OBJETIVO

El alumno conocer los eritrocitos sensibilizados por anticuerpos incompletos,

que son capaces de ser aglutinados por la Antiglobulina Humana.

INTRODUCCIN
La prueba de antiglobulina o prueba de Coombs con el empleo del suero
antiglobulina humana poliespecfico, es la tcnica ms utilizada en
inmunohematologa. Los componentes principales del reactivo antiglobulina son
los anticuerpos anti-IgG y anti-C3 (C3d/C3dg); la actividad anti-IgA y anti-IgM no
es imprescindible pero deseable.1 La presencia de estos anticuerpos permite la
deteccin de autoanticuerpos IgM (no aglutinantes) e IgA en la prueba de
antiglobulina directa (PAD) para el diagnstico de la anemia hemoltica
autoinmune (AHAI) que, en ocasiones, por las dificultades en su deteccin, estn
involucrados en la etiologa de la AHAI "Coombs negativa".
La prueba de Coombs detecta, como mnimo, entre 200 y 500 molculas de IgG
por hemate. El lmite de deteccin para los anticuerpos de los isotipos IgA e IgM
no ha sido determinado, probablemente porque no existe consenso para la
estandarizacin de los reactivos antiglobulnicos con estas especificidades, por su
baja frecuencia, o porque para revelar la presencia de estas inmunoglobulinas en
los hemates se prefiere el empleo de mtodos ms sensibles.
En nuestro laboratorio utilizamos como sueros de Coombs monoespecficos antiIgA y anti-IgM los reactivos de estas especificidades para uso en inmunologa,
despus de estandarizados de acuerdo con las recomendaciones
de Petz y Garratty. La cuantificacin de molculas de inmunoglobulinas por
hemate se realiza mediante un ELISA para, entre otras aplicaciones, apoyar el
diagnstico inmunohematolgico de las AHAI. A partir de las investigaciones
realizadas en pacientes con AHAI, determinamos el lmite de deteccin de la PAD
para los anticuerpos IgA e IgM y comparamos los resultados obtenidos en el
ELISA con lo comunicado previamente para los anticuerpos de la clase IgG.

Las pruebas de anticuerpos se hacen para detectar ciertos anticuerpos que atacan
a los glbulos rojos. Los anticuerposson protenas producidas por elsistema
inmunitario. Normalmente, los anticuerpos se adhieren a sustancias extraas,
como bacterias y virus, y hacen que sean destruidas.
Las siguientes condiciones provocan que se formen anticuerpos.

El suero de Coombs permite establecer la presencia de globulina y por lo tanto de

anticuerpos, ya que son de la mismanaturaleza, los anticuerpos incompletos como
son los que producen la eritroblastosis fetal y la anemia hemoltica adquirida, se
absorben sobre la superficie del glbulo rojo; pero no los aglutinan, el suero
Antiglobulina permite reconocer estos glbulos sensibilizados al combinarse con
los anticuerpos globulnicos que ya cubren.

Es util reconocer estos globu1os sensibilizados al combinarse con los anticuerpos

globulnicos que ya cubren su superficie el suero de coombs es ideal pus tiene
anticuerpos contra las globulinas sricas humanas que abarcan cuatro grandes
alfa1, alfa2, beta y gamma, y dentro de estos grupos se en cuentran anticuerpos
Anti Rh incompletos, Anti-Duffi, Anti Kell el suero de Coombs se obtiene por
inyecciones repetidas de sueros humanos del grupo O a conejos el animal
sensibilizado de esta manera produce anticuerpos contra la fraccin globulinica de
las proteinas sricas y contra anticuerpos incompletos que pueden encontrarse
revistiendo a los hemates o bien es suspensin en el plasma, por lo que se llama
Antiglobulina Humana, se preparan reactivos de amplio espectro mediante la
mezcla de sueros obtenidos de distintos animales.

La IgG no produce aglutinacin de los eritrocitos, pero se fijan sobre ellos y

permanecen sin soltarse, al agregar el suero de Coombs se forman puentes entre
los fragmentos cercanos y es posible ver la aglutinacin, revelando que esos
eritrocitos estaban en realidad cubiertos de anticuerpos.

FUNDAMENTO

De los sistemas serolgicos para demostrar la presencia de antgenos o

anticuerpos de grupos sanguneos, la Prueba de Coombs o antiglobulina humana
es considerada como la ms eficiente y de mayor valor en el Banco de Sangre.
Principio de la prueba: Detectar inmunoglobulinas de la clase IgG y/o fracciones
del complemento ( C3d ) unidos a los G.R. Obtencin: El reactivo de antiglobulina
se prepara inyectando a conejos gamma globulina humana purificada para obtener

suero antiglobulina, y otras son inyectadas con componentes purificados del

complemento ( C3 ) para producir anticuerpos especficos contra ellos .
Los anticuerpos y complemento humano son globulinas y adems son diferentes a
otras especies; por lo tanto, se comportan como antgenos cuando se inyectan a
otras animales.
Si un animal es inyectado con globulinas humanas purificadas o con suero total,
este animal elaborar anticuerpos contra ellas, estos anticuerpos tendrn
especificidad antiglobulina humana. El suero antiglobulina humana ( Suero de
Coombs ) reaccionar especficamente contra las globulinas humanas. Si los G.R.
estn sensibilizados por las inmunoglobulinas, el suero de Coombs se combinar
con ellas.

Prueba de Coombs Indirecta

La prueba de la antiglobulina o prueba de Coombs indirecta (in vitro), permite la
deteccin e identificacin de globulinas ligadas inmunolgicamente a los hemates.
La adicin del reactivo antiglobulina a los mismos ocasionar su aglutinacin.
Cuando la Prueba de Antiglobulina se emplea para detectar anticuerpos en el
suero por sensibilizacin de los eritrocitos in vitro, se conoce como prueba
indirecta de antiglobulinas o de Coombs (PCI). Los sueros antiglobulinas que se
obtienen de conejos inmunizados pueden ser de amplio espectro (con anticuerpos
contra inmunoglobulinas humanas y componentes del complemento) o pueden ser
monoespecficos (anti IgG, anti-IgM, anti-IgA, anti- C3+C4, anti C3b, anti-C3d,
anti-C4b y anti C4d).
Aunque la PAG de una prueba muy sensible, una prueba negativa no excluye la
presencia de anticuerpos en los eritrocitos (se calculan en 100 a 500 molculas de
IgG fijadas a los eritrocitos para que sean detectadas).
La prueba indirecta de antiglobulina o Coombs indirecto pone de manifiesto la
sensibilizacin de los hemates que se ha producido in vitro con diversos fines:
pruebas cruzadas pretransfusionales, investigacin de anticuerpos
antieritrocitarios en un suero problema, determinacin del fenotipo eritrocitario
mediante sueros especficos.
Detecta los anticuerpos o los componentes del complemento fijados in vitro a los
hemates durante un tiempo de incubacin en el laboratorio. Tiene aplicacin en el
estudio de anticuerpos en un suero problema a travs de hemates de

composicin antignica conocida (hemates de escrutinio, paneles de hemates,

etc.), determinacin de antgenos eritrocitarios a travs de antisueros especficos
y, por ltimo, en las pruebas de compatibilidad pretransfusional.
El reactivo antiglobulina que se utiliza bsicamente en todas las aplicaciones
indicadas es un suero poliespecfico que contiene principalmente anti-IgG y anticomponente C3d del complemento, pudiendo contener adems anticuerpos de
otras especificidades: anti IgM, anti-IgA, anti-C3b, etc., pero no es conveniente
que contenga anti-C4, ya que dicha especificidad no slo carece de significado
para el diagnstico, sino que los resultados positivos debidos a la misma pueden
confundir por tratarse de positivos falsos.
En una prueba de antiglobulina directa positiva con el suero poliespecfico, puede
tener inters investigar, mediante los sueros antiglobulina monoespecficos, el tipo
de anticuerpo unido a los hemates. Siempre que en los hemates se detecte algn
anticuerpo fijado, se puede separar mediante un proceso de elucin y proceder a
su estudio. Si nicamente estn fijados componentes del complemento, no se
puede efectuar ninguna elucin pero ello constituye un dato til para el
diagnstico.

Pruebas de coombs directa

La prueba de Coombs directa se utiliza principalmente para determinar si
una anemia hemoltica, en la que la tasa de destruccin de los hemates o clulas
rojas de la sangre es superior a la tasa de produccin de las mismas, es debida a
la presencia de anticuerpos frente a los hemates. Esto puede suceder en anemias
hemolticas autoinmunes en las que la persona produce anticuerpos frente
a antgenos de sus propios hemates (autoanticuerpos). Algunos ejemplos seran
ciertos trastornos autoinmunes como el lupus eritematoso sistmico,
enfermedades malignas como la leucemia linfoctica crnica y linfomas, y ciertas
infecciones como la neumona por micoplasma y la mononucleosis. Tambin hay
quin puede desarrollarla como consecuencia de la toma de ciertos
medicamentos, como penicilina.
La prueba de Coombs directa tambin se utiliza para diagnosticar la enfermedad
hemoltica del recin nacido debida a incompatibilidad sanguneo materno-fetal.
En el momento del nacimiento la madre puede haber quedado expuesta a
antgenos de los hemates del beb y puede haber generado anticuerpos contra
los hemates de su hijo. Este sera el caso de un beb Rh-positivo cuya madre es
Rh-negativo. Anteriormente, la presencia de anticuerpos frente al antgeno Rh
constitua la causa ms frecuente de enfermedad hemoltica del recin nacido, si
bien actualmente esta situacin es rara gracias al uso de tratamientos preventivos
administrados a la madre durante y despus de cada embarazo. La causa ms

frecuente de enfermedad hemoltica del recin nacido en la actualidad es la

incompatibilidad ABO entre una madre del grupo O y su beb. Este tipo de
incompatibilidad materno-fetal suele ser leve.
La prueba de Coombs directa tambin puede utilizarse para evaluar una posible
reaccin transfusional. Si despus de haber recibido una transfusin de sangre se
presenta fiebre u otros sntomas sugestivos de una reaccin hemoltica
transfusional, la prueba de Coombs directa indicar si la persona ha generado
anticuerpos contra los hemates transfundidos. Si se detecta anticuerpos fijados a
la superficie de los hemates, stos pueden ser destruidos (hemolizados) o
eliminados de la circulacin antes de lo normal.

Material y reactivo

1 gradilla

4 tubos de 13 x 100

2 tubos de 10 x 75

2 pipetas Pasteur c/bulbo

1 centrifuga Serofuge

1 bao mara 37C

Solucin salina en pizetas

Suero de coombs

Globulos rojos problema

Globulos rojos O Rh negativos

BIBLIOGRAFIA

 http://www.uhclatino.com/CentrodeInformaci
%C3%B3n/Pruebasdelaboratorio/tabid/131/language/es-ES/Default.aspx
http://www.medicina-interhttp//www.medicina-interna.org/archivos%5Cclases
%5Cpregrado%5Chematologia%5CTabla%202%20de%20Hematolog%C3%ACa
%20McGrawHill39CuadrosFiguras.pdfna.org/archivos%5Cclases%5Cpregrado
%5Chematologia%5CTabla%202%20de%20Hematolog%C3%ACa
%20McGrawHill39CuadrosFiguras.pdf
http://www.nlm.nih.gov/medlineplus/spanish/ency/article/003344.htm

CONCLUSION
La prueba de Coombs indirecta in vitroo (en el suero del organismo) es una tcnica de de
antiglobulina, la cual identifica la presencia de anticuerpos circulantes que se puedan fijar
a la membrana de los eritrocitos.
Esta empleada en un banco de sangre es necesaria para la deteccin de anticuerpos
problemas en el suero y pruebas de compatibilidad previas a la transfusin.
Esta si se encuentra positiva el botn de glbulos rojos no se disuelve ya que el
anticuerpo sencibilizante acta como antgeno para el reactivo antiglobulina provocando
aglutinacin.
Si se encuentra negativa el botn de glbulos rojos se disuelve no presentando
aglutinacin.