3.

Mtodos Cromatogrficos
3.1 Cromatografa
A principios del siglo XX, el botnico ruso Tswett separ pigmentos vegetales
pasando soluciones de estos pigmentos por una columna de vidrio empaquetada
con CaCO3. Las especies separadas aparecan como bandas de colores, lo que
dio origen al nombre del mtodo.
chroma = color graphein = escribir
3.1.1 Concepto:
I.U.P.A.C. define la cromatografa de forma ms amplia como:
Mtodo usado principalmente para la separacin de los componentes de una
muestra, en el cual los componentes son distribuidos entre dos fases, una de las
cuales es estacionaria, mientras que la otra es mvil.
3.1.2 Fase estacionaria y fase mvil
Distribucin de solutos entre dos fases, una de las cuales se encuentra en
movimiento, por lo que se le conoce como fase mvil y que consiste en un fluido
(gas, lquido) cuya funcin es arrastrar a la muestra a travs de una fase fija,
conocida como fase estacionaria, constituida por un slido o un lquido fijado en un
slido y que es inmiscible con la fase mvil.
3.1.3 Clasificacin de los mtodos cromatogrficos.
Los mtodos cromatogrficos se pueden clasificar de dos maneras. La primera de
ellas se basa en los medios fsicos por medio de los cuales las fases estacionaria
y mvil se ponen en contacto. En la cromatografa en columna, un tubo estrecho
contiene la fase estacionaria a travs de la cual la fase mvil se fuerza a pasar por
presin.
En la cromatografa en plano, la fase estacionara fija sobre una placa plana o en
los intersticios de un papel; en este caso la fase mvil se desplaza a travs de la
fase estacionaria por capilaridad o por gravedad.
3.2 Cromatografa de gases.
La cromatografa de gases es una tcnica que separa mezclas en componentes
individuales. Se utiliza para identificar componentes y medir sus respectivas
concentraciones.
3.2.1 Instrumentacin.
1.Deposito de gases y controladores de
presin y caudal
2.Inyector
3.Columna cromatografa y horno
4.Detector
5.Amplificador de seal
6.Registrador.

3.2.2 Cromatografa de gases acoplada a espectrometra de masas. CG/EM.

La cromatografa de gases es una tcnica separativa que permite la separacin de
mezclas muy complejas. Pero una vez separados, detectados, e incluso
cuantificados todos los componentes individuales de una muestra problema, el
nico dato de que disponemos para la identificacin de cada uno de ellos es el
tiempo de retencin de los correspondientes picos cromatogrficos. Este dato no
es suficiente para una identificacin inequvoca, sobre todo cuando analizamos
muestras con un nmero elevado de componentes.
Por otra parte, la espectrometra de masas puede identificar de manera casi
inequvoca cualquier sustancia pura, pero normalmente no es capaz de identificar
los componentes individuales de una mezcla sin separar previamente sus
componentes, debido a la extrema complejidad del espectro obtenido por
superposicin de los espectros particulares de cada componente.
Por lo tanto, la asociacin de las dos tcnicas, GC (Gas Chromatography) y MS
(Mass Spectrometry) da lugar a una tcnica combinada GC-MS que permite la
separacin e identificacin de mezclas complejas.
3.3 Cromatografa de lquidos de alta resolucin.
La cromatografa es una tcnica para separar mezclas en sus componentes
individuales para que puedan ser identificados y cuantificados. En cromatografa
lquida (LC), un lquido en movimiento (fase mvil) lleva la muestra a travs de una
fase estacionaria (el soporte slido encontrado dentro de una columna de LC). Los
componentes de la muestra se separan en base a sus diferencias de afinidad con
la fase estacionaria. La LC es adecuada para el anlisis de molculas no voltiles
y trmicamente sensibles, incluyendo compuestos de alto peso molecular como
protenas. Adems, puede ser una herramienta til para purificar molculas
pequeas y macromolculas derivadas de sntesis qumica o procesos naturales.
Cada equipo de cromatografa lquida generalmente incluye los siguientes
componentes claves: un sistema de bombeo para el manejo de los solventes, un
inyector de muestra, una columna o columnas, detectores y un sistema de manejo
de datos. Diferentes tipos de bombas, inyectores, columnas, detectores y
colectores de fracciones se utilizan conjuntamente en diversas configuraciones,
basadas en las necesidades de la muestra.
3.3.1 Instrumentacin
Fuente regulador de helio, Resipientes de solvente, Valvula para entregar los
solventes, Valvula de salida unidireccional, Bomba, Amortiguador de pulso, Valvula
de entrada unidireccional, Valvula de drenaje, Filtro, Regulador de contra presin,
Traductor de presin, Valvula del inyector, Columna, detector.
3.3.2 Sistema de bombeo
Entre los requisitos para las bombas en cromatografa de lquidos est
1) la generacin de presiones de hasta 6000 psi (lb/in2) o 414 bares,
2) salida libre de pulsos,

3) tasas de flujo de 0.1 a 10 mL/min,

4) Reproducibilidad del flujo de 0.5% relativo o mejor y
5) componentes resistentes a la corrosin a causa de la diversidad de solventes.
3.3.3 Columnas y fases estacionarias
El objetivo de las columnas es producir picos estrechos y bien separados de una
muzcla multi-componente
La fase estacionaria
Las propiedades necesarias para una fase estacionaria lquida inmovilizada son:
1. Caractersticas de reparto (factor de capacidad ' y factor de selectividad )
adecuados al analito.
2. Baja volatilidad, el punto de ebullicin de la fase estacionaria debe ser al
menos 100 C mayor que la mxima temperatura alcanzada en el horno.
3. Baja reactividad.
4. Estabilidad trmica, para evitar su descomposicin durante la elucin.
3.3.4 Detectores.
Las caractersticas de un detector ideal son:

Sensibilidad: Es necesario que pueda determinar con precisin cundo

sale analito y cuando sale slo el gas portador. Tienen sensibilidades entre 10 8
y 10-15 g/s de analito.

Respuesta lineal al analito con un rango de varios rdenes de magnitud.

Tiempo de respuesta corto, independiente del caudal de salida.

Intervalo de temperatura de trabajo amplio, por ejemplo desde

temperatura ambiente hasta unos 350-400 C, temperaturas tpicas trabajo.

Estabilidad y reproducibilidad, es decir, a cantidades iguales de analito

debe dar salidas de seal iguales.

Alta fiabilidad y manejo sencillo, o a prueba de operadores inexpertos.

Respuesta semejante para todos los analitos, o

Respuesta selectiva y altamente predecible para un reducido nmero de

analitos.

3.3.5 Fase normal y fase inversa.

Fase normal: cuando la fase estacionaria es ms polar que la fase mvil

Fase invertida: cuando es ms polar la fase mvil
3.3.6 Derivatizacin.
Es el proceso que consiste en modificar qumicamente un compuesto para
producir un derivado con nuevas propiedades que faciliten o permitan su anlisis
Aplicaciones:
La cromatografa de gases tiene amplia aplicacin, en las industrias se enfoca
principalmente a evaluar la pureza de los reactantes y productos de reaccin o
bien a monitorear la secuencia de la reaccin, para los fabricantes de reactivos
qumicos su aplicacin para la determinacin de la pureza es lo ms importante.