CROMATOGRAFA

PRACTICA N 5

COMPETENCIA GENERAL:
Determina por fraccionamiento los

aminocidos que componen una muestra

problema de naturaleza proteica

1. MARCO TEORICO
CROMATOGRAFIA
La cromatografa es uno de los principales mtodos para la separacin
de especies qumicas estrechamente relacionadas en mezclas
complejas. La cromatografa es un mtodo fsico de separacin basado
en la distribucin de los componentes de una mezcla entre dos fases
inmiscibles, una fija o estacionaria y otra mvil.
El uso de la cromatografa en papel para la separacin e identificacin
de aminocidos es de gran importancia, la fase mvil empleada
generalmente es una mezcla de nbutanol/cido actico/agua. La
separacin implica que los aminocidos cuya cadena lateral (R) tenga
un carcter ms apolar, tendrn tendencia a desplazarse con la fase
mvil, mientras que lo aminocidos que sean polares, ya sean con carga
o sin carga, sern retenidos por la fase estacionaria. Ello es as, porque
la fase mvil est formada por solventes que son ms apolares que el
agua, que es el solvente de la fase estacionaria.
El papel que se utiliza para la cromatografa est fabricado con celulosa
pura y fibras de celulosa para intercambio inico. Este papel permite
separaciones eficientes y rpidas de sustancias orgnicas o inorgnicas
cargadas. Entre los diferentes tipos de papel se encuentra el tipo DE81
que es un papel delgado (0,20 mm) con grupos funcionales de dietil
aminoetilo (DEAE) celulosa. La velocidad de flujo es de 95 mm/30 min
(en agua), acta como un intercambiador de aniones dbilmente bsico
para separacin de aniones, nucletidos y aminocidos, tambin se lo
usa para ensayos enzimticos y aplicacin de la tcnica de la huella
dactilar.

2. MATERIALES UTILIZADOS

vaso
preci
pitad
o

bag
uet
a

hor
no
pap
el
gom
a

pab
ilo

3. REACTIVOS UTILIZADOS

cint
a
sco
tch

ninhi
drin
a
argin
ina
cisti
na

4. PROCEDIMIENTO
i) Medir 2 cm al papel de goma y trazarlo con un lpiz, escribir con 2
puntos en ella adems de pegar un pedazo de pabilo en la parte
superior de la hoja.
ii) En el primer punto agregar cuidadosamente una gota arginina y en el
segundo punto agregar albumina, rodear con un lpiz la parte
humedecida por cada uno de ellos.
iii) Seguidamente colocar la hoja de goma dentro del frasco contenido
con agua destilada hasta menos de la mitad pero sin tocar los trazos
del lpiz.
iv) Llevarlo al horno para secar.
v) Despus colocarlo en un recipiente contenido de ninhidrina y
humedecerlo por unos segundos y luego volver a llevarlo al horno a
secar.
vi) Colocar la hoja de nuevo en el frasco contenido de agua destilada
por 20 minutos as se podr observar que el agua destilada asciende
hasta cierto punto y trazar con el lpiz hasta donde ascendi el agua
destilada y determinar sus Rf.

albu
min
a

alani
na

agu
a
dest
ilada

5. PREGUNTAS
Qu relacin tiene la solucin de ninhidrina en la identificacin de
aminocidos?
Cuando son digeridos se agrega ninhidrina, la cual reacciona con el
grupo alfa-amino de los aminocidos y los oxida, reducindose la
ninhidrina a hidridantina,y liberando este alfa-amino como amonio
(NH4+) ste se condensa con una ninhidrina y una hidridantina
formando un producto que posee coloracin prpura y por tanto puede
medirse su concentracin por absorbancia, la cual es proporcional a la
concentracin de amonio y sta es proporcional a la de aminocido.
Qu ventaja tiene la cromatografa en la separacin de
aminocidos?
Es ideal para detectar concentraciones bajas de aminocidos,
utilizndose para revelar su presencia en cromatogramas y fracciones
procedentes de otras tcnicas de separacin.
Averigue otros tipos de cromatografas

Qu caractersticas debe de tener un solvente para ser utilizados

como excluyentes en cromatografa de papel?