios y mantienen un
equilibrio dinmico entre las 2 rutas para mantener la estructura y las
funciones del organismo.
Rutas anablicas (divergentes)

=>
reacciones qumicas para
sintetizar molculas grandes y complejas (polisacridos, protenas) a partir de
precursores
sencillos
(amino cidos o
glucosa)
con
un
gasto
de energa/intercambio protones (en forma de hidrlisis de ATP o consumo de
poder reductor/ oxidado); la utilizacin del ATP es termodinamicamente
desfavorables; estas reacciones se aceleran en cuatro ocasiones => durante
periodos de exceso relativo de energa, en periodos en que hay una gran
asequibilidad
de molculas precursoras,
en
periodos
de
crecimiento
y regeneracin de material celular.
Rutas catablicas (convergentes)

=>
reacciones qumicas que
rompen/degradan de manera secuencial los combustibles ingeridos o
almacenados
como
glcidos lpidos o protenas y
los
convierten
en molculas mas pequeas (CO2 y H2O en ultimo termino), que
producen energa en forma de ATP y poder reductor que es almacenable o
consumible (en este proceso consumen frecuentemente oxigeno - son procesos
de degradacin oxidativa); este tipo de procesos se aceleran en los periodos de
falta de combustible o de estrs en un organismo; se dividen en 3 etapas:
(1) Hidrlisis de las macro-molculas (polisacridos, lpidos, protenas) =>
se
obtienen
los monmeros o
las
subunidades
(monosacridos, disacridos, cidos grasos y glicerol, aminocidos) que los

constituyen.
(2) Catabolismo de los monmeros o subunidades (se realiza en las
mitocondrias) => los convierten en/ se produce acetil coenzima A (acetil CoA).
(3) Oxidacin total => formada por 2 rutas metablicas: (1)-ciclo de
acido ctrico / ciclo de Krebs (produce NADH + oxida el acetilCoA => CO2); (2)fosforilacin oxidativa (produce ATP que se regenera en => NAD+) y
transporte de electrones reduce el O2 => H2O; producto desecho => CO2 +
H2O + NH3 (amoniaco - va al rion en forma de urea => transformado en el
higado).
Las rutas de biosntesis/ anablicas no son las inversas (son irreversibles) de
las rutas catablicas.
Metabolismo energtico - las 2/3 partes del oxigeno que inspiramos, se

utilizan
en
los
procesos
oxidativos
mitocondriales
(respiracin celular); funcin de Acetil CoA en el metabolismo => es la
forma en que el ciclo de Krebs acepta la mayora del combustible aportado,
aunque
pueda
seguir
otros
destinos
(como
precursor en biosntesis); formacin de Acetil CoA (en la mitocondria):
(1) Polisacridos (dieta) o Glucgeno (reserva en hgado/musculo) + gluclisis/
glucogenlisis (va glucoltica) => glucosa => piruvato + oxidacin => acetil
CoA
(2) Lpidos (dieta) o triacilgliceroles/ triglicridos (reserva en higado/tejido
adiposo) + liplisis => cidos grasos libres + beta oxidacin => acetil CoA
(3) Protenas (dieta)
+
protelisis
=> aminocidos +
desaminacin y oxidacin => acetil CoA.
transaminacin/
Destinos de acetil CoA:

- en la mitocondria => oxidacin completa del grupo acetil en el ciclo de Krebs
=> energa
- en el hgado => sntesis de cuerpos cetnicos (acetona, acetoacetato y betahidroxibutirato), cuando el ciclo de Krebs esta saturado
- en el citoplasma => la transferencia de las unidades acetil
(como precursor de
las molculas)
y
la
posterior biosntesis de
esteroles, cidos grasos, aminocidos,
acetil
colina,
colesterol,
gluconeognesis.
Hidratos de carbono/ carbohidratos/ glcidos/ sacridos/ azucares =>

compuestos orgnicos formados por C, O, e H; su formula emprica es (CH2O)n;
se clasifican segn su numero de molcula:
(a) monosacridos =>
contienen
1 nica molcula de
azucar
e.j.
glucosa/dextrosa C6H12O6 (azucar de uva), fructosa (azucar de caa o de
remolacha), galactosa (azucar de leche); en solida es blanco; muy solubles en
agua e insolubles en disolventes no polares; la mayora son dulce; puede ser
=> aldosas y cetosas (aldehido o cetona), formas D y L, formas alfa y beta;
disacridos => compuestos por 2 molculas de azucar sencillo por enlace
glucosdico en el que se desprende una molcula de agua; sacarosa (azucar de
mesa) se obtiene de glucosa y fructosa; lactosa (azucar de leche) se obtiene de
glucosa y galactosa; maltosa (producto de degradacin almidn + amilasa) se
encuentra en la cerveza;
(b) oligosacridos => formados por entre 3-10 molculas de azucar sencillo
(c) polisacridos => formados por la unin de 11 a cientos de miles de
azucar sencillo
Clasificacin segn su funcin biolgica:

(1) polisacridos de reserva => almidn (vegetales) o glucgeno (animales)
(2) polisacridos estructurales => celulosa (vegetales) y quitina (hongos /
artrpodos)
(3) otras funciones => reconocimiento celular (MHC), proteccin frente a
condiciones adversas (capsulas en microorganismos) y adhesin a superficies
(biopelculas) como pegamento
Clasificacin segn su composicin:
- homopolisacridos => repeticin de un monoscarido
- heteropoliscaridos => repeticin ordenada de un disacrido formado por
2 monosacridos distintos
(alternancia
de
2 monosacridos);
algunos
participan junto a polipptidos (peptidoglucanos, muco-polisacridos o
proteoglucanos);
Fuentes de glcidos en el organismo:
Dieta
=>
ingeridos
en
forma
de polisacridos (almidn)
y disacridos (sacarosa, fructosa), una vez digeridos, son absorbidos en forma
de monosacridos; los que son absorbidos diferentes a la glucosa, se
transforman en glucosa en el hgado .
Sntesis endgena => gluconeognesis (formacin de glucosa a partir de

precursores no glucdicos => a partir de aminocidos, acido lctico, piruvato y
glicerol) tiene lugar en el hgado (90%) y en el rin (10%) y necesita
enzimas especficos mitocondriales
y
citoplasmticos
y
suministro energtico en forma de ATP y GTP (ruta anablica); es esencial para
regular la glucemia (el cerebro utiliza 20% del gasto de glucosa del todo el
cuerpo).
GLUCONEOGNESIS
VA DEL SORBITOL
Funciones de los hidratos de carbono:

(1)
Fuente
de energa (la
la degradacin de molculas de
diferentes vas metablicas:
mas
importante)
obtenida
de
glucosa
=> monosacridos,
mediante
- va de gluclisis en
citoplasma
(la
ruta
mas
importante
cuantitativamente): degradacin de 1 molcula de glucosa (por la accin de
enzima glucoltica) => se obtiene 2 molculas de piruvato + oxidacin =>
acetil CoA que entra al ciclo de Krebs (aerobiosis) => da lugar a
36 molculas de ATP; en el proceso anaerobiosis el piruvato =>
cuerpos cetnicos;
- va de las pentosas fosfato: se obtiene ribosa (fundamental en
la sntesis de cidos nucleicos/ruta anablica) y tambin NADPH/poder reductor
(molcula necesaria en muchos procesos metablicos del organismo).
- va del sorbitol: se obtiene fructosa (exceso de glucosa entrar a
las clulas ricas
en
aldosa
reductasa
e.j.
cristalino, clulas de
Schwann, clulas endoteliales => se transforma en polialcohol/ sorbitol (toxico)
+ enzima sorbitol deshidrogenasa => fructosa);
(2) Reserva energtica - esta funcin la desempea el glucgeno mediante
el proceso glucogenognesis por el exceso del aporte glucosa/ aumento de
glucemia; este tiene lugar en el hgado (en el proceso glucogenlisis => se
obtiene energa para todo el organismo) y en el musculo (el
proceso glucogenlisis => se obtiene energa solo para los msculos); en el
proceso
de glucogenlisis,
se
necesita
fundamentalmente
=>
enzima glucgeno fosforilasa y enzima desramificador;
(3) Servir de base para la sntesis de estructuras como cidos nucleicos (a
partir de ribosa que se obtiene por la va de las pentosas fosfato).
VA DE PENTOSAS FOSFATO
Metabolismo de la Glucosa - es importante la homeostasis de glucosa en la

sangre/ glucemia a travs de rutas catablicas (gluclisis y glucogenlisis) y
rutas
anablicas
(gluconeognesis a
partir
de
las protenas y glucogenognesis).
- glucemia en ayunas (VN) => 60-100 mg/dl, tras la ingerida (postprandial) se
elevan a 120-150 mg/dl o mas; en persona normal este nivel
descienden rpidamente y vuelve a alcanzar el nivel basal; glucemia no se
debe dejar por debajo de 50-60 mg/dl;
- con una funcin renal normal, aparece glucosuria cuando la glucemia es >
160 mg/dl (umbral renal para glucosa); si el tbulo renal esta daado, puede
aparecer
glucosuria
con
glucemia
normales;
en condicin normales,
el tbulo renal reabsorbe la glucosa en su totalidad (no tiene que haber
glucosuria);
- el metabolismo de la glucosa se regula mediante la insulina y un conjunto de
sustancias de accin antagnica/ contra-insulares (glucagn, glucocorticoides,
catecolaminas y hormona del crecimiento); el hgado almacena unos 100 gr
de glucgeno para la necesidad del organismo durante 4 horas;
funcin de insulina (hormona hipoglucemiante): el aumento de glucemia
=> estimula la produccin de insulina que a su vez estimula => captacin de
glucosa por las clulas del musculo esqueltico y las adiposas => se utilizara
como combustible o reserva glucgeno (glucogenognesis a nivel heptico y
muscular);
insulina tambin disminuye gluconeognesis del cidos grasos
(estimula el almacenamiento en el tejido adiposo/ lipognesis => acumulo
de triglicridos) y aminocidos (promueve sntesis de protena/ proteognesis a
nivel muscular);
funcin de glucagn: promueve glucogenlisis (degradacin de glucgeno),
gluconeognesis (moviliza cidos grasos y aminocidos como combustible)
y cetognesis (sntesis de
cuerpos cetnicos);
moviliza cidos grasos
(liplisis), aminocidos (protelisis) y glucosa (gluclisis) como combustible;
*** la secrecin de insulina y de glucagn (por parte de pncreas) esta
controlada por el nivel de la glucemia;
glucocorticoides
(cortisol):
sustancia contra-insular (antagnica a
la
insulina); son compuestos esteroides sintetizados por la corteza suprarrenal;
estimulan gluconeognesis y liplisis;
catecolaminas
noradrenalina)
insulina;
(adrenalina):
compuestos contra-insular (adrenalina
y
estimula glucogenlisis, liplisis y
inhibe
la secrecin de
GH/ somatotropina (hormona del crecimiento): genera la resistencia a

la accin de la insulina; estimula liplisis; su antagonista es somatostatina
(inhibidora de GH)
Alteraciones en el metabolismo de los hidratos de carbono - el

metabolismo de la glucosa es defectuoso en 2 enfermedades importantes en la
practica clnica => la obesidad y la diabetes que se puede desarrollar hacia =>
arteriosclerosis, hiper-tensin, las enfermedades de vasos capilares, del rin y
la ceguera.
(a)- Hipoglucemia => glucemia < 45-50 mg/dl acompaada o no de
signos clnicos; desequilibrio causado por el consumo de glucosa por los
tejidos; manifestaciones clnicas => aumento de liberacin de adrenalina
(grupo catecolaminas) y disfuncin del sistema nervioso central (es importante
que estos remiten cuando se corrige la hipoglucemia); 2 tipos de hipoglucemia
=> por causa del ayuno y postprandial (ver cuadro 11.4 libro).
desencadenada
por
el
ayuno:
menos secrecin de
las glndulas productoras de hormonas hiperglucemiantes (la corteza
suprarrenal y hipfisis anterior); insuficiencia heptica grave => no se produce
glucogenlisis ni gluconeognesis; exceso de alcohol => aumento NADH

(inhibicin de la gluconeognesis); tumores pancreticos => segregan insulina
en exceso y desordenada; otro tumores de metabolismo hiperactivo => utiliza
gran cantidad de glucosa;
- postprandial: perdida parte del estomago => absorcin brusca de glucosa
(hiperglucemia) seguida de secrecin excesiva de insulina (hipoglucemia);
idioptica.
HIPOGLUCEMIA
(b)- Hiperglucemia => elevacin anormal de la glucemia que conduce a

"diabetes" (> a 100 mg/dl en ayunas y > a 150 mg/dl en postprandial);
causas:
deficiencia
absoluta
de secrecin de
insulina
como consecuencia del efecto de hormonas antagonistas;
- secrecin excesiva de esteroides glucognicos (glucocorticoides)
relativa
- secrecin excesiva
de
en sndrome de Cushing
ACTH
(hormona
adrenocorticotropa)
como
- secrecin excesiva de hormona del crecimiento

- secrecin de catecolaminas
- hipertiroidismo y ayuno simple => la glucemia aumentan a niveles
excesivamente elevados despus de la administracin oral de hidratos de
carbono
Diabetes (diabetes mellitus) => una metabolopata compleja, crnica que

afecta al sistema vascular; causas:
- dficit de la insulina absoluto: la secrecin de insulina es insuficiente para un
funcionamiento normal del metabolismo de los hidratos de carbono
- relativo: la secrecin es normal (o superior a lo normal), pero por estar
aumentadas las necesidades, resulta insuficiente para cubrirlas;
Consecuencia directa de dficit de
metabolismo de los 3 principios inmediatos:
insulina
=> alteracin en
el
- metabolismo glucdico: hiperglucemia y glucosuria, debido a que => (1) se

reduce el consumo de glucosa por parte del musculo y tejido adiposo, (2)
disminuye
la sntesis de glucgeno (3)
se
estimula
la glucogenlisis y
la gluconeognesis;
- metabolismo lipdico: aumento de la liplisis y se generan gran cantidad de
AG /cidos grasos => cidos grasos en el higado se usan para sntesis de
cuerpos cetnicos (cetognesis) => pasan a la sangre y se acumulan
(hipercetonemia) y se eliminan por la orina (cetonuria); el metabolismo de
las lipoprotenas tambin se ve alterado.
- metabolismo proteico: aumento de la liberacin de los aminocidos a la
sangre (protelisis) por parte de las proteinas musculares (catabolismo
proteico) => favorece gluconeognesis en el higado.
Clasificacin de la diabetes:
(a)- diabetes primaria o esencial => el dficit de insulina es idioptico
o gentico (defectos de los receptores de la insulina o reacciones
autoinmunes); 2 tipos => ver cuadro 11.5 libro;
- tipo I (insulino dependiente o juvenil): edades tempranas < 30 aos;
consecuencia de la desaparicin de clulas beta (productor de insulina); cursa
con cetosis (aumento de cuerpos cetnicos en tejidos o fluidos orgnicos); peso
corporal normal o inferior; frecuentemente se detectan Ac anti-islotes de
Langerhans (autoinmune); presencia de ciertos Ags del sistema HLA;
- tipo II (no insulino dependiente): se manifiesta en la madurez > 40
aos; disfuncin de las clulas beta (responden de forma tarda y dbil a la
glucosa); resistencia a la accin de insulina debida a defectos del receptor;
forma mas frecuente (90%) de los casos; es hereditaria; peso corporal supera
lo normal;
- diabetes qumica o latente (tolerancia anormal/ patolgica a la
glucosa): los pacientes tienen una cifra < a la de los diabticos; son personas
con problemas de obesidad; se detecta una glucemia en ayunas < a 140 mg/dl
y tras la prueba de tolerancia doral a la glucosa, a las 2 horas > o igual a 140 e
inferior a 200 mg/dl, pero con algn otro valor superior a 200
mg/dl; prevencin => reduccin de la ingesta calrica y corregir el exceso de
peso;
- diabetes gestacional /del embarazo: se reconoce por primera vez durante
el embarazo; las que padecen => mayor riesgo y morbilidad y mortalidad
perinatal, as como de padecer diabetes o intolerancia a la glucosa al cabo de
unos aos; se diagnostica mediante la prueba de la tolerancia oral de glucosa
(PTOG)
(b)- diabetes secundaria o sintomtica => el dficit de insulina esta originado

por una enfermedad (eje. lesiones externas del pncreas, inflamaciones,
hiperfuncin
de
las glndulas secretoras
de
hormonas contrainsulares, frmacos, etc)
Diagnostico de la diabetes - las mas utilizadas se basan en

la demostracin de una tolerancia anormal a la glucosa; tolerancia disminuida
=> al padecer hiperglucemia y glucosuria en ayunas; VN 70-105 mg/dl en
adultos y 80-115 mg/dl en mayores de 60 aos; cabe posibilidad de realizar
una prueba de tolerancia a la glucosa; para considerar una persona como

diabtica:
- aumento de glucemia > a 198 mg/dl y presencia de sntomas tpicos (sed
excesiva/polidipsia,
emisiones
excesiva
de
orina/poliuria,
hambre
excesiva/polifagia, disminucin de peso corporal);
- una glucemia en ayunas > a 139 mg/dl, obtenida en 2 ocasiones
- una glucemia en ayunas menor de 140 mg/dl y 2 pruebas de PTOG con un
nivel de glucosa a las 2 horas > a 198 mg/dl y al menos otro valor
puntual tambin > a 198 mg/dl.
Las pruebas mas utilizadas para el diagnostico de la diabetes:
- las que determinan la glucosuria (supera el umbral renal 160 mg/dl)
- las que determinan la glucemia en ayunas, postprandial, prueba de
sobrecarga de glucosa/PTOG (oral, intravenosa, sensibilizada con cortisol) ver
cuadro 11.6 libro.
Pruebas de tolerancia oral de glucosa (PTOG)
- durante 3 das inmediatamente anteriores a la prueba, ingerir una dieta rica
en carbohidratos
- se realiza por las maanas (variacin de la tolerancia mayor)
- administracin de la glucosa 75 g en ayunas
- extraccin cada 30 minutos durante 2 horas (venosa o capilar)
- a veces se tolera mal (vmitos => se debe anotar); la tolerancia a la glucosa
disminuye con la edad;
Indicada para:
- pacientes con glucosuria, sin sntomas clnicos de diabetes y con glucemia
normal tanto en ayunas y postprandial
- pacientes con sntomas de diabetes, sin glucosuria y con glucemia normales
en ayunas;
- personas que tengan antecedentes familiares de diabetes mellitus
- mujeres que han dado a luz nios con peso excesivo (4-5 kg)
- embarazadas que presenten glucosuria
Interpretacin de los resultados - en funcin de la glucemia frente al
tiempo transcurrido, si la glucemia no desciende a las 2 horas => posibilidad
de padecer diabetes; segn la curva, el diagnostico puede ser => glucosuria
renal, retraso del almacenamiento, diabetes leve o diabetes grave;
Esquema:
La diabetes gestacional o del embarazo - es una prueba para el

diagnostico de la diabetes gestacional; se desencadena en el embarazo y
desaparece despus del parto; puede traer consecuencias graves para el feto
si no es detectada a tiempo; las pruebas son:
(1) test O'Sullivan => *glucemia basal (en ayunas), *beber una solucin de
glucosa (50 g) y *glucemia despus de 60 minutos; no es necesario realizar-lo a
las gestantes < 25 aos, peso corporal normal, no antecedentes familiares de
diabetes, no pertenencia a grupo tnico con alta prevalencia de diabetes; en el
resto de mujeres se indica a las 24-28 semanas de gestacin (cuando tienen
lugar los cambios hormonales que afectan a la produccin de insulina) y a las
32-34 semanas, siempre que el test de diagnostico no sea positivo; un valor de
glucemia superior o igual a 140 mg/dl es positivo => se hace curva de
glucosa.
(2) curva de glucosa => se evala la capacidad de la paciente para tolerar
una sobre carga oral de glucosa estndar (100 g) y se determina: *glucemia
basal (en ayunas), *glucemia a los 30 minutos (despus de la sobrecarga), 60
minutos, 120 minutos, 180 minutos; existe diabetes gestacional: 2 o mas
resultados superan cifras => glucemia en ayunas 150 mg/dl, glucemia a la
hora 190 mg/dl, a las 2 horas 165 mg/dl, a las 3 horas 145 mg/dl;
Cosas a tener en cuenta al realizar ambas pruebas => una ingesta

alimentaria de carbohidratos 3 das antes de la prueba y estar en ayunas 12
horas antes del anlisis, evitando frmacos que puedan interferir; desde la
primera extraccin (glucemia basal) hasta que finalice la prueba, no fumar,
tomar caf o te o comer nada, pero se debe beber abundante agua
(ningn otro liquido); las manifestaciones como mareo, sudoracin y debilidad
son transitorias; no se debe caminar o realizar otro ejercicio fsico.
Determinacin para valorar el funcionamiento del metabolismo de los

hidratos de carbono - los mas importante son (ver cuadro 11.7 libro):
- determinaciones de la glucemia basal (mira mas abajo!!)
- determinaciones de la glucosuria;
- determinacin de cuerpos cetnicos en sangre (cetonemia) y en orina
(cetonuria);
- prueba de la sobrecarga oral de glucosa
- det. de hormonas (insulina, glucagn, glucocorticoides, GH, adrenalina), sobre
todo la insulinemia;
- determinacin de enzimas sustratos hidrocarbonados en clulas y tejidos
(hemoglobina glicosilada)
- micro-albuminuria
- determinaciones inmunolgicas
- determinacin de receptores
Determinacin de la glucemia basal por mtodos enzimticos:

Glucosa-oxidasa => es una enzima que cataliza la reaccin de la glucosa
presente en la muestra; el mtodo mas usado para cuantificar los resultados es
la determinacin del perxido de hidrgeno /Trinder;
es
un mtodo colorimtrico e enzimtico
para determinacin "in
vitro"
de
la concentracin de glucosa en suero o plasma; el color sera proporcional a
la concentracin de glucosa; la tcnica se basa en la oxidacin de la glucosa
presente en la muestra catalizada por la GOD (glucosa oxidasas) => se forma
perxido de hidrgeno que reacciona con un compuesto coloreado (Ac
glucnico) => se forma producto coloreado que es proporcional a
la concentracin de glucosa y se mide con espectrofotometra; fundamento
de la determinacin => (1) Glucosa + H2O + O2 + GOD/glucosa
oxidasa => acido glucnico + H2O2 (perxido de hidrgeno); (2) H2O2 +
cromgeno => compuesto coloreado; si la lectura se realiza con el
espectrofotmetro manual, habr que hacer los clculos oportunos para pasar
la absorbancia (DO) obtenida a concentracin de glucosa, basndose en
la concentracin del estndar; con el espectrofotmetro semiautomtico y el
autoanalizador la concentracin nos sera dada directamente.
Hexoquinasa => enzima puede fosforilar a cualquierhexosa(unmonosacridoazcar

como laglucosaofructosa), por tanto, es una enzima de baja especificidad
(fosforilacin); proporciona el grado mximo de especificidad a la hora
determinar la glucosa presente en la muestra (mtodo de referencia); primer
paso: Glucosa + ATP + hexoquinasa => glucosa-6-fosfato + ADP; segundo
paso: Glucosa-6-fosfato + NADP => NADPH (se mide en el espectrofotmetro
a 340 nm); el resultado es directamente proporcional a la concentracin de
glucosa.
Determinaciones del metabolismo de los hidratos de carbono:

Glucosa en orina => valores normales de glucosuria es negativa; solo se
detecta cuando se supera el umbral renal (glucemia > 160-180 mg/dl).
Cuerpos cetnicos => la determinacin se lleva a cabo en sangre y orina; los
cuerpos cetnicos son derivados de los cidos grasos y la variacin de sus
niveles en sangre (cetonemia) y orina (cetonuria) informa indirectamente
acerca del metabolismo hidrocarbonado.
Sobrecarga oral de glucosa => permite distinguir entre diversas
alteraciones del metabolismo hidrocarbonado: (a) cuando uno de los valores >
200 mg/dl y el obtenido a las 2 horas esta entre 140-200 mg/dl => intolerancia
a la glucosa (b) cuando en 2 momentos de la prueba (1 de ellos debe ser el
obtenido a las 2 horas) la glucemia es > a 200 mg/dl => diabetes.
Hormonas insulina => se determina insulinemia y las hormonas contrainsulares (glucagn); en ocasiones, se determina el pptido C mediante RIA o
ELISA (para averiguar si es hiper-insulinemia endgeno o exgeno => insulina
de preparados comerciales no llevan pptido C).
Hemoglobina glicosilada => es una fraccin de la hemoglobina A, unida de
forma irreversible (mediante enlaces covalentes) a glucosa; su aparicin es
proporcional a los niveles de glucosa en sangre; no es util para el diagnostico
de la diabetes; es una tcnica muy especifica, pero su sensibilidad es escasa
(la obtencin de Hb glicosilada anormal, no excluye una diabetes); mtodos
mas utilizados: HPLC => cromatografia de intercambio inico, cromatografia
de afinidad, etc; inmunolgicos => la lectura se realiza por turbidimetra.
Microalbuminuria => excrecin de pequeas cantidades de protenas en
orina que no pueden ser detectadas por los mtodos habituales
de determinacin de protenas en orina (tiras reactivas); sirven para controlar
diabetes;
una deteccin precoz
puede
evitar complicacin; mtodo =>
inmunoqumicos (buena sensibilidad y especificidad y es automatizables);
la cuantificacin se realiza mediante turbidimetra o nefelometra.
Determinaciones inmunolgicas => se utilizan para determinar la
presencia
de
Acs especficos contra
la
insulina
o
contra
las clulas pancreticas beta; mtodos => enzimoinmunoanalisis (ELISA) y la
inmunofluorescencia indirecta (FIA).
Determinacin de receptores => la cantidad de receptores para la insulina
determina en muchos casos la afectividad de su accin como hormona
hipoglucemiante.
Tema 15 - Enzimologa Diagnstica

Enzimas (biocatalizadores) - protenas biologicas especializadas en la
catlisis (acelera catabolismo) de reacciones orgnicas; composicin: las
holoenzimas pueden contener fraccin proteica (apoenzima) y no proteica
/peso molecular menor (cofactores) que a su vez puede ser => (1)
iones metlicos (activadores enzimticos => ayudan a captar el sustrato para
conseguir el producto; no se modifican durante la catlisis) o (2)
moleculas orgnicas (grupos prostticos - se unen permanentemente;
coenzimas - se unen solo durante la reaccin);
Mecanismo
de accin enzimatica
la funcin de
biocatalizadores orgnicos (enzimas) es acelerar la velocidad de las reacciones
al
disminuir
la energa de activacin y
la obtencin mas rpida de
los
productos.
Reaccin enzimatica: enzima + sustrato = enzima-sustrato = enzimaproducto = enzima + producto
- reaccin sin
catalizar
(gasta
mas energa):
estado
inicial
A+B
+ energa de activacin => estado de transicin estable => estado final C+D
- reaccin catalizada
(gasta
menor energa):
estado
inicial
A+B
+ energa de activacin =>
estado
de transicin altamente energtico e
inestable => estado final C+D
Formas en las que pueden aparecer las enzimas:

- isoenzimas (isozimas) => formas mltiples de una determinada enzima y
catalizan la misma reaccin; tienen pequeas diferencias en cuanto a sus
propiedades fsico-qumicas,
tamao,
estructura,
PM,
solubilidad,
comportamiento cataltico, etc.; LDH (lactato deshidrogenasa) aparece en 5
formas isoenzimticas que catalizan la reaccin reversible => LD-5:M4
(msculos/ higado), LD-4:M3H, LD-3:M2H2, LD-2:MH3, LD-1:H4 (corazn); CK
(creatn quinasa/cinasa) tiene 3 formas isoenzimticas => CK-BB (cerebro), CKMB (miocardio), CK-MM (musculo esqueltico);
- complejos multienzimticos => son asociaciones de enzimas que

catalizan reacciones consecutivas;
- proenzimas => precursores inactivas de las enzimas proteolticas que
catalizan la hidrlisis de enlaces peptdicos; el paso de pro-enzima a enzima
supone la ruptura de un enlace peptdico.
Fenmenos catalitico:
(1) Interaccin enzima-sustrato (E-S) => tiene lugar en centro activo en
forma de puentes de hidrgeno, interacciones electrostticas, fuerzas de Van
der Waals y covalente.
(2) Conformacin del centro activo (CA) => hiptesis de llave-cerradura
(rgida/estructura
complementaria); hiptesis del
acoplamiento
inducido
(no rgida/ el sustrato induce un cambio en la estructura de la enzima para
acoplarse).
(3)
Especificad enzimtica =>
absoluto
(solo
con
un
sustrato);
de reaccin (acta con diferentes sustratos de caracterstica comn); estreoespecfica (acta sobre sustrato con determinada configuracin espacial)
(4) Factores que influyen en la actividad enzimtica:
- concentracin de sustrato: cuanto mas sustrato, mas velocidad =>
proporcional hasta un punto mximo / constante de Michaelis Menten/
km; grficamente se observa => cintica de primer orden: cuando la velocidad
directamente proporcional a la concentracin de sustrato y cintica de orden
cero: cuando se alcanza la velocidad mxima ya no depende de
la concentracin de sustrato - la velocidad no aumenta (la enzima esta
saturada); en las determinaciones analticas de la AE (actividad enzimtica) =>
se trabaja en la zona cintica de orden cero, por eso, los reactivos comerciales
se preparan con exceso de sustrato;
pH:
se
trabaja
en
las
condiciones
optimas
de
pH (se
emplea disolucin tampn que lo mantiene); variaciones de pH pueden alterar
la estructura proteica;
- temperatura: a mas temperatura mas AE, siempre que no se supere el punto
que la estructura proteica se desnaturalice, se elimine o disminuya esta
actividad (37C);
- presencia de inhibidores /activadores: son sustancias que inhiben o aumentan
la velocidad de la reaccin; los activadores suelen ser iones metlicos o
moleculas de pequeo tamao.
(5) nomenclatura (clasificacin de enzimas)

xido-reductasas
=>
catalizan
reacciones
de oxidacinreduccin (deshidrogenasas, oxidasas, reductasas); A + B => A reducido + B
oxidado
- transferasas => catalizan reacciones de transferencia de grupos
funcionales, partes de moleculas, de un donador a un aceptor (transaminasas);
A-B + C => A + B-C
- hidrolasas => catalizan reacciones de hidrlisis de enlaces al aadir
una molcula de agua (lipasas, amilasa, peptidasas); A-B + H2O => A-H + BOH
- liasas => catalizan reacciones de eliminacin o adicin de alguna molcula,

grupo funcional etc (descarboxilasa); A-Co2 => A + CO2
- isomerasas => catalizan
mutarotasas); A => A*
reacciones
de
isomerizacin
(epimerasas,
- ligasas => catalizan reacciones de condensacin de 2 moleculas

por formacin de un enlace a costa de la hidrlisis de un trifosfato (sintetasas);
A+B + NTP (ATP) => A-B + NDP (ADP) + Pi (fosfato)
Enzimas analizadas en diagnstico clnico:

1Transaminasa glutmico oxalactica
(GOT)
o
aspartato
aminotransferasa (AST) - transaminasas - se localiza en mitocondrias y
citoplasma de tejido cardaco, heptico, muscular, hemates, tejido esqueltico,
renal y uretral => marcador srico en patologas hepatopatias, miopas,
procesos cardacos.
2- Transaminasa glutmico pirvica (GPT) o alanino aminotransferasa
(ALT) - transaminasas - se encuentra en citoplasma del tejido heptico,
muscular, renal y cardaco => marcador srico en patologas hepatopatias,
miopatas.
3- Lactato deshidrogenasa (LDH) - xido-reductasas - se localiza en los

tejidos cardaco, muscular, renal heptico cerebral y hemates => es un
marcador srico en patologas hepatopatas, procesos cardacos y miopatas.
4- Creatn fosfoquinasa (CPK) - transferasas musculo esqueltico, cardaco y cerebro => es un
patologa miopatias, procesos cardacos.
se encuentra en
marcador srico en
5- gamma-Glutamiltranspeptidasa (GGT) - transferasas - se localiza en

citoplasma
de
celulas hepticas, rin,
intestino
y pncreas =>
marcador srico en patologas hepatopatas, pancreticas.
6- alfa-amilasa - hidrolasas - se encuentra
y pncreas exocrino => enfermedades del pncreas
en glndulas salivares
7- lipasa - hidrolasas - su localizacin es pancretica => enfermedades

del pncreas
8- fosfatasa alcalina (ALP) - hidrolasa - se localiza en hueso, hgado, rin,
intestino, glndula mamaria y placenta => marcador srico en enfermedades
oseas (actividad osteoblstica), hepatopatas/ colesttica (con elevacin de
transaminasas); se distinguen ambas mirando sus isoenzimas;
9- fosfatasa cida - hidrolasa - se encuentra en la prstata, el
higado, hemates, plaquetas y hueso => es un marcador srico en carcinoma
prosttico (sintetiza psa/antgeno prosttico especifico glucoprotena - como
marcador de prstata).
Diagnostico de laboratorio del infarto agudo de miocardio (IAM):

I. La principal isoenzima
en clulas cardiacas es CK-MB
que
se
determina
por
estar
localizada
(1)
la
CK-MB
(creatn fosfoquinasa-miocardio,
mas especifica de lesin muscular cardaca); en el IAM pueden pasar
hasta 3-6 horas antes de que se detecta una elevacin de la CM-MB, luego
aumentan rpidamente (hasta 10-20% de la CK total - su VN 3-6%) alcanzando
su mximo a las 24 horas y luego desciende rpidamente en 1-4 das;
(2) LDH1y2 (lactato deshidrogenasa-heart) => su incremento es mas
lento que CK - a las 12 horas y alcanzan su mximo a las 36-72 horas y su
normalizacin en 1-2 semanas; VN = 120-240 U/L (25C)
(3) GOT o AST (glutmico oxalactica o aspartato aminotransferasa)
=> no es especifica del IAM, pero una concentracin normal de GPT y
aumentada del GOT, nos puede relacionar con IAM; su elevacin ocurre a las 68 horas con punto mximo a las 18-24 horas y puede persistir hasta
5 das despus del IAM (nos puede ayudar a saber cuando ocurri el
IAM), segn sea mayor o menor su aumento nos orientara en el mejor o peor
pronostico; su VN 5-35 UI/L
II. Marcadores cardiopata precoces, aparecen a las pocas horas:
MIOGLOBINA (protena cardiaca) => es mas especifica que las enzimas
para valorar el dao miocardio; se eleva rpidamente (entre 3-6 y de forma
breve en sangre por lo que es muy buen marcador para diagnosticar IAM entre
las 3-6 horas despus de los sntomas; TROPONINA (subunidades I y T
- cardacas) => son muy sensibles y especificas en el diagnsticos del IAM
cuando su concentracin aumenta en el plasma; son liberadas por
las clulas lesionadasentre 3-12 horas despus del IAM y permanecen elevadas
bastante mas tiempo que CK-MB; permiten diferenciar en dao miocrdico
reversible del irreversible, diagnostico de infartos en procesos quirrgicos
cadenas ligeras y pesadas de miosina => permanece hasta 15 das (la I);
la accin combinada de troponina T y CK-MB permite confirmar o no un IAM en
las primeras 3-6 horas; la troponina I permite un diagnostico temprano del IAM
(a las 4 horas de los sntomas).
III. Electrocardiograma - aunque el patrn del IAM puede no aparecer hasta
24 horas despus del infarto; varan segn el tamao y lugar de la lesin.
Determinacin analitica de la actividad enzimtica - no se mide la

cantidad de enzimas en el suero, porque su concentracin es baja; sin embargo
dada su elevada capacidad cataltica, es posible determinar su actividad con
fiabilidad y se presupone que por lo general la actividad es proporcional a
la concentracin;
a- Es necesario conocer:
- la estequiometra de la reaccin que cataliza
- si necesita o no cofactor y cual es
- la concentracin minima de sustrato y cofactor para alcanzar
la mxima velocidad de reaccin
- las condiciones optimas de medida => pH, tiempo de incubacin, procesado
de la muestra biolgica y los reactivos (se debe procesar de inmediato para
evitar la hemlisis - si la muestra esta hemolizada, se recomienda una
nueva extraccin porque los hemates tienen muchas enzimas e interfieren;
los frmacos tambien
pueden
alterar
la concentracin de
enzimas),
temperatura, posibles activadores e inhibidores endognos y exgenos de la
muestra;
- las caractersticas de la tcnica analitica para esa muestra biolgica
b- Debidos a la presencia de la enzima en la muestra y a su actividad
especifica, se puede determinar la actividad enzimtica (AE) analizando
como parmetro:
- la aparicin de algn producto
- la desaparicin del sustrato
- la variacin del cofactor o de algn componente de la reaccin en el
transcurso de la misma
c- Tcnica analitica mas empleada => espectrofotometra ultravioleta-visible

(UV-V)
d- Fase de retardo - se debe medir la absorbancia en esta fase; el tiempo de
retardo esta indicado por los protocolos comerciales.
e- Fase lineal => se determina la actividad enzimtica, porque la velocidad
de formacin del producto es constante.
f- La velocidad comienza a disminuir debido a => agotamiento de sustrato,
variaciones de pH que no han podido ser amortiguadas por el tampn, efectos
de inhibicin de la enzima, etc.
g- AE se mide en UI-ml => unidad internacional como la cantidad de enzima
que
transforma
un
micromol
de
sustrato
en
un
minuto
en
condiciones estndar previamente establecidas (en cada unidad se define la
unidad de actividad y sus unidades.
Metodos analticos de determinacin de actividad enzimtica - no es

importante un dato puntual de absorbancia sino la variacin de la absorbancia
por unidad de tiempo ocasionada por la AE.
(1) Metodos a punto final => no es frecuente; se supone que la reaccin es
lineal y la cintica de orden cero no ocurre siempre; pasos: se ponen en
contacto los reactivos (que aportan el sustrato) y la muestra biolgica (aporta
la enzima) y tras un periodo de incubacin que supere el periodo de retardo, se
mide la absorbancia; al cabo de un tiempo establecido se detiene la reaccin y
se vuelve a medir la absorbancia;
(2) Metodos cinticos => medir la absorbancia varias veces con intervalo de
minutos; permite comprobar que realmente estas en la zona lineal de la curva,
zona ideal para la determinacin; si se detectan desvos de la linealidad, se
puede despreciar alguna de las medidas finales de la absorbancia; en los
protocolos
comerciales
se
indican
los
pasos
a
seguir
en
cada determinacin para que el resultado sea fiable; tipos =>
a. En muchas reacciones enzimticas participan como cofactores los complejos

NAD-NADH o NADP-NADPH y en esta participacin se basan muchos
metodos analticos.
b. Metodos colorimtricos miden la formacin del color.
Calculo de la actividad enzimtica - una vez obtenida la variacin de
absorbancia por minuto, para calcular AE se pueden emplear los siguientes
metodos:
- la aplicacin de una variante de la ley de Lambert-Beer
- la construccin de una recta de calibrado
- medidas indirectas de la concentracin de sustrato
Formula => AE (UI-L) = DO/min x factor de calculo
Tema 16 - Funcin Heptica

Higado - un rgano de naturaleza glandular, profusamente vascularizado,
rodeado por una capsula fibrosa con un peso +/- 2,5% del peso corporal; es el
encargado de la transformacin bioqumica delos principios inmediatos
ingeridos
en
la
diete
y
absorbidos
a
nivel
intestinal, as como
su distribucin por todo el organismo; irrigado por la arteria heptica y la vena
porta, la sangre sale del higado por venas supra-hepticas que desembocan en
la vena cava inferior; histologa => clulas hepaticas o hepatocitos,
elementos
vasculares
(vasos sanguneos,
vasos linfticos y vas biliares), parnquima (la propia masa glandular);
Funcin:
- Interviene activamente en el metabolismo de los principios inmediatos
- Participa junto con la mdula osea
de sntesis y regeneracin sanguinea
el
bazo
en
los
procesos
- Forma la bilis (cuya composicin: sales biliares, bilirrubina, urobilingeno,

colesterol, agua fosfolipidos, electrolitos)
- Encargado de la eliminacin de productos potencialmente txicos para el
organismo (detoxificacin por bio-transformacin)
- Participa en las funciones del sistema monocito-macrfago (SRE)
- Participa en el metabolismo de hormonas y vitaminas =>
(1) sintetiza protenas encargadas de transportar hormonas y vitaminas en la

sangre
(2) degrada las hormonas y facilita su eliminacin
(3) sirve de almacn de ciertas vitaminas
(4) participa en el metabolismo de la vitamina D3 activa (calcitriol)
Actuacin heptica en el metabolismo de los principios inmediatos - se

encarga de proporcionar a los tejidos: energa, glucosa y cidos graso en
periodos inter-digestivos.
a. Hidratos de carbono:
- despus de las comidas => almacena la glucosa en forma de glucgeno o TG
- entre las comidas => glucogenognesis y gluconeognesis
b. Lpidos:
- moviliza cidos grasos procedentes del tejido adiposo (liplisis)
- sintetiza AG a partir del exceso de glucosa y AA => para sintetizar TG que
forma parte de las lipoprotenas VLDL y HDL
- utiliza AG para sintetizar "cuerpos cetnicos" (fuente de energa para higado y
el resto del organismo)
- sintetiza colesterol (1,5-2 g diarios)
c. Protenas:
- metaboliza selectivamente los AA
- utiliza el amoniaco de la degradacin AA, del rin y intestino,
para sntesis de urea y glutamina
- sintetiza protenas plasmaticas (albumina, factores de coagulacion, etc.)
Actuacin heptica en la secrecin biliar - formar la
bilis, cuya composicin: sales biliares, bilirrubina, urobilingeno, colesterol,
agua fosfolipidos y electrolitos que desempea funciones de:
- Servir de vehculo para la eliminacin de bilirrubina, colesterol y otras
sustancias
- Mantener disuelto el colesterol
- Facilitar la digestin y absorcin de las grasas a nivel intestinal (mediante las
sales biliares)
Metabolismo de la bilirrubina:
- una pequea parte de BB tiene su origen en el catabolismo de
enzimas hepticas (citocromos, catalasas) y en la destruccin en la MO de
eritrocitos (inmaduros)
- la mayor parte de BB procede del catabolismo de la Hb presente en el

interior de los eritrocitos que tiene lugar en las clulas del SRE (bazo, higado,
ganglios linfticos y MO); los hemates que ja han completado su ciclo vital
(120 das) son degradados, liberando la Hb que contenan; Hb se desdobla en
globina y grupo HEM ; grupo HEM se desdobla, liberando el tomo de Fe y el
HEM se transforma en una cadena lineal formado por 4 anillos (pirrlicos) que
son la estructura bsica de los pigmentos biliares; el 1er pigmento formado es
biliverdina; tras su reduccin => bilirrubina indirecta (insoluble e
hidrofbica); este se incorpora a la sangre unida a la albumina; en el hepatocito
se conjuga con el cido glucurnico => BB hidrosoluble/conjugada y
directa; una pequea parte regresa a la sangre, pero la mayor parte accede al
intestino delgado por el esfnter de Oddi; por la accin de la flora intestinal, una
parte se transforma en estercobilingeno que al oxidarse => estercobilina,
se elimina por las heces (confiere su color caracterstico); el resto de BB
conjugada se absorbe en el intestino y pasa a la sangre y se elimina por la
orina (una pequea parte) y la mayor parte vuelve al higado e intestino
(circulacin entero-heptica).
Funcin de la bilis => servir de vehculo para la eliminacin de colesterol,
bilirrubina y otras sustancias; mantener disuelto (emulsionado) el colesterol;
favorecer la digestin y absorcin de las grasas a nivel del intestino delgado
(debida a las sales biliares)
Actuacin heptica en la destoxificacin por bio-transformacin toxico endognos (bilirrubina, amoniaco) y exgenos (txicos, frmacos):
- Modificar su actividad reduciendo o eliminando su toxicidad orgnica

- Hacerlos hidro-solubles y por tanto fcilmente eliminables (va biliar o
urinaria)
Actuacin hepatica
a
nivel
del
sistema
monocitomacrfago (clula Kupffer/fagocitosis) - sistema retculo endotelial que
atribuyen a las siguientes funciones:
- hematopoyesis
- respuesta inmunitaria (especifica y inespecifica)
- funciones de tipo metablico
- formacin de pigmentos
Actuacin heptica en el metabolismo de hormonas y vitaminas:
- Sintetiza protenas transportadoras de hormonas y vitaminas en el
torrente sanguneo
- Degradar las hormonas y facilitar su eliminacin
- Almacena vitamina D (circulacin entero-heptica)
Trastornos hepticos - clasificacin morfologica de las hepatopatas
A. Enfermedades del parnquima (alteraciones intra-hepticas)
- Hepatitis (viral o toxico - aguda o crnica)
Cirrosis
(de
origen alcohlico;
de
tipo
biliar;
hemocromatosis
=> acumulacin de Fe, cirrosis, intolerancia de hidratos de carbono;
posnecrtica; fibrosis qustica pancreatica /enfermedad de Wilson)
- Infiltrados (de grasa TG, colesterol; de glucgeno; de tipo amiloide; otros
(leucemia, linfoma, granuloma)
- Lesiones que ocupan un espacio (tumores, quistes, abscesos)
- Trastornos funcionales que cursan con ictericia => supresin o detencin del
flujo de bilis (colestasis) en el embarazo; diversos sndromes.
B. Enfermedades hepato-biliares (resultado de alteraciones en
las vas biliares donde fluye la bilis)
- Obstruccin biliar extra-heptica
- Colangitis (inflamacin de los conductos biliares)
C. Enfermedades vasculares (son de origen circulatorio)
- Malformaciones arteriovenosas
- Trombosis de la vena heptica o de la vena porta
- Congestin pasiva crnica
Trastornos mas frecuentes de la funcionalidad heptica:
Trastornos en el metabolismo de los principios inmediatos

(1) Hidratos de carbono
- hiperglucemia => siempre que los niveles de insulina no < de VN, puede ser
debida a una reduccin de la capacidad del higado para metabolizar la
glucosa/ glucogenognesis y gluconeognesis (disminucin del
numero
de
hepatocitos y alteraciones de la estructura heptica);
- hipoglucemia => solo en insuficiencias hepticas graves como consecuencia
de la incapacidad del higado para sintetizar y liberar glucosa (glucogenlisis) al
torrente sanguneo.
(2) Lpidos - dficit de ciertas enzimas que intervienen decisivamente el
metabolismo lipdico causando alteracin en la va metablica; dficit de lecitilcolesterol-acil-transferasa (LCAT) que regula la esterificacin del colesterol en
sangre => aumenta el colesterol libre que se deposita sobre la membrana
de hemates (se altera), los hace mas frgiles y causa anemia hemoltica.
(3) Protenas
a- La urea NH2CONH2 se sintetiza en el higado de la neutralizacin
del anin bicarbonato HCO3- con amonio NH4; una deficiencia heptica puede
provoca:
- acumulo de amonio
(encefalopata heptica)
en
sangre
=> alteracin cerebrales
graves
- nivel alto de bicarbonato en sangre => alcalosis (pH alcalina de la sangre)

- descenso en la sntesis de urea y su nivel en el plasma
b- Fallo a nivel heptico de
(de carcter proteico)
la sntesis de
factores
de
la
coagulacion
Trastorno en la funcin biliar

(1) Ictericia - coloracin amarilla que aparece en la piel y mucosas debida a la
presencia de un pigmento, la bilirrubina, cuando este se encuentra en la sangre
>
2
mg/dl;
indica
trastornos
en
la formacin, captacin
conjugacin y eliminacin (el proceso mas difcil) de la bilirrubina por el
higado.
Causas - clasificacin fisiopatolgica:
- Aumento de la produccin de BB en anemias hemolticas => incapaz de
asumir el aumento de BB debido a la rotura masiva de eritrocitos
=> acumulacin de BB indirecta.
- Captacin anormal de BB por los hepatocitos en sndrome de Gilbert =>

falla
la sntesis hepatica
de
la protena transportadora
(albumina)
=> acumulacin de BB no conjugada.
- Alteracin del
proceso
de conjugacin de
del recin nacido
=>
inmadurez
de
=> acumulacin de BB insoluble.
BB
la
en
trastorno
glucoroniltransferasa
- Trastorno en la eliminacin de la BB conjugada en hepatopatas difusas,

enfermedades congnitas => incapacidad de los hepatocitos para eliminar la
BB conjugada con la bilis => acumulacin de BB conjugada.
- Alteraciones del flujo biliar de la BB en diversos trastornos de obstruccin en
las vas biliares => la BB conjugada al no poder seguir su camino normal,
vuelve a la sangre => acumulacin de BB directa.
Tipos de Ictericia:
- Pre-heptica o hemoltica => aumenta la BB indirecta en el suero
- Heptica o hepato-celular => aumenta la BB directa y indirecta
- Post-heptica u obstructiva => aumenta la BB directa
Diagnostico - para determinar que tipo de ictericia instaurado es
necesario los datos de:
- tipo de BB preferentemente aumentada en el suero
- presencia o ausencia de BB en orina (coluria)
- color de las heces y cantidad de urobilingeno en ellas
- cantidad de urobilingeno en la orina
(2)
Colestasis la alteracin de
la formacin de
la
bilis
o
de
su excrecin hacia el duodeno por causa de un mal funcionamiento de
las clulas hepticas (hepatocitos)/
intra-heptico o
por obstruccin de
las vas biliares/ extra-heptico; inicialmente => ictericia, coluria, hipocolia o
acolia (disminucin de secrecin biliar) y prurito; posteriormente => si se
prolonga aparecen xantomas (alteracin cutanea de un trastorno del
metabolismo lipdico) esteatorrea (exceso de grasa en las heces/heces blancas)
y sndrome de malabsorcin; diagnostico => ecografa, tomografa axial
computerizada (TAC) y datos laboratorio.
Clasificacin de colestasis (segun sus causas):
Intraheptica => infecciones (hepatitis vrica), txicos (alcohol, frmacos, de
origen
industrial),
neoplasias
(carcinoma, metstasis),
infiltraciones
(amiloidosis), otras (cirrosis heptica, embarazo, postoperatorio).
Extraheptica => litiasis (en el coldoco), neoplasias (pancretica, en
la vescula biliar, en las vas biliares), infestaciones parasitarias (hidatidosis,
ascridos, fasciola heptica), pancreatitis (aguda o crnica) otras causas
(estenosis del conducto biliar, ulcera duodenal).
Trastornos en la capacidad de detoxificacin por bio-transformacin como consecuencia de la insuficiencia heptica para eliminar ciertos
compuestos, puede aparecer una cierta intolerancia a sustancias
=> frmacos, txicos, etc. que no pueden ser degradadas y se acumulan,
llegan a provocar trastornos.
Trastornos en el metabolismo de hormonas y vitaminas - puede causar

importantes alteraciones (cualitativa y cuantitativas) de la sntesis de
algunos metabolitos como "somatomedina" (hormona imprescindible para un
funcionamiento normal de la hormona del crecimiento (GH)
Determinacin de la funcionalidad heptica:

- de tipo fsico (palpacin y percusin del abdomen) => la sensibilidad,
consistencia y textura de la superficie heptica; el aumento del tamao del
higado (hepatomegalia => tumores, insuficiencia cardiaca, obstruccin de

las vas biliares y inflamacin en hepatitis);
- de tipo instrumental
- de tipo funcional
Tcnicas de exploracin instrumental de las hepatopatas

- Radiologia: en caso de hepatomegalia => el diafragma derecho es
desplazado hacia arriba (Rx torax)
- Gamma-grafa: mediante isotopo radioactivo con afinidad sobre los
hepatocitos y clulas Kupffer => ofrece imagen de la existencia de lesiones
(abscesos, quistes y tumores) que no tienen capacidad de fijar el compuesto
radiactivo.
- TAC: ofrece imagen del higado con su forma y tamao, la existencia de
lesiones, calibre de las vas biliares.
- Ecografa: utiliza ondas sonoras que da informacin => tipo lesiones
existente, si es solida o lquidos, calibre de los conductos biliares intrahepticos
Laparoscopia: introduccin de
un
dispositivo ptico en
cavidad abdominal => permite observar directamente el higado.
la
- Puncin-biopsia: la obtencin de una muestra del tejido heptico para su

posterior estudio mediante anatoma patologica.
Pruebas funcionales hepticas
Marcadores
sricos
de
las hepatopatas son
constituyentes sanguneos, tiles en
el
reconocimiento
de
la
enfermedad heptica,
aunque
no
sirven
para
medir
la
funcionalidad heptica global; su alteracin refleja fundamentalmente el dao
del hepatocito o del rbol biliar; citolisis heptica/ necrosis hepato-celular/
rotura celular => las enzimas saldrn al exterior aumentando su nivel en el
suero; disminucin de
sus
niveles sricos => inhibicin de
la sntesis de
enzimas; perfil heptico de rutina => GOT, GPT, ALP, GGT, Bilirrubina
Transaminasas (GOT y GPT) - el aumento de ambas nos indica
citolisis heptica; la GPT aumenta en lesiones de poca entidad y la GOT
aumenta en lesiones hepticas mas graves; tienen poco valor pronostico, pero
se usan para determinar la actividad de las enfermedades hepticas con lisis

celular.
- Glutamicoxalacetica (GOT) o Aspartatoaminotransferasa (AST): se

encuentran en el interior de clulas hepaticas y musculares (tanto en el
citoplasma como en las mitocondrias); VN plasmticos = 5-35 U/L; se
encuentra aumentada en lesiones hepticas graves (> de 3000 U en hepatitis
agudas y mas moderado en hepatitis crnicas), en necrosis del miocardio
(IAM), en
procesos
que
afectan
las clulas musculares (triquinosis
=> parsitos de
cerdo/jabal),
necrosis
tisular
(embolia
pulmonar)
y hemlisis masivas
con
ictericia; disminucin: difcil (sera
por desaparicin absoluta del parnquima hepatica).
- Glutamino piruvica (GPT) o Alaninaminotransferasa (ALT): se encuentra solo

en el citoplasma de las clulas sobre todo hepticas (hepatocitos) y
musculares; VN plasmticos < 55 U/L; esta aumentada en los mismos casos
que la GOT, pero sugiere mas a una alteracin heptica, en hepato-carcinoma,
en metstasis hepticas y hepatitis; cualquier aumento indica enfermedad que
afecte al higado (es mas especifica del hgado);
- Fosfatasas alcalina (ALP): son un conjunto de isoenzimas (se difieren en sus

propiedades fsicas, qumicas e inmunolgicas) y se encuentra aumentada
fundamentalmente en las alteraciones oseas (osteoporosis) y hepticas; VN =
60 - 250 U/L; la isoenzima heptica aumenta cuando existe obstruccin biliar
total o parcial (colestasis) o una lesin que ocupa un espacio en el higado
(tumor o quiste); la elevacin de las fosfatasas alcalina heptica es indicativa
de: colestasis (patrn de colestasis => el aumento de ALP heptica y GGT,
mientras
los
niveles
de
las
transaminasas
son
normales),
cirrosis heptica y metstasis hepticas, carcinomas de vescula biliar, etc; se
encuentra disminuida en personas que sufren hipotiroidismo y nios que
presentan retraso en el crecimiento; pruebas que acompaan a F.A./ALP =>
- LAP y 5-NT - son enzimas de gran utilidad para aumentar la especificidad de
la FA, ya que se encuentran elevadas en las enfermedades hepticas, pero no
en
los
trastornos seos;
FA/ALP
+
LAP
o
5-NT
elevados
=> alteracin heptica; si LAP y 5-NT son normales => otro origen.
Alteracin de la fosfatasa alcalina / ALP (esquema)
- gamma-Glutamiltranspeptidasa (GGT) - es un marcador de gran sensibilidad

para hepatopatas (citolisis y colestasis); VN = 5-40 U/L; cuando su
valor plasmtico es normal, es muy posible que no haya ninguna alteracin a
nivel heptico; se utiliza en combinacin de la ALP para diferenciar el
origen heptico u oseo de una alteracin; ALP + GGT elevadas y GOT + GPT
normales => colestasis; todas elevadas => citolisis.
- Lactato deshidrogenasa (LDH) - presente en la mayor parte de las clulas del

organismo,
formada
por
varias
isoenzimas;
LDH-5
es
de localizacin heptica; su aumento es indicativo de necrosis hepatocelular o de carcinoma metastsico de hgado; VN = 230-480 U/L.
- Bilirrubina (BB) => hiper-bilirrubinemia fisiolgica (recin nacido, permanecer

en
grandes
alturas)
cursa
con
ictericia;
hiper-BB patolgica (preheptica/hemoltica, heptica/hepato-celular, post-heptica/obstructiva); hipobilirrubinemia aparece en anemias intensas (ferropnicas, aplsicas); VN de
BB total 0,15 - 1 mg/dl mas de 2 mg/dl => ictericia; VN de BB

directa/conjugada 0-0,25 mg/dl; VN de BB indirecta/insoluble 0,15-0,8
mg/dl; el aumento de BB directa/conjugada => alteraciones en el flujo biliar/
colestasis; el aumento de BB indirecta/unida a la albumina es causado por =>
anemias hemolticas masivas, fallo de la protena transportadora, alteracin del
proceso de conjugacin fisiolgica => la inmadurez de la glucuroniltransferasa;
para ver que tipo de ictericia => que tipo de BB aumenta, coluria en la orina,
presencia o ausencia de BB en las heces;
El diagnostico de las enfermedades hepticas en el laboratorio, todava no es

totalmente
satisfactorio.
Ocasionalmente
siguen
apareciendo hepatopatas crnicas en las que todas las pruebas BQ arrojan
resultados normales. En casos excepcionales se puede demostrar
una relacin causa-efecto entre determinadas pruebas y la etiologa
o alteracin detectada a nivel heptico. La prueba funcional, la causa de
la alteracin heptica y la patologa, no se encuentran en estricta correlacin,
por esto hay que acompaan las con pruebas de TAC, ecografa, etc.
Parmetros biolgicos para Hepatitis

(1) Transaminasas => en las hepatitis sus niveles plasmticos son entre 10 y
100 veces superiores a VN
(2) Pruebas de Coagulacion => la mas utilizada es Tiempo de Quick (se reduce
mas de la mitad - proceder a la hospitalizacin)
(3) Serologa => investigacin de la presencia de ciertos Ags procedentes del
virus
causante
de
la
hepatitis; determinacin de
los
distintos
Acs especficos (IgM e IgG) que aparecen en el plasma de la persona afectada,
tanto cualitativa como cuantitativamente.
(4) Proteinograma
Tema 17 - Funcin Endocrina

Hormona - es un mediador/mensajero qumico que es secretadas por
glandulas especializadas y influye en la actividad de las clulas (regulador
bioquimico); funciones => mantener la homeostasia; iniciar, mediar y regular
los
procesos
de
crecimiento,
desarrollo, maduracin, reproduccin y
envejecimiento; endocrinologa => estudia la comunicacin y el control
ejercidos
dentro
de
los
organismos
vivos
por
medio
de
mensajeros qumicos/hormonas; el sistema endocrino junto con el sistema
nervioso conforman el mecanismo por el cual el organismo controla e integra
la funcin de los distintos tejidos y rganos, sintetizando y liberando hormonas;
Clasificacin - pueden agruparse en cuatro grandes familias en funcin de su

estructura qumica:
- Pptidos; de diferente complejidad: TSH (h.tiroestimulante/tiroliberina), GH
(h.del
crecimiento), polipptidos (glucagn),
oligopptidos
(vasopresina), glucoprotena (gonadotropinas)
- Derivadas de aminoacidos: triyodotironina, adrenalina
- Esteroideas (derivan del colesterol): progesterona, andrgenos, estrgenos,
corticosteroides, vit. D
- Derivadas de los cidos grasos: prostaglandinas
Los mecanismos de accin de las hormonas (las funciones):

- funcin Autocrina y paracrina (ella misma y celula vecina): retrogadamente
sobre sus clulas de origen para modular su propia secrecion u otros procesos
intracelulares; la clulas secretora es a la vez diana;
- funcin Paracrina: actua sobre clulas diana/adyacentes que se encuentran
en el mismo lugar mediante la simple difusion a travs del liquido intersticial
que las separa (cerca una de la otra);
- funcin Endocrina: acta sobre clulas diana alejadas, siendo transportada
por la circulacion sanguinea a los diversos tejidos donde actuaran;
- funcin Neurocrina: mediante un sistema hibrido de transmision de seales,
en el cual, la seal hormonal tiene su origen en una neurona y tras el
transporte axonal a la circulacion sanguineas, es llevada al una celula diana
alejada (la celula secretora es una neurona).
Sinapsis quimica => seal paracrina (de neurona a neurona hasta llegar al
organo diana).
Mecanismo
de regulacin hormonal
las
hormonas
sintetizadas
por clulas de rganos diana
pueden
controlar
por
retroaccin
las glndulas endocrinas; el mecanismo de regulacin dominante es el de la
retroalimentacin/ retroaccin negativa; hay 3 tipos =>
- r. n. de asa larga (bucle largo de regulacin por r. n.) => enva seal a larga
distancia para que se deje de sintetizar hormonas estimulante;
- r. n. de asa corta (bucle corto) => e.j. la hormona de la hipfisis envia seal
al hipotlamo para que no sintetice/ envi mas hormonas estimulante;
- r. n. de asa ultra corta (bucle ultra corta) => la hormona enva la seal a su
propia glndula
Las condiciones fisiolgicas que requieren la accin de una hormona, estimulan
su liberacin y
los
productos
resultantes, suprimen
su liberacin;
esta asociacin homeostatica puede ser entre:
- una hormona y uno o mas sustratos
- una hormona y otras hormonas
- una hormona y factores qumicos
Tambin existen pautas de liberacin hormonal dirigidas por => ritmos diurnos,
fases del sueo, variaciones estacionales, fases del desarrollo, dolor las
emociones, las lesiones, etc. a traves de complejas vas neurales;
Efecto de la unin entre hormona y receptor:

a- Cuando la unin es en la membrana plasmtica de la clula, el complejo
resultante acta generando en el citoplasma moleculas de sealizacin como
el cAMP (adenosinmonofosfato cclico/ mensajeros moleculares) que influyen
en los procesos metablicos de la clula activando o inhibiendo enzimas preexistentes.
b- Cuando la unin se produce en el citoplasma o en el ncleo, el complejo
formado interacciona con moleculas de ADN generalmente activando un gen
determinado e incrementado la sntesis de la protena corespondiente.
Resultado => tienen que aumentar o disminuir uno o mas procesos
intracelulares en la clula diana (reacciones enzimticas, movimientos
inicos, re-ordenamientos citoesqueleticos (algo que re-establece la actividad
celular).
Metodos analticos generales para el estudio de la funcin endocrina:
- Medida de las concentraciones plasmticas de las hormonas
- Cuantificacin de la excrecin urinaria de la hormona o sus metabolitos
- Medida de Ac circulantes que interfieren la accin hormonal o lesionan
la glndula en estudio
- Determinacin de la tasa de produccin y secrecin hormonal
- Pruebas funcionales o dinmicas, de estimulacin o supresin
- Estudio de los receptores de la hormona (biopsia, cultivos celulares)
Tcnicas inmunoqumicas que se utiliza con mas frecuencia en

la cuantificacin hormonal:
- RIA (radioinmunoanlisis) => son tcnicas inmunolgicas cuantitativas en las
que se utilizan isotopos radiactivos como marcadores de los Ag o Ac.
La radiacin emitida puede ser medida con un contador (de centelleo)
gamma obtenindose la
actividad
radiactiva
que
es
la
velocidad
de desintegracin.
- EIA (enzimoinmunoanalisis) => son tcnicas inmunoquimicas cuantitativas

que emplea reacciones Ag-Ac, marcando uno u otro con enzimas; a
la reaccin inmune le sigue una reaccin indicadora: se aade el sustrato de la
enzima, se desarrolla la reaccin enzimtica y se determina la actividad de la
enzima
marcadora fotomtricamente mediante tcnicas colorimtricas
habitualmente; los EIA pueden ser homogneos y heterogneos; se diferencian
en que los ensayos homogneos no se requiere lavado o separacin fsica de
las sustancias reaccionantes antes de medir la actividad enzimtica y en
los heterogneos es necesaria la separacin fisica de los reaccionantes en las
fracciones libre y ligada antes de la determinacin de la actividad de la enzima
marcador.
***cuadro 16.6 y 16.7 pag.225
EIA heterogneos:
- tcnica competitivo => Ag Pr y Ag marcado compiten por el Ac; la
actividad enzimtica sera inversamente proporcional a la cantidad de Ag Pr.
- tcnica sandwich => mediante procesos de lavados y incubacin;
actividad enzimtica es directamente proporcional a la cantidad de Ag Pr.
la
- tcnica enzimomtrico => mediante procesos de lavados y incubacin; la

actividad enzimtica sera inversamente proporcional a la cantidad de Ag
presente en la muestra problema.
- FIA (fluroinmunoanlisis) => tcnica de determinacin cuantitativa que

emplea reacciones Ag-Ac en las que se marcan unos u otros con compuestos
fluorescentes midindose posteriormente la fluorescencia desarrollada con
aparatos llamados fluormetros; pueden ser homogneos o heterogneos.
- Otras tecnicas: espectrofotomtricas, cromatogrficas y pruebas de

inmunoaglutinacin (inhibicin de la hemaglutinacin y aglutinacin directa o
indirecta de partculas de ltex).
rganos y tejidos secretores de hormonas:

1- Hipotlamo => es una parte del SNC, regin del cerebro por debajo
del tlamo y
por
encima
de
la hipfisis acta en
respuesta
a estmulos nerviosos; ah se encuentran clulas neuroendocrinas (neuronas)
con capacidad de sintetizar y secretar hormonas estimulantes o inhibidoras de
la hipfisis y hormonas que emigran por va nerviosa al lbulo posterior de

la hipfisis donde se almacenan hasta su secrecin, como vasopresina y
oxitocina; factores liberados =>
-GHRF / somatoliberina (factor regulador de la hormona del crecimiento);
-LH-RH / gonadotropina/gonadoliberina (factor regulador de LH /lutropina/
luteinizante y FSH/ folitropina/ foliculoestimulante);
-TRH / tiroliberina (factor regulador de la tirotropina /TSH);
-CRF
/
corticoliberina
/adrenocorticotropa /ACTH);
(factor
regulador
de
la
corticotropina
- factores inhibidor => somatostatina.
2- Hipfisis => rgano glandular y nervioso, pequeo, como una aceituna

situado en la base del crneo, en una depresin osea (silla turca); consta de 2
partes anatmicas y funcional-mente diferentes (anterior/ adenohipfisis y
posterior/ neurohipfisis); adenohipfisis secreta =>
ACTH / adrenocorticotropa/corticotropina => sntesis de glucocorticoides
GH
/
somatotropina
y cartlago de conjuncin
=>
efectos
anablicos;
crecimiento
oseo
TSH / tirotropina => sntesis de hormonas tiroideas

FSH / folculo estimulante/folitropina => espermatognesis, el desarrollo
del folculo y sntesis de estrgenos en ovarios
LH / luteinizante/lutropina => desarrollo
testiculares y sntesis de andrgenos
de
las clulas intersticiales
LTH / prolactina => produccin de leche
3- Glndulas perifricas
(a) Tiroides => se localiza en la parte anterior del cuello, sobre
los cartlagos de la laringe y esta constituida por 2 lbulos unidos por un istmo;
en ocasiones se puede observar un tercer lbulo piramidal (lbulo de
Lalouette)
que
parte
del istmo;
tiene
como
objetivo
primordial
la sntesis y liberacin al torrente circulatorio de las hormonas tiroideas
(tiroxina/T4 y triyodotironina/T3) que se forman tras la captacin del yodo
y protelisis de la tiroglobulina; la unidad funcional e histologa de la tiroides es
el folculo tiroideo => compuesto por una capa de clulas tireocitos y dentro se
encuentra una sustancia peptdica yodada (tiroglobulina), que se incluye en su
secuencia a T3 y T4; funcin =>
- influyen en el crecimiento y maduracin de los tejidos
- regulan el consumo total de energa

- regulan el recambio de sustancias
hormonas, incluyndose a si mismas
esenciales
como
vitaminas
- ejercen acciones a nivel mitocondrial, sobre el metabolismo oxidativo y a

nivel de la membrana plasmtica influyendo sobre el flujo de sustratos y
cationes;
El eje hipotlamo - hipfisis - tiroideas: la regulacin se hace con TSH y
con el contenido de tiroides; la TSH provoca estimulacin tiroidea para
sintetizar hormonas tiroideas; la regulacin de la TSH es mediante el TRH
(estimula) y hormonas tiroides (inhiben su secrecin y antagonizan con el TRH);
Hipotlamo => TRH (tiroliberina) => Hipfisis => TSH (tirotropina) => Tiroides
=> T3 (triyodotironina) (+) T4 (tiroxina) => metabolismo basal y reacciones
celulares (+) tirocalcitonina => metabolismo fosfoclcico.
Deteccin de los problemas tiroides:

Caso 1 - TSH aumentada y T4 disminuida => hipotiroidismo primario
(problema de tiroides); al haber poco T4, la hipfisis cree que tiene que
sintetizar mas TSH y estimular a la tiroides, pero la tiroides no funciona bien; si

TSH alto y T4 normal => autoinmune, existe Ac anti tiroides.
Caso 2 - TSH aumentada y T4 aumentada => hipertiroidismo secundario,
la disfuncin puede ser de la hipfisis o del hipotlamo; habr que determinar
TRH (si TRH baja - problema de hipfisis; si TRH alta - problema de hipotlamo.
Caso 3 - TSH disminuida y T4 disminuida => hipotiroidismo secundario;
la disfuncin puede ser de la hipfisis o del hipotlamo; hay que determinar
TRH (si TRH baja - problema de hipotlamo; s TRH alta - problema de hipfisis)
Caso 4 - TSH disminuida y T4 aumentada => hipertiroidismo primario;
problema de tiroides; T4 inhibir a la TSH, por eso esta baja, pero la
tiroides seguir produciendo T4
Hipotiroidismo;
causas
=>
falta
de
yodo;
enfermedad gentica (dficit enzimtico); tratamiento del hipertiroidismo con
yodo radiactivo o ciruga; tiroiditis de Hashimoto (destruccin autoinmune de la
tiroides); sntomas => pulso lento, voz ronca, habla lenta, cara
hinchada, cada de pelo y cejas, parpados cados
intolerancia al fri,
estreimiento, aumento de peso, cabellos escasos y secos, piel
seca, sndrome del tnel carpiano, confusin, depresin, demencia; descenso
del consumo calrico.
Hipertiroidismo /tirotoxicosis; causas => (1) enfermedad de Graves
(autoinmune, se fabrican Ac anti receptor de la TSH en la tiroides => TSH baja;
(2) ndulos toxicos (adenomas) => bocio multinodular toxico o bocio
hipertrfico; (3) hipertiroidismo secundario por tumor hipofisiario que libera
mucha TSH; sntomas => aumento del metabolismo general del organismo,
frecuencia cardaca, hipertensin arterial,
sudor, escalofros y
temblor,
nerviosismo, perdida de peso, insomnio, movimiento intestinal, diarrea,
debilidad, ojos saltones y enrojecidos, sensibilidad de los ojos a la luz, mirada
fija, confusin.
(b) Suprarrenal => es un organo endocrino; son 2 glndulas de pequeo

tamao situadas en los polos superiores de ambos riones en las que se
diferencian tanto anatmica como funcionalmente 2 partes:
- corteza / zona externa - secreta => hormonas corticales /esteroideas
derivados
del
colesterol:
(1)
mineralcorticoides
aldosterona
con funcin => reabsorcin de sodio a nivel renal (equilibrio hidroltico)
y regulacin balance inico (eliminar
K+);
(2)
glucocorticoides
cortisol
con funcin => protelisis, liplisis, gluconeognesis (causando
hiperglucemia), anti-inflamatorios y
inmunosupresor
(3) andrgenos suprarrenales
(androsterona
y
dehidroepiandrosterona)
con funcin => virilizacin y proteognesis;
- mdula / zona interna - secreta => adrenalina (favorece la tensin arterial,
taquicardia, glucemia metabolismo basal y estimula del SNC) y noradrenalina
(aumenta la tensin arterial).
Sndrome Cushing => se produce por sobre exposicin del organismo al

cortisol/glucocorticoides (hipercorticismo) ocasionado por hiperfuncin de
las glndulas suprarrenales (corteza); causas => adenoma hipofisiario,
corticotropina ectpica, adenoma suprarrenal, carcinoma suprarrenal;
sintomas
=>
calvicie
e
hirsutismo
facial
en
mujeres;
joroba
de bfalo; hipertensin;
adelgazamiento cutneo hematomas
con
facilitad; curacin defectuosa de las heridas; acne, cara de luna,
mejillas pletricas;
osteoporosis;
aumento
de
la
grasa
abdominal; estras abdominales; necrosis avascular de la cabeza femoral;
debilidad muscular.
El eje hipotlamo - hipfisis - suprarrenales:
Hipotlamo =>
CRF
(corticoliberina)
=> Hipfisis =>
ACTH
(adrenocorticotropa/ corticotropina) => Glndula suprarrenal => corteza
(mineralcorticoides
aldosterona,
glucocorticoides
cortisol, andrgenos /androsterona
y dehidroepiandrosterona)
+ mdula (catecolaminas /adrenalina y noradrenalina)
(c) Hormona y factores de crecimiento - la hormona de crecimiento (GH) es

un polipptido producido por el lbulo anterior de la hipfisis; su secrecin es
estimulado por GHRF/ somatoliberina (factor liberador de la GH) secretado por
el hipotlamo; funcin:
- indirecta: por medio de factores de crecimiento similares a la insulina (IGFs)
que
estimulan
el
crecimiento esqueltico,
la sntesis proteica
y
la proliferacin celular; la fuente principal de estos factores es el higado;
- directa: accin antiinsulinica que provoca hiperglucemia e hiperlipemia
favoreciendo la gluconeognesis;
Pruebas diagnosticas mas utilizadas en el estudio de problema de

crecimiento:
1- la valoracin basal de la GH
2- los niveles sricos de los IGFs (factores de crecimiento semejantes a la
insulina)
3- las pruebas de estimulacin de la GH => las mas aceptadas son la prueba
con GHRH y la de hipoglucemia insulnica (la hipoglucemia estimula
la produccin de GH)
4- las pruebas de supresin => se hacen cuando se sospecha un exceso
de produccin de GH (gigantismo o acromegalia)
5- las pruebas de secrecin espontanea integrada => valoran la secrecin de
la hormona durante 24h con
una determinada periodicidad o
su excrecin urinaria (no hay problema de secrecin puntual, sino alteracin en
el patrn de secrecin de GH).
Gigantismo => exceso de somatotropina en los nios que con lleva a un
crecimiento lineal excesivamente rpido suele ser debido a un tumor
hipofisiario antes de que se cierren las epfisis; otras causas: hiperplasia
suprarrenal congnita, hipertiroidismo, trastornos hereditarios (sindrome de
Klinefelter).
Acromegalia => es el aumento de la secrecin de somatotropina en una
edad
posterior
(al
crecimiento
habitual), despus de
la fusin de
las epfisis oseas; suele ser por un adenoma hipofisiario.
(d) Gonadal (testiculo y ovario)
El eje hipotlamo - hipfisis - gnadas:
I. Hipotlamo => LH-RH (gonadoliberina) => Hipfisis => gonadotropina FSH

(folculo estimulante/ folitropina) => Ovarios (estimula la maduracin de ovulo
y produccin de estrgenos/
estradiol)
o Testculos (estimula espermatognesis)
II. Hipotlamo => LH-RH (gonadoliberina) => Hipfisis => gonadotropina LH
(luteinizante /lutropina) => Ovarios (estimula ovulacin y produccin de
progesterona/cuerpo lteo) o Testculos (estimula produccin de testosterona
/andrgenos y desarrollo clulas intersticiales)
Ciclo menstrual => en la mujer, los niveles de gonadotropinas (FSH y LH)

tienen variaciones cclicas, cada 28 das (ciclo menstrual) aproximadamente la
FSH
estimula
el
crecimiento
y maduracin del
vulo
(del
1er da de menstruacin hasta 10-12 das) y la produccin de estrgenos en el
ovario; los estrgenos son hormonas feminizantes responsables de los
caracteres sexuales femeninos; a lo largo del ciclo menstrual ambas hormonas
(FSH y estrgenos) estimulan el desarrollo del folculo; sobre el da 10 los
niveles de estrgeno que han ido aumentando estimulan el hipotlamo que
determina un gran aumento en la sntesis de LH producindose el pico de
la ovulacin; esto provoca la rotura del folculo maduro y la ovulacin; en la 2
mitad del ciclo, tras la ovulacin, el folculo estimulado por la LH origina el
cuerpo lteo que secreta progesterona; los altos niveles de progesterona
frenan
la sntesis de
gonadotropina;
sino
hay fecundacin,
el
cuerpo lteo degenera y se produce la eliminacin de la mucosa endometra
(menstruacin); descienden los niveles de estrgenos y progesterona y
comienzan a aumentar los niveles de estrgenos y FSH
Fecundacin => el cuerpo lteo no degenera y sigue secretando

progesterona (se ira engrosando); el ovulo fecundado se implanta en la
mucosa endometra uterina, se desarrolla el embrin y la placenta que
secreta estrgenos, progesterona y hormonas anlogas a las hipofisirias y
sexuales como gonadotropina carinica (hCG) y somatotropina carinica; la
hCG formada por 2 subunidades (alfa y beta) se sintetiza en los 1s das del
embarazo con un mximo al 3er mes, luego desciende hasta 5 mes y es
estable hasta el final del embarazo (el parto); en el embarazo aumentan
extraordinariamente los estrgenos y la progesterona decayendo bruscamente
al final; al eliminarse la placenta se secreta prolactina (LTH) hipofisiria que
activa en las glndulas mamarias desarrollados por el efecto de estrgenos y
progesterona => produccin de leche; el amamantamiento estimula
la secrecin de oxitocina en la hipfisis con 2 efectos => secrecin lactea y
contraer la musculatura uterina para recuperar el tamao original del tero;
Las hormonas gonadal y su secretores

Testosterona => secretada por los testculos a partir de la
pubertad; funcin:
- funcin virilizante
- estimulan el desarrollo muscular y esqueltico
- estimulan los caracteres sexuales masculinos: vellosidad,
voz, maduracin testicular, espermatognesis
- controla la secrecin de las hormonas hipotlamo-hipfisis, estimulantes
del testculo (FSH y LH) retroalimentacin negativa;
- responsable del crecimiento y la funcin de la prstata y testculos por la LH
en las clulas intersticiales.
Oxitocina => secretada por el hipotlamo y emigra al lbulo posterior de
la hipfisis (neurohipfisis) donde se almacena hasta su secrecin; funcin:
- favorecer la secrecin lctea
- contraer la musculatura uterina para recuperar el tamao original del tero
- estimula la contracciones en el parto
Progesterona => secretada por el cuerpo lteo (el ovario) tras
la ovulacin y tambin secretada por la placenta (la mucosa uterina) durante el
embarazo; funcin:
- frenar la sntesis de gonadotropinas tras la ovulacin
- ayuda a la implantacin del ovulo fecundado en la mucosa uterina
- ayuda al embarazo
- ayuda a desarrollar las glndulas mamarias en el embarazo
Estrgenos => secretada por el ovario durante el ciclo menstrual
y tambin por la placenta durante el embarazo; funcin:
- maduracin y funcin feminizante de rganos sexuales
responsable de los caracteres sexuales femeninos

estimula en el desarrollo del folculo (aumenta en 10 da del ciclo menstrual)
estimula la ovulacin
desarrollo y mantenimiento del endometro
ayuda en el embarazo (placenta)
ayuda a desarrollar la glndulas mamaria en el embarazo
Prolactina/LTH => secretada por la adenohipfisis/hipfisis anterior, gracias a

la eliminacin de la placenta tras el parto; funcin: estimula la produccin de
leche en las glandulas mamarias
Gonadotropina carinica (hCG) => secretada por la placenta; esta formada
por 2 subunidades (alfa y beta) se detecta en suero o orina; tiene mucha
importancia en el 1er trimestre del embarazo y a lo largo de los 9 meses; es
semejante a la LH y FSH y hormona sexuales; funcin:
- sirve para el diagnostico de embarazo normal y/o ectpico => 150-800
mUI/ml o menores;
- peligro de aborto 1er trimestre(niveles persistentes bajos)
- diagnostico y tratamiento de tumores trofoblsticos (clulas despus del
cigoto)
- crecimiento y mantenimiento de la placenta
Pldora anticonceptiva - compuesto de progesterona engaa al organismo

haciendo creer que hay embarazo => impide la ovulacin; no deja que se
desarrolla el endometro (menos grueso); aumenta el espesor / la consistencia
del flujo vaginal y as es como barrera para los espermatozoides.
Gonadotropina carinica /hCG (secretada por la placenta) - VN en embarazo

5000-80000 mUI/ml
Variacin de la secrecin de hCG durante la gestacin - se sintetiza en los 1s
das del
embarazo,
alcanzando
el mximo nivel
al
3er
mes
de
la gestacin (70 das despus de la ultima menstruacin), luego desciende
hasta el quinto mes y se mantiene estable hasta al final del embarazo.
Niveles de hCG en el embarazo ectpico - 150-800 mUI/ml o menos
(niveles bajos), porque esta hormona es secretada por la placenta que se
ubicara en la cavidad uterina; cuando el embrin se desarrolla ectpicamente
trompas de Falopio) no va a encontrar lo necesario para sobrevivir
(no endometro, placenta sin nutrientes); el nivel de hCG aumentara al
principio pero luego parara su aumento; tambin se pueden encontrar estos
niveles de hCG en un peligro de aborto en el 1er trimestre (crecimiento
embrionario normal); en caso de presencia de tumor trofoblastico, los
niveles notablemente aumentados (no siempre) => altos mas de lo normal
para esa poca del embarazo.
Hipogonadismo
primario
(masculino)
- produccin deficiente
de
espermatozoides y una secrecin disminuida de testosterona por causas =>
deficiencia testicular, hipo-funcin de las gnadas, agenesia testicular,
agresiones testiculares, traumatismo por radiacin, frmacos.
Hipogonadismo secundario - produccin deficiente de espermatozoides y
secrecion disminuida de testosterona por defecto en el hipotlamo o la hipfisis
(ausencia de gonadotropinas)
Hipogonadismo
amenorrea
primario
(femenino)
- hipo-funcin de
los
ovarios,
Hipogonadismo secundario - secrecin deficiente de estrgenos amenorrea,

infertilidad, se debe a un problema con la hipfisis o el hipotlamo.
Tema 23 - Estudio de la funcin renal y

de los productos finales del metabolismo
Urea - es el principal compuesto de excrecin del amoniaco, que se forma en

el transcurso del catabolismo de los aminocidos y las protenas (producto final
del catabolismo proteico en el higado y musculos); sintetizada en el higado a
partir de los aminocidos+bicarbonato => pasa a la sangre => eliminada por
los riones (tras la desaminacin => el grupo amino => amoniaco => urea).
Valor normal en suero = 10 - 50 mg/dl
Inters clnico - el aumento de la concentracin de la urea en sangre
(hiperuremia) esta estrechamente relacionada con alteraciones en
su eliminacin por lo que es un indicador de insuficiencia renal y una gran
utilidad como mtodo sencillo de seguimiento de una insuficiencia renal ya

instaurada; la urea se elimina por va renal, siendo filtrada facilmente a nivel
glomerular; una vez filtrada, se reabsorbe en un 40% a nivel de los tbulos
proximales; si falla el rion, no se filtra y se acumula en sangre; un aumento de
urea en sangre, nos indicara una causa => extrarenal (alteracin heptica,
hemorragia digestiva, aumento de urea por catabolismo de protenas, aumento
por exceso proteico en la dieta) o nefroptica (insuficiencia renal aguda
o crnica); las causas de hiperuremia:
insuficiencia
renal
aguda
(glomerulonefritis
neoplasias, clculos renales, hemlisis)
insuficiencia
renal crnica
diabetes, hipertensin arterial)
aguda,
pielonefritis,
(glomerulonefritis crnica,
neoplasias,
Acido urico - es el producto final de la degradacin de las purinas (adenina,

guanina e hipoxantina) procedentes del catabolismo de los cidos nucleicos
(ADN, ARN) por la enzima xantinooxidasa; las purinas proceden de:
- exgena => el consumo de protenas de origen animal
- endgenas => con la renovacin celular; es la mas importante; al combinarse
con un azucar => nucleosidos + fosfato => nucletidos (ADN, ARN, AMPcclico y ATP)
Valor normal en suero = 3,4-7 mg/dl en hombres y 2,4-5,7 mg/dl en mujeres
(20% menos)
Inters clnico - interviene en la renovacion celular; diariamente 60% del AU
es eliminado por la orina, mediante filtrado glomerular; luego es reabsorbido
en los tubulos renales 90% del total; el resto es eliminado con la bilis
(va hepatica) y los jugos pancreaticos y gastrico; los trastornos en su

nivel plasmtico, se manifiestan como hiper o hipo uricemia y nos pueden
indicar una serie de patologas (se puede determinar en sangre y orina):
- hiperuricemia: causas metablicas (aumento de la uricemia y uricuria) =>
por incremento en la sntesis de AU procedente de => la dieta rica en purinas;
lisis
celular
(leucemias);
consumo
de
ATP
(ejercicio
intenso);
trastornos metablicos hereditario (dficit enzimtico); causas renales (uricuria
< uricemia porque se acumula en sangre) => dficit de su secrecin/
insuficiencia renal; inhibicin por competitividad con ciertos metabolitos como
acido lctico y cuerpos cetnicos; consecuencia
de
hiperuricemia =>
problemas a nivel articular (gota aguda/crnica y tofos => deposito de
uratos), clculos renales/ obstruccin renal de los tbulos.
- hipouricemia es causada por dficit enzimtico de xantinooxidasa, hormona
antidiurtica /ADH y fallo en la reabsorcin tubular (no hay reabsorcin o
la secrecin es excesiva); cuando la causa de la hipouricemia es el aumento de
la eliminacin renal, existe riesgo de litiasis renal (uricuria > uricemia); cuando
la causa es por la insuficiente sntesis de AU => ambos nivel de uricuria y
uricemia son bajos;
Amoniaco - es uno de los productos finales del metabolismo de las protenas y

se forma en el intestino por accin de las bacterias sobre las protenas y por
la hidrlisis de la glutamina en el rin; normalmente, el higado elimina la
mayor parte del amoniaco en sangre que fluye por la vena porta y lo convierte
en urea;
valor normal en suero = 80-100 microgramo/dl.
Inters clnico - sirve para ver la funcionalidad del higado => su
metabolismo, la evolucin de una hepatopata y el grado de respuesta al
tratamiento; su aumento en sangre podra afectar seriamente al equilibrio
acido-base y a la funcin cerebral (es toxico para las neuronas); su
nivel plasmtico depende de la ingestin de protenas, el ejercicio fsico y
algunos frmacos.
Creatina - es un compuesto nitrogenado no proteico; se sintetiza en

riones, el intestino delgado, el pncreas y el hgado a partir
los aminocidos metionina, arginina y glicocola; es importante para
metabolismo muscular porque constituye un importante mecanismo
almacenamiento de fosfato de alta energa (fosfocreatina); la mayor parte
los
de
el
de
de
creatina se encuentra a nivel muscular en forma de fosfocreatina y una

pequea parte en el plasma y en los hemates.
Creatinina - es un producto final del metabolismo muscular; es

un anhdrido de la creatina que se forma mediante una reaccin espontanea e
irreversible y su formacin tiene una relacin directa con la masa muscular;
cuando este libre, no se utiliza en el metabolismo del cuerpo, y
funciona nicamente como producto de excrecin de la creatina; valor
normal en suero = 0,5 - 1,1 mg/dl
Inters clnico - sirve como marcador precoz de la funcin renal,
especialmente de la filtracin glomerular; tras pasar por la sangre, se elimina
en su mayora via renal (filtrado glomerular) y una pequea cantidad por las
heces; su nivel plasmtico es bastante constante, de manera que no se
modifica ni con el ejercicio ni con las variaciones del catabolismo, por lo
que cualquier incremento del nivel srico indica problema renal, insuficiencia
renal (suele ser paralelo al aumento de urea), lesin renal, prerrenal,
sistmicas o vasculares del rion u obstruccin; nunca se altera al no ser que
haya alteracin renal.
Aclaramiento de creatinina - se utiliza para determinar la funcin renal,
especialmente la filtracin glomerular; es la velocidad con que la creatinina es
depurada de la sangre por el rion / la velocidad con que el rion pasa la
creatinina de la sangre a la orina en un minuto; la formula:
aclaramiento de creatinina = (mg/dl creatinina - orina) x (volumen de orina /
24h)
(mg/dl creatinina - suero) x (60' x 24h)
Determinaciones que se realizan en suero y en orina para estudiar

la funcin renal => urea/uremia (indicador de insuficiencia renal y su
seguimiento de tratamiento) y creatinina (filtracin glomerular y aclaramiento
de creatinina en orina 24 h); la diferencia entre urea y creatinina como
marcadores sricos de alteracin renal:
1urea
=>
indicar
insuficiencia
renal rpidamente pero
su
aumento tambin depende
de
la
ingesta
proteica,
catabolismo
proteico endgeno, si hay hemorragias digestivas y hepatopatas (se puede ver
alterada por otras causas); creatinina => aunque es mas lento que la urea,
siempre indica insuficiencia renal (mas especifica), siempre que la masa
muscular se mantenga constante; no se modifica ni con el ejercicio ni con
variaciones del catabolismo y no depende de la dieta;
2- urea puede estar alto y la creatinina no en lesiones hepticas (se determina
GOT y GPT);
3- urea => producto de excrecin de amoniaco; creatinina => producto final
del metabolismo muscular;
4- urea se elimina va renal y creatinina se elimina va renal y heces;
Determinaciones que se deben realizar segn la peticin analitica:

a. Perfil hepatico => hemograma, proteinograma, factores de coagulacion,
BQ (urea, amoniaco, urobilingeno, GOT, GPT, GGT, ALP, LDH-5, BB total , LAP,
5-NT); muestra sangre total para hemograma (tubo lila), en plasma para
coagulacion (tubo azul) y en suero (tubo amarillo/rojo) para el resto de las
pruebas; la muestra se extrae en ayunas para hemograma; exento
de hemlisis; procesamiento de inmediato, porque las enzimas pierden
actividad y temperatura mxima 37 para que las enzimas no se
desnaturalizan; BB protegido de la luz y refrigerado, porque es un pigmento.
b. Pre-operatorio => hemograma, pruebas de coagulacion (t.de Quick), PTT,

grupo sanguneo, BQ (glucosa, urea, creatinina, electrolitos (Na+, K+, Cl-);
muestra sangre total para hemograma (tubo lila), en plasma para coagulacion
(tubo azul), en suero para BQ (tubo amarillo); la muestra se extrae en ayunas o
no ingerir alimento graso para no tener plasma lipmico; se rechazan el primer
tubo (por la tromboplastina tisular); no tomar medicacin 2 semanas antes?
c. Estudio de posible IAM o seguimiento del mismo => CK total, CK-MB,

LDH-1/LDH-2, GOT, marcadores precoces (mioglobina y troponina I,T) solo se
piden al principio si no se sabe cuando empez (precoz o tarda); seguimiento
=> determinaciones seriadas los primeros 3 o 4 das con curva de ascenso
y normalizacin tipicas en cada una de las enzimas y protenas en sangre a
diferentes intervalos de tiempo desde la 1a hora hasta incluso 7 das despus;
generalmente se realizan en suero (tubo amarillo); condiciones de urgencia =>
seguimiento 6, 8, 12, 24 horas - 7 das y con protena precoces; muestra no
hemolizada y procesado inmediato;
d. Perfil renal => muestra de orina en recipiente estril: la orina 1 hora de

la maana en ayunas para la determinacin de: acetonuria, glucosuria,
proteinuria, bilirrubinuria, urobilinogeno, micro albuminemia; muestra en suero
(tubo amarillo) para la determinacin de: urea, urato, creatinina, Na+, K+ Cl-,
glucosa; el aclaramiento de creatinina no se hace de rutina; no realizar
ejercicio intenso.
e. Perfil lipidico => TG /triglicridos, colesterol, HDL, LDL; muestra en suero

(tubo amarillo) en ayunas, dieta habitual 2-3 semanas antes, no realizar
ejercicio fsico intenso 3 horas antes, suspender medicacin??? 1 mes antes y
retrasar en caso de enfermedad; realizar colesterol y TG antes de 48 horas;
para la lipoprotenas => solucin conservante y antes de 3-4 das (muestras

refrigeradas); puede salir suero hiperlipdico (diluir y repetir prueba).
Estudio del lquido seminal

El
semen
es
una solucin compleja,
compuesta bsicamente por
espermatozoides suspendidos en un liquido llamado plasma seminal que
proporciona un medio nutritivo y volumen adecuado para llevar los
espermatozoides hacia el moco cervical; es una mezcla de secreciones
producidas
por
los testculos y
las glndulas => vesculas seminales, prstata,
epiddimos,
conductos
deferentes, glndulas bulbouretrales
(Cowper)
y glndulas uretrales
(Littr); formacin del lquido seminal => en los testculos se producen
espermatozoides y hormonas sexuales masculinas => pasan al epiddimo (se
maduran y se almacenan => eyaculados o reabsorbidos por el organismo);
eyaculacin => conducto deferente + fluidos de vesculas seminales
y prstata;
- fraccin pre-eyaculatoria (lubricante clara) de las glndulas uretrales y
bulbouretrales
- fraccin previa de la prstata (cido ctrico y fosfatasa cida)
- fraccin principal de testculo - epiddimo - deferente => espermatozoides
- fraccin final de las vesculas seminales (coloide) => fructosa
Examen del liquido seminal

1. Datos del paciente => cdigo de barras, etiqueta
2. Condiciones del examen => hora de eyaculacin, hora de examen,
tiempo de transporte, mtodo de obtencin abstinencia sexual, ultimo proceso
febril.
3. Examen fsico (macroscpico)
- Volumen normal (tras 3-5 das de continencia): 2-6 ml
- Tiempo de liquacion: debe licuarse totalmente a los 15 minutos
- Color: blanquecino
- pH: 7-8,1
- Viscosidad normal: cae gota-a gota
- Filancia: filamento menor o igual a 1cm
4. Examen microscpico
- Examen en directo - observacin directa en fresco de una gota en porta =>
si hay o no cristales de fosfato de espermina (cristalizacin), leucocitos,
espermatozoos, hemates, aglutinacion, espermiofagia (fagocitados por
leucocitos)
- Estudio de la motilidad - es necesario que tengan una motilidad activa
para penetrar en el moco cervical y emigren hacia el ovulo; se realiza mediante
la tcnica de observacin directa en fresco => se registra el porcentaje
total de espermatozoides que presentan movilidad y inmviles y clasificando
los mviles segn presenten movilidad activa (avanzan) o pasiva (se mueven
pero no avanzan) o con indice de vitalidad (test de Williams Pollak) en
fresco o en frotis teido => los resultados se expresan como porcentaje de
espermatozoides teidos y se indica el indice de vitalidad que es la inversa del
numero de espermatozoides teidos (si estos son 40%, el indice de vitalidad es
de 60%)
- Recuento normal 20-250 millones/ml (en cmara de Neubauer);
Hiperespermia > 250 millones/ml; Oligospermia entre 1-20 millones/ml;
Azoospermia => ausencia de espermatozoides maduros (presencia
de clulas de espermiognesis/ inmaduros); Aspermia => ausencia de
espermatozoides y de clulas de espermiognesis.
- Motilidad normal 60-90% movilidad (antes de 2 horas);
Astenospermia => <50% de formas mviles a las 2 horas; Necrospermia
=>
todas
las
formas
carecen
de
movilidad; determinacin de
las categoras a,b,c,d (ha de haber un 50% entre a y b para ser frtil).
- Indice de vitalidad => estudio de necrospermia (cuantos hay de vivos y

muertos); los espermatozoides vivos no se tien con eosina => la membrana
no es permeable; valor normal => coloracin con eosina <40% (vivos al
60%)
- Formula espermtica => % de espermatozoides normales y anormales
(anomalas de anatoma cabeza,
cuello
y
cola);
presencia
de clulas de espermiognesis y teratognicas (tumoracin en su maduracin),
de descamacin y cualquier otro tipo; informe de estudio morfolgico.
5. Examen Bioqumico
- Estudio prstata: Zinc => disminuido en inflamaciones (parmetro de la
actividad bacteriana); Acido ctrico => transporte calcio (afecta a la
motricidad de los espermatozoides); es un parmetro representativo del
funcionamiento prosttico;
disminuido
en
insuficiencias
prostticas,
inflamaciones
y
neoplasias
(valores
normales
250-800
mg/dl);
Fosfatasa cida => aumentada en tumores y PSA (marcador tumor) UI/ml
- Estudio vesculas seminales: Fructosa => valores normales 160-500
mg/dl; disminuida en trastornos funcionales de las vesculas seminales
o dficit de testosterona.
- Estudio epididimo: Carnitina => necesaria en la adquisicin de movilidad
del espermatozoide; disminuida en problemas de baja motilidad.
Estudio del lquido cefalorraqudeo

El liquido cefalorraquideo (LCR) - es un liquido transparente e incoloro en el
espacio subaracnoideo (entre la membrana piamadre y aracnoides de las
meninges) que se forma por filtracin de sangre a traves de los capilares
coroideos; funcin =>(1)
protector,
amortiguador
del encfalo y mdula espinal; (2) transferencia de sustancias entre la sangre y
los tejidos nerviosos (el medio extra-celular de las neuronas) semipermeable;
su examen sirve para =>(1) determinar infecciones, hemorragias cerebrales,
aumento de la presin intra-craneal y otras afecciones del SNC; (2) diagnostico
de
cefaleas,
entumecimiento
de
las
extremidades
y
otros
sintomas neurolgicos;
Toma de muestras - por puncin lumbar (4 espacio lumbar) se recoge 2,5-5

ml - depende de la presin repartidos en 3 tubos (bioqumica en tubo con
fluoruro sdico para evitar gluclisis, citologa en un tubo con heparina y
microbiologia en un tubo estril)
Examen fsico - estudio de caracteres organolpticos:
- Aspecto normal: limpio, transparente y cristalino; anormal => turbio
(procesos infecciosos, presencia de microorganismos, de leucocitos),
empaado, opalescente o sanguinolento (extraccin traumatica => tras
la puncin el 1er tubo sera el nico sanguinolento; patologa => si todos los
tubos son sanguinolentos)
- Color normal: incoloro / transparente; anormal => rojizo (presencia
de hemates en
hemorragia
reciente, puncin traumtica);
amarillo
(xantocrmico por degradacin de la hemoglobina, hemorragia antigua con
bilirrubina, oxihemoglobina, ictericia, pus).
- Volumen: 90-200 ml (adultos); 10-60 ml (recin nacidos)
- Presin: 70-200 mm agua en adultos; 50-100 mm agua en nios
- Densidad: 1,005-1,008
- pH: 7,4-7,5
Examen citolgico - para ver si hay infeccin
- Recuento celular total normal: <5 clulas/micro-litros (linfocitos y
monocitos); >5 puede haber meningitis; patolgico => pleocitosis (moderada,
acentuada,
extrema): patologa del
SNC,
generalmente
enfermedades
inflamatorias o infecciosas.
Recuento
diferencial; tcnica => concentracin celular, tincin, observacin microscpi
ca (neutrfilos, linfocitos, eosinfilos, clulas plasmaticas con linfocitos,
histiocitos malignos con linfocitos en esclerosis multiple, macrfagos en infarto
craneales)
Examen qumico - determinaciones de metabolitos y pH
- Protenas normal: 0,2-0,4 g/l (importante determinacin de albumina e IgG
que se sintetiza en SNC para evaluar la integridad de la barrera sangre-LCR);
los valores aumentados en procesos que afectan al SNC como inflamaciones,
infecciones, procesos tumorales, abscesos cerebrales; es muy importante en el
diagnostico de esclerosis multiple mediante electroforesis del LCR.
- Glucosa normal: 50-80 mg/dl (mitad del nivel sanguneo); variacin de
la glucorraquia => disminuida en hipoglucemia y aumentada en diabetes
mellitus;
la determinacin de
glucosa
es
de
ayuda
para
demostrar algn impedimiento en el transporte de glucosa desde el plasma
hacia el LCR o un uso aumentado de la glucosa en SNC debido a la presencia
de leucocitos o grmenes.
- Acido lctico es aumentado en meningitis bacterianas y en hipoxia del tejido
del SNC y no se modifica en las meningitis vricas.
- Lactato deshidrogenasa (LDH) se utiliza pra el diagnostico diferencial de

la meningitis bacteriana y vrica.
- Creatin-kinasa (CK) aumenta en mltiples trastornos del SNC; > 4 U/L
=> lesin cerebral isqumica.
- Adenosindesaminasa (ADA) su aumento sirve para el diagnostico de la
meningitis tuberculosa >9 U/L
- Aspartato aminotransferasa
hemorragias y tumores.
(AST/GOT)
aumenta
en
meningitis,
- Cloruros se disminuye en meningitis tuberculosas y purulentas.
Examen inmunolgico / serolgico - deteccin de Ags y Acs

- Anticuerpos anti VIH
- Acs anti-microbianos (segn la patologa que se sospecha)
- Acs anti treponema pallidum (FTA-ABS) sfilis => afecta al SNC
Examen
microbiolgico
la etiologa infecciosa
- demostracin del
germen
causal
de
- Cultivo y antibiograma
- Tincin en porta si fuera necesario
Tipos de Meningitis => tuberculosa, bacteriana, vrica, sifiltica, mictica,

parasitaria, purulenta; meningitis bacteriana => glucosa disminuida,
acido lctico aumentada , LDH aumentada; meningitis tuberculosa => ADA
(adenosindesaminasa) aumentada, cloruro disminuida, glucosa disminuida;
Estudio del liquido sinovial

Liquido sinovial - se encuentra en las articulaciones de las extremidades
(cavidad articular); se deriva del plasma sanguneo que se filtra a traves de
los capilares sinoviales difundiendo hasta la cavidad articular, donde se aaden
algunas sustancias sintetizadas en la membrana sinovial como protenas y

acido
hialurnico
(macromolcula compleja
que
le
da
viscosidad); funcin => lubricar las superficies de rozamiento; aportar
nutrientes al cartlago articular; su estudio es para el diagnostico de
enfermedades articulares (artritis/ inflamacin de las articulaciones y
artrosis/ enfermedad degenerativa articular); su anlisis permite realizar un
diagnostico preciso en la mayora de las artritis infecciosas agudas y en las
artropatas inducidas por cristales.
Clasificacin de artritis => infecciosas, metablicas (gota/cristales de urato;

pseudogota/
condrocalcinosis/
cristales
de
pirofosfato
de
calcio), mecnicas (traumatismos,

tumores),
relacionadas
con
otras
enfermedades (alergia, hemofilia), idiopticas (reumatoide), lupus eritematoso.
Toma de muestras - mediante puncin articular (artrocentesis) estando el

paciente en ayunas (si se va a determinar la glucosa); se extrae 2-5 ml.
Examen fsico
- Aspecto normal => amarillo plido trasparente; anormal => lechoso
(artritis, lupus eritematoso) purulento (artritis infecciosa), verdoso (artritis por
haemophilus, sinovitis aguda por gota o pseudogota/ condrocalcinosis),
amarillo
intenso
(proceso
inflamatorios),
rojo
(artritis traumtica,
tumores, artropatas).
- Viscosidad y filancia: muy viscoso, pegajoso al tacto (acido hialurnico disminuida en inflamaciones/ infecciones); se mantiene elevada en
derrames traumticos y artrosis; filamento de unos 3-6 cm.
Examen citolgico
- Recuento celular total normal 10-200 clulas/micro-litro (leucocitos);
anormal=> osteoartritis, traumatismos, gota, condrocalcinosis, artritis
reumatoide, artritis infecciosa, etc.
- Recuento diferencial; tcnica => frotis, tincin, estudio morfologa celular
(clulas AR, clulas LE, clulas de Reiter)
Examen de cristales - en artropatas
Urato monosdico (gota)

Pirofosfato clcico (condrocalcinosis)
Hidroxiapatita (artritis)
Colesterol (artritis reumatoide)
Examen qumico
- Protenas normal 15-30 g/l (albumina 55-70%); aumentadas en procesos
articulares en los que esta afectada la membrana sinovial (trasvasa
de protenas).
- Glucosa normal: similar a la glucemia; disminuida en procesos inflamatorios
e infecciones (las bacterias la consumen); si es inferior a la mitad de la
simultanea en suero, => infeccin bacteriana
- Lactato => indicador de inflamacin (cuando es >30 mg/dl)
Complemento
=>
niveles
reducidos
con
respecto
a
los
niveles sricos simultneos, es indicativo de artritis reumatoide y/o lupus
eritematoso.
Examen microbiolgico
- Sedimento
- Cultivo y antibiograma
Examen inmunolgico
- Complemento
Estudio del lquido pleural, pericrdico y

peritoneal
Lquido pleural, pericrdico y peritoneal - son fluidos serosos derivados
del suero y secretados por las membranas con funcin de proteger a
los rganos de la friccin; liquido pleural se encuentra entre las capas pleura
visceral y pleura parietal (membranas que revisten los pulmones);
liquido pericrdico se encuentra entre la capa parietal y la capa visceral que
reviste el exterior de corazn liquido peritoneal se encuentra entre las
capas peritoneo parietal y peritoneo visceral; efusin serosa (derrame) =>
se produce cuando hay un aumento anormal de la cantidad de liquido, causado
por
el
dao
en
los
mecanismos fisiolgicos (desequilibrio)
de
la formacin o absorcin del fluido; tipos:
- Trasudados: fluidos no inflamatorios que se producen por alteracin de
la presin osmtica del plasma sanguneo o la presin hidrosttica capilar (no
altera la membrana)
- Exudados: fluidos inflamatorios producidos como consecuencia de
procesos patolgicos (lesionan la membrana) con inflamacin o irritacin de la
membrana serosa y aumento de la permeabilidad capilar.
- Derrame quiloso: fluido producido por el escape de quilo desde el
conducto torcico como consecuencia de lesin u obstruccin linftica (trauma,
tumor o tuberculosis)
Anlisis de los derrames serosos
- Fsico => observacin del aspecto
- Citolgico => recuento de hemates, leucocitos y recuento diferencial
- Bioqumico => protenas totales, ADA
- Microbiolgico => cultivos
Examen qumico
- Liquido pleural => determinacin de protenas para la diferenciacin entre
exudado y trasudado (< de 3 g/dl en trasudado; > de 3 g/dl en exudado);
adenosindesaminasa (ADA) ayuda para el diagnostico de la pleuritis
tuberculosa; la concentracin de glucosa > a 0,5 con la srica (< de 60 mg/dl
en exudado); un nivel alto de triglicridos indica la presencia de quilomicrones
(quilotrax
por
traumatismo
o obstruccin linfomatosa);
las
amilasas estn aumentadas en las pancreatitis; pH < a 7,3 indican una
posible evolucin del derrame hacia empiema (acumulacin de pus en la
cavidad pleural causado por una infeccin en el pulmn) y si < de 6 indica
rotura esofgica.
- Liquido asctico => determinacin de protenas, glucosa, fosfatasa alcalina
y amoniaco.
- Liquido pericrdico => determinacin de la glucosa.
Drogas de abuso
Droga - toda sustancia que introducida en un organismo vivo puede modificar
una o varias de sus funciones, es susceptible de crear dependencia, y puede a
la vez provocar tolerancia (incluido => nicotina, alcohol y cafena); droga de
abuso => sustancias administradas en un organismo vivo, y capaces de
producir cambios en el estado de percepcin, comportamiento, creando habito
de consumo y presentando una sintomatologa psquica y/o de dependencia;
Analtica de dogas de abuso - el anlisis inicial (screening o de presuncin)

y anlisis de confirmacin;
- La orina es muestra de eleccin por razones => contiene
una concentracin superior (solubilidad elevada) y durante mas tiempo que
otras muestras; la facilidad de su obtencin con procedimiento no invasivo.
- El suero o plasma y sangre total son tiles para la deteccin del consumo
reciente, anlisis toxicologia forense y analtica post-morten.
- En la analtica post-morten se emplean extractos tisulares
- En el consumo de drogas de abuso en el ultimo trimestre del embarazo, se
emplea el meconio.
- La analtica de screening
(presencia/ausencia)
presentan
informe
cualitativo
de
resultados
(plantas de coca)
Tiempo de deteccin de drogas en orina
- Anfetaminas: 2-4 das o superior
- Barbitricos: 1-21 das o superior
- Benzodiazepinas: 3 das o superior
- Cannabinoides: 1-36 das o superior
- Cocaina: hasta 72 horas
- Etanol: depende del peso, la edad salud y el metabolismo individual
- Opiceos: 2-5 das o superior
Screening /presuncin - son pruebas para eliminar las muestras con
resultado negativo y reducir al mximo el numero de anlisis de segundo nivel
(confirmacin); no precisan personal especializado al ser fciles de realizar;
para ser cuantitativa, comparar con patrones de calibracin; los metodos de
screening son adecuados para => verificar el consumo de estupefacientes,
evaluar el grado de consumo/abuso y identificar sustancias consumidas;
las tcnicas => se basan en la inmunoqumica (RIA/ radioinmunoensayo, EIA/
enzimoinmunoensayo, FPIA/ inmunoensayo de polarizacin fluorescente) y
cromatografia en capa fina /TLC); test inmunolgico rpido se realiza en
un anlisis de screening cualitativo.
(cannabis sativa)
FIA - Ac anti droga en pocillo, se introducen los Ag (muestra) y trazador (Ag
comercial marcado con fluorforos/florescencia); compiten por el Ac; si la
fluorescencia es elevada habr poca droga (el resto de fluorescencia se elimina
con el lavado?); cuanto mas droga => menos fluorescencia.
EIA - Ac antidroga en pocillo, se introducen los Ag (muestra) y trazador (Ag
comercial marcado con una enzima); compiten por el Ac; si hay mucha droga,
quedara mucha enzima libre que reaccionara con sustrato y dara el producto
coloreado (mucho color); cuanto mas droga => mas enzima => mas color.
RIA - Ac antidroga en pocillo con Ag (muestra) y trazador marcado con isotopo
radioactivo; compiten por el Ac; se lava (el resto de radiactividad se elimina
con el lavado); cuanto mas droga => menos radiactividad.
TLC
- separacin de
diferentes
drogas segn sus caractersticas fisico
- qumicas; para la identificacin de la droga se emplean diferentes estndares.
Metodos de confirmacin - se utiliza tcnica cromatografia de gases (GC),

espectrometra
de
masas
(MS)
y
cromatografia
liquida
de
elevada resolucin (HPLC).
(la planta opio / adormidera)

Principales drogas de abuso
- Cannabinoides => cannabis sativa, THC
- Depresoras => barbitricos, benzodiazepinas, alcohol
- Alucingenas => fenciclidina, mescalina, LSD
- Opiceos => herona, codena, dihidrocodeina, hidrocodona, hidromorfona,
oxicodona, oximorfona, metadona, propofixeno, antagonistas Opiceos
- Estimulantes => anfetaminas, cocana
- Otras drogas => tabaco, sustancias voltiles
Marcadores tumorales (MT)

Los marcadores tumorales (MT) - macromolculas orgnicas que se
encuentran en el torrente circulatorio y/o en diversos tejidos o fluidos y cuya
presencia o variacin en su concentracin, presenta cierta relacin con
la aparicin y/o desarrollo de algunos tumores malignos; se encuentra en el
espacio intracelular o en la superficie de las clulas tumorales, tambin pueden
proceder de otras clulas donde ha sido inducida su produccin; tipos de
MT => antgenos, glucoprotenas, enzimas, hormonas, protenas sricas, otras
(zinc, cobre, etc.)
Estudio de las heces

Las heces - constituidas fundamentalmente por agua, restos alimenticios no
digeridos, productos de la digestin y gran cantidad de bacterias;
su anlisis es til para orientar un diagnostico;
Patologas segn los hallazgos en las heces

- Deteccin de sangre y/o moco => patologas intestinales (colitis ulcerosa,
carcinoma de colon, plipos hemorroides)
- Deteccin de
restos
de
principios
inmediatos
mal
digeridos
=> patologas digestivas (sndrome de malabsorcin esteatorrea, amilorrea,
creatorrea)
- Deteccin del germen causal => infecciones intestinales (diarrea)
- Deteccin de huevos, quistes, parsitos => parasitosis intestinales (diarreas,
anemias)
Anlisis a realizar en una muestra de heces
- Examen fsico-qumico => caracteres organolpticos, pH, sangre
Estudio
de
la digestin =>
microscpico (montaje hmedo directo, tinciones)
- Estudio microbiolgico coprocultivo
cultivos, observacin macroscpica
pruebas bioqumicas e inmunolgicas
examen macroscpico y
=>
siembras
y microscpica,
de
tinciones,
- Estudio parasitolgico => examen macroscpico y microscpico (montaje

directo, tinciones, tcnicas de concentracin)
Sndrome de malabsorcin
- Malabsorcin pancreatgena => esteatorrea (presencia anormal de grasa en
las heces), creatorrea (presencia anormal de protenas), amilorrea (presencia
anormal de hidratos de carbono/almidn).
- Malabsorcin hepatgena => esteatorrea
- Malabsorcin entergena => en general, siendo mas importante la
esteatorrea
Examen fsico-qumico de las heces
Caracteres organolpticos patolgicos

- Moco: es patolgico excepto en nios recin nacidos; masa gelatinosa
formando grumos de forma irregular y consistencia viscosa; aspecto
filamentoso o formando membranas; es blanquecino, mas o menos
transparente; las partculas de moco de gran tamao proceden de
la porcin inferior del intestino grueso; el moco finamente dividido y mezclado
con
las
heces,
procede
de
las
porciones
mas
altas;
indica
=> inflamacin o irritacin de la mucosa intestinal, especialmente del colon en
neoplasias, colitis ulcerosa, disentera bacilar, etc.
- Pus: macroscpicamente como una masa blanquecina normalmente asociada

con sangre y /o restos de mucosa; los leucocitos se observa microscpicamente
en una tincin; aparecen en => colitis ulcerosa, disentera bacilar y pacientes
con abscesos o fistulas anales.
- Sangre: macroscpicamente como heces rojas o melenas (heces
alquitranadas) o presentarse como "sangre oculta" cuando se encuentra en
menor cantidad y esta digerida; cuando es roja procede de los tramos finales
del aparato digestivo; la sangre oscura esta digerida y procede de las partes
altas del aparato digestivo; se encuentra en => tumores, ulceras, colitis
ulcerosa, fistulas anales, hemorroides.
Determinacin de pH - valor normal 6,8-7,2 (depende de la alimentacin);

las protenas alcalinizan las heces (producen amonio y urea) y los hidratos de
carbono las acidifican (fermentacin); importante:
- reaccin cida =>
la fermentacin
- reaccin alcalina
la putrefaccin
indica trastornos digestivos

=>
indica
trastornos
con
digestivos
aumento
con
aumento
de
de
Investigacin de sangre oculta - la tcnica mas utilizada se basan en

la investigacin de peroxidasas como indicadores de la presencia de Hb en las
heces;
HEMDETECT
IMMO
=>
prueba inmunolgica rapida
para
la deteccin de sangre oculta en heces; es una prueba inmunocromtica
especifica de deteccin de Hb humana.
Estudio del equilibrio hidroelectroltico,

acido bsico y gaseoso del organismo
humano
Equilibrio hidro-electroltico
Neutralidad elctrica - un estado en el cual hay una igualdad entre el total
de aniones y cationes en los compartimentos liquidos corporales; los
electrolitos se absorben mediante un mecanismo de:
- trasporte activo (con gasto energtico);
- difusin pasiva (debido a la diferencia de gradiente electro-qumico);

- difusin facilitada (acompaando al agua en su respuesta a una diferencia del
gradiente osmotico/ arrastre por el solvente)
Osmolaridad - el numero de partculas de soluto, por unidad de volumen, en
una disolucion expresada en miliosmoles de soluto/Litro de solucion (mOsm/L);
el agua difunde en general, de una zona de menor concentracin osmolar a
una de mayor concentracin, para igualar osmolaridades;
Mecanismos de concentracin y aumento de flujo urinario - en

condiciones fisiolgicas de normalidad el rion regula la concentracin de
solutos y mantiene la osmolaridad de los lquidos organicos dentro de los
limites estrictos:
(1) Si el organismo necesita retener agua => los mecanismos
de reabsorcin entran en funcionamiento => aumenta la osmolaridad de la
orina (mas concentrada - menos agua)
(2) Si hay un exceso de agua en el organismo => el flujo urinario aumenta =>
disminuye la osmolaridad (menos concentrada - mas agua)
Mecanismo de absorcin y secrecin de agua y electrolitos mediados

por hormonas (vasopresina /ADH) y neurotransmisores:
(1) Un aumento de la osmolaridad del suero => estimula la secrecin de la
hormona antidiurtica (ADH) que acta sobre los tbulos renales => resorcin
de agua aumenta => la orina se concentra
(2) Un descenso de la osmolaridad del suero => inhibe (incluso llega a
suprimir) la liberacin de ADH => resorcin de agua disminuye => la orina se
diluye (disminuye la osmolaridad de la orina)
Evaluacin del equilibrio hidro-electroltico en el organismo (evaluar la
capacidad del rion como regulador) => determinar cualitativa y
cuantitativamente los solutos presentes en la orina:
- calculando el peso especifico (densidad) de la muestra
- medir la osmolaridad urinaria (normalmente coincide con la el peso
especifico)
- determinar los electrolitos presente
Con el resultado de las pruebas, tambin se consigue determinar:
- el estado de hidratacin
- la funcionalidad de la hormona antidiurtica (ADH)
- la gravedad de un estado de coma en un paciente (actividad hipotlamo/SNC)
Estudio de los electrolitos orgnicos mas importantes - el suero/plasma
es el fluido biolgico de eleccin a la hora de evaluar la composicin en
aniones y cationes del organismo.
Sodio (Na+) - su metabolismo tiene estrecha relacin con el de agua; el

desplazamiento del sodio es paralela a la del cloro; es el principal catin
extracelular que rige el volumen del compartimento; Natremia normal =>
135-148 milimoles/L (mEq/L); sodio en orina normal => 60-180 milimoles/L
(mEq/L); su concentracin es controlada por los riones y SNC (sistema
endocrino).
Hipernatremia - estado hipertnico; en suero superior a 150 mEq/L; causas
=>
aumento
del
aporte, disminucin de
la eliminacin renal, alteracin endocrina, sudoracin intensa,
diarrea, frmacos diurticos.
Hiponatremia - estado hipotnico; dficit del aporte, polidipsia, aumento
perdidas
gastrointestinales,
renales, alteracin endocrina,
quemaduras, sudoracin excesiva; clasificacin de
hiponatremia segn la determinacin volemica
=>
isovolmicas
(insuficiencia renal), hipovolmicas (vmitos o diarreas), hipervolmicas
(sndrome nefrtico).
Filtracin - transporte activo (consume energa)
Excrecin - la mayora por va renal
Reabsorcin - regulado por Aldosterona (umbral renal = 110-130 mEq/L)
Funciones biolgicas - conserva la presin osmtica (la integridad celular),

mantener el equilibrio acido-base (pH), participa en transmisin de impulsos
nerviosos
Mecanismo de regulacin - flujo de sangre (mas flujo => mas excrecin Na+
y Cl-); anhidrasa carbnica (enzima con actividad diurtica); aldosterona
(acta en reabsorcin de Na+); otros esteroides/ estrgenos y progesterona
(retencin de agua y Na+ durante ciclo menstrual); renina (origina retencin de
agua y sal); ADH/ hormona antidiurtica o AVP/ arginina vasopresina (regula
la reabsorcin/ retencin de agua).
Determinacin - puede realizarse en suero o en plasma; no utilizar
heparina sdica como anti-coagulante; procesar las muestras antes de 3 horas
(evitar el desplazamientos de ion entre el interior y el exterior);
anotar frmacos que pueden aumentar/disminuir Na+ en sangre; metodos
=> absorcin atmica/ fotometra de llama y potenciometra.
Potasio (K+) - es un catin intracelular; se transporta mediante el transporte

activo (con gasto de energa celular); una ingestin diaria insuficiente puede
ocasionar una grave reduccin de la sntesis proteica; valores normales de
Kalemia => 3,5-5 milimoles/L (mEq/L); concentracin urinaria (potasuria)
normal => 1,5-3,5 g/24 horas (<90mEq/dia); su nivel plasmtico esta regulado
por su excrecin renal.
Hiperpotasemia /hiperkalemia => valores > 5,5 mEq/L; causas =>
aumento del aporte/ alimentos proteicos (destruccin celular, perfusin de
K+); disminucin de
la excrecin renal;
acidosis metablica (extrado de
las clulas); valores >6,5 mEq/L puede causar problemas cardacos incluso la
muerte por paro cardaco.
Hipopotasemia/hipokalemia => < 3,5 mEq/L; valores < 2,5 mEq/L puede
causar problemas cardacos incluso la muerte; causas => disminucin del
aporte, perdidas gastro-intestinales, alteraciones endocrinas, alcalosis,
insulinoterapia, quemaduras graves.
Excrecin - 80-90% del K+ de las clulas es filtrado y excretado por va renal;
no existe un umbral renal para el K+ => se sigue eliminando aunque hay
carencia de K+.
Funciones biolgicas - conduccin nerviosa; contraccin muscular; regulaci
n de la presin osmtica; equilibrio acido-bsico; regulacin junto con Ca2+2 y
Mg+2 del gasto cardaco (velocidad y fuerza con que se contrae el corazn).
Determinacin - til para el diagnostico de alteraciones => del equilibrio
acido-base; del equilibrio hidro-electroltico; se utiliza una muestra de sangre
venosa
sin
aplicar
torniquete;
=> turbidimtricos, absorcin atmica, fotometra de llama.
metodos
Metabolismo fosfoclcico - se encuentra en el hueso 99% del calcio, 81%

del fosfato (P) y 65% del magnesio; las cifras de fosfato siempre son evaluadas
con relacin a las de calcio; son cationes extracelulares que ejerce importantes
funciones orgnicas => tampones acido-base, cofactores de enzimas, factores
de la coagulacion, etc.
Regulacin hormonal de calcio y fsforo
(1) Paratohormona/ paratiroidea (PTH) - sintetizada y secretada por
las glndulas paratiroides;
se
regula
por
la concentracin de
Ca+2 plasmtico (feedback negativo Ca+2 alta => PTH baja; nivel Ca+2 baja
=>
PTH
alta); funcin =>
mantenimiento
de
los
niveles
de
calcio plasmtico (reabsorcin /subir el nivel de Ca+2); formacin de tejido
oseo nuevo.
(2) Calcitonina/ tirocalcitonina - producida el el tiroides; su secrecin esta
regulada por el nivel de fosfo-calcio plasmtico total (hipercalcemia =>
su secrecin alta para bajar el nivel de Ca+2; hipocalcemia => inhibe
su secrecin); funcin => es la contraria de PTH (inhibe la reabsorcin de
calcio y facilita el deposito de calcio nuevo (hipocalcemia); ejerce su accin a
nivel oseo.
(3) Calcitriol - es la forma activa de la vitamina D3; necesita los rayos
ultravioleta sobre la piel para sintetizarse; su sntesis es completada en el
hgado y rion; funcin => incrementa los niveles de calcio (accin paralela
y sinergia con la PTH); se regula => mecanismo feedback (cuando hay
hipocalcemia, hipoparatiroidismo, hipofosfatemia => la sntesis de vitamina D3
es alta).
Calcio (Ca2+) - de todo el calcio plasmtico, calcio libre es la fraccin ionica

(fisiolgicamente activa); se encuentra en el esqueleto oseo y los dientes 98%;
en el plasma 2% => calcio inico activo 46%, calcio unido a las protenas 40%
(unido a la albumina 80% y a las globulinas 20%) y formando complejos
solubles de bicarbonato, citrato, fosfato y sulfato 14%; Calcemia normal =>
8,5-10,5 mg/dL (2,1-2,6 milimoles/L); nivel Ca+2 esta influenciada por el
pH: acidosis => favorece la disociacin => aumenta Ca+2; al contrario,
alcalosis => dificulta la disociacin => disminuido Ca+2; calciuria normal
50-200 mg/24 horas;
Hipercalcemia - > 10,5 mg/dL (hipercalcemia grave > 13,5 mg/dL); causas
=> aporte elevado, tumoral, alteracin del sistema endocrino, secundaria a un
hiperparatiroidismo.
Hipocalcemia - causado por
secundaria a hiperfosfatemia.
Aumento
de
Ca2+
primario; diurticos tiacidicos
hipercalcemia).
aporte
disminuido, alteracin endocrino,
causado
por
hipoparatiroidismo
(impide la excrecin urinaria de calcio =>
Disminucin de Ca2+ - causado por hiperparatiroidismo primario; hormona

paratiroidea ectpica (productora de tumores); ingestin excesiva de vitamina
D, diversas malignidades.
Hipocalciuria - se produce en raquitismo
Hiper-calciuria - se produce en hiperparatiroidismo, hipertiroidismo,mieloma
multiple.
Regulacin - PTH eleva los niveles de calcio al recibir el estimulo del calcitriol;
Calcitriol eleva los niveles de calcio; Calcitonina disminuye los niveles de
calcio; Estrgenos aumenta
los depsitos de
calcio
en
los
huesos; Andrgenos estimula la corteza suprarrenal y puede ocasionar
hipocalcemia y descalcificacin de los huesos.
Funciones biolgicas constituyente
fundamental
del
oseo; regulacin hormonal (paratiroides); coagulacion sangunea.
esqueleto
Metodos analiticos - utilidad: medir la actividad de la PTH; valorar la

funcionalidad del metabolismo del calcio; evaluar determinadas enfermedades
malignas; tcnica => potenciometro.
Fsforo (P) - 85% de fsforo orgnico forma parte de la matriz osea; 15% se
encuentra en el plasma => unido a protenas (12%), como H2PO4-/fosfato
dicido
(10%),
en
forma
de
HPO4-2/fosfato
monocido
y
NaHPO4/ hidrgeno fosfato de sodio (75%); valores normales de fosfatemia
en nios 4-6,5 mg/dL (2,3-3,8 mEq/L) y en adultos 3-5 mg/dL (1,78-2,9
mEq/L); las concentraciones plasmticas de fosfato varan en funcin =>
pH;
el
momento
de
dia
(ritmo
circadiano
noche
mas
bajo);
aspectos fisiolgicos (disminuido en el embarazo); concentracin urinaria
normal (fosfaturia) => 0,5-3g/24h;
Hiperfosfatemia
causas
proteicos), alteracin endocrina,
=>
aporte
aumento
de
elevado
(alimentos
procesos catabolismos,
insuficiencia renal aguda o crnica, frmacos; nivel > 9 mg/dL => disminuye el
calcio podra causar arritmias, contracciones musculares.
Hipofosfatemia - causas => alcoholismo crnico, disminucin del aporte,
trastornos equilibrio electroltico (hipercalcemia), alteraciones renales (elevada
perdida), alteraciones endocrinas; valores < a 1mg/dL puede causar
alteraciones en la musculatura esqueltica respiratoria => insuficiencia
respiratoria.
Absorcin - a nivel intestinal mediante un mecanismo de transporte, regulado
por la vitamina D.
Excrecin - va urinaria por la accin de la PTH.
Funciones biologicas - forma parte de la matriz osea y tejido dentario, tejido
nervioso, protenas celulares, membrana celular; equilibrio acido-base (el
sistema HPO4-2 / H2PO4- en el plasma acta como tampn interviene en
la contraccin muscular; participa en los mecanismos de absorcin y
metabolismo de los principios inmediatos.
Magnesio (Mg2+) - se encuentra en el hueso 65-70%; su estudio tiene escaso

valor clnico; valores normales de magnesemia => 1,8-2,9 mg/dl (1,5-2,5
mEq/Litro); todos los alimentos naturales (leche y legumbres) son ricos en Mg;
es difcil tener un dficit en la dieta; una dieta pobre en potasio o calcio,
dificulta el proceso de absorcin del Mg.
Funcin biolgicas => muy relacionadas con las funciones de calcio en el
organismo (mantener el nivel calcio intracelular; equilibrio neuromuscular);
participa
en
procesos
de
transferencia energtica (cofactor
en
sistemas enzimticos ATP-asa); es indispensable para metabolismo de
carbohidratos, sntesis de protenas, sntesis de cidos nucleicos.
Hipermagnesemia => valores > 3,5 mEq/L
Estudio del equilibrio cido-bsico

cido - sustancia que pueda dar un protn a otra (dador de protones) y
aceptor de un par electrnico
Base - sustancia que pueda aceptar protones de otra (aceptor de protones) y
dador de un par electrnico;
PH sanguineo normal (7,35-7,45) se encuentra en el lado alcalino de

neutralidad;
Tampn (amortiguador) - una mezcla de un cido y su base conjugado
con funcin fundamental => la de resistir los cambios de pH;
Equilibrio acido-basico - aquella situacin de equilibrio, establecido en el
balance entre sustancias de carcter acido y de carcter bsico de la sangre,
como consecuencia de la interrelacin entre los sistemas respiratorio
y metablico; alteracin respiratoria
=>
la concentracin de
CO2
o
cido carbnico constituye el cambio primario; alteracin metabolica =>
la alteracin de la concentracin de bicarbonato (HCO3-).
Regulacin del equilibrio acido-basico - evitar las variaciones en el pH es
la tarea de los tampones (sistemas amortiguadores) presentes en el
organismo, capaces de captar o liberar protones (H+) como respuesta a os
cambios de acidez de los distintos lquidos orgnicos con la ayuda de los
pulmones y los riones.
La acidosis - exceso de H+ en la sangre (acidemia); pH < 7,35
La alcalosis - dficit de H+ en la sangre; pH > 7,45
Tampones mas importantes del organismo - en el plasma
=> tampn bicarbonato/ acido carbnico (H2Co3 / HCO3-); tampn fosfato
(H2PO4-); protenas plasmticas;
en
los hemates => tampn Hb
y
bicarbonato/ acido carbnico.
Determinar la alteracin del equilibrio acido-base - la concentracin H+,
HCO3-, Pco2;
- determinar la presin parcial de CO2 (en caso de trastornos respiratorios)
- determinar la concentracin de bicarbonato (en caso de
trastornos metablicos)
Clasificacin de las alteraciones del equilibrio cido bsico:
- Metablica: dficit primario de HCO3- => acidosis; aumento primario de
HCO3- => alcalosis
- Respiratoria: aumento primario de CO2 => acidosis; dficit primario de CO2
=> alcalosis
Equilibrio gaseoso
Ventilacin - intercambio de aire, entre la atmsfera y los alvolos
Difusin - intercambio de gases a traves de la membrana de
los alvolos pulmonares
Perfusin - paso de la sangre a traves de los vasos sanguneos pulmonares
Oxigeno => disuelto en plasma (presin parcial de oxigeno /Po2) y unido a la

Hb; valor normal Po2 en sangre => 97 mmHg o entre 80-100 mmHg (varia
con la edad); < de 80 mmHg => hipoxemia; excepciones neonatos entre 40-70
mmHg.
Dixido de carbono /anhdrido carbnico =>disuelto en plasma (como
CO2 y como bicarbonato o acido carbnico) y unido a la Hb; valores
normales en la sangre Pco2 => 35-45 mmHg (no varia con la edad)
Insuficiencia respiratoria:
- alteraciones en la perfusin (a nivel de la circulacin pulmonar)
- alteraciones en la difusin (a nivel de la membrana alveolo-capilar)
- alteraciones en la ventilacin => obstructiva, restrictiva, mixta
Pruebas funcionales respiratorias - espirografa simple y gasometra
arterial
Monitorizacin de frmacos (MF)

Se recomienda la monitorizacin de un frmaco cuando:
- Su ventana teraputica es reducida y bien definida
- Se sospecha incumplimiento del tratamiento
- Se sospechan interacciones con otros medicamentos
- Se observan posibles sintomas de toxicidad
- Se sospecha inefectividad (no se observa la respuesta teraputica esperada)
- Se observa gran variabilidad individual en la farmacocintica
- Existen otras patologas que pueden modificar la respuesta
- Existe un estado fisiolgico que puede modificar la respuesta
- Se exige una revisin o seguimiento clnico-legal del tratamiento
Farmacocintica => absorcin - distribucin - eliminacin (metabolismo
- excrecin)
Programa de monitorizacin de frmacos - se basa en la relacin individual
existente entre la concentracin srica del frmaco y su respuesta clnica ,
estableciendo los indicadores de respuesta adecuados para cada frmaco =>
se encarga la unidad de farmacocintica clinica en el hospital
Indicaciones para la monitorizacin de frmacos- es aconsejable realizar
la monitorizacin de frmacos cuando:
- Se sospechan interacciones medicamentosas
- Se sospecha una mala aplicacin del tratamiento (no respetar las dosis, no
terminar)
- Se conoce la dificultad de aplicacin del tratamiento, p.ej. en
la poblacin anciana
- El frmaco tiene un margen o ventana teraputica estrecho
- No se alcanza el efecto teraputico deseado con la dosis indicada
- Se observan sintomas y/o signos de toxicidad
- Se observa variabilidad inter-individual con respecto al metabolismo
- El metabolismo esta alterado debido a otra patologa subyacente
- El metabolismo esta alterado como consecuencia del estado psico-fsico del
paciente
- Se cuestiona la bio-disponibilidad de la formulacin administrada
- Se requiere un seguimiento o comprobacion medico-legal del tratamiento
Tcnicas electroqumicas
La qumica electro-analtica - un grupo de metodos analticos cuantitativos
basados en las propiedades elctricas de la disolucion de un analito cuando
forma parte de una clula elctrica.
La clula electro-qumica - 2 conductores (electrodos), cada uno sumergido
en una solucin adecuada de electrolito, un puente salino inerte entre ambos
para que circule la corriente elctrica y un potenciometro para medir la
diferencia de potencial generada.
Fundamento
- Reaccin de oxidacin: tomo metlico neutro => ion positivo
+ electrn (soltado); M => M+ + e- Reaccin de reduccin: ion positivo + electrn => tomo metlico neutro; M+
+ e- => M
Las tcnicas electroqumicas mas utilizadas en el laboratorio clnico son las
amperomtricas y las potenciomtricas; los metodos amperomtricos se basan
en la medida de la cantidad de corriente que fluye cuando se aplica un voltaje
constante al electrodo de medida (dinmicos); los metodos potenciomtricos
se basan en la medida del potencial de las clulas electroqumicas en ausencia
de corriente (estticos);
Su utilidad en el laboratorio:
- Medida del pH
- Determinacin de concentracin de iones
- Medida de la presin parcial de gases (CO2 y O2) => PO2 y PCo2
- Medidas del punto final de metodos volumtricos
- Medida del poder de oxidacin o reduccion de una solucion
El equipo requerido para estos metodos es simple, consta de => electrodo de
referencia, electrodo indicador,dispositivo para medir el potencial.
Estudio de la orina
Funcin del rin:
- La eliminacin de nuestro organismo de una importante cantidad de
residuos metablicos, muchos de ellos intiles, y de otros que incluso
pueden comportarse como txicos.
- La regulacin de la composicin de los fluidos de nuestro organismo
facilitando as, tanto la supervivencia de las clulas como el optimo desarrollo
de todos los procesos metablicos.
- El control hormonal de la presin arterial (adrenalina, noradrenalina)
- El control de los niveles orgnicos del calcio (mineral corticoides aldosterona,
1,25 dihidroxicolecalciferol)
- El control de la eritropoyesis (eritropoyetina)
Nefronas - son unidades funcionales bsicas consiste de 2 partes => el
glomerulo (dentro de la cavidad "capsula de Bowman") y la red tubular.
El glomerulo - filtrar/ depurar el plasma 25 ml de sangre por minuto (150
litros de plasma/ dia); se filtra agua, urea, creatinina, aminocidos, cido rico,
glucosa, protenas de bajo pm.
La red tubular - el filtrado por el glomerulo es recogido en la capsula de
Bowman y se dirige hacia la red tubular donde se lleva a cabo un proceso de
reabsorcion selectiva => reabsorber agua, ciertos elementos tiles par el
organismo y que deben ser recuperadas (glucosa, agua, sodio, cloruro, potasio,
bicarbonato, urea, aminocidos, proteina) y permite la secrecin de otras que,
po su toxicidad, deben ser posteriormente eliminadas mediante
la miccin (amonio, urea, hidrogeniones); se elimina 1 ml de orina por minuto
(1500 ml diarios)
Caractersticas fundamentales en recogida de muestras de orina
- Miccin espontanea => anlisis fisico-qumico, estudio del
sedimento, concentracin de creatina.
- Cateterismo vesical (sondaje) => pacientes que presentan dificultades de
la miccin, mujeres para evitar la contaminacin vaginal.
- Puncion suprapubica => diagnostico de infeccin por
microorganismos extraos en nios.
Tipos de muestras para un anlisis de orina (sin supervision):
- Primera orina de la maana => se recomienda porque la concentracin de
solutos es variable a lo largo del da y esta en relacin con la ingesta de

liquidos.
- Orina tomada al azar => muestra valida para cultivos microbiologicos
- Orina minutada (fraccionada, de 2 horas, de 24 horas) => gran utilidad para
el paciente diabeticos
Anlisis de orina - objetivos:
- obtener informacin del estado general del rion y las lesiones
que pudieran afectarlo
- detectar la existencia de una alteracin a nivel de las vas urinarias
- teniendo en cuenta aquellos productos que se eliminan va urinaria, detectar
alteraciones funcionales de otros rganos
- detectar las alteraciones metablicas de diversa etiologia
- se intenta encontrar sustancias o componentes que normalmente no se
encuentran en la orina
- detectar alguna alteracin en la concentracin (por defecto o por exceso) de
componentes que habitualmente se encuentran en la orina
Tipos de anlisis de orina => anlisis elemental, completo, rutinario,
anormales y sedimento.
Parmetro bioqumico => Densidad - Bilirrubina Cuerpos cetnicos - Protenas - Urobilinogeno - Glucosa - Hemoglobina Nitritos.
Examen fsico - macroscopico
1)- Cantidad / diuresis normal 800-200 ml; alteracin => oliguria, poliuria,
anuria
2)- Aspecto / turbidez clara y transparente; alteracin => gelatinoso,
opalescente, turbidez con sedimento rojo, espuma persistente de agitar
(albumina)
3)- Color amarillo / mbar (en funcin de la concentracin)
4)- Olor aromtico, ligeramente amoniacal
5)- Densidad 1.010-1.030 (se determina mediante urodensimetro, tiras
reactivas o refractrometria); alteracin => insuficiencia renal, diabetes,
trastornos nerviosos, procesos febriles
6)- pH 4,5-8,2 (normal pH 6)
Importancia clnica del estudio de "anormales" en orina
Protenas - en condiciones normales las protenas se encuentran 130-150
mg/da en funcin del volumen de orina eliminado; en recin nacidos 2-8
mg/100 ml; cantidad de proteina => albumina 1/3 del total (fisiolgica),
globulinas, proteina de Tamm-Horsfall (T-H) no se encuentra en el plasma - se
forma en el tubulo contorneado distal, transferrina, IgA; proteinuria

=> eliminacin de proteina en orina superando los VN (intensa >4 g/dia: leve
<0,5 g/dia)
Glucosa - la orina normal carece casi por completo de glucosa; normoglucemia
=> 6-120 mg/dl; umbral renal 160 mg/dl; glucosuria => aumento de
la concentracin de glucosa en orina por encima de los VN, causada por (1)
aumento de la glucemia por encima de umbral renal (2) alteracin renal
(tubulopatia)
Cuerpos cetnicos - en personas sanas, los CC se sintetizan en el hgado y se
metabolizan por completo, de forma que en la orina aparecen en
concentraciones mnimas (indetectables); cetonuria => aparicin de
cueros cetnicos detectable sen orina; la presencia de cetonuria y el aumento
de cetonemia implica que no se realiza correctamente el catabolismo oxidativo
de los cidos grasos; las causas de cetonuria:
- sobrecarga de lipidos en la dieta
- diabetes mellitus (coma diabetico)
- vmitos (nios embarazadas)
- bajo consumo de hidratos de carbono o alteracin en su metabolismo
- ayuno prolongado
Hemoglobina - no aparece en orinas normales; hemoglobinuria => presencia
de Hb en orina (si la cantidad en alta, se puede ver a simple vista); causas =>
enfermedad renal de vas altas, anemias hemolticas reacciones
transfusionales, infecciones (malaria, paludismo)
Pigmentos biliares (bilirrubina y biliverdina) - aparece BB en orina, siempre que
aumente la BB directa en sangre por causas => enfermedad obstructiva,
lesiones hepticas.
Uribilinogeno - BB directa con la bilis, pasa al intestino delgado donde
por accin de la flora bacteriana se transforma en urobilinogeno o
estercobilinogeno (se elimina en mayora con las heces y la orina en
menor concentracin); la cantidad de urobilinogeno aumenta en la orina en las
hepatitis y las anemias hemolticas; la determinacin de urobilinogeno debe
realizarse rpidamente en orina, ya que se transforma en urobilina + O2 (falso
negativo).
Nitritos - su aparicin en la orina indica crecimiento bacteriano (bacteriuria), de
germenes capaces de reducir los nitratos ingeridos con la dieta, hasta nitritos
(entero-bacterias); un resultado negativo de la prueba de los nitritos, no indica
ausencia de microorganismos, ya que puede haber bacterias que no son
productores de nitritos o ausencia de nitratos ingeridos en la dieta.

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lectroforesis de protenas
y de cidos nucleicos
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Definicin
La mayora de las biomolculas poseen una carga elctrica, cuya magnitud depende del pH
del medio en el que se encuentran. Como consecuencia, se desplazan cuando se ven
sometidas a un campo elctrico.
Se denomina electroforesis a la tcnica mediante la cual se separan las biomolculas en
disolucin cuando se ven sometidas a un campo elctrico. Se trata de una tcnica
fundamentalmente analtica, aunque tambin se puede realizar con fines preparativos.
Cada molcula se desplaza por efecto del campo, alcanzando rpidamente una velocidad
constante al equilibrarse la fuerza impulsora (fuerza del campo elctrico) con la resistencia
al avance (fuerza de friccin o rozamiento) impuesta por el medio en el que se desplaza.
Fuerza del campo elctrico = Fuerza de friccin
qE = fv
q = carga (C)
E = intensidad del campo (V/m =
N/C)
f = coeficiente de friccin (CVs / m2 =

kg/s)
v = velocidad de la molcula (m/s)
El coeficiente de friccin mide la resistencia intrnseca debida a las caractersticas de cada

molcula, esencialmente su forma y su tamao. As, por ejemplo, las molculas grandes y
asimtricas poseen un mayor coeficiente de friccin que las pequeas y compactas.
La velocidad por unidad de campo recibe el nombre de movilidad electrofortica,
vE==qf=Zef
(Z = nmero entero; e = carga del electrn)
En unas condiciones determinadas de electroforesis, la diferente movilidad de cada
molcula define su separacin en el espacio; al ir transcurriendo el tiempo, se van
separando progresivamente unas de otras.
Al ser el medio de soporte a su vez un polielectrolito, est constituido por iones, que son
atrados y as recubren los iones de la muestra, lo que altera el comportamiento de stos en
el campo. Todo ello hace que el tratamiento terico cuantitativo de la electroforesis sea muy
difcil y que esta tcnica resulte poco til para obtener informacin precisa sobre la
estructura de las molculas. Sin embargo, es enormemente til como tcnica analtica y
preparativa.
Se suele hablar de 3 tipos de electroforesis:
1. De frente mvil: los componentes de la muestra estn presentes en
toda la disolucin y se determina pticamente la posicin del frente de
avance o frontera con el disolvente.
2. Zonal: la muestra se aplica como una mancha o banda y sus

componentes migran a travs de un disolvente, utilizando adems un
medio que soporta a ste. En este caso no se determina la movilidad,
sino que el nico objetivo de la tcnica es separar los componentes de la
muestra.
3. Continua: la muestra se aplica tambin en una zona, pero se suministra
continuamente a lo largo del proceso (para ms informacin, vanse las
pp.250-2 de Freifelder, 1999).
Estudiaremos nicamente la electroforesis zonal, de uso ms extendido.

Finalmente, debe sealarse que, aunque es menos frecuente, tambin se puede aplicar la
electroforesis para la separacin de clulas.
Medios de soporte para realizar la electroforesis

La muestra debe situarse en o sobre un medio soporte, principalmente para evitar
perturbaciones mecnicas y corrientes de conveccin durante la separacin. En algunos
soportes (papel o similares) la muestra queda sobre la superficie y avanza a lo largo de ella,
con escasa friccin, por lo que el mecanismo principal de separacin es la magnitud de la
cargade cada componente de la muestra. Otros medios de soporte (geles, medios
semislidos o gelatinosos) estn formados por polmeros que forman una malla, matriz o
red tridimensional a travs de la cual deben avanzar las molculas de la muestra, que queda
embebida en el medio de soporte electrofortico. Como consecuencia, la friccin es notable
y los factores de forma y tamao adquieren una alta relevancia en la separacin.
Medios de baja friccin
Medios de elevada friccin
papel
acetato de celulosa
gel de
almidn
gel de
agarosa
separacin principalmente por

carga
separacin por carga, tamao y forma
gel de poliacrilamida
gel de
agarosa+poliacrilamida
Papel: sencillo, pero con elevada adsorcin debido a los grupos hidroxilo de la celulosa.
Acetato de celulosa: los grupos OH estn acetilados, lo que reduce la adsorcin; baja
tincin de fondo; es posible transparentarla o disolverla para detectar y recuperar los
componentes separados.
Almidn: pasta de almidn cuyos granos se han disgregado en un tampn caliente (se
hinchan). Actualmente se utiliza poco, ha sido sustituido por la poliacrilamida.
Agarosa: polisacrido, producto purificado de algas (composicin similar al agar-agar). Se

disuelve en caliente (50-60C) y al enfriar solidifica formando un gel, de alta porosidad.
Poliacrilamida: el gel es el resultado de la polimerizacin qumica de una mezcla de
acrilamida y bisacrilamida. Regulando la concentracin de ambas y su proporcin se
consiguen distintas porosidades, siempre menores que la de los geles de agarosa.
acrilamid
a:
(forma polmeros lineales)
N,Nmetilenobis(acrila
mida):
(introduce uniones cruzadas entre

cadenas de poliacrilamida)
poliacrila
mida:
(vista
parcial)
Agarosa+poliacrilamida: porosidad intermedia.

Poliacrilamida con SDS: el dodecilsulfato sdico (Sodium Dodecyl Sulphate) es un
detergente aninico que se une a las protenas, desnaturalizndolas en una conformacin
extendida recubierta de molculas de SDS. Como consecuencia, el tamao de la molcula
de protena es directamente proporcional a su longitud en aminocidos y su carga queda
enmascarada por la mayor carga del SDS que la recubre, que es tambin proporcional a la
longitud. Por lo tanto, la movilidad electrofortica de la protena depende exclusivamente
de su masa molecular.
H-(CH2)12-SO4
Modos de disposicin del soporte

Horizontal
En papel, para
aminocidos u otras molculas pequeas, y en soportes similares (especialmente, acetato de
celulosa), para protenas.
En gel de almidn o de agarosa, para protenas y especialmente para cidos nucleicos. Casi
siempre el tampn cubre el gel (para evitar que se seque debido al calentamiento sufrido al
pasar la corriente), denominndose por ello electroforesis submarina.
Soporte impregnado de disolucin tampn por capilaridad, disuelve la muestra y mantiene
el contacto elctrico.
Se aplica la muestra depositndola (pipeta o aplicador especfico) como una gota sobre el
soporte (papel, acetato de celulosa) o dentro de un pocillo creado en el gel.
Vertical
Casi exclusivamente con gel de poliacrilamida (ms resistente fsicamente, no se desliza),

para protenas o para cidos nucleicos de pequeo tamao.
El gel puede rellenar tubos de vidrio (cada vez se usa menos) o estar contenido entre 2
placas rectangulares.
Contacto elctrico y disolvente gracias al tampn que embebe el gel y llena las cubetas o
compartimentos del nodo y ctodo.
La muestra se deposita con micropipeta llenando un pocillo creado al polimerizar el gel.
En cuanto a la composicin del gel hay dos variantes: electroforesis continua (un solo tipo
de gel) y electroforesis discontinua (2 tramos de gel de composicin ligeramente
diferente).
Ejemplos de separacin electrofortica

Separacin de protenas por SDS-PAGE discontinua vertical
SDS-PAGE = SDS-PolyAcrylamide Gel

Electrophoresis, electroforesis en gel de poliacrilamida en presencia de dodecilsulfato
sdico.
Gel de poliacrilamida, en placa, vertical.
Separacin de acuerdo con la masa molecular (estrictamente, con la longitud de la cadena
polipeptdica).
La muestra se trata con SDS (a mayor concentracin que en la composicin del gel) y se
calienta brevemente a 90-100C, para provocar la desnaturalizacin. Se suele aadir
tambin -mercaptoetanol para reducir los puentes disulfuro, separando as las subunidades
de la protena y permitiendo que se extiendan por efecto del SDS.
En la preparacin del gel se mezclan:
un tampn de pH (comnmente Tris-HCl)
acrilamida y bisacrilamida
un agente iniciador de la polimerizacin, como el persulfato amnico

(genera radicales libres)
un agente catalizador de la polimerizacin, como el TEMED (N,N,N,Ntetrametiletilenodiamina)
SDS
Permite obtener una estimacin de la masa molecular de las protenas separadas. Para ello
es preciso analizar en la misma electroforesis unas protenas patrn, de tamao conocido,
con las que se construye una curva de calibrado, representando movilidad frente a
logaritmo de masa molecular.
Para controlar el avance del frente de
electroforesis (posicin de mxima movilidad) se aade a la muestra un colorante marcador

(tracking dye), molcula cargada y de pequeo tamao que avanza ms que cualquier
componente de la muestra; el ms habitual es el azul de bromofenol.
Para mejorar la resolucin (obteniendo bandas ms compactas) se suele emplear
electroforesis discontinua:
En la parte superior, un gel acumulador o concentrador (stacking

gel), que tiene como efecto concentrar la muestra en una banda
estrecha.
Ocupando la mayor parte de la placa, un gel separador (resolving gel)

en el que tiene lugar la separacin de los componentes.
El efecto concentrador se debe a una mayor porosidad del gel acumulador combinada con
una diferente composicin de los tampones de cubeta (Tris-glicina) y de gel (Tris-HCl) y
distinto pH para ambos geles.
Nota: Tris es tris(hidroximetil)aminometano, una sustancia habitual para preparar

disoluciones tampn de pH prximo a 7.
Separacin de DNA en geles de agarosa, electroforesis horizontal submarina
composicin del gel
% de
acrilamida
resolucin
conseguida:
tamao
de DNA (kb)
% de
agarosa
20
0,006 - 0,10
15
0,025 - 0,15
12
0,04 - 0,2
0,06 - 0,4
0,08 - 0,5
3,5
1-2
2
0,1 - 2
1,5
0,2 - 3
1,2
0,4 - 6
0,9
0,5 - 7
0,7
0,8 - 10
0,6
1 - 20
0,3
5 - 60
Las molculas de DNA de las clulas son excesivamente grandes para avanzar a travs de
un gel de electroforesis normal, pero pueden analizarse si previamente se han fragmentado
de forma controlada. Se suelen emplear geles de agarosa (concentracin entre 0,3% y 2%),
ms porosos que los de poliacrilamida. Las caractersticas mecnicas de estos geles hacen
aconsejable la realizacin de la electroforesis en horizontal, habitualmente submarina.
Las muestras se aplican en pocillos practicados dentro del gel.
Una de las formas ms comunes de fragmentar el DNA es el empleo de endonucleasas de
restriccin, que cortan en secuencias diana caractersticas.
La carga elctrica de una molcula de DNA depende de sus grupos fosfato, y el nmero de
stos es igual al doble del nmero de pares de bases. La forma de todas las molculas de
DNA es esencialmente la misma. En consecuencia, resulta que la movilidad en
electroforesis depende exclusivamente de la longitud de la molcula (medida habitualmente
como nmero de pares de bases, pb): la electroforesis separa los fragmentos de DNA de
acuerdo con su longitud en pb. De forma similar al caso de protenas en SDS-PAGE, se
suelen aplicar patrones en uno de los pocillos para hacer una curva de calibrado de
tamaos.
El avance del frente de electroforesis se observa gracias a colorantes como azul de
bromofenol y xileno cianol, aadidos a la muestra.
Cuando los fragmentos de cido nucleico analizados son de tamao muy pequeo se
utilizan geles de poliacrilamida, o de mezclas de agarosa y poliacrilamida cuando el tamao
es intermedio.
Revelado o deteccin
Tincin de protenas y de cidos nucleicos
Bromuro de etidio: Agente intercalante, se

introduce entre las bases apiladas del DNA, abre un poco la doble hlice,
provoca un desenrollamiento local. Su fluorescencia (color naranja al iluminar
con UV) aumenta mucho cuando se une al DNA: mtodo de tincin o revelado
del DNA, especialmente usado en electroforesis y en centrifugacin.
Se pueden emplear sustancias coloreadas o fluorescentes que se unan a las protenas o los
cidos nucleicos.
En el primer caso suelen ser colorantes orgnicos que interaccionan con las protenas de
forma poco selectiva, principalmente electrosttica. Ejemplos: azul brillante de Coomassie,
negro amido, rojo Ponceau.
Para los cidos nucleicos se usa el azul de metileno o, ms frecuentemente, compuestos
fluorescentes e intercalantes, como el bromuro de etidio (vase figura). Un compuesto
intercalante es aqul que se introduce entre los pares de bases apilados del DNA.
Tras la electroforesis, el gel se sumerge en un recipiente con una disolucin del colorante y
se espera a que aqul se impregne y as el colorante se una a las molculas separadas en el
gel. Tras lavar el gel para eliminar el exceso de tincin no unida especficamente, se
observa, fotografa o cuantifica mediante densitometra.
deteccin por tincin con un agente fluorescente y

observacin bajo luz ultravioleta
deteccin por autorradiografa

Ensayo enzimtico
Si entre las molculas separadas hay una enzima, se puede detectar aadiendo sus sustratos
(naturales o sintticos) y sus cofactores, y detectando la aparicin del producto,
generalmente coloreado.
Autorradiografa
Tanto protenas como cidos nucleicos pueden marcarse isotpicamente previamente a la

electroforesis, en cuyo caso la deteccin se hace mediante autorradiografa del gel (vase
figura).
Inmunoensayo (Western)
En caso de disponer de ellos, los anticuerpos permiten la deteccin selectiva del

componente de inters (protena o grupo marcador unido qumicamente a la protena o al
cido nucleico antes de la electroforesis). La permeabilidad de los geles para el acceso del
anticuerpo es limitada, por lo que se hace una transferencia de las molculas separadas en el
gel hacia una membrana de nitrocelulosa o de nailon, la cual se somete luego a la
disolucin que contiene el anticuerpo. Los detalles de esta tcnica de inmunotransferencia

o ensayo Western blot se tratarn en un tema posterior.
Deteccin de cidos nucleicos con sondas (Southern y Northern)
Las molculas con una secuencia determinada de nucletidos se pueden detectar mediante
hibridacin con sondas especficas, pequeas molculas de cido nucleico monocatenario
(oligonucletidos) con la secuencia complementaria a la buscada y marcadas con un
istopo radiactivo, un grupo fluorescente, etc. Para llevar a cabo con xito la hibridacin se
requiere tambin la transferencia desde el gel a una membrana de nitrocelulosa o nailon.
Los detalles de estos ensayos (Southern blot para DNA y Northern blot para RNA) se
estudian en un tema posterior.
Tcnicas especiales
Isoelectroenfoque
(Tambin se llama enfoque isoelctrico o IEF, de isoelectrofocusing). Se trata de una

variante de electroforesis en la que el gel (poliacrilamida) posee un gradiente de pH fijado
en su estructura. Esto se consigue incluyendo en su preparacin molculas ionizables con
valores de pK diferentes. Como consecuencia, al avanzar los componentes de la muestra a
lo largo del gel se encuentran en entornos de pH diferente, y eventualmente alcanzan una
regin en la cual el pH es igual al punto isoelctrico de la molcula muestra y, en
consecuencia, sta detiene su avance. Se alcanza, pues, un equilibrio y se consigue la
separacin de los componentes de la muestra de acuerdo con su punto isoelctrico, que
adems se puede medir, pues se conoce el gradiente de pH del gel.
Electroforesis bidimensional
Tras realizar una primera separacin su resultado se somete a otra de diferente mecanismo
en direccin perpendicular. Generalmente la primera es un isoelectroenfoque en un gel
cilndrico estrecho que luego se coloca como muestra para una SDS-PAGE. Se obtienen as
mapas complejos de bandas, muy caractersticos de cada muestra, cuya utilidad principal es
la comparacin con el obtenido de otra muestra similar pero conocida.
Electroforesis de campo pulsante
Las molculas o fragmentos de DNA de longitud superior a 20-40 kb no se pueden resolver

(separar) empleando la electroforesis convencional en gel de agarosa. Esto se debe, en
primer lugar, a la dificultad de manejo de los geles preparados con las bajas
concentraciones de agarosa que requeriran (inferior al 0,4%). Adems, las molculas de
DNA, que adoptan una conformacin ms o menos globular, poseen un tamao
excesivamente grande para atravesar los poros del gel y no se separan en funcin de su
tamao. Para solventar este problema se ha ideado una modificacin de la tcnica, conocida
como electroforesis de campo pulsante (o pulsado, pulsed-field gel electrophoresis ,
PFGE). Se emplean geles de agarosa al 1%, pero se altera peridicamente la orientacin del
campo elctrico aplicado, activando alternativamente dos pares de electrodos. El frecuente
cambio de direccin del campo elctrico consigue que las molculas se desplieguen y
avancen a travs de los poros en conformacin extendida. A mayor tamao, se reorientan

con ms dificultad, por lo que avanzan ms despacio.
As se consigue separar fragmentos de DNA de hasta varias megabases,

lo que supone un avance significativo pero an no sirve para estudiar los cromosomas
humanos enteros (de 50 a 250 Mb cada uno). S se han podido analizar as los cromosomas
de levadura (figura derecha).
Las muestras han de contener el DNA sin fragmentar, por lo se requiere una preparacin
especial (al purificar el DNA por los mtodos habituales se fragmenta por debajo de 100
kb). Para obtener preparaciones con los cromosomas intactos se mezclan las clulas con
agarosa caliente (37C) y se vierte en pequeos moldes de unos milmetros, de forma que al
solidificarse la agarosa (4C) forma bloques (insertos) que incluyen las clulas intactas.
En stos se realiza la lisis celular y la digestin de las protenas (p.ej., con EDTA, SDS y
proteinasa K, que difunden a travs de los poros del gel) sin que se alteren las grandes
molculas de DNA. Tras una dilisis para eliminar los restos de la digestin, se consigue un
bloque de agarosa con el DNA intacto en su interior, y se deposita el bloque entero en un

pocillo del gel de electroforesis.
Electroforesis preparativa
Se han desarrollado variantes preparativas, es decir, que permiten la obtencin de

cantidades significativas de los componentes de la muestra por separado. No se detallarn
aqu (vase Freifelder 1991, pp.256-7)
Inmunoelectroforesis
Combina una separacin electrofortica con una deteccin por inmunodifusin.
Aplicaciones
Determinacin de la masa molecular
Como se ha indicado, se puede obtener una estimacin de la masa molecular (en kDa) de
protenas empleando SDS-PAGE, y de fragmentos de DNA (en pb) empleando
electroforesis en agarosa. En ambos casos, en uno de los pocillos del gel se carga una
mezcla de molculas patrn de tamao conocido, con el fin de poder trazar la curva de
calibrado. Para las protenas, la validez del dato obtenido depende de que la
desnaturalizacin con SDS haya sido completa y de que se hayan separado las subunidades
gracias a la reduccin con mercaptoetanol; adems, la presencia de oligosacridos en las
glicoprotenas altera la movilidad, que ya no proporciona valores de masa molecular
fiables.
Se aplica en
uno de los
pocillos del
gel una
mezcla de
fragmentos
de DNA de
tamao
conocido,
denominado
s patrones,
marcadores
de masa
molecular o
escalera de
DNA (DNA
ladder). Tras
su
separacin
en la
electroforesi
s, se revelan
y se
representa
para todas
las bandas la
movilidad
(distancia
avanzada o,
mejor,
cociente
entre sta y
el avance del
frente de
electroforesi
s) frente al
logaritmo
del tamao
(longitud en
pb). Sobre la
recta
ajustada se
interpolan
las distancias
de avance de
las muestras
problema,
calculando
as su
tamao en
pb.
En este
ejemplo, los
patrones
empleados
son
fragmentos
bien
conocidos,
aquellos
obtenidos a
partir del
DNA del
virus por la
accin de las
endonucleas
as de
restriccin
EcoRI e
HindIII.
Determinacin del punto isoelctrico
Como se ha indicado, mediante isoelectroenfoque se obtiene una medida del punto

isoelctrico de las protenas (pHI o pI).
Isoenzimas
Las variantes de una enzima, con pequeas diferencias en su estructura y en su actividad

enzimtica, se analizan rutinariamente mediante electroforesis o, en especial, mediante
isoelectroenfoque. De hecho, los nombres de las isoenzimas derivan a veces de su
movilidad electrofortica. Se puede aplicar anlogamente a las isoformas de protenas no
enzimticas.
Mapas de restriccin
Una de las formas de estudiar la secuencia de los cidos nucleicos, en especial el DNA,
consiste en tratarlo con distintas enzimas de restriccin, analizar mediante electroforesis en
gel de agarosa los fragmentos resultantes e intentar reconstruir la secuencia de la molcula
original formando su mapa de restriccin, uno de los tipos de mapa fsico.
Secuenciacin de cidos nucleicos
La obtencin de la secuencia completa, nucletido a nucletido, tambin depende del

anlisis electrofortico de fragmentos de DNA, tanto en el mtodo qumico de Maxam y
Gilbert como en el mtodo enzimtico de Sanger. Se utilizan en este caso geles de
poliacrilamida, debido al tamao pequeo de los fragmentos, pudindose resolver
fragmentos que se diferencian en un solo nucletido.
. Los genes de las cadenas ligeras kappa y lambda:

1. Estn localizados en el mismo cromosoma
2. Producen protenas que se asocian slo con un tipo de cadena pesada
3. Pueden expresarse en la misma clula B
4. Se expresan siempre antes que los genes de las cadenas pesadas
5. Ninguno de los anteriores
2. Una respuesta rpida, con niveles ms altos de IgG que de IgM es
consecuencia de:
1. Una reaccin de hipersensibilidad retardada
2. Una respuesta autoinmune
3. La memoria inmunolgica
4. Una respuesta frente a polisacridos
5. Una respuesta timo-independiente
3. NO tienen un origen mieloide:
1. Clulas plasmticas
2. Neutrfilos
3. Monocitos
4. Eritrocitos
5. Basfilos
4. El sistema del complemento es:
1. Activado por complejos antgeno-anticuerpo
2. Exclusivo de la inmunidad adaptativa
3. Un componente termorresistente del plasma
4. Activado por cualquier polisacrido bacteriano
5. No opsonizante
5. Se caracteriza por un exceso de produccin de IgG monoclonal:
1. Enfermedad del suero
2. Sndrome de la inmunodeficiencia adquirida
3. Macroglobulinemia de Wldenstrom
4. Neumonitis por hipersensibilidad
5. Mieloma mltiple
6. En un hemograma normal, las clulas del sistema inmunitario ms
numerosas son:
1. Monocitos
2. Clulas NK
3. Linfocitos B
4. Neutrfilos
5. Linfocitos T
7. La destruccin por linfocitos T de clulas infectadas por virus, requiere
compatibilidad del complejo principal de histocompatibilidad con respecto a
antgenos:
1. Sanguneos AB0
2. Rh
3. De clase I
4. De clase II
5. De clase III
8. Caractersticamente, los haptenos tienen:
1. Inmunogenicidad
2. Capacidad de interaccin con anticuerpos
3. Peso molecular alto
4. Naturaleza polisacardica
5. T-independencia
9. La cadena J es una glicoprotena de 15 kDa asociada con:

1. IgA
2. IgG1
3. IgG2
4. IgD
5. IgE
10. Cul de los siguientes ensayos es ms sensible para medir la
concentracin de anticuerpos?:
1. ELISA
2. Precipitacin
3. Aglutinacin
4. Inmunodifusin radial
5. Inmunoelectroforesis
11. La hipermutacin somtica en los genes de los anticuerpos explica:
1. La exclusin allica
2. El cambio de clase de IgM a IgG
3. El incremento de afinidad en la maduracin de la respuesta inmune
4. La expresin de inmunoglobulinas en la membrana de los linfocitos
5. La inmunodeficiencia adquirida
12. La inmunidad obtenida por transferencia de linfocitos T activados de un
individuo adulto es un ejemplo de inmunidad:
1. Innata
2. Adoptiva
3. Natural
4. Humoral
5. Inespecfica
13. Las clulas dendrticas maduras:
1. Son un tipo de linfocitos B maduros

2. Son un tipo de linfocitos T memoria
3. Han perdido la expresin de molculas de clase II del complejo principal de
histocompatibilidad
4. Proceden de precursores de la mdula sea
5. Se identifican con linfoblastos presentes en los rganos linfoides
14. Las clulas pre-B se caracterizan por:
1. Expresar IgM de membrana
2. Su capacidad de responder al antgeno
3. Expresar cadena mu citoplasmtica
4. Expresar IgD en superficie
5. No haber experimentado an fenmenos de recombinacin VDJ
15. En la sangre perifrica humana, los linfocitos ms abundantes son:
1. Linfocitos B IgM+ IgD+
2. Linfocitos B IgG+
3. Linfocitos T CD4+
5. Clulas NK
16. Un marcador caracterstico de los linfocitos B humano es:
1. CD4
2. El receptor para el interfern gamma
3. La selectina L
4. La integrina VLA-4
5. CD19
17. Entre las clulas B, las clulas plasmticas de una respuesta humoral
secundaria se caracterizan por:
1. Secretar anticuerpos de baja afinidad
2. Secretar anticuerpos poco mutados en relacin a la lnea germinal

3. Estar ausentes de la mdula sea
4. Su alta tasa de secrecin de anticuerpos
5. Su alta expresin de inmunoglobulinas de membrana
18. En las IgG, los idiotopos se localizan en:
1. Dominios VH y VL
2. Dominios FC
3. Regiones constantes
4. Dominios CH
5. Dominios CL
19. Los hibridomas secretores de anticuerpos monoclonales son:
1. Tumores monoclonales de clulas plasmticas
2. Clulas obtenidas por fusin de clulas B y de clulas de mieloma
3. Un tipo de linfomas foliculares
4. Formas de mielomas mltiples
5. Un tipo de leucemias linfoblsticas agudas
20. La activacin de los linfocitos T CD4+ se caracteriza por la expresin de:
1. CD40
2. Las molculas B7-1 y B7-2
3. La interleucina 12
4. El receptor de alta afinidad para la interleucina 2
21. La exclusin allica en la expresin de receptores antignicos de los
linfocitos:
1. Tiene su origen en la secuencia de reordenamientos durante la maduracin
de los linfocitos
2. Es resultado de diferencias en las tasas de transcripcin
3. Es resultado de la estimulacin antignica

4. Es resultado de procesos de seleccin negativa
5. Es resultado del procesamiento diferencial de RNAm
22. La interaccin de pptidos con las molculas del complejo principal de
histocompatibilidad:
1. Es covalente
2. Es de baja afinidad
3. Es de especificidad muy restringida
4. Es irreversible
5. Tiene una velocidad de asociacin muy rpida
23. La hendidura de unin al pptido de las molculas de clase I del complejo
principal de histocompatibilidad:
1. Est abierta en sus extremos
2. Permite alojar pptidos de ms de 30 aminocidos
3. Puede alojar nicamente pptidos derivados de antgenos propios
4. Puede encajar numerosos pptidos diferentes
5. Est configurada por residuos de la cadena alfa y de la microglobulina beta-2
24. En el reconocimiento de antgenos proteicos por los linfocitos T:
1. La molcula CD4 se asocia al antgeno
2. La molcula CD8 interacta con el receptor del linfocito
3. El receptor reconoce residuos en el pptido y en la molcula presentadora
del complejo principal de histocompatibilidad
4. Se reconocen siempre eptodos conformacionales
5. Los antgenos son reconocidos en forma soluble libre
25. Las perforinas:
1. Son secretadas en la activacin de los mastocitos
2. Son homlogas a las caspasas
3. Se asocian al componente C9 del complemento para formar poros
4. Son homlogas a las hemolisinas bacterianas

5. Estn en grnulos en los linfocitos T citotxicos y clulas NK
26. En la mayora de los tejidos, los linfocitos ms numerosos son:
1. B
2. T colaboradores (TH)
3. T citotxicos
4. Clulas NK
5. T supresores
27. En la mdula sea de los mamferos tiene lugar la:
1. Maduracin de los linfocitos T
2. Seleccin de los linfocitos T
3. Hipermutacin somtica generadora de anticuerpos
4. Maduracin de los linfocitos B
5. Sntesis de los reactantes de la fase aguda
28. Los centros germinales de los folculos linfoides contienen:
1. Linfocitos T
2. Clulas dendrticas
3. Macrfagos activados
4. Clulas CD34+
5. Clulas B activadas
29. El sistema inmunitario asociado al tubo digestivo se caracteriza por:
1. No presentar linfocitos T activados
2. Carecer de clulas T memoria
3. Presentar niveles elevados de IgA
4. No desarrollar folculos linfoides
5. La ausencia de clulas dendrticas
30. En el sistema inmunitario cutneo, la epidermis se caracteriza por:

1. Carecer de clulas presentadoras de antgenos
2. Carecer de linfocitos T
3. Presentar vnulas de endotelio alto
4. Su alto contenido en linfocitos B
5. Presentar linfocitos T CD8+
31. La adhesin de los linfocitos a las vnulas endoteliales altas est regulada
por:
1. Protenas plasmticas
2. Diriginas
3. Colectinas
4. Defensinas
5. Reaginas
32. Los macrfagos activados:
1. Experimentan expansin clonal
2. Producen IL-12
3. Se comportan como clulas presentadoras de antgenos
4. Liberan perforina
5. Expresan CD40L en superficie
33. Las clulas dendrticas foliculares:
1. Expresan molculas de clase II del complejo principal de histocompatibilidad
2. Presentan antgenos a las culas T
3. Expresan CD28 en superficie
4. Expresan B7 en superficie
5. Seleccionan linfocitos B activados
34. Es un mecanismo de la respuesta inmune humoral innata la/el:
1. Activacin oligoclonal de linfocitos Th2
2. Va alternativa de activacin del complemento srico

3. Activacin de mastocitos
4. Activacin de clulas B
5. Opsonizacin mediada por anticuerpos
35. Son componentes de la respuesta inmunitaria adaptativa:
1. Las integrinas
2. El complemento srico
3. Las defensinas
4. Los linfocitos T CD8+
5. Las colectinas
36. Una preparacin de anticuerpo monoclonal:
1. Puede presentar distintos tipos de cadenas pesadas
2. Carece de cadenas ligeras
3. Puede presentar distintos tipos de cadenas ligeras
4. Puede presentar distintos alelos del mismo locus
5. Presenta un nico par VH/VL
37. Un anticuerpo antiidiotpico reconoce:
1. Regiones constantes de cadenas pesadas
2. Regiones variables de anticuerpos
3. Regiones constantes de cadenas ligeras
4. Alelos en regiones marco de inmunoglobulinas
5. Eptopos en dominios Fc
38. Las molculas HLA de clase I:
1. Presentan preferentemente pptidos de origen extracelular
2. Se unen a la cadena invariante
3. Interaccionan con la molcula CD4
4. Presentan pptidos a los linfocitos CD8+

5. Se expresan en los eritrocitos circulantes
39. La seleccin positiva de los linfocitos T tiene lugar en:
1. El bazo
2. El timo
3. La mdula sea
4. Los centros germinales de folculos linfoides
5. Las reas T de los ganglios perifricos
40. El complejo CD3 est implicado en:
1. La activacin del complemento
2. La transduccin de seales
3. El reconocimiento antignico
4. La regulacin del trfico de linfocitos T
5. El establecimiento de contactos celulares
41. Las inmunoglobulinas relacionadas con la alergia atpica son
caractersticamente de la clase:
1. IgM
2. IgG
3. IgA
4. IgE
5. IgD
42. La IL-7 es fundamentalmente:
1. Reguladora de la inmunidad innata
2. Reguladora de la inmunidad adquirida
3. Estimuladora de la hematopoyesis
4. Una quimiocina
5. Una citocina proinflamatoria
43. Las inmunoelectroforesis:

1. Permiten analizar mezclas de antgenos
2. Requieren que antgenos y anticuerpos sean simultneamente sometidos a
electroforesis
3. Requieren que antgenos y anticuerpos tengan distinto punto isoelctrico
4. Son habitualmente aplicadas para hacer determinaciones cuantitativas
5. Son tan sensibles como un ELISA
44. En la inmunodifusin doble en gel, se observan bandas de precipitacin
cuando:
1. Antgenos y anticuerpos tienen distinta carga
2. La concentracin de antgeno libre excede a la del anticuerpo
3. El anticuerpo es una IgM
4. Se ensayan antgenos no relacionados
5. Antgenos y anticuerpos se combinan en la zona de equivalencia
45. Los superantgenos bacterianos:
1. Son siempre glucolpidos de la pared celular
2. Son procesados por va endosmica
3. Se comportan como mitgenos de linfocitos B
4. Se comportan como activadors policlonales de linfocitos T
5. Son un tipo de antgenos T-independientes
46. La reaccin del transplante contra el husped se produce cuando el/la:
1. Transplante contiene clulas T inmunocompetentes
2. Receptor s inmunocompetente
3. Reaccin leucocitaria mixta es negativa
4. Receptor tiene clulas citotxicas sensibilizadas
5. Transplante se realiza entre individuos singnicos
47. Las molculas HLA de clase II:
1. Presentan pptidos ms largos que las de clase I

2. Estn asociados a la microglobulina beta-2
4. Caractersticamente presentan pptidos a las clulas NK:
5. Se expresan en todos los linfocitos T circulantes

48. Las clulas NK humanas:
1. Reconocen molculas de clase I del complejo principal de
histocompatibilidad
2. Producen IL-2
3. Son excepcionalmente abundantes en los ganglios perifricos
4. Expresan receptores antignicos somticamente reordenados
5. Expresan constitutivamente FasL
49. Las inmunoglobulinas con mayor poder aglutinante
son:
1. IgM
2. IgG
3. IgA
4. IgE
5. IgD
50. Son clulas profesionales presentadoras de antgenos los (as):
1. Keratinocitos
2. Hepatocitos
3. Linfocitos B
4. Linfocitos T CD4
5. Clulas cebadas
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SOLUCIONES (0 050)
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49
50
. Los genes de las cadenas ligeras kappa y lambda:

1. Estn localizados en el mismo cromosoma
2. Producen protenas que se asocian slo con un tipo de cadena pesada
3. Pueden expresarse en la misma clula B
4. Se expresan siempre antes que los genes de las cadenas pesadas
5. Ninguno de los anteriores
2. Una respuesta rpida, con niveles ms altos de IgG que de IgM es consecuencia de:
1. Una reaccin de hipersensibilidad retardada
2. Una respuesta autoinmune
3. La memoria inmunolgica
4. Una respuesta frente a polisacridos
5. Una respuesta timo-independiente
3. NO tienen un origen mieloide:
1. Clulas plasmticas
2. Neutrfilos
3. Monocitos
4. Eritrocitos
5. Basfilos
4. El sistema del complemento es:

1. Activado por complejos antgeno-anticuerpo
2. Exclusivo de la inmunidad adaptativa
3. Un componente termorresistente del plasma
4. Activado por cualquier polisacrido bacteriano
5. No opsonizante
5. Se caracteriza por un exceso de produccin de IgG monoclonal:
2. Sndrome de la inmunodeficiencia adquirida
3. Macroglobulinemia de Wldenstrom
4. Neumonitis por hipersensibilidad
5. Mieloma mltiple
6. En un hemograma normal, las clulas del sistema inmunitario ms numerosas son:
1. Monocitos
2. Clulas NK
3. Linfocitos B
4. Neutrfilos
5. Linfocitos T
7. La destruccin por linfocitos T de clulas infectadas por virus, requiere
compatibilidad del complejo principal de histocompatibilidad con respecto a
antgenos:
1. Sanguneos AB0
2. Rh
3. De clase I
4. De clase II
5. De clase III
8. Caractersticamente, los haptenos tienen:
1. Inmunogenicidad
2. Capacidad de interaccin con anticuerpos
3. Peso molecular alto
4. Naturaleza polisacardica
5. T-independencia
9. La cadena J es una glicoprotena de 15 kDa asociada con:
1. IgA
2. IgG1
3. IgG2
4. IgD
5. IgE
10. Cul de los siguientes ensayos es ms sensible para medir la concentracin de
anticuerpos?:
1. ELISA
2. Precipitacin
3. Aglutinacin
4. Inmunodifusin radial
5. Inmunoelectroforesis
11. La hipermutacin somtica en los genes de los anticuerpos explica:
1. La exclusin allica
2. El cambio de clase de IgM a IgG

3. El incremento de afinidad en la maduracin de la respuesta inmune
4. La expresin de inmunoglobulinas en la membrana de los linfocitos
5. La inmunodeficiencia adquirida
12. La inmunidad obtenida por transferencia de linfocitos T activados de un individuo
adulto es un ejemplo de inmunidad:
1. Innata
2. Adoptiva
3. Natural
4. Humoral
5. Inespecfica
13. Las clulas dendrticas maduras:
1. Son un tipo de linfocitos B maduros
2. Son un tipo de linfocitos T memoria
3. Han perdido la expresin de molculas de clase II del complejo principal de
histocompatibilidad
4. Proceden de precursores de la mdula sea
5. Se identifican con linfoblastos presentes en los rganos linfoides
14. Las clulas pre-B se caracterizan por:
1. Expresar IgM de membrana
2. Su capacidad de responder al antgeno
3. Expresar cadena mu citoplasmtica
4. Expresar IgD en superficie
5. No haber experimentado an fenmenos de recombinacin VDJ
15. En la sangre perifrica humana, los linfocitos ms abundantes son:
1. Linfocitos B IgM+ IgD+
2. Linfocitos B IgG+
5. Clulas NK
16. Un marcador caracterstico de los linfocitos B humano es:
1. CD4
2. El receptor para el interfern gamma
3. La selectina L
4. La integrina VLA-4
5. CD19
17. Entre las clulas B, las clulas plasmticas de una respuesta humoral secundaria se
caracterizan por:
1. Secretar anticuerpos de baja afinidad
2. Secretar anticuerpos poco mutados en relacin a la lnea germinal
3. Estar ausentes de la mdula sea
4. Su alta tasa de secrecin de anticuerpos
5. Su alta expresin de inmunoglobulinas de membrana
18. En las IgG, los idiotopos se localizan en:
1. Dominios VH y VL
2. Dominios FC
3. Regiones constantes
4. Dominios CH
5. Dominios CL
19. Los hibridomas secretores de anticuerpos monoclonales son:
1. Tumores monoclonales de clulas plasmticas
2. Clulas obtenidas por fusin de clulas B y de clulas de mieloma
3. Un tipo de linfomas foliculares
4. Formas de mielomas mltiples
5. Un tipo de leucemias linfoblsticas agudas
20. La activacin de los linfocitos T CD4+ se caracteriza por la expresin de:
1. CD40
2. Las molculas B7-1 y B7-2
4. El receptor de alta afinidad para la interleucina 2
21. La exclusin allica en la expresin de receptores antignicos de los linfocitos:
1. Tiene su origen en la secuencia de reordenamientos durante la maduracin de los
linfocitos
2. Es resultado de diferencias en las tasas de transcripcin
3. Es resultado de la estimulacin antignica
4. Es resultado de procesos de seleccin negativa
5. Es resultado del procesamiento diferencial de RNAm
22. La interaccin de pptidos con las molculas del complejo principal de
histocompatibilidad:
1. Es covalente
2. Es de baja afinidad
3. Es de especificidad muy restringida
4. Es irreversible
5. Tiene una velocidad de asociacin muy rpida
23. La hendidura de unin al pptido de las molculas de clase I del complejo
principal de histocompatibilidad:
1. Est abierta en sus extremos
2. Permite alojar pptidos de ms de 30 aminocidos
3. Puede alojar nicamente pptidos derivados de antgenos propios
4. Puede encajar numerosos pptidos diferentes
5. Est configurada por residuos de la cadena alfa y de la microglobulina beta-2
24. En el reconocimiento de antgenos proteicos por los linfocitos T:
1. La molcula CD4 se asocia al antgeno
2. La molcula CD8 interacta con el receptor del linfocito
3. El receptor reconoce residuos en el pptido y en la molcula presentadora del complejo
principal de histocompatibilidad
4. Se reconocen siempre eptodos conformacionales
5. Los antgenos son reconocidos en forma soluble libre
25. Las perforinas:
1. Son secretadas en la activacin de los mastocitos
2. Son homlogas a las caspasas
3. Se asocian al componente C9 del complemento para formar poros
4. Son homlogas a las hemolisinas bacterianas
5. Estn en grnulos en los linfocitos T citotxicos y clulas NK

26. En la mayora de los tejidos, los linfocitos ms numerosos son:
1. B
2. T colaboradores (TH)
3. T citotxicos
4. Clulas NK
5. T supresores
27. En la mdula sea de los mamferos tiene lugar la:
1. Maduracin de los linfocitos T
2. Seleccin de los linfocitos T
3. Hipermutacin somtica generadora de anticuerpos
4. Maduracin de los linfocitos B
5. Sntesis de los reactantes de la fase aguda
28. Los centros germinales de los folculos linfoides contienen:
1. Linfocitos T
2. Clulas dendrticas
3. Macrfagos activados
4. Clulas CD34+
5. Clulas B activadas
29. El sistema inmunitario asociado al tubo digestivo se caracteriza por:
1. No presentar linfocitos T activados
2. Carecer de clulas T memoria
3. Presentar niveles elevados de IgA
4. No desarrollar folculos linfoides
5. La ausencia de clulas dendrticas
30. En el sistema inmunitario cutneo, la epidermis se caracteriza por:
1. Carecer de clulas presentadoras de antgenos
2. Carecer de linfocitos T
3. Presentar vnulas de endotelio alto
4. Su alto contenido en linfocitos B
5. Presentar linfocitos T CD8+
31. La adhesin de los linfocitos a las vnulas endoteliales altas est regulada por:
1. Protenas plasmticas
2. Diriginas
3. Colectinas
4. Defensinas
5. Reaginas
32. Los macrfagos activados:
1. Experimentan expansin clonal
2. Producen IL-12
3. Se comportan como clulas presentadoras de antgenos
4. Liberan perforina
5. Expresan CD40L en superficie
33. Las clulas dendrticas foliculares:
1. Expresan molculas de clase II del complejo principal de histocompatibilidad
2. Presentan antgenos a las culas T
3. Expresan CD28 en superficie
4. Expresan B7 en superficie
5. Seleccionan linfocitos B activados
34. Es un mecanismo de la respuesta inmune humoral innata la/el:
1. Activacin oligoclonal de linfocitos Th2
2. Va alternativa de activacin del complemento srico
3. Activacin de mastocitos
4. Activacin de clulas B
5. Opsonizacin mediada por anticuerpos
35. Son componentes de la respuesta inmunitaria adaptativa:
1. Las integrinas
2. El complemento srico
3. Las defensinas
4. Los linfocitos T CD8+
5. Las colectinas
36. Una preparacin de anticuerpo monoclonal:
1. Puede presentar distintos tipos de cadenas pesadas
2. Carece de cadenas ligeras
3. Puede presentar distintos tipos de cadenas ligeras
4. Puede presentar distintos alelos del mismo locus
5. Presenta un nico par VH/VL
37. Un anticuerpo antiidiotpico reconoce:
1. Regiones constantes de cadenas pesadas
2. Regiones variables de anticuerpos
3. Regiones constantes de cadenas ligeras
4. Alelos en regiones marco de inmunoglobulinas
5. Eptopos en dominios Fc
38. Las molculas HLA de clase I:
1. Presentan preferentemente pptidos de origen extracelular
2. Se unen a la cadena invariante
4. Presentan pptidos a los linfocitos CD8+
5. Se expresan en los eritrocitos circulantes
39. La seleccin positiva de los linfocitos T tiene lugar en:
1. El bazo
2. El timo
3. La mdula sea
4. Los centros germinales de folculos linfoides
5. Las reas T de los ganglios perifricos
40. El complejo CD3 est implicado en:
1. La activacin del complemento
2. La transduccin de seales
3. El reconocimiento antignico
4. La regulacin del trfico de linfocitos T
5. El establecimiento de contactos celulares
41. Las inmunoglobulinas relacionadas con la alergia atpica son caractersticamente
de la clase:
1. IgM
2. IgG
3. IgA
4. IgE
5. IgD
42. La IL-7 es fundamentalmente:
1. Reguladora de la inmunidad innata
2. Reguladora de la inmunidad adquirida
3. Estimuladora de la hematopoyesis
4. Una quimiocina
5. Una citocina proinflamatoria
43. Las inmunoelectroforesis:
1. Permiten analizar mezclas de antgenos
2. Requieren que antgenos y anticuerpos sean simultneamente sometidos a electroforesis
3. Requieren que antgenos y anticuerpos tengan distinto punto isoelctrico
4. Son habitualmente aplicadas para hacer determinaciones cuantitativas
5. Son tan sensibles como un ELISA
44. En la inmunodifusin doble en gel, se observan bandas de precipitacin cuando:
1. Antgenos y anticuerpos tienen distinta carga
2. La concentracin de antgeno libre excede a la del anticuerpo
3. El anticuerpo es una IgM
4. Se ensayan antgenos no relacionados
5. Antgenos y anticuerpos se combinan en la zona de equivalencia
1. Son siempre glucolpidos de la pared celular
2. Son procesados por va endosmica
3. Se comportan como mitgenos de linfocitos B
4. Se comportan como activadors policlonales de linfocitos T
5. Son un tipo de antgenos T-independientes
46. La reaccin del transplante contra el husped se produce cuando el/la:
1. Transplante contiene clulas T inmunocompetentes
2. Receptor s inmunocompetente
3. Reaccin leucocitaria mixta es negativa
4. Receptor tiene clulas citotxicas sensibilizadas
5. Transplante se realiza entre individuos singnicos
47. Las molculas HLA de clase II:
1. Presentan pptidos ms largos que las de clase I
2. Estn asociados a la microglobulina beta-2
4. Caractersticamente presentan pptidos a las clulas NK:
5. Se expresan en todos los linfocitos T circulantes
48. Las clulas NK humanas:
1. Reconocen molculas de clase I del complejo principal de histocompatibilidad
2. Producen IL-2
3. Son excepcionalmente abundantes en los ganglios perifricos
4. Expresan receptores antignicos somticamente reordenados
5. Expresan constitutivamente FasL
49. Las inmunoglobulinas con mayor poder aglutinante

son:
1. IgM
2. IgG
3. IgA
4. IgE
5. IgD
50. Son clulas profesionales presentadoras de antgenos los (as):
1. Keratinocitos
2. Hepatocitos
3. Linfocitos B
4. Linfocitos T CD4
5. Clulas cebadas
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SOLUCIONES (0 050)
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3
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2
19
1
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1
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3
40
2
50
3
Test 3: Preguntas tipo test de la seccin de

inmunologa (201-260)
Autor: Salvador Resino | Visitas: 1.688 views | Categora: Apuntes de
Inmunologa
201. Las principales clulas presentadoras de antgenos son:

1. Monocitos y macrfagos.
2. Clulas dendrticas, linfocitos B y macrfagos.
3. Linfocitos B y mastocitos.
4. Linfocitos T, monocitos y mastocitos.
5. Clulas dendrticas convencionales y plasmocitoides.
202. Los leucocitos ms abundantes en sangre venosa de adulto humano, son los:
1. Neutrfilos.
2. Eosinfilos.
3. Basfilos.
4. Linfocitos T.
5. Linfocitos B.
203. Sobre las quimiocinas es corrector afirmar que:
1. Presentan muy baja homologa de secuencia.
2. Cada quimiocina tiene su propio receptor.
3. Siempre se sintetizan de novo despus de su induccin.
4. Son glicoprotenas de alto peso molecular y su mRNA es muy estable.
5. Intervienen en el trfico celular, organognesis y angiognesis.
204. Los antgenos T-independientes, TI-2:
1. Inducen cambio de isotipo.
2. Inducen maduracin en la afinidad.
3. Inducen respuestas secundarias.
4. Se comportan como activadores policlonales de linfocitos B.
5. Suelen presentar eptopos repetitivos.
205. Es correcto afirmar que la cadena invariante:
1. Es polimrfica y se une al dmero de MHC de clase II (MHC-II).
2. Es no polimrfica y se une a MHC-II en los endosomas.
3. Se une a MHC-II bloqueando el sitio de unin a pptidos.
4. Solo se expresa en las clulas dendrticas maduras.
5. Carece de motivos intracitoplasmticos y tiene como funcin estabilizar a MHC-II.
206. Los polimorfismos de las molculas de histocompatibilidad de clase II se concentran
en:
1. Los dominios V-alfa.
2. Los dominios V-beta.
3. Los dominios b2.
4. Los dominios a2.
5. La hendidura peptdica.
207. En el procesamiento y presentacin de pptidos por va endoctica, estn implicados:
1. El proteasoma.
2. Las protenas TAP.
3. La calnexina.
4. La molcula HLA-G.
5. La molcula HLA-DM.
208. Un macrfago humano expresa en su superficie molculas de histocompatibilidad:
1. Solo de clase I.
2. De clase II, pero de un nico haplotipo.
3. De clase I y II de los dos haplotipos.
4. De clase I y II, pero de un nico haplotipo.
5. Segn exclusin allica.
1. No requieren procesamiento para estimular a linfocitos T.
2. Se unen a dominios invariantes del receptor antignico.
3. Son presentados en la hendidura peptdica de molculas de clase I.
4. Son presentados en molculas CD1.
5. Son reconocidos por linfocitos Tgd.
210. El fragmento Fc de un anticuerpo:
1. Contiene regiones variables.
2. Conserva las funciones efectoras asociadas al isotipo del anticuerpo.
3. Conserva la capacidad de reconocimiento antignico.
4. Presenta regiones de hipervariabilidad.
5. Presenta secuencias ITAM.
211. La especificidad del reconocimiento antignico de un anticuerpo reside en:
1. Regiones constantes de la cadena ligera.
2. Regiones constantes de la cadena pesada.
3. Su dominio Fc.
4. Los extremos carboxilo terminal de sus cadenas pesadas y ligeras.
5. Las regiones variables de la cadena pesada y de la cadena ligera.
212. Las clulas B maduras:
1. Son objeto de seleccin negativa en la medula sea.
2. Solo expresan IgM pero no IgD en su membrana.
3. Expresan el receptor c-kit en su membrana.
4. Expresan IgM e IgD en su membrana.
5. Son dependientes de IL-7.

213. El ligando de CD40 (CD40L) induce:
1. Apoptosis.
2. Cambio isotpico de inmunoglobulinas.
3. Emigracin hacia los ganglios perifricos.
4. Liberacin de perforina.
5. Sntesis de IL-2.
214. Las clulas plasmticas:
1. Se dividen.
2. Experimentan hipermutacin somtica.
3. Expresan inmunoglobulinas de membrana.
4. No expresan molculas de clase II del complejo principal de histocompatibilidad.
5. Cambian de isotipo.
215. Las clulas T que reconocen antgeno presentado por MHC de clase II expresan el
correceptor:
1. CD3.
2. CD4.
3. CD8.
4. CD45.
5. CD5.
216. Los linfocitos Th1 efectores:
1. Reconocen molculas de histocompatibilidad de clase I.
2. Secretan IL-10.
3. Cooperan con macrfagos.
4. Cooperan con linfocitos B.
5. Reconocen lpidos en molculas CD1.
217. La maduracin de afinidad de los anticuerpos tiene lugar en:
1. Los folculos linfoide primarios.
2. Crtex del ndulo linftico.
3. Centro germinal del ndulo linftico.
4. Paracortex del ndulo linftico.
5. Medula sea.
218. La anafilaxis sistmica es desencadenada por:
1. Mastocitos asociados a los vasos sanguneos.
2. Inmunocomplejos circulantes.
3. Linfocitos Th2 activados.
4. Eosinfilos activados.
5. IgG.
219. La esclerosis mltiple es una enfermedad mediada por:
1. IgG.
2. IgE.
3. Inmunocomplejos.
4. Linfocitos T.
5. Anticuerpos contra el receptor de acetilcolina.
220. Cuando una preparacin de sangre perifrica humana es centrifugada en un gradiente
de Ficoll-Hypaque:
1. Granulocitos y linfocitos forman un halo en la interfase.
2. Eritrocitos y clulas NK sedimentan.
3. Granulocitos y eritrocitos van al fondo.
4. Se separan linfocitos B y T en funcin de su densidad.
5. Los monocitos sedimentan junto con los granulocitos.
221. Cul de las siguientes tcnicas usara para determinar la concentracin de una
citocina en suero?:
1. ELISPOT (Enzyme-linked immunosorbent spot).
2. Inmunodifusin radial simple.
3. Cromatografa de afinidad.
4. ELISA (Enzyme-linked immunosorbent assay).
5. Microscopia confocal.
222. Son clulas presentadoras de antgenos:
1. Linfocitos B.
2. Linfocitos T.
3. Clulas cebadas.
4. Leucocitos polimorfonucleares neutrfilos.
5. Leucocitos basfilos.
223. Existe una vacuna humana frente a:
1. Legionella pneumophila.
2. Pseudomonas aeruginosa.
3. Brucella melitensis.
4. Campylobacter jejuni.
5. Bordetella pertussis.
224. La IL-8:
1. Induce reordenamientos V(D)J.
2. Se comporta como quimiocina.
3. Regula la hematopoyesis.
4. Est implicada en la respuesta inmune especfica.
5. Induce proliferacin de linfocitos B.
225. El aceite de inmersin se emplea:
1. En la microscopia de campo oscuro.
2. Para aumentar el contraste.
3. Para aumentar la captacin de la luz por el objetivo y mejorar la apertura numrica.
4. Con los objetivos de 40X y 100X.
5. Entre el portaobjetos y el cubreobjetos.
226. La microscopia que se utiliza para la observacin de una muestra tenida con
diamidino-2-fenilindol (DAPI) es la:
1. Electrnica.
2. De contraste de fases.
3. De campo claro.
4. De campo oscuro.
5. De fluorescencia.
227. Las clulas T reguladoras son:
1. CD4+ CD45RA+ CD62L+.
2. CD8+ CD45RO+.
3. CD8+ CD25+.
4. CD4+ CD25+ FoxP3+.
5. CD8+ CD45RO+ CD62L+.
228. Los linfocitos T que expresan el receptor gamma-delta:
1. Carecen del complejo CD3.
2. Estn presentes en elevadas concentraciones en el epitelio.
3. Co-expresan el receptoralfa/beta tras una infeccin aguda.
4. Su reconocimiento est restringido por CD1.
5. Reconocen especficamente superantgenos.
229. Indique la asociacin correcta citosina-principales clulas productoras:
1. IL-2 / eosinfilos.
2. IL-10 / linfocitos Th1.
3. IL-4 / neutrfilos.
4. IL-12 / clulas dendrticas.
5. IFN-gamma/ linfocitos Th2.
230. Las clulas presentadoras de antgeno profesionales (APC) son:
1. Aquellas que expresan MHC de clase I.
2. Exclusivas de los rganos linfoides secundarios.
3. Cualquier clula en la que se induce la expresin de MHC de clase II.
4. Aquellas reconocidas por los linfocitos CD4+ y CD8+.
5. Las dendrticas, los macrfagos y los linfocitos
231. Es una caracterstica de las molculas del MHC de clase II el:
1. Unir pptidos de 8 aminocidos.
2. Expresarse en todas las clulas somticas.
3. Pertenecer a la superfamilia de las inmunoglobulinas.
4. Ser glicoprotenas formadas por la cadena alfa y la beta-2 microglobulina.
5. Interaccionar con el correceptor CD8 expresado en los linfocitos T.
232. En una tincin inmunohistoquimica de un tejido empleando un anticuerpo anti-CD14
aparecen marcados los (las):
1. Monocitos.
2. Clulas plasmticas.
3. Linfocitos T.
4. Clulas endoteliales.
5. Clulas NKT.
233. La maduracin de afinidad y el cambio de isotipo de las inmunoglobulinas se dan en el
(la):
1. Crtex del timo.
2. Paracortex de los linfonodos.
3. Folculo primario.
4. Centro germinativo.
5. Vaina periarteriolar.
234. En comparacin con la inmunidad adaptativa, la innata:
1. Se vale de receptores de especificidad alta y muy diversa.
2. Se desarrolla muy lentamente.
3. Tiene asociada memoria inmunolgica.
4. Reconoce patrones moleculares.
5. Modifica progresivamente sus caractersticas.
235. Un fragmento Fc de un anticuerpo:
1. Conserva las funciones efectoras asociadas al isotipo del anticuerpo.
2. Conserva la capacidad de reconocimiento del antgeno.
3. Incluye regiones constantes de las cadenas pesadas y ligeras.
4. Incluye los dominios N terminales de las cadenas pesadas y ligeras.
5. Tiene una masa molecular del orden de 100 kDa.
236. La especificidad antignica de un anticuerpo la determina la secuencia aminoacdica
de su (sus):
1. Isotipo.
2. Dominios Fc.
3. Regiones determinantes de complementariedad (CDRs).
4. Regin bisagra.
5. Extremos carboxlicos.
237. El transporte de IgA hacia el exterior de las mucosas esta mediado por:
1. La molcula HLA-DM.
2. El receptor TLR4.
3. El receptor Rc-alfa-R.
4. La cadena J.
5. El receptor poli-IgR.
238. Durante la diferenciacin de linfocitos B en la medula sea, se ejerce seleccin
negativa sobre las (los):
1. Clulas pre-B.
2. Clulas pro-B.
3. Clulas plasmticas.
4. Linfocitos B inmaduros.
5. Linfocitos B maduros.
239. A diferencia de los receptores de los linfocitos B, los receptores antignicos de los
linfocitos T alfa/beta maduros:
2. No reconocen antgenos en su forma nativa.
3. Experimentan cambio isotpico.
4. Generan formas circulantes solubles.
5. No tienen distribucin clonotpica.
1. Son ciertos polisacridos.
2. Son procesados por va endoctica.
3. Se comportan como nitrgenos de clulas B.
4. Son presentados en el contexto de molculas MHC de clase I.
5. Se comportan como activadores policlonales de linfocitos T.
241. La perforina es:
1. Producida por los linfocitos T citotxicos y NK.
2. Un pptido antimicrobiano.
3. Una citosina pro-inflamatoria.
4. Un componente del complemento srico.
5. Producida por los linfocitos Th1.
242. En la medula de los lbulos timicos:
1. Se modifica la afinidad de los receptores de los timocitos para molculas propias.
2. No hay expresin de molculas MHC de clase II.
3. Predomina la seleccin positiva de timocitos inmaduros.
4. Se completa la expresin del receptor antignico de los timocitos.
5. Predomina la seleccin negativa de timocitos.
243. Las respuestas de tipo Th1 se caracterizan por la alta produccin de:
1. Anticuerpos IgG4.
2. IL-17.
3. IL-10 y TGF-beta.
4. IL-2 e IFN-gamma.
5. IL-4 e IL-5.
244. El cambio de isotipo de los linfocitos B:
1. Esta catalizado por los enzimas RAG.
2. Requiere contactos CD40/CD40L.
3. Es un fenmeno T-independiente.
4. Tiene lugar en la medula sea.
5. Tiene tambin efectos en la afinidad de sus receptores antignicos.
245. Las clulas plasmticas:
1. Se dividen muy activamente.
2. No cambian de isotipo.
4. Expresan molculas MHC de clase II.
5. Expresan inmunoglobulinas de membrana.
246. Es caracterstico de una respuesta humoral adaptativa primaria:
1. Su alta afinidad por el antgeno.
2. El alto nivel de hipermutacin somtica.
3. La produccin mayoritaria de IgM.
4. La produccin mayoritaria de IgE.
5. Su desarrollo en el plazo de 24-48 horas.
247. Los linfocitos NK humanos:
1. Expresan CD3.
2. Expresan receptores para IgG.
3. Reordenan los genes del receptor de los linfocitos T.
4. Reordenan los genes de inmunoglobulinas.
5. Reconocen especficamente antgenos virales.
248. El dao asociado a la dermatitis por contacto esta mediado por:
1. Anticuerpos especficos.
2. Activacin del complemento srico.
3. Linfocitos Th1 especficos.
4. Linfocitos T CD8+ especficos.
5. Eosinfilos activados.
249. El choque anafilctico es consecuencia de la desgranulacin de:
1. Linfocitos NK.
2. Eosinfilos.
3. Mastocitos asociados a los vasos sanguneos.
4. Mastocitos asociados a las mucosas.
5. Linfocitos T citotxicos.
250. En los mamferos, los receptores del tipo Toll o TLRs actan como receptores de:
1. Sealizacin.
2. Fagocitosis.
3. Formas activadas del complemento.
4. Anticuerpos.
5. Hiper-respuesta.
251. En un Western-blot:
1. Se detectan solo eptopos conformacionales.
2. No pueden ser utilizados fragmentos Fab.
3. El antgeno es sometido a electroforesis.
4. Los anticuerpos utilizados no pueden ser monoclonales.
5. Antgeno y anticuerpo han de tener carga de signo opuesto.
252. En el sndrome de hiper-IgM ligado al cromosoma X:
1. Ocurre hipermutacin somtica.

2. Se generan centros germinales.
3. Se generan linfocitos B de memoria.
4. Los linfocitos B son defectivos en el enzima Btk.
5. Los linfocitos Th son defectivos en CD40L.
253. Est ntimamente ligada al receptor del linfocito T:
1. CD80 (B7.1).
2. CD86 (B7.2).
3. CD3.
4. CD28.
5. CD62L.
254. Los mastocitos o clulas cebadas segregan:
1. Amilasa.
2. Anticuerpos.
3. Histamina.
4. Insulina.
5. Surfactante.
255. Es caracterstica de una reaccin de hipersensibilidad de tipo IV la:
1. Desgranulacin de mastocitos mediada por IgE.
2. Lisis celular por activacin del complemento.
3. Activacin de macrfagos por IFN-gamma.
4. Desgranulacin de mastocitos mediada por C3a y C5a.
5. Quimiotaxis de neutrfilos.
256. Qu citoquina induce diferenciacin Th1?:
1. TNF-alfa.
2. IFN-alfa.
3. IL-6.
4. IL-12.
5. IL-10.
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SOLUCIONES (201 260)
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Test 4: Preguntas tipo test de la seccin de inmunologa (151-200)
Test 2 : Preguntas tipo test de la seccin de inmunologa (051-100)
Test: Preguntas tipo test de la seccin de diagnstico inmunolgico
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Test 4: Preguntas tipo test de la seccin de

inmunologa (151-200)
Autor: Salvador Resino | Visitas: 1.459 views | Categora: Apuntes de
Inmunologa
151. La cadena ligera L de un anticuerpo:

1. Interviene en la unin al antgeno
2. Es bivalente
3. Se une a receptores Fc
4. Es capaz de activar al complemento srico
5. Slo tiene dominios V
152. La IgE humana se caracteriza por:
1. Unirse a receptores Fc de fagocitos
2. Inducir la desgranulacin de las clulas ceba-das
3. Estar presente en la membrana de clulas B maduras
4. Ser la nica inmunoglobulina que cruza la placenta
5. Ser secretada en forma pentamrica
153. El paso de anticuerpos a las mucosas y la leche ocurre por:
1. Translacin
2. Transporte activo
3. Inmunizacin pasiva
4. Transcitosis
5. Difusin
154. Con respecto de la respuesta primaria, los anticuerpos sricos inducidos en la
secundaria:
1. Incluyen niveles ms altos de IgM
2. Presentan una afinidad mayor por el antgeno
3. Duran menos
4. Aparecen con ms retraso
5. Estn en menor cantidad que en la respuesta primaria
155. La tecnologa ms eficiente y precisa para tipificar leucemias empleando
anticuerpos monoclonales frente a antgenos de la superficie de determinados linajes
celulares es la:
1. Citometra de flujo
2. Inmunoprecipitacin
3. Reaccin en cadena de polimerasa
4. Reaccin de aglutinacin
5. Inmunoabsorcin ligada a enzima o ELISA
156. El correceptor del linfocito B es un complejo proteico:
1. Que modifica seales estimuladoras
2. Responsable de la endocitosis del antgeno
3. Formado por una cadena pesada de IgG y CD28
4. Formado por una cadena ligera de IgG y CD28
5. Nuclear que regula la diferenciacin a clulas plasmticas
157. El proceso de seleccin negativa en el timo consiste en:

1. La supervivencia de clulas T cuyos TCR (receptores del linfocito T) reconocen
molculas de MHC propias
2. La eliminacin de las clulas T que reaccionan de forma muy intensa con MHC propio
3. La segregacin de timocitos que fracasan en la seleccin positiva
4. La proliferacin de precursores de clulas T en la corteza externa
5. La seleccin de timocitos que expresan TCR
158. Las clulas T gamma delta humanas:
1. Expresan los correceptores CD4 y CD8
2. Expresan una alta diversidad de cadenas gamma y delta
3. Estn restringidas por CD1
4. Estn restringidas por el sistema HLA en la presentacin de antgenos
5. Reconocen ligandos no peptdicos
159. Las clulas TH se activan por:
1. El reconocimiento de un complejo antgeno-MHC clase II en una clula presentadora de
antgeno
2. El reconocimiento de un complejo antgeno-MHC clase I en un macrfago
3. La interaccin con un linfocito TC4. El reconocimiento de un complejo antgenoanticuerpo en un linfocito B
5. La presencia de toxinas en el medio
160. La presentacin de antgenos no peptdicos se lleva a cabo preferentemente a
travs de:
1. MHC clase I
2. MHC clase II
3. Familia CD1 de molculas clase I no clsicas
4. Familia CD2 de molculas clase I clsicas
5. Familia CD2 de molculas clase II no clsicas
161. La citocina que se une a su receptor en la misma clula que la sintetiza posee una
accin:
1. Antagnica
2. Sinrgica
3. Redundante
4. Pleiotrpica
5. Autocrina
162. Es una citocina caractersticamente secretada por linfocitos TH1:
1. IFN-gamma
2. IL-4
3. IL-5
4. IL-10
5. IL-13
163. Las reacciones autoinmunes iniciadas contra un antgeno propio pueden
provocar lesiones tisulares con formacin y liberacin de otros antgenos que activan a
linfocitos especficos y exacerban la enfermedad. Este fenmeno recibe el nombre de:
1. Susceptibilidad gentica
2. Mantenimiento de la autotolerancia
3. Mimetismo molecular
4. Propagacin del eptopo
5. Reaccin mixta de linfocitos
164. Un trastorno sistmico mediado por inmunocomplejos genera la:
1. Diabetes mellitus insulinodependiente
2. Esclerosis mltiple
3. Enfermedad de Graves
4. Miastenia grave
165. Las reacciones de hipersensibilidad de tipo I son mediadas por:
1. IgE unida a receptores Fc de mastocitos o basfilos
2. Inmunocomplejos que activan el complemento
3. Enzimas lticas que producen lesiones localizadas
4. IgG y clulas con citotoxicidad dependiente de anticuerpos
5. Citocinas que activan macrfagos
166. Los antgenos que se expresan en las clulas fetales antes de que entre en pleno
funciona-miento el sistema inmunitario, y que se reconocen como extraos si aparecen
ms tarde en clulas cancerosas se conocen como:
1. MUC1
2. Ganglisidos GD2 y GD3
3. Marcadores oncognicos
4. Endotoxinas
5. Antgenos tumorales oncofetales
167. El trasplante de tejidos entre gemelos monozigticos recibe el nombre de:
1. Autoinjerto
2. Aloinjerto
3. Isoinjerto
4. Xenoinjerto
5. Injerto nulo
168. La supervivencia intracelular de algunos patgenos puede provocar la activacin
crnica de clulas CD4+, acumulacin de macrfagos activados y necrosis tisular, lo
que da lugar a la formacin de:
1. Papilas
2. Pstulas
3. Corpsculos
4. Granulomas
5. Escaras
169. Los macrfagos activados producen pptidos catinicos que destruyen la

integridad de las membranas bacterianas y que se conocen como:
1. Perforinas
2. Granzimas
3. Opsoninas
4. Polimixinas
5. Defensinas
170. Las clulas plasmticas productoras de anti-cuerpos derivan de:
1. Linfocitos B
2. Linfocitos T
3. Macrfagos
4. Monocitos
5. Clulas mesenquimales
171 Los receptores tipo Toll de los fagocitos son receptores:
1. Endocticos
2. De sealizacin
3. De opsonizacin
4. De formas activadas del complemento
5. De dominios Fc de anticuerpos
172. La respuesta inmunitaria innata precoz frente a las infecciones vricas es mediada
principalmente por:
1. IL-4
2. IL-10
3. IL-12
4. Interferones (IFN)
5. Linfotoxinas
173. El receptor del tipo Toll (TLR) que reconoce el RNA bicatenario de origen viral
es:
1. TLR2
2. TLR3
3. TLR4
4. TLR7
5. TLR9
174. Se transporta a travs de la placenta desde la madre al feto la:
1. IgG
2. IgM
3. IgA1
4. IgD
5. Todas las anteriores, salvo la IgM
175. El isotipo de un anticuerpo depende de la secuencia de aminocidos de la regin:
1. Constante de las cadenas ligeras

2. Variable de las cadenas ligeras
3. Constante de las cadenas pesadas
4. Variable de las cadenas pesadas
5. Variable de las cadenas pesadas y ligeras en su conjunto
176. El componente secretor:
1. Permite la formacin de la IgA dimrica
2. Es una parte del receptor poli-Ig que queda unida a la IgA dimrica
3. Realiza la dimerizacin de la IgA
4. Transporta IgA monomrica al espacio extravascular
5. Protege a la IgA monomrica frente a proteasas
177. El principal estmulo para el cambio de isotipo de la cadena pesada durante la
activacin de los linfocitos B es(son):
1. Las citocinas sintetizadas por los linfocitos T cooperadores junto con el ligando de CD40
expresado por estos linfocitos
2. La activacin de los eosinfilos por la unin de IgE a los receptores Fc
3. El agrupamiento de IgM e IgD por unin de antgenos multivalentes
4. La IL-12 y el IFN-gamma generados por las clulas presentadoras de antgenos
5. La apoptosis de los linfocitos B que expresan IgM
178. Con respecto del sistema del complemento:
1. La C3 convertasa de la va alternativa es C3b3b3b
2. El sistema es termoestable
3. MASP-1 y MASP-2 son sern-proteasas
4. La va clsica se inicia por lisis espontnea de C3
5. C5a inicia la formacin del complejo de ataque a la membrana (MAC)
179. Un defecto en el sistema NADPH-oxidasa de macrfagos y neutrfilos puede
conducir al desarrollo de:
1. Enfermedad granulomatosa crnica
2. Deficiencia de la adhesin leucocitaria
3. Enfermedad de Chediak-Higashi
4. Angioedema hereditario
5. Encefalomielitis autoinmunitaria
180. Los folculos primarios estn formados por:
1. Linfocitos B vrgenes y macrfagos activa-dos
2. Linfocitos B, linfocitos T y monocitos
3. Linfocitos B vrgenes y de memoria
4. Centrocitos en la zona oscura y centroblastos en la zona clara
5. Linfocitos B en reposo y clulas foliculares dendrticas
181. Indique la asociacin receptor ligando correcta:
1. ICAM-1 LFA-1
2. TLR4 RNA de doble cadena
3. MBL Pentraxina
4. Protena C reactiva Manosa
5. CD2 IL-4
182. La cadena invariante:
1. Es sensible a las proteasas del retculo en-doplsmico
2. Pertenece a la superfamilia de las inmunoglobulinas
3. Tiene un dominio transmembrana que per-mite conducir a las molculas MHC de clase II
(MHC-II) a la membrana plasmtica
4. Facilita la interaccin de MHC-II con la tapasina, permitiendo as la carga del pptido
procedente del proteosoma
5. Se degrada dejando un fragmento que interacciona con el surco de unin de MHC-II
183. Las molculas MHC de clase I (MHC-I):
5. Estn formadas por dos cadenas alfa y dos cadenas beta
6. No estn involucradas en el reconocimiento de clulas tumorales por clulas NK
7. No participan en las interacciones con clulas T CD8+
8. Unen pptidos generados en endosomas
5. Son muy polimrficas
184. La molcula CD28:
1. Participa en la coestimulacin de las clulas T
2. Permite a los linfocitos T producir IL-1 y no IL-2
3. No interacciona con CD80
4. Se expresa slo en las clulas T activadas
5. Tiene un dominio intracitoplasmtico que activa NF-kappa-beta
185. Es un factor de crecimiento de progenitores hematopoyticos la citosina:
1. IFN-gamma
2. IL-9
3. TGF-beta
4. IL-3
5. IL-10
186. Es caracterstico de las clulas T CD8+:
1. Reconocer pptidos procesados por la va endoctica
2. No precisar de seales coestimuladoras para ser activadas
3. No responder a la IL-2 durante la expansin clonal
4. Liberar perforinas y granzimas
5. Eliminar bacterias patgenas extracelulares
187. Seale cul de las siguientes relaciones es la correcta:
1. Hipersensibilidad de tipo I Enfermedad del suero
2. Hipersensibilidad de tipo I Eritroblastosis fetal
3. Hipersensibilidad de tipo II Asma alrgica
4. Hipersensibilidad de tipo III Anafilaxia
5. Hipersensibilidad de tipo IV Dermatitis por contacto
188. La seleccin positiva permite la continuidad en el sistema inmune de los timocitos

que expresan receptores T (TCRs):
1. Autorreactivos
2. Que interaccionan con afinidad alta o media con molculas de MHC propias
3. Como 2, pero con afinidad baja
4. Completos
5. Y correceptores CD4 y CD8
189. CD44, CD45RO y Bcl-2 son marcadores de linfocitos:
1. T naive (vrgenes)
2. T de memoria
3. T efectores
4. T y B
5. T helper (cooperadores)
190. La tolerancia central se produce cuando los linfocitos:
1. Maduros reconocen autoantgenos en los tejidos perifricos
2. Maduros reconocen antgenos en ausencia de coestimuladores
3. Maduros son estimulados repetidamente por antgenos persistentes
4. Inmaduros encuentran los antgenos propios en el timo y la mdula sea
5. Inmaduros interaccionan con clulas pre-sentadoras de antgeno
190. Son anafilotoxinas implicadas en la desgranulacin de mastocitos y basfilos
durante el curso de una respuesta inflamatoria:
1. Histamina y granzima
2. TNF-alfa e IL-12
3. Las toxinas diftrica y pertsica
4. C3a, C4a y C5a
5. C5b6789
192. Es un ejemplo clsico de superantgeno:
1. La protena de la cpside del virus de la hepatitis
2. La enterotoxina estafiloccica
3. El flagelo de Borrelia burgdorferi
4. Los polisacridos de membrana de Trypanosoma cruzi
5. Los lipopolisacridos de bacterias gram-negativas
193. En la fase ms temprana de una respuesta inflamatoria, las clulas que migran
desde la sangre y alcanzan las primeras el foco de infeccin son los(las):
1. Macrfagos
2. Dendrticas
3. Neutrfilos
4. Linfocitos T
5. Linfocitos B
194. El proceso por el cual las clulas NK destruyen clulas a las que se han unido
anticuerpos especficos es denominado:
1. Citotoxicidad celular dependiente de anti-cuerpos

2. Opsonizacin
3. Linfolisis mediada por Fc
4. Muerte celular programada inducida
5. Erradicacin inmune
195. El subtipo celular TH1 es responsable de:
1. La neutralizacin viral
2. La secrecin de IL-1, IL-11 e IL-18
3. Cooperar en la activacin de las clulas B
4. La secrecin de IL-4, IL-5, IL-6 e IL-10
5. La generacin de hipersensibilidad retarda-da
196. Las clulas T helper (cooperadoras) se activan por:
1. El reconocimiento de un complejo antgeno-MHC-II en una clula presentadora de
antgeno
2. El reconocimiento de un complejo antgeno-MHC-I en un macrfago
3. La interaccin con un linfocito T citotxico
4. El reconocimiento de un complejo antgeno-anticuerpo en un linfocito B
5. La presencia de citotoxinas en el medio
197. La sustancias capaces de aumentar la inmunogenicidad se conocen como:
1. Haptenos
2. Eptopos
4. Coadyuvantes
5. Inmungenos
5. Determinantes antignicos
198. Es una protena de fase aguda:
1. Protena C reactiva
2. LFA-1
3. C2 del complemento
4. CCL19
5. Interfern alfa
199. Los tumores susceptibles a la lisis por clulas NK son aquellos en que las clulas
tumorales:
1. Aumentan la expresin de CD44
2. Producen IFNgamma
3. Disminuyen la expresin de MHC de clase I
4. Expresan de forma aberrante CD99
5. Expresan elevadas cantidades de factores angiognicos
200. En la activacin del complemento C5a:
1. Se comporta como opsonina
2. Activa la disociacin de las convertasas de C3
3. Inicia la formacin del complejo de ataque a la membrana
4. Se comporta como anafilotoxina

5. Aclara y elimina inmunocomplejos
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Test: Preguntas tipo test de la seccin de diagnstico inmunolgico

Laboratorio de Inmunohistoquímica2015

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Laboratorio de Inmunohistoquímica2015

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Laboratorio de Inmunohistoqumica:

Creado recientemente en las

La tcnica de Inmunohistoqumica se fundamenta en la reaccin Antgeno - Anticuerpo.

Ficha tcnica del inmunomarcaje indirecto con amplificacin peroxidasa-dab

Ebullicin en tampn citrato: 130

2) reconocen antgenos en el contexto de molculas del complejo principal de

4) aumentar la secrecin de heparina por parte de los mastocitos.

2) la afinidad es mayor en las respuestas primarias que en las secundarias.

. El idiotipo de una molcula de anticuerpo est determinado por la secuencia de

5) slo se expresan en clulas presentadoras de antgenos.

4) no incluyen en su estructura puentes disulfuro.

5) dos fragmentos Fab y un fragmento pFc.

2) si son polimricas o monomricas.

5) cadenas pesadas de IgG, IgM e IgD.

70. Qu clase o isotipo de Igs se encuentra en el plasma habitualmente en forma

4) inmunocomplejos con equivalencia Ag-Ac.

asociacin con la cadena de beta-2 micro-globulina.

1) se expresan esencialmente en todas las clulas nucleadas.

5) no incluye interacciones hidrofbicas.

1) lisis de clulas extraas.

2) incremento de permeabilidad vascular.

ara que un linfocito T reconozca un antgeno a travs de su TCR hace falta

Tejido vascular y linfoide (- a ++)

Las CPA o clulas accesorias participan activamente en la iniciacin de la respuesta

Molcula del CPA

Molcula del Linfocito T

d) Expresin de molculas co-estimuladoras en la superficie celular (B7.1 y B7.2) o

Por las CPA

Macrfago Mdula Variable

Fagocitosis (?) Desconocida:

10.2. PROCESAMIENTO DEL ANTGENO: Ag extracelulares e intracelulares.

10.2.1.2. MOLCULAS DE CLASE II

Los estadios del procesamiento de Ag intracelular son los siguientes:

(LMP) y se encuentran en un orgnulos llamado PROTEOSOMA. Los proteosomas estn

d) Unin de pptidos a molculas de nueva sntesis de MHC-I para formar complejos

10.2.2.2. LA VA EXGENA: PRESENTACIN POR MHC-II.

Los estadios del procesamiento de Ag extracelular son los siguientes:

f) Transporte del complejo a la superficie celular. Finalmente el MHC-II unido al

10.2.2.3. SEPARACIN DE LA VA EXOGENA.

Como es lgico, las clulas presentadoras de antgeno (APC) expresan simultneamente

10.2.3. CARACTERSTICAS DE LOS PPTIDOS ASOCIADOS A MOLCULAS DE MHC.

Antgenos del MHC

Test: Preguntas tipo test de la seccin de inmunologa humoral y celular

Test: Preguntas de la seccin de molculas que participan en el reconocimiento

Test: Preguntas tipo test de la seccin de organizacin del sistema inmune

Gentica del MHC

Necesita ser wikificado conforme a las convenciones de estilo de

Carece de fuentes o referencias que aparezcan en una fuente

Por favor, edtalo para mejorarlo, o debate en la discusin acerca de

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4 Northern blot inverso

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