INTRODUCCIN:

La interaccin entre las ondas electromagnticas y la materia de la regin UV-visible

es el campo de estudio de la espectroscopia UV-visibles o espectrofotometra. Esta
basada en la relacin que presenta un haz de luz incidente en la muestra y el haz de
luz que pasa por la solucin.
Su estudio se basa en que la cantidad de luz absorbida por la materia presente en la
solucin es caracterstica del compuesto. La respuesta de dicho componente es
funcin de las caractersticas del haz de luz incidente en la muestra, lo que permite
determinar la respuesta en funcin de la calidad del haz proporcionado. Dicho conjunto
de respuesta en el rango de longitud de onda de la gama UV-visible se denomina
espectro de absorcin; dicha respuesta es caracterstica de cada compuesto.

OBJETIVO:

Determinar el aspecto que presenta el espectro de absorcin de un colorante.

Comparar el aspecto de un colorante y el de una sal colorida.
Familiarizarse con la utilizacin y manejo de un espectrmetro UV- visible.

ANTECEDENTES

Espectro de absorcin

La espectroscopia de absorcin es la medida de la cantidad de luz absorbida por un

compuesto en funcin de la longitud de onda de la luz. En general, e irradia una
muestra con una fuente de luz y se mide la cantidad de luz transmitida a varias
longitudes de onda, utilizando un detector y registrando el fenmeno en un grfico. Al

contrario que en los ensayos qumicos, la mayora de las tcnicas espectroscpicas no

son destructivas, es decir, no destruyen las muestras durante el anlisis; se pueden
realizar diferentes tipos de espectros sin prdida o perdiendo muy poco de muestra.

Cuando un slido incandescente se halla rodeado por un gas ms fro, el espectro

resultante presenta un fondo continuo interrumpido por espacios oscuros denominados
lneas de absorcin que ocurren porque el gas ha absorbido de la luz aquellos
colores que ste irradia por s mismo. Pero tambin se da el caso que en la naturaleza
cohabitan cuerpos que absorben radiacin emitida por otros, eliminando del espectro
de radiacin que reciben aquellas bandas absorbidas, las cuales quedan de color
negro. A esas bandas, se les suele llamar rayas negras o simplemente rayas
espectrales.

Por otra parte, suele ocurrir que unos cuerpo absorben slo la radiacin de unas
determinadas longitudes de onda y no aceptan absorber otras de otras longitudes, por
lo que cada cuerpo, cada elemento qumico en la prctica, tiene su propio espectro de
absorcin, el cual se corresponde con su espectro de emisin, al igual como si fuera el
negativo con el positivo de una pelcula.

Un liviano, transparente y caliente gas en frente de una fuente productora de

radiaciones espectrales, especialmente de caractersticas continuas, genera un
espectro de absorcin, el cual se distingue por una serie de lneas espectrales oscuras
entre los colores brillantes del espectro continuo. En el grfico de la figura se grafica la
intensidad lumnica versus la longitud de onda (visuales) contrastada con las lneas
espectrales sustradas del resto de la luz.

En el caso de una estrella, cuando la luz del caliente y energtico interior de ella
atraviesa la ms fra y menos energtica atmsfera exterior, alguno de los fotones son
absorbidos por electrones, que saltan a niveles concretos de energa. Muchas de tales
interacciones crean bandas oscuras en el espectro continuo con longitudes de onda
que corresponden con los intervalos entre pares de niveles energticos.

Espectro electromagntico

Es el intervalo de todas las frecuencias posibles, desde cero hasta el infinito. En la

prctica, en el espectro se representan desde loas bajas frecuencias de radio
utilizadas en las comunicaciones con submarinos hasta las altas frecuencias de los
rayos gamma. El espectro electromagntico es continuo.

Todas las radiaciones electromagnticas

viajan a la velocidad de la luz

(aproximadamente 3 x 1010cm/s, en el vaco), pero difieren en la frecuencia y en la

longitud de onda.

Onda electromagntica

Una

onda

electromagntica

es

la forma de propagacin

de la

radiacin

electromagntica a travs del espacio. En la naturaleza, las fuerzas elctricas se

originan de dos formas: Primero est la atraccin o la repulsin elctricas entre las
cargas elctricas (+) y (-).

Las ondas electromagnticas siguen una trayectoria rectilnea y su velocidad es

constante en cada medio especfico. Al pasar de un medio a otro la nica
caracterstica que permanece constante es la frecuencia. La velocidad vara para cada
longitud de onda. La frecuencia y la longitud de onda se relacionan segn la siguiente
expresin matemtica: Longitud de onda = C x T = C / f
Donde es la longitud de onda, C es la velocidad de la luz en el vaco, T el periodo y "f"
la frecuencia.

La frecuencia de una onda es el nmero de ondas que pasan por un punto fijo cada
segundo o el nmero de vibraciones por unidad de tiempo; se representa por la letra
griega

(>un<), y generalmente se mide en hertzios (Hz) o ciclos por segundo. La

longitud de onda, representada por la letra griega (>lambda<), es la distancia entre

dos picos (o dos valles) de una onda. La longitud de onda es una distancia y por lo
tanto su unidad de medida es el metro. Como la luz es una radiacin electromagntica
que tiene unas longitudes de onda muy pequeas se usan submltiplos del metro,
como son el ngstrom () que es la diezmilmillonsima de metro (1x10 -8m) y el
Nanmetro (nm) que es la milmillonsima de metro (1x10-9m).

La longitud de onda y la frecuencia, las cuales son inversamente proporcionales, estn

relacionadas por la ecuacin:

c = velocidad de la luz (3x1010 cm/s)

Donde:

= frecuencia de hertzios

= longitud de onda en cm.

Las ondas electromagnticas viajan como los fotones, corpsculos de energa

carentes de masa. La energa de un fotn es proporcional a su frecuencia e
inversamente proporcional a su longitud de onda. Un fotn de frecuencia

tiene una

energa dada por:

hc
h

Donde h es la constante de Planck: 1.58x10-37 Kcal. /s

6.62x10-37

kJ/s.

En ciertas condiciones, una molcula puede absorber la energa de un fotn que ha

chocado sobre ella. En este caso, la energa de la molcula aumenta una cantidad
igual a la energa del fotn hv. Por esta razn, la irradiacin de una mezcla de reaccin
se suele representar por el smbolo hv.

Los rayos X son tan energticos que excitan a los electrones hacia todos los niveles
de energa, produciendo ionizacin. El ultravioleta-visible excita a los electrones a
niveles de energa ms altos dentro de las molculas. Las energas de infrarrojo

producen vibraciones moleculares y las energas de microondas producen rotaciones.

Las frecuencias de onda de radio (energa muy baja) producen transiciones de espn
nuclear que se observan en la espectroscopia RMN.

Otras ondas electromagnticas:

La naturaleza de onda de la luz origina que los diferentes colores se reflejen de forma
diferente por una superficie, generando finas rayas paralelas [a esto se debe el que un
disco compacto lser (para uso musical o para ordenador) brille en todos los colores
del arco iris]. Las filas ordenadas de los tomos en un cristal tambin forman lneas
paralelas pero mucho menos espaciadas y resultan tener el mismo efecto sobre los
rayos X, mostrando que los rayos X, al igual que la luz, tambin son ondas
electromagnticas, pero con una longitud de onda mucho ms corta.

Se encontr posteriormente que los haces de electrones en un campo magntico,

dentro de un tubo de vaco, podan hacerse inestables y emitir ondas ms largas que
la luz: el tubo magnetrn donde ocurra esto fue un dispositivo de radar de alto secreto
durante la II Guerra Mundial e hizo posible posteriormente la fabricacin del horno
microondas.

Las ondas electromagnticas lideran la radio y la televisin y la enorme industria

electrnica. Pero tambin se generan en el espacio (por rayos de electrones inestables
en la magnetosfera, as como en el Sol y en el universo remoto, informndonos sobre
las partculas magnticas del distante espacio).

Las ondas, o 'disturbios', se dan en un medio invisible llamado el campo de fuerza

elctrico (que utiliza partculas cargadas, como los electrones (-) y los protones (+) que
se afectan y hacen mover entre s); sin estas partculas cargadas no puede haber

campos de fuerza elctrica y por tanto no hay ondas electromagnticas. Por lo tanto,
los campos magnticos podran producir corrientes elctricas y las corrientes
elctricas producen campos magnticos.

Espectrofotmetro

Un espectrofotmetro es un instrumento usado en la fsica ptica que sirve para medir,

en funcin de la longitud de onda, la relacin entre valores de una misma magnitud
fotomtrica relativos a dos haces de radiaciones. Tambin es utilizado en los
laboratorios de qumica para la cuantificacin de sustancias y microorganismos. Hay
varios

tipos

de

espectrofotmetros,

puede

ser

de

absorcin

atmica

espectrofotmetro de masa.

Regin UV-visible:

La espectroscopia visible es una de las tcnicas ms ampliamente y ms

frecuentemente empleadas en el anlisis qumico; Para que una sustancia sea activa
en el visible debe ser colorida: el que una sustancia tenga color, es debido a que
absorbe ciertas frecuencias o longitudes de onda del espectro visible y transmite otras
ms. Por ejemplo: una solucin es amarilla debido a que dentro de la regin visible
absorbe radiacin en el rango de 435 a 480 nm. En este rango de longitud de onda se
encuentra el color azul del visible, por lo que este compuesto absorbe el color azul y
transmite los colores complementarios que dan origen al color amarillo de la solucin
mencionada.

La absorcin y transmisin de las longitudes de onda de la regin visible de esta parte

del espectro no es la misma en substancias que den diferentes tonalidades de

amarillo, por lo que podemos tener una gama diferente de tonalidades como: amarillo
canario, amarillo limn, amarillo plido, etc.

La siguiente tabla nos da una relacin entre rango de longitudes de onda en que
absorbe el compuesto, color absorbido y color observado o transmitido.

Espectro visible
Violeta
Azul
Verde-azul
Azul-verde
verde
Verde-amarillo
Amarillo
Naranja
rojo

en nm
400-450
450-480
480-490
490-500
500-560
560-575
575-590
590-625
625-750

El Ultravioleta del vaco se considera aquella regin

comprendida de los 100 a los 190 nm. Se le llama as
debido a que el nitrgeno atmosfrico absorbe este tipo
de radiacin, por lo que se debe efectuar el vaco para
poder excluir las absorbancias de este gas de las
absorbancias del compuesto en estudio.

Las complicaciones tcnicas asociadas al vaco necesario, adems de la poca utilidad

que se tiene en el Ultravioleta del vaco, han hecho que esta tcnica prcticamente no
tenga uso y de hecho no hay equipos disponibles comercialmente para aplicaciones
de este tipo de espectroscopia. El espectro Visible y Ultravioleta, por el contrario,
tienen amplia aplicacin y son tcnicas que se emplean continuamente. El rango
visible se considera de los 380 a los 750 nm. El rango del Ultravioleta cercano o del
Cuarzo es de 190 a 380 nm.

La base de la espectroscopia Visible y Ultravioleta consiste en medir la intensidad del

color (o de la radiacin absorbida en UV) a una longitud de onda especfica
comparndola con otras soluciones de concentracin conocida (soluciones estndar)
que contengan la misma especie absorbente. Para tener esta relacin se emplea la
Ley de Beer, que establece que para una misma especie absorbente en una celda de
espesor constante, la absorbancia es directamente proporcional a la concentracin.

La coloracin de la solucin se debe a la especie absorbente y esta coloracin puede

ser natural o inducida. La coloracin natural puede ser la base de la cuantificacin de
una especie, como por ejemplo: la clorofila en ciertas plantas, los complejos metlicos
que se encuentran presentes en solucin acuosa, como son los iones de Cobre (II),
Manganeso (VII), Cobalto (III), etc.

Ms frecuentemente, se induce a la formacin de un complejo colorido que absorba en

el visible, y que sea especfico para el elemento o compuesto que se desea cuantificar
colorimtricamente. Ejemplo: la formacin de un complejo colorido cuando el cloro
libre reacciona con la ortotoluidina, o la cuantificacin de glucosa en la sangre y orina
por la accin del molibdato en determinadas condiciones, o la intensificacin del color
del ion cobre, al formar un complejo amoniaco-cobre, el cual se forma cuando a una
solucin acuosa que contiene iones cobre se le agrega hidrxido de amonio.

Para esto se requiere de un control de ciertas condiciones, que inhiben o favorecen la

formacin de compuestos coloridos:

pH: El pH es un factor determinante en la formacin de ciertos complejos o

compuestos coloridos. Cuando el pH influye en la tcnica analtica, se requiere de
un control adecuado de este valor para lo cual se agrega alguna solucin buffer, o
estabilizador de pH.
Temperatura: La temperatura es factor importante, sobre todo en reacciones en
las cuales el factor cintico es la base del anlisis.
Tiempo: En ciertas reacciones, se requiere de un tiempo determinado para que se
tenga una lectura estable de absorbancia de la solucin producida.
Es tambin factible que los complejos o compuestos formados sean lbiles, estos es
que despus de un cierto tiempo se descompongan a otros productos diferentes, por

lo que el tiempo indicado al que debe hacerse la lectura debe establecerse con base a
la experiencia y los resultados que se tengan.

Las tcnicas analticas UV-Visible han recibido gran aceptacin debido, entre otras a
las siguientes razones:
1. Amplio campo de aplicacin: Como ya se ha mencionado, las tcnicas
espectroscpicas UV-Vis., son ampliamente empleadas ya que son muchas las
especies que son activas en el Visible, y muchas ms las que con un tratamiento
adecuado son capaces de formar especies coloridas. Lo mismo puede decirse de la
espectroscopia UV.
2. Selectividad adecuada: Aunque no es muy comn si es posible tener interferencias
en UV-Visible. Cuando esto ocurre, es posible emplear los mtodos para anlisis de
multicomponentes. Otra alternativa es aislar el analito de la interferencia, o separa la
interferencia misma.
3. Buena Exactitud y Precisin: En estas tcnicas espectroscpicas es normal tener
errores relativos del 1 al 3 %, por lo cual se puede considerar que se tendrn
resultados analticos con un mnimo de incertidumbre si se procede en la forma
correcta.
4. Facilidad y Conveniencia: Aunque existen instrumentos altamente sofisticados
acoplados a computadoras y con sistemas pticos y electrnicos de alta precisin, es
posible obtener resultados muy aceptables para anlisis de rutina, con instrumentos o
espectrofotmetros de los ms sencillos en el mercado, a un costo muy accesible.

En 1852, August Beer estudi la influencia de la concentracin de soluciones coloridas

sobre la transmisin de luz. La conclusin a la que lleg fue que el valor de a' para una
determinada sustancia es proporcional a su concentracin, es decir:

10

Donde, c es la concentracin y

la absortividad (constante independiente de la

concentracin).

La ley de Beer es anloga a la ley de Bouguer - Lambert. Mientras que Bouguer y

Lambert estudiaron la variacin en la absorcin de un haz de luz, en funcin de la
variacin de la espesura de la camada absorbente, Beer hizo el mismo estudio en lo
que se refiere a la concentracin de la solucin, manteniendo la espesura constante.
En ambos casos, el resultado es el mismo pues, ya que al variar la concentracin, o
variar la espesura de la solucin a ser atravesada por la luz, esencialmente
aumentamos o disminuimos el nmero de partculas que interaccionan con la
radiacin.

Para realizarse un anlisis espectrofotomtrico es tambin necesario conocer el

espectro de absorcin de la muestra que se quiere determinar. Esto es hecho para
definirse cual es la longitud de onda de la radiacin incidente, que causar la
absorcin mxima de la especie a ser determinada y as obtener la mejor sensibilidad
en su cuantificacin. El espectro de absorcin es obtenido variando la longitud de onda
de la radiacin que incide sobre la muestra y medindose la cantidad de radiacin
absorbida

en

un

espectrofotmetro.

Una otra caracterstica particular de la ley de Beer es la sumatoria de las

absorbancias. En muchos casos, es posible determinar simultneamente dos o ms
especies diferentes presentes en una muestra, utilizndose esta misma ley.
Tericamente, esto puede ser realizado desde que no ocurra ninguna interaccin entre
las especies y que el espectro de absorcin observado por la mezcla sea la suma de
los espectros individuales que serian obtenidos en el caso de que slo una de las

11

especies estuviese presente en la solucin y bajo las mismas condiciones

experimentales. En la prctica, estas condiciones ideales no ocurren, pero sin
embargo es posible la determinacin de especies qumicas en una mezcla. En este
caso, para cada longitud de onda, la absorbancia total debida a las especies presentes
en la solucin puede ser expresada como la suma de las absorbancias de cada una de
ellas,

Para el caso particular de dos sustancias,

en disoluciones cidas y color azul en disoluciones bsicas.

12

CONCLUSIONES

Por medio de esta prctica se logr familiarizarse y aprender el uso correcto y manejo
del espectrofotmetro de absorcin UV-visible por medio de sustancias que presentan
color y que por medio de la espectrofotometra se puede observar su regin de
absorbancia en determinada longitud de onda que nosotros podemos manejar de
acuerdo a nuestras necesidades, as como lograr determinar en que regin se
encuentra determinado compuesto si es que este es desconocido, ayudndonos
tambin al graficarlo para facilitar la determinacin del mismo.

En esta prctica aprendimos a utilizar el espectrofotmetro que nos sirvi para medir,
en funcin de la longitud de onda, la relacin entre valores de una misma magnitud
fotomtrica relativos a dos haces de radiaciones. Tambin se puede utilizar para la
cuantificacin

de

sustancias,

que

fue

lo

que

nosotros

realizamos

con

espectrofotmetro de absorbancia bsicamente obtuvimos mejorar la resolucin de los

espectros obtener mayor sensibilidad. Estuvo interesante la prctica por que fue la
primera vez que pudimos utilizar el espectrofotmetro de absorbancia y as poderlo
ocupar con mucho ms facilidad.

Se pudo realizar exitosamente el experimento ya que al colocar muestra nuestra

muestra se obtuvo la medida de la cantidad de luz de absorcin del compuesto, para
la obtencin de su longitud de onda.

BIBLIOGRAFA

13

 Wade, L. G., Qumica orgnica, 5 edicin, Prentice hall, Madrid, 2004, Pgs.: 490495,544.
Manual de seguridad de sustancias peligrosas en laboratorio de Q.F.B : Trabajo
monogrfico para obtener el titulo de Q.F.B por Bettina Herrera Fabela 2003, Pg.
160 y 239
Skoog, Douglas A. Qumica Analtica,.Edit Mc Graw Hill 7 ed. Mxico 2001.Pg. 282
http://www.doschivos.com/trabajos/quimica/484.htm
http://www.chemkeys.com/esp/
http://www.fquim.unam.mx/sitio/uploads/pdfs/hoja14.pdf
www.monografias.com, consultada 18/02/07, hora 15:00hrs, actualizacin: 5/01/07

14